правила, алгоритм, анализ, исследование, техника сбора

Если у человека есть подозрение на туберкулез, необходимо как можно раньше выявить данное заболевание или исключить его наличие. Чтобы определить уровень скопления патогенов, их чувствительность к лекарственным средствам, необходимо сдать специальный анализ. Назначается сбор мокроты на микобактерии туберкулеза, который проводится по строгим правилам, чтобы минимизировать погрешности.

Как собрать мокроту для анализа

Туберкулез часто маскируется под иные болезни, поэтому диагностировать его бывает трудно. Часто течение болезни воспринимается как простое ОРВИ.

Чтобы диагностировать болезнь, нужно пройти рентген грудной клетки, который покажет наличие патологического процесса в легких, сдать анализ мокроты на микобактерии туберкулеза. Такое исследование является обязательным и при сдаче нужно соблюдать правила сбора мокроты на туберкулез.

Анализ на микобактерии туберкулеза проводится следующим образом:

• обязательно на голодный желудок, лучше всего рано утром;
• нельзя чистить зубы перед взятием мокроты;
• перед анализом необходимо прополоскать рот теплой кипяченой водой;
• взятия происходит после нескольких глубоких вдохов, которые провоцируют отхаркивание.

Мокрота собирается в заранее подготовленный стерильный контейнер, который можно приобрести в аптеке. Для достоверного анализа необходимо наполнить контейнер не менее 5 мл материала, после чего в срочном порядке нужно сдать анализ в ближайшую лабораторию.

При сдаче анализа не стоит касаться края контейнера ртом и руками, чтобы не нарушить стерильность.

Анализ мокроты у больных туберкулезом не особо отличается от выше описанной схемы. Но все-таки есть несколько нюансов, которые и надо соблюдать для того, чтобы результат исследования был как можно точнее.

Алгоритм достаточно прост:

1. Необходимо проводить такой анализ в отдельной комнате с хорошей вентиляцией, чтобы при попадании бактерий в пространство не произошло заражение других людей.
2. При сборе биоматериала окна в помещении должны быть открыты, а количество материала должно быть не меньше 3 мл.
3. Собирать биоматериал можно в домашних условиях или на улице, главное соблюдать выше написанные рекомендации, чтобы не подвергать других людей опасности.

Стоит обратить внимание на контейнер для биоматериала. Обязательно данный сосуд должен обладать широким горлышком, быть прозрачным и прочным, чтобы на нем можно было написать информацию о пациенте.

Стерильность – это главное условие, данные сосуды не должны подвергаться повторному использованию. Результаты исследования приходят спустя 3 суток с момента сдачи.

Методы исследований

Существует несколько методов, направленных на исследование мокроты:

• бак-посев;
• микроскопическое исследование по Цилю-Нильсену;
• люминесцентный анализ;
• методика ПЦР.

Следует рассмотреть все методы, которые позволяют определить наличие палочки Коха в организме человека, приводящей к развитию туберкулеза. Наличие микроорганизма хотя бы в одном анализе указывает на то, что человек является носителем заболевания.

Бактериоскопия

В большинстве случаев используется техника по Цилю-Нильсену. Этот метод относят к маркерному исследованию. После того как необходимое количество биоматериала собрано, в мокроту добавляется специальный раствор, после чего начинается тщательное исследование под микроскопом, который должен быть оснащен иммерсионной системой для таких исследований.

После контактирования со специальным раствором болезнетворные бактерии приобретают красный окрас. Достоинство данного исследования в финансовой доступности и срочности диагностики. Исследование занимает сутки, в срочном порядке может быть осуществлено в течение 60 минут. Но такое исследование не самое надежное.

Люминесцентный

Такой вид исследования проводится при помощи специального микроскопа. Болезнетворные бактерии при исследовании приобретают желтый цвет на общем темном фоне, благодаря чему становятся явными. При помощи этой методики можно определить, какое количество бактерий скопилось в организме человека. Исходя из результата, можно диагностировать форму заболевания и степень тяжести протекания туберкулеза.

ПЦР

Данное высокочувствительное исследование несет в себе много информации и заключается в копировании небольшого участка ДНК, что позволяет выявить наличие болезнетворных бактерий в биоматериале человека. Данное исследование хорошо тем, что проводится в течение всего 4 часов, что не дает потерять время в лечении заболевания.

Бактериологический

Бактериологическое исследование проводится при помощи помещения биоматериала в специальную среду. Для того чтобы определить наличие возбудителя в организме, достаточно 2 десятков жизнеспособных КУМ. Данный метод долгий, т.к. рост бактерий может занимать от 20 дней до 3 месяцев. Результат исследования определяется в виде +, где + говорит о плохом росте, ++ – о среднем, а +++ – об обильном росте бактерий. Самые опасные бактерии имеют маркировку +++.

Расшифровка

Если выявлены микобактерии туберкулеза, анализ покажет результаты, которые расшифрует лечащий врач. По данным исследования определяется наличие у человека туберкулеза, бронхоэктаза или абсцесса легких, т.к. эти заболевания могут протекать с одинаковыми симптомами.

По составу слизи можно диагностировать астматический приступ или наличие острого бронхита.

При содержании прожилок крови можно диагностировать воспаление легких. При тяжелой форме развития заболевания слизь выходит из организма вместе с кровянистыми выделениями, которые могут быть незаметными или существенными.

Дальнейшие действия

При диагностировании такого заболевания как туберкулез важно прислушиваться к рекомендациям врачей и следовать назначенной терапии. Важно соблюдать МБТ, для того чтобы предотвратить заражение близких людей этой болезнью.

Больной туберкулезом должен длительно лечиться и систематически наблюдаться у врача, т.к. при пренебрежении этими условиями возбудитель будет прогрессировать. Сегодня при выявлении данной болезни на начальной стадии можно полностью вылечиться.

процесс процедуры, виды анализов и расшифровка результатов

При воспалении дыхательных путей у человека выделяется секрет, который имеет бактерицидное происхождение. Возникновение слизи является поводом сдавать анализ мокроты. Который помогает установить причину болезни, и определить стадию ее развития.

Чаще всего, тест проводится при подозрении у пациента наличия палочки Кроха в организме. По результатам обследования больному ставится диагноз и составляется план курсовой терапии.

Зачем сдавать мокроту на анализ

Сдавать отхаркивающуюся слизь на анализ требуется людям, которые длительный период имеют кашель, а он сопровождается секретом. Врач при любых подозрениях на проблемы с дыхательными путями отправит на лабораторное исследование.

Бакпосев входит в комплекс диагностики на выявление заболевания кавернозного туберкулеза, также его проводят для проверки метода лечения.

Кроме этого, анализ сдается при других болезнях легких — это пневмония, подозрение на развитие онкологии, абсцесс, аспергиллез. Также исследование помогает выявить является ли человек аллергиком или нет.

Виды мокроты

Выделения, образующие в дыхательной системе имеют разную консистенцию. Мокрота может быть жидковатой, вязкой, густоватой. Состояние ее напрямую зависит от количества слизистого вещества. При пневмонии она становится вязкой, а вирус делает ее жидкой. Цвет и структура изменяются из-за болезни.

Типы мокроты в зависимости от недомогания:

• белая — легкие поражены грибком, при этом появляются и гнойные вкрапления;
• коричневая с желтоватым оттенком — это абсцесс, сопровождаемый сгустками крови;
• красная — инфаркт легких;
• прозрачная — астма, у больного наблюдается хрип. Он может вызвать кашель, имеющий сухую форму;
• зеленая — вирусная инфекция, это бронхит, пневмония, грипп;
• кровянистая — онкология.

Бронхами и легкими выделяется прозрачная мокрота, а свой оттенок она видоизменяет из-за появления примесей.

Виды анализов мокроты

Есть несколько типов диагностики, которые осуществляют проверку мокроты на наличие разных вирусов.

Общий анализ

За сутки в легких выделяется не больше 100 мл мокроты. Слизь должна выглядеть бесцветной, а также не допускается присутствия запаха. Когда в результате лабораторного анализа обнаруживаются возбудители палочки Кохи, то нужно сдавать мокроту на болезнь туберкулез, чтобы понять клиническую картину развития недуга.

Недостаток общего исследования — это длительность времени ожидания результатов. Также необходимо сдать мочу на туберкулезное тестирование.

Бактериологическое исследование

При бактериоскопической диагностике мазок для проведения исследования окрашивают специальным раствором. Изменение цвета материала свидетельствует о положительной реакции на микробактерии туберкулеза.

Степень развития инфильтративной инфекции определяется по подсчету количества содержания в слизи микроорганизмов. Бактериологическое исследование помогает выявить возбудителя инфекции, а бакпосев определяет его чувствительность. На этом основывается курс медикаментозной противотуберкулезной терапии.

Микроскопическое исследование

Микробиологическое тестирование во фтизиатрии необходимо для выявления характера болезни. Проверяется количество нейтрофилов. К примеру, когда их число достигает 25, то расшифровать это можно, как простуду, или любую вирусную инфекцию.

Когда лаборант обнаруживает, что слизь имеет эластичные волокна, то это указывает на наличие раковых клеток в организме. Так как происходит осуществление разрушения легочных тканей.

Макроскопическое исследование

Изучение мокроты с помощью данного метода выявляет цвет, консистенцию и запах. Окрас секрета влияет на выявление заболевания. Также позволяет увидеть атипические клетки. А структура биоматериала указывает на стадию развития недомогания.

Когда слизь вязкая или немного студенистая, то это начальная стадия недуга. А сильно жидкая или слаботягучая форма — это тяжелый вид болезни. Выявление запаха характеризуется такими названиями патологий, как гангрена, гнойное воспаление мягких тканей, бронхоэктазы.

Как правильно сдавать мокроту на анализ

Собрать мокроту на анализ возможно в лаборатории или дома. В стационаре больному выдается стерильная емкость, которая имеет объем 20-50 мл. У банки большое отверстие, чтобы легче сплевывать выделения. Выполнена она из прозрачного материала, это позволяет лаборанту оценить качество и количество пробы.

Для сдачи пациенту нужно сделать 3 медленных, но при этом глубоких выдохов и вдохов. Перерыв между ними составляет около 3 секунд. После чего исследуемый выкашливает мокроту в чистую емкость. Если не получается отхаркивать ее, то в медцентре пациенту делают ингаляцию, процедура занимает 15 минут. Раствор состоит из соли и соды, помогает откашливатся.

Внимательно требуется следить за тем, чтобы слюна не попала в собираемые выделения. Такая проба не пригодна для анализа в лаборатории.

Чтобы сохранить материал медики используют специальные консервирующие вещества.

Труднее всего собирать образец для исследования у ребёнка. Он проглатывает мокроту, по этой причине применяется иная методика сбора. Тампоном раздражают корень языка и горло. Это вызывает приступ кашля, и секрет попадает на вату. После, его переносят на специальное стекло и просушивают.

У лежачих больных мокрота собирается, как и у ребенка.

Как собрать мокроту в домашних условиях

Предварительно приобретается ёмкость для анализа мокроты. Её можно купить в любой аптеке, домашняя баночка не подходит. Так как для исследования она должна быть абсолютно стерильной. Ее нельзя открывать до момента самой процедуры, так как могут попасть микробы, и это повлияет на точность диагностирования.

Сбор материала для тестирования дома подходит беременным женщинам. Так как в поликлинике можно получить инфицирование.

Когда возникают проблемы с отхаркиванием в носоглотке дома, то собрать выделения у больного можно с помощью простого способа. Для этого нужно вскипятить воду и подышать носом над парами. Тогда мокроту будет легче выкашливать.

Баночку требуется отвезти на анализ в течение двух часов. Если нет возможности, то хранить собранный биоматериал нужно в холодильнике. Оставить ее там можно всего на три часа, после такой сбор анализа мокроты не используется при обследовании.

Лучше, сдавать материал амбулаторно, фтизиатр соберет его по всем правилами. Ведь мокрота имеет маленький срок хранения, и манипуляции требуется проводить быстро.

Подготовка к анализу на мокроту

К проведению диагностики нужно готовиться. Обязательно произвести гигиенические процедуры. Тщательно почистить зубы, прополоскать ротовую полость. Это позволяет избежать попадание в биоматериал посторонней флоры. Такая ситуация повлияет на расшифровку и результат лабораторного исследования.

Стоит обратить внимание, что нельзя использовать ополаскивающие средства. Нарушение правил приводит к тому, что требуется сдавать анализ повторно.

Вечером перед диагностикой желательно пить много теплой воды. Разрешается принимать антибиотики, способствующие отхаркиванию. Кроме этого, можно употреблять травяные отвары, вызывающие мокроту.

Забор материала у взрослого желательно производить в лабораторных условиях. Специалист проведет инструктаж, расскажет о применяемых техниках. Тогда получиться правильно сдать анализ на исследование. При невозможности лично прийти в поликлинику, можно собрать слизь в домашней обстановке.

Расшифровка результатов

В лаборатории проводится зрительный анализ материала. Это помогает определить ее консистенцию, оттенок и характерные особенности. Далее проводится изучение секрета с помощью микроскопического метода. Выявляются микробы, которые спровоцировали болезнь.

При обнаружении вредоносных микроорганизмов проводится бактериоскопия. Посев помещается в благоприятную среду, с определенным микроклиматом и температурным режимом.

Алгоритм расшифровки довольно прост и состоит из изучения ее внешнего вида, консистенции и запаха.

Например, при бронхите, астме биоматериал имеет прозрачный цвет.

Такой тип еще встречается у курильщиков. Жемчужный оттенок говорит о развитие внутри организма злокачественных опухолей.

Когда в секрете присутствуют сгустки крови, то у больного рак легких последней стадии или tuberculosis. Темно оранжевый окрас появляется, когда развивается пневмония. Также может быть при закупорке кровеносных сосудов.

Присутствие в мокроте гнилого запаха свидетельствует об абсцессе, гангрене. Золотистый цвет характерен для аллергических реакций. При гайморите или застое слизи выделения приобретают зеленую окраску. Желтоватый расшифровывается, как болезнь бронхит.

Содержание в структуре материала гноя, говорит о туберкулезе или тяжелой форме крупозного воспаления легких. В норме у здорового человека отсутствуют выделения в бронхах. Описание результатов приклеивается в карту больного.

ВОЗ рекомендует ежегодно проходить диагностику.

Это поможет предотвратить развитие многих заболеваний. Сдать анализ можно в государственном медицинском учреждении бесплатно. Или в любой частной клинике, стоимость процедуры незначительная.

Как сдать анализ мокроты для исследования на БК

При воспалении органов дыхания и других подобных недугах рекомендуется проводить анализ мокроты на туберкулез. На основе анализа мокроты определяется характер, а также главная причина развития аномальных процессов, что больше напоминают патологию.

При поражениях органов системы дыхания анализ показывает секрет подобный густой слизи, в котором скрываются данные о первопричине патологии. Они, в свою очередь, и стали катализатором ухудшения жизнедеятельности здоровых клеток. Причина может скрываться в микобактериях Коха, клетках злокачественных новообразований, глинистых, кровяных примесей. Все эти образования, так или иначе, влияют на характер и содержимое слизи

Что представляет собой лабораторное исследование секрета

Как сдать мокроту и зачем это делать? Исследование данного типа представляет собой одну из наиболее результативных методик, что поможет выяснить характер недуга. Большинство болезней несут серьезную угрозу для жизни пациента вне зависимости от возраста, многие из которых даже способны привести к летальному исходу. Как только опасные микробы попадают в организм человека, они тут же активно размножаются и развивают опасные патологические соединения, что провоцируют выделение мокроты во время форсированного выдоха или чиханья.

Для диагностирования заболевания, врачами назначается проведения ряда общих анализов, что сочетают в себе бактериологическое и макроскопическое исследование. Не стоит забывать и о химическом и микроскопическом анализе. На всех этих этапах удается собрать важные данные о мокроте. На их основе происходит анамнез и итоговое медицинское заключение.

Подготовительный этап

Процедура требует обращения внимание на определенные нормы, благодаря которым удастся достигнуть «чистоты» проведенного исследования. Во рту у каждого человека есть определенная флора, что нередко смешивается с опасной мокротой. Чтобы для лабораторного исследования использовался необходимый материал, рекомендуется придерживаться таких советов (перед сбором следует):

• Пить больше подогретой воды и вовремя принимать медикаментозные препараты.
• Очищать ротовую полость и зубы.

Процесс сдачи материала

Сдать мокроту на анализ нужно в обязательном порядке. Перед этим, его необходимо грамотно собрать либо дома, либо в условиях стационара. Для этого пациенту выдают специально обработанную емкость, что не должна открываться до процедуры. Лучше всего собирать материал для анализа сразу после пробуждения, ведь в это время концентрация опасных веществ достигает максимальных показателей. Секрет для анализа необходимо постепенно выкашлять. При этом важно, чтобы пациент не отхаркал его. Для улучшения отхождения слизи, рекомендуется:

• Сделать ряд вдохов и выдохов, но только главное убрать спешку. Затем происходит задержка дыхания.
• Начните кашлять и сплюньте секрет, что накопился в специальную выданную емкость.
• Убедитесь, что при этом не выделилась слюна, и она не смешалась с мокротой.
• Процедура повторяется до тех пор, пока уровень необходимого секрета не достигнет первой отметки на емкости.

Если вы потерпели неудачу и не можете повторить все написанное выше, подышите над паром. Используйте кастрюлю или отправляйтесь в теплый душ, так вы ускорите отхождение секрета.

По завершению сбора необходимого биологического материала, емкость нужно доставить в специальный лабораторный пункт. Важно, чтобы анализы были свежими (держать их дома можно до 120 минут), ведь в секрете быстро начинают размножаться разные микро и макроэлементы, что мешают грамотной диагностической постановке.

Сдача биологического материала на обнаружение любой из форм туберкулеза

Если форсированный выдох имеет длительную форму и не прекращается на протяжении месяца, считается что это показание для исследования слизистого выделения из дыхательных путей. Подозрение на наличие палочки Коха – серьезная диагностика, поэтому патогенный материал собирается в условиях стационара. Для более точного постановления диагноза, биоматериал собирается не менее трех раз.

Как сдавать мокроту, ведь грамотность в этом вопросе крайне важна. Первый сбор проводится сразу после пробуждения, второй – спустя четыре часа, а третий – через сутки.

Алгоритм

Для того чтобы расшифровать посев мокроты необходимо провести несколько этапов. Изначально лечащий врач визуально осматривает пациента. Он должен обратить внимание на характер форсированного выдоха, цвет и слоистость выделенного секрета, и другие патогенные образования. Готовые образцы изучают под специальным лабораторным аппаратом, после чего биоматериал должен поступить на бактериоскопию. Последним из этапов исследования является посев слизи на специальную среду.

Расшифровка

Для правильного диагностирования недуга, вам необходимо показать результаты врачу, обратите внимание, что биологический материал оценивается по нескольким разным показателям. Необходимо провести анализ макроскопического и бактериоскопического вида.

Оттенок, насыщенность, густота, наличие глинистого или кровяного запаха, деление на слои и наличие образований – это главные симптомы макроскопического исследования.

1. Прозрачный биоматериал может выделяться при форсированном выдохе у пациентов с хроническими недугами органов дыхательной системы.
2. Если биоматериал имеет рыжеватый оттенок с кровяными частицами, это часто сигнализирует, что в организме есть место палочке Коха, или же у пациента возможна онкология.
3. Слизь с крупинками гноя, что образуется во время накапливания белых кровяных клеток, сигнализирует об отмирании легких или образовании острой гангрены.
4. Желтый или зеленый оттенок образований сигнализирует о патологии в органах дыхания. Для этого необходимо дополнительно сдать анализ мокроты на бк.

Положительный результат: расшифровка анализа мокроты на туберкулез легких у человека

Анализ полученного биологического материала подтверждает наличие в организме недуга. Это нашло свое подтверждение в:

• нехарактерных примесях, или непонятных вкраплениях;
• наличии сгустков слизевого характера;
• видимых шарах слизи;
• неприятном гнойном или инфекционном запахе;
• гное.

Макроскопическое исследование отображает иную информацию:

• свертки фибринозного типа;
• линзовые останки бактерий, что провоцируют туберкулез;
• продукты от разложенного распада веществ микроорганизмов;
• остатки патологических процессов в легочных тканях.

Вторая методика – микроскопическая, позволяет определить еще несколько опасных элементов:

• альвеолярные резидентные макрофаги;
• увеличенное число белых кровяных клеток;
• увеличенная норма форменных элементов крови.

При заболевании, что спровоцировала бактерия Коха, пациент нередко пытается выплюнуть изобилие слюны. Харканье кровью увеличивает процедуру образования красных кровяных клеток.

Эпителий в результатах анализа

На этапе микроскопической диагностики мокроты нередко можно диагностировать наличие плоских, коротких или длинных плоских клеток. Присутствие эпителия свидетельствует о серьезных нарушениях со здоровьем, в частности о возможном туберкулезе почек.

При обнаружении повышенного эпителия можно утверждать о наличии таких заболеваний, как: удушье, воспаление легких и онкологические опухоли. Во многих случаях упомянутые выше образования представляют собой примеси слизи, что поступают из носоглотки и не являются главными для диагностики.

Эозинофилы в мокроте при туберкулезе

Вирусы этого вида содержат специфические белковые соединения, что могут разрушать ткани органов дыхательной системы. Один из видов лейкоцитов считается главным фактором развития заболевания органов дыхательной системы, в частности туберкулеза. Однако исследования данного вопроса пока не завершились. Эти клетки невозможно в полной мере устранить из организма, однако можно в несколько раз уменьшить их концентрацию при необходимом лечении. Превышение данного показателя в анализе помимо туберкулеза может свидетельствовать об эозинофильной пневмонии, глистных поражениях легких.

Сдать анализ мокроты жизненно необходимо, ведь своевременная диагностика и обнаружение недуга поможет быстрее назначить грамотное лечение.

правила сбора, сколько делается и результат

Туберкулез является одним из самых массовых заболеваний в мире. Это трудноизлечимая инфекционная болезнь, которая не проходит без последствий для организма и может привести к смертельному исходу. Основные клинические проявления туберкулеза – субфебрильная температура тела на протяжении нескольких недель и кашель, который сопровождается выделением мокроты, зачастую кровавой.

Анализ мокроты на выявление бактерий туберкулеза является одним из важнейших диагностических методов болезни. В случае туберкулезного воспаления, как и многих других воспалительных заболеваний дыхательной системы, «мокрый» кашель является защитным механизмом организма. При помощи этого процесса организм пытается избавиться от инфекции.

Назначение анализа

Выявлением пациентов, заболевших туберкулезом, занимаются врачи первичных лечебных заведений. Но подтверждается диагноз в специализированном противотуберкулезном учреждении. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза относится к обязательным диагностическим минимумам.

Симптоматика туберкулезной инфекции может не проявляться длительное время. При развитии патологии появляется сухой кашель, на смену которому приходит мокрый, с выделением патологической слизи.

Характер самого секрета может быть разным:

1. Изначально это вязкая, бело-гнойная мокрота, в последующем ее вязкость увеличивается.

   Характер мокроты

2. Иногда в нем могут обнаруживаться прожилки крови, как проявление кавернозного процесса в легочной ткани.
3. В редких и тяжелых случаях слизистые выделения из легких могут быть представлены сплошной кровавой массой.
4. При активном туберкулезном инфекционно-воспалительном процессе не встречается пенистый секрет, как при бронхите или простуде.

Количество мокроты за сутки в течение всей болезни также изменяется. На пике болезни оно может достигать 300-400 мл за сутки. При этом постепенно отделение бронхиального секрета затрудняется, кашель приобретает спазматический характер. Первоначально мокрота преимущественно отходит утром, далее – в течение всего дня.

Основные методы выявления микобактерии туберкулеза в биологических жидкостях:

• бактериоскопия;
• бактериология.

Согласно рекомендациям ВООЗ, забор проводят не меньше двух раз. Исследование назначают при обращении к врачу пациента с жалобами на кашель, который длится более 3 недель. После чего проводят бактериоскопическое исследование и выявляют наличие кислоустойчивых бактерий.

Смотрите также:

Правила сбора

Существует определенная последовательность сдачи анализа мокроты при подозрении на туберкулез:

1. Всем пациентам, которые подвергаются клиническому обследованию, производят забор двух образцов секрета для микроскопии.
2. Контейнеры для сбора должны быть одноразовые с широкой горловиной, объемом не меньше 5-7 мл.

   Контейнер для сбора мокроты

3. Первую порцию бронхиального секрета пациент собирает и сдает при посещении лечебного учреждения в день обращения с соответствующими жалобами.
4. Вторую порцию пациент собирает дома самостоятельно утром. Медицинский сотрудник должен разъяснить правила забора секрета.

При диагностическом исследовании важно знать правила сбора мокроты на туберкулез:

1. Забор материала производят в утреннее время до приема пищи – за ночь во время сна образуется большое количество мокроты, что облегчает непосредственно проведение забора выделений и повышает информативность исследования.
2. Нужно провести все гигиенические процедуры ротовой полости: почистить зубы и пополоскать слизистую рта – это проводится с целью предотвращения попадания в патологический материал остатков пищи и микрофлоры ротовой полости.
3. Перед самой процедурой не следует принимать противокашлевые лекарственные препараты, так как угнетение кашля может затруднить отхождение слизи.
4. Вечером перед сном накануне забора материала назначают препараты, которые облегчают отхождение секрета (муколитики). Если отхождение мокроты затруднено, то в таком случаем применяют ингаляционное введение разжижающих или отхаркивающих лекарственных средств.

   Правила сбора мокроты

5. Нужно приготовить стерильную герметическую емкость для материала.
6. Помещение, где проводится забор, должно быть хорошо проветрено, соответствовать санитарным нормам, быть отдаленным от большого собрания людей.
7. Для облегчения отхождения секрета можно выпить теплой воды. После этого хорошо откашливаются и сплевывают мокроту в контейнер. Необходимо проследить, чтобы не была сплюнута слюна.

Забором материала занимаются работники лечебных медицинских учреждений. Лучше всего сдавать мокроту под контролем медика, который определит правильность выполнения процедуры. Изучением патологического материала занимается лаборант, задача которого заключается в точном и правильном исследовании мокроты.

Сбор мокроты в больнице осуществляется в отдельном помещении, которое отделено от врача стеклянной перегородкой. В дальнейшем медработник делает маркировку контейнера на его внешней боковой стороне.

Смотрите также:

Проведение исследования

Мокроту для исследования на туберкулез необходимо доставить сразу же после ее забора. В крайнем случае, она хранится не более семи дней в холодильнике при температуре +3°С. При транспортировке все контейнеры плотно упаковывают в специальные биксы, фиксируя их в вертикальном положении. Должна быть защита от УФ лучей. К каждому боксу прикрепляют описание образцов ТБ-05(а), дату и номер забора.

Бактериоскопическое исследование заключается в создании мазка на предметном стекле, который проходит определенные этапы обработки. Одним из них является окрашивание по методу Циля-Нильсена. Далее проводят пересмотр 100 полей зрения. Если не обнаруживаются МБТ, то просматривают еще дополнительно 200.

Также исследуемый материал окрашивают карболовым фуксином. Затем обесцвечивают 5% раствором серной кислоты или 3% солянокислым спиртом. Затем

Как провериться на туберкулез взрослому человеку. Анализ по крови, Инвитро, гемотест

Туберкулез – это опаснейшее из инфекционных заболеваний, часто встречающееся во всем мире. Главной причиной его развития в организме человека и животного является палочка Коха. Основными признаками подобного недуга считается кашель с мокротой в начальной стадии, а если болезнь не выявлена вовремя, то появляется кровь в мокроте, а после при активном развитии и смерть пациента.

Еще пару десятков лет назад вылечить туберкулез нельзя было, а сегодня шанс есть у каждого, главное вовремя выявить патологию. Провериться взрослому на туберкулез можно в любой лаборатории, сдав определенный анализ.

Содержание записи:

Показания к исследованию

Недуг развивается вследствие наличия в организме палочки Коха – это один из видов бактерий, передающихся воздушно-капельным путем. Бактерия устойчива к холоду, влаге и теплу.

Провериться на туберкулез взрослому необходимо в нескольких случаях:

• если был контакт с инфицированным человеком;
• если на рентгеновском снимке присутствуют затемнения;
• если наблюдается слабость и высокая температура тела;
• кашель хронического характера;
• если у человека пропал аппетит;
• если наблюдается увеличение лимфатических узлов;
• повышенная потливость в ночное время;
• если есть противопоказания к туберкулиновой пробе.

Провериться на туберкулез взрослому следует, если ему была проведена операция по пересадке органов, пациентам ВИЧ-инфицированным, при диагнозе – сахарный диабет.

Если есть симптомы, указывающие на развитие туберкулеза, то нужно обратиться за направлением на обследование к терапевту.

Анализ крови

Пройти проверку на туберкулез взрослому можно, если сдать анализ крови. Существует несколько результативных методов, помогающих подтвердить или опровергнуть диагноз. В зависимости от риска инфицирования, общего состояния здоровья и возраста пациента специалист может дать направление на прохождение одного из таких исследований:

• общий или биохимию;
• квантифероновый тест;
• ИФА;
• ПЦР.

Все исследования разные и помогают выявить недуг на его начальной стадии, определить скрытую форму или открытую форму.

Общий анализ крови – это основное исследование, которое регулярно проводят при туберкулезе легких и других органов. Этот анализ не поможет выявить наличие палочки Коха, но помогает оценить общее состояние здоровья и отследить, как организм сопротивляется инфекции, насколько эффективна терапия.

Подготовка к анализу

Чтобы получить максимально реальные результаты при сдаче анализа крови на туберкулез, важно правильно подойти к подготовке к нему:

• исключить прием антибиотиков, которые могут исказить результаты;
• анализ должен проводиться утром на голодный желудок;
• никакого приема спиртосодержащих напитков за 2 суток до забора крови;
• никакого психоэмоционального и физического перенапряжения;
• ограничить употребление жирной пищи.

Проведение анализа

Общий анализ крови проводят в лабораторных условиях. Биоматериал у пациента берут из пальца. Результаты будут готовы уже через пару часов после забора. У этой методики есть весомый минус – поставить максимально точный диагноз не получится, удастся только оценить общее состояние здоровья.

Расшифровка результатов

Оценивая полученные результаты после сдачи анализа крови, специалист в первую очередь смотрит, какой уровень лейкоцитов и лимфоцитов в крови, какова скорость оседания эритроцитов. Количество лейкоцитов при туберкулезе больше нормы, а лимфоциты наоборот ниже нормального показателя.

Если у человека активная форма туберкулеза, то в крови наблюдается высокая степень нейтрофилов. Но информативнее всего в анализе крови – показатель СОЭ. Его норма – это не более 30 единиц. Если же у пациента туберкулез, то СОЭ увеличивается до 50 и более единиц.

На острую форму туберкулеза может указать высокий белок, мочевина, холестерин и лизоцим.

ПЦР

ПЦР или полимеразная цепная реакция – это максимально точный способ молекулярно-генетического исследования, помогающий выявить в организме человека различные инфекции и установить, какой из микроорганизмов является возбудителем болезни.

ПЦР исследование позволяет выявить в организме человека чужеродное ДНК в любой жидкости, взятой из организма:

• кровь;
• слюна;
• мокрота;
• выделения из половой системы;
• смывная жидкость из бронхов;
• сок из желудка.

Только специалист может точно сказать, какую именно жидкость из организма следует взять, чтобы провести анализ и поставить точный диагноз.

Подготовка к анализу

Забор крови для проведения анализа на туберкулез с использованием ПЦР-методики – это только первый этап.

Чтобы анализ дал максимально точный диагноз, важно правильно к нему подготовиться:

1. Если для анализа берется мокрота, то перед забором следует провести туалет ротовой полости. Выполнить туалет нужно вечером за 12 часов перед забором и утром. Весь этот промежуток времени пищу не принимать. Вечером принять лекарство, способствующее лучшему отхождению мокроты.
2. Если для ПЦР-исследования берется кровь, то за 8 часов до забора пищу не употреблять. Брать анализ утром на голодный желудок. Курить перед забором нельзя. Забор берется из вены на локтевом сгибе. Кровь собирается в стерильную пробирку, куда добавляется еще и антикоагулянт, чтобы кровь не сгущалась. Смешивать два составляющих следует аккуратно, без резких движений.
3. Мочу для исследования собирают утром до завтрака. Перед сбором жидкости нужно тщательно провести туалет половых органов.
4. Смывы с бронхов и спинномозговую жидкость собрать может только специалист в стационаре.

Проведение анализа

Провериться на туберкулез взрослому при помощи ПЦР несложно, но важно соблюдать особые требования к проведению анализа. Только так можно добиться точных результатов, открывающих полную картину здоровья пациента.

Метод ПЦР самый точный с помощью которого можно проверится на туберкулез и не только!

Не только пациент должен соблюдать все правила сбора материала для анализа. Специалисты лаборатории также должны соблюдать некоторые правила. Храниться материал должен только в стерильной таре и отправляется в лабораторию для дальнейшего исследования.

А после материал в специальном приборе центрифугируют, отделяя клеточный осадок, который после и проверяют под микроскопом. Когда первоначальные данные изучены, к материалу добавляют специальный фермент – транскриптазу, которая проводит цепную реакцию и образует ферменты генетического материала для дальнейшего исследования. После проводится расшифровка полученных данных специалистом.

Расшифровка результатов

Срок проведения анализа составляет не более 7 часов. Пациент на руки получает ответ и их может быть 2 варианта.

Обнаружено	Это означает, что в исследуемом материале было обнаружено ДНК бактерий туберкулеза. В этом случае возможность заражения составляет 98%. При таком показателе доктор проводит расширенную расшифровку анализа, в которой будет определено: стадия болезни, расположение очага. Если анализ положительный, то пациента в срочном порядке отправляют в тубдиспансер на лечение.
Не обнаружено	Означает, что возбудитель недуга в исследуемом материале не выявлен.

Посев

Этот анализ предусматривает забор мокроты из ротовой полости для выявления в ней возбудителей туберкулеза. Эта методика считается одной из самых точных и результативных. Основная проблема данной методики заключается в том, что результатов приходится ждать долго.

А все дело в том, что отдельные микроорганизмы растут долго – до 3-х месяцев. В виду такой особенности образцы для анализа содержат в стерильном термостате весь срок проведения исследования.

Подготовка к анализу

Чтобы получить точные данные, во время забора материала нужно соблюдать некоторые рекомендации:

1. Сбор мокроты собирается в стерильную тару. Ее можно взять в лаборатории.
2. Перед сбором материала необходимо провести тщательный туалет ротовой полости.
3. Отхаркивание проводить лучше утром на голодный желудок. Именно этот период считается самым благоприятным для сбора материала, так как в это время выделяется максимальное количество мокроты.
4. Анализ необходимо доставить в лабораторию не позже, чем через пару часов после сбора материала.

Если сбор проведен правильно, то у мокроты будет слизисто-гнойный или слизистый характер. Объем материала для исследования должен быть около 5 мл.

Проведение анализа

Когда биоматериал попадает в лабораторию, его изначально проверяют визуально. Если болезнь протекает в тяжелой форме, то в мокроте будут присутствовать вкрапления крови. Но это еще не показатель для постановки диагноза – туберкулез. Кровь в мокроте может присутствовать и при крупозной пневмонии и при опухоли в дыхательной системе.

Если у пациента туберкулез, то в мокроте будут обнаружены патогенные микроорганизмы.

Проанализировать мокроту можно двумя методиками:

1. Бактериоскопический. Этот метод используется уже не 1 десяток лет. Благодаря нему можно выявить эритроциты, волокна тканей легкого, спириллы Куршмана и другие вещества. В мокроте инфицированного пациента кроме патогенной микрофлоры еще наблюдаются темные фрагменты – мелкие частицы распадающихся очагов.
2. Биологический. Этот способ предполагает использование таких процедур: отстаивание смеси, встряхивание, удаление белка и только после этого содержимое пробирки отбирается на посев.

Расшифровка результатов

После того, как образец будет окрашен, его рассматривают под микроскопом и подсчитывают количество бактерий. Если в поле зрения их количество не превышает цифры 3, то недуг считается неподтвержденным, а в бланке пишут итог – не обнаружено.

Если в поле зрения лаборанта обнаружено бактерий в пределах 4-9, то результат недостаточно позитивный.

А вот дальше, если в поле зрения 10 и более организмов, то лаборант ставит показатель +1. Если их более 2 десятков, то +2, а вот если их количество уже значительно превышает 30, то это уже заразная форма.

Анализ мокроты

Провериться на туберкулез взрослому при помощи исследования мокроты рекомендуется тем пациентам, которым требуется подтверждение диагноза, корректировки дальнейшего лечения, установки дозы лекарства при химиотерапии. Анализ мокроты – это постоянно необходимое исследование.

Подготовка к анализу

Брать экссудат для проведения исследования можно несколькими способами:

• материал после проведения ингаляций при помощи небулайзера;
• после промывания бронхов при помощи специальных растворов;
• мокрота из альвеол;
• получение слизи при проведении бронхоскопии;
• взятие биоптата из плевры, бронхов;
• мазки из гортани.

Материал собирают в стерильную тару с герметичной крышкой. Только так можно защитить материал от попадания в него микроорганизмов из окружающей среды.

Режим сбора материала для проведения диагностики зависит от стадии болезни:

• если человек поступил с жалобами первый раз, то сбор проводят 3 раза в течение 3 суток;
• если пациент уже находится на лечении, то берут 3 пробы за раз;
• в период ремиссии для отслеживания динамики пробу берут каждые 2-3 месяца по 2 пробы.

Проведение анализа

Характер мокроты позволит определить стадию болезни:

• если мокрота имеет белый цвет или прозрачна, то у пациента латентная стадия;
• мокрота серого, желтого или зеленого цвета с гнойным характером – активно развивается клиническая стадия;
• присутствие прожилок крови – поздняя стадия.

Расшифровка результатов

В зависимости от формы туберкулеза меняется и характер мокроты.

Форма недуга	Характер мокроты
Фиброзная	Мокрота имеет густую и липкую консистенцию. В ней кроме гноя и крови еще присутствует фибрин.
Инфильтративная	Мокрота имеет сероватый оттенок, наблюдается харканье кровью.
Диссеминированная	Мокрота с гноем и слизью, часто присутствуют кровяные примеси.
Кавернозная	Мокрота имеет темный цвет с большим содержанием гноя и крови.
Острая очаговая	Много гноя.
Хроническая очаговая	Мокроты небольшое количество, но в основном это гной.
Открытая	Мокрота может иметь любую консистенцию, цвет, объем и консистенцию.
Закрытая	Мокрота полностью отсутствует.

Диагностика методом T-SPOT

Т-СПОТ – это современный тест на туберкулез, который считается альтернативой пробам Манту. Способ достаточно сложный и дорогой, заключается он в иммунологическом исследовании крови. Этот тест показывает, насколько человек склонен к заражению туберкулезом.

Подготовка к анализу

Какой-то особенной подготовки перед сдачей анализа не требуется. Забор крови проводят в утренние часы и на голодный желудок. За сутки до проведения анализа необходимо отказаться от курения и употребления спиртосодержащих напитков.

Согласовав предварительно с лечащим врачом, возможно, придется отказаться от приема некоторых лекарственных средств. Для проведения тестирования требуется согласие пациента.

Проведение анализа

В лабораторных условиях у пациента берут венозную кровь. Количество крови зависит от возраста пациента: для взрослого это 8 мл.

после сбора крови на Т-лимфоциты воздействую антигенами туберкулеза, и начинается активно вырабатываться гамма-интерферон. Результат влияет на количество выделившегося интерферона.

Расшифровка результатов

Результаты тестов можно получить уже через 3-4 дня после забора крови.

Существует 3 варианта ответов:

1. Положительный. Он говорит о том. Что человек инфицирован. В пробе были найдены антитела и их число в пределах 8-100 спотов. Эти цифры говорят, что организм человека контактировал с палочкой Коха.
2. Отрицательный. Он сообщает о том, что инфекции нет в организме пациента.
3. Сомнительный. Результат непонятный, найдено в крови около 7 спотов. Иногда это может говорить о том, что болезнь только начинает развиваться, и определено требуется повторное проведение анализа.

Квантифероновый тест

Это современнейшая уникальная методика, которая является альтернативой всеми известной туберкулинодиагностике. С помощью данного метода удается достоверно выявить инфицирован ли пациент палочкой Коха или нет. Этот способ считается отличным дополнением к другим методам диагностики.

Подготовка к анализу

Этот способ предполагает обследование с использованием методики IGRA, который предполагает применение иммуноферментный анализ. Кровь у пациента берут натощак. За 10 часов до забора прекращают прием пищи. Не стоит делать забор, если у пациента наблюдается острая форма инфекции, так как результат может быть не верным.

Проведение анализа

Для проведения диагностики у пациента берут венозную кровь – 5 мл.

А после, используя три отдельные пробирки, нужно разделить собранную кровь:

1. Красная пробирка. В ней уже находится три антигена микобактерий, которые вместе с кровью культивируются на протяжении 24 часов при температуре 37 °С. Т-лимфоциты подвергаются активному стимулированию антигенами и если они уже знакомы, то начинает активно вырабатываться интерферон.
2. Серая пробирка. Она необходима для контроля. В сыворотке крови определяют уровень интерферона без дополнительной стимуляции антигенами.
3. Фиолетовая пробирка. Она помогает оценить уровень интерферона в сыворотке крови после инкубации.

Расшифровка результатов

После проведения анализа пациент может получить 3 варианта ответа:

1. Отрицательн

Анализ мокроты на туберкулез: как правильно сдать,расшифровка и сколько делается

Анализ мокроты на туберкулез входит в комплекс диагностических мероприятий, необходимых для выявления и уточнения диагноза. мокроты поможет составить грамотную схему лечения.

Как правильно сдать анализ мокроты на туберкулез

Врачи разработали правила сдачи анализа. Слюну собирают утром, до того, как человек позавтракал. Сначала пациент проводит гигиенические процедуры:

• чистка зубной эмали,
• тщательное прополаскивание чистой водой полости рта и глотки.

Затем начинается непосредственная сдача материала на анализ. Как правильно сдать анализ мокроты? Требования к процедуре:

1. Приготовление начинается заранее, с вечера. Пациенту предлагается принять специальные препараты, которые сделают отход легочного секрета более естественным. Это отхаркивающие и разжижающие составы. Если такие процедуры не помогают, проводят ингаляцию с фармацевтическим составом для отхаркивания.
2. Приготовить емкости для мокроты. Слизь нужно собрать в стерилизованную посуду, закрывающуюся плотно, герметично.
3. Перед сдачей по-хорошему кашляют и сплевывают в емкость. Объем слюны не должен быть большим, требуется мокрота из гортани. Бактерии ротовой полости являются в анализе посторонними.
4. Собирать слюну следует в помещении с отличной вентиляцией. Анализ проводят, открывая фрамуги, запуская вытяжку. Советуют открывать окна, или выйти на свежий воздух.

Во время процедуры в помещение запрещается входить. Посторонние могут внести в микрофлору кабинета, а значит в мокроту, патологические образования. Медицинские работники проводят прием анализа в специальной маске (респираторе).

Анализ мокроты на туберкулез расшифровка

Начинается расшифровка с рассматривания внешнего вида слизи. Патология характеризует изменение цвета – он становится темным, с различимыми примесями крови. Цвет – не основной показатель. Мокрота становится темной от употребления красного вина, увлечением кофе. Часть лекарственных препаратов и цветных напитков меняют внешний вид слизи.

Расшифровывается собранный материал по двум показателям, то есть, получить врачи предполагают два результата:

1. Положительный.
2. Отрицательный.

Положительный ответ

Анализ полученной мокроты подтверждает присутствие в организме заболевания. Что подтверждает это:

• посторонние примеси или неизвестные вкрапления,
• наличия слизевых сгустков,
• видимые прожилки,
• неприятный гнойный или инфекционный запах,
• гной.

Макроскопический метод исследования дает другие данные:

• фибринозные свертки,
• линзовые образования палочки Коха,
• продукты от разложения распада бактериальных веществ,
• остатки патологического процесса в тканях легкого.

Положительный результат выявляет увеличенное количество белковых соединений. Оно достигает 100-120г/л.

Другой метод – микроскопический дает возможность выявить другие опасные элементы:

• альвеолярные макрофаги,
• завышенный состав лейкоцитов,
• высокую норму лимфоцитов.

При туберкулезе человек часто пытается выбросить слюну изо рта. Кровохарканье увеличивает процесс формирования эритроцитов. Объем слюны во рту такой, что проглотить его человек, не замечая, не может. Ее больше, чем в здоровом состоянии.

Отрицательный ответ

Исследование показывает, что количество лейкоцитов небольшое, соответствует норме. Микробактерии также не выявляются. Если пациент чувствует себя не здоровым, то специалист назначит дополнительное обследование. Возможно, что заболевание связано с патологией легкого.

Виды и методы дополнительной диагностики зависят от симптомов и состояния больного.Анализ мокроты считается среди медицинских работников самым простым, но и достоверным по результатам. Он помогает поставить точный диагноз.

Слюну изучает многосторонне: макро-,микро-,бактериоскопически, делается и биологический анализ содержания мокроты.

Как проходит изучение слизи

Туберкулез опасен патологическим воздействием на ткани легкого, наблюдается их распад. Анализ проходит несколькими методами. Самый распространенный – ИФА (иммуноферментный). Суть метода:

1. К раствору, в который помещена часть мокроты, добавляют антитела.
2. Проверяют концентрацию антигенов, сравнивают с нормой здорового организма.
3. Определяют активность патологической среды.
4. Ставят диагноз.

Второй вариант лабораторного исследования – ВАСТЕС. Для метода берут специальное медицинское оборудование. Суть аппаратного исследования:

1. В мокроту вводят микросреду для предполагаемого вида инфицирования.
2. В аппарате начинают в определенной температуре выращивать штаммы бактерий.
3. В процессе происходит выработка углекислого газа, его улавливают датчики.
4. Газ соединяется с красителем.
5. По индексу флюоресценции делают выводы о виде заболевания.

Самый простой способ &#8211, культуральный. Мокроту высеивают в специальной среде. Врач рассматривает виды колоний микробных образований. Метод самый длительный, но позволяет доказать диагноз. Его используют очень редко, именно из-за длительного промежутка времени, который не всегда целесообразен для пациента.

Анализ мокроты пцр на туберкулез

ПЦР – это аббревиатура медицинского термина – полимеразная цепная реакция. Диагностика является одной из последних разработок ученых. Ее открыли в 1983 году, важность открытия оценена в мире, ученый получил высшее признание – Нобелевскую премию.

Метод основан на использовании генной инженерии. Универсальность его в необходимость небольшого количества материала для постановки точного диагноза. Выявить заражение туберкулезом реально в первые часы инфицирования, не дожидаясь развития болезни.

Суть метода, что такое полимеразно:

• у больного берут фрагмент частиц ДНК,
• проводят биологический синтез материала,
• определяется класс микроорганизмов.

Процесс технологически сложен, он предполагает молекулярно-генетическую экспертизу. ПЦР на туберкулез проходит буквально за несколько часов.

Время, необходимое для других методов, не может сравниться с ним по скорости. Сдав анализ, пациент ждет обнаружения возбудителя заболевания.

Процесс, который лежит в основе сможет понять только специалист. Обычному человеку не разобраться в тонкостях метода.

Как проходит диагностика туберкулезной пробы:

1. Берут необходимый для анализа материал. Что может им стать: кровь, содержание желудка, мокрота, воды, промываемые бронхами.
2. Тип материала подбирают в зависимости от вида возбудителя возможной инфекции.
3. Следующий этап – изучение цепной связи. Две цепи подвергают высоким температурам до 98 градусов. Этап называется денатурацией (разрушением структурной цепи ДНК). Время воздействия температуры – до 2 минут.
4. Следующая стадия – отжиг. Температуру снижают, дают возможность праймеру соединиться с нитью ДНК.
5. В итоге происходит элонгация – синтез нужных для процесса молекул.

Для проведения такого анализа, требуется специальное оборудование. Оно дорогостоящее, поэтому его нет в наличии в любом учреждении здравоохранения. ПЦР проводится в сложных случаях, когда нет точного результата обычных методов диагностики, нельзя провести инструментальные способы проверки состояния пациента.

Преимущества ПЦР технологии:

1. Скорость получения результата. Примерно за 5ч врач имеет точные данные. Такая скорость позволяет помочь пациенту в экстренных ситуациях. Чаще, это предоперационный период.
2. Разрешен, когда нельзя использовать другие методы. Например, частое повторение рентгеновских снимков приводит к облучению. ПЦР не опасен для больного.
3. Исследовать можно любую биологическую среду. Выявляются даже сложные формы туберкулеза.
4. Метод безопасен, поэтому подходит для детского возраста.
5. Инфекция выявляется на любой стадии.
6. ПЦР не позволяет спрятаться даже небольшому количеству бактериальных микро образований.
7. Подходит для проверки возможного рецидива туберкулеза.

Сколько делают анализ мокроты на туберкулез

Пробы берут не один раз. Повторы исключают возможность ошибок или получения некачественного материала, не отражающего истинного положения и состояния больного. Сколько раз собирать мокроту, подскажет лечащий врач. Самый оптимальный вариант – трехразовая сдача. Иногда могут потребоваться дополнительные пробы. В какие периоды времени проводят сбор:

1. Перед едой в утреннее время.
2. Через 3-4 часа после первой пробы.
3. На второй день, также до приема пищи.

Туберкулез – опасное заболевание, которое может поразить организм любого человека. Ситуаций заражения достаточно много. При любом подозрении на возможность появления инфекции, не стоит ждать ярких симптомов. Следует сдать анализы, пройти обследование и вовремя начать лечение.

Загрузка…

Источник: https://s-voi.ru/zabolevanie-legkih/metody-sdachi-analiza-mokroty-na-tuberkulez

Анализ мокроты больного на туберкулез — Первый по туберкулезу

Оглавление: [скрыть]

• Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза
• Обследование на туберкулез: как собрать мокроту
• Различные методики обследования на туберкулез
• Диагностика с помощью ПЦР
• Подводим итоги

Заболевания дыхательной системы наверняка знакомы каждому. Врачи часто для постановки диагноза берут анализ мокроты на туберкулез.

У всех было такое состояние, когда появлялся сухой кашель, незначительно повышалась температура тела, имелась слабость во всем теле. Данные симптомы характерны для многих заболеваний, однако одним из тяжелых видов такой патологии является туберкулез.

Туберкулез легких широко распространен в таких странах, как:

• Россия;
• Украина;
• Германия.

Это заболевание зачастую имеется у лиц без определенного места жительства, заключенных, малообеспеченных людей.

Оно характеризуется тяжелым поражением легких с образованием полостей распада (каверн), очагов уплотнения в легких.

Они поражаются, в частности, из-за того, что легочная ткань обильно снабжена кровеносными и лимфатическими сосудами. А это обуславливает распространение туберкулеза на другие системы органов.

Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза

Мокрота — секрет слизистой оболочки бронхов, при нормальном состоянии организма не образующийся. Во время заболевания наблюдается повышение секреции данной субстанции. Она начинает образовываться даже в самых мелких бронхах, что существенно увеличивает риск попадания микобактерий (основной возбудитель туберкулеза) в мокроту. Во время кашля частицы мокроты несколько рассеиваются в выдыхаемом воздухе. При вдыхании подобного воздуха происходит попадание микобактерий в незараженный организм , в котором, при соблюдении определенных условий, развивается инфекционный процесс, и туберкулез начинает прогрессировать.

При появлении вышеуказанных симптомов паниковать не стоит, так как вполне возможно, что место имеет банальная простуда.

Однако туберкулез следует заподозрить , когда данные симптомы имеются уже довольно долгое время (не менее двух недель), пациент похудел за это время, а также если не делалась контрольная флюорография (нет данных минимум за полгода).

Если же симптомы развились за несколько дней, есть стопроцентная уверенность в том, что это не туберкулез.

При подозрении на туберкулез (наличие на снимке очаговых уплотнений до 1 см в диаметре, затемнения доли или сегмента легкого, чаще всего, верхних его частей) немедленно стоит обратиться к фтизиатру за консультацией. Если же и у него возникнет подозрение на туберкулез, то сразу же будет назначен анализ мокроты.

Источник: https://1tuberkulez.ru/raznoe/analiz-mokroty-na-tuberkulez.html

Анализ мокроты на туберкулез: правила сбора в домашних условиях

В здоровом организме бронхи вырабатывают слизь без цвета и запаха, которая необходима для того, чтобы очищать дыхательные пути от попадающих туда микроскопических частичек пыли, вдыхаемого мусора и микробов.

Механизм очищения органов дыхания очень прост: реснички эпителия, устилающего их, поднимают слизь наверх вместе с чужеродными частицами.

В норме такой мокроты вырабатывается очень мало, поэтому здоровый человек не замечает ее отделения, и она проглатывается вместе со слюной.

Но на фоне любого воспалительного процесса, сопровождающего, какое-либо заболевание дыхательных путей, в том числе и туберкулеза, количество продуцируемой бронхами мокроты значительно возрастает.

Это связано, в первую очередь, с раздражением бокаловидных клеток, а также, при присоединении воспалительного процесса, когда клетки иммунной системы организма начинают поглощать патогенные микроорганизмы, образуются гнойные массы. Они также формируют отделяемое в виде мокроты при заболеваниях дыхательных путей.

С помощью кашля организм выводит эту жидкость – именно с помощью нее диагностируются многие бронхо — легочные патологии и выявляется степень и характер течения воспалительного процесса.

Количество выделяемой при влажном кашле мокроты также указывает на некоторые особенности течения заболевания. При этом она может, не выводится посредством кашля совсем (трудноотделяемая мокрота) или, наоборот, биоматериал можно собрать без каких-либо трудностей.

Два самых распространённых исследования этого отделяемого – это бактериоскопия и посев: именно эти два этапа позволяют провести точную диагностику заболевания, вызвавшего повышенное отделение мокроты и как следствие, влажный кашель с рядом сопутствующих симптомов.

Как собирается мокрота для анализа

1. Для начала необходимо позаботиться о контейнере – его можно купить в любой аптеке. Это специализированная емкость для сбора мокроты: она стерильна, с широким горлышком и крышкой. Также контейнер могут выдать в медицинском учреждении. Необходимый объем биоматериала для исследования – 5мл, поэтому емкость должна быть соответствующая.
2. Самым подходящим временем для сбора мокроты являются утренние часы, поскольку за время ночного сна скапливается достаточное количество и собрать ее гораздо легче. Однак

Туберкулез (стационарное лечение) — что вам нужно знать

Этот материал нельзя использовать в коммерческих целях, в больницах или медицинских учреждениях. Несоблюдение может повлечь судебный иск.

ЧТО НУЖНО ЗНАТЬ:

Туберкулез (ТБ) — это тяжелая инфекция, вызываемая бактериями Mycobacterium tuberculosis. Туберкулез обычно начинается в легких. Бактерии легко передаются от человека к человеку по воздуху. Они могут жить в вашем теле долгое время, не вызывая у вас болезней.Это называется скрытым туберкулезом. Скрытый означает, что у вас нет симптомов, но они могут развиться позже. Латентный ТБ может перерасти в активный ТБ, если его не лечить.

КОГДА ВЫ ЗДЕСЬ:

Информированное согласие

— это юридический документ, объясняющий, какие тесты, методы лечения или процедуры могут вам понадобиться. Информированное согласие означает, что вы понимаете, что будет сделано, и можете принимать решения о том, чего хотите. Вы даете свое разрешение, когда подписываете форму согласия. Вы можете попросить кого-нибудь подписать эту форму за вас, если вы не можете ее подписать.Вы имеете право понимать свое медицинское обслуживание известными вам словами. Прежде чем подписывать форму согласия, осознайте риски и преимущества того, что будет сделано. Убедитесь, что на все ваши вопросы есть ответы.

Отдых с поднятой головой:

Держите изголовье кровати приподнятым, чтобы облегчить дыхание. Также можно поднять голову и плечи на подушках или отдохнуть в кресле с откидной спинкой. Если вы чувствуете одышку, немедленно сообщите об этом врачу.

Изоляция:

Изоляционные меры безопасности используются для защиты других от инфекции.Медицинские работники и посетители должны будут носить герметичные медицинские маски, чтобы войти в вашу комнату. Чтобы прекратить изоляцию, вам понадобится 3 отрицательных образца мокроты.

Пульсоксиметр:

Пульсоксиметр — это прибор, который измеряет количество кислорода в крови. Шнур с зажимом или липкой лентой надевается на палец, ухо или палец ноги. Другой конец шнура подсоединяется к устройству, регистрирующему уровень кислорода.

Лекарства:

• Антибиотики помогают бороться с туберкулезом.
• Стероидное лекарство уменьшает воспаление.
• Жаропонижающие жаропонижающие.
• Отхаркивающее средство помогает разжижать слизь из легких. Когда мокрота жидкая, вам будет легче ее откашлять и выплюнуть.

Тесты:

• Образец мокроты можно собирать часто. Это может помочь поставщикам медицинских услуг выбрать для вас лучшее лечение. Когда вы кашляете, слизь из легких собирается в чашку.Возможно, вам потребуется сдать 3 образца мокроты, обычно первым делом с утра.
• Газы артериальной крови (ГАК) предназначены для проверки вашей крови на содержание кислорода и углекислого газа. Результаты могут сказать медицинским работникам, насколько хорошо работают ваши легкие.
• Анализ крови может показать повреждение ваших органов или распространение инфекции.
• Рентген грудной клетки может показать отек, инфекцию или коллапс легких.
• Компьютерная томография может показать повреждение тканей.Вам могут дать контрастную жидкость, чтобы ткани лучше выглядели. Сообщите врачу, если у вас когда-либо была аллергическая реакция на контрастную жидкость.

Обращение:

• Дыхательные процедуры помогают открыть дыхательные пути, чтобы вам стало легче дышать. Машина используется для превращения жидкого лекарства в туман. Вы вдохнете туман в легкие через трубку и мундштук. Вдыхаемый туман быстро действует на дыхательные пути и легкие, облегчая симптомы.
• Глубокое дыхание и кашель поможет расширить легкие и предотвратить дальнейшие повреждения. Сделайте глубокий вдох и задержите дыхание как можно дольше. Выпустите воздух и сильно закашляйтесь. Глубокий вдох помогает открыть дыхательные пути. Вам могут дать стимулирующий спирометр, который поможет вам сделать глубокий вдох. Положите пластиковый кусочек в рот и сделайте медленный глубокий вдох. Затем выпустите воздух и откашляйтесь. Повторяйте эти шаги 10 раз каждый час.

РИСКИ:

ТБ может передаваться другим людям и вызывать инфекцию.Лечение может быть более трудным, если инфекция распространилась на другие части вашего тела. Без лечения туберкулез может вызвать долгосрочные проблемы с легкими. Инфекция может распространиться на мозг, кости, позвоночник и почки. Это может быть опасно для жизни.

ДОГОВОР ОБ УХОДЕ:

У вас есть право помочь спланировать свое лечение. Узнайте о своем состоянии здоровья и о том, как его можно лечить. Обсудите варианты лечения со своими поставщиками медицинских услуг, чтобы решить, какое лечение вы хотите получать. Вы всегда имеете право отказаться от лечения.

© Copyright IBM Corporation 2020 Информация предназначена только для использования Конечным пользователем, ее нельзя продавать, распространять или иным образом использовать в коммерческих целях. Все иллюстрации и изображения, включенные в CareNotes®, являются собственностью A.D.A.M., Inc. или IBM Watson Health

, охраняемой авторским правом.

Приведенная выше информация является только учебным пособием. Он не предназначен для использования в качестве медицинского совета по поводу индивидуальных состояний или лечения. Поговорите со своим врачом, медсестрой или фармацевтом перед тем, как следовать любому лечебному режиму, чтобы узнать, безопасно ли оно для вас и эффективно.

Дополнительная информация

Всегда консультируйтесь со своим врачом, чтобы убедиться, что информация, отображаемая на этой странице, применима к вашим личным обстоятельствам.

Заявление об отказе от ответственности за медицинское обслуживание

Подробнее о туберкулезе (стационарное лечение)

Сопутствующие препараты

IBM Watson Micromedex

Симптомы и лечение

Справочник клиники Мэйо

RACGP — Тестирование на туберкулез

Крис Коултер

Эта статья является частью нашей серии «Тесты и результаты» за 2012 г., целью которой является предоставление информации об общих тестах, которые регулярно заказывают врачи общей практики.Он учитывает такие аспекты, как показания, что сказать пациенту, что тест может и не может сказать вам, а также интерпретацию результатов.

Туберкулез (ТБ), по оценкам, поражает треть населения мира, но о возможности туберкулеза в качестве диагноза можно забыть в Австралии, где общая заболеваемость невысока; ежегодно в стране диагностируется около 1000 случаев, а заболеваемость составляет 5-6 случаев на 100 000 населения. ¹

Пациенты, родившиеся, выросшие или недавно прибывшие из стран с высоким бременем ТБ, а также пациенты из некоторых общин коренных народов подвергаются гораздо более высокому риску заражения ТБ.После заражения туберкулез может оставаться латентным в течение многих лет, вновь проявляясь при иммуносупрессии или пожилом возрасте. Тестирование на туберкулез зависит от стадии заболевания. Скрытая инфекция ТБ диагностируется путем выявления специфических иммунологических ответов на белки Mycobacterium tuberculosis (MTB) с использованием тестов высвобождения гамма-интерферона или туберкулиновой кожной пробы. При активном туберкулезе требуется рентген грудной клетки и микробиологические исследования. В этой статье описывается, как каждый тест может помочь в диагностике ТБ, хотя ключевой диагностической проблемой по-прежнему остается «вспомнить о ТБ».

Что такое туберкулез?

Туберкулез вызывается инфицированием штаммами комплекса микобактерий, обычно МТБ. Другие близкородственные виды, такие как M. africanum (человек) и M. bovis (туберкулез крупного рогатого скота), также ответственны за инфекцию, хотя в Австралии они редки. Другие виды микобактерий могут вызывать инфекцию, но не заразны, требуют другого лечения и не должны называться туберкулезом. Туберкулез — это заболевание, подлежащее регистрации в Австралии как лабораториями, так и врачами.Бытовые контакты с подтвержденным случаем туберкулеза требуют обследования.

После воздействия и вдыхания туберкулезных микобактерий, переносимых по воздуху, клеточная иммунная защита обычно сдерживает инфекцию, поэтому пациенты не заболевают остро. Иногда (особенно у детей) инфекция распространяется, приводя к туберкулезному менингиту или милиарному туберкулезу. Первичная инфекция также может проявляться пневмонией или плевральным выпотом. Когда инфекция сдерживается иммунной системой, она остается в спящем состоянии, обычно в верхушках легких.Это называется «латентной туберкулезной инфекцией» (ЛТИ).

В целом, риск развития активного туберкулеза в течение жизни у человека с ЛТИ составляет 10%, причем наибольший риск наступает в течение 2 лет после заражения. После реактивации симптомы, такие как жар, ночная потливость, потеря веса и кашель, развиваются, как правило, в течение 2–3 недель и более.

Туберкулез — классическое заболевание легких, но 39% уведомлений в Австралии в 2007 г. относились к внелегочным инфекциям. ¹ Другие очаги инфекции включают лимфатические узлы, плевральную полость, кости и суставы, мочеполовые и мозговые оболочки.

Когда рассматривать ТБ

Поскольку проявления могут быть нетипичными, всегда следует рассматривать ТБ, особенно в группах высокого риска заражения ТБ ( Таблица 1 ) или реактивации ТБ ( Таблица 2 ). Блок-схема, подробно описывающая, как проводить расследование при рассмотрении диагноза ТБ, показана на рис. 1 .

Таблица 1. Группы повышенного риска заражения ТБ

Пожилые пациенты — заболеваемость была намного выше в середине 20 века, особенно послевоенные европейские мигранты и беженцы из Вьетнамской войны Австралийские аборигены Жители острова Торресова пролива — от контакта с жителями Папуа-Новой Гвинеи (где высока заболеваемость туберкулезом и МЛУ-ТБ) 11 пересечение границы Мигранты или беженцы из стран с высоким бременем туберкулеза, особенно беженцы из стран Африки к югу от Сахары и студенты из Индии, Китая и других азиатских стран Медицинские работники, работавшие в странах с высоким уровнем нагрузки

Рисунок 1.Обследование при постановке диагноза ТБ

Таблица 2. Факторы риска реактивации ТБ

Недавно перенесенная инфекция, особенно в течение первых 2 лет Состояния с ослабленным иммунитетом, включая ВИЧ-инфекцию (риск реактивации ТБ составляет 10% в год 4 , хотя он значительно снижается с помощью антиретровирусной терапии 12 ) Лекарственные препараты (например, иммуномодуляторы, химиотерапия и посттрансплантация)

Обследования при подозрении на туберкулез легких

Пациентам с симптомами, указывающими на активный ТБ (такими как ночная потливость, кашель и лихорадка), требуется рентген грудной клетки и микробиологическое исследование.Эти пациенты потенциально заразны, поэтому следует соблюдать меры предосторожности.

Рентген грудной клетки

Важны и задне-передние (ПА), и боковые снимки с четкими пояснениями для радиолога. Типичные изменения включают уплотнение воздушного пространства, кавитацию и сокращение волокон в одной или обеих верхних долях или в верхних частях нижних долей (, рис. 2, ). В случае вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) чаще встречаются атипичные проявления, включая [редко] отсутствие изменений, несмотря на активное заболевание.На рентгенограмме грудной клетки бывает сложно отличить активную инфекцию от скрытой, поэтому микробиология также важна.

Рис. 2. Рентгенограмма грудной клетки мужчины 47 лет с типичным туберкулезом легких

Анализ мокроты

Три образца мокроты (желательно ранним утром) показаны для максимального выхода. У детей желудочная аспирация является полезным суррогатом. Распыленный гипертонический раствор может вызвать выделение мокроты, поэтому бронхоскопия используется редко. Сбор должен происходить подальше от других людей и в банку с резьбовой крышкой.Мокроту следует незамедлительно доставить в лабораторию, но ее можно хранить в холодильнике в течение 1–2 дней.

Микроскопия

Кислотно-быстрая микроскопия — быстрая (в течение 24 часов, менее часа, если срочно) и недорогая. Для положительного результата мазка требуется примерно 5000 бацилл на мл мокроты. Микроскопия выявляет кислотоустойчивые бациллы примерно в 50% случаев туберкулеза легких. Окрашивание по Цилю-Нильсену является стандартным и использует особые свойства окрашивания восковых покрытий стенок микобактериальных клеток.Затем необходимы культуральные или молекулярные анализы, чтобы подтвердить, являются ли кислотоустойчивые бациллы комплексом MTB.

Культура

Культура — самый чувствительный тест. Предпочтительны автоматические жидкие культуры, поскольку они более быстрые и чувствительные, чем твердые культуральные среды, а также могут определять чувствительность к лекарствам.

Молекулярные анализы

Молекулярные анализы обнаруживают ДНК, специфичную для комплекса MTB. В образцах с положительным мазком они очень чувствительны, но в образцах с отрицательным мазком чувствительность снижается до 50%.Некоторые эксперты рекомендуют новый тест быстрой полимеразной цепной реакции (ПЦР) (анализ Xpert® MTB / RIF, Cepheid, Саннивейл, Калифорния), который не подвержен загрязнению. ² Чувствительность эквивалентна твердой культуре и одновременно определяет устойчивость к рифампицину.

Тестирование лекарственной чувствительности

Культивированный изолят следует тестировать в отношении препаратов первой линии (изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид и стрептомицин). Затем резистентные штаммы тестируются против препаратов второго ряда.Случаи множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) определяются по устойчивости как к изониазиду, так и к рифампицину. Штаммы, устойчивые к рифампицину, обычно также устойчивы к изониазиду. Штаммы, устойчивые к лекарствам, требуют более длительного лечения; в отношении МЛУ-ТБ руководящие принципы Всемирной организации здравоохранения рекомендуют курс терапии не менее 20 месяцев. ³

Тесты на подозрение на латентный туберкулез

Диагностика ЛТИ зависит от тестов иммунного распознавания антигенов MTB с туберкулиновым кожным тестом (TST) или анализами высвобождения гамма-интерферона (IGRA).Эти тесты становятся положительными через 4–6 недель после заражения. ⁴ В презентации могут быть представлены пациенты из стран с высокой распространенностью, контактные лица индексного случая или медицинские работники, представляющие для скрининга на ТБ.

Зачем диагностировать латентный туберкулез?

Лечение ЛТИ снижает риск перехода в активную форму ТБ на 60–90% и устраняет возможность передачи. Профилактическая химиотерапия обычно проводится с применением только изониазида (в среднем 9 месяцев), а не требует комбинированной терапии.Риск прогрессирования заболевания наиболее высок в течение первых 2–3 лет, особенно в течение 1 года. ⁵

Туберкулиновая кожная проба

TST — или проба Манту — позволяет оценить воспаление дермы после внутрикожной инъекции протеина туберкулина. Тест необходимо прочитать через 48–72 часа после приема. Диаметр уплотнения дает полуколичественную оценку вероятности развития ЛТИ. Ложноположительные результаты могут быть результатом предыдущей вакцинации против бацилл Кальметта-Герена (БЦЖ) и контакта с Mycobacterium spp.Врачи общей практики должны связаться со своими местными лабораториями относительно доступности тестирования в их районе.

Анализ высвобождения гамма-интерферона

В анализах высвобождения гамма-интерферона используется способность лимфоцитов человека выживать в течение короткого периода в пробирке. Если лимфоциты заразились предшествующей туберкулезной инфекцией, они вырабатывают определяемое количество гамма-интерферона. Существует два коммерчески доступных теста: анализ Quantiferon Gold In-Tube ™ (Celestis Australia) и тест T-spot ™ (Oxford Immunotech).Анализы высвобождения гамма-интерферона не зависят от предыдущей вакцинации БЦЖ. Венозный образец не требует специального времени или подготовки пациентом. Скидка по программе Medicare доступна только в том случае, если у пациента подавлен иммунитет. Врачам общей практики следует связаться со своей лабораторией, поскольку анализ может стоить пациенту до 100 долларов.

Положительный результат IGRA предполагает, что иммунная система пациента распознает антигены ТБ. Это может быть связано либо с текущей инфекцией, либо с инфекцией в далеком прошлом.Анализ высвобождения гамма-интерферона не позволяет диагностировать активный туберкулез — необходимы микробиологические тесты. Точно так же отрицательный тест не может исключить активный ТБ, потому что чувствительность не 100%. ⁶

Какой тест при LTBI лучше всего?

Несмотря на многочисленные испытания и последующие метаанализы, вопрос о том, как лучше всего включить IGRA в диагностические алгоритмы, остается спорным. Национальный консультативный комитет Австралии по туберкулезу предполагает, что TST остается предпочтительным методом с IGRA в качестве дополнительного анализа для субъектов старше 2 лет. ⁷ Международные правила значительно различаются. ⁸ Туберкулиновая кожная проба предпочтительна для детей младшего возраста, особенно в возрасте до 2 лет. Анализы высвобождения гамма-интерферона легче интерпретировать у пациентов, вакцинированных БЦЖ, и должны работать лучше у пациентов с ослабленным иммунитетом, но доказательств этого нет. Анализ QFG-IT облегчает оценку ответа иммунной системы. Отсутствие обнаруживаемого иммунного ответа (анергия) не может вызвать ложноотрицательный результат теста TST. В таблице 3 сравниваются важные характеристики двух основных типов тестов для обнаружения LTBI.

Если результаты теста TST или IGRA положительны, активная форма заболевания должна быть исключена с помощью рентгенографии грудной клетки и мокроты для микроскопии и посева. Перед началом лечения любой положительный результат необходимо обсудить с клиницистом, имеющим опыт ведения ТБ.

Таблица 3. Сравнение важных характеристик двух основных типов тестов для обнаружения LTBI

	TST	IGRA
График льгот Medicare	$ 11.30	35,15 $ (только для пациентов с ослабленным или ослабленным иммунитетом) *
Специфичность — зависит от предыдущей вакцинации БЦЖ	Есть	Нет
Специфичность — под влиянием предыдущего заражения микобактериями окружающей среды	Есть	Меньше, чем при TST (но тестовые антигены также обнаружены в M. marinum , M kansasii и M. szulgai )
Особые меры предосторожности	Хранить реагент туберкулина при –8 ° C в защищенном от света месте	Кровь должна быть обработана в течение 16 часов
Подходит для детей младше 2 лет	Есть	Нет
Реакции гиперчувствительности	Возможно — анафилаксия редко	Нет
Количество посещений для прохождения теста	Два #	Один
* Примечание: могут возникнуть дополнительные расходы даже для пациентов с ослабленным иммунитетом — свяжитесь с вашей лабораторией # Примечание: с обученным медицинским работником — свяжитесь с вашим центром сбора патологий

Другие испытания

Внелегочный туберкулез диагностируется путем отправки образца в физиологическом растворе для микроскопии и посева.Гистопатология может выявить типичные изменения (некротические гранулемы, казеозы и кислотоустойчивые бациллы). Врачам общей практики рекомендуется связаться со своей лабораторией по поводу наилучшего обращения с пробами, если у них есть подозреваемый случай.

Серологические тесты на ТБ обычно проводятся в некоторых зарубежных странах, но они нечувствительны и неспецифичны и не рекомендуются в Австралии. ⁹

Все пациенты с туберкулезом должны пройти скрининг на ВИЧ-инфекцию. Следует контролировать ферменты печени, так как некоторые лечебные препараты могут вызвать химический гепатит.Гепатиты B и C, по-видимому, увеличивают риск гепатотоксичности, поэтому перед лечением проверьте серологию. ¹⁰ Показано регулярное полное исследование крови для выявления лекарственной нейтропении или тромбоцитопении. Дефицит витамина D может увеличить риск прогрессирования ТБ, хотя ценность анализа и замены неясна.

Ключевые вопросы диагностики туберкулеза

• Может быть, это туберкулез? Рассматривайте ТБ у пациентов с симптомами, у пациентов из групп высокого риска и у пациентов с недифференцированным заболеванием.
• Это активный или латентный ТБ? Тестирование различается в зависимости от стадии заболевания.
• При латентном туберкулезе — что ТКП или IGRA более доступны и подходят этому пациенту?
• При активном туберкулезе — после рентгенологического исследования мокроты и посева. Следует ли мне запрашивать молекулярное тестирование, чтобы ускорить диагностику и выявить резистентность?

Конфликт интересов: не заявлен.

Благодарности

Вклад доктора Эндрю Берка в рецензирование рукописи признателен.Также выражается благодарность отделу медицинской визуализации больницы принца Чарльза, Брисбен, за использование рентгенограммы грудной клетки.

Список литературы

1. Барри К., Константинос А. и Национальный консультативный комитет по туберкулезу. Уведомления о туберкулезе в Австралии, 2007 г., Commun Dis Intell 2009; 33: 304–15.
2. Johnson PD. Туберкулез с высокой устойчивостью в землях Down Under. Med J Aust 2011; 194: 565–6.
3. Всемирная организация здравоохранения.Руководство по программному ведению лекарственно-устойчивого туберкулеза. Обновление 2011 г. Доступно на www.who.int/tb/challenges/mdr/programmatic_guidelines_for_mdrtb/en.
4. Шааф С., Зумла А., редакторы. Туберкулез. Исчерпывающий клинический справочник. Сондерс Эльзевир, Европа, 2009.
5. Horsburgh CR Jr, Рубин EJ. Клиническая практика. Скрытая туберкулезная инфекция в США. N Engl J Med 2011; 364: 1441–8.
6. Mazurek GH, Jereb J, Lobue P, Iademarco MF, Metchock B, Vernon A.Руководство по использованию теста QuantiFERON-TB Gold для выявления инфекции Mycobacterium tuberculosis, США. MMWR Recomm Rep 2005; 54: 49–55.
7. Изложение позиции по иммуноанализу на высвобождение интерферона-g при выявлении латентной туберкулезной инфекции. Одобрен Национальным консультативным комитетом по туберкулезу. Опубликовано Департаментом здравоохранения и старения Содружества. Сентябрь 2009 г. Доступно по адресу: www.health.gov.au/internet/main/publishing.nsf/Content/cdna-ntac-interferon.htm [Доступно в марте 2012 г.].
8. Denkinger CM, Dheda K, Pai M. Рекомендации по тестам высвобождения интерферона g при туберкулезной инфекции: соответствие, несоответствие или путаница. Clin Microbiol Infect 2011; 17: 806–14.
9. Всемирная организация здравоохранения. Коммерческие серодиагностические тесты для диагностики туберкулеза. Заявление о политике, 2011 г. WHO / I + TEM / TB / 2011.5. Доступно на www.who.int/topics/tuberculosis/en/
10. Саукконен Дж. Дж., Кон Д. Л., Ясмер Р. М. и др. Официальное заявление ATS: гепатотоксичность противотуберкулезной терапии.Am J Respir Crit Care Med 2006; 174: 935–52.
11. Simpson G, Coulter C, Weston J, et al. Модели устойчивости туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью в Западной провинции Папуа-Новой Гвинеи [заметки с мест]. Int J Tuberc Lung Dis 2011; 15: 551–2.
12. Lawn SD, Harries AD, Williams BG и др. Антиретровирусная терапия и борьба с ВИЧ-ассоциированным туберкулезом. Будет ли это делать ART? Int J Tuberc Lung Dis 2011; 15: 571–81.

Переписка [email protected]

Открытие или сохранение файлов

Файлы на веб-сайте можно открывать или загружать и сохранять на свой компьютер или устройство.

Чтобы открыть, щелкните ссылку, ваш компьютер или устройство попытается открыть файл с помощью совместимого программного обеспечения.

Чтобы сохранить файл, щелкните ссылку правой кнопкой мыши или щелкните ссылку и выберите «Сохранить как …». Следуйте подсказкам, чтобы выбрать место.

Типы файлов

PDF Большинство документов на веб-сайте RACGP имеют формат Portable Document Format (PDF). Эти файлы будут иметь «PDF» в скобках вместе с размером файла для загрузки. Чтобы открыть файл PDF, вам понадобится совместимое программное обеспечение, такое как Adobe Reader.Если у вас его нет, вы можете бесплатно загрузить Adobe Reader.

DOC Некоторые документы на этом сайте представлены в формате Microsoft Word. Они будут иметь «DOC» в скобках вместе с размером файла для загрузки. Для просмотра этих документов вам понадобится программа, которая может читать формат Microsoft Word. Если у вас ничего нет, вы можете бесплатно скачать MS Word Viewer.

MP3 Большинство веб-браузеров воспроизводят аудио в формате MP3 в браузере

Культурально-независимое обнаружение и характеристика Mycobacterium tuberculosis и M.africanum в образцах мокроты с использованием метагеномики дробовика на настольном секвенаторе

Введение

Туберкулез (ТБ) — это инфекция, в первую очередь легких, вызываемая Mycobacterium tuberculosis и родственными видами, входящими в комплекс M. tuberculosis . Туберкулез остается серьезной глобальной проблемой здравоохранения, уступая только ВИЧ / СПИДу с точки зрения глобальной смертности от одного инфекционного агента — по оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в 2012 году туберкулезом заболели 8,6 миллиона человек.3 миллиона человек умерли от этой болезни, в том числе 320 000 умерли среди ВИЧ-инфицированных (ВОЗ, 2013).

Центральное место в ведении больных туберкулезом у отдельных пациентов и в обществе занимают методы лабораторной диагностики, позволяющие эффективно и на ранней стадии обнаруживать случаи. Начиная с новаторской работы Коха и Эрлиха в 1880-х годах, лабораторная диагностика туберкулеза легких в значительной степени полагалась на кислотостойкое окрашивание образцов мокроты и культивирования на селективных лабораторных средах для выделения микобактерий (Ehrlich, 1882; Koch, 1882).Микроскопия по-прежнему обычно используется в качестве диагностического метода первой линии и как единственный лабораторный метод в условиях ограниченных ресурсов (Drobniewski et al., 2012). Положительный мазок также используется в качестве ориентира для определения инфекционности и чувствительности к лечению. Однако микроскопия не позволяет идентифицировать кислотоустойчивые бациллы на уровне видов (Maiga et al., 2012). Такая идентификация важна для определения курса лечения, поскольку патогенные микобактерии, не входящие в комплекс M. tuberculosis , часто не поддаются лечению обычными противотуберкулезными препаратами (Maiga et al., 2012). Кроме того, существуют важные различия в ответе на лечение даже в пределах комплекса M. tuberculosis . M. bovis и M. canettii не реагируют на противотуберкулезное средство первой линии пиразинамид — в результате неспособность распознать M. bovis как причину ТБ может иметь фатальные последствия (Allix-Beguec и др., 2010). Кроме того, M. canettii , по-видимому, демонстрирует пониженную восприимчивость к многообещающему новому кандидату противотуберкулезного препарата, PA-824 (Feuerriegel et al., 2011; Feuerriegel et al., 2013).

Также растет признание клоноспецифических различий в биологии патогенов в пределах M. tuberculosis complex . M. africanum , который в основном ограничен Западной Африкой, где он вызывает до половины случаев легочного туберкулеза у человека, связан с менее передаваемой и менее тяжелой инфекцией, чем типичные штаммы «современного» M. tuberculosis clade (de Jong, Antonio & Gagneux, 2010).Аналогичным образом, M. canettii , ограниченный Африканским рогом, и M. bovis , оба обычно являются побочным продуктом животных, относительно плохо передаются от человека к человеку (Fabre et al., 2010; Gonzalo-Asensio et al. , 2014). Напротив, линия Beijing-W M. tuberculosis sensu stricto , которая распространилась по миру в последние десятилетия, по-видимому, вызывает более агрессивное заболевание и с большей вероятностью станет устойчивой к лекарствам (Nicol & Wilkinson, 2008; Borgdorff и ван Соолинген, 2013).

Из-за медленных темпов роста комплекса M. tuberculosis традиционная посевная диагностика туберкулеза обычно занимает несколько недель или даже месяцев. Точно так же обычное фенотипическое тестирование микобактериальной чувствительности остается медленным и может быть ненадежным для всех классов противотуберкулезных агентов. В последние десятилетия автоматизированное обнаружение роста в жидкой культуре, например, с помощью Пробирка с индикатором роста микобактерий (MGIT) позволила повысить скорость и облегчить диагностику, так что теперь посевной диагностический анализ часто возможен в течение двух недель (Pfyffer et al., 1997).

Однако, по сравнению с большинством других лабораторных процедур, рабочие процессы диагностики туберкулеза на основе посевов остаются сложными, дорогими, медленными, технически сложными и требуют дорогостоящих средств биологической защиты. Кроме того, поскольку выделение микобактерий в чистой культуре и тестирование чувствительности остаются обременительными, в условиях ограниченных ресурсов эти шаги не выполняются, и даже в лабораториях с хорошими ресурсами, как правило, из каждого образца отслеживают только одну или несколько субкультур с одной колонией.Это ведет к недостаточному распознаванию смешанных инфекций, когда присутствует более одного штамма из комплекса M. tuberculosis или когда ТБ встречается вместе с инфекцией другими микобактериями (Shamputa et al., 2004; Warren et al., 2004 ; Cohen et al., 2011; Wang et al., 2011). Это может привести к трудностям в лечении, когда штаммы или виды, восприимчивые к традиционному противотуберкулезному лечению, сосуществуют с устойчивыми штаммами или видами у одного и того же пациента (Hingley-Wilson et al., 2013).

В качестве альтернативы культуральному и фенотипическому тестированию на чувствительность ВОЗ недавно рекомендовала новый быстрый, автоматизированный диагностический тест на ТБ, основанный на амплификации в реальном времени, — анализ Xpert MTB / RIF (ВОЗ, 2011). Эта система позволяет одновременно обнаруживать M. tuberculosis и мутации устойчивости к рифампицину в закрытой системе, подходящей для использования в простой лабораторной обстановке, обеспечивая при этом результат менее чем за два часа непосредственно из образцов мокроты (Helb et al., 2010 ).Однако этот подход работает неоптимально при смешанных инфекциях, не может предоставить полный спектр клинически значимой информации (например, видообразование, восприимчивость к другим агентам) и, при отборе проб только небольшой части генома, не дает понимания биологии патогенов, эволюции и эпидемиология (Zetola et al., 2014).

Эпидемиологическое исследование клинических изолятов комплекса M. tuberculosis играет важную роль в ведении и контроле туберкулеза.Был разработан ряд схем молекулярного типирования, в том числе фингерпринт IS 6110 , микобактериальное чередование повторяющихся тандемных повторов с переменной единицей (MIRU-VNTR) и сполиготипирование (Jagielski et al., 2014). Эти подходы могут быть полезны для отличия рецидива от повторного заражения и для распознавания смешанных инфекций у отдельного пациента, а также для определения источников инфекции, выявления вспышек и отслеживания распространения клонов внутри сообщества. Однако, поскольку эти подходы обычно требуют выделения патогена в чистой культуре, клинически значимые данные типирования обычно не доступны в течение 1-2 месяцев после сбора образца мокроты.

За последние пятнадцать лет полногеномное секвенирование применялось к постоянно более широкому кругу изолятов из M. tuberculosis и родственных видов (Cole et al., 1998; Brosch et al., 2002; Gutierrez, Supply & Brosch , 2009). Эти усилия пролили свет на эволюцию и популяционную структуру этой группы патогенов, показав, что члены комплекса M. tuberculosis репродуктивно изолированы, почти не участвуют в горизонтальном переносе генов и демонстрируют клональную популяционную структуру, в которой клоны расходятся через ограниченный набор генетических изменений, включая точечные мутации, делеции, перемещение вставляемых элементов и перестройки в повторяющихся регионах.Полногеномный анализ позволяет отнести изоляты к ряду видов, глобальных линий и суб-линий на основе однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) и больших полиморфизмов последовательностей (обычно делеций, которые часто называют «областями различия» или RD. , и вставка подвижного элемента IS 6110 ).

В последние годы доступность быстрого и дешевого высокопроизводительного секвенирования и, в частности, появление удобных для пользователя настольных платформ для секвенирования, таких как Illumina MiSeq (Loman et al., 2012а; Loman et al., 2012b), привели к широкому использованию полногеномного секвенирования в тестировании чувствительности к туберкулезу и эпидемиологии с принятием полногеномного секвенирования для рутинного использования в некоторых справочных лабораториях по туберкулезу (Gardy et al., 2011; Koser et al., 2012; Roetzer et al., 2013; Walker et al., 2013; Walker et al., 2014). Однако высокопроизводительное секвенирование еще не использовалось в качестве диагностического инструмента для туберкулеза, поскольку предполагалось, что необходимо подвергнуть клинические образцы длительному культивированию, прежде чем можно будет получить достаточное количество микобактериальной ДНК для секвенирования и анализа всего генома.Некоторые исследователи (Koser et al., 2013) недавно оспорили это предположение, получив последовательности генома микобактерий из ДНК, выделенной непосредственно из трехдневной культуры MGIT образца мокроты. Однако здесь возникают вопросы: зачем возиться с культурой; почему бы не получить последовательности генома микобактерий непосредственно из образца мокроты, без посева?

Метагеномика дробовика — то есть беспристрастное секвенирование в массовом порядке ДНК, извлеченных из образца без целевой амплификации или захвата — предоставила мощный, свободный от предположений подход к восстановлению геномов бактериальных патогенов из современных и исторических материалов (Pallen, 2014).Этот подход позволил реконструировать геном вспышки штамма из образцов стула из вспышки Escherichia coli O104: h5 в 2011 г., и оказался успешным в получении данных о последовательности всего генома для Borrelia burgdorferi , M. leprae , M. tuberculosis и Brucella melitensis из давно умерших человеческих останков (Keller et al., 2012; Chan et al., 2013; Loman et al., 2013; Schuenemann et al., 2013; Kay et al., 2014). Метагеномика недавно предоставила клинически полезную информацию в случаях хламидийной пневмонии и нейролептоспироза (Fischer et al., 2014; Wilson et al., 2014).

Здесь мы исследуем потенциал метагеномики в обнаружении и характеристике штаммов Mycobacterium tuberculosis и M. africanum в образцах мокроты с положительным мазком от пациентов из Гамбии в Западной Африке.

Материалы и методы

Микробиологический анализ и отбор проб

Восемь образцов мокроты с положительным мазком и посевом были отобраны для метагеномного анализа из образцов, собранных в мае 2014 года под эгидой проекта Enhanced Case Finding (http: // Clinicaltrials.gov / show / NCT01660646). Объединенный комитет правительства Гамбии / MRC по этике одобрил это исследование под номером SCC 1232, и все участники получили информированное письменное согласие. Образцы мокроты собирали путем откашливания в стерильную чашку и транспортировали на льду в туберкулезную лабораторию отделения MRC в Гамбии в течение 24 часов после сбора.

Перед отбором для метагеномного исследования аликвоту каждого образца подвергали микробиологическому анализу. Эти образцы были обеззаражены гидроксидом натрия и методом N -ацетил-1-цистеина (NaOH / NALC) с конечной концентрацией 1% для NaOH, 1.45% цитрата натрия и 0,25% для NALC. Мазки мокроты готовили путем центрифугирования 3–10 мл очищенной мокроты с последующим ресуспендированием осадка в 2 мл буфера. Мазки окрашивали аурамином-О, а затем исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии. Положительные мазки подтверждены окрашиванием по Цилю-Нильсену. 20–100 полей были исследованы при 1000-кратном увеличении, и образцы с положительным мазком были оценены количественно как 1 +, 2 + или 3 + (Kent & Kubica, 1985). Присутствие M. tuberculosis complex в образцах было подтверждено посевом в система обнаружения микобактерий BACTEC MGIT 960 и на склонах среды Левенштейна – Йенсена.Культивированные изоляты подвергали сполиготипированию, как описано ранее (Kamerbeek et al., 1997; de Jong et al., 2009).

Извлечение ДНК с использованием дифференциального лизиса

Экстракция ДНК

была проведена в туберкулезной лаборатории отделения MRC в Гамбии. Аликвоты необработанной мокроты были подвергнуты протоколу дифференциального лизиса, измененному по сравнению с опубликованным методом метагеномного анализа мокроты от пациентов с муковисцидозом (Lim et al., 2013). В этом методе клетки человека подвергаются осмотическому лизису, а затем высвободившаяся ДНК человека удаляется обработкой ДНКазой.Чтобы контролировать загрязнение в лаборатории, мы обработали два отрицательных контрольных образца, содержащих только стерильную воду, тем же методом.

В начале протокола дифференциального лизиса аликвоту цельной мокроты объемом 1 мл смешивали с 1 мл раствора противоотечного средства (0,25 г N-ацетил-L-цистеина, 25 мл 2,9% цитрата натрия, 25 мл воды) до разжижения и инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли 48 мл фосфатно-буферного раствора (pH 7) и тщательно перемешивали перед центрифугированием при 3220 × g в течение 20 мин.Осадок ресуспендировали в 10 мл стерильной деионизированной воды и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин, чтобы клетки человека подверглись осмотическому лизису, в то время как клетки микобактерий остались нетронутыми. Стадии центрифугирования и ресуспендирования в воде повторяли перед последним циклом центрифугирования. Затем осадок обрабатывали набором ДНКазы, свободной от РНКазы (Qiagen), добавляя 25 мкл ДНКазы I (2,73 единицы Кунитца на мкл), 100 мкл буфера RDD и 875 мкл стерильной воды. Затем образец инкубировали при комнатной температуре в течение 2 ч с повторным переворачиванием пробирок.Образец подвергали двум циклам центрифугирования и ресуспендированию осадка в 10 мл буфера ТЕ (0,01 М трис-HCl, 0,001 М ЭДТА, pH 8,0). Наконец, перед началом экстракции ДНК образец центрифугировали и осадок ресуспендировали в 500 мкл ТЕ-буфера. По завершении протокола дифференциального лизиса образцы подвергали термообработке при 75 ° C в течение 10 минут с последующей экстракцией ДНК с использованием коммерческого набора NucleoSpin Tissue-Kit (Macherey-Nagel, Duren, Германия) в соответствии с протоколом производителя для трудно лизируемые бактерии.

Подготовка библиотеки и секвенирование

образца ДНК были отправлены в медицинскую школу Warwick, Ковентри, Великобритания, где были выполнены все дальнейшие лабораторные и биоинформатические анализы. Концентрацию ДНК, присутствующую в каждом экстракте, определяли с использованием флуорометра Qubit 2.0 и набора для анализа дцДНК Qubit ^® в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen Ltd., Пейсли, Великобритания), используя HS (высокая чувствительность) или BR ( широкий спектр) в зависимости от концентрации ДНК.Не было обнаружено ДНК в образцах отрицательного контроля с набором HS, который чувствителен до 10 пг / мкл. Экстракты ДНК разбавляли до 0,2 нг / мкл и затем преобразовывали в библиотеки для секвенирования с использованием набора для подготовки образцов Illumina Nextera XT в соответствии с инструкциями производителя (Illumina UK, Little Chesterford, United Kingdom). Секвенирование библиотек проводили на Illumina MiSeq в Университете Уорика.

Идентификация последовательностей человека и микобактерий

Считывание последовательностей

было картировано против генома Mycobacterium tuberculosis h47Rv (номера доступа в GenBank AL123456) и эталонного генома человека hg19 (идентификатор сборки GenBank: GCA_000001405.1), используя Bowtie2 версии 2.1.0 (Langmead & Salzberg, 2012), используя упрощенные и строгие протоколы. В упрощенном протоколе используется опция —very-sensitive-local. Строгий протокол допускал только ограниченное несоответствие (3 на 100 пар оснований) и мягкое обрезание концов низкого качества, используя параметры —ignore-quals —mp 10,10 —score-min L, 0,0.725 —local —ma 1. Для преобразования данных покрытия из файлов BAM в формат с разделением табуляцией использовался специально созданный сценарий, который затем вводился в Microsoft Excel, который затем использовался для создания графиков покрытия.Считывания метагеномных последовательностей из этого исследования (за исключением тех, которые картированы в геноме человека) были депонированы в Европейском нуклеотидном архиве под следующими номерами доступа: ERS542292, ERS542293, ERS542294, ERS542295, ERS542296, ERS542297, ERS542298, ERS542299.

Отнесение видов и клонов с использованием SNP с низким охватом

Для филогенетического анализа с использованием SNP были отобраны репрезентативные геномы каждого вида и основных линий в пределах M.tuberculosis , которые инфицируют людей, основываясь на обозначениях клонов, сообщенных PolyTB (Coll et al., 2014). Последовательности генома были взяты из записей в архиве краткого чтения ERP000276 и ERP000124 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Traces/sra/). Затем мы сопоставили эти геномы против M. tuberculosis, h47Rv с Bowtie2 при настройках по умолчанию, а затем вызвали SNP с помощью VarScan2 (Koboldt et al., 2012). Любые SNP, которые попадали в набор ранее опубликованных повторяющихся генов, были исключены из дальнейшего анализа (Comas et al., 2010). SNP использовались для построения дерева с RAxML версии 7 (Stamatakis, 2014), используя параметры по умолчанию с моделью GTR-gamma. Считывания из метагенома из каждого образца были сопоставлены с эталонным штаммом M. tuberculosis h47Rv, используя настройки по умолчанию в Bowtie2 и основание большинства, вызываемое из каждой позиции SNP без качественной фильтрации. Если в позиции не было базы, использовался разрыв. Затем использовали набор программ pplacer (Matsen, Kodner & Armbrust, 2010) для присвоения последовательности вида и линии на дереве микобактерий.

Присвоение происхождения с использованием IS 6110 — профили сайтов для вставки

Мы сопоставили каждый метагеном с последовательностью IS 6110 (инвентарный номер Genbank: AJ242908), используя параметр Bowtie —local, который выполняет мягкое вырезание отображаемых последовательностей. Затем мы извлекли фланкирующие последовательности IS6110 путем извлечения всех последовательностей размером> 30 п.н., которые были мягко вырезаны с концов элемента. Затем эти последовательности были картированы против генома h47Rv с использованием Bowtie2 и определены координаты точек вставки IS 6110 .

Результаты

Обнаружение комплекса M. tuberculosis в образцах мокроты

Мы получили метагеномные последовательности из восьми образцов мокроты, положительных по мазку и культуре. Количество считываний последовательностей в каждом метагеноме мокроты варьировалось от 989 442 до 2 818 238 (таблица 1). Доля считываний из каждого картирования образца в референсный геном человека hg19 варьировала от 20% до 99%.

Таблица 1:

Характеристики образцов и результаты секвенирования.

Образец	ЗН марка	Концентрация ДНК в экстракте (мкг / мл)	Общее количество читает	% считываний, совпадающих с геномом человека
К1	3+	27.8	989 442	73,71
К2	3+	2,28	2,170,640	78,46
К3	2+	71	1 617 808	99,3
К4	2+	250	1 204 408	97.22
K5	2+	7,7	1 537 676	74,17
К6	2+	48,8	2 411 708	97,47
К7	1+	25	2 818 238	50.59
K8	1+	0,63	1 851 892	20,29

DOI: 10.7717 / peerj.585 / table-1

Покрытие при картировании считываний на геном эталонного штамма M. tuberculosis h47Rv в расслабленных условиях варьировалось от 0,009X до 1,3X (таблица 2). Однако мы подозревали, что многие из совпадений были ложноположительными.Чтобы подтвердить наши подозрения, мы вычислили среднюю глубину чтения в позициях, где чтения совпали.

Таблица 2:

Сопоставление с эталонным геномом M. tuberculosis h47Rv.

Образец	В спокойных условиях картирования			При строгих условиях картографирования
	Основания центрирующие на h47Rv	Покрытие х47Рв	Среднее чтение глубина	Основания центрирующие на h47Rv	Покрытие х47Рв	Средняя глубина чтения
К1	410 228	0.093	2,2	141 906	0,032	1,3
К2	5 685 901	1,289	2,3	3 057 187	0,693	1,9
К3	99 643	0.023	1,3	54 413	0,012	1,2
К4	40 019	0,009	1,9	10 840	0,002	1,3
K5	732 623	0.166	2,5	238 451	0,054	1,3
К6	94 023	0,021	2,3	34 704	0,008	1,7
К7	1,366,309	0.310	11,4	50 873	0,012	1,5
K8	1,725,816	0,391	7,7	109 514	0,025	1,3

DOI: 10.7717 / peerj.585 / таблица-2

Если совпадения произошли из-за идентичности последовательностей с консервативными генами других видов, можно было бы ожидать, что будет несколько чтений, соответствующих каждой отображаемой позиции, тогда как для библиотеки дробовика, где охват меньше 1X, можно было бы ожидать, что средняя глубина чтения составит быть около 1.Однако, поскольку мы создали наши библиотеки последовательностей с использованием протокола парных концов, будет наблюдаться различное перекрытие между чтениями, происходящими из одного и того же фрагмента ДНК, поэтому можно было бы ожидать, что средняя глубина чтения для настоящего случайного ружья в этих условиях будет находиться в пределах от 1 до 2. Однако, когда картирование выполнялось в расслабленных условиях, средняя глубина считывания была> 2 в шести из восьми образцов и в двух случаях была> 7 (Таблица 2), что указывает на основной вклад ложных совпадений в консервативные гены.

Чтобы ограничить совпадения генома h47Rv подлинным выравниванием на мишени, мы затем сопоставили каждый метагеном с эталонным штаммом в условиях высокой строгости (≤ 3 несовпадений на 100 пар оснований, с мягким обрезанием концов низкого качества). Это привело к уменьшению сопоставления считываний с h47Rv во всех образцах с охватом h47Rv при строгих настройках в диапазоне от 0,002X до 0,7X. Тем не менее, мы извлекли от ~ 11000 до 3 миллионов пар оснований последовательности M. tuberculosis из наших образцов в таких жестких условиях (таблица 2).Средняя глубина считывания образцов упала до 1,2–1,9, что соответствует ожиданиям для случайного ружья (таблица 2).

Филогенетическое размещение штаммов M. tuberculosis с использованием SNP

Обычные филогенетические методы, основанные на идентификации надежных SNP, не могут быть применены к типам последовательностей генома с низким охватом, которые мы получили здесь. Однако метод «филогенетического размещения» предлагает альтернативное решение (Matsen, Kodner & Armbrust, 2010; Kay et al., 2014). Здесь используется фиксированное справочное дерево, вычисленное из геномов с высоким охватом, и помещается неизвестная последовательность запросов на дерево с помощью таких программ, как pplacer (Matsen, Kodner & Armbrust, 2010). Чтобы выполнить филогенетическое размещение на наших образцах, мы получили набор филогенетически информативных SNP от представителей основных линий в пределах комплекса M. tuberculosis . Затем мы проанализировали чтения из каждого метагенома мокроты, которые выровнялись по эквивалентным положениям в геноме h47Rv.

Используя этот подход, несмотря на низкий охват, мы могли уверенно отнести (с апостериорной вероятностью> 0,97) все микобактериальные геномы, полученные из метагенома, к виду и линии в пределах комплекса M. tuberculosis (рис. 1). Во всех этих случаях выводы метагеномики совпадали с выводами сполиготипирования культивируемых изолятов (таблица 3). Для двух образцов (K3, K5) геном, полученный из метагенома, был отнесен к M. africanum clade 2, что согласуется с известной высокой распространенностью этой линии в Гамбии (de Jong et al., 2010). Пять образцов были отнесены к евро-американской линии (также называемой Lineage 4), которая находится в кладе современных штаммов M. tuberculosis и, как известно, широко распространена в Гамбии (de Jong et al., 2010) . Филогенетическое размещение позволило отнести три из этих образцов к суб-линии H, один — к T-кладе, а один — к кладе LAM.

Рисунок 1: Дерево максимального правдоподобия, показывающее размещение геномов, полученных из метагенома микобактерий, среди основных ветвей и клад в пределах M.tuberculosis комплекс.

Обнаружение и характеристика Mycobacterium tuberculosis в образцах мокроты с использованием метагеномики дробовика. Показаны по два представителя от каждой линии / клад. Дерево рассчитано с использованием RaXML и укоренено с помощью M. canetti (не показано). Таблица 3:

Виды и родословные по филогенетическому расположению и сполиготипированию.

Образец	Филогенетическое размещение с помощью pplacer		Сполиготипирование
	Вид, происхождение, клад	Апостериорная вероятность	Lineage	Сполиготип
К1	М.tuberculosis Евро-Американский / Происхождение 4 LAM clade	1	евро-американец	1101111111110111111100001111111100001111011
К2	M. tuberculosis Европейско-американский / Происхождение 4 H clade	1	евро-американец	11111111111111111111111111110100001111111
К3	М.africanum Lineage 6 M. africanum clade 2	1	Западная Африка 2	1111110001111111111000001000011111111101111
К4	M. tuberculosis Европейско-американский / Происхождение 4 H clade	0,99	евро-американец	11111111111111111111111111110100001111111
K5	М.africanum Lineage 6 M. africanum clade 2	1	Западная Африка 2	11111100011111111111111111111111111101111
К6	Не определено		Западная Африка 2	11111100011111111111111111111111111101111
К7	М.tuberculosis евро-американский / Lineage 4 H clade	0,97	евро-американец	11111111111111111111111111110100001111111
K8	M. tuberculosis Евроамериканский / Происхождение 4 T clade	1	евро-американец	1111110000000000000000000111111100001111111

DOI: 10.7717 / peerj.585 / таблица-3

Определение видов и линий с использованием IS 6110 сайтов вставки

Из четырех выборок мы смогли получить информацию о сайтах вставки IS 6110 (Таблица 4). В двух из трех образцов (K2, K4), отнесенных к кладе H филогенетическим расположением, мы обнаружили сайты вставки IS 6110 , которые ранее сообщались как специфические для клады Harlem или H (HSI1, HSI2, HSI3), тем самым подтверждая принадлежность к клонам на основе SNP (Cubillos-Ruiz et al., 2010). В образце, относящемся к кладе LAM, мы получили информацию об одном сайте вставки IS6110 , который нарушает кодирующую последовательность Rv3113. Сообщается, что эта вставка специфична для клады LAM (Lanzas et al., 2013), что снова подтверждает принадлежность клонов на основе SNP. В одном из двух образцов, отнесенных к M. africanum , мы получили информацию об одном сайте вставки IS6110. Однако эта вставка, по-видимому, отсутствовала во всех других доступных штаммах с секвенированием генома из M.tuberculosis комплекс, поэтому был филогенетически малоинформативен.

Таблица 4:

IS 6110 профилей.

Образец	Нет. Означает сопоставление с IS 6110	Количество считываний, охватывающих IS 6110 место вставки	IS 6110 Координаты места установки	Комментарии
К1	11	1	3480371	Специально для клады LAM
К2	199	22	2610861 (HSI1), 1075947–1075950 (HSI2), 1715974 (HSI3). 212132–212135, 483295–483298, 888787, 1695606, 1986622–1986625, 3120523	HSI1, HSI2, HSI3 для класса H:
К3	2	0	Не определено
К4	6	2	2610861–2610864 (HSI1)	HSI1, специфичный для H клады
K5	4	1	2631765	Уникальный такой неинформативный
К6	0	0	Не определено
К7	2	0	Не определено
K8	5	0	Не определено

DOI: 10.7717 / peerj.585 / таблица-4

Обсуждение

Здесь мы представили доказательство принципа того, что метагеномика дробовика может быть использована для обнаружения и характеристики последовательностей M. tuberculosis из образцов мокроты без культивирования или целевой амплификации или захвата, с использованием доступной настольной платформы для секвенирования Illumina MiSeq, и относительно простые протоколы выделения ДНК, секвенирования и биоинформатики.

Метагеномика как метод диагностики туберкулеза легких имеет несколько доказанных или потенциальных преимуществ.Обходя потребность в культуре, он может предоставлять информацию быстрее, чем традиционные подходы. Даже в этом исследовании, подтверждающем принцип действия, для большинства образцов была предоставлена ​​более подробная информация, чем при использовании традиционных подходов, включая сполиготипирование. Кроме того, он представляет собой открытый универсальный подход, который может позволить воссоединить микробиологию ТБ с другой микробиологией мокроты, особенно потому, что уже было показано, что метагеномика воздействует на другие патогены дыхательных путей, включая бактерии и вирусы ( Lysholm et al., 2012; Fischer et al., 2014). Он также помогает обнаруживать смешанные инфекции (Chan et al., 2013; Koser et al., 2013), которые имеют клиническое значение, но трудно распознать (Shamputa et al., 2004; Warren et al., 2004; Cohen et al., 2011; Wang et al., 2011; Hingley-Wilson et al., 2013).

Тем не менее, в настоящее время существует несколько важных ограничений метагеномики как диагностического подхода. Наше исследование было ограничено исследованием образцов мокроты с положительным мазком, когда диагноз уже можно быстро и легко получить с помощью микроскопии; Вероятно, потребуется значительное улучшение чувствительности, прежде чем метагеномика сможет работать с отрицательными мазками и положительными образцами.Однако следует подчеркнуть, что случаи с положительным мазком мокроты являются наиболее важными случаями ТБ с точки зрения инфекционности и тяжести заболевания, и быстрая, точная диагностика и эпидемиологическое исследование таких образцов могут помочь в борьбе с ТБ (Shaw & Wynn-Williams, 1954 ; Colebunders & Bastian, 2000; Wang et al., 2008). Кроме того, для всех наших образцов метагеномика выходит за рамки простого обнаружения кислотоустойчивых бацилл и предоставляет клинически важную информацию на уровне видов и происхождения в пределах M.tuberculosis комплекс.

Удивительно, но метагеномика не оказалась настолько информативной в применении к современным образцам мокроты, как к историческим образцам, из которых мы получили гораздо больший охват геномов патогенов, что позволило распознать филогенетически информативные полиморфизмы больших последовательностей (Chan et al., 2013; Kay et al., 2014). Более того, в наших руках метагеномика мокроты еще не обеспечивает достаточной глубины охвата геномов ТБ, чтобы обеспечить точный вызов SNP, необходимый для тестирования чувствительности на основе последовательностей.Остается неясным, может ли быть увеличена глубина охвата только за счет уточнения протоколов экстракции ДНК или, возможно, придется пожертвовать скоростью, простотой и открытостью метагеномики дробовика путем включения амплификации микобактериальной ДНК или клеток (т. Е. Путем культивирования в пробирках MGIT (Koser et al., 2013)) или путем захвата микобактериальных клеток или ДНК (Sweeney et al., 2006; Bouwman et al., 2012; Schuenemann et al., 2013).

Некоторые утверждали, что метагеномика слишком дорога для рутинного использования (Köser, Ellington & Peacock, 2014).Однако несколько лет назад то же самое касалось секвенирования всего генома; в этом исследовании затраты на реагенты составили <50 фунтов стерлингов за образец. Кроме того, с небольшими изменениями мы ожидаем, что извлечение ДНК может быть завершено через несколько часов после получения образца мокроты, а также секвенирования и анализа в течение нескольких дней. Кроме того, теперь, когда культивируемые изоляты ТБ регулярно секвенируются во многих лабораториях (Koser et al., 2012; Kohl et al., 2014), каталог местных геномов ТБ будет доступен для сравнения с геномами, полученными из метагенома, облегчение эпидемиологического анализа

С вероятными будущими улучшениями в простоте, пропускной способности и рентабельности секвенирования, в сочетании с коммодитизацией лабораторных и информационных рабочих процессов, можно предвидеть переломный момент, когда единый автоматизированный рабочий процесс, основанный на метагеномике, может начать конкурировать с множеством современных методов. используется в диагностической микробиологической лаборатории, а также предоставляет дополнительную полезную информацию по эпидемиологии, устойчивости к противомикробным препаратам и биологии патогенов.

Дополнительная информация

Обнаружение и характеристика Mycobacterium tuberculosis в образцах мокроты с использованием метагеномики дробовика. Детальное филогенетическое размещение геномов, полученных из метагенома

Для каждой выборки основные базы в каждой позиции эталонного SNP (или пробелы, если в этой позиции не было покрытия) были объединены, и последовательность была помещена в эталонное дерево с помощью pplacer (см. Методы). Выходные данные pplacer (файл jplace) были проанализированы, и был создан новый файл, так что каждое альтернативное размещение для образца можно было отобразить в дереве вместе с апостериорной вероятностью этого размещения.Деревья были сгенерированы из измененного файла места с использованием гуппи из набора программ pplacer. Показаны только 3 лучших места размещения для каждого образца. Комбинированные значения pp для каждого альтернативного размещения образца в кладе использовались, чтобы установить вероятность того, что образец принадлежит к этой кладе.

DOI: 10.7717 / peerj.585 / supp-1

Клинико-патологические наборы и диагностические проблемы

Клинико-патологические проявления кожного туберкулеза разнообразны.Точный диагноз часто упускается из виду из-за клинических проявлений кожных заболеваний различной этиологии и относительной малочисленности патогенов в очагах поражения. Между тем, почти все диагностические методы обладают меньшей чувствительностью и специфичностью, что усложняет диагностику. В этой статье пересматривается текущий сценарий физиопатологии заболевания и подчеркиваются клинико-патологические проблемы, связанные с многогранными проявлениями кожного туберкулеза при диагностике.

1. Общие сведения

Кожный туберкулез — относительно редкое явление, составляющее 1–1,5% всех внелегочных проявлений туберкулеза, которое проявляется только в 8,4–13,7% всех случаев туберкулеза [1]. Несмотря на то, что это встречается редко, учитывая его глобальную распространенность, клиницистам необходимо различать многие клинические варианты кожного туберкулеза и маскарадных инфекций — гранулематозный сифилис, дискоидную красную волчанку, псориаз, туберкулоидную лепру, саркоидоз, актиномикоз, мицетому и бактериальные инфекции. другие кожные инфекции — для исключения пропущенной или поздней диагностики [2, 3].Большинство методов диагностики кожного туберкулеза обладают меньшей чувствительностью и специфичностью. Следовательно, врачи должны прибегать ко всем возможным испытаниям наряду с широким клиническим рассмотрением; следовательно, суммирование положительных зачатков было бы вспомогательным в точном диагнозе.

2. Эпидемиология

Туберкулез представляет собой серьезную проблему общественного здравоохранения в Юго-Восточной Азии, поскольку большая часть (45%) от общего числа предполагаемых 10,4 миллионов случаев инфицирования была зарегистрирована в регионе [4].При составлении данных об уровне смертности на Юго-Восточный регион и регионы Африки приходилось 85% от общего числа смертей от туберкулеза [4]. ТБ занимает 6-е место среди причин смерти в Непале [5]. Исследование распространенности не проводилось в Непале из-за бесстрастного участия правительства в секторе здравоохранения; однако ежегодно в НПТ сообщалось о 34 122 случаях туберкулеза [6].

Туберкулез является эндемическим заболеванием в Непале; Однако сообщалось об ограниченных случаях кожного туберкулеза. Заболеваемость туберкулезом кожи в Центральном Непале была равна 0.1%; Тем не менее, точные данные о заболеваемости по стране остаются анонимными. Клиникоэпидемиологическое исследование, проведенное в Непале Dwari et al. 2010 г. выявлен бородавчатый туберкулез (48%) как преобладающий клинический тип [7]; однако, если судить по более ранним исследованиям, наиболее распространенной волчанкой была обыкновенная волчанка (64%), за ней следуют туберкулез бородавки (19%) и папулонекротический туберкулез (4%) [8]. По иронии судьбы, случаи кожного туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ), резистентного как минимум к двум наиболее мощным противотуберкулезным препаратам первого ряда, изониазиду и рифампицину, и ШЛУ-ТБ — штаммам МЛУ, устойчивым к фторхинолонам, плюс один из инъекционные препараты, такие как канамицин, амикацин и капреомицин, также поступали из Индии и Китая, граничащих с Непалом [9–11].Тем не менее, точная эпидемиологическая сущность возможных случаев заболевания туберкулезом кожи с МЛУ / ШЛУ до сих пор не известна или не сообщается из Непала.

3. Этиологический агент

Основным этиологическим возбудителем кожного туберкулеза является Mycobacterium tuberculosis — иногда M. bovis или вакцина БЦЖ (аттенуированный штамм M. bovis ) [12, 13].

Mycobacterium tuberculosis — это прямая или слегка изогнутая (палочковидная), неподвижная, не спорулированная палочка, имеющая длину от 1 до 10 мкм, длина м и 0.От 2 до 0,6 мкм шириной м; его наиболее важная особенность — кислотостойкость из-за высокого содержания липидов в клеточной стенке. Приблизительно насчитывается 4000 генов, большинство из которых участвует в механизме инвазии иммунной системы, а 200 — в метаболизме липидов; следовательно, патоген способен выживать как внутри, так и вне фагоцитарных клеток [14]. Между тем, поскольку липиды являются основным источником энергии для Mycobacterium tuberculosis , патоген непосредственно отвечает за размножение в ткани хозяина и формирование клеточных стенок [14, 15].

4. Путь заражения

Кожный туберкулез может быть получен в результате гематогенного или лимфатического распространения легочного очага или путем прямого заражения. Однако решающим фактором для клинических проявлений до контакта с бациллами является естественный иммунный ответ хозяина.

Экзогенная инфекция возникает при прямом заражении бацилл кожей предрасположенных людей (туберкулезный шанкр, туберкулез бородавчатой ​​кожи) [1].

Эндогенная инфекция является вторичной по отношению к ранее существовавшему первичному очагу и может быть результатом смежного (исходный туберкулез, скрофулодермия), гематогенного (острый милиарный туберкулез, туберкулезная гумма и вульгарная волчанка) или лимфатической диссеминации (волчанка обыкновенная) [2, 16].

5. Классификация кожного туберкулеза на основе нагрузки патогенов

На основе нагрузки патогенов на кожу вариант туберкулеза можно разделить на две большие категории.

Мультибациллярные формы (легко обнаруживаемые в кожной ткани) включают туберкулезный шанкр, скрофулодермию, возбудитель туберкулеза, острый милиарный туберкулез и туберкулезную гумму [17, 18].

Паучибациллярные формы (редкие бациллы) включают туберкулез бородавчатой ​​кожи, туберкулоид и обыкновенную волчанку [17, 18].

6. Клинические проявления туберкулеза кожи

Туберкулез кожи проявляет разнообразные клинические проявления: воспалительные папулы, бородавки, гнойные узелки, хронические язвы и другие атипичные поражения [19].

7. Экзогенный туберкулез кожи

7.1. Tuberculosis Chancre

Прямые прививки Mtb на коже после травм или хирургических вмешательств, выполненных с нестерилизованными материалами, и даже после татуировок или пирсинга тела, приводят к приобретенному туберкулезному шанку.Развиваясь из твердой, безболезненной, красновато-коричневой, медленно растущей папулы или узелка, через 2–4 недели она перерастает в рыхлые язвы со склонностью к кровотечению с гранулированной поверхностью [20]. Кроме того, бациллы распространяются через лимфатические узлы в регионарные лимфатические узлы.

Предположительная идентификация может быть сделана с помощью гистопатологических исследований, при которых обычно отмечается острая нейтрофильная воспалительная реакция, выраженная в КУБ и некротических областях [16]. Последовательно очаг поражения приобретает гранулематозную форму с увеличенными гигантскими клетками через 3–6 недель с уменьшенным количеством бацилл [20].

7.2. Tuberculosis Verrucosa Cutis

Tuberculosis verrucosa cutis, обычная экзогенная форма туберкулеза, чаще встречается у анатомов, врачей и босоногих детей из тропических зон, поскольку инфекция распространяется через поврежденный кожный слой [1]. Поражения — одиночные, безболезненные и без аденопатии — чаще наблюдаются на конечностях, предрасположенных к травмам [16]. Поражения превращаются в эритематозные папулы в бородавки с периферическим распространением.

8.Эндогенный туберкулез

8.1. Скрофулодермия

Скрофулодермия, также называемая колликвативной кутисом, является распространенной формой кожного туберкулеза; он является результатом прямого распространения основного туберкулезного поражения в лимфатический узел, кость, суставы или яички [1, 2]. Часто поражаются шея, подмышечные впадины и пах, при этом шейные лимфатические узлы являются частым источником инфекции [1]. Ранние поражения выглядят как твердые, безболезненные, подкожные и красно-коричневые узелки, которые переходят в язвы и отделяют пазухи [21].Может произойти самопроизвольное заживление с оставлением келоидных рубцов, ретракций и атрофических последствий [21].

8.2. Восточный туберкулез

Восточный туберкулез — очень редкая форма кожного туберкулеза — клинически характеризуется изъязвлениями на слизисто-кожных отверстиях, включая ротовую полость, нос, перианальную область, гениталии и прилегающую кожу, обычно распространенная форма туберкулеза легких, кишечника или мочеполовых органов [22 ]. Поражения диаметром от 1 до 3 см выглядят как рыхлые болезненные папулы и узелки от эритематозного до желтоватого цвета, которые могут переходить в болезненные язвы [16].В перилезной ткани очевидны отек и воспаление.

8.3. Волчанка обыкновенная,

Волчанка обыкновенная — наиболее частая форма кожного туберкулеза в Европе, Индии и Непале [8, 13, 16]. Это хроническая, прогрессирующая, малобациллярная форма кожного туберкулеза, которая возникает в первую очередь у ранее сенсибилизированных лиц [23, 24]. Инфекция происходит эндогенно лимфогематогенным путем, а иногда и экзогенным путем — с дренажным рубцом скрофулодермии [25].

Наиболее типичным клиническим признаком обыкновенной волчанки является папулотуберкулезное поражение, обычно на ногах и ягодицах, которое в конечном итоге сливается в бляшку (рис. 1, 2 (а) и 2 (b)) [12]. Бляшки разрастаются по периферии, с серпигинозными или бородавчатыми краями, что сопровождается обесцвечиванием и атрофией в центре [25]. Кроме того, классический вид описывается как «узелки яблочного желе», наблюдаемые при диаскопии [24, 26].

8.4. Туберкулезная гумма

Туберкулезная гумма, также известная как метастатический туберкулезный абсцесс, является результатом гематогенного распространения микобактерий из первичного очага, особенно в иммунокомпрометированном хозяине, но вряд ли в иммунокомпетентном хозяине [17, 27].Клинически это может иметь сходство со скрофулодермией; В туберкулезной десне наблюдается небольшое количество поражений туловища и конечностей с непоследовательными подкожными узелками, имеющими тенденцию к изъязвлению и оттоку казеозного секрета [23].

8,5. Острый милиарный туберкулез

Это редкое проявление кожного туберкулеза, преимущественно у хозяина с тяжелым иммунодефицитом, демонстрирующее анергию. Основная масса случаев увеличивалась в основном из-за коинфекции ВИЧ со снижением количества CD4 ниже 100 клеток / мк л [28].Клинически можно заметить разнообразные кожные поражения — эритему и эритематозно-беловатые или эритематозно-пурпурные папулы, которые позже разрываются, образуя пупок и корку, оставляя гипохромные рубцы [17].

9. Туберкулиды

Туберкулиды — острые или хронические кожные формы туберкулеза, проявляющиеся в различных клинических формах, имеющие склонность к гиперергическим проявлениям, активному туберкулезу или диссеминированным формам [20]. Дискретная взаимосвязь между туберкулидами и туберкулезом продолжает обсуждаться, потому что клинические формы обычно имеют симметричное распределение, туберкулезное поражение (обычно неактивное) внутренних органов или лимфатических узлов и отсутствие AFB (низкая положительность посева и ПЦР) в поражениях [ 16, 26].

9.1. Папулонекротические туберкулиды

Папулонекротические туберкулиды — часто наблюдаемая кожная форма у детей и молодых людей [29]. Они выглядят как безболезненные, симметричные эритематозные или фиолетовые папулонодулярные поражения, особенно вокруг лица, ушей, разгибательных областей туловища, конечностей и ягодиц, оставляя вдавленный рубец [26].

9.2. Lichen Scrofulosorum

Lichen scrofulosorum — это высыпание множественных, небольших, сгруппированных, бессимптомных, твердых, перифолликулярных, лихеноидных папул или бляшек, часто поражающих детей и взрослых с основными заболеваниями костей и лимфатических узлов [16, 26].Дерматоз не оставляет шрамов спустя месяцы или годы. Возникновение этого туберкулида предполагалось после вакцинации БЦЖ и у пациента, инфицированного M. avium-intracellulare [30].

9.3. Индуративная эритема Базена

Индуративная эритема Базина — гранулематозный лобулярный панникулит, который проявляется в виде подкожных узелков эритематозно-пурпурного цвета, обычно на ногах и бедрах [26]. Узелки продвигаются на несколько сантиметров в диаметре, образуя глубокие язвы с казеозными выделениями и оставляя пигментный рубец без или после успешного лечения.Однако рецидив может происходить в виде обострений каждые 3-4 месяца с аналогичными клиническими проявлениями [1]. Кроме того, тенденция коинфекции с системными заболеваниями, такими как саркоидоз, является дифференциальным клиническим диагнозом узловатой эритемы [16, 21].

10. Диагностика туберкулеза кожи

10.1. Дифференциальный диагноз

Точный диагноз часто значительно откладывается и откладывается, поскольку кожный туберкулез обычно не рассматривается при дифференциальной диагностике из-за относительной малочисленности патогенов в поражениях и различных клинических проявлений (таблица 1) [2, 16, 19, 31 –33].Следовательно, дифференциальный диагноз является обязательным для успешного клинического ведения и лечения.

кожный кожный туберкулез кожно-фиброзная 9 , венерическая лимфогранулема, бактериальные абсцессы, метастазы опухоли, гистиоцитоз и гидраденит карцинома базисных клеток Вульгарная волчанка , дискоидная красная волчанка, проказа, глубокие грибковые инфекции пиларис (PRP82) и микропаптериоз пиларис (PRP82) nodosum, кожный полиартериит, панкреатический панникулит, глубокая волчанка, подкожный саркоидоз и кожная Т-клеточная лимфома S. N Классификация кожного туберкулеза Диагностические соображения 1 1 споротрихоз, лейшманиоз, атипичный микобактериоз, сифилис, болезнь кошачьих царапин и туляремия Tuberculosis verrucosa cutis паракокцидиоидомикоз, лейшманиоз, споротрихоз, туберкулезный веррукозомикоз.Лобомикоз, атипичный микобактериоз, гипертрофический плоский лишай, бородавчатая карцинома, йододермия, бромодермия, обыкновенная бородавка, кератоакантома центрифуга и вегетарианская пиодермия 82 82 9008 82 2 Восточный туберкулез буллезные болезни, травмы, грибковые заболевания, сифилис, саркоидоз или плоскоклеточная карцинома Туберкулезная гумма лейшмания, споротрихоз, нокардиоз, атипичные микобактерии ( Mycobacterium marinum ), гнойные инфекции (90oc446 Staphylocus , Streptococcus ) и глубокие грибковые инфекции Острый милиарный туберкулез метастатические карциномы 3 Туберкулиды Папулонекротический туберкулезный туберкулез лишайник pity лейкоцитокластический некротический васкулит, зуд и вторичный сифилис Lichen scrofulosorum красный плоский лишай и нитидный лишай, сифилидные лихеноиды, экзематид, волосяной кератоз, красный питириоз

10.2. Лабораторная диагностика

10.2.1. Туберкулиновый кожный тест

Этот метод включает инъекцию 0,1 мл туберкулина, очищенных производных белка (PPD), полученных из ослабленного штамма M. tuberculosis , внутрикожно и считывание результатов через 48-72 часа; при положительной интерпретации диаметр уплотнения превышает размер на 10 мм. Эта реакция является классическим примером реакции гиперчувствительности замедленного типа, когда сенсибилизированные Т-клетки, вызванные предшествующей инфекцией, рекрутируются, высвобождая лимфокин [34].Эти лимфокины вызывают уплотнения за счет локальной вазодилатации, отека, отложения фибрина и привлечения других воспалительных клеток в эту область [34, 35]. TST имеет чувствительность от 33% до 96% и специфичность 62,5% с порогом 10 мм для кожного туберкулеза; однако чувствительность превышает 97% у невакцинированного населения [36, 37].

Кроме того, при отдельном анализе клинических форм кожного туберкулеза, положительность, интенсивность туберкулиновой кожной пробы также расходятся (таблица 2).В конце концов, ни положительный результат ТКП обязательно указывает на активную инфекцию, ни отрицательный результат ТКП не исключает сохранение инфекции.

кожный милиарный туберкулез 9 0081 Клинические формы туберкулеза кожи Результат кожного туберкулинового теста Туберкулез шанкре первоначально становится отрицательным при течении болезни (обычно через 15 дней) Tuberculosis verrucosa сильно положительный Lupus vulgaris обычно положительный Скрофулодермия сильно положительный Восточный туберкулез отрицательный отрицательный Папулонекротический туберкулоид положительный Lichen scrofulosorum положительный Индуративная эритема Базина положительный

10.2.2. Иммунологические тесты (анализ высвобождения гамма-интерферона)

Одобренные FDA иммунологические тесты, QuantiFERON и EliSpot, оценивают сенсибилизацию к M. tuberculosis путем измерения количества гамма-интерферона, выделяемого лимфоцитами, противостоящими M. tuberculosis специфическим антигенам. 16]. Чувствительность и специфичность QuantiFERON составляют 89% и 99% соответственно, в то время как EliSpot имеет чувствительность 98,8% и специфичность 100% [38]. В отличие от туберкулиновой кожной пробы (ТКП), он выявляет заболевание у пациентов, вакцинированных против БЦЖ (скрытой инфекции), а также активной инфекции.

Эти тесты до сих пор не входят в повседневную практику в нашей среде из-за высокой стоимости и трудоемкой процедуры экстракции клеток от культуры до подготовки антигена (особенно в EliSpot).

10.2.3. Гистопатология

Гистопатология биопсии кожи показывает гранулематозные проявления, как и при кожных заболеваниях различной этиологии — кожный лейшманиоз, туберкулезная проказа, поверхностная гранулематозная пиодермия, кожный саркоидоз, диссеминированная волчанка, 35, хромомикоз [16].Между тем, точное определение диагноза туберкулеза кожи сделать не удалось; однако характерный признак (хорошо сформированные гранулемы без казеозного некроза, гранулемы с казеозным некрозом и наличие плохо сформированных гранулем с интенсивным казеозным некрозом) может быть вспомогательным для дифференциации типов кожного туберкулеза (Таблица 3) [16, 19 , 21, 26, 28, 33, 39].

Различные формы кожного туберкулеза Гистопатологические особенности Наблюдение AFB Отсутствие зернистой опухоли84 Lupus vulgaris Эпидермис может быть атрофическим или гипертрофическим, проявляться акантозом, папилломатозом и даже псевдоэпителиоматозной гиперплазией.Наличие хорошо сформированных туберкулезных гранулем, чаще сопровождаемых гигантскими клетками Лангханса, или гранулем, подобных инородному телу, в ретикулярной дерме. нечасто Lichen scrofulosorum неказеозные эпителиоидно-клеточные гранулемы в верхней части дермы и вокруг дермальных придатков не видны Промежуточные формы: гранулемы с оболочкой Tuberculosis verrucosa cutis отмечена псевдоэпителиоматозная гиперплазия эпидермиса с гиперкератозом и плотным инфильтратом воспалительных клеток, состоящим из нейтрофилов, лимфоцитов и гигантских клеток.Наличие гранулематозных инфильтратов является кардинальным признаком можно увидеть Первичный кожный туберкулез он варьируется в зависимости от времени прививки; в недавних очагах присутствует некротический нейтрофильный инфильтрат с многочисленными КУБ. На более позднем этапе происходит организация гранулем уменьшенное число Острый милиарный туберкулез Кожа состоит из участков воспалительного инфильтрата, состоящего из лимфоцитов, плазматических клеток и нейтрофилов с очаговыми поверхностными дермальными участками некроза и абсцесса образование без истинной казеозной гранулемы.Для этих поражений характерно наличие кислотоустойчивых бацилл с сосудистыми тромбами можно увидеть Tuberculosis orificialis туберкулоидные гранулемы вокруг срединной, центральной и поверхностной язвы, сопровождающиеся казеозным некрозом в области глубокая дерма обычно не обнаруживается Папулонекротический туберкулез очаги поражений показали псориазоподобную эпидермальную гиперплазию и эпителиоидные гранулемы с лимфоцитами и гигантские клетки Лангханса с различным количеством некрозов, наблюдаемых в верхней и средней части дермы с перифолликулярным обычно не обнаруживается Плохо сформированные гранулемы с интенсивным казеозным некрозом Скрофулодермия Массивный центральный некроз с образованием абсцесса и во многих случаях нагноением, следы гранулем могут наблюдаться на иферия поражений могут быть обнаружены Метастатические абсцессы и гумма Центральное изъязвление с обильным казеозным некрозом, окруженное краем гигантских клеток и макрофагов, может наблюдаться часто обнаруживаются

Двусмысленное проявление кожного туберкулеза для корреляции гистологического с клиническими наблюдениями в доказательной диагностике несовершенно и не имеет практического смысла.

10.2.4. Диагностика с помощью теста: окрашивание и культивирование

Клеточная стенка микобактерий богата сложными липидами, устойчивыми к действию кислоты и алкоголя; следовательно, возбудитель называется кислотоустойчивыми бациллами (КУБ). Методы окрашивания включают методы окрашивания Циля-Нильсена (распространенные на практике), Киньюна и методы на основе флуорохромов с аурамин-родамином. Микроскопическое наблюдение AFB при окрашивании тканей или секретов позволяет проводить эмпирическую терапию, если есть достаточные клинические подозрения. Однако это не обязательно указывает на кожный туберкулез, поскольку другие патогены, такие как Nocardia , Corynebacterium , нетуберкулезные микобактерии и даже артефакты, могут проявлять кислотоустойчивые свойства [38, 40].

Кроме того, более низкая чувствительность к окрашиванию при внелегочном туберкулезе по сравнению с туберкулезом легких ограничивает применимость теста [16, 37, 38]. Культуры патогена, Mycobacterium tuberculosis , на определенных твердых средах или путем автоматического определения его метаболитов в жидких средах остаются золотым стандартом для идентификации и определения их лекарственной чувствительности. Однако длительное время генерации патогенов для роста и низкая чувствительность результатов культивирования к повреждениям и образцам тканей создают дополнительные проблемы для быстрой и точной диагностики кожного туберкулеза [16, 38].

10.2.5. Амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР)

Обнаружение рода Mycobacterium с использованием бактериальной рибосомной ДНК 16S с помощью ПЦР-анализов в настоящее время считается важной вехой в диагностике туберкулеза легких и некоторых форм туберкулеза кожи. ДНК, присутствующая в образце свежих тканей, крови или парафиновых блоках, даже в фиксированных формалином срезах, залитых парафином, амплифицируется, и затем ее можно идентифицировать, подтверждая присутствие микобактерий [16, 33, 41].

ПЦР-анализ имеет повышенную чувствительность и специфичность в диагностике кожного туберкулеза (таблица 4) [42–55]; тем не менее, как и другие диагностические подходы, он не дает результатов при малобациллярных формах из-за неравномерного микробного распределения [25, 45].

Lee et al.2016) Ссылки и дата Количество образцов Чувствительность (%) Специфичность (%) 574 51,1 86,3 (Тан и др., 2001) 105 100 100 (мультибактериальная форма) Всего 73 (положительность 55% в случаях бородавчатого туберкулеза и 60% в случаях вульгарной волчанки; положительный результат 54% в случаях твердой эритемы) не рассчитано (малобациллярная форма) (Chawla et al.2009) 104 74,1 96,1 (Агарвал и др., 2017) 70 24,5 не рассчитано (Салиан и др. 1998) 60 (парафин, фиксированный формалином встроенный) 73,6 100 (Огуску и др., 2003) 37 43,7 90,4 (Неги и др. 2005) 37 95,2 100 (Абдалла и др.2009) 34 88 83 (Сяо и др. 2003) 34 56 не рассчитано (Лалл и др., 2017) 31 25,8 не рассчитано (Хосрави и др., 2006) 30 (фиксированный формалин) 75 не рассчитано (Рамам и др. 2013) 28 25 73,7 (Khine et al.2017) 25 52 не рассчитано (Quiros et al. 1996) 20 85 не рассчитано

10.2.6. Генотипирование

Генотипирование, недавний прогресс в диагностике кожного туберкулеза, имеет тенденцию отделять атипичные микобактерии от Mtb и обнаруживать мутант, если он продолжает вызывать лекарственную устойчивость патогена. Основные методы молекулярного типирования — сполиготипирование, MIRU-VNTR (тандемные повторы микобактериальных чередующихся повторяющихся единиц с переменным числом) и RFLP — обнаруживают Mycobacterium tuberculosis , ДНК или РНК в клинических образцах путем амплификации нуклеиновых кислот in vitro, расширяя возможности эпидемиологических исследований , передача и вспышки ЛТБ [56].Клиническая применимость этих методов генотипирования также была проведена у пациентов с кожным туберкулезом в Китае Ziang et al., 2017 с повышенной чувствительностью и специфичностью [57].

10.2.7. RFLP (полиморфизм длины рестрикционного фрагмента)

Золотой стандарт генотипирования, основанный на IS6110 полиморфизм длины рестрикционного фрагмента (RFLP), существует уже более эпохи; однако это трудоемко, дорого и требует большого количества хромосомной ДНК [56].

10.2.8. Сполиготипирование

Сполиготипирование — обычно используемое для дифференциации комплексного штамма Mycobacterium tuberculosis — основано на полиморфизмах локуса хромосомного прямого повтора (DR), который содержит переменное количество коротких DR, перемежающихся неповторяющимися спейсерами [56, 57].

10.2.9. Микобактериальные чередующиеся повторяющиеся единицы-переменные числа тандемных повторов (MIRU-VNTR)

Недавно Международный консорциум предложил MIRU-VNTR в качестве стандартизированной схемы генотипирования с наборами из 15 и 24 локусов, которые, как было доказано, обладают достаточной дискриминирующей способностью для отслеживания передачи и изучение филогенетики туберкулеза [57].

11. Выводы

В центре внимания почти все методы исследования придают меньшую чувствительность и специфичность при кожном туберкулезе, учитывая атипичную узловатую эритему, неспецифический внешний вид, недостаточно понятные методы радиовизуализации, особенности гистопатологии и даже методы микробного посева. . Тем не менее, методы генотипирования могут быть помощником в решении этой диагностической задачи, парадоксальным образом недоступной для третьего мира, такого как наш, из-за высоких эксплуатационных расходов и необходимости оснащения лаборатории.С этой точки зрения, клиницисты должны прибегать ко всем возможным тестам, чтобы поддержка положительных зачатков была вспомогательной при ранней и точной диагностике кожного туберкулеза.

Сокращения

Повторяющееся число TB:

AFB:	Кислотоустойчивые бациллы
МЛУ-ТБ:	Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью
MIRU-VNTR:	Микобактериальные вкрапленные повторяющиеся единицы
Mtb:	Mycobacterium tuberculosis
NTP:	Национальная программа по борьбе с туберкулезом
ПЦР:	Полимеразная цепная реакция
TST:	Туберкулиновая проба	X
Туберкулез с широкой лекарственной устойчивостью.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Выражение признательности

Авторы хотели бы поблагодарить профессора д-ра Дживана Бахадура Шершанда (отделение микробиологии Института медицины) и профессора доктора Дварика Прасад Шреста (отделение дерматологии и венерологии Института медицины).

Туберкулез мочеполовой системы (GUTB) | Блог HealthEngine

Что такое туберкулез мочеполовой системы (GUTB)

Туберкулез мочеполовой системы — заболевание мочеполовой системы.Это включает в себя все мочевыводящие пути и репродуктивную систему. Это внелегочная форма туберкулезной инфекции.

Статистика по туберкулезу мочеполовых органов (GUTB)

Туберкулез — это прежде всего медицинская проблема третьего мира, от которой ежегодно страдают от 3,5 до 4 миллионов человек во всем мире, 90% из которых находятся в развивающихся странах. В 1998 году в США был зарегистрирован уровень заболеваемости 6,8 на 100 000 человек. В западном мире это заболевание наиболее распространено среди ВИЧ-инфицированных, маргинализированных этнических групп и иммигрантов.На мочеполовой туберкулез приходится около 15% всех внелегочных случаев туберкулеза.

Факторы риска мочеполового туберкулеза (GUTB)

1. 1. Первичная инфекция туберкулезом: Легочная или внелегочная инфекция. Развитие туберкулеза мочеполовой системы обычно возникает в результате распространения туберкулеза легких.
2. Предыдущий контакт с пациентами, инфицированными туберкулезом: У людей, находящихся в тесном контакте с туберкулезом, может развиться скрытая инфекция, которая может активизироваться в более позднем возрасте с ухудшением иммунной системы.
3. Иммуносупрессия: Приобретенная (например, ВИЧ-инфекция) или врожденная.
4. Демографические: Туберкулез чаще встречается у мигрантов и других уязвимых или маргинализированных групп общества.
5. Место жительства: Туберкулез чаще встречается на азиатском субконтиненте и в Африке, чем в западных странах, таких как США, Великобритания и Австралия.

Прогрессирование туберкулеза мочеполовой системы (GUTB)

Туберкулез мочеполовой системы возникает в результате распространения туберкулеза легких через кровь в мочеполовые пути.Бактерии поселяются в тканях мочеполовых путей и образуют казеозные гранулемы. Обычно преобладают местные мочевые симптомы (дизурия, гематурия, боль в боку), но у пациента может быть полное бессимптомное течение до образования больших деструктивных гранулем. Если оставить заболевание без лечения, могут образоваться большие абсцессы и свищи. Сильные стриктуры мочеточника могут привести к обструкции мочевыводящих путей и необратимому повреждению почек. Без лечения состояние будет прогрессировать и может распространиться на другие части тела, что приведет к широко распространенному милиарному туберкулезу.Состояние хорошо поддается антимикробной терапии, которая является основой терапии, описанной ниже.

Как диагностируется туберкулез мочеполовой системы (GUTB)?

1. Кровь : FBC, культура на AFB.
2. Радиология : найти радиологические доказательства туберкулеза легких.
3. Посев мокроты : Если у пациента есть подозрение на активную инфекцию легочного туберкулеза. Образец следует отправить на определение культуры и чувствительности кислотоустойчивых бацилл (КУБ).

Прогноз при туберкулезе мочеполовой системы (GUTB)

Прогноз для этого состояния благоприятный, если инфекция вызвана чувствительным к антибиотикам штаммом организма. В последнее время появляются устойчивые к антибиотикам штаммы туберкулеза, которые могут потребовать интенсивного или более продолжительного режима антибиотиков. Для искоренения инфекции необходимо принимать противотуберкулезные препараты не менее шести месяцев. Эти препараты обладают множеством нежелательных побочных эффектов, которые могут ограничивать приверженность пациента к терапии и снижать вероятность выздоровления.

Как лечится туберкулез мочеполовой системы (GUTB)?

Длительная антибактериальная терапия: Поскольку бактерии способны вызывать образование гранулем, они относительно защищены от действия большинства антибиотиков. Поэтому в течение длительного периода времени используются несколько антибиотиков, чтобы обеспечить хорошее проникновение в защитные гранулемы и уничтожить организм и заболевание.

Стандартный режим приема антибиотиков в Австралии включает следующие пероральные антибиотики:

• Рифампицин, Изониазид, Пиразинамид и Этамбутол в течение двух месяцев
• Рифампицин и Изониазид на следующие четыре месяца
• Другие режимы используются, если пациент испытывает непереносимые побочные эффекты от вышеуказанного режима или если бактерии оказываются устойчивыми к этим агентам при тестировании чувствительности.Ответ на терапию антибиотиками при туберкулезе мочеполовой системы затруднен и обычно оценивается клинически по тяжести симптомов. Для оценки искоренения болезни после шестимесячного курса антибиотиков можно проводить периодический анализ мочи.

Мочеполовой туберкулез (GUTB) Ссылки

1. Браунвальд, Фаучи, Каспер, Хаузер, Лонго, Джеймсон. Принципы внутренней медицины Харрисона. 15-е издание. Макгроу-Хилл. 2001.
2. Котран, Кумар, Коллинз 6-е издание.Патологическая основа болезни Роббинса. Компания WB Saunders. 1999.
3. Кумар П., Кларк М. КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА. У. Б. Сондерс, 2002 стр. 545-549.
4. Лонгмор М., Уилкинсон И., Торок Э. ОКСФОРД СПРАВОЧНИК ПО КЛИНИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ. Издательство Оксфордского университета. 2001.

Индуцированная мокрота по сравнению с бронхоскопией при туберкулезе легких с отрицательным мазком — полный текст

Это рандомизированное исследование, в котором сравниваются различные диагностические подходы к диагностике туберкулеза легких у пациентов с подозрением на туберкулез легких, у которых не выявлено трех классических (неиндуцированных) образцов мокроты. При прямом осмотре туберкулезная палочка не выявляется.

Исследователи сравнивают чувствительность метода индуцированной мокроты с эндоскопическим доступом (компьютерная томография с последующим БАЛ и трансбронхиальной биопсией под контролем рентгеноскопии и, в конечном итоге, сбор мокроты сразу после бронхоскопии).

Люди из группы высокого риска по туберкулезу, проходящие скрининг с помощью рентгена грудной клетки или пациенты с симптомами, будут госпитализированы, если рентгенограмма их грудной клетки покажет подозрение на активный туберкулез.

В соответствии с надлежащей клинической практикой: образцы мокроты (неиндуцированные) будут браться при поступлении и каждое следующее утро.Если прямое исследование и ПЦР первых трех классических образцов мокроты отрицательны: пациенты будут рандомизированы на две группы с различным диагностическим подходом (индуцированная мокрота или эндоскопический подход) .Цель нашего исследования — доказать, что тщательный эндоскопический подход имеет более высокую чувствительность, чем индуцированная мокрота при диагностике туберкулеза легких у пациентов с высоким подозрением на активный туберкулез на рентгенограмме грудной клетки, но с отрицательными результатами прямого исследования и / или ПЦР на трех последовательных нормальных образцах мокроты.

В исследование будут включены 154 пациента (на основе статистического анализа гипотезы о том, что эндоскопический подход имеет чувствительность, вдвое превышающую чувствительность индуцированной мокроты).

• первая ветвь: 2 последовательных индуцированных мокроты с использованием ультразвукового распылителя.