T клетки Hs Да

Первичные опухоли молочной железы были получены путем имплантации клеток 4T1 или 4T1.2 в жировые подушечки молочных желез самок мышей BALB / c. Серийные срезы этих опухолей окрашивали ализарином красным S, фон Коссой (с ядерно-быстрым красным контрастом) и H&E для оценки минерализации.Одна из пяти опухолей молочной железы 4T1 содержала кальцификаты, а минерализация была обнаружена в пяти из шести опухолей молочной железы 4T1.2. Типичная минерализующая опухоль молочной железы 4T1.2 показана на рис. Положительное окрашивание на кальций (красный; ализариновый красный S) и фосфат кальция (черный / коричневый; фон Косса) постоянно наблюдалось в одной и той же области опухолей между серийными срезами. Гематоксилин (пурпурный) также более интенсивно окрашивался в областях кальцификатов.

Минерализация опухолей молочной железы мышей.Серийные срезы опухолей жировых подушек молочной железы 4T1 и 4T1.2 окрашивали, используя ализарин красный S, фон Косса (включая ядерно-быстрый красный контрастный краситель) и H&E. Минерализация была обнаружена в пяти из шести первичных опухолей 4T1.2 и в одной из пяти первичных опухолей 4T1. Показаны репрезентативные изображения первичных опухолей 4T1.2. Масштабные линейки представляют 800 мкм, м при увеличении × 100 и 200 мкм, мкм при увеличении × 400. Окрашивание ализариновым красным S и окрашивание по фон Коссу положительно на кальций (красный) и фосфат кальция (черный / коричневый) соответственно.Гематоксилин также окрашивался более интенсивно в областях кальцификатов.

Транспорт фосфата необходим для минерализации клеток 4T1

Фосфонмуравьиная кислота, известный ингибитор семейства натрий-фосфатных котранспортеров типа II (Murer et al , 2004), была использована для исследования роли транспорта фосфата в β G и Pi-индуцированная минерализация клеток 4T1. Клетки 4T1 имели положительную окраску на кальций после обработки β G или Pi, начиная с 14-го и 7-го дня, соответственно ().Однако добавление PFA в сочетании с любой формой фосфата ( β, G & PFA или Pi и PFA) ингибировало минерализацию на срок до 28 дней. Эти результаты были подтверждены окрашиванием по фон Коссе, как показано на репрезентативных изображениях на 28 день (), а также количественным анализом кальция. Обработка β -глицерофосфатом и Pi приводила к статистически значимому увеличению уровней кальция, начиная с 21 и 7 дней соответственно ( P <0,001;). Напротив, уровни кальция в группах β G & PFA и Pi и PFA с течением времени оставались сопоставимыми с контрольными уровнями.

Влияние 1 м PFA, известного ингибитора ко-транспортеров Na-Pi, на минерализацию клеток 4T1. Все изображения просматриваются под световым микроскопом при увеличении × 100, а масштабные линейки представляют 500 мкм м ( n = 3). ( A ) Окрашивание ализарином красным S клеток 4T1, обработанных 1 м PFA. ( B ) Окрашивание по Фон Коссы клеток 4T1, обработанных 1 м PFA в течение 28 дней. Эффект 1 м PFA на минерализацию клеток 4T1, определенный с помощью анализа о-крезольфталеина кальция, показан в ( C ) и ( D ).Каждая точка представляет собой среднее количество кальция, измеренное в промилле. нормализовано к белку, измеренному в мг, ± среднеквадратичное отклонение, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA. ^*** P <0,001 β G и Pi по сравнению с во всех других группах лечения в каждый момент времени. Ctl (контроль) = обычная питательная среда. β G = 10 м β G. PFA = 1 м PFA. β G & PFA = 10 м β G и 1 м PFA. Pi = 10 м Pi. Pi & PFA = 10 м Pi и 1 м PFA.

ЩФ требуется для минерализации клеток 4T1

Роль ЩФ изначально была исследована с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени ().Повышение экспрессии мРНК ALP было обнаружено на 21 и 28 день в минерализующихся клетках 4T1, обработанных ОК ( P <0,001). Напротив, наблюдалась общая тенденция к снижению экспрессии мРНК ALP в клетках 4T1 с нарушенной минерализацией, обработанных OC & dex, что было статистически значимым на 7 и 14 дни ( P <0,05). Также исследовали влияние экзогенной ЩФ. Было обнаружено, что при добавлении ЩФ к ОК уровни кальция постоянно повышались по сравнению с группой ОК на 7-е сутки ( P <0.05), 14 ( P <0,01), 21 ( P <0,01) и 28 ( P <0,001;). Затем действие левамизола, известного ингибитора ЩФ, было исследовано на клетках 4T1. Обработка β -глицерофосфатом и Pi привела к положительному окрашиванию S ализариновым красным, начиная с 14-го и 7-го дня соответственно (). Добавление левамизола к β G ( β G & lev) ингибировало окрашивание S ализарином красным на срок до 28 дней. Напротив, левамизол не влиял на минерализацию, индуцированную Pi, о чем свидетельствует положительное окрашивание S ализарином красным, начиная с 7-го дня.Эти результаты были подтверждены окрашиванием по фон Коссу, как показано на репрезентативных изображениях 28-го дня (). Эти результаты были также подтверждены количественным анализом кальция. Хотя повышение уровня кальция было обнаружено в клетках 4T1, обработанных β G, с течением времени ( P <0,001 по сравнению с контролем и β G & lev), в группе β G & lev увеличения не было обнаружено. до 28 дней (). Уровни кальция увеличивались с течением времени в клетках 4T1, обработанных Pi ( P <0.05 против контроля) и аналогичные уровни были обнаружены в группе Pi & lev ( P <0,01 против контроля). Статистической разницы между группами Pi и Pi & lev не было обнаружено ни в какой временной точке на срок до 28 дней ( P > 0,05;).

Роль ЩФ в минерализации клеток 4T1. ( A ) Экспрессию мРНК ALP анализировали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени. Результаты выражаются в произвольных единицах и нормализуются к элементам управления в каждый момент времени.Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3, двусторонний дисперсионный анализ. ^* P <0,05 OC & dex по сравнению с контролем в дни 7 и 14. ^*** P <0,001 OC по сравнению с контролем и OC & dex в дни 21 и 28 ( B ) Влияние экзогенная ЩФ, как определено кальциевым анализом о-крезольфталеина. Каждая точка представляет собой среднее количество кальция, измеренное в промилле. нормализовано к белку, измеренному в мг, ± среднеквадратичное отклонение, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA. ^* P <0,05 OC и ALP по сравнению с во всех группах на 7 день, ^** P <0,01 OC и ALP по сравнению с во всех группах в дни 14 и 21, ^*** P <0,001 OC и ALP против во всех группах на 28 день. ( C ) Окрашивание ализарином красным S клеток 4T1, обработанных 100 мкл левамизола (lev), при просмотре под световым микроскопом при увеличении × 100. Масштабная линейка представляет 500 мкм м. ( D ) Окрашивание по Фон Косса клеток 4T1, обработанных 100 мкМ лев в течение 28 дней, как видно под световым микроскопом при увеличении × 100.Масштабная линейка представляет 500 мкм м. Образцы β G, Pi и Pi & lev положительно окрашивают фосфат кальция (черный) к 28 дню. Положительного окрашивания не наблюдалось в контрольной группе, группах β G & lev и lev. Влияние lev на минерализацию клеток 4T1, определенное с помощью анализов о-крезолфталеина кальция, показано в ( E ) и ( F ). Каждая точка представляет собой среднее количество кальция, измеренное в промилле. нормализовано к белку, измеренному в мг, ± с.е.м., двусторонний дисперсионный анализ. ^* P <0,05 Pi по сравнению с контролем на 28 день, ^** P <0,01 Pi & lev по сравнению с контролем на 28 день, ^*** P <0,001 β G по сравнению с контролем и β G & lev на 28 день. Остеогенный коктейль = 50 μ мкг / мл ^–1 аскорбиновой кислоты и 10 мкМ β G. OC & dex = OC, включая 10 ^–7 дексаметазон. ALP = 1 Ед. Мл ^–1 ALP. OC & ALP = OC, включая 1 Ед. Мл ^–1 ALP. β G = 10 м β G. β G & lev = 10 м β G и 100 μ лев. Лев = 100 мк лев. Pi = 10 м Pi. Pi & lev = 10 m Pi и 100 μ lev.

Влияние ингибиторов физиологической минерализации на минерализацию 4T1

Роль OPN исследовали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени (). Повышение экспрессии мРНК OPN было обнаружено на 21 день в минерализующих клетках 4T1, обработанных OC ( P <0,05), и на 11 день в группе OC & dex с нарушенной минерализацией ( P <0.001). Влияние экзогенного OPN также исследовали на минерализацию клеток 4T1 с использованием количественного анализа кальция (), однако добавление 0,5 мкг мкг / мл ^–1 OPN к ОК (ОС и ОПН) приводило к уровням кальция, аналогичным Группа ОК к 21 дню, и никаких различий между этими двумя группами обнаружено не было ( P > 0,05). Аналогичным образом было обнаружено, что экзогенное добавление PPi, известного ингибитора физиологической минерализации, не влияет на клетки 4T1 (2). Повышение содержания кальция было обнаружено в клетках 4T1, обработанных ОК и 3.5 μ PPi (OC & PPi) по сравнению с контрольной группой к 28-му дню ( P <0,001;). Эти уровни были сопоставимы с повышенными уровнями кальция в группе ОК во все моменты времени, и не было обнаружено различий между этими двумя группами ( P > 0,05).

Влияние известных ингибиторов физиологической минерализации на клетки 4T1 и влияние эндогенной активности ЩФ. ( A ) Экспрессию мРНК OPN анализировали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени. Результаты выражаются в произвольных единицах и нормализуются к элементам управления в каждый момент времени.Каждая точка представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3, двусторонний дисперсионный анализ. ^* P <0,05 OC по сравнению с контролем и OC & dex на 21 день ^*** P <0,001 OC & dex по сравнению с контролем и OC на 11 день ( B ) Влияние экзогенного OPN на минерализацию клеток 4T1, как определено анализом о-крезольфталеина кальция. Каждая точка представляет собой среднее количество кальция, измеренное в промилле. нормализовано к белку, измеренному в мг, ± с.е.м., односторонний дисперсионный анализ. ^** P <0,01 OC и OC & OPN по сравнению с контролем на 21 день ( C ) Влияние PPi на минерализацию клеток 4T1, как определено анализом о-крезольфталеина с кальцием. Каждая точка представляет собой среднее количество кальция, измеренное в промилле. нормализовано к белку, измеренному в мг, ± среднеквадратичное отклонение, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA. ^** P <0,01 OC по сравнению с контролем и PPi на 28 день, ^*** P <0,001 OC и PPi по сравнению с контролем и PPi на 28 день.( D ) Окрашивание ALP, проведенное на клетках 4T1, как наблюдали под световым микроскопом при увеличении × 100. Масштабная линейка представляет 500 мкм м. Положительное окрашивание на ALP (розовый) наблюдается на 7 и 14 дни в контрольной (Ct1), OC и OC & dex группах. ( E ) Окрашивание ALP на клетках MCF10a, наблюдаемое под световым микроскопом при 100-кратном увеличении. Масштабная линейка представляет 500 мкм м. Ни в одной группе лечения в любой момент времени не наблюдалось положительного окрашивания на ЩФ.( F ) Сравнение активности ЩФ в клетках 4T1 и MCF10a. Результаты выражены в ALP (пг), нормализованной к белку ( мкг г). Каждая точка представляет собой среднее значение ± s.e.m, двусторонний дисперсионный анализ. ^* P <0,05 OC & dex по сравнению с контролем на 7 день в клетках 4T1, ^*** P <0,001 OC и OC & dex по сравнению с контролем на 14 день в клетках 4T1. Остеогенный коктейль = 50 мкМ г мл ^–1 аскорбиновой кислоты и 10 мкМ β г.OC & dex = OC, включая 10 ^-7 дексаметазон. OC & PPi = OC и пирофосфат 3,5 мкм . PPi = 3,5 мкм пирофосфат. OC & OPN = OC и 0,5 μ г мл ^–1 OPN.

Высокая эндогенная активность ЩФ коррелирует с потенциалом минерализации

Обнаружив, что экзогенные PPi и OPN не ингибируют минерализацию клеток 4T1, как ожидалось, эндогенные уровни ЩФ были исследованы как потенциальная причина. Окрашивание ALP использовали для визуализации активности ALP в клетках 4T1, выращенных в течение до 14 дней.Розовый цвет указывает на положительное окрашивание на ЩФ, и репрезентативные изображения показаны на. Положительное окрашивание наблюдалось в контрольных образцах на 7 и 14 дни. Дальнейшее усиление окрашивания было обнаружено в группе OC, тогда как уменьшение окрашивания ALP наблюдалось в группе OC & dex в оба момента времени. Окрашивание щелочной фосфатазой также проводили на линии клеток MCF10a (), которая ранее была признана неминерализующейся в тех же экспериментальных условиях (). В клетках MCF10a не наблюдалось положительного окрашивания на ЩФ ни в одной группе лечения в течение периода до 14 дней.Эти результаты были также подтверждены количественным анализом ЩФ (). К 14 дню увеличение активности ЩФ было обнаружено в группе ОК по сравнению с контрольной группой для линии клеток 4Т1 ( P <0,001). Напротив, снижение активности ЩФ было обнаружено в группе OC & dex на 7-й день ( P <0,05) и 14 ( P <0,001). При прямом сравнении линия клеток MCF10a имела небольшую активность ЩФ или не имела активности ни для одной из групп лечения в течение до 14 дней.

Царапины были сделаны в монослоях клеток 4T1, и миграция клеток была зарегистрирована в ответ на возрастающие концентрации β G, кальция (Ca ²⁺ ) , CO и HA.Было обнаружено, что со временем все большее количество клеток мигрировало в области царапин для всех групп лечения. Однако большее количество клеток наблюдалось в группах НА 10 m β G, 10 m Ca ²⁺ и 72 μ g cm ^–2 HA по сравнению с контрольными группами к 48 часам (соответственно). Эти результаты оказались статистически значимыми при количественном анализе закрытия раны с использованием программного обеспечения Scion image ( P <0,01). Напротив, не было обнаружено значительных изменений для обработки CO ни для 18 μ г / см ^–2 или 72 μ г / см ^–2 к 48 часам ( P > 0.05 против контроля ; ).

Изучение влияния возрастающих концентраций β G, кальция (Ca ²⁺ ), CO и HA на миграцию клеток 4T1 с использованием анализа царапин на ранах. ( A ) Анализ царапин на ранах клеток 4T1, обработанных β G. К 48 часам наблюдается увеличение миграции клеток при обработке 10 м β G по сравнению с контрольной группой (ctl; ростовая среда, содержащая 0,5 % FBS), который оказался статистически значимым при количественной оценке с использованием программного обеспечения Scion image.( B ) Анализ царапин на ране клеток 4T1, обработанных увеличивающимися концентрациями кальция. К 48 часам наблюдается увеличение миграции клеток при обработке 10 м Ca ²⁺ по сравнению с группой 1,8 м Ca ²⁺ (питательная среда, содержащая 0,5% FBS), что было обнаружено статистически значимым при количественной оценке с использованием Программное обеспечение Scion image. ( C ) Анализ царапин на ране клеток 4T1, обработанных возрастающими концентрациями CO. Не было обнаружено значительных различий в миграции клеток между разными группами лечения в любой момент времени.( D ) Анализ царапин на ране клеток 4T1, обработанных увеличивающимися концентрациями НА. Увеличение миграции клеток наблюдается для 72 мкм г / см ^–2 клеток, обработанных НА, по сравнению с контрольной группой через 48 часов, что было подтверждено как статистически значимое при количественной оценке с использованием программного обеспечения Scion image. Все изображения просматривают под световым микроскопом при увеличении × 100 через 0, 24 и 48 ч ( n = 3). Масштабные линейки представляют 500 мкм м. Для количественной оценки каждая точка представляет собой средний процент закрытия царапин ± с.е.м., двусторонний дисперсионный анализ. ^** P <0,01 10 м β G, 10 м Ca ²⁺ и 72 μ г см ^–2 HA по сравнению с контролем через 48 ч.

Обсуждение

Микрокальцификации молочных желез — один из самых надежных маммографических признаков рака груди и часто единственный индикатор заболевания груди в непальпируемой форме. Недавнее исследование показало, что содержание карбоната в микрокальцификатах молочной железы, состоящих из ГК, может быть связано со степенью поражения (Baker et al , 2010).Однако, несмотря на их ценность для раннего выявления рака груди и потенциальное прогностическое значение, механизмы, с помощью которых формируются микрокальцификаты молочной железы, в лучшем случае неясны. Остается неясным, производятся ли они активным клеточным процессом или кальцификаты являются признаком клеточной дегенерации.

Здесь мы впервые продемонстрировали, что линии клеток молочной железы способны минерализовать in vitro . Это было подробно показано для линии метастатических клеток 4T1 мыши, которая, как было обнаружено, минерализовалась к 11 дню при обработке ОК.Рамановская микроскопия использовалась для идентификации видов кальция, откладываемых клетками 4T1. Полоса комбинационного рассеяния, наблюдаемая при 960 см ^-1 , указывает на присутствие HA, который является клинически значимым видом кальция, который связан как с доброкачественными, так и со злокачественными заболеваниями груди (Büsing et al , 1981; Radi, 1989; Haka et al , 2002).

Также была подтверждена минерализация дополнительных клеточных линий молочной железы в присутствии ОК, которые включали метастазирующую мышиную молочную железу 4T1.2 и высокоинвазивной линии клеток молочной железы человека Hs578Ts (i) ₈ . Напротив, сравнительно менее инвазивные клетки Hs578T и неопухолевые клетки MCF10a не были способны минерализоваться в одних и тех же условиях. Это предполагает, что потенциал минерализации в этой модели in vitro связан с фенотипом клеток молочной железы, поскольку только опухолевые клетки молочной железы были способны продуцировать HA. Кроме того, более узкая полоса пропускания была обнаружена для HA, депонированного клетками Hs578Ts (i) ₈ (15.9 ± 1,7 см ^-1 ) по сравнению со всеми другими линиями минерализующих клеток. Сужение пика растяжения фосфата ^-1 на 960 см было связано с более низким содержанием карбоната (Haka et al , 2002) и более низким содержанием карбоната с увеличением степени злокачественности опухоли (Baker et al , 2010), что отражает высокую инвазивность природа клеток Hs578Ts (i) ₈ . Haka и др. (2002) ранее сообщали, что микрокальцификации типа II, возникающие при доброкачественных новообразованиях груди, имели среднюю FWHH 18.0 ± 0,5 см ^-1 , тогда как отложения в поражениях, диагностированных как DCIS, имели среднюю FWHH 17,0 ± 0,5 см ^-1 . Данные о FWHH для минералов, полученных из мышиных источников, ранее не сообщались, но обе линии клеток мыши (4T1 и 4T1.2) генерировали FWHH значительно выше (21,7 ± 1,2–23,9 ± 3,0 см ^-1 ), чем Hs578Ts человека (i) ₈ клеточная линия или ранее опубликованные данные по биопсии груди человека.

Остеогенная среда использовалась в экспериментах in vitro , поскольку добавление экзогенного фосфата для исследования потенциала минерализации является обычным делом в исследованиях минерализации множества других патологий, включая остеобласты и гладкомышечные клетки сосудов in vitro (Shioi et al , 1995; Коэльо и Фернандес, 2000).В организме человека фосфат является наиболее распространенным внутриклеточным анионом, который чаще всего встречается в форме аденозинфосфатов (АМФ, АДФ и АТФ), а также в ДНК и РНК и может высвобождаться путем гидролиза АТФ или АДФ. Следовательно, есть основания предполагать, что в нише ранней опухоли быстро пролиферирующие популяции клеток могут подвергаться физиологически локализованным высоким уровням фосфата. Здесь представлены результаты небольшого исследования in vivo , показывающие, что 4T1 и 4T1.2 клетки, выращенные в жировой подушке молочной железы мышей BALB / c, способны производить кальцификаты без каких-либо экспериментальных изменений уровней фосфатов. Время, необходимое для минерализации клеток 4T1 и 4T1.2 in vitro , было относительно одинаковым (11 против 14 дней, соответственно), однако обнаружение минерализации жировых подушечек молочных желез in vivo отличалось с микрокальцификациями. чаще встречается в опухолях 4T1.2. Точные причины этого неясны, но могут быть связаны с фенотипом клеток, поскольку 4T1.Клеточная линия 2 представляет собой вариант, выделенный из родительских клеток 4T1 путем клонирования единичных клеток, и, как известно, развиваются явные метастазы в кости, легкие и лимфатические узлы (Lelekakis et al , 1999). В отличие от клеточных линий 4T1, клеточные линии 4T1.2 имеют высокую склонность к распространению на вспомогательные лимфатические узлы с метастазированием, которое, как полагают, происходит лимфогенным путем (Eckhardt et al , 2005). Их повышенная склонность к минерализации может быть еще одной особенностью их агрессивного фенотипа. Тем не менее обе клеточные линии 4T1 и 4T1.2 способны минерализовать in vivo в отсутствие каких-либо экзогенных факторов или экспериментального изменения физиологических уровней фосфатов. Это демонстрирует врожденную способность производить микрокальцификации молочной железы в процессе развития опухоли. Это открытие также подтверждает нашу работу in vitro и демонстрирует, что минерализация не просто связана с присутствием компонентов среды для культивирования клеток или явлением, возникающим в результате длительного монослойного культивирования.

Дексаметазон, синтетический глюкокортикоид, также был исследован, поскольку было показано, что он усиливает минерализацию некоторых костноподобных клеток (Maniatopoulos et al. , 1988; Coelho and Fernandes, 2000).Поскольку потенциал минерализации клеток молочной железы in vitro ранее не был исследован, были исследованы две версии ОК (с дексаметазоном и без него), чтобы определить оптимальные условия для минерализации. Мы показали, что дексаметазон подавляет минерализацию линий клеток 4T1 и 4T1.2 мыши. Напротив, присутствие дексаметазона в ОК необходимо для минерализации клеточной линии человека Hs578Ts (i) ₈ . Этот видоспецифический эффект также наблюдался в исследованиях минерализации in vitro с использованием остеобластов.Дексаметазон усиливает минерализацию клеток костного мозга человека (Coelho and Fernandes, 2000), тогда как дексаметазон ингибирует минерализацию клеточной линии мышиного остеобласта MC3T3-E1 in vitro (Lian et al , 1997). Было высказано предположение, что различный эффект дексаметазона может зависеть от стадии созревания остеобластов исследуемых клеточных линий (Lian et al , 1997). Кроме того, причина видоспецифического эффекта дексаметазона может быть связана с различиями в метаболизме дексаметазона между клетками человека и мыши, что приводит к разным основным метаболитам (Tomlinson et al , 1997).Эти различные метаболиты потенциально могут оказывать различное влияние на передачу сигналов в клетках и транскрипцию генов, связанную с минерализацией.

Используя установленную модель in vitro минерализации молочных желез, были исследованы молекулярные механизмы, участвующие в этом процессе. Роль транспорта фосфата изучалась с использованием PFA, известного ингибитора семейства котранспортеров фосфата натрия (Na-Pi) типа II (Murer et al , 2004). Ингибирование этих котранспортеров Na-Pi с использованием PFA полностью устраняет как индуцированную β G, так и индуцированную Pi минерализацию клеток 4T1.Это указывает на то, что, независимо от источника, интернализация фосфата необходима для минерализации 4T1 в этой модели. Транспортировка фосфата через мембрану с помощью фосфатного насоса предполагает, что идет активный регулируемый процесс и что наблюдаемая минерализация не является просто результатом осаждения в среде или результатом некротического мусора. Кроме того, сообщалось, что экспрессия котранспортера NaPi-IIb повышена в ткани рака груди по сравнению с нормальной тканью (Chen et al , 2010).Никакие другие исследователи не исследовали участие этих переносчиков в минерализации клеток молочной железы, однако активация котранспортеров Na-Pi в эпителиальных клетках молочной железы болезненным состоянием может способствовать локализованной минерализации, даже если уровни фосфата в сыворотке находятся в нормальном физиологическом диапазоне.

Роль ЩФ также была исследована, поскольку этот фермент имеет хорошо задокументированную роль в физиологической продукции ГК (Owen et al , 1990; Orimo, 2010). Увеличение мРНК ЩФ было обнаружено в минерализующихся ОК-обработанных клетках 4Т1, и было обнаружено, что экзогенное добавление ЩФ усиливает минерализацию клеток 4Т1.Также было обнаружено, что левамизол, который является известным ингибитором ЩФ, ингибирует индуцированную β G минерализацию, но не индуцируемую Pi минерализацию клеток 4T1. Это говорит о том, что ALP может выполнять функцию минерализации клеточных линий молочной железы, аналогичную наблюдаемой для остеобластов. Считается, что щелочная фосфатаза гидролизует органический фосфат, высвобождая Pi, который может использоваться клетками для создания HA (Robison, 1923; Simao et al , 2007). Когда функция ALP ингибируется обработкой левамизолом клеток 4T1, не происходит индуцированной β G минерализации.Это, вероятно, связано с нарушением продукции Pi из β G. Напротив, нарушение функции ALP не влияет на индуцированную Pi минерализацию, поскольку Pi уже свободно доступен для использования клетками для продукции HA. Это также могло бы объяснить, почему минерализация последовательно обнаруживается в более ранние моменты времени для клеток, обработанных Pi, поскольку считается, что гидролиз β G зависит от времени.

Потенциальная роль OPN была исследована в нашей модели in vitro минерализации клеток молочных желез, поскольку этот фосфопротеин высоко экспрессируется в кости и, как известно, активируется во время формирования кости (Chen et al. , 1992; Standal et al. al , 2004).Сообщалось также о повышенной экспрессии OPN в опухолях груди, содержащих микрокальцификаты (Bellahcene and Castronovo, 1995). Было обнаружено, что эндогенная экспрессия мРНК OPN повышается в группе минерализующихся OC на 21 день. Это является дополнительным доказательством того, что клетки молочной железы минерализуются регулируемым образом, подобно остеобластам. Кроме того, увеличение мРНК OPN было обнаружено на 11 день в группе OC & dex. Это может способствовать пониженному уровню минерализации, наблюдаемому в группе OC & dex по сравнению с группой OC.Считается, что остеопонтин отрицательно регулирует минерализацию, связываясь и предотвращая дальнейший рост кристаллов ГК (Boskey et al , 1993; Gericke et al , 2005; Jahnen-Dechent et al , 2008). Относительно раннее повышение экспрессии мРНК OPN в сочетании с тенденцией к снижению экспрессии мРНК ALP в группе OC & dex может объяснить, почему в этой группе лечения была обнаружена меньшая минерализация.

Роль OPN была дополнительно исследована путем изучения влияния экзогенного OPN на минерализацию 4T1, поскольку известно, что он ингибирует минерализацию остеобластов in vitro (Boskey et al , 1993; Addison et al , 2007) .Однако экзогенное добавление OPN не влияло на минерализацию клеток 4T1 при добавлении к OC. Точно так же экзогенная обработка PPi, другого известного ингибитора минерализации остеобластов (Addison et al , 2007), не оказывала влияния на минерализацию 4T1. Эти результаты показывают, что процесс минерализации молочной железы может не полностью совпадать с процессом физиологической минерализации. Мы предположили, что это наблюдение может быть связано с высоким эндогенным уровнем ЩФ, поскольку было показано, что ЩФ устраняет ингибирующий эффект как ОПН, так и пирофосфата посредством дефосфорилирования и гидролиза, соответственно.Остеопонтин активен только в фосфорилированной форме (Boskey et al , 1993; Hunter et al , 1994; Keykhosravani et al , 2005), и пирофосфат может гидролизоваться до Pi, что устраняет его ингибирующее действие (Lomashvili et al. al , 2004; Addison et al , 2007; Simao et al , 2007). Поэтому окрашивание и анализ ЩФ использовали для изучения эндогенной активности ЩФ в минерализующейся клеточной линии 4T1 по сравнению с неминерализующейся клеточной линией MCF10a.Как и предполагалось, сравнительно высокие уровни активности ЩФ можно было обнаружить даже в контрольных клетках 4T1, тогда как в клеточной линии MCF10a при любом исследуемом лечении активность ЩФ была незначительной или отсутствовала вовсе. Дополнительное повышение активности ЩФ наблюдалось в клетках 4T1 в ответ на ОК. Следовательно, усиленная экспрессия и без того высоких эндогенных уровней ALP может устранить ингибирующие эффекты OPN и пирофосфата в этой модели in vitro .

Влияние условий культивирования in vitro , которые привели к минерализации, также исследовали в отношении миграции клеток.Используя анализы царапин на ранах, было обнаружено, что 10 мкл β G увеличивали миграцию клеток 4T1 на 40% после 48 часов обработки по сравнению с контрольной группой. Поскольку микрокальцификаты могут образовываться в ответ на локально высокие концентрации кальция, также исследовали возрастающие концентрации кальция. В целом было обнаружено, что 10 мкл кальция увеличивал миграцию клеток 4T1 на ~ 30% после 48-часовой обработки по сравнению с контрольной группой. Эти данные предполагают, что микросреда или условия ниши, предшествующие минерализации молочных желез и в конечном итоге ведущие к ней, могут способствовать миграции клеток 4T1.Затем были исследованы функциональные эффекты экзогенно кристаллизованного CO и HA на миграцию клеток 4T1. Было обнаружено, что кристаллы CO размером до 72 мкм г / см ^–2 не влияют на миграцию клеток в течение 48 часов обработки. Напротив, после 48 часов обработки 72 мкм г / см ^–2 кристаллов НА, миграция клеток 4T1 увеличилась на 20% по сравнению с контрольной группой. Поскольку возрастающие концентрации фосфата или кальция имели несколько более выраженные миграционные эффекты, чем добавление экзогенной кристаллизованной ГК, вполне возможно, что фаза предварительной минерализации имеет наибольшее биологическое значение.Минерализация приведет к связыванию кальция и фосфата, которые могут высвобождаться хронически, и его эффекты могут быть более выраженными при анализе, проводимом в течение более длительного периода времени. Увеличение миграции клеток, наблюдаемое при лечении ГК, но не наблюдаемое при лечении СО, придает вес теории о том, что ГК и условия, предшествующие ее отложению, могут иметь функциональные биологические последствия в микросреде опухоли. Эти данные свидетельствуют о том, что депонированный ГК может стимулировать миграцию окружающих клеток в микроокружении опухоли, что может способствовать прогрессированию рака груди.Ранее мы сообщали, что обработка HA нескольких линий клеток молочной железы активирует продукцию MMP (Morgan et al , 2001), которые, как известно, вносят вклад в инвазию рака груди в окружающие ткани (Lochter and Bissell, 1999). Следовательно, присутствие HA в микросреде опухоли может способствовать прогрессированию рака груди и, в конечном итоге, метастазированию, продуцируя MMP для разрушения базальной мембраны и усиления миграции клеток в окружающие ткани.

Основываясь на результатах, обсуждаемых в этой статье, мы выдвинули механизм in vitro 4T1 минерализации клеток молочной железы (). Мы предполагаем, что ЩФ на поверхности клеток молочной железы гидролизует β G до глицерина и Pi. Полученный Pi может затем транспортироваться в клетки молочной железы с помощью котранспортеров Na-Pi типа II. Оказавшись внутри клетки, Pi может объединяться с любыми доступными источниками кальция для производства кристаллов HA. Клетки молочных желез обладают врожденной способностью концентрировать ионы кальция, поскольку это происходит в естественных условиях, обеспечивая возможность лактации (Virk et al , 1985; VanHouten et al , 2007).Затем гидроксиапатит покидает клетки по еще неизвестному механизму. Остеопонтин и PPi во внеклеточном матриксе не влияют на ограничение роста кристаллов, возможно, из-за активации ALP. Щелочная фосфатаза может действовать путем дефосфорилирования OPN и гидролиза PPi до Pi, который впоследствии может быть включен в растущие кристаллы HA. Таким образом, мы предполагаем, что дисбаланс этих регуляторов физиологической минерализации в микросреде опухоли может быть ответственным за формирование патологических микрокальцификатов молочной железы.Гидроксиапатит и биохимические условия, которые инициируют его отложение, могут затем усилить миграцию окружающих клеток молочной железы. Кроме того, остеомимикрические способности клеток молочной железы могут также способствовать их способности метастазировать в кость, когда они попадают в кровоток, поскольку они будут обладать врожденной способностью выживать в костном микроокружении.

Предлагаемый механизм минерализации клеток молочной железы. β G гидролизуется до глицерина (G) и Pi под действием ALP.Неорганический фосфат интернализуется семейством котранспортеров Na-Pi типа II. Попав внутрь клетки, Pi соединяется с кальцием (Ca) с образованием HA. Происходит повышающая регуляция мРНК ALP. Гидроксиапатит проникает во внеклеточный матрикс по еще неизвестному механизму. Неорганический пирофосфат действует как естественный ингибитор образования ГК. Однако сверхэкспрессия ALP опухолевыми клетками молочной железы может привести к гидролизу PPi до Pi, который впоследствии может быть включен в HA. Остеопонтин также является естественным ингибитором образования HA, однако сверхэкспрессия ALP может дефосфорилировать OPN, делая его неактивным и тем самым устраняя его ингибирующий эффект.Кристаллы гидроксиапатита, присутствующие во внеклеточном матриксе, усиливают пролиферацию и миграцию окружающих клеток и еще больше усугубляют рост и метастазирование опухоли.

Одной из наиболее примечательных характеристик модели является то, что клетки вырабатывают НА, разновидность кальция, которая обнаруживается в клинических образцах человека. В условиях, исследованных in vitro, только более опухолевые клеточные линии были способны к минерализации, что позволяет предположить, что наша модель in vitro и предлагаемый механизм могут быть наиболее полезными для изучения отложения кальция, связанного со злокачественными новообразованиями груди.Как и во всех моделях in vitro, существуют ограничения в повторении сложных взаимодействий, которые могут иметь место в сценарии in vivo . Несмотря на это, наша модель клеточной линии имеет то преимущество, что предоставляет неограниченный источник гомогенного материала и не содержит потенциальных контаминирующих стромальных клеток, что дает возможность проводить воспроизводимые механические эксперименты в контролируемой среде. Хотя переносимость результатов, полученных на клеточных линиях, на опухоли, повсеместно остается предметом дискуссий, эта модель представляет собой отправную точку в области, которая ранее не была исследована.

Эта работа предлагает понимание процесса злокачественной минерализации в ткани груди и, в конечном итоге, проложит путь к более полному пониманию сложных взаимоотношений между минералом, микросредой и состоянием дифференцировки клеток, которые их откладывают. Поскольку все больше случаев рака молочной железы выявляется на пред пальпируемой стадии, в основном из-за наличия микрокальцификатов молочной железы, крайне важно, чтобы текущие исследовательские усилия отражали эти разработки и были сосредоточены на понимании биологии, лежащей в основе одного из самых надежных маркеров доклинического рака молочной железы. .

Кальцификационная микроструктура отражает микросреду тканей груди

В итоге наши результаты демонстрируют значительное увеличение длины когерентности, размера кристаллитов и неоднородной деформации кальцификатов с увеличением злокачественности тканей. Значения этих характеристик сопоставимы с другими природными апатитами; размером от 23 до 39 нм и неравномерной деформацией порядка 10 90 · 109 −3 90 · 110 [21, 25]. Эти данные подтверждают мнение о том, что механизмы образования кальцификации в различных тканевых микроокружениях могут различаться, поэтому ниже мы предлагаем новую модель этого процесса.Это суммировано на рис. 5.

Сводная диаграмма, показывающая факторы микросреды, влияющие на включение различных типов карбоната в HAp при микрокальцификациях, связанных с доброкачественными, DCIS и инвазивными клетками ткани груди

Микроокружение ткани и образование кальцификации

Микроокружение тканей, окружающее доброкачественные, in-situ и инвазивные клетки, может сильно различаться, и поэтому ионная среда, в которой формируются кальцификаты, может быть разной.Способность инвазивной клетки к метастазированию определяется условиями в ее микроокружении, которое регулируется многочисленными факторами, включая pH, белки, внеклеточный матрикс, клеточные процессы и концентрации ионов [12]. Известно также, что биогенные кальцификаты обладают различными характеристиками, такими как фазовый состав и содержание карбонатов, когда они связаны с различными тканевыми патологиями [14, 15, 22].

Кислотность — важный фактор образования кальциноза.Внеклеточная кислотность также является ключевым маркером агрессивности рака, вызванной переключением на гликолитический тип дыхания, вызванным гипоксией в опухолевых клетках, известным как эффект Варбурга. Гликолиз производит более высокий уровень ионов водорода по сравнению с аэробным дыханием, которое, в свою очередь, истекает из цитоплазмы для поддержания нейтрального или щелочного внутриклеточного pH, в результате чего внеклеточный pH становится более кислым [12, 32, 33]. Кроме того, действие углекислых ангидраз (КА) внутриклеточно и внеклеточно приводит к кислому внеклеточному pH из-за превращения углекислого газа в воде в водород и бикарбонат-ионы во внеклеточной жидкости [34].Экспрессия одного внеклеточного CA, CAIX, также была связана с более высокой степенью DCIS и инвазивной карциномой, одновременно с повышением кислотности внеклеточного pH и злокачественными новообразованиями [35, 36].

Влияние на образование кальцификации сообщается в исследованиях, в которых кислый pH увеличивает вероятность образования кислого предшественника в процессе образования гидроксиапатита [11]. Нейтральный и щелочной pH способствует прямому превращению ACP в HAp, тогда как кислый pH вызывает образование дополнительного предшественника, такого как OCP [37].Следовательно, различия во внеклеточном pH между доброкачественными, in-situ и инвазивными клетками могут привести к различным механизмам образования микрокальцификатов гидроксиапатита. Эти разные механизмы образования приводят к включению различных типов карбонатного замещения; Гидролиз ACP способствует замещению карбоната как в гидроксидном сайте (A-тип), так и в фосфатном сайте (B-тип), тогда как гидролиз OCP способствует включению карбоната в сайты B-типа [38]. Следовательно, доброкачественные клетки с нейтральным pH среды способствуют гидролизу ACP, который с большей вероятностью приводит к образованию карбонатных апатитов A / B, тогда как инвазивные клеточные среды (благоприятствующие гидролизу OCP) могут приводить к преимущественно карбонатным апатитам B-типа.Это дополнительно подтверждается наблюдениями, что включение натрия в решетку HAp индуцирует образование OCP, а замещение натрия является самым высоким при инвазивных кальцификациях [15, 39]. Также было показано, что гипоксия инициирует остеогенную дифференцировку в других типах клеток, поэтому может вносить вклад в различные механизмы формирования доброкачественных, in-situ и инвазивных патологий ткани груди [40].

Кроме того, при низком процентном содержании карбоната (<4 мас.%) Более низкий мас.% Карбоната был связан с карбонатным замещением B-типа, а более высокий мас.% Благоприятствовал A-типу [20].В совокупности с исследованиями, в которых сообщается о более низком уровне общего карбоната при инвазивных кальцификациях и повышении уровней при уменьшении злокачественности, это свидетельствует о предпочтении карбоната B-типа при инвазивных кальцификациях и A-типа при доброкачественных [22].

Вместе кислый внеклеточный pH и ранее сообщенные концентрации карбоната в микрокальцификациях предполагают более высокий уровень карбоната B-типа в кальцификациях HAp, связанных с инвазивной тканевой патологией. Точно так же нейтральный pH и более высокое содержание карбоната в массе доброкачественных клеток предполагают повышенное включение карбоната A-типа.Эти механизмы отражаются в измерениях микроструктуры и параметрах решетки, измеренных при доброкачественных, in-situ и инвазивных кальцификациях.

Кальцификационная микроструктура

Предыдущие исследования продемонстрировали уменьшение общего карбонатного замещения с увеличением злокачественности ткани, что должно приводить к увеличению размера кристаллитов при злокачественности [17, 22]. Это наблюдение также подтверждается нашими данными; микрокальцификации, связанные с инвазивными опухолями, характеризовались как обладающие наибольшим размером кристаллитов (рис.4) Впервые наш анализ также позволяет сделать более конкретный вывод относительно распределения карбоната в решетке.

Увеличение общего карбонатного замещения также было связано с увеличением неоднородного штамма, поэтому можно было бы ожидать уменьшения неоднородного штамма со злокачественными новообразованиями [21]. Однако представленные здесь данные указывают на обратную тенденцию. Ранее было показано, что замены B-типа увеличивают неоднородный штамм [17]. Замены B-типа, в принципе, для того же количества замен будут давать более неоднородный штамм, чем у A-типа.Это связано с тем, что карбонатное замещение фосфата происходит случайным образом в 6 кристаллографически эквивалентных сайтах ( hm ) в элементарной ячейке, по сравнению с 2 ( e3 ) для гидроксидных замещений. Неоднородные значения деформации, наблюдаемые в этом исследовании, предполагают увеличение замещения карбоната B-типа с увеличением злокачественности. Однако, учитывая, что общий карбонат уменьшается со злокачественными новообразованиями, это исследование предполагает, что решетчатый карбонат микрокальцификатов молочной железы занимает сайты как A-типа, так и B-типа [22].

Эта модель дополнительно подтверждается предыдущими оценками размеров элементарной ячейки апатита, выявленными измерениями параметров решетки. Карбонатные замещения А-типа увеличивают ось «а» апатита из-за того, что СО ₃ имеет значительно больший ионный радиус, чем ОН. Напротив, карбонат B-типа уменьшает ось «а» из-за того, что CO ₃ имеет меньший радиус, чем фосфат [28]. Кроме того, карбонатные замещения A-типа уменьшают ось «c», а B-тип увеличивает ось «c» [28].Предыдущие исследования показали уменьшение оси «а» при злокачественных новообразованиях и увеличение оси «с», что дополнительно подтверждает точку зрения о том, что количество карбонатного замещения B-типа увеличивается, а замещение A-типа уменьшается с увеличением злокачественности [14]. .

Распределение данных, наблюдаемое на всех графиках Вильямсона-Холла, указывает на микроструктурную анизотропию. Отсутствие надежных пиков в отражениях, кроме 00ℓ, означает, что только данные в этом отражении можно разделить на размер и неоднородную деформацию.Однако отмеченное увеличение CL со злокачественностью во всех трех проанализированных отражениях (рис. 3) указывает на то, что размер кристаллитов и / или неоднородная деформация также изменяются в направлениях и <0 k0>. Было отмечено, что белки взаимодействуют с небазальными сторонами HAp, ограничивая рост при нейтральном pH [41]. Внеклеточная кислотность может вызывать изменения в конформации белка в раковых клетках, позволяя увеличить CL в направлениях <0 k0> и , следовательно, направленное отклонение в величине различия.Таким образом, для разработки количественных биомаркеров на основе микроструктурных особенностей требуется соответствующий выбор направления решетки для максимальной чувствительности.

Важность микроструктурных различий

Исследования ранее показали, что общее содержание карбонатов в гидроксиапатите положительно коррелирует с растворимостью кристаллов, что позволяет предположить, что доброкачественные кальцификаты груди более растворимы, чем патологические, вследствие соответствующего содержания карбонатов в них. [21, 22].Однако более стабильные кальцификаты обычно считаются доброкачественными [42]. Положительная корреляция между неоднородной деформацией и растворимостью карбонизированного апатита была обнаружена ранее, что может предложить объяснение этого очевидного противоречия, когда менее напряженные кристаллиты, то есть кристаллиты в доброкачественных кальцификациях, менее растворимы [21]. Это может указывать на то, что тип карбоната также играет роль в других характеристиках кальцификации. Кроме того, более кислый pH увеличивает растворимость гидроксиапатита, что также может играть роль в относительной нестабильности кальцификатов в патологической ткани [43].

Кроме того, было показано, что взаимодействие кальцификации с белками окружающей ткани играет важную роль в распространении характеристик вирулентности опухоли. Например, было показано, что присутствие гидроксиапатита в линиях клеток молочной железы активирует матриксные металлопротеиназы, которые являются ключевыми белками при деградации базальной мембраны, усиливают митогенез и индуцируют продукцию интерлейкинов (ИЛ) [44]. Также было продемонстрировано, что морфология поверхности кристаллов гидроксиапатита влияет на уровень адсорбции белка на кристаллах, что может иметь последующие эффекты на экспрессию маркеров остеобластов, таких как связанный с Runt фактор транскрипции 2 (RUNX2) и щелочная фосфатаза (ALP). [45].Более того, замещение ионов, таких как карбонат, в решетке гидроксиапатита может повлиять на морфологию кристаллов, а это означает, что микроструктура микрокальцификатов потенциально может влиять на последующие эффекторы и, следовательно, на характеристики вирулентности опухоли [20, 46].

Микрокальцификации при раке груди: активное явление, опосредованное эпителиальными клетками с мезенхимальными характеристиками | BMC Cancer

CAS Статья PubMed Google ученый

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Рак груди и микрокальцификации: остеоиммунологическое заболевание?

Отчет о вашей патологии: доброкачественные заболевания груди

При проведении биопсии груди взятые образцы были изучены под микроскопом врачом-специалистом с многолетней подготовкой по имени патолог .Патологоанатом отправляет вашему врачу отчет с диагнозом для каждого взятого образца. Информация в этом отчете будет использоваться для управления вашим лечением. Следующие вопросы и ответы призваны помочь вам понять медицинский язык, который вы можете найти в отчете о патологии при биопсии груди, такой как игольная биопсия или эксцизионная биопсия.

При игольчатой ​​биопсии полая игла используется для взятия образца из аномальной области. При эксцизионной биопсии удаляется вся аномальная область, часто вместе с некоторыми окружающими нормальными тканями.Иссеченная биопсия очень похожа на операцию по сохранению груди, называемую лампэктомией.

Что это означает, если в моем отчете используются какие-либо из следующих терминов: аденоз, склерозирующий аденоз, апокринная метаплазия, кисты, изменение столбчатых клеток, гиперплазия столбчатых клеток, коллагеновый сферулез, эктазия протоков, столбчатые изменения с выступающими апикальными мордами и выделениями (CAPSS) , папилломатоз или фиброзно-кистозные изменения?

Все эти термины описывают доброкачественные (незлокачественные) изменения, которые патолог может увидеть под микроскопом.Их не нужно лечить. Они не вызывают беспокойства, если обнаруживаются вместе с раком. Более подробную информацию о многих из них можно найти в «Доброкачественные заболевания груди».

Что значит, если в моем отчете говорится о некрозе жировой ткани?

Некроз жира — доброкачественное заболевание, не связанное с риском рака. Чаще всего это вызвано травмой (травмой) груди, хотя может наблюдаться и без травм в анамнезе.

Что это значит, если в моем отчете говорится об обычной гиперплазии протоков (UDH)?

UDH — это доброкачественное открытие, которое связано с небольшим увеличением заболеваемости раком груди в будущем.Его не нужно полностью удалять или обрабатывать каким-либо иным образом.

Что делать, если в моем отчете говорится о лучевом рубце или сложном склерозирующем поражении?

Эти результаты доброкачественные (не злокачественные). Если эти результаты видны при эксцизионной биопсии, дальнейшие действия не требуются. Однако если они обнаружены при игольчатой ​​биопсии, все не так просто. Если поражение небольшое, полностью удалено с помощью игольной биопсии или не связано с тем, что было видно на маммограмме, дальнейшее лечение может не потребоваться. Однако для более крупных или не полностью удаленных с помощью игольной биопсии поражений может потребоваться удаление большего количества ткани из этой области, потому что иногда они обнаруживаются рядом с чем-то более серьезным, что, возможно, требует лечения.Вам следует поговорить со своим врачом о том, что лучше всего в вашем случае.

Что значит, если в моем отчете говорится о папилломе?

Папиллома — это доброкачественное (не злокачественное) образование. Если при эксцизионной биопсии обнаруживается папиллома, дальнейшее лечение обычно не требуется. Когда папиллома диагностируется при игольчатой ​​биопсии, все не так просто. Если папиллома небольшого размера и то, что было видно на маммограмме, выглядело как папиллома (а не что-то более серьезное), дальнейшее лечение может не потребоваться.Однако часто врач может порекомендовать удалить больше ткани в этой области, чтобы убедиться, что поблизости нет ничего более серьезного. Вам следует поговорить со своим врачом о том, что лучше всего в вашем случае.

Что означает, если в моем отчете говорится о плоской эпителиальной атипии?

Плоская эпителиальная атипия не является раком. Однако иногда его можно найти рядом с чем-то более серьезным. Если при эксцизионной биопсии обнаруживается атипия плоского эпителия, в большинстве случаев дальнейшие действия не требуются. Однако, если при пункционной биопсии выявляется атипия плоского эпителия, ваш врач может порекомендовать удалить часть ткани вокруг места биопсии (хирургическое иссечение).Тем не менее, лучший способ лечения атипии плоского эпителия неясен. Если ваша биопсия показала атипию плоского эпителия, лучше всего поговорить об этом со своим врачом.

Что делать, если в моем отчете говорится о фиброаденоме, фиброэпителиальном поражении или филлодарной опухоли?

Фиброаденома — самая распространенная доброкачественная (незлокачественная) опухоль молочной железы. Если он диагностирован при игольчатой ​​биопсии и то, что было видно на маммограмме, выглядело как фиброаденома (а не что-то более серьезное), его не нужно удалять, и его можно будет наблюдать без дальнейшего лечения.Если опухоль растет или вызывает проблемы с внешним видом груди, ее можно удалить.

A филлодийная опухоль — очень редкая опухоль молочной железы, которая развивается из клеток стромы (соединительной ткани) груди. Другие названия этих опухолей включают филлоидную опухоль и филлоидную цистосаркому . Эти опухоли обычно доброкачественные, но они могут вернуться и привести к ненормальному виду груди, если ее не удалить полностью. В редких случаях они могут быть злокачественными (рак).Злокачественные опухоли филлодий могут распространяться за пределы груди, хотя это случается реже, чем при более распространенных типах рака груди. Если опухоль филлодий диагностируется при игольчатой ​​биопсии, ее чаще всего лечат путем полного ее удаления (часто с помощью какого-либо вида операции по сохранению груди).

В некоторых случаях патологу, наблюдающему за иглой биопсии, может быть трудно сказать наверняка, является ли рост (опухоль) фиброаденомой (распространенной доброкачественной опухолью) или опухолью филлодий. В этом случае патолог может назвать это клеточным фиброэпителиальным поражением или доброкачественным фиброэпителиальным новообразованием .Поскольку это может быть филлодическая опухоль, опухоль чаще всего лечится путем ее полного удаления (часто с помощью какой-либо операции по сохранению груди, такой как лампэктомия).

Что означает, если в моем отчете упоминаются микрокальцификации или кальцификации?

Микрокальцификаты или кальцификаты — это отложения кальция, которые можно обнаружить как в незлокачественных, так и в раковых поражениях груди. Их можно увидеть как на маммограммах, так и под микроскопом. Определенные типы кальцификатов обнаруживаются в областях, содержащих рак.Если они видны на маммограмме, возможно, потребуется биопсия этой области. Затем, когда биопсия будет сделана, патолог осматривает удаленную ткань, чтобы убедиться, что она содержит кальцификаты. Если кальцификаты есть, врач знает, что при биопсии взят образец правильного участка (аномальный участок с кальцификациями, который был замечен на маммограмме).

Что означает, если в моем отчете о биопсии упоминаются специальные тесты, такие как высокомолекулярный цитокератин (HMWCK), CK903, CK5 / 6, p63, специфический для мышц актин, тяжелая цепь гладкомышечного миозина или кальпонин?

Это специальные тесты, которые иногда использует патолог, чтобы помочь поставить правильный диагноз различных поражений груди.Не всем пациентам нужны эти специальные тесты. Упоминание этих тестов в вашем отчете не влияет на точность вашего диагноза.

Очерки патологии — Микрокальцификации

Другие неопухолевые

Микрокальцификации

Тема завершена: 1 июня 2010 г.

Незначительные изменения: 26 августа 2020 г.

Поиск в PubMedc: в груди [название]

Просмотры страниц в 2020 г .: 2,767

Просмотры страниц в 2021 г. по настоящее время: 3,109

Цитируйте эту страницу: Warzecha H.Микрокальцификации. Сайт PathologyOutlines.com. https://www.pathologyoutlines.com/topic/breastcalcification.html. По состоянию на 4 декабря 2021 г.

Определение / общее

• Отложения кальция в ткани груди, видимые на маммографических изображениях

Эпидемиология

• Может возникнуть в любом возрасте, но чаще встречается после менопаузы

Этиология

• Может быть связан как с доброкачественными, так и со злокачественными новообразованиями

Клинические особенности

• Наличие микрокальцификатов на маммографии привело к обнаружению опухолей молочной железы размером от 1 до 2 мм.
• Микрокальцификации присутствуют в 50% карцином по сравнению с 20% доброкачественных заболеваний груди, но только 20% «подозрительных» микрокальцификатов на самом деле являются частью злокачественного процесса.

Описание рентгенологического исследования

• Подозрительные микрокальцификации нерегулярные и мелкие; не вызывают подозрений — грубые и короткие
• Патологоанатомы должны обнаруживать микрокальцификации на предметных стеклах, которые соответствуют микрокальцификации на предметных стеклах на рентгеновских снимках — если они отсутствуют, представить дополнительную ткань, получить дополнительные уровни или использовать поляризованную микроскопию для поиска оксалата кальция (Pathologica 2007; 99: 5)
• Исчерпывающий поиск микрокальцификаций дает небольшое увеличение конкретной диагностической информации, но требует высоких технических затрат (Mod Pathol 2001; 14: 350)
• Примечание: микрокальцификаты могут отсутствовать при биопсии из-за неудачного извлечения (Radiology 2006; 239: 61)
• Примечание: рекомендуется гистологически исследовать все образцы вакуумной биопсии груди, даже без микрокальцификаций (Eur Radiol 2008; 18: 925)
• Обнаружение микрокальцификаций фосфата кальция снижается с помощью глиоксаля фиксатора (Hum Pathol 2004; 35: 1058)

• Категория 0 — требуется дополнительная визуализация
• Категория 1 — отрицательная
• Категория 2 — доброкачественное обнаружение
• Категория 3 — вероятно доброкачественное обнаружение — рекомендуется краткосрочное интервальное наблюдение
• Категория 4 — подозрительное отклонение — следует рассмотреть возможность биопсии
• Категория 5 — серьезные подозрения на злокачественное новообразование — необходимо принять соответствующие меры
• Ссылки: Американский радиологический колледж: Атлас ACR BI-RADS®, пятое издание, 2013 г.
• Предложил радиологам подклассифицировать BI-RADS 4 как 4A (низкое подозрение на злокачественность), 4B (промежуточное подозрение на злокачественность) и 4C (умеренное беспокойство, но не классическое для злокачественности, Breast J 2010; 16:28)

• Тип 1 — кольцевой
• Тип 2 — правильно точечный
• Тип 3 — слишком тонкий для уточнения формы
• Тип 4 — точечная неправильная форма
• Тип 5 — червеобразный (Bull Cancer 1984; 71: 57)

Радиологические изображения

DCIS

Микроскопическое (гистологическое) описание

• Микрокальцификации фосфата кальция связаны с доброкачественными и злокачественными заболеваниями; синие / фиолетовые псаммомы, похожие на куски
• Кристаллы оксалата кальция обычно находятся в доброкачественных кистах или терминальных протоках, гистологически апокринных или положительных по GCDFP-15; связаны с LCIS, но очень редко с инвазивной карциномой (Am J Surg Pathol 1991; 15: 586)
• Кристаллы оксалата кальция могут присутствовать в центрифугированном фиксаторе (Am J Surg Pathol 1997; 21: 255)

Микроскопические (гистологические) изображения

Кальцификаты оксалата кальция

С поляризованным светом

Без поляризованного света

Доброкачественные образования с микрокальцификациями

ADH

Склерозирующий аденоз

Изображения, размещенные на других серверах :

Доброкачественные образования с микрокальцификациями:

Мукоцеле-подобное поражение

Влияние кальцификаций на ультразвуковую эластографию сдвиговой волной груди: исследовательское исследование

Аннотация

Назначение

Изучить влияние макрокальцификатов и кластерных микрокальцификатов, связанных с доброкачественными новообразованиями груди, на эластографию сдвиговой волной (SWE).

Методы

SuperSonic Imagine (SSI) и ультразвуковая эластография сдвига гребенчатым методом (CUSE) были выполнены на трех наборах фантомов, чтобы исследовать, как кальцификаты различных размеров и распределений влияют на измеренную эластичность. Чтобы продемонстрировать эффект in vivo , CUSE оценили трех пациенток с доброкачественными новообразованиями в груди, связанными с кальцификациями, выявленными при маммографии.

Результаты

Оценки кажущейся максимальной эластичности (E _max ), полученные в результате отдельных макрокальцификаций (с диаметрами 2 мм, 3 мм, 5 мм, 6 мм, 9 мм, 11 мм и 15 мм), показали значения более 50 кПа для всех случаев, что представляет собой увеличение более чем на 100%. над фоном (~ 21кПа).Мы рассматривали круговую область диаметром 2 см, представляющую интерес для всех экспериментов с фантомами. Среднее значение эластичности (E _{, среднее значение} ) варьировалось от 26 кПа до 73 кПа, в зависимости от размера макрокальцификации. Высокоплотные кластеры микрокальцификаций показали более высокие значения E _max , чем кластеры микрокальцификации с низкими концентрациями, но разница в средних значениях E _{не была значительной.}

Выводы

Наши результаты демонстрируют, что присутствие крупных изолированных макрокальцификатов и высококонцентрированных кластеров микрокальцификатов может привести к появлению участков с явно высокой эластичностью в SWE.Учитывая, что доброкачественные образования груди обычно имеют значительно более низкие значения эластичности, чем злокачественные опухоли, такие области с высокой эластичностью, появляющиеся из-за наличия кальциноза в доброкачественных образованиях груди, могут привести к ошибочному диагнозу.

Образец цитирования: Gregory A, Mehrmohammadi M, Denis M, Bayat M, Stan DL, Fatemi M, et al. (2015) Влияние кальцификаций на ультразвуковую эластографию сдвиговой волной груди: исследовательское исследование. PLoS ONE 10 (9): e0137898. https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0137898

Редактор: François Hug, Universite de Nantes, FRANCE

Поступила: 27 марта 2015 г .; Одобрена: 23 августа 2015 г .; Опубликован: 14 сентября 2015 г.

Авторские права: © 2015 Gregory et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах бумага.

Финансирование: Mayo Clinic финансово заинтересована в технологии, описанной здесь.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Кальцификаты груди — это минеральные отложения, которые могут образовываться по разным причинам. Часто кальцификаты присутствуют как в доброкачественных, так и злокачественных образованиях молочной железы [1, 2]. Несколько исследований показали, что кальцификаты доброкачественных образований в основном состоят из оксалата кальция, тогда как кальцификаты злокачественных образований состоят из гидроксиапатита кальция [3–7].Более того, размер и распределение кальцификатов груди различаются между доброкачественными и злокачественными образованиями груди. Доброкачественные кальцификации могут проявляться в виде рассеянных или сгруппированных структур и могут быть очень маленькими (микрокальцификации) или большими (макрокальцификации). Злокачественные кальцификаты обычно образуют линейные или сегментарные паттерны и обычно более рассредоточены и плеоморфны [1, 2, 8, 9].

В настоящее время маммография и ультразвуковое исследование являются наиболее часто используемыми инструментами визуализации для обнаружения рака груди.По сравнению с ультрасонографией, маммография имеет более высокую чувствительность при обнаружении кальцификатов. Однако из-за относительно низкой чувствительности (67,8%) и специфичности (75%) маммографии при скрининге рака [10] появляются новые методы для улучшения этих статистических показателей. Одним из методов является виброакустография (ВА), метод визуализации, чувствительный к динамическим характеристикам ткани [11]. Исследования ex vivo и in vivo VA для выявления повреждений груди, включая макро- и микрокальцификации, показали многообещающие результаты [12–19].Еще одним новым методом является визуализация эластичности, включая квазистатическую эластографию и эластографию сдвиговой волной (SWE). Квазистатические методы в основном качественные [20, 21], однако некоторые отображают модуль с точностью до мультипликативного параметра и, следовательно, являются количественными в этом смысле. С другой стороны, методы поперечных волн являются количественными и используют силу акустического излучения ультразвука для генерации поперечных волн в ткани. С помощью методов визуализации эластичности поперечной волны эластичность ткани можно рассчитать по измеренной скорости поперечной волны [22–25].Эластография на основе сдвиговой волны дает информацию, аналогичную пальпаторной, например, о жесткости тканей. Хорошо известно, что злокачественные образования обычно более жесткие, чем доброкачественные [26–29], по этой причине для различения доброкачественных и злокачественных образований в разных органах использовались разные методы SWE. SuperSonic Imagine (SSI) [22, 30] и визуализация поперечных волн с использованием импульса силы акустического излучения (ARFI) [31, 32] являются двумя наиболее известными методами SWE. Преимущества этих методов в дифференцировке новообразований груди хорошо изучены [31, 33–39], но мало исследований изучали влияние кальцификации груди на SWE [40–42].

Когда ткань характеризуется своими физическими свойствами, такими как эластичность, важно учитывать, какие факторы могут повлиять на жесткость ткани и потенциально привести к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Кальцификаты груди имеют совершенно иное эластичное поведение, чем нормальная или аномальная ткань груди, и часто встречаются на маммограммах (до 80%) [43]. Модуль упругости (модуль Юнга) оксалата кальция (24,5 ГПа) и гидроксиапатита кальция (40-117 ГПа) [44, 45] чрезвычайно велик по сравнению со средними значениями эластичности (E _{, среднее значение} ) доброкачественных образований (10-80 кПа) и злокачественные образования (30–180 кПа) [46–52].Ожидается, что соответствующие скорости поперечных волн (если они вообще обнаруживаются) намного превышают самую высокую частоту кадров ультразвукового изображения, доступную в настоящее время для SWE. Артефакты визуализации и отслеживания, напротив, могут привести к ошибочным показаниям эластичности в месте кальцификации, которые могут находиться в динамическом диапазоне методов SWE.

В этой статье мы экспериментально оцениваем, насколько повышается показание жесткости при наличии кальцификатов на SWE. Мы сосредоточили внимание на характеристиках доброкачественных кальцификатов и изучили влияние микрокальцификатов и макрокальцификатов с использованием методов ультразвуковой эластографии сдвига гребенчатым методом (CUSE) и SuperSonic Imagine (SSI).Представлены результаты фантомных исследований кальцификатов и оценки in vivo CUSE у женщин с доброкачественными образованиями молочной железы с кальцификациями.

Методы и материалы

Метод и система визуализации CUSE

CUSE — это основанный на быстром ультразвуке метод количественной и двумерной визуализации упругости поперечных волн, в котором несколько поперечно распределенных силовых пучков акустического излучения используются для одновременного возбуждения ткани и индукции поперечных волн [53].CUSE с четырьмя сфокусированными толкающими лучами является одним из методов визуализации поперечной волны для этого исследования (рис. 1а). Скорость локальной поперечной волны измерялась в каждом пикселе путем усреднения скорости волн слева направо (LR) и справа налево (RL) (рис. 1b). Рассчитанные значения скорости поперечной волны были использованы для восстановления карты скорости поперечной волны с цветовой кодировкой (рис. 1c) [54].

Рис. 1. Метод CUSE.

(а) Возбуждение среды с помощью четырех эквидистантных акустических лучей радиационной силы. (b) Обнаружение распространения поперечных волн LR (, красные стрелки, ) и RL (, синие стрелки, ).(c) Реконструкция двумерной карты поперечной волны по рассчитанной скорости распространения поперечной волны.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g001

Для этого исследования мы использовали CUSE, который был реализован в системе Verasonics V1 (Verasonics Inc, Киркланд, Вашингтон, США), оснащенной преобразователем с линейной решеткой. L7-4 (Philips Healthcare, Andover, MA), как описано в Mehrmohammadi et. al [26]. Были получены изображение в B-режиме и данные в фазе / квадратуре (IQ). Данные IQ обрабатывались программой на базе Matlab (Mathworks Inc., MA) графический интерфейс пользователя для восстановления карты скорости поперечной волны. Для сглаживания карты поперечных волн применялся средний фильтр 5 × 5 пикселей. Изображение в B-режиме было наложено на карту скорости поперечной волны, чтобы получить окончательное изображение. Никаких шумоподавлений или усреднения кадров не производилось.

Система SSI

SSI, выполняемый AixPlorer (SuperSonic Imagine, Экс-ан-Прованс, Франция), представляет собой метод ультразвуковой визуализации сдвига в режиме 2D-SWE в реальном времени, который предоставляет информацию об эластичности. Этот метод возбуждает ткань путем создания силы акустического излучения в разных точках фокусировки вдоль оси луча (рис. 2a) со сверхзвуковой скоростью, создавая две поперечные волны, распространяющиеся в противоположных направлениях (рис. 2b).Путем измерения и отслеживания локальных смещений, вызванных распространением поперечной волны, система восстанавливает карту упругости (рис. 2c) [22].

Рис. 2. Метод SSI.

(а) Возбуждение среды путем создания последовательности точек силы акустического излучения, параллельных оси пучка. (б) Распространение двух поперечных волн в противоположных направлениях. (c) Реконструкция двухмерной карты эластичности по измеренному локальному смещению.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g002

В данном исследовании использовался датчик с линейной решеткой с полосой пропускания 4–15 МГц (SuperLinear SL15-4, Экс-ан-Прованс, Франция). Для цветовой шкалы изображений SWE было установлено значение по умолчанию, заданное системой Aixplorer (≥7,7 м / с). Визуализация SWE была установлена ​​в режим проникновения. Изображения B-режима и эластичности были собраны в формате DICOM и проанализированы с помощью программного обеспечения для обработки изображений OsiriX (Pixmeo SARL, Женева, Швейцария).

Исследования фантомов, имитирующих ткань

Три серии экспериментов были выполнены на фантомах, имитирующих ткань, для оценки влияния кальцификатов на SWE.

Эксперимент 1 — Исследование влияния размера кальцификации.

Первый эксперимент включал семь кальцинированных включений в ткани, имитирующей желатиновый фон. Кальцифицированные включения образованы почечнокаменной болезнью (КС). По химическому составу камни в почках представляли собой оксалат кальция (CaC ₂ O ₄ ) [55–59], который аналогичен составу доброкачественных кальцификатов, обнаруживаемых в ткани груди [5]. Целью фантома было исследование влияния макрокальцификатов разных размеров на оценки упругости поперечной волны.Мы выбрали семь камней в почках диаметром 2 мм, 3 мм, 5 мм, 6 мм, 9 мм, 11 мм и 15 мм, чтобы представить грубые или похожие на попкорн макрокальцификаты. Фантом был изготовлен путем смешивания 75% об. / Об. Дистиллированной воды, 9% об. / Об. Желатина из свиной кожи (300 bloom, Sigma Aldrich, Миссури, США), 10% об. / Об. Глицерина (Sigma Aldrich, Миссури, США) и 0,8% мас. / Мас. Лапонита (Sigma Aldrich, Миссури, США). К фону добавляли частицы целлюлозы размером 20 мкм и 50 мкм (Sigma Aldrich, Миссури, США). Первый слой желатиновой смеси выливали в кубическую форму размером 729 см ³ и покрывали пластиковой мембраной для застывания при комнатной температуре.Через 45 минут семь камней в почках поместили на фантом на площади 9 × 9 см, затем на них вылили второй слой желатиновой смеси (рис. 3).

После того, как второй слой был установлен, фантом вынули из формы и поместили на основание опорной стойки. Зонд был закреплен на вершине фантома, удерживаемого удлинительным зажимом, чтобы избежать смещения и эффектов предварительного сжатия при визуализации поперечной волны (SWI). Обычный B-режим был использован для локализации семи включений. Сначала была проведена визуализация эластичности SSI, а затем CUSE.Каждое включение отображалось отдельно.

Эксперимент 2 — Исследование влияния распределения кальцификатов.

Во втором эксперименте участвовали три желатиновых фантома для оценки влияния кальцификатов с различным распределением на SWE.

Первый фантом содержал 200 мг интактного почечного камня для имитации очень концентрированного дистрофического, грубого или похожего на попкорн макрокальцификации (рис. 4а). Второе фантомное включение состояло из 200 мг измельченного почечного камня, смешанного с 0.2 мл ткани, имитирующей желатин, напоминающую концентрированный кластер круглых и точечных микрокальцификатов (рис. 4b). Третье фантомное включение было сделано путем смешивания 200 мг измельченного почечного камня с 1,77 мл желатина, имитирующего ткань, чтобы он напоминал рассеянный кластер микрокальцификатов, подобных региональным рассеянным микрокальцификациям (рис. 4c). Каждое включение помещали между двумя слоями желатинового фона в 3 различных кубических формах 7 × 7 × 6 см. Рецепт желатинового фона и установка изображения для трех фантомов были аналогичны описанным для первого эксперимента.

Рис. 4. Эксперимент 2.

(а) Включение с 7-миллиметровым интактным почечным камнем. (б) Включение с кластерным распределением измельченного почечного камня. (c) Включение с региональным распределением измельченного почечного камня.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g004

Эксперимент 3 — Изучение очевидного увеличения скорости поперечной волны из-за наличия кальцификатов.

Результаты, полученные в первом эксперименте, показали, что участки с высокой скоростью сдвига волны ниже более крупных камней в почках.Цель этого эксперимента — определить причину такого увеличения скорости поперечной волны. Тот факт, что повышенная скорость выглядит асимметрично, то есть в основном ниже уровня кальцификации, предполагает, что этот артефакт мог быть вызван ошибочным отслеживанием поперечных волн. По этой причине этот эксперимент был разработан для одновременного обнаружения поперечных волн на противоположных сторонах фантома.

В эксперименте использовались две системы Verasonics с двумя линейными преобразователями L7-4; в каждой системе была одна и та же программа CUSE.Фантом для теста состоял из ткани размером 9 × 9 × 4,5 см, имитирующей желатиновый фон, с включением почечного камня размером 11 мм. Рецепт желатина был таким же, как и в предыдущих опытах. Два датчика L7-4 были соосно выровнены лицом друг к другу с зазором (примерно на высоту фантома) между ними и удерживались зажимами на опорной стойке. Затем фантом помещали между зондами на сетку, прикрепленную к опорной стойке (рис. 5).

В первой системе CUSE датчик размещался на вершине фантома.Вторая система CUSE с датчиком на противоположной стороне фантома была модифицирована за счет исключения передачи толкающих лучей, но она все еще могла отслеживать поперечные волны, создаваемые верхним датчиком. Две системы были синхронизированы, чтобы обеспечить одновременную визуализацию SWE в верхней и нижней части фантома.

Для этого исследования были отобраны в общей сложности три пациентки с подозрительными новообразованиями в груди и кальцификатами, выявленными при маммографии.Это исследование было одобрено Наблюдательным советом клиники Мэйо (IRB). Письменные подписанные информированные согласия с разрешением на публикацию, одобренные Mayo Clinic IRB, были получены от зарегистрированных пациентов. Перед участием в исследовании каждый пациент прошел клиническое ультразвуковое исследование и маммографию. Оценка SWE проводилась перед биопсией.

Каждую пациентку сначала осмотрел опытный сонографист с помощью обычного УЗИ в B-режиме для определения массы груди.Массовая область была отмечена на изображении путем рисования от руки для определения области интереса. Затем зонд фиксировался фиксируемым шарнирным рычагом. После этого было проведено CUSE. Чтобы уменьшить артефакт дыхательного движения, пациентку просили задерживать дыхание при каждом ультразвуковом исследовании и получении CUSE.

Измерения упругости

Для расчета значений жесткости в конкретном месте для всех образцов фантомов была выбрана круговая интересующая область (ROI) диаметром 20 мм (имитирующая 20-миллиметровое поражение груди).Выбор ROI зависел от оператора. Чтобы решить проблему изменчивости, мы сделали три регистрации поперечной волны, и для каждой регистрации мы попытались расположить кальцинированную область в середине 20-миллиметровой рентабельности инвестиций. Каждое измерение не зависело от других измерений. Для исследований in vivo ROI была нарисована по границам поражения.

Минимальные, максимальные, средние и стандартные значения отклонения скорости поперечной волны были получены из изображений CUSE. Чтобы перевести скорость поперечной волны в упругость (модуль Юнга), было использовано следующее выражение: (1) где ρ = 1000 кг / м ³ представляет плотность ткани, а c — скорость поперечной волны.Вышеприведенное выражение предполагает, что мягкая ткань является линейным, изотропным, несжимаемым и эластичным материалом. В случае машины SSI минимальные, максимальные, средние и стандартные значения эластичности отклонения (модуль Юнга) были получены после выбора ROI с помощью инструмента SuperSonic Imagine’s QBox, доступного с программным обеспечением обработки изображений OsiriX.

Для дальнейшей количественной оценки эффектов кальцификации относительная погрешность была определена как, (2) где E _ROI и E _BG — средняя эластичность ROI и фона соответственно.Относительная ошибка указывает на изменение эластичности ROI относительно эластичности фона.

Результаты

Результаты исследования фантома, имитирующего ткань

Эксперимент 1 — Исследование влияния размера кальцификации.

Визуализация фантома с семью включениями почечных камней различных размеров была использована для исследования влияния единичных грубых кальцификатов на визуализацию CUSE и SSI. Чтобы количественно оценить эти эффекты, вокруг кальцификации была нарисована фиксированная круглая область интереса диаметром 2 см, имитирующая воображаемую доброкачественную массу с тем же значением эластичности, что и фон (рис. 6).

Рис. 6. Результаты эксперимента 1 — карты скорости поперечной волны CUSE (a-h) и SSI (i-p).

(a, i) Желатиновый фон (b, j) Камень в почках 2 мм (c, k) Камень в почках 3 мм (d, l) Камень в почках 5 мм (e, m) Камень в почках 6 мм (f, n) Камень в почках 9 мм ( g, o) камень в почках 11 мм (h, p) камень в почках 15 мм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g006

Во время этого эксперимента наблюдалось явное увеличение скорости поперечной волны, в основном на кальцификации, но когда размер камня превышал 6 мм (Рис. 6e – 6h и 6м – 6р) под почечным камнем начали формироваться участки с высокой жесткостью.Эти области стали более заметными для более крупных камней при визуализации CUSE и SSI. Мы называем значение эластичности камней в почках «очевидным», потому что реальное значение эластичности камней в почках составляет порядка ГПа.

Среднее значение максимальной, минимальной и средней эластичности по измерениям на трех сборах для каждого размера кальцификации показано в таблице 1. Стандартное отклонение среднего значения — это вариация между тремя сборами.

Первоначальные фантомные результаты первого эксперимента демонстрируют пропорциональную зависимость между средним и максимальным модулем упругости и диаметром макрокальцификации.E _мин. значений оставались в пределах диапазона эластичности футляра без кальцификации (фон). Вместо этого, средние значения E _{показали значительное увеличение, особенно для камней в почках размером 9 мм, 11 мм и 15 мм. Результаты E max показали большой прирост даже при наличии макрокальцификации 2 мм. Мы наблюдали низкую вариабельность трех измерений поперечной волны, полученных для кальцификатов размером менее 9 мм (стандартное отклонение> 3,5 кПа), и вариации до 7.89 кПа для больших кальцификатов. Кажущиеся высокоскоростные поперечные волны, генерируемые кальцификациями, создают ошибку в измерениях эластичности. На рис. 7 относительная погрешность, рассчитанная по формуле (2), измеряется как функция диаметра кальцификации для CUSE и SSI.}

Между двумя методами наблюдается хорошая корреляция. Мы наблюдали увеличение примерно на 10% относительной погрешности на 1 мм, добавленное к размеру макрокальцификации, для включений от 2 до 9 мм. Относительная ошибка была выше 100% для более крупных макрокальцификаций (диаметр кальцификации> 50% диаметра ROI).

Эксперимент 2 — Исследование влияния распределения кальцификатов.

Второй эксперимент оценивался так же, как и первое фантомное исследование. Круглая область интереса диаметром 2 см была нарисована вокруг области кальцификации, имитируя воображаемую границу образования. На рис. 8 показаны результирующие карты скорости поперечной волны методов CUSE и SSI.

Рис. 8. Результаты эксперимента 2: карты скорости поперечной волны CUSE (a-d) и SSI (e-h).

(a, e) Желатиновый фон (b, f) 15-миллиметровое региональное распределение измельченного почечного камня (c, g) 8-миллиметровое кластерное распределение измельченного почечного камня (d, h) 7-миллиметровый интактный почечный камень.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g008

SWE-изображения продемонстрировали увеличение скорости поперечной волны с увеличением концентрации кальцификатов. В таблице 2 приведены средние значения E _min , E _max и E _{, рассчитанные на основе трех различных измерений.}

Результаты этого эксперимента подтверждают, что распределение микрокальцификаций влияет на результирующий модуль упругости (E _{среднее значение} и E _max ).E _мин. , как и в эксперименте 1, оставалось несмещенным из-за наличия кальцификатов.

График относительной погрешности, определенной в уравнении (2), показан на рисунке 9; уменьшение жесткости можно увидеть по мере того, как кальцификаты становятся более разбросанными.

Рис. 9. E _{— средние значения относительной ошибки} для 7-миллиметрового интактного почечного камня (крупный), кластерного распределения измельченного почечного камня 8 мм, регионального рассеянного распределения 15 мм измельченного почечного камня и желатинового фона.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g009

Эксперимент 3 — Изучение очевидного увеличения скорости поперечной волны из-за наличия кальцификатов.

На рис. 10 показаны результирующие карты скорости поперечной волны, соответствующие датчикам в верхней и нижней части фантома. Было замечено, что области высокой жесткости были созданы в теневой области непосредственно за кальцификацией (почечный камень) в обоих сценариях. Это неправильное толкование жесткости желатина было сочтено артефактом; Это означает, что измерения в тени кальцификации ненадежны.

Случай 1.

Женщина 47 лет обратилась с жалобой на пальпаторную аномалию левой груди. Клиническая маммография (рис. 11а) выявила рассеянные фиброгландулярные образования в левой груди, классифицированные как D2, и группу кальцификатов в составе мягких тканей. Окончательной оценкой была категория 4 BI-RADS. Прицельное ультразвуковое исследование левой молочной железы показало массу около 6 мм в наибольшем измерении с неоднородной эхогенностью (рис. 11b).Карта скорости поперечной волны CUSE (рис. 11c) показала высокую жесткость на массе и ниже (в тени). E _{, среднее значение} для ROI вокруг массы (отмеченной красной пунктирной линией) было 106,56 ± 14,56 кПа, а E _max было 192,00 кПа. Биопсия под контролем УЗИ выявила доброкачественный организующийся некроз жира с большим количеством макрофагов, нагруженных гемосидерином, и дистрофические кальцификаты в строме.

Рис. 11.

(a) Медиолатеральная косая маммография, выявляющая группу макрокальцификаций, связанных с массой мягких тканей (красная стрелка).(b) Клиническое ультразвуковое исследование в B-режиме, выявившее образование размером 6 мм (синяя стрелка) с неоднородной эхогенностью. (c) Изображение CUSE, показывающее высокую жесткость вдоль вертикальной оси массы. Цветная полоса указывает скорость поперечной волны.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g011

Случай 2.

У 79-летней женщины появилась новая инверсия соска на правой груди. Диагностическая маммография выявила неоднородную плотную ткань в обеих грудях, классифицированных как D3, и область линейных кальцификатов в правой груди (рис. 12а).Прицельная ультразвуковая оценка субареолярной правой молочной железы показала гипоэхогенную внутрипротоковую массу 9 × 6 × 11 мм (рис. 12b). Края массы на некоторых участках казались нечеткими. Цветное изображение потока не показало внутренней васкуляризации. Эта аномалия не была обнаружена на маммографии. Окончательной оценкой была категория 4 BI-RADS. Визуализация правой молочной железы CUSE (рис. 12c) показала высокую жесткость внутри новообразования и окружающей области. Жесткость под массой была связана с грудной стенкой. E _{среднее значение} и E _max в пределах области интереса (отмечены вокруг массы красной пунктирной линией) были 73.21 ± 11,29 кПа и 192,00 кПа соответственно. Биопсия под контролем УЗИ выявила доброкачественно-очаговую атипичную лобулярную гиперплазию на фоне гиперплазии протоков с кальцификациями доброкачественных протоков.

Рис. 12.

(a) Медиолатеральная маммограмма правой груди с увеличением, показывающая неоднородную плотную ткань со смесью макрокальцификатов и линейных микрокальцификатов (красная стрелка). (b) УЗИ в B-режиме правой груди, выявляющее гипоэхогенную внутрипротоковую массу размером 9 × 6 × 11 мм (синяя стрелка).(c) Изображение CUSE, показывающее высокую скорость поперечной волны в некоторых областях внутри массива. Цветная полоса указывает скорость поперечной волны.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g012

Случай 3.

72-летняя женщина поступила с патологическим осмотром правой груди. Диагностическая маммография выявила неравномерную асимметрию в 3 см в правой груди, включая макрокальцификаты (рис. 13а). Плотность груди была классифицирована как D3. Итоговая оценка была 4-й категории BI-RADS.Клиническое ультразвуковое исследование показало неправильную область размером 2,3 см со смешанной эхогенностью (рис. 13b). Визуализация CUSE показала высокую жесткость массы и окружающей области. Результаты эластичности в пределах ROI (отмечены вокруг массы красной пунктирной линией): E _{, среднее значение} 94,08 ± 12,7 кПа и E _{, максимальное значение} 192,00 кПа (рис. 13c). Биопсия под контролем УЗИ выявила доброкачественную паренхиму с плотным фиброзом стромы и кальцификатами доброкачественных протоков.

Рис. 13.

(a) Медиолатеральная маммограмма правой груди, выявляющая образование с участием макрокальцификатов (красная стрелка).(b) Ультразвук в B-режиме, демонстрирующий неправильную область 2,3 см со смешанной эхогенностью (синяя стрелка). (c) изображение CUSE, показывающее высокую жесткость массы; цветная полоса указывает скорость поперечной волны.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0137898.g013

Обсуждение

Во многих исследованиях по дифференциации доброкачественных образований молочной железы от злокачественных использовались несколько параметров эластичности для корреляции с патологией. Некоторые из наиболее часто используемых в исследованиях SSI — это E _mean и E _max со значениями отсечки от 45 до 80 кПа для среднего E и от 54 до 94 кПа для E _max [41, 42, 48 –52].В наших первоначальных результатах исследования CUSE для дифференциации доброкачественных и злокачественных поражений молочной железы E _{среднее значение} было связано с результатами патологии с пороговым значением 83 кПа [27].

В этом исследовании очень плотные кластеры микрокальцификаций и одиночные макрокальцификации размером более 5 мм создавали видимость высоких скоростей поперечных волн выше 5,77 м / с, что соответствует E _max 100 кПа. Рассеянные по регионам микрокальцификации не достигли столь высоких значений, но были способны увеличить модуль упругости ROI (мнимая масса) примерно на 50% для среднего значения E и 250% для E _max .

Berg et. [40] в многонациональном исследовании с использованием прототипа сканера Aixplorer, оснащенного датчиком L15-4, сообщили об увеличении на E _max 9 кПа для масс, связанных с кальцификациями. Наши фантомные исследования подтверждают, что кальцификаты могут вызывать появление высокой жесткости. Результаты фантома SSI показали увеличение E _max на 26 кПа для нашего наименьшего макрокальцификации (диаметр 2 мм) и 31 кПа для включения с региональным распределением микрокальцификатов (диаметр 15 мм).Причина несоответствия E _max между двумя исследованиями может быть связана с размером кальцификатов, степенью концентрации микрокальцификатов в пределах ROI и / или значением эластичности фона (массы).

Увеличение среднего значения E из-за наличия кальцификатов зависит от размера ROI, и размер ROI следует учитывать при сравнении результатов с другими. Однако единственное исследование в этой области было проведено Berg et.al [40], где они изучали влияние кальцификаций на E _max . Насколько нам известно, исследований влияния кальцификации на средние значения E _{для сравнения с нашими результатами не проводилось.}

Относительная ошибка измеряет процент изменений средних значений эластичности из-за наличия кальцификатов. Мы наблюдали увеличение относительной погрешности с увеличением концентрации или размера кальцификации. Ожидается более чем 100% -ное увеличение относительной погрешности E _max при наличии макрокальцификаций диаметром более 2 мм.Степень концентрации микрокальцификатов — еще одна переменная, которая влияет на измерения упругости поперечной волны. Дисперсно распределенные микрокальцификаты, распространенные по всему включению, имеют меньший эффект, чем концентрированные кластеры микрокальцификатов, расположенные во фракции включения. Подобно макрокальцификациям, E _{означает, что} измерений кластерных микрокальцификаций зависят от размера ROI. В фантомном исследовании 40% области ROI содержали кластер микрокальцификаций, что привело к ~ 90% относительной ошибки E _mean .

Хотя мы использовали две системы с разными датчиками и разными методами возбуждения, наши результаты показали хорошую корреляцию между ними. Однако сравнение этих двух систем выходит за рамки данной статьи.

Третий фантомный эксперимент, в котором использовались два преобразователя, демонстрирует, что высокая ошибка жесткости ниже макрокальцификаций является результатом низкого отношения сигнал / шум B-моды в теневой области. Эта кажущаяся жесткость считается артефактом; Это означает, что измерения в теневой области кальцификации ненадежны.

Дополнительным фактором, который имеет прямое влияние на дифференциацию доброкачественных и злокачественных образований, является пороговое значение для измерений эластичности. Низкие пороговые значения более чувствительны к наличию кальцификатов и могут увеличить количество ложных срабатываний.

Результаты наших фантомов продемонстрировали воспроизводимость (низкое стандартное отклонение) при трех разных сборах. Больше вариаций средней эластичности наблюдается в исследованиях in vivo , где фон неоднороден.

Результаты исследования in vivo на людях показали, что различные типы кальцификатов влияют на эластичность в разной степени. В случае 1 масса с группой больших макрокальцификаций показала самую высокую жесткость из трех случаев, за ней следовала масса с микрокальцификациями в доброкачественных протоках с большим макрокальцификацией (случай 3) и, наконец, масса с небольшими макрокальцификациями и микрокальцификациями в доброкачественные протоки показали наименьшую жесткость (случай 2).Две из трех масс будут неправильно классифицированы с учетом сообщенного CUSE порогового значения E _{среднее значение} 83 кПа [27]. Наши результаты in vivo согласуются с данными Berg et. др. [40], показывая, что наличие кальцификатов в массе коррелирует с увеличением жесткости.

Выводы

Результаты нашего исследования демонстрируют, что наличие кластерных и крупных или грубых кальцификатов в доброкачественных новообразованиях молочной железы может вызвать появление областей с высокой жесткостью, когда они оцениваются методами эластографии сдвиговой волной.Следовательно, такие доброкачественные образования можно ошибочно принять за злокачественные. Хотя мы не полностью исследовали источники таких ошибок, наши экспериментальные результаты с двумя зондами, смотрящими с двух сторон фантома, имитирующего ткань, и тот факт, что ошибка для двух систем SWE имеет схожие шаблоны, предполагают, что это в основном связано с неточным отслеживанием поперечных волн.

Необходимы исследования с большим количеством пациентов для дальнейшей количественной оценки повышения эластичности доброкачественных образований с различными типами кальцификации.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AG MM MD MB MF AA. Проведены эксперименты: АГ ММ МД МБ МФ АА. Проанализированы данные: АГ ММ МД МБ МФ АА. Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: AG MM MD MB MF AA. Написал статью: AG MM MD MB DS MF AA.

Ссылки

1. 1. Эллис I, Эванс AJ. Доброкачественная кальцификация груди. В: Эванс А., Пиндер С., Уилсон Р., Эллис И., редакторы. Кальцификация груди: диагностическое руководство.Лондон: Гринвич Медиа Медиа; 2002. С. 1–30.
2. 2. Серпы EA. Кальцификации груди: маммографическая оценка. Радиология. 1986; 160 (2): 289–93. pmid: 3726103
3. 3. Морган М., Кук М., Маккарти Г. Микрокальцификации, связанные с раком груди: эпифеномен или биологически значимая характеристика выбранных опухолей? J Mammary Gland Biol Neoplasia. 2005; 10 (2): 181–7. pmid: 16025224
4. 4. Fandos-Morera A, Prats-Esteve M, Tura-Soteras JM, Traveria-Cros A.Опухоли груди: состав микрокальцификатов. Радиология. 1988. 169 (2): 325–7. pmid: 2845471
5. 5. Scimeca M, Giannini E, Antonacci C, Pistolese C, Spagnoli L, Bonanno E. Микрокальцификации при раке груди: активный феномен, опосредованный эпителиальными клетками с мезенхимальными характеристиками. BMC Рак. 2014; 14 (1): 286.
6. 6. Кокс РФ, Эрнандес-Сантана А., Рамдасс С., МакМахон Дж., Харми Дж. Х., Морган депутат. Микрокальцификации при раке груди: новое понимание молекулярного механизма и функциональных последствий минерализации молочной железы.Br J Рак. 2012; 106 (3): 525–37. pmid: 22233923
7. 7. Бейкер Р., Роджерс К.Д., Шеперд Н., Стоун Н. Новые отношения между микрокальцификациями груди и раком. Br J Рак. 2010 (103): 1034–9.
8. 8. Деметри-Льюис А., Сланец П.Дж., Айзенберг Р.Л. Кальцификации груди: основная группа. Am J Roentgenol. 2012; 198 (4): W325 – W43.
9. 9. Фаршид Г., Салливан Т., Дауни П., Гилл П.Г., Питерс С. Независимые предикторы злокачественных новообразований груди при обнаружении микрокальцификатов на экране: результаты биопсии в 2545 случаях.Br J Рак. 2011; 105 (11): 1669–75. pmid: 22052156
10. 10. Сварт Р., Харрис Дж. Э. Скрининг рака груди. 16 апреля 2014 г. [процитировано 19 декабря 2014 г.]. In: Medscape [Интернет]. Доступно: http://emedicine.medscape.com/article/1945498-overview#aw2aab6b2.
11. 11. Фатеми М, Гринлиф Дж. Ф. Виброакустическая спектрография, стимулированная ультразвуком. Наука. 1998. 280 (5360): 82–5. pmid: 9525861
12. 12. Ализад А, Фатеми М, Уолд Л. Э., Гринлиф Дж. Ф. Выполнение виброакустографии при обнаружении микрокальцификаций в иссеченной ткани груди человека: исследование 74 образцов ткани.IEEE Trans Med Imaging. 2004. 23 (3): 307–12. pmid: 15027523
13. 13. Ализад А., Мехрмохаммади М., Гош К., Глейзбрук К.Н., Картер Р.Э., Караберкмез Л.Г. и др. Виброакустография груди: первый опыт доброкачественных образований. BMC Med Imaging. 2014; 14 (1): 240.
14. 14. Ализад А., Уэйли Д., Гринлиф Дж., Фатеми М. Возможные применения виброакустографии в визуализации груди. Технологии в исследовании и лечении рака. 2005. 4 (2): 151–8.
15. 15. Ализад А, Фатеми М, Уэйли Д.Х., Гринлиф Дж. Ф.Применение виброакустографии для обнаружения кальцинированных артерий в тканях груди J Ultrasound Med. 2004. 23 (2): 267–73. pmid: 14992365
16. 16. Ализад А., Уэйли Д., Урбан М., Картер Р., Кинник Р., Гринлиф Дж. И др. Виброакустография груди: первые результаты обнадеживают. Исследование рака груди. 2012; 14 (5): R128. pmid: 23021305
17. 17. Ализад А., Уэйли Д.Х., Гринлиф Дж. Ф., Фатеми М. Критические проблемы при визуализации груди с помощью виброакустографии. Ультразвук. 2006; 44: e217 – e20.pmid: 16843513
18. 18. Фатеми М, Уолд Л. Е., Ализад А., Гринлиф Дж. Ф. Виброакустическая тканевая маммография. IEEE Trans Med Imaging. 2002. 21 (1): 1–8. pmid: 11838661
19. 19. Mehrmohammadi M, Fazzio RT, Whaley DH, Pruthi S, Kinnick RR, Fatemi M и др. Предварительные результаты in vivo виброакустографии груди с квазидвумерным матричным преобразователем: шаг вперед к клиническому применению. Ультразвук Med Biol. 2014. 40 (12): 2819–29. pmid: 25438862
20. 20. Schaefer F, Heer I, Schaefer P, Mundhenke C, Osterholz S, Order B и др.Ультразвуковая эластография груди — результаты 193 поражений груди в проспективном исследовании с гистопатологической корреляцией. Eur J Radiol. 2011. 77 (3): 450–6. pmid: 19773141
21. 21. Чанг Дж.М., Мун В.К., Чо Н, Ким С.Дж. Оценка массы груди: факторы, влияющие на качество эластографии УЗИ. Радиология. 2011. 259 (1): 59–64. pmid: 21330569
22. 22. Беркофф Дж., Тантер М., Финк М. Сверхзвуковая визуализация сдвига: новый метод картирования эластичности мягких тканей. Транзакции IEEE по ультразвуку, сегнетоэлектрикам и контролю частоты.2004. 51 (4): 396–409. pmid: 15139541
23. 23. Сарвазян А.П., Руденко О.В., Суонсон С.Д., Фаулкс Дж.Б., Емельянов С.Ю. Визуализация упругости сдвиговой волной: новая ультразвуковая технология медицинской диагностики. Ультразвук Med Biol. 1998. 24 (9): 1419–35. pmid: 10385964
24. 24. Беркофф Дж., Чаффай С., Тантер М., Сандрин Л., Кателин С., Финк М. и др. In vivo Обнаружение опухоли молочной железы с помощью транзиторной эластографии. Ультразвук Med Biol. 2003. 29 (10): 1387–96. pmid: 14597335
25. 25.Тантер М., Беркофф Дж., Атанасиу А., Деффье Т., Генниссон Дж. Л., Монтальдо Дж. И др. Количественная оценка вязкоупругости поражения груди: первоначальные клинические результаты с использованием изображений сверхзвукового сдвига. Ультразвук Med Biol. 2008. 34 (9): 1373–86. pmid: 18395961
26. 26. Mehrmohammadi M, Song P, Meixner DD, Fazzio RT, Chen S, Greenleaf JF и др. Ультразвуковая сдвиговая эластография с гребенчатым проталкиванием (CUSE) для оценки узлов щитовидной железы: предварительные результаты in vivo. IEEE Trans Med Imaging.2014 (99): 1–12.
27. 27. Денис М., Мехрмохаммади М., Сонг П., Мейкснер Д.Д., Фаццио Р.Т., Прути С. и др. Ультразвуковая сдвиговая эластография груди с гребнем: первые результаты показывают многообещающие. ПлоС один. 2015; 10 (3): e0119398. pmid: 25774978
28. 28. Кроускоп Т.А., Уиллер Т.М., Каллель Ф., Гарра Б.С., Холл Т. Модули упругости тканей груди и простаты при сжатии. Ультразвуковая визуализация. 1998. 20 (4): 260–74. pmid: 10197347
29. 29. Сьюэлл CW. Патология доброкачественных и злокачественных заболеваний груди.Radiol Clin North Am. 1995. 33 (6): 1067–80. pmid: 7480656
30. 30. Финк М., Тантер М. Многоволновая визуализация и сверхвысокое разрешение. Физика сегодня. 2010. 63 (2): 28–33.
31. 31. Бай М., Ду Л., Гу Дж., Ли Ф, Цзя X. Количественная оценка тканей виртуального прикосновения с использованием технологии импульсов силы акустического излучения. Первоначальный клинический опыт с твердыми массами груди. J Ultrasound Med. 2012. 31 (2): 289–94. pmid: 22298873
32. 32. Яо М., Ву Дж., Цзоу Л., Сюй Дж., Се Дж., Ву Р. и др.Диагностическая ценность количественной оценки тканей Virtual Touch для поражений груди различного размера. Международное исследование BioMed. 2014; 2014: 7.
33. 33. Янкулеску В., Чиолован Л.М., Дюнан А., Виль П., Мазуни С., Делалог С. и др. Дополнительные преимущества эластографии сдвиговой волной Virtual Touch IQ при ультразвуковой оценке поражений груди. Eur J Radiol. 2014; 83 (5): 773–7. pmid: 24602803
34. 34. Чанг Дж. М., Мун В. К., Чо Н, Йи А., Ку Х. Р., Хан В. и др. Клиническое применение эластографии сдвиговой волной (SWE) в диагностике доброкачественных и злокачественных заболеваний груди.Лечение рака груди Res. 2011. 129 (1): 89–97. pmid: 21681447
35. 35. Афанасиу А., Тардивон А., Тантер М., Сигал-Зафрани Б., Беркофф Дж., Деффье Т. и др. Поражения груди: количественная эластография со сверхзвуковой сдвиговой визуализацией — предварительные результаты 1. Радиология. 2010. 256 (1): 297–303. pmid: 20505064
36. 36. Косгроув Д. О., Берг В. А., Доре С. Дж., Скиба Д. М., Генри Дж. П., Гей Дж. И др. Эластография сдвиговой волной новообразований груди хорошо воспроизводима. Eur Radiol. 2012. 22 (5): 1023–32.pmid: 22210408
37. 37. Ли Джи, Ли Д.В., Фанг YX, Сон Й.Дж., Дэн З.Дж., Гао Дж. И др. Выполнение эластографии сдвиговой волной для дифференциации доброкачественных и злокачественных твердых образований молочной железы. ПлоС один. 2013; 8 (10): e76322. pmid: 24204613
38. 38. Эванс А., Велехан П., Томсон К., Брауэр К., Джордан Л., Перди С. и др. Дифференциация доброкачественных и злокачественных солидных образований молочной железы: значение эластографии сдвиговой волной в соответствии с жесткостью поражения в сочетании с ультразвуком в оттенках серого в соответствии с классификацией BI-RADS.Br J Рак. 2012; 107 (2): 224–9. pmid: 226
39. 39. Эванс А., Велехан П., Томсон К., Маклин Д., Брауэр К., Пурди С. и др. Количественная ультразвуковая эластография сдвиговой волной: начальный опыт исследования твердых новообразований молочной железы. Рак молочной железы Res. 2010; 12 (6): R104. pmid: 21122101
40. 40. Берг В.А., Косгроув Д.О., Доре С.Дж., Шефер Ф.К.В., Свенссон В.Е., Хули Р.Дж. и др. Приложение E1, Сдвиговолновая эластография улучшает специфичность груди УЗИ: многонациональное исследование 939 опухолей BE1.Радиология. 2012: 1–9.
41. 41. Ко К., Юнг Х, Ким С., Ким Х, Юн Дж. Потенциальная роль поперечно-волновой ультразвуковой эластографии для дифференциальной диагностики немассивных поражений груди: предварительный отчет. Eur Radiol. 2014; 24 (2): 305–11. pmid: 24081648
42. 42. Берг В.А., Косгроув Д.О., Доре С.Дж., Шефер Ф.К.В., Свенссон В.Е., Хули Р.Дж. и др. Эластография сдвиговой волной улучшает специфичность груди УЗИ: международное исследование 939 масс BE1. Радиология. 2012. 262 (2): 435–49.pmid: 22282182
43. 43. Craciun II. Кальцификации груди — Часть 1 из 2. 26 ноября 2002 г. [цитировано 18 декабря 2014 г.]. In: EURORAD. Доступно: http://www.eurorad.org/case.php?id=420.
44. 44. Хаймбах Д., Манвер Р., Жонг П., Якобс Дж., Гессе А., Мюллер С. К. и др. Акустические и механические свойства искусственных камней по сравнению с естественными почечными камнями. Журнал урологии. 2000. 164 (2): 537–44. pmid: 10893640
45. 45. Джун Пак RSL. Биоматериалы Введение.3-е изд. Нью-Йорк: Springer Science + Business Media; 2007.
46. 46. Youk JH, Gweon HM, Son EJ, Han KH, Kim JA. Диагностическая ценность коммерчески доступной эластографии сдвиговой волной рака груди: интеграция в классификацию BI-RADS с подкатегориями категории 4. Eur Radiol. 2013. 23 (10): 2695–704. pmid: 23652850
47. 47. Ко К. Х., Юнг Х. К., Ким С. Дж., Ким Х., Юн Дж. Х. Возможная роль ультразвуковой эластографии сдвиговой волной в дифференциальной диагностике немассивных поражений молочной железы: предварительный отчет.Eur Radiol. 2014; 24 (2): 305–11. pmid: 24081648
48. 48. Сяо Й, Цзэн Дж, Цянь М., Чжэн Р., Чжэн Х., редакторы. Количественный анализ эластичности ткани вокруг опухоли на основе эластографии сдвиговой волной для классификации опухолей молочной железы. Общество инженерии в медицине и биологии (EMBC), 35-я ежегодная международная конференция IEEE, 2013 г .; 2013: IEEE.
49. 49. Чанг Дж. М., Вон Дж. К., Ли К-Би, Пак И. А., Йи А., Мун В. Сравнение поперечно-волновой и деформационной ультразвуковой эластографии в дифференциации доброкачественных и злокачественных поражений груди.Am J Roentgenol. 2013; 201 (2): W347 – W56.
50. 50. Ли Э.Дж., Чон Х.К., Ко К.Х., Ли Дж.Т., Юн Дж.Х. Диагностические возможности эластографии сдвиговой волной: какой параметр использовать в дифференциальной диагностике твердых новообразований груди? Eur Radiol. 2013; 23 (7): 1803–111. pmid: 23423637
51. 51. Ли Ш., Чанг Дж. М., Ким У. С., Бэ МС, Чо Н, Йи А. и др. Дифференциация доброкачественных и злокачественных твердых образований молочной железы: сравнение двухмерной и трехмерной поперечно-волновой эластографии.Eur Radiol. 2013. 23 (4): 1015–26. pmid: 23085867
52. 52. Чеби О.Д., Коркмазер Б., Кылыч Ф., Дикичи А., Велидедеоглу М., Айдоган Ф. и др. Использование эластографии сдвиговой волной для дифференциации доброкачественных и злокачественных новообразований груди. Диагностическая и интервенционная радиология (Анкара, Турция). 2013. 20 (3): 239–44.
53. 53. Song P, Zhao H, Manduca A, Urban MW, Greenleaf JF, Chen S. Ультразвуковая эластография сдвига с гребенчатым нажимом (CUSE): новый метод для двумерной визуализации эластичности мягких тканей при сдвиге.IEEE Trans Med Imaging. 2012. 31 (9): 1821–32. pmid: 22736690
54. 54. Song P, Urban MW, Manduca A, Heng Z, Greenleaf JF, Shigao C. Ультразвуковая сдвиговая эластография с гребенчатым нажимом (CUSE) с различными ультразвуковыми толкающими лучами. IEEE Trans Med Imaging. 2013. 32 (8): 1435–47. pmid: 235

55. 55. Silva SFRd, Matos DCd, Silva SLd, Daher EDF, Campos HdH, Silva CABd. Химико-морфологический анализ камней в почках: двойное слепое сравнительное исследование. Acta Cirurgica Brasileira.2010; 25: 444–8. pmid: 20877956
56. 56. Manglaviti G, Tresoldi S, Guerrer CS, Di Leo G, Montanari E, Sardanelli F и др. Оценка химического состава мочевых камней in vivo с помощью двухэнергетической КТ. Am J Roentgenol. 2011; 197 (1): W76 – W83.
57. 57. Мосли Х.А., Мосли Х.Х., Камаль В.К. Состав почечных камней у пациентов с избыточным весом и ожирением: предварительный отчет. Исследования и отчеты в урологии. 2013 (2013: 5): 11–5.
58. 58. Бангаш К., Шигри Ф., Джамал А., Анвар К.Спектр состава почечных камней: химический анализ почечных камней. Международный журнал патологии. 2011 (9 (2)): 63–6.
59. 59. Орландо М.Т.Д., Куплич Л., де Соуза Д.О., Белич Х.

    Leave a Comment Отменить ответ

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    Message

    Имя *

    Email *

    Сайт