Контроль качества проведения биопсий эмбрионов
Контроль качества проведения биопсий эмбрионов
Одним из направлений деятельности лаборатории Genetico является преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ) эмбрионов на моногенные и хромосомные заболевания. Подробнее о том, в каких случаях проводится ПГТ и каковы возможности современной преимплантационного тестирования, мы расскажем в одной из следующих статей. А сейчас хотели бы подробнее остановиться на этапе, без которого проведение ПГТ не представляется возможным — биопсии эмбриона. В процессе биопсии от эмбриона отделяются одна или несколько клеток, которые в последующем используются для генетических анализов. От качества биопсии эмбриона зависит сама возможность проведения последующей диагностики, а также точность получаемых результатов ПГТ. Перед тем, как начать сотрудничество с эмбриологом клиники ЭКО, мы предлагаем эмбриологу выполнить тестовую биопсию. Тестовая биопсия проводится на эмбрионах, непригодных к переносу или остановившихся в развитии, еще до того, как эмбриолог приступит к выполнению биопсии образцов пациентов для ПГТ. Все биопсии выполняются по определенным правилам, что позволяет осуществить соблюдение необходимых этапов
Самый первый этап контроля качества начинается в нашей лаборатории ПГТ и заключается в проверке чистоты буфера, который в последующем в пробирках передается эмбриологу клиники ЭКО. Именно в такие пробирки с проверенным буфером эмбриолог помещает образцы биопсии эмбрионов. Одна из пробирок должна остаться неоткрытой эмбриологом: она передается вместе с образцами биопсии в лабораторию ПГТ на исследование. Чистота буфера в этой пробирке будет отражать качество транспортировки и хранения пробирок с буфером в клинике ЭКО. Перед тем как поместить клетки эмбриона в пробирку с буфером, эмбриолог промывает эти клетки в нескольких каплях такого же буфера. Чтобы удостовериться в качестве отмывки биопсийного материала и отсутствии контаминации (загрязнения), к каждому образцу биопсии предоставляется собственный контроль – проба среды из последней отмывочной капли, чистота которой также нами проверяется. Таким образом, на втором этапе от эмбриолога в нашу лабораторию поступают образцы материала биопсии, контроли чистоты отмывки каждого образца и контроль чистоты транспортировки и хранения буфера.
В лаборатории проводят следующий этап — полногеномную амплификацию. Она позволяет многократно увеличить концентрацию ДНК в каждом образце. Так, даже очень малое количество ДНК клеток эмбриона, взятых на анализ, или количество ДНК, присутствующее в контрольных образцах, станет достаточным для последующего исследования. После амплификации оцениваем количество и качество ДНК. При успешно выполненной биопсии в образцах от эмбриона будет много ДНК; а во всех контролях, полученных от эмбриолога, ничего наблюдаться не должно. Кроме того, наша лаборатория следит за соответствующим качеством собственных реактивов. При каждом анализе образцов биопсии мы ставим собственные контроли: проверяем, работают ли реактивы правильно, так как при хранении они могут испортиться, и оцениваем их чистоту. На рисунке ниже показан образец успешно выполненной тестовой биопсии: в каждом образце есть материал биопсии, все контроли чистые, правильно сработали внутренние контроли нашей лаборатории.
Вся методика тестовых биопсий разработана нашей лабораторией для того, чтобы качество работы Genetico и сотрудничающих с нами эмбриологов оставалось на высоте, так как это является обязательным условием не только успешного проведения ПГТ, но и эффективной работы с Вашими эмбрионами. Если в образцах наблюдается загрязнение или отсутствие биопсийного материала, мы подготавливаем рекомендации для эмбриолога, чтобы при проведении биопсии на образцах пациента свести вероятность таких ошибок к минимуму.
Нами был проведен сравнительный анализ качества выполнения эмбриологами тестовых биопсий и биопсий эмбрионов для ПГТ. Качество выполнения биопсий эмбрионов для ПГТ было достоверно выше, чем во время выполнения тестовых биопсий. При выполнении биопсий эмбрионов для ПГТ мы реже сталкивались с такими проблемами, как отсутствие клеток эмбриона в доставленных в лабораторию пробирках и наличие контаминации (загрязнения) в последней отмывочной капле. Таким образом, проведение тестовой биопсии и полученные по ее результатам рекомендации позволяют значительно снизить частоту возникновения ошибок при выполнении биопсии эмбрионов пациентов для проведения генетической диагностики. Эмбриологи, сотрудничающие с нашей лабораторией, успешно выполнили тестовую биопсию, что позволяет пациентам быть уверенными в высоком качестве получаемых услуг. Кроме того, мы тщательно следим за соблюдением всех необходимых этапов контроля качества, как во время тестовой биопсии, так и при проведении биопсии для преимплантационной генетической диагностики, чтобы убедиться в
Автор: Мусатова Елизавета
Врач-генетик
2.3 Биопсия бластомеров и трофэктодермы / КонсультантПлюс
2.3 Биопсия бластомеров и трофэктодермы
Биопсия эмбрионов является безопасной процедурой, позволяющей провести преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ). Достоверность результатов ПГТ напрямую зависит от качества предоставленного материала, поэтому в эмбриологических лабораториях особое внимание уделяется мерам для снижения риска контаминации тестируемых образцов.
Выбор метода исследования генетического материала (FISH, PCR, array-CGH, NGS и т.д.) и соответствующая подготовка проб зависит от показаний к ПГТ.
Биопсия бластомеров.
— Процедуру биопсии бластомеров проводят на 3 день развития эмбрионов.
Рекомендуется забирать не более одного бластомера от каждого эмбриона. Забор большего числа клеток может негативно влиять на жизнеспособность и имплантационный потенциал эмбриона (169, 170). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств — 1b).
— Забор большего числа клеток не рекомендуется проводить для эмбрионов, имеющих в составе менее 6 клеток (169, 170). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств — 1b).
— Биопсию компактизующихся эмбрионов рекомендуется проводить в специальной среде для биопсии, не содержащей ионы Ca2+/Mg2+ для минимизации риска лизиса окружающих клеток (171, 172). Уровень убедительности рекомендаций B (уровень достоверности доказательств — 2b).
— Для анализа рекомендуется забирать бластомер среднего размера с четко визуализируемым одним ядром (173). Уровень убедительности рекомендаций B (уровень достоверности доказательств — 2b).
Биопсия трофэктодермы.
— При подготовке к биопсии трофэктодермы рекомендуется проводить вспомогательный хетчинг любым методом на 3 или 4 день развития, однако лазерный хетчинг предпочтителен как наименее оператор-зависимая и затратная по времени процедура (174). Уровень убедительности рекомендаций A (уровень достоверности доказательств — 1b).
— Процедуру биопсии трофэктодермы рекомендуется проводить на 5 и 6 день развития на бластоцистах отличного и хорошего качества (не менее 3BB по классификации Гарднера) (175). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств — 4).
— Эмбрионы плохого качества рекомендуется биопсировать после обсуждения с пациентами всех возможных рисков проведения подобной манипуляции и последующей криоконсервации. В особых случаях возможна биопсия остановившихся в развитии эмбрионов, диагностируемых с целью уточнения причины остановки в развитии. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств — 4).
— Не рекомендуется при биопсии трофэктодермы забирать в биоптат клетки, не включенные в состав бластоцисты, и прочие цитоплазматические фрагменты для минимизации риска ложноположительных результатов ПГТ. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств — 4).
— В случае применения лазерной биопсии допускается не более двух — трех выстрелов для облегчения разрыва контактов между клетками трофэктодермы. Не рекомендуется использовать лазер вблизи внутренней клеточной массы эмбриона, а также рекомендуется делать выстрелы в область межклеточных контактов с целью минимизации повреждения клеток трофэктодермы. Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств — 4).
— При невозможности интерпретации генетической лабораторией полученных данных (в т.ч. из-за отсутствия амплификации, деградации хроматина) рекомендуется повторно провести биопсию соответствующего эмбриона после обсуждения с пациентами возможных рисков проведения подобной манипуляции и последующей повторной криоконсервации (176, 177). Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств — 3).
Комментарии. Подготовку и хранение проб биоптата необходимо осуществлять согласно рекомендациям генетической лаборатории с использованием предоставленного генетической лабораторией буфера и учетом конкретного метода тестирования. Метод проведения вспомогательного хетчинга при подготовке к биопсии не оказывает влияния на достоверность результатов генетического тестирования (174, 178, 179).
Открыть полный текст документа
ЭКО
Центр вспомогательных репродуктивных технологий был открыт в 2011 году в Сибирском государственном медицинском университете и входит в состав многопрофильных университетских клиник. Центр является базой кафедры акушерства и гинекологии Сибирского государственного медицинского университета.
Центр занимается вопросами репродукции и генетики, проводит диагностику и применяет эффективные передовые технологии в лечении всех видов женского и мужского бесплодия.
В центре есть все, чтобы помочь появиться на свет Вашему ребенку: собственная современная лаборатория, SP-room для сбора биологического материала, криохранилище, современная операционная, комфортабельные пред- и послеоперационные палаты. И, конечно же, наша гордость — врачи и медицинские сестры — настоящие профессионалы своего дела с многолетним опытом работы, которые шаг за шагом приведут вас к нашей общей цели. Кроме того, при необходимости Вы сможете обратиться к врачам университетских клиник смежных специальностей (эндокринологам, урологам, андрологам и другим), которые являются признанными специалистами в своей сфере. Такая возможность невероятно важна, ведь репродукция — сложная область, в которой может потребоваться помощь врачей различных специальностей.
Наша цель — РОЖДЕНИЕ ЗДОРОВОГО РЕБЕНКА.
Почему Вам следует обратиться именно Центр вспомогательных репродуктивных технологий СибГМУ ?
В центре применяются передовые методы борьбы с женским и мужским бесплодием. Центр вспомогательных репродуктивных технологий Сибирского государственного медицинского университета оснащен современным оборудованием от ведущих мировых производителей. Наши специалисты — профессионалы своего дела, врачи с многолетним опытом, которые постоянно совершенствуют свои знания и навыки, в том числе, проходя стажировки и участвуя в конференциях по всей России и за рубежом. Среди наших специалистов — кандидаты и доктора медицинских наук, врачи высшей категории, члены Европейского общества репродукции человека и эмбриологии (ESHRE) и Американского общества репродуктивной медицины (ASRM).
Если Вы подозреваете у себя или партнера проблемы с зачатием, Вы можете смело обратиться в наш Центр вспомогательных репродуктивных технологий. Вместе мы найдем решение Вашей проблемы и поможем Вам стать родителями здорового ребенка.
Мозаицизм эмбрионов: возникновение и последствия
Мозаицизм эмбрионов: возникновение и последствияг. Киев, проспект Победы, 121-Б 8:00 — 18:00 ПН-СБ
| Эуплоидный эмбрион (нормальный набор хромосом) | Мозаичный эмбрион | Анеуплоидный эмбрион (аномальный набор хромосом) |
Что такое мозаицизм?
Мозаизм — это наличие двух или более клеточных линий, каждая из которых имеет различный генотип в пределах одного эмбриона, ткани или индивидуума. Эмбрионы с хромосомным мозаицизмом содержат две или более линии клеток с различным количеством хромосом (например, некоторые клетки являются эуплоидными, а другие — анеуплоидными).Как возникает мозаицизм?
Полная анеуплоидия является результатом ошибок в мейозе, возникающих во время созревания половых клеток (гамет). В основном считается, что частота анеуплоидии увеличивается с возрастом матери. Известно, что мозаицизм является результатом ошибок в митозе, а не в мейозе, которые возникают во время деления клеток в процессе развития эмбриона. Таким образом, показатели мозаицизма, видимо, не зависят от возраста матери. Исследователи связывают возникновения данного нарушения с дефектами структур сперматозоида, которые в будущем эмбрионе формируют аппарат для равноценного распределения хромосом между клетками.Влияние временного фактора
Распространение мозаицизма эмбрионов связано со временем возникновения митотической ошибки. Если ошибка произойдет в ранней фазе деления клеток, тогда будет затронуто больше клеток, чем если бы это произошло на более позднем этапе.ПГТ-A обычно проводят на 5-е сутки после оплодотворения яйцеклетки (стадия бластоцисты), биопсию выполняют, когда эмбрион содержит примерно 100-200 клеток. Показанные модели представляют собой эмбрионы со 128 клетками.Случаи возникновения мозаицизма
Наши данные свидетельствуют о том, что клинические случаи мозаицизма составляют около 10-20%. Однако, многие современные исследования показывают, что случаи возникновения мозаицизма при биопсии эмбриона на стадии бластоцисты выше на 20-30%. Процент мозаицизма выше, так как эти данные включают образцы, диагностированные как мозаичные по одной или по нескольким хромосомам, и анеуплоидные по одной или по нескольким хромосомам. Поскольку эти образцы содержат мейотическую анеуплоидию, они были бы клинически классифицированы как «анеуплоидные», а не «мозаичные».Как обнаружить мозаицизм?
Обычно биоптат бластоцисты на 5-е сутки содержит от 5 до 10 клеток. Уровень мозаицизма в биоптате из 5 клеток минимально может составить 20% (1 из 5 клеток), при этом самым высоким показателем может быть 80% (4 из 5 клеток). Однако, Международное общество по преимплантационной диагностике (PGDIS), также как и руководство Европейского общества репродукции и эмбриологии человека по выполнению ПГТ-А, рекомендуют классифицировать результаты ПГТ-A следующим образом: эмбрионы, в которых выявлено менее 20% анеуплоидных клеток относит к категории эуплоидных, при выявлении анеуплоидных клеток в интервале от 20 до 80% расценивать как мозаицизм, а в определением анеуплоидий в более чем80% клетов считать эмбрион анеуплоидным. ПГТ-A с высокой точностью, которое можно выполнить с применением NGS, в настоящее время является единственным подтвержденным методом , для надежного обнаружения мозаицизма в этом диапазоне.Мозаицизм эмбриона
Мозаицизм может появляться как во всем эмбрионе, так и быть ограниченным в определенных его участкахВ процессе биопсии бластоцисты проводиться забор клеток трофэктодермы (TE), которая вдальнейшем продолжает формировать плаценту; в то же время внутри клеточная масса (ICM), из которой формируется тело плода, остается нетронутой. Мозаицизм, выявленный в образце трофэктодермы, не всегда указывает на наличие мозаицизма в ICM, что, в свою очередь, не гарантирует появление мозаицизму у плода, но и не гарантирует живорождение.Мозаицизм в ICM
Мозаицизм в трофэктодерме
Также возможно, что мозаицизм может существовать только в ICM, не затрагивая TE. В таком случае при проведении ПГТ-А Эмбрион с мозаичным ICM, но эуплоидным TE, получит статус эуплоидного, а перенос и имплантация такого эмбриона может привести к неблагоприятному исходу. Поэтому очень важно сохранять обмен информацией между клиницистами и специалистами лабораторий, которые проводят предимплантационное генетическое тестирование, чтобы улучшить точность диагностики, сопоставляя ее с клиническими исходами.Повторная биопсия мозаичного эмбриона
Так как при биопсии бластоцисты выполняется забор клеток из ТЕ, повторная биопсия эмбриона с выявленным мозаичным набором хромосом не даст никакой дополнительной информации о ICM и, следовательно, не рекомендуется. Кроме того, результаты повторной биопсии не отменяют первоначальные результаты, даже если они различаются. Скорее, различные результаты будут характерны для категории эмбрионов с мозаицизмом.Установленный мозаицизм на эмбриональной стадии развития не всегда имеет связь с мозаицизмом, определяемом на пренатальном этапе, так как ограниченный плацентарный мозаицизм возникает тогда, когда хромосомный состав клеток плаценты, обычно выявляемый при биопсии ворсин хориона (CVS), не совпадает с таковым у плода. Это наблюдается примерно в 2% беременностей и является одной из причин, по которым последующее тестирование хромосомного набора рекомендуется осуществлять при амниоцентезе, а не при биопсии ворсин хориона.Клинические последствия
В случаях, когда для переноса в полость матки используются мозаичные эмбрионы, наблюдается снижение частоты имплантации, при этом частота самопроизвольных прерываний беременности возрастает (по сравнению с переносом эуплоидных эмбрионов), в отличии от зарегистрированных случаев живорождения.По мнению исследователей Munne & Wells (2017), «нет подробных данных, описывающих состояние [детей] после переноса мозаичных эмбрионов, но, насколько нам известно, родилось более 100 таких детей. До сих пор не было сообщений об аномальных кариотипах, хотя вполне вероятно, что немногие беременные или дети были подвержены детальной цитогенетической оценке». В течении многих лет мозаичные эмбрионы, вероятно, были перенесены несознательно, поскольку предыдущие методы при проведении ПГТ-A классифицировали эмбрионов только как эуплоидные или анеуплоидные. Поскольку некоторые мозаичные эмбрионы могут оказаться жизнеспособными, практика исключения всех эмбрионов с мозаицизмом из переноса может привести к потере эмбриона и снижению общего показателя частоты наступления беременности. Всем пациентам рекомендуется консультирование генетиков перед тем, как принять решение о переносе или исключении мозаичных эмбрионов.Интерпретирование результатов мозаицизма
В случаях, когда нет эуплоидных эмбрионов, исследования и рекомендации предлагают расставить приоритеты среди мозаичных эмбрионов, основываясь на проценте клеток с выявленной анеуплоидией в биоптате и количества вовлеченных хромосом, как показано ниже. Приоритетность, что базируется на оценке типа хромосомного нарушения, также может быть рассмотрена, но изменение количества хромосом (моносомия против трисомии) имеет меньшее значение.| Мозаицизм низкого уровня (20-40% аномальных клеток). Было показано, что эмбрионы с такими показателями чаще имеют эуплоидные ICM. Перенос таких эмбрионов с 50%-ной вероятностью приводит к наступлению нормальной беременности. Образцы с низким уровнем мозаицизма, включающим одну хромосому, могут быть приоритетными для использования в переносе , если нет эуплоидных эмбрионов. | |
| Мозаицизм высокого уровня (>40-80% аномальных клеток). Считается, что перенос эмбрионов с мозаицизмом высокого уровня в 30% случаев приводит к наступлению нормальной беременности. Образцам с мозаицизмом высокого уровня, также как и образцам с низким уровнем мозаицизма, вовлекающим две хромосомы, может быть дан более низкий приоритет. | |
| Комплексный мозаицизм (мозаицизм с вовлечением более трех хромосом ). Перенос эмбрионов, в клетках которых выявлен мозаицизм с вовлечением более трех хромосом, имеет низкую вероятность в развитии нормальной беременности, а именно коло 6 %. Эмбрионы с комплексным мозаицизмом должны относится в категорию с самым низким приоритетом. |
ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ РЕПРОДУКЦИИ
г. Киев, проспект Победы, 121-Б
+38 (044) 390-02-02 +38 (096) 220-00-03
[email protected]
Записаться на приём
© «IGR» Копирование материалов сайта запрещено. Лицензия МОЗ Украины АЕ № 197377
Стрейф Александра Бартовна — ЦКБ УДП РФ
Стрейф Александра Бартовна
Эмбриолог в отделении вспомогательных репродуктивных технологий.
Владеет всеми методиками проведения эмбриологического этапа цикла ВРТ: оценка и обработка эякулята для программ ВРТ, исследование степени фрагментации ДНК в сперматозоидах,сбор и денудация ооцит-кумулюсных комплексов, ICSI, IMSI, PICSI, оценка, культивирование, криоконсервация, разморозка ооцитов и эмбрионов, перенос эмбрионов в полость матки, вспомогательный хетчинг, лазерная и механическая биопсия трофэктодермы.
Член РАРЧ. Принимает активное участие в российских и международных конференциях по репродуктивной медицине.
Обучалась в Университете Антверпена в Бельгии. Высшее образование по специальности «Биология». Работала в клинике ЭКО эмбриологом.
В 2015 г. – закончила обучение и прошла итоговую аттестацию по специальности «Клиническая лабораторная диагностика» в Российской Медицинской Академии Последипломного Образования.
2016 – 2018 гг.. – аспирантура на базе НИИ морфологии человека и Первого Московского Государственного Медицинского Университета им. Сеченова.
2017 г. — курсы повышения квалификации по программе «Биопсия эмбриона» в Научно-Образовательном Центре Репродуктивных Технологий им. Фредерика Паулсена в Национальном Медицинском Исследовательском Центре Акушерства, Гинекологии и Перинатологии им. Кулакова.
2018 г. – сертифицированный курс повышения квалификации: «Вспомогательные репродуктивные технологии и практическая эмбриология» в Первом Санкт-Петербургском государственном медицинском университете имени академика И.П. Павлова.
С 2018 г. – обучение по специальности «Общественное здравоохранение» в ФГБНУ «НИИ общественного здравоохранения им. Семашко».
2012-2015 гг. – ассистент лаборатории нанотехнологий, г. Москва.
2014-2018 гг.: эмбриолог клиники «Альтравита», г. Москва.
С 2018 г. – эмбриолог отделения вспомогательных репродуктивных технологий ФГБУ «ЦКБ с поликлиникой» УД Президента РФ.
Специалисты отделения охраны репродуктивного здоровья ООКБ№2 освоили новую диагностику эмбриона человека перед имплантацией (ПГД)
Дата добавления: 27 мая 2021 г.
Специалисты отделения охраны репродуктивного здоровья Оренбургской областной клинической больницы №2 освоили новую диагностику эмбриона человека перед имплантацией (ПГД). Ранее подобный высокотехнологичный анализ производился только в крупнейших городах России. Об этом достижение рассказала заведующая отделением Людмила Владиславовна Лизурчик.
Наши врачи освоили преимплантационную генетическую диагностику. Это современная диагностика генетических заболеваний у эмбриона человека перед имплантацией в полость матки, то есть до начала беременности. Обычно для анализа проводится биопсия трофэктодермы у эмбриона, находящегося на стадии дробления. Проведение этой диагностики может дать полную информацию, какой из эмбрионов, который были получены путем экстракорпорального оплодотворения, имеет высокий риск наследственной патологии или хромосомных аномалий. А это значит, что специалисты введут в полость матки эмбрион, у которого больше шансов прижиться и на свет появится здоровый ребенок.
— В 2019 году благодаря Минздраву Оренбургской области для нашего отделения было закуплено необходимое оборудование для биопсии ооцита и эмбриона. Впервые мы опробовали преимплантационную генетическую диагностику в марте 2020 года, а уже в апреле выбранный эмбрион был имплантирован женщине. Беременность прошла удачно, и в январе 2021 года родился здоровый малыш – девочка. Эта попытка забеременеть с помощью ЭКО для этой женщины была 6, все предыдущие попытки были неудачные (замершая беременность, два спонтанных выкидыша), но благодаря этой технологии мы смогли отобрать эмбрион, который имел больше всего шансов прижиться и у нас все получилось. В этом году с помощью этой диагностики, 9 женщин стали беременными, еще по 4 пациенткам ждем результата, у них срок выявления беременности пока не наступил. Подобная технология поможет сделать еще больше семей Оренбургской области счастливыми!
Пока эта процедура делается на платной основе, но возможно в будущем, она будет включена в программу ОМС.
В ООКБ №2 с 2017 года работает отделение охраны репродуктивного здоровья. Основной задачей специалистов этого отделения является оказание специализированной медицинской помощи по лечению женского и мужского бесплодия с применением высокотехнологичных методов (вспомогательные репродуктивные технологии). За годы работы они помогли стать родителями сотням семей Оренбургской области. В отделении охраны репродуктивного здоровья ведется прием по врачебным специальностям: акушерству-гинекологии (первичный прием по бесплодию, ведение циклов ЭКО репродуктологами, ведение беременных), урологии-андрологии, эндокринолог, гематолог, имеется кабинет ультразвуковой диагностики (исследование органов малого таза, внутренних органов, молочных желез, щитовидной железы), процедурный кабинет.
Телефоны регистратуры отделения: +7 (3532) 44-65-54.
Как увеличить шансы на успешное ЭКО?
Зарождение новой жизни — великое таинство данное нам природой. К сожалению, не всегда процесс наступления беременности естественным путем становится возможным.
Важным этапом в лечении бесплодия является внедрение новых методов ВРТ, которые позволяют реализовывать функцию деторождения. Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) — самый эффективный способ наступления беременности при бесплодии на данный момент.
Лаборатория Медицинского центра “Элегра” оснащена современным высокотехнологическим оборудованием — процедуры проводятся с помощью микроскопа Nikon eclipse Ti-S и с использованием микроманипуляторов Narishige TAKANOME, что позволяет внедрить новейшие технологии.
- Каждый 4 случай бесплодия обусловлен мужским фактором (плохим качеством спермы). В данном случае применяются методы ИКСИ — введение спермодозоида в цитоплазму яйцеклетку и ПИКСИ – метод отбора оптимального спермодозоида, наиболее подходящего для оплодотворения. Что позволяет повысить эффективность ЭКО в случаях тяжелого мужского бесплодия до 70%!
- Внедрение в Медицинском центре “Элегра” ПГС (преимплантационный генетический скрининг) доказала свою высокую эффективность, особенно у пациентов старшего репродуктивного возраста. Можно сказать, что у тех, кто делал ПГС эмбриона в программах ЭКО, реже бывают замершие беременности или прерывания на ранних сроках. Это объясняется тем, что для имплантации в матку отбираются только эмбрионы без хромосомных аномалий.
ПГД — генетическая диагностика, которая позволяет выявить хромосомные нарушения эмбриона в ходе процедуры ЭКО до момента переноса зародыша в полость матки женщины
— NGS (Next Generation Sequencing) — в основе метода полное геномное секвенирование нового поколения
— FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) — скрининг наиболее часто встречающихся численных хромосомных аномалий - В Медицинском центре “Элегра” биопсия эмбрионов проводится с помощью лазерной технологии. На сегодняшний день это самый безопасный инструмент для малоинвазивного и нетравматического вмешательства в эмбрион, а клетки трофэктодерма эмбриона наиболее информативны для исследования генетического статуса эмбриона. Сущность метода заключается в аспирации одного-двух бластомеров эмбриона. Сначала эмбрион помещают на каплю среды в чашку Петри и покрывают специальным раствором для предотвращения высыхания. С одной стороны эмбрион фиксируют прочно удерживающей пипеткой, а с другой стороны делают отверстие в оболочке эмбриона, чтобы через него провести аспирацию генетического материала.
Качество лаборатории ЭКО — качество лаборатории клиники!
Статья написана Аврицевич Галиной Валентиновной — эмбриологом медицинского центра «Элегра»
Advances in Day 7 Embryo Biopsy
Во время ЭКО стадия развития эмбриона, морфологическая степень и хромосомный статус являются первостепенными факторами, определяющими, какой эмбрион переносить, и вероятность имплантации. Современные методы ЭКО расширяют культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты (5, 6 или 7 день). Используя эту методологию, эмбрион может подвергнуться биопсии трофэктодермы, при которой 5-7 клеток выделяются и сохраняются для дальнейшего генетического скрининга. Биопсия не влияет на будущее качество эмбриона.
Процесс интерпретации генетического состава эмбриона называется преимплантационным генетическим тестированием на анеуплоидию (PGT-A). Анеуплоидия определяется как неправильное количество хромосом, а эуплоидия определяется как правильное количество хромосом. Исторически сложилось так, что биопсия трофэктодермы для PGT-A выполняется примерно на 5 или 6 день развития, когда эмбрион достигает разрастания и превращается в бластоцисту. Однако некоторым эмбрионам может потребоваться больше времени в культуре для достижения полного роста или роста после оплодотворения.Эти медленно развивающиеся эмбрионы развиваются на 7-й день, и считается, что у них более низкая частота наступления беременности по сравнению с пациентами, которые выбирают эмбрионы 5-го или 6-го дня во время переноса. Опубликованные отчеты ставят под сомнение и потенциально предвзято относятся к клинической ценности эмбрионов 7-го дня во многих эмбриологических лабораториях и практик АРТ. Но возможность обобщения этих исследований сейчас ставится под сомнение. В планах исследований часто использовались относительно небольшие размеры выборки, вариативность лабораторных процедур и часто не было возможности использовать преимущества современных методов скрининга.В связи с последними достижениями в области преимплантационных генетических технологий и улучшенными условиями культивирования современные эмбриологические лаборатории переходят к регулярному расширению культивирования эмбрионов после 6-го дня развития.
В RMA в Нью-Йорке мы считаем, что медленно развивающиеся эмбрионы дают некоторым пациентам шанс забеременеть. Наша практика уже несколько лет занимается расширенной культурой до 7-го дня. В одной из наших последних исследовательских публикаций мы оценили репродуктивный потенциал самой большой когорты эмбрионов седьмого дня, подвергнутых биопсии для доимплантационного генетического тестирования на анеуплоидию.Наше исследование показало, что эуплоидные эмбрионы 7-го дня (эмбрионы с правильным числом хромосом) по сравнению с эмбрионами 5-го или 6-го дня показали повышенную распространенность генетических аномалий или анеуплоидов, но было обнаружено, что очень многообещающий процент этих эмбрионов были эуплоидными или обычный. Кроме того, было показано, что эуплоидные эмбрионы 7-го дня, которые были отобраны для переноса, достигли приемлемых показателей беременности и исходов живорождений. Это исследование поддерживает дополнительную стратегию лечения пациентов, у которых в противном случае не было бы возможности продолжить лечение или добиться успешной беременности.
Доктор Эрнандес-Ньето недавно участвовал в вебинаре, организованном Международной инициативой ЭКО (I3), рассказывая об этих медленно развивающихся эмбрионах и их клиническом применении. Посмотрите вебинар.
Поделитесь этим постомХотите знать, почему MCRH не пользуется большим успехом в проведении биопсии эмбриона и PGS для каждого пациента, подвергающегося ЭКО? — Клиника репродуктивной медицины | Бесплодие | Центр репродуктивного здоровья Среднего Запада
Хотите знать, почему MCRH не занимается биопсией эмбриона и предимплантационным генетическим скринингом для каждого пациента, проходящего ЭКО? Часть ответа наглядно демонстрируется в этой статье о обратной стороне генетического тестирования, а именно о мозаицизме…
«В редакционной статье, сопровождающей исследование, Гленн Шаттман, доцент кафедры репродуктивной медицины Медицинского колледжа Вейл Корнелл в Нью-Йорке, отмечает, что удивительным было то, что даже эмбрионы с до 50% аномальных клеток имплантировались с той же скоростью, что и это проверено как обычно.И хотя эмбрионы с более чем половиной аномальных клеток имели более низкую частоту имплантации и рождаемости, беременность по-прежнему приводила к здоровым родам, что позволяет предположить, что аномальные клетки были либо устранены, либо восстановлены ».
Самостоятельный ремонт, ребята. Предимплантационный генетический скрининг не только добавляет пациентам многие тысячи долларов расходов, не говоря уже о добавлении 2 месяцев к процессу (биопсия проводится через месяц, эмбрионы замораживаются и заменяются через два месяца), но и определенно возможно (вероятность 33%). ) что эмбрионы проявили способность к самовосстановлению и привели к здоровым родам! Таким образом, программы, продвигающие эту технологию, могут фактически отбрасывать «аномальные эмбрионы», которые впоследствии могли привести к нормальным родам!
Обратите внимание на эту статью…
https: // www.wsj.com/…/ivf-testing-spurs-a-debate-over-mosai…
Мы все хотим иметь здоровых детей. Мы все строим семьи. Мы также не одобряем проведение ненужных анализов (есть несколько генетических заболеваний, при которых преимплантационная генетическая диагностика важна и полезна), дорогостоящих и отнимающих больше времени.
Мы наблюдали, как многие программы продвигают эту технологию, и мы, к сожалению, видели, как пациенты ищут эти программы, потому что они считаются более «передовыми».Это один из тех случаев, когда мы чувствуем, что применение этой технологии повсеместно вредно, неуместно и опасно.
Доктор К.
Каковы ограничения и риски ПГД?
Каковы ограничения и риски ПГД?
Ограничения PGD
- Предимплантационная генетическая диагностика может проверять только 11 из 23 пар хромосом. Аномалии в оставшихся 12 хромосомах обнаружить невозможно.
- Частота ошибок для PGD при обнаружении аномального количества хромосом в настоящее время составляет 10%.
- PGD не может обнаружить генетический мозаицизм. Вот когда генетические аномалии могут присутствовать в одной клетке эмбриона, а не в другой.
- Возможно, что ни один из эмбрионов не будет признан «нормальным», но из-за ограничений, описанных выше, они действительно могут быть нормальными.
- Для хромосомных транслокаций PGD не может обнаружить аномалии в хромосомах, кроме той, которая, как известно, участвует в транслокации.
Каковы риски?
В настоящее время риски, связанные с биопсией эмбриона, неизвестны.Хотя это случается редко, во время биопсии можно случайно повредить эмбрион, что приведет к остановке развития. Биопсия эмбриона задерживает деление клеток на несколько часов, и некоторые эмбрионы не восстанавливаются после биопсии. Биопсия эмбриона и / или генетический анализ могут быть неудачными из-за технических проблем. Просто невозможно узнать относительную выгоду для каждого отдельного случая.
Bottom Line
Предимплантационная генетическая диагностика (PGD) предлагается в нашей клинике в Нью-Джерси, потому что в некоторых случаях она может быть полезной.Однако это дорого и в лучшем случае может обнаружить ненормальное количество 11 из 23 пар хромосом и, в некоторых случаях, специфическое отклонение в структуре одной хромосомы. Более того, ПГД имеет значительную погрешность. ПГД разрекламирована и привела к нереалистичным ожиданиям пациентов (т.е. только ПГД может дать вам «нормального» ребенка). ПГД лишь поверхностно затрагивает потенциальные генетические проблемы эмбриона. Генетические проблемы, из-за которых эмбрионы перестают расти после имплантации, в целом не обнаруживаются с помощью PGD.Однако разрабатываются новые технологии, которые могут обеспечить более точный и подробный анализ эмбрионального генома.
Свяжитесь с нами
Если вы хотите узнать больше об этой процедуре или вам интересно, подходит ли вам предимплантационная генетическая диагностика (ПГД), свяжитесь с нашим специалистом по репродуктивной системе Нью-Джерси сегодня. Мы будем рады назначить для вас консультацию.
Простой, менее инвазивный метод микропипетирования стриппера для биопсии эмбриона на третий день | Исследования и практика в области фертильности
Фарфалли В.И., Магли М.К., Ферраретти А.П., Джанароли Л. Роль анеуплоидии при имплантации эмбриона. Gynecol Obstet Investig. 2007. 64 (3): 161–5.
CAS Статья Google ученый
Крей Л., Лю Х., Чжан Дж., Грифо Дж. Стратегии фертильности и возраста матери для улучшения исхода беременности. Ann N Y Acad Sci. 2001; 943: 26–33.
CAS Статья PubMed Google ученый
Munne S, Cohen J, Sable D. Преимплантационная генетическая диагностика пожилого возраста матери и по другим показаниям. Fertil Steril. 2002. 78 (2): 234–6.
Артикул PubMed Google ученый
Munne S, Chen S, Colls P, Garrisi J, Zheng X, Cekleniak N, et al. Материнский возраст, морфология, развитие и хромосомные аномалии у более 6000 эмбрионов на стадии дробления. Репродукция Биомед онлайн. 2007. 14 (5): 628–34.
CAS Статья PubMed Google ученый
Магли М.С., Джанароли Л., Ферраретти А.П., Лаппи М., Руберти А., Фарфалли В. Морфология и развитие эмбриона зависят от хромосомного набора. Fertil Steril. 2007. 87 (3): 534–41.
Артикул PubMed Google ученый
Палини С., Де Стефани С., Примитерра М., Галлуцци Л. Предимплантационная генетическая диагностика и скрининг: настоящее и будущее. Гинеколл Эндокринол. 2015; 19: 1–5.
Google ученый
Adiga SK, Kalthur G, Kumar P, Girisha KM. Преимплантационная диагностика генетических заболеваний. J Postgrad Med. 2010. 56 (4): 317–20.
CAS Статья PubMed Google ученый
Милан М., Кобо А.С., Родриго Л., Матеу Е., Меркадер А., Буэндиа П. и др. Новое определение пожилого возраста матери как показания для преимплантационного генетического скрининга. Репродукция Биомед онлайн. 2010. 21 (5): 649–57.
Артикул PubMed Google ученый
Янг З., Лю Дж., Коллинз Г.С., Салем С.А., Лю Х, Лайл С.С. и др. Отбор одиночных бластоцист для переноса свежих только с помощью стандартной оценки морфологии и с массивом CGH для пациентов с ЭКО с хорошим прогнозом: результаты рандомизированного пилотного исследования. Mol Cytogenet. 2012; 5 (1): 24.
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Форман Э.Дж., Хонг К.Х., Ферри КМ, Тао Х, Тейлор Д., Леви Б. и др. Экстракорпоральное оплодотворение с переносом одной эуплоидной бластоцисты: рандомизированное контролируемое исследование.Fertil Steril. 2013; 100 (1): 100–7. e1.
Артикул PubMed Google ученый
Скулкрафт В.Б., Суррей Е., Миньярес Д., Густофсон Р.Л., Скотт-младший Р.Т., Кац-Джаффе М.Г. Комплексный хромосомный скрининг (CCS) с витрификацией приводит к улучшению клинических исходов у женщин> 35 лет: рандомизированное контрольное исследование. Fertil Steril. 2012; 98 (3, приложение): S1. 9 //.
Артикул Google ученый
Харпер Дж. К., Кунен Э., Де Рик М., Хартон Дж., Муту К., Пехливан Т. и др. Сбор данных консорциума ESHRE PGD X: циклы с января по декабрь 2007 г. с последующим наблюдением за беременностью до октября 2008 г. Hum Reprod. 2010. 25 (11): 2685–707.
CAS Статья PubMed Google ученый
Goossens V, Traeger-Synodinos J, Coonen E, De Rycke M, Moutou C., Pehlivan T, et al. Сбор данных консорциума ESHRE PGD xi: циклы с января по декабрь 2008 г. с последующим наблюдением за беременностью до октября 2009 г.Hum Reprod. 2012. 27 (7): 1887–911.
CAS Статья PubMed Google ученый
Moutou C, Goossens V, Coonen E, De Rycke M, Kokkali G, Renwick P, et al. Сбор данных консорциума ESHRE PGD xii: циклы с января по декабрь 2009 г. с последующим наблюдением за беременностью до октября 2010 г. Hum Reprod. 2014. 29 (5): 880–903.
CAS Статья PubMed Google ученый
Ly KD, Agarwal A, Nagy ZP. Преимплантационный генетический скрининг: помогает или мешает лечению ЭКО и какова роль эмбриона? J Assist Reprod Genet. 2011; 28 (9): 833–49.
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Чжан Дж.К., Ли XL, Пэн Й, Го Х, Хэн BC, Тонг GQ. Уменьшение воздействия на человеческие эмбрионы за пределами инкубатора улучшает качество эмбрионов и скорость бластуляции. Репродукция Биомед онлайн.2010. 20 (4): 510–5.
Артикул PubMed Google ученый
Wang WH, Kaskar K, Gill J, DeSplinter T. Упрощенный метод биопсии эмбриона для преимплантационной генетической диагностики. Fertil Steril. 2008. 90 (2): 438–42.
Артикул PubMed Google ученый
Harton GL, Magli MC, Lundin K, Montag M, Lemmen J, Harper JC и др. Консорциум ESHRE PGD / специальная группа по эмбриологии — рекомендации по передовой практике биопсии полярного тела и эмбриона для доимплантационной генетической диагностики / скрининга (PGD / PGS).Hum Reprod. 2011; 26 (1): 41–6.
CAS Статья PubMed Google ученый
Джонс А.Е., Райт Дж., Корт Х.И., Штрауб Р.Дж., Надь З.П. Сравнение вылупления с помощью лазера и закисленного вылупления Тирода путем оценки скорости развития бластоцист у родственных эмбрионов: проспективное рандомизированное исследование. Fertil Steril. 2006. 85 (2): 487–91.
Артикул PubMed Google ученый
Ким Х.Дж., Ким СН, Ли С.М., Чхве С.А., Ли Дж.Й., Джи BC и др. Результаты преимплантационной генетической диагностики с использованием либо сверления зоны с подкисленным раствором Тироде, либо частичного рассечения зоны. Clin Exp Reprod Med. 2012. 39 (3): 118–24.
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Дуглас-Гамильтон Д.Х., Кониа Дж. Тепловые эффекты при лазерном бурении предэмбриональной зоны. J Biomed Opt. 2001. 6 (2): 205–13.
CAS Статья PubMed Google ученый
Wong CY, Mills JK. Моделирование многоимпульсной лазерной абляции с приложениями для автоматического удаления зон. Материалы конференции: Ежегодная международная конференция Общества инженеров IEEE в медицине и биологии Ежегодная конференция Общества инженеров IEEE в медицине и биологии. 2015 август; 2015: 2567–70.
Гордон Дж. В., Банда I. Использование бурения зон для безопасной и эффективной биопсии ооцитов и эмбрионов мышей. Биол Репрод. 1990. 42 (5–6): 869–76.
CAS Статья PubMed Google ученый
Пирс К.Э., Михалопулос Дж., Кисслинг А.А., Сейбель М.М., Зильберштейн М. Преимплантационное развитие эмбрионов мыши и человека, биопсированных на стадиях дробления с использованием модифицированной техники замещения. Hum Reprod. 1997. 12 (2): 351–6.
CAS Статья PubMed Google ученый
Надь З.П., Лю Дж., Джорис Х., Деврой П., Ван Штайртегем А. Динамика активации ооцитов, образования пронуклеусов и расщепления в человеческих ооцитах, оплодотворенных интрацитоплазматической инъекцией сперматозоидов.Hum Reprod. 1994. 9 (9): 1743–8.
CAS PubMed Google ученый
Fragouli E, Wells D, Delhanty JD. Хромосомные аномалии в ооците человека. Cytogenet Genome Res. 2011. 133 (2–4): 107–18.
CAS Статья PubMed Google ученый
Fragouli E, Katz-Jaffe M, Alfarawati S, Stevens J, Colls P, Goodall NN, et al. Комплексный хромосомный скрининг полярных телец и бластоцист пар, у которых неоднократно не выполнялась имплантация.Fertil Steril. 2010. 94 (3): 875–87.
Артикул PubMed Google ученый
Mastenbroek S, Twisk M, van der Veen F, Repping S. Преимплантационный генетический скрининг: систематический обзор и метаанализ РКИ. Обновление Hum Reprod. 2011. 17 (4): 454–66.
CAS Статья PubMed Google ученый
Maia SB, Moura H, Kane SC, Costa FS. Предимплантационный генетический скрининг и диагностика: что должны знать врачи.Rev Bras Ginecol Obstet. 2015; 37 (2): 53–8.
Артикул PubMed Google ученый
Проповедь К., Ван Штайртегем А., Либаерс И. Преимплантационная генетическая диагностика. Ланцет. 2004. 363 (9421): 1633–41.
Артикул PubMed Google ученый
Чард Т. Частота имплантации и раннего невынашивания беременности в естественных циклах. Baillieres Clin Obstet Gynaecol.1991. 5 (1): 179–89.
CAS Статья PubMed Google ученый
Santos MA, Kuijk EW, Macklon NS. Влияние стимуляции яичников при ЭКО на развивающийся эмбрион. Репродукция. 2010. 139 (1): 23–34.
CAS Статья PubMed Google ученый
Wang Z, Ang WT. Автоматический выбор положения для биопсии эмбриона на стадии дробления при предимплантационной генетической диагностике.IEEE T Bio-Med Eng. 2015; 7.
Сельва Дж. Вспомогательный вылупление. Hum Reprod. 2000; 15 Дополнение 4: 65–7.
Артикул PubMed Google ученый
Уилл М.А., Кларк Н.А., Суэйн Дж. Э.. Биологические буферы pH при ЭКО: помощь или помеха на пути к успеху. J Assist Reprod Genet. 2011; 28 (8): 711–24.
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
Дюмулен Дж. С., Бра М, Кунен Э, Дризен Дж., Гераедтс Дж. П., Эверс Дж. Л.. Влияние среды, не содержащей Ca2 + / Mg2 +, на процедуру биопсии для преимплантационной генетической диагностики и дальнейшего развития человеческих эмбрионов. Hum Reprod. 1998. 13 (10): 2880–3.
CAS Статья PubMed Google ученый
Ducibella T, Андерсон Э. Влияние дефицита кальция на формирование окклюды zonula occludens и бластоцеля у эмбриона мыши.Dev Biol. 1979. 73 (1): 46–58.
CAS Статья PubMed Google ученый
Что включает в себя биопсия эмбриона?
Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) — это инструмент, предназначенный для генетического «знакомства» эмбрионов до их переноса в матку матери. Благодаря этой методике мы можем изучить количество их хромосом и выяснить, являются ли они носителями наследственного заболевания .Эта информация помогает нам выбрать эмбрионы, из которых будут рождены здоровые дети. Но как мы можем найти эту информацию?
Сегодня единственный способ найти генетическую информацию об эмбрионах — это выполнить биопсию эмбриона. Что включает в себя биопсия эмбриона?
Чтобы объяснить процедуру биопсии, мы должны иметь в виду, что наша отправная точка — ЭМБРИОНЫ . Эмбрионы извлекаются после выполнения цикла вспомогательной репродукции, предпочтительно с помощью интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ), и их развитие оценивается в течение периода культивирования до 3-го или 5-го дня.
К 3-му дню биопсийные эмбрионы должны иметь количество клеток, равное или превышающее 6, чтобы на их дальнейшее развитие не повлиял факт «захвата» клетки для проведения анализа. Для проведения биопсии необходимо просверлить отверстие в прозрачной оболочке эмбриона (ZP) либо с помощью химических агентов (кислота Тироде), либо с помощью лазерных импульсов. Затем путем аспирации отбирается бластомер (эмбриональная клетка), который затем анализируется в наших лабораториях молекулярной и генетической биологии.
После проведения биопсии эмбрионы находятся под наблюдением для оценки их развития до момента переноса.
К 5 дню биопсийные эмбрионы должны были достичь стадии бластоцисты. Если это так, биопсию проводят как минимум 4-5 клеток из внешнего клеточного слоя, которые будут формировать структуры плаценты (трофэктодерма), сохраняя внутреннюю клеточную массу, которая будет формировать эмбрион, неповрежденной. Сверление ZP выполняется с помощью лазера, который является наиболее точным доступным методом, поскольку толщина ZP уменьшается из-за связанных процессов расширения, и развитие эмбриона может быть поставлено под угрозу при использовании других методов.Эмбрион естественным образом вытеснит часть трофэктодермы из блестящей оболочки. Это тот кусок, который можно биопсировать. Наиболее распространенный способ биопсии трофэктодермы — аспирация с использованием лазерных импульсов для запуска отделения клеток, хотя существуют и другие методы.
Биопсия эмбриона — это деликатная процедура, требующая высокой точности и опытной команды эмбриологов. Ошибки при выполнении техники могут поставить под угрозу развитие эмбриона или последующий генетический диагноз.
Доктор Дори Родригес , биолог в Instituto Bernabéu
Чтобы узнать следующие темы для нашего форума: подписывайтесь на нас на facebook.
Вы можете записаться на онлайн-консультацию или записаться на прием в Instituto Bernabeu.
Более подробная информация на нашем веб-сайте: www.institutobernabeu.com или www.ibbiotech.com
Первая успешная биопсия эмбриона при серповидноклеточной анемии
Ученые успешно использовали новую технику для выявления генетической мутации, вызывающей серповидно-клеточную анемию.Впервые преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) привела к рождению здоровых девочек-близнецов у пары, в которой оба партнера были носителями серповидно-клеточного признака. Результаты этого исследования, проведенного исследователями из Центра репродуктивной медицины и бесплодия (CRMI) Медицинского колледжа Вейл при Корнеллском университете и Нью-Йоркской пресвитерианской больницы (New York Weill Cornell Center), совместно с исследователями из Центра молекулярной медицины и Genetics (CMMG) в Государственном университете Уэйна, появится в выпуске журнала Американской медицинской ассоциации (JAMA) от 12 мая.
Биопсия эмбриона с помощью PGD — это диагностический метод, который используется при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) для определения генетического статуса доимплантационных эмбрионов. PGD требует опыта высококвалифицированных медицинских и генетических бригад и доступна только в специализированных центрах, таких как New York Weill Cornell.
«Этот метод позволяет родителям с достаточной уверенностью знать, что их ребенок будет здоровым, еще до того, как мать вынашивает ребенка. Благодаря этой новой возможности мы можем помочь парам, у которых есть генетический признак, вызывающий серповидно-клеточную анемию, и мы можем практически исключить риск передачи этой черты своим детям », — сказал д-р.Зев Розенвакс, главный исследователь исследования и директор CRMI в Нью-Йоркском Центре Вейля Корнелла.
Серповидно-клеточная анемия поражает почти одного из 625 рождений афроамериканцев, хотя почти 10% пациентов с различными заболеваниями серповидного ряда не относятся к афроамериканцам. Серповидно-клеточная анемия — это состояние, при котором форма красных кровяных телец изменяется с круглой на «серповидную», что приводит к закупорке мелких кровеносных сосудов и нарушению нормального кровотока. Дети, страдающие серповидно-клеточной анемией, испытывают хронические эпизоды боли и повышенную восприимчивость к потенциально опасным для жизни состояниям, включая бактериальные инфекции и органную недостаточность.В настоящее время не существует удовлетворительных методов лечения этого серповидного состояния.
Доктор Зев Розенвакс и доктор Кангпу Сюй возглавляли группу исследователей в Нью-Йоркском центре Вейл Корнелл в сотрудничестве с доктором Марком Хьюзом из CMMG. Согласно отчету, опубликованному в JAMA, в 1997 году пара лечилась стандартным ЭКО, методом, обычно используемым для лечения бесплодия, при котором сперма и яйцеклетки извлекаются и оплодотворяются в лаборатории. ПГД была проведена на семи эмбрионах, созданных ЭКО, и анализ ДНК отдельных клеток, взятых из биопсии этих эмбрионов, определил генетический статус каждого эмбриона.Три внешне нормальных, здоровых эмбриона были перенесены обратно в матку матери, а беременность двойней была подтверждена ультразвуком через семь недель. Амниоцентез, проведенный на четвертом месяце беременности, подтвердил, что у близнецов не было серповидно-клеточной мутации. Этих здоровых девочек родили в нью-йоркском центре Weill Cornell 5 мая 1998 года.
«Наши результаты подтверждают, что ПГД — это безопасный и жизнеспособный вариант для пар, являющихся носителями серповидноклеточной анемии, которые хотят предотвратить генетически дефектного ребенка — это может предоставить им реалистичную альтернативу пренатальному тестированию», — считает доктор.Сюй, ведущий автор исследования.
«ПГД уже успешно использовался для выявления нескольких других наследственных признаков, включая муковисцидоз и связанные с полом заболевания, такие как гемофилия. Этот успех является еще одним свидетельством того, что ПГД имеет огромные преимущества для пар, которые хотят минимизировать риск передачи определенных заболеваний. или условия для их детей », — сказал доктор Розенвакс. Раньше серповидно-клеточную анемию можно было диагностировать только с помощью амниоцентеза, процедуры, выполняемой во время беременности.
В настоящее время в нью-йоркском Центре Вейл Корнелл предимплантационное генетическое тестирование предлагается для отбора пар, страдающих генетическими нарушениями и хромосомными аберрациями, включая болезнь Тэя Саха, синдром Дауна, муковисцидоз, талассемию и анемию Фанкони среди других. Доктора Розенвакс, Сюй и их коллеги активно проводят исследования по применению ПГД для лечения других хромосомных заболеваний, таких как синдром ломкой Х-хромосомы и болезнь Хантингтона.
Является ли биопсия морулы на четвертый день возможной альтернативой доимплантационному генетическому тестированию?
Абстрактные
Цель
Для оценки эффективности и клинического исхода PGT-M, проведенного в День-3, День-4 и День-4 «отложенных» эмбрионов, которые не подходили для биопсии в День-3.
Устройство и установка
Когортно-историческое исследование всех последовательных пациентов, поступивших в программу ЭКО-ПГТ-М в крупном медицинском центре.
Основные показатели результата
Частота наступления беременности и процентное соотношение полных, неполных диагнозов, неудачных результатов ПЦР, аномальных эмбрионов в PGT стадии расщепления на 3-й день, «отложенные» эмбрионы на 4-й и 4-й день.
Пациенты и методы
Мы изучили медицинские карты всех пациентов, поступивших в наш ЭКО для нового цикла ЭКО-ПГТ-М.Пациенты были разделены на 3 группы в зависимости от дня биопсии бластомера: 3-й день — стадия дробления, 4-й день — морула и 4-й день — «отложенные» эмбрионы. Лабораторные данные, генетические диагностические и клинические результаты были собраны и сравнены между различными исследовательскими группами.
Результаты
Девятьсот шесть пациентов прошли циклы PGT-M в нашей программе PGT: 747, 127 и 32 в группах «отложенного» дня 3, 4 и 4 дня соответственно. Текущие показатели беременностей на перевод и на пациентку (15.8% и 9,4% соответственно) были несущественно ниже в День-4 «с задержкой» по сравнению с Днем-3 (21,4% и 17,5%, соответственно) и Днем-4 (24,3% и 19,7%, соответственно). При сравнении ВСЕХ морул (День-4 и День-4 «с задержкой») с ВСЕМИ эмбрионами на стадии дробления (День-3, День-4 и День-4 «с задержкой»), после переноса была продемонстрирована значительно более высокая частота продолжающейся беременности. эмбрионов, полученных из биопсии морулы, по сравнению с биопсией на стадии дробления (33,3% против 20,5%, p <0,03, соответственно).
Заключение
Биопсия эмбриона на 4-й день возможна и дает сопоставимый и даже более высокий процент продолжающихся беременностей, если она проводится на стадии морулы. Необходимы дальнейшие исследования, оценивающие совокупную частоту родов живорождений за начатые циклы при биопсии эмбриона на 3-й день по сравнению с 4-м днем для PGT-M.
Образец цитирования: Орвието Р., Фельдман Б., Визель М., Шани Х., Айзер А. (2020) Является ли биопсия морулы на 4-й день возможной альтернативой доимплантационному генетическому тестированию? PLoS ONE 15 (9): e0238599.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238599
Редактор: Паола Вигано, IRCCS San Raffaele Scientific Institute, ITALY
Поступила: 22 мая 2020 г .; Одобрена: 19 августа 2020 г .; Опубликовано: 11 сентября 2020 г.
Авторские права: © 2020 Orvieto et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи.
Финансирование: Автор (ы) не получил специального финансирования для этой работы.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.
Введение
Преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ) позволяет парам, подверженным риску передачи серьезного генетического заболевания, выбрать здоровые эмбрионы для переноса и дать возможность родить здоровое потомство.Основными показаниями для PGT являются специфические моногенные аберрации и расстройства, связанные с полом (PGT-M), структурные и численные хромосомные дисбалансы (PGT-SR), а также скрининг анеуплоидии (PGT-Aneuploidy PGT-A) [1, 2]. Основываясь на тестировании отдельных эмбриональных клеток, PGT-M уже применялся в широком диапазоне структурных и численных хромосомных дисбалансов, моногенных заболеваний, HLA-типирования и т. Д. С помощью PGT-полимеразной цепной реакции (ПЦР), метода выбора для амплификации. небольшое содержание ДНК, полученное при биопсии бластомера.
На основании исследования 2013 г. [3], демонстрирующего, что биопсия на стадии расщепления заметно снижает репродуктивный потенциал эмбриона по сравнению с биопсией трофэктодермы, за последние полдесятилетия произошел сдвиг в сторону биопсии на стадии бластоцисты, а не на стадии расщепления, в основном в установках PGT-Aneuploidy. . Более пристальный взгляд на это исследование показывает, что их «вводящий в заблуждение вывод» является результатом не пагубного эффекта биопсии эмбрионов на стадии дробления, которая показала приемлемую 30% устойчивую частоту имплантации, а из-за их «невероятно» высокой (50%) устойчивой имплантации. эмбрионов, не подвергшихся биопсии, на стадии дробления, что было сопоставимо / эквивалентно устойчивой скорости имплантации биопсированных и не подвергнутых биопсии бластоцист.(51% против 54% соответственно). Последнее противоречит общеизвестным данным, представленным в недавнем Кокрановском обзоре [4], о том, что частота клинической беременности / живорождения после переноса свежей крови выше в бластоцистах по сравнению с переносами на стадии дробления. Более того, если 36% женщин достигают клинической беременности после переноса свежей стадии дробления (цифра аналогична той, которая была достигнута после переноса биопсированных эмбрионов на стадии дробления в исследовании 2013 года), от 39% до 46% наступят после переноса свежей стадии бластоцисты [4 ].
Неудивительно, что согласно сбору данных XIV-XV Консорциума ESHRE PGD [5] о PGT-M, биопсия эмбриона на стадии 3-го дня дробления все еще использовалась наиболее часто (93% циклов), в то время как использование биопсии бластоцисты оставалось низкий (2%). Более того, ПЦР была наиболее широко используемым методом амплификации ДНК первой линии (93% циклов). Результаты, очень похожие на предыдущий сбор данных [6].
В нашей программе PGT-M мы используем биопсию бластомера от 3 эмбрионов на разных стадиях развития: (a) Высококачественные (> 6 бластомеров и <15% фрагментация) эмбрионы на стадии дробления 3-го дня.(b) Каждый раз, когда День-3 совпадает с выходными / праздником (нерабочим днем), эмбрионы культивируются еще один день и подвергаются биопсии в День-4- на стадии морулы; и (c) в случае, если эмбрионы высокого качества не были подходящими / доступными для биопсии на 3-й день, эмбрионы культивируют еще один день, и, если их догнали, они подвергаются биопсии бластомера на 4-й день.
На основании вышеупомянутых наблюдений мы попытались оценить эффективность и клинические исходы PGT-M, проведенного на стадии расщепления на 3/4 день и на стадии 4-го дня морулы.
Пациенты и методы
Пациенты
Мы рассмотрели компьютеризированные файлы всех последовательных пациентов, поступивших в нашу программу ЭКО-ПГТ-М с января 2006 г. по февраль 2020 г. Мы включили только пациентов, перенесших ПГТ-М, на основе программ мультиплексной ПЦР, разработанных для гаплотипирования с использованием информативных микросателлитных маркеров [7] которые достигли стадии захвата яйцеклетки (OPU) и имели по крайней мере один эмбрион, доступный для генетической оценки. Все данные были полностью анонимными, прежде чем мы получили к ним доступ.Исследование было одобрено IRB этического комитета Медицинского центра Шиба (разрешение IRB №: 9918).
Были включены все обычные показания для ЭКО / ИКСИ и принятые протоколы стимуляции яичников (описанные в [7] и [8]). Лабораторные процедуры и молекулярная диагностика подробно описаны в другом месте [7]. Лютеиновая поддержка прогестерона начиналась либо с ежедневных 600 мг микронизированных мягких гелевых капсул прогестерона (Утрогестан, Бесинс, Исковеско, CTS, Петах-Тиква, Израиль) в трех разделенных дозах, либо с вагинального прогестерона 90 мг (Crinone; Merck Serono, Hellerup, Дания). один раз в день.Лютеиновая поддержка прогестероном была начата через 1 день после сбора ооцитов. Продолжающаяся беременность определялась, когда срок беременности составлял ≥12 недель.
PGT
Эмбрионов 3-го дня подвергали биопсии бластомера, как описано ранее [7] (группа 3-го дня). В случае, если в День-3 для биопсии не было подходящих / доступных эмбрионов высокого качества (> 6 бластомеров и <15% фрагментация), эмбрионы культивировали еще один день, а в случае догнали их подвергали биопсии бластомера на 4-й день ( День-4 «отсроченная» группа).Более того, всякий раз, когда день-3 совпадал с выходным / праздником (выходным днем), эмбрионы культивировали в течение еще одного дня и подвергали биопсии в день-4 на стадии морулы. т.е. эмбрион, состоящий из 12–32 бластомеров, и все бластомеры находятся в процессе уплотнения (группа День-4). Эмбрионы на 4-й день помещали в среду, не содержащую кальций-магний (SAGE, CooperSurgical), на несколько минут до тех пор, пока они не разуплотнялись. После этого метод биопсии был выполнен, как описано ранее для биопсии эмбриона на третий день [7].
Молекулярные диагнозы каждого эмбриона в трех исследуемых группах классифицируются, как описано ранее [7]: « Полный диагноз — пораженный или пораженный эмбрион в соответствии с исследованным генетическим заболеванием; Неполный диагноз — предполагаемое выпадение аллеля или рекомбинация; ПЦР сбой — ДНК не доступна для диагностики Аномальный — эмбрион имеет аномальную сборку аллелей, то есть любая структура, отличная от одного материнского и одного отцовского аллелей, соответствующих известному гаплотипу, e.грамм. трисомия, моносомия или однопородная дисомия «.
Статистика
Различия в переменных между исследуемыми группами были статистически проанализированы с помощью критерия хи-квадрат, если это необходимо. Значение p <0,05 считалось значимым.
Результаты
Девятьсот шесть пациентов прошли циклы PGT-M в нашей программе PGT в период с января 2006 года по февраль 2020 года: 747, 127 и 32 пациента в группах «отсроченного» дня 3, 4 и 4 дня соответственно.
Лабораторные / эмбриологические и генетические данные представлены в таблице 1.Хотя значительных различий между группами в степени оплодотворения не наблюдалось, процент эмбрионов, доступных для биопсии, был выше в День-4 по сравнению с группами Дня-3. Более того, группа «отложенного» дня 4 имела самую низкую скорость переноса эмбрионов (59,4%) по сравнению с группами дня 3 (81,8%, p <0,01) и дня 4 (81,1%, p <0,02). Частота продолжающихся беременностей на перевод и на одну пациентку (15,8% и 9,4%, соответственно) была незначительно ниже в День-4 «с задержкой» по сравнению с Днем-3 (21,4% и 17.5% соответственно) и День-4 (24,3% и 19,7% соответственно). Такая же тенденция наблюдалась и при оценке частоты имплантации.
Молекулярные диагнозы представлены в Таблице 1. Хотя не наблюдалось значительных различий в процентном соотношении полной, неполной диагностики, неудач ПЦР или аномальных эмбрионов, между исследуемыми группами, День-4 «с задержкой» давал значительно меньшее количество незатронутых эмбрионов по сравнению с в 3-й день (25,5% против 37,2%, p <0,005, соответственно) и 4-й день (25.5% против 35,2%, p <0,03 соответственно).
В таблице 2 представлена частота продолжающихся беременностей в зависимости от стадии развития эмбриона в различных группах исследования. Морула на 4-й день позволила достичь значительно более высоких показателей продолжающейся беременности по сравнению с эмбрионами на стадии дробления на 3-й, 4-й и 4-й день с «задержкой» (таблица 2А). Более того, при сравнении ВСЕХ морул (День-4 и День-4 «с задержкой») с ВСЕМИ эмбрионами на стадии дробления (День-3, День-4 и День-4 «с задержкой»), была продемонстрирована значительно более высокая частота продолжающейся беременности после перенос морулы по сравнению с эмбрионами на стадии дробления (33.3% против 20,5%, p <0,03 соответственно. Таблица 2B).
Обсуждение
В настоящем исследовании пациенток, проходящих новый цикл лечения ЭКО, использующих PGT-M на основе программ мультиплексной ПЦР, частота продолжающихся беременностей на перевод и на пациентку была сопоставима между Днем-3 (21,4% и 17,5% соответственно) и Биопсия эмбриона на 4-й день (24,3% и 19,7% соответственно). Более того, если биопсия должна быть отложена по техническим причинам, биопсия эмбриона на 4-й день на стадии морулы возможна и дает значительно более высокий процент продолжающихся беременностей по сравнению с биопсией эмбриона на стадии дробления.Эмбрионы 3-го дня, не подходящие для биопсии, следует культивировать до 4-го дня. Если эмбрионы догонят стадию морулы, рекомендуется биопсия эмбриона для PGT-M. Однако следует избегать биопсии эмбриона у эмбрионов 4-го дня, которые не развились после стадии дробления.
Наши общие показатели и результаты циклов PGT-M были сопоставимы со сбором данных консорциума ESHRE XIV – XV [5]. Уровень оплодотворения (61,8%) и процент эмбрионов, подвергающихся биопсии, на оплодотворенный ооцит (74.3%), были сопоставимы с нашим опытом при биопсии на третий день (69,6% и 84,1% соответственно). Из эмбрионов, подвергшихся биопсии, в целом 72,1% были определены как имеющие полный диагноз — нетронутый или пораженный эмбрион в соответствии с исследованным генетическим заболеванием. Более того, среди биопсированных эмбрионов процент незатронутых / переносимых эмбрионов составил 37,2% в целом, что соответствует данным ESHRE [5], согласно которым 40,9% диагностированных эмбрионов можно было передать генетически. Более того, более пристальный взгляд на данные, представленные De Rycke [5] по циклам PGT-M, выполненным для единичных генных нарушений с использованием ПЦР, выявил скорость доставки на OPU и на перенос эмбриона 20% и 26%, соответственно, что соответствует с нашими цифрами.Следует отметить, что в нашей общей популяции ЭКО в период с 2016 по 2019 год мы провели 2263 OPU, с 31% и 28,1% продолжающейся беременностью на перенос эмбриона у пациентов в возрасте <35 лет и <40 лет, соответственно.
Недавнее исследование Theobald et al. [9] представили статус PGT в Великобритании и США в период с 2014 по 2016 год. По данным Theobald et al., В 2016 году у пациентов, перенесших PGT-M / SR, уровень живорождений составил 18,9% и 29,8% на OPU / перенос, соответственно. . Хотя эти цифры выше, чем у нас или Де Рик [5], следует подчеркнуть, что Theobald et al.сообщили об общих результатах ПГТ, включая перенос бластоцисты. Более того, их данные относятся к периодам с 2014 по 2016 год, тогда как мы сообщали о нашем опыте с 2006 по 2020 годы.
Наши наблюдения сообщают о схожих результатах при выполнении PGT-M на эмбрионах 4-го дня по сравнению с 3-м днем. Однако, как и ожидалось, более развитые эмбрионы на стадии морулы (день 4) дают более высокую частоту наступления беременности на перенос по сравнению с эмбрионами на стадии дробления (день 3) (таблица 2A и 2B). Более того, всякий раз, когда эмбрионы не подходят для биопсии на 3-й день, если они догонят стадию морулы на 4-й день, их репродуктивный потенциал практически восстанавливается, и их следует рассматривать для применения PGT-M.С другой стороны, те, которые не догнали стадию морулы на 4-й день и остались на стадии расщепления, дали НУЛЕВОЙ процент наступления беременности, и поэтому их биопсии следует избегать.
Эти наблюдения согласуются с наблюдаемым более высоким процентом наступления беременности на перенос при сравнении переноса эмбрионов на 5-й день с переносом эмбриона на стадии дробления на 3-й день [4]. Чем более развит эмбрион, тем выше вероятность наступления беременности. Однако следует уточнить, что расширенное культивирование может нанести вред эмбриональному развитию из-за неоптимальных условий культивирования [10], как уже было продемонстрировано Racowsky et al.[11] и Xiao et al. [12], которые сообщили об улучшении частоты наступления беременности при переносе эмбрионов на стадии дробления по сравнению с бластоцистой, когда был доступен только один эмбрион.
Заключение
Таким образом, можно сделать вывод, что в циклах PGT-M биопсия эмбриона на 4-й день возможна и дает сопоставимый и даже более высокий уровень продолжающейся беременности, если она проводится на стадии морулы. Необходимы дальнейшие исследования, оценивающие совокупную частоту родов живорождений за начатые циклы при биопсии эмбриона на 3-й день по сравнению с 4-м днем для PGT-M.
Ссылки
- 1. Харпер JC, Сенгупта SB. Преимплантационная генетическая диагностика: современное состояние, 2011. Hum Genet. 2012. pmid: 21748341
- 2. Бергер В.К., Бейкер В.Л. Преимплантационная диагностика моногенных заболеваний. Семин Репрод Мед 2014; 32: 107–113 pmid: 24515905
- 3. Скотт Р.Т. младший, Апхэм К.М., Форман Э.Дж., Чжао Т., Трефф Н.Р. Биопсия на стадии расщепления значительно снижает потенциал имплантации человеческого эмбриона, в то время как биопсия бластоцисты — нет: рандомизированное и парное клиническое исследование.Fertil Steril. 2013; 100: 624–30. pmid: 23773313
- 4. Glujovsky D, Farquhar C, Quinteiro Retamar AM, Alvarez Sedo CR, Blake D. Стадия расщепления по сравнению с переносом эмбриона на стадии бластоцисты в вспомогательных репродуктивных технологиях. Кокрановская база данных Syst Rev.2016, 30 июня; (6): CD002118. pmid: 27357126
- 5. De Rycke M, Goossens V, Kokkali G, Meijer-Hoogeveen M, Coonen E, Moutou C. ESHRE Сбор данных Консорциума PGD XIV-XV: циклы с января 2011 года по декабрь 2012 года с последующим наблюдением за беременностью до октября 2013 года.Hum Reprod 2017; 32 (10): 1974–1994. pmid: 29117384
- 6. Де Рике М., Бельва Ф., Гуссенс В., Муту С., СенГупта С.Б., Трэгер-Синодинос Дж. И др. Сбор данных Консорциума ESHRE PGD XIII: циклы с января по декабрь 2010 г. с последующим наблюдением за беременностью до октября 2011 г. Hum Reprod 2015; 30: 1763–1789. pmid: 26071418
- 7. Фельдман Б., Айзер А., Бренгауз М., Дотан К., Леврон Дж., Шифф Е. и др. Предимплантационная генетическая диагностика — стоит ли использовать ИКСИ для всех? J Assist Reprod Genet.2017; 34 (9): 1179–1183. pmid: 28612309
- 8. Орвието Р., Бренгауз М., Фельдман Б. Новый подход к пациенту с нормальным ответом и повторяющимися неудачными имплантациями — описание случая. Гинекол Эндокринол. 2015; 31: 435– pmid: 25731193
- 9. Теобальд Р., СенГупта С., Харпер Дж. Статус доимплантационного генетического тестирования в Великобритании и США. Hum Reprod 2020; 35: 986–998. pmid: 32329514
- 10. Орвието Р., Преимплантационный генетический скрининг — необходимое РКИ, которое еще не проводилось.Репрод Биол Эндокринол 2016; 201: 14,35
- 11. Racowsky C., et al., Количество восьмиклеточных эмбрионов является ключевым фактором при выборе переноса на третий или пятый день. Fertil Steril, 2000; 73: 558–64. pmid: 10689013
- 12. Xiao J.S. и др., Когда доступен только один эмбрион, что лучше: перенести на 3-й день или продолжить рост? Reprod Biomed Online, 2019; 39: 916–923. pmid: 31685365