Биопсия бластомера/трофэктодермы / полярного тельца ооцита

Протокол ЭКО – сложный многоэтапный процесс, результатом которого в идеале должно стать рождение здорового ребенка. Одна из процедур, которая помогает будущим родителям и медикам достичь желаемого – предимплантационная генетическая диагностика плода (ПГД).

Что такое ПГД

Предимплантационная диагностика генетических заболеваний – это генетический анализ, который проводится на стадии культивирования эмбриона, до переноса его в полость матки будущей матери. Благодаря ПГД отклонения в геноме плода можно выявить еще до наступления беременности.

Таким образом, многократно уменьшается риск:

• рождения больного ребенка
• получения замершей беременности
• самопроизвольного аборта (выкидыша)
• иммунного конфликта между матерью и ребенком.

Биопсия (забор клеток) может проводиться на разных стадиях, в зависимости от каждого конкретного случая:

• на стадии яйцеклетки/зиготы (полярные тельца яйцеклетки исследуют обычно, если будущая мама является носителем аномалии)
• на стадии дробления эмбриона на 6-8 бластомеров, примерно на третий день его развития (один из бластомеров отбирают для исследования)
• на стадии бластоцисты – на пятый день развития эмбриона производят забор 5 – 7 клеток трофэктодермы, что дает более достоверные результаты).

Сегодня существуют разные методы ПГД, которые применяются в зависимости от того, каким оборудованием оснащена генетическая лаборатория:

• FISH (флуорисцентная гибридизация in situ (то есть на своем месте) – довольно доступный и быстрый метод диагностики, который, к сожалению, не позволяет сделать анализ всех хромосом
• CGH — Comparative Genomic Hybridization (сравнительная геномная гибридизация) – в этом случае на генетические отклонения могут быть диагностированы все 24 хромосомы в эмбрионе
• PCR — Polymerase chain reaction (полимерная цепная реакция) – метод, который позволяет диагностировать заболевания, в основе которых лежат доминантные и рецессивные мутации, определять хромосомные нарушения, антигены системы HLA, а также резус-фактор эмбрионов. Прежде, чем проводить PCR эмбриона, необходимо обследовать будущих родителей, а иногда и других близких родственников на наличие мутации
• NGS — Now-Generation Sequencing (высокопроизводительное секвенирование) – наиболее современный и дорогостоящий метод, который позволяет максимально точно проводить генетический тест, находя мутации в любом участке хромосом.

Биопсия бластомера

Биопсия бластомера – процедура, при которой в блестящей оболочке эмбриона (зоне пеллюцида) делают микроскопический прокол, через который при помощи биопсийной иглы отбирают для исследования один или два бластомера.

Безопасность процедуры доказана: после биопсии, в ходе которой изымается не более двух клеток, эмбрион продолжает нормально развиваться, сохраняя достаточное количество генетического материала.

Биопсия трофэктодермы

В ходе биопсии трофэктодермы (поверхностного слоя бластоцисты) изымаются клетки, из которых впоследствии формируются внезародышевые ткани – плацента. Извлечения внутренних клеток эмбриона в этом случае не требуется. Диагностика генетических нарушений в этом случае более точна, так как может проводиться при помощи большего количества клеток.

Какие заболевания позволяет выявить ПГД

Предимплантационная генетическая диагностика эмбрионов позволяет выявить до полутора сотен наследственных заболеваний – моногенных мутаций или генетический аномалий.

Среди последних – синдром Дауна, синдромы Эдвардса, Патау, Тернера, Кляйнфельда. Среди наиболее распространенных моногенных мутаций — гемофилия, фенилкетонурия, муковисцедоз, гемолгобинопания, наследственные миопатии, хорея Гемингтона, синдром Мартина-Белла, нейросенсорная тугоухость, невральная амиотрофия и другие.

Показания к проведению

В ряде случает проведение ПГД необходимо. Сдать генетический анализ нужно, если

• хотя бы один из родителей страдает генетическими болезнями или является их носителем
• генетические или хромосомные аномалии выявлены в сперматозоидах или яйцеклетках
• олигозооспермия, азооспермия, большой процент аномальных сперматозоидов обнаружены в отцовском материале
• возраст матери – больше 35 лет, а отца – больше 39 лет
• имеет место невынашивание беременности (два выкидыша и более)
• резус-конфликт привел к гибели ребенка
• в анамнезе есть несколько неудачных попыток ЭКО

Стоимость биопсии

Название услуги	Стоимость, руб
Биопсия бластомера	17000
Биопсия эмбриона	21500

Что такое биопсия эмбрионов?

Биопсия эмбрионов выполняется микроскопически при помощи микроманипуляторов. Сущность метода заключается в аспирации одного-двух бластомеров эмбриона. Сначала эмбрион помещают на каплю среды в чашку Петри и покрывают специальным раствором для предотвращения высыхания. С одной стороны эмбрион фиксируют прочно удерживающей пипеткой, а с другой стороны делают отверстие в оболочке эмбриона, чтобы через него провести аспирацию генетического материала.

Чтобы сделать отверстие в оболочке эмбриона применяют несколько методов:

1. механический – специальной иглой;
2. химический – специальный раствор;
3. лазерный луч.

После биопсии бластомера эмбрион возвращают в среду для культивирования. Биопсию бластомера чаще всего проводят на третьи сутки развития эмбриона, по достижении им 6-10 клеточной стадии развития. На 4 сутки жизни эмбриона биопсию проводить уже нежелательно, поскольку происходит процесс клеточной адгезии и «уплотнения» эмбриона. На клеточной поверхности эмбриона начинается экспрессия особых адгезивных молекул, вследствие чего клетки эмбриона слипаются друг с другом.

Биопсия в этом случае может привести к значительным повреждениям эмбриона.

На 5 день жизни эмбрион называется бластоцистой и имеет уже два вида клеток – внутреннюю клеточную массу и клетки трофоэктодермы. Можно проводить биопсию бластоцисты, однако при наличии у супружеской пары показаний для проведения преимплантационной генетической диагностики (ПГД) остается совсем немного времени. Ведь эмбрионы должны попасть в матку не позже шестого дня, иначе нормальная имплантация будет невозможна.

Все вышесказанное следует иметь в виду, выбирая центр репродуктивной медицины, если супружеской паре показана ПГД. Судьба планируемой беременности методом ЭКО во многом определяется опытом и другими профессиональными качествами сотрудников эмбриологической лаборатории.

Автор: Девятова Е.А.

Вся информация носит ознакомительный характер. Если у вас возникли проблемы со здоровьем, то необходима консультация специалиста.

Читайте также

Преимплантационная генетическая диагностика или преимплантационный генетический тест эмбриона (ПГД/ПГТ)

Позволяет выявить и предотвратить передачу эмбриону тяжелых заболеваний, вызванных генетическими и/или хромосомными аномалиями, которые иногда затрудняют наступление беременности или являются причиной выкидыша на раннем сроке беременности

ПГД — что это и почему этот тест важен?

 

Преимплантационная генетическая диагностика или преимплантационный генетический тест эмбриона (ПГД/ПГТ) — это генетический анализ эмбриона с помощью биопсии его клеток до переноса в матку будущей мамы. Этот анализ позволяет нам:

• Предотвратить перенос эмбрионов, которые из-за хромосомных аномалий могут спровоцировать выкидыш на раннем сроке или не приведут к беременности.
• Обнаружить и предвидеть на стадии эмбриона тяжелые заболевания, вызванные генетическими аномалиями. Обеспечить здоровое потомство и не допустить передачу болезней будущим поколениям.

Хромосомные и моногенные аномалии — что это?

У здоровых людей в геноме 46 хромосом — 23 от папы и 23 от мамы, которые несут в себе наследственные признаки. В геноме 22 аутосомы и одна пара половых хромосом, которые определяют пол (XX у женщин и XY у мужчин). Каждая хромосома — это «большая книга», содержащая всю генетическую информацию, которая указывает как должны выглядеть и работать клетки нашего организма. 

Но иногда при разделении клеток происходят ошибки, которые могут привести к увеличению числа хромосом или, наоборот, к их недостаточному количеству.

Такие хромосомные аномалии делятся на следующие виды:

• Численные — лишние или недостающие хромосомы;
• Структурные — у одной из хромосом не хватает какой-либо части, или есть лишняя часть, или эта часть находится в другой хромосоме, или возникает инверсия хромосом; 

Аномалия в числе или структуре хромосом эмбриона — это самая частая причина отторжения при имплантации или выкидыша на ранней стадии. Поэтому ПГТ-A анеуплоидий — очень полезный анализ в диагностике и лечении в нашем Отделе по вопросам отторжения эмбрионов при имплантации. 

Иногда аномалия происходит в конкретном гене и влияет на работу организма, вызывая моногенное заболевание, которое передается следующему поколению.

Виды преимплантационной генетической диагностики

1. ПГТ-A хромосомных аномалий. Преимплантационная генетическая диагностика эмбриона для обнаружения анеуплодий.
2. НЕИНВАЗИВНЫЙ ПГТ-A хромосомных аномалий.
3. ПГТ-M моногенных заболеваний — преимплантационный генетический тест для обнаружения моногенных заболеваний
4. ПГТ-SR для диагностики структурных аномалий

Далее подробно описывается каждый тест:

1. ПГТ-A — преимплантационный генетический тест для анализа анеуплодий (хромосомных аномалий) 

Избегая переноса таких эмбрионов, мы помогаем родителям не столкнуться с вынашиванием ребенка с генетическим заболеванием, избежать отторжения эмбриона или выкидыша на ранней стадии беременности.   Например, лишняя копия 21-ой хромосомы является причиной синдрома Дауна (трисомия 21). Другие распространенные хромосомные нарушения (лишняя или недостающая хромосома) — трисомия 18, трисомия 15 или 47, и XXY (Синдром Клайнфельтера).

Кому рекомендуется ПГТ-A?

•  
• Если будущая мама старше 35 лет.
• В случаях неоднократного самопроизвольного прерывания беременности и/или отторжения эмбриона в двух или более циклах ЭКО.
• Пациенты с диагностированными хромосомными аномалиями.

Пошаговое описание ПГТ-A

1. На приеме гинеколог разработает план процедуры, которая начнется в первый день менструации.
2. Стимуляция яичников для получения ооцитов.
3. Получение эмбрионов с помощью цикла ЭКО.
4. Когда эмбрион достигнет 5-6 дней развития, наступит стадия бластоциста: мы проведем забор клеток с помощью биопсии эмбриона.
5. Криоконсервация эмбрионов до момента переноса.
6. Обработка биопсии для хромосомного анализа и постановки диагноза.
7. После получения результата проводится подготовка эндометрия матери и переноса эмбриона без хромосомных нарушений, при этом исключаются аномальные эмбрионы и неудачные переносы.

 

2. Неинвазивный ПГТ-A

Новейший вариант ПГТ-A — это неинвазивный ПГТ-A, который заключается в хромосомном скрининге эмбриона. Вместо анализа клеток, полученных при биопсии эмбриона, изучается ДНК, выделяемая эмбрионом в питательную среду. Мы проверили в лабораторных условиях, что в процессе развития «в пробирке» эмбрион выделяет ДНК в питательную среду. Мы можем проанализировать ее, чтобы установить, является ли эмбрион эуплоидным (нормальный набор хромосом) или анеуплодным (хромосомная аномалия). В первых исследованиях получаются результаты, аналогичные ПГТ-A с биопсией, хотя в настоящий момент этот вид диагностики не считается таким же точным и надежным, как традиционный ПГТ-A. По этой причине неинвазивность метода соседствует с некоторой степенью недоверия к результатам.

Кому рекомендуется ПГТ-A?

Родителям, которым по этическим и эмоциональным причинам сложно проводить биопсию эмбриона.

 

3. ПГТ-M — преимплантационный генетический тест для обнаружения моногенных заболеваний

Генетический анализ эмбрионов будущих родителей — носителей наследственного заболевания. Он позволяет обнаружить аномалию или мутацию гена, который вызывает болезнь.   Первый шаг: генетическое исследование будущих родителей для выявления ошибки (мутации) гена, который вызывает болезнь (информативное исследование). После получения генетической информации, на следующем шагу мы выполняем информативное обследование, которое позволит нам создать специфическую стратегию диагноза для борьбы с заболеванием этой семьи. Болезни могут быть аутосомно-рецессивные, аутосомно-доминантные и связанный с Х-хромосомой, например: синдром ломкой X-хромосомы, гемофилия А, муковисцидоз, болезнь Гентингтона, серповидноклеточная анемия, синдром Марфана и т. д.

Кому рекомендуется ПГТ-M?

• Парам, где один из партнеров является носителем генетического заболевания с аутосомно-доминантным типом наследования (50% детей будут страдать этим заболеванием).
• Парам, в которых женщина является носителем генетического заболевания, связанного с полом (50% детей будут страдать этим заболеванием).
• Парам, в которых оба партнера являются носителями генетического заболевания с аутосомно-рецессивным типом наследования (25% детей будут страдать этим заболеванием).

 

Пошаговое описание ПГТ-M

1. В первую очередь, необходим генетический анализ родителей. Мы должны изучить историю болезни и определить мутацию гена, которая вызывает заболевание.
2. Затем проводится информативное исследование, в ходе которого мы разработаем стратегию для определения аномалии в эмбрионах. Зачастую в этом исследовании должны участвовать здоровые и больные члены обеих семей.
3. Запускается цикл ЭКО. Когда у женщины начинается менструация, производится стимуляция яичников, и через 15-25 дней проводится забор ооцитов.
4. В лаборатории мы оплодотворим их спермой партнера или донора и будем выращивать до 5-6-го дня, т. е. до стадии бластоциста. В этот момент проводится биопсия эмбриона — забор нескольких клеток для генетического анализа. Эмбрионы замораживаются до получения результатов.
5. Биопсия обрабатывается для генетического анализа, и мы ставим диагноз.
6. После получения результата проводится подготовка эндометрия матери и перенос эмбриона без аномалий исследованного гена.

 

4. ПГТ-SR — преимплантационный генетический тест для обнаружения структурных аномалий

Тест обнаруживает эмбрионы с аномальными хромосомами — «разорванными» или с неправильным соединением сегментов. Такие структурные хромосомные аномалии бывают разного типа: делеции, транслокации, дупликации, инсерции, инверсии и кольца. Заболевание проявляется, когда невозможна правильная экспрессия гена из-за аномалии, которая влияет на структуру хромосомы.

Виды структурных хромосомных аномалий

Сбалансированные реципрокные транслокации

Транслокация — тип хромосомной аномалии, при которой одна из частей хромосомы отрывается и присоединяется к другой хромосоме. Реципрокные транслокации возникают при переносе сегментов между двумя хромосомами с изменением конфигурации, но не количества хромосом.

Реципрокные транслокации считаются сбалансированными, если при их формировании не происходит ни потеря, ни добавление генетического материала. Это случается, когда участок хромосомы меняет свое положение в геноме.

Несбалансированная реципрокная транслокация

В этом случае происходит потеря или добавление генетического материала. Также изменяется количество копий на хромосомном участке. Можно найти участки одной хромосомы в другой.

Робертсоновские транслокации

Происходит слияние двух акроцентрических хромосом (с одним плечом) и потеря одного из концов, при этом две хромосомы объединяются в одну. Носители имеют 45 хромосом вместо 46, и повышается риск трисомии.

Делеции

Потеря участка ДНК хромосомы.

Дупликация

Сегмент хромосомы повторяется вдоль исходного участка и создает одну или несколько копий гена или части хромосомы.

Инсерция

Часть хромосомы оказывается в необычном месте в той же или в другой хромосоме. Если нет ни добавления, ни потери генетического материала, рождается здоровый ребенок.

Парацентрические инверсии

Инверсии возникают, когда часть хромосомы ломается в двух точках, внутренний сегмент поворачивается на 180° и снова соединяется с хромосомой. При парацентрической инверсии инвертированный фрагмент лежит по одну сторону от центромеры.

Перицентрические инверсии

Центромера находится внутри инвертированного фрагмента

Кольца

Края хромосомы разрываются и соединяются, формируя кольцо. Это вызывает генетические заболевания, чаще всего синдром Шерешевского-Тёрнера.

Кому рекомендуется такое исследование?

Парам, в которых один из партнеров является носителем структурной хромосомной аномалии. 

Пошаговое описание ПГТ-SR

1. На первом приеме гинеколог оценит ваш случай.
2. Возможно будет необходим тест на обнаружения структурных аномалий.
3. На следующем приеме будет проведена диагностика и разработка процедуры, которая начнется в первый день менструации.
4. Стимуляция яичников для получения ооцитов.
5. Получение эмбрионов с помощью цикла ЭКО.
6. Когда эмбрион достигнет 5-6 дней развития, наступит стадия бластоциста: мы проведем забор клеток с помощью биопсии эмбриона.
7. Криоконсервация эмбрионов до момента переноса.
8. Обработка биопсии для хромосомного анализа и постановки диагноза.
9. После получения результата проводится подготовка эндометрия матери и переноса эмбриона без хромосомных нарушений, при этом исключаются аномальные эмбрионы и неудачные переносы.

 

Преимущества ПГД/ПГТ

Улучшенный отбор эмбрионов: мы будем знать, у каких эмбрионов нет хромосомных аномалий, и какие гарантируют рождение здорового ребенка. 

Предотвращение переноса эмбрионов, которые не приживутся. Существуют генетические нарушения, которые несовместимы с жизнью и затрудняют развитие эмбриона на раннем этапе или даже имплантацию в матку. 

Благодаря анализу, мы не будем переносить или имплантировать эмбрионы, которые в дальнейшем могут привести к выкидышу или рождению ребенка с каким-либо синдромом. 

Уменьшение времени ожидания успешной беременности. Мы не переносим эмбрионов, которые не гарантируют рождение здорового ребенка или не будут развиваться. 

Снижение затрат. Нет необходимости замораживать и переносить генетически нездоровых эмбрионов, даже если они выглядят здоровыми. Таким образом, мы избегаем лишних расходов на перенос эмбрионов, которые точно не приведут к успешной беременности.

Психологическое здоровье. Гарантия здорового эмбриона снижает возможность выкидыша и эмоциональное напряжение для пары в таких случаях.

Недостатки ПГД/ПГТ

Это инвазивная процедура, так как проводится биопсия эмбриона для генетического анализа. Кроме успешного опыта применения этой техники, существует неинвазивный ПГТ-A, который анализирует ДНК в питательной среде, где развивается эмбрион. Он также исследует количество хромосом, хотя на данный момент точность этого метода ниже. 

Цикл без переноса. Иногда все эмбрионы имеют хромосомные аномалии, и перенос не проводится. С одной стороны, это ведет к прерыванию процедуры, а с другой, эмоционально воздействует на будущих родителей. 

Мозаицизм эмбриона. В настоящее время, благодаря развитию различных генетических анализов, мы можем знать, отличаются ли клетки эмбриона генетически (мозаицизм). Остается определить, влияет ли этот факт на эмбрион каким-либо образом. Этому вопросу посвящены различные исследовательские работы Instituto Bernabeu. 

Скрининг. Биопсия эмбриона анализирует внешнюю часть и не затрагивает часть, которая приводит к рождению ребенка. Многие научные исследования доказали высокий уровень их взаимосвязи. Взятый материал содержит информацию обо всем эмбрионе. 

Трудность в принятии решения. Многим парам по этичным и эмоциональным причинам больно принять решение об исследовании своего эмбриона. В этом случае они могут провести неинвазивный ПГТ-A. Кроме того, наша клиника предлагает профессиональную психологическую помощь.

Ученые: диагностика эмбрионов не повышает шансы родить ребенка после ЭКО — Социальная ответственность

Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) не повышает шансы на рождение ребенка. Таковы данные исследования, опубликованного в журнале Human Reproduction, сообщает The Independent. Эта процедура проводится после экстракорпорального оплодотворения с целью «отсеивания» эмбрионов с генетическими нарушениями перед внедрением в слизистую оболочку матки.

С возрастом в организме повышается риск изменения числа хромосом в половых клетках. У женщин старше 40 лет эта проблема затрагивает свыше половины яйцеклеток. Генетические аномалии — наиболее распространенная причина выкидышей и мертворождений после процедуры экстракорпорального оплодотворения.

В исследованиях приняли участие 396 женщин 36-40 лет, которые делали ЭКО в девяти клиниках семи разных стран. Половина пациенток прошла ПГД, а половина ограничилась стандартной процедурой экстракорпорального оплодотворения. Число живорождений оказалось равным в обеих группах: 24%. Правда, исследователи признали, что у женщин, прошедших ПГД, значительно реже случались выкидыши. И, как считают специалисты, на этом могут спекулировать клиники, предлагающие эту процедуру.

«Многие учреждения, делающие ЭКО, могут ошибочно трактовать это в пользу ПГД-A (преимплантационной генетической диагностики на анеуплоидию — нестандартное число хромосом)», — заметила профессор репродуктивной медицины Саутгемптонского университета Ин Чон, не принимавшая участия в исследовании. По словам специалиста, новая работа ученых не дает однозначных ответов на поставленные вопросы, и поэтому использовать полученные данные нужно «с осторожностью». Как считает Чон, без убедительных доказательств эффективности процедуры биопсия эмбриона для проведения ПГД — «плохая клиническая практика», и предлагать ее пациенткам не стоит. «Мы до сих пор до конца не понимаем биологию развития яйцеклетки и эмбриона и, таким образом, можем принести больше вреда, чем пользы», — пояснила специалист.

Финансирование ЭКО в государственных клиниках, управляемых Национальной службой здравоохранения (NHS), во многих регионах Британии сокращается. И все больше пар обращается в частные клиники. ПГД — одна из широкого спектра дополнительных процедур и тестов, которые, по заверению ряда врачей, помогают достигнуть максимальных результатов. Некоторые клиники оценивают вероятность успешной беременности в случае проведения ПГД в 98%. Процедуру, которая обходится в £2 тыс. ($2,6 тыс.), активно рекламируют.

«Слишком часто пары, которым требуется ЭКО, поддаются обману и «клюют» на различные виды тестов и вспомогательной терапии, эффективность которых не доказана, а число  поражает», — заявил специалист по акушерству и гинекологии в Уорвикском университете профессор Ян Брозенс. По его мнению, новое исследование, в котором он также не принимал участие, было тщательно продумано и качественно проведено, дав однозначный ответ на вопрос об эффективности ПГД-А с точки зрения шансов на рождение ребенка после этой процедуры.

Материал предоставлен проектом +1.

 

Предимплантационная генетическая диагностика (ПГД)

Процедура проведения ПГД

Все типы ПГД проводятся в клинике по следующей схеме. Сначала проводится стимуляция суперовуляции у женщины, пункция фолликулов и оплодотворение полученных яйцеклеток. Все полученные эмбрионы культивируют до стадии бластоцисты (это — стадия, на которой эмбрион имплантируется в эндометрий женщины).

Бластоциста состоит в среднем из 100 клеток. Часть клеток образуют трофэктодерму (будущая плацента), часть — внутреннюю клеточную массу (будущий плод). Эмбриологи проводят биопсию трофэктодермы, т.е. берут из нее несколько (3-5) клеток, не повреждая будущий плод, и отправляют на генетический анализ. Эмбрион замораживают. Процедура проводится на высокотехнологичном оборудовании под микроскопом при помощи микроманипуляторов и специальной лазерной установки. При этом и эмбрион, и часть клеток, отправленная на генетический анализ, маркируются строго в соответствии с принадлежностью одного к другому.

После этого часть клеток трофэктодермы анализируется генетиками на предмет наличия хромосомных аномалий, моногенных заболеваний или транслокаций. По каждому эмбриону генетик дает заключение, на основании которого репродуктолог совместно с пациентом смогут принять решение о переносе конкретного эмбриона. В среднем процедура ПГД занимает 1 месяц.

Преимущества ПГД

Какие есть альтернативы ПГД? Существуют технологии, которые также могут рассказать о генетических отклонениях плода.

Неинвазивное пренатальное тестирование, или НИПТ. Его можно выполнять с 9 недели беременности. К этому сроку в крови матери уже находится достаточное количество ДНК плода для того, чтобы оценить наличие/отсутствие хромосомных аномалий. После забора крови из вены генетик даёт заключение, на основании которого родители вместе с врачом могут принять решение о прерывании беременности на раннем сроке.

Биопсия хориона — инвазивный метод диагностики, который заключается в заборе небольшого образца тканей зарождающейся плаценты. Плацента в большинстве случаев имеет такой же генетический материал, что и плод. Поэтому по результатам анализа плацентарной ткани можно сделать вывод о генетическом статусе плода. Ткани забирают при помощи иглы, прокалывая плодный пузырь. В связи с чем может возникать риск нарушения течения беременности и даже выкидыша.

Амниоцентез — анализ околоплодных вод. Как и биопсия хориона, амниоцентез — это инвазивный метод. Только здесь генетический статус определяется по околоплодным водам, образец которых забирается при помощи прокола в животе под УЗ-контролем.

Можно сделать вывод о том, что ПГД имеет неоспоримые преимущества по сравнению с альтернативными методами диагностики:

• преимплантационная генетическая диагностика даёт возможность узнать генетический статус эмбриона до наступления беременности и последующей необходимости прерывания при неблагоприятных результатах;
• ПГД позволяет выбрать очередность переноса эмбрионов, чтобы уменьшить время до наступления беременности. ​

Специалисты направления

ПГД эмбриона при ЭКО в Москве

Подготовка к ПГТ Проведение ПГД назначается после консультации репродуктолога, генетика и выполненного анализа на кариотип у обоих партнеров. Забор материала для исследования проводят из эмбрионов, полученных методом экстракорпорального оплодотворения. При носительстве моногенного заболевания необходим предварительный этап ПГТ-М, продолжительностью до 60 дней. Оценка результатов генетического тестирования По окончании исследования генетик направляет репродуктологу результаты ПГД, а также рекомендации по переносу определенных эмбрионов. В итоге пациент получает информацию о хромосомном наборе каждого проанализированного эмбриона. Хромосомные сбои показывают вероятность рождения ребенка с различными синдромами. К примеру, лишняя хромосома в 21-ой паре свидетельствует о риске синдрома Дауна, в 13-ой паре — синдрома Патау, а в 18-ой — синдрома Эдвардса. Помимо этого, такие генетические сбои могут привести к нежизнеспособности эмбриона, прерыванию беременности либо осложнениям ее течения. Результат тестирования показывает такие патологии, как муковисцидоз, нейросенсорная тугоухость, генетические миопатии, спинальная мышечная атрофия и другие. Основываясь на этих результатах репродуктолог совместно с пациентом разрабатывают дальнейшую тактику в принятии решения об эмбриотрансфере. ПГД — это путь к рождению здорового малыша. При наличии показаний к проведению ПГД планирующей паре рекомендуется получить консультацию генетика, пройти тестирование эмбрионов перед переносом и обеспечить себе шансы на здоровое потомство. Для получения подробной информации о проведении ПГД в Центре репродуктивного здоровья «СМ-Клиника» звоните по телефону +7 (495) 975-78-89. Как и когда проводится ПГД Материал для генетического теста забирают путем биопсии внешней оболочки эмбриона (трофоэкодермы). Для этого отбирают трофэктодермы на 5-ый день развития, достигшие стадии бластоцисты. К этому моменту он имеет порядка двух сотен клеток. Биопсию выполняет наш квалифицированный эмбриолог. При этом от каждой трофэктодермы отделяют по несколько клеток и направляют взятые образцы в лабораторию, а их самих замораживают. Процедура для самого эмбриона безопасна, поскольку к моменту взятия биоптата каждая клетка бластоцисты является полипотентной, то есть способной дифференцироваться в целостный организм.

Виды ПГД В нашей клинике возможно проведение двух видов преимплантационного генетического тестирования: ПГТ-А тест эмбрионов на анеуплоидии (хромосомные аномалии) При этом методе анализируются 23 пары хромосом, которые в норме должны присутствовать в каждой клетке. Обнаружение третьей хромосомы в одной из пар (трисомии) свидетельствует о наличии различных патологий у будущего ребенка (синдромы Дауна, Патау, Эдвардса). Для исследования используется технология секвенирования нового поколения, которая основана на высокоскоростной расшифровке последовательности ДНК. Метод позволяет отобрать для эмбриотрансфера только здоровые бластоцисты без хромосомных нарушений. ПГТ-М тестирование на моногенные заболевания Этот вид тестирования проводят способом полимеразной цепной реакции. Его суть заключается в копировании выбранного участка ДНК при помощи специальных ферментов. Конкретный способ тестирования подбирается индивидуально, совместно с репродуктологом и генетиком. Обе методики могут выполняться одновременно и, дополняя друг друга, давать наиболее точный результат прогноза. Длительность проведения процедуры составляет 12 рабочих дней с момента получения биоптата. Возможности ПГД Своевременно проведенное генетическое тестирование эмбриона дает возможность: повысить вероятность успеха протокола ЭКО; уменьшить риск невынашивания беременности на ранних сроках; минимизировать риск подсадки эмбриона с генетическими и хромосомными аномалиями; снизить вероятность мутаций; потенциально уменьшить количество попыток ЭКО, необходимых для успешного зачатия. Своевременно проведенная генетическая диагностика эмбрионов – это возможность избавить будущих родителей от одного из страхов – страха рождения ребенка с хромосомными аномалиями. Опытные генетики Центра репродуктивного здоровья «СМ-Клиника» бережно и точно проведут обследование, повышая шансы на успех ЭКО.

Генетическая диагностика

Благодаря тому, что в программах ЭКО специалисты могут наблюдать за яйцеклетками и эмбрионами, появилась возможность исследовать их хромосомы и гены и, таким образом, диагностировать многие наследственные заболевания.

Так как диагноз при этом ставится до переноса эмбриона в полость матки, эти исследования получили название «предимплантационная генетическая диагностика» (Preimplantation Genetic Diagnostics – PGD) — диагностика до прикрепления (имплантации) эмбриона (в эндометрий), т. е. до наступления беременности.

Предимплантационная генетическая диагностика (ПГД) – ранняя форма  пренатальной диагностики, разработанная в конце 1980-х годов для помощи парам, находящимся в группе риска по возможности передачи наследственных заболеваний потомству. Если у таких пар есть желание получить здоровое потомство, единственным, помимо ПГД, возможным вариантом для них служит пренатальная диагностика с применением амниоцентеза или цитогенетического исследования ворсин хориона (ЦИВХ). Основным недостатком пренатальной диагностики является то, что при выявлении у плода заболевания перед парой встает дилемма, прерывать ли беременность или пролонгировать ее, зная, что ребенок будет страдать наследственной болезнью. ПГД предоставляет некоторым парам альтернативу, поскольку диагностика производится на преимплатационных эмбрионах и пациентке переносятся лишь здоровые эмбрионы. Таким образом, беременность начинается с осознания факта, что плод не будет болен.

Показания к проведению предимплантационной генетической диагностики:

• возраст женщины более 40 лет;
• мужское бесплодия, при котором подтверждены анеуплоидии в сперматозоидах;
• повторяющиеся выкидыши;
• несколько неудачных попыток ЭКО;
• определение пола, включая наличие заболеваний, связанных с полом;
• наличие у одного из родителей хромосомных транслокаций.

Как проводится предимплантационная диагностика наследственных заболеваний?

У ооцитов и эмбрионов клеточную биопсию можно осуществить на трех различных этапах:

1. Ооцит/зигота (биопсия полярного тельца).

2. 6-10-клеточный эмбрион на стадии дробления (биопсия на стадии дробления).

3. Эмбрионы на стадии бластоцисты (биопсия бластоцист).

Биопсия на стадии дробления является наиболее широко применяемой в мире методикой. При биопсии полярного тельца исследуются лишь материнские хромосомы.

От каждого из родителей ребенок получает только половину набора хромосом. Каждая клетка содержит полный набор хромосом, и незрелые половые клетки не являются исключением. Каким же образом оказывается, что в момент слияния половые клетки имеют лишь половинный набор хромосом?

У сперматозоидов это происходит от того, что при созревании они делятся, и каждый получает половину из полного набора. Яйцеклетка в процессе созревания сбрасывает ровно половину своего хромосомного набора в «мусорную корзинку» — так называемое полярное тельце. Полярное тельце можно забрать и изучить его гены и хромосомы, и в результате исследования определить, здорова яйцеклетка или нет, не повредив при этом саму яйцеклетку. Оплодотворяют только здоровые яйцеклетки. Это и обеспечивает развитие здорового плода.

В некоторых случаях для предимплантационной диагностики производят биопсию самого эмбриона. При биопсии из 6-8 клеточного эмбриона удаляется одна или две клетки (бластомеры), которые и подвергают исследованию. Доказано, что все эти манипуляции абсолютно безвредны для будущего ребенка и никак не сказываются на его развитии и здоровье.

ПГД можно сравнить с пренатальной диагностикой. Биопсия эмбриона эквивалента ЦИВХ или амниоцентезу, а диагностику бластомера можно приравнять к пренатальной диагностике. Поскольку здесь имеет место применение двух методик, биопсии и диагностики, группа ПГД состоит из группы ИКСИ и группы генетиков. Методика биопсии эмбрионов должна выполняться компетентным эмбриологом, но диагностика должна проводиться отделением генетики.

Какие наследственные заболевания можно исключить с помощью предимплантационной диагностики?

Уже сегодня, благодаря имеющимся методикам, возможна диагностика большого числа генетических заболеваний: муковисцедоза, гемофилии, таласемии, болезни Тея-Сакса, дефицита 1-антитрипсина и других.

Кроме этого, предимплантационная диагностика позволяет предупредить рождение ребенка с уродствами и болезнью Дауна у женщин старше 35 лет, которые в связи с возрастом имеют высокий риск рождения ребенка с такими отклонениями.

Важным моментом является также стоимость процедуры, поскольку ряд технологий клеточной диагностики являются весьма затратными. К примеру, стоимость зондов для FISH может равняться стоимости цикла ЭКО, что делает ПГД весьма дорогой манипуляцией. В Великобритании некоторые органы здравоохранения финансируют циклы ПГД, в других странах также отмечено применение государственных средств или фондов страховых компаний для данной цели; если оплачивать процедуру приходится самим пациентам, они могут выбрать пренатальную диагностику.

Наиболее логичным и наиболее мотивированным представляется применение ПГД в группе пациенток, страдающих бесплодием или привычным невынашиванием беременности. Пациенты, являющиеся носителями хромосомных аномалий, представляют собой одну из сложнейших групп для лечения в связи с ограниченным количеством доступных зондов и отмечаемым у них высоким уровнем аномальных эмбрионов.

Этика и законодательство

Законодательство в отношении ПГД различается в разных странах. Многие страны приняли законы, регламентирующие ПГД или же ПГД и исследования эмбрионов, в других же таких законов нет. Тем не менее, ряд стран запретили ПГД? Что поразительно, принимая во внимание, цель ПГД – устранить необходимость в прерывании беременности. Основным аргументом против ПГД является возможность злоупотреблений, к примеру, определения пола эмбрионов для балансирования семьи или для выбора определенных характеристик ребенка, так называемых «дизайнерских детей». Злоупотребление пренатальной диагностикой отмечалось в некоторых странах на протяжении многих лет, но, как и при всех медицинских манипуляциях, положительное должно перевешивать отрицательное; технологии не следует запрещать лишь из-за риска злоупотребления ими. Законодательство, регламентирующее применение ПГД, должно решить эти вопросы. В Великобритании Управление по контролю за человеческим оплодотворением и эмбриологией, лицензирующее все центры ЭКО, запретило определение пола эмбрионов с целью балансирования состава семьи; оно также выдает лицензии всем центрам ПГД. Следует помнить, что ПГД не является простой процедурой, прежде всего из-за ее высокой инвазивности и низкой частоты беременности. Для пар, желающих получить «дизайнерского ребенка», пренатальная диагностика является более легким путем, при котором возможна единовременная диагностика многих заболеваний.

Будущее ПГД

Развитие ПГД в последние 10 лет было весьма медленным. По-прежнему невозможно поставить диагноз муковисцидоза или болезни Дауна по одной клетке, и список диагностируемых заболеваний весьма невелик.  ПГД оказалась более сложной манипуляцией, чем предполагалось: концепция единственной клетки как репрезентативной по отношению ко всему эмбриону была размыта и осложнена открытием высокой частоты у эмбрионов человека хромосомного мозаицизма. К сожалению, несколько раз имели место диагностические ошибки, в основном обусловленные хромосомным мозаицизмом, выпадением аллеля или контаминацией (возможно, клетками кумулюса или сперматозоидами). Тем не менее, недавние исследования показали, что вероятность ошибки при диагнозе муковицидоза составила 0,3-5,6% в зависимости от того, 1 или 2 клетки были исследованы; этот риск можно снизить до 0,015-1,25%, рассматривая как пригодные к переносу лишь гомозиготные непораженные эмбрионы.

Процесс биопсии эмбриона — ЭКО

Выделение ценной информации, полученной при биопсии эмбриона

Являясь ведущим центром репродукции в Канзасе, Центр репродукции Среднего Запада стремится предоставлять мужчинам и женщинам самые современные услуги по лечению бесплодия. Дэн Гелбах, доктор медицины, использует проверенные методы лечения, такие как внутриматочная инсеминация, или ВМИ, и экстракорпоральное оплодотворение, или ЭКО, чтобы помочь нашим пациенткам достичь здоровой беременности. Доктор Гельбах также использует передовые технологии, такие как биопсия эмбриона, чтобы обеспечить нашим пациентам наилучшие шансы на успех.

Обзор процесса ЭКО

Прежде чем рекомендовать какое-либо лечение, д-р Гельбах назначит полную оценку фертильности, чтобы выявить любые препятствия на пути к беременности. Если тесты покажут, что необходимы вспомогательные репродуктивные технологии, наш центр репродуктивной медицины в Канзасе может использовать ЭКО. В процессе ЭКО наши опытные эмбриологи объединяют яйцеклетку и сперму в лаборатории. Эти клетки в конечном итоге развиваются в эмбрионы, которые доктор Гельбах перенесет в матку. Перед переносом эмбрионов наши эмбриологи могут выполнить биопсию эмбриона, чтобы определить, какие эмбрионы являются хромосомно нормальными.

Почему наш центр репродуктивного здоровья в Канзасе использует биопсию эмбриона

Технологические достижения позволяют доктору Гельбаху не только помогать нашим пациентам в зачатии, но и делать все возможное, чтобы обеспечить рождение здоровых младенцев. С помощью доимплантационного генетического скрининга, или PGS, наш эксперт из Центра фертильности в Канзасе может идентифицировать хромосомно нормальные эмбрионы и переносить только здоровые эмбрионы в матку. В случаях, когда один или оба партнера являются носителями определенных наследственных заболеваний, доктор Гельбах использует доимплантационную генетическую диагностику или ПГД, чтобы предотвратить передачу этих заболеваний любому потенциальному потомству.

Прерывание процесса биопсии эмбриона

Биопсия эмбриона позволяет доктору Гельбаху собрать необходимый генетический материал для анализа. С помощью биопсии эмбриона эмбриолог удаляет несколько клеток из внешнего слоя эмбриона, которые в конечном итоге становятся плацентой. Процесс состоит из следующих шагов:

• На 5, 6 или 7 день развития эмбриолог удаляет клетки из каждого эмбриона и отправляет биопсию для генетической оценки.
• Лаборатория определяет, есть ли у эмбриона 23 пары интактных хромосом.
• Для анализа PGD генетики будут искать маркеры, указывающие на наличие конкретного наследственного заболевания.
• Доктор Гельбах составит график переноса эмбрионов и будет использовать только непораженные эмбрионы.

В Центре репродукции Среднего Запада мы знаем, что вашей конечной целью является здоровый ребенок. Доктор Гельбах использует передовые технологии, в том числе биопсию эмбриона, чтобы помочь обнадеживающим родителям добиться успеха. Для получения дополнительной информации или записи на прием обращайтесь в офис нашего центра репродуктивного здоровья в Канзасе.

Если ЭКО, то ПГД или ПГС? Что генетическое тестирование может рассказать вам о вашем эмбрионе

Если вы кандидат на экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО), вы, вероятно, узнали много новой информации, прежде чем принять решение, и это, вероятно, включает в себя совершенно новый словарный запас. Есть еще несколько сокращений, которые вам следует знать, если вы еще этого не сделали: PGD и PGS, которые представляют собой предимплантационные генетические тесты. Хотя эти термины могут использоваться как синонимы, на самом деле они разные.

Преимплантационное генетическое тестирование проводится перед переносом эмбриона во время ЭКО, чтобы врачи могли выбрать один без известной или предполагаемой генной проблемы (PGD) или один без аномального количества хромосом (PGS). Цель как PGD, так и PGS — увеличить шанс выбора здорового эмбриона, из которого вырастет здоровый ребенок. Эти достижения могут иметь реальное значение, поскольку врожденные дефекты возникают почти в одной из 20 беременностей, варьируя по степени тяжести от незначительных анатомических аномалий до обширных генетических нарушений, включая умственную отсталость.Щелкните здесь, чтобы узнать больше о генетическом тестировании на врожденные дефекты.

Итак, если вы проходите ЭКО или думаете об этом, вот дополнительная информация о том, подходит ли вам такой тест.

Что такое ПГД или преимплантационная генетическая диагностика?

PGD — это метод, который предоставляет информацию о составе генов клеток, обнаруженных в эмбрионе (оплодотворенной яйцеклетке). Биопсия эмбриона удаляет около 3-8 клеток из каждого 5-дневного эмбриона (бластоцисты), затем клетки отправляются в лабораторию для тестирования.Эмбрион обычно замораживают и имплантируют позже. ПГД можно использовать для выявления примерно 2000 наследственных заболеваний с одним геном, а точность определения пораженных и незатронутых эмбрионов составляет 98 процентов.

Кто больше всего выигрывает от PGD?

PGD обычно используется парами, в семейном анамнезе которых имеется серьезное или смертельное заболевание, которые беспокоятся о передаче его своим детям. ПГД помогает путем поиска специфических маркеров определенного заболевания, например, заболеваний одного гена, включая муковисцидоз и серповидно-клеточную анемию.Он также используется, когда в семейном анамнезе есть расстройства, связанные с полом, включая синдром ломкой Х-хромосомы и мышечную дистрофию Дюшенна. Родители также могут использовать ПГД для поиска подходящих стволовых клеток для других братьев и сестер, нуждающихся в трансплантации костного мозга.

Что такое ПГС или преимплантационный генетический скрининг?

PGS используется для определения того, содержат ли клетки эмбриона нормальное количество хромосом, которое составляет 46. После роста эмбриона в лаборатории его обычно берут на 5-й день (стадия бластоцисты).Затем несколько клеток эмбриона отправляются во внешнюю лабораторию, которая использует технологию для подсчета количества хромосом в каждой клетке. Эмбрионы с нормальным числом хромосом являются «эуплоидными», а эмбрионы с ненормальным числом — «анеуплоидными». Цель PGS — избежать переноса аномального эмбриона в матку.

Кто больше всего выигрывает от PGS?

Все пары подвержены риску рождения аномальных эмбрионов. Этот риск значительно увеличивается с возрастом женщины. Аномальный эмбрион почти всегда не может имплантироваться или, если это происходит, заканчивается биохимической беременностью (только гормональное свидетельство беременности), выкидышем, гибелью плода на более поздних сроках беременности, мертворождением или рождением ребенка с аномалиями.

Пары, подвергающиеся ЭКО, могут выбрать ПГС, потому что у них тяжелое бесплодие по мужскому фактору, повторяющиеся неудачи ЭКО, пожилой возраст или очень большое количество эмбрионов. PGS может использоваться теми, кто переживает множественные выкидыши, у которых могут быть разные типы транслокаций, когда часть одной хромосомы отрывается и прикрепляется к другой хромосоме, что приводит к увеличению или потере генетического материала клетки.

Использование PGS быстро растет благодаря поддержке многих врачей и пациентов, которые хотят перенести нормальный эмбрион.По некоторым оценкам, PGS используется почти в 35% всех случаев ЭКО и вскоре может быть использован в половине всех циклов. И это несмотря на цену: стоимость PGS колеблется от 3000 до 7000 долларов и полностью оплачивается пациентом — даже если страховка покрывает стоимость лечения ЭКО.

Опасения по поводу PGS

Помимо стоимости, многие критично относятся к тому, как часто используется PGS. Хотя он часто выявляет эмбрионы с более высокой вероятностью имплантации и превращения в ребенка, у него есть недостатки: при биопсии эмбриона для удаления клеток для тестирования возникает небольшое повреждение; системы генетического тестирования иногда не работают; а замораживание может повредить эмбрион.Что еще более важно, состояние, называемое мозаицизмом, когда некоторые клетки в общем нормальном эмбрионе являются аномальными или некоторые из клеток в целом аномального эмбриона являются нормальными, может привести к результатам тестов, которые не точно отражают хромосомный статус эмбриона.

До сих пор ведутся споры о том, как часто эти проблемы приводят к неправильной классификации эмбриона — диапазон составляет 10-40 процентов при средней оценке 20 процентов. PGS можно использовать для увеличения частоты беременностей и снижения частоты выкидышей, по крайней мере, при первом переносе эмбриона, но, вероятно, снижает общие совокупные шансы на зачатие ребенка от одного цикла ЭКО на 20 процентов.Новые задачи включают более точное определение того, насколько распространены мозаичные эмбрионы, как лучше всего их обнаруживать и следует ли переносить некоторые мозаичные эмбрионы, потому что они все еще могут привести к здоровому ребенку.

Наконец, есть еще одно предостережение Американского общества репродуктивной медицины (ASRM): «Генетический скрининг может помочь выявить пары, которые имеют повышенный риск возрастных или семейных генетических нарушений и врожденных дефектов. Однако ни один тест не может точно предсказать риск всех дефектов у ребенка, а многие врожденные дефекты, такие как те, которые связаны с воздействием окружающей среды и токсичными веществами, а также те, которые являются случайными и необъяснимыми, не имеют генетической основы и не могут быть обнаружены с помощью генетический скрининг.”

Поговорите со своим специалистом по фертильности о PGD / PGS

Если вы безуспешно пытались забеременеть и решили пройти курс лечения бесплодия, необходимо учитывать множество факторов. То же самое и с предимплантационным генетическим тестированием — это сложно. В этом случае ваш специалист по фертильности может помочь вам обсудить возможные варианты. Когда ваш ребенок станет подростком, это тоже будет сложно, но тогда вы будете сами по себе!

Новые названия для PGD и PGS

Кроме того, термины PGD и PGS теперь заменяются новой терминологией в Международном глоссарии по лечению бесплодия и бесплодия.Новое название для всех тестов — Преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ). При анеуплоидиях это PGT-A; для моногенных / единичных генных дефектов PGT-M; а для хромосомных структурных перестроек — PGT-SR. Итак, то, что называлось PGD, теперь называется PGT-M, а то, что называлось PGS, теперь PGT-A или PGT-SR. Скорее всего, потребуется несколько лет, чтобы новые имена закрепились, поэтому можно использовать любое из них сейчас.

Эта статья была первоначально опубликована в Huffington Post

Влияние биопсии на потенциал развития человеческого эмбриона во время преимплантационной генетической диагностики

Преимплантационная генетическая диагностика и скрининг (PGD / PGS) на предмет моногенных заболеваний и / или численных / структурных хромосомных аномалий представляет собой инструмент для тестирования эмбрионов, направленный на выявление здоровых и / или эуплоидных эмбрионов в когорте, полученной во время цикла ЭКО.Важнейшим аспектом этой технологии является потенциальный вред, который биопсия может оказать на эмбрион. Были предложены различные стратегии биопсии эмбриона. Биопсия бластомера на стадии расщепления все еще представляет собой наиболее часто используемый метод в Европе в настоящее время, хотя было показано, что этот подход оказывает негативное влияние на жизнеспособность эмбриона и потенциал имплантации. Биопсия полярного тела была предложена в качестве альтернативы биопсии эмбриона, особенно для тестирования анеуплоидии. Однако до настоящего времени ни одно достаточно мощное исследование не прояснило влияние этой процедуры на репродуктивную компетентность эмбриона.Биопсия на стадии бластоцисты на сегодняшний день представляет собой самый безопасный способ не повлиять на потенциал имплантации эмбриона. По этой причине, а также из-за свидетельств более высокой согласованности молекулярного анализа, проводимого на клетках трофэктодермы, внедрение биопсии бластоцисты постепенно расширяется во всем мире. Цель этого обзора — представить опубликованные на сегодняшний день доказательства влияния биопсии на различных этапах доимплантационного развития на репродуктивный потенциал эмбриона человека.

1. Введение

Преимплантационная генетическая диагностика и скрининг (PGD / PGS) — это инструмент, применение которого в методах вспомогательной репродукции (ВРТ) значительно расширилось за последние десятилетия [1]. Конечная цель PGD / PGS — определить, поражен ли эмбрион моногенным заболеванием и / или хромосомными нарушениями, тем самым предотвращая имплантацию плода с симптомами и / или ограничивая риски, лежащие в основе переноса хромосомно аномальных эмбрионов (в основном, неудач имплантации). и выкидыши).В синтезе PGD / PGS является мощным инструментом для достижения цели беременности и смягчения ее побочных эффектов. Для достижения этой цели обязательно не нанести значительного вреда эмбриону во время биопсии и сохранить его жизнеспособность и репродуктивный потенциал. Во-первых, не навреди — это догма в клинической практике, которая прекрасно применима и в этом контексте. Этот обзор будет представлять собой обзор различных этапов доимплантационного развития эмбриона, на которых может быть выполнена процедура биопсии. Будет дано определение технических недостатков, устранение которых может негативно повлиять на репродуктивный потенциал.В основном будут изучены три различных подхода, а именно биопсия полярного тельца (PB) из зрелого ооцита и / или зиготы, биопсия бластомера на стадии расщепления и биопсия трофэктодермы (TE) на стадии бластоцисты. Недавно была предложена биопсия на стадии морулы, которая будет кратко обсуждена.

Данные консорциума ESHRE PGD за 2009-2010 годы [2] выявили неравномерное распределение количества процедур биопсии, выполненных в Европе, между тремя основными стратегиями.В частности, одна биопсия бластомера составляла почти 90% от общего числа, в то время как биопсия TE составляла менее 1%. Те же данные, относящиеся к 2012-2013 гг. [3], вместо этого продемонстрировали впечатляющую противоположность, поскольку частота процедур биопсии на стадии PB и биопсии на стадии расщепления снизилась примерно до 2% и 75% соответственно. Вместо этого применение биопсии на стадии бластоцисты в АРТ постепенно увеличивается. Причиной этого резкого изменения является обзор и метаанализ, опубликованные Mastenbroek и коллегами в 2011 году, ясно показывающие, что PGS в том виде, в каком он проводился, а именно, биопсия на стадии расщепления, проанализированная с помощью 9-хромосомной FISH, является вредной процедурой [4].Однако, хотя использование 9-хромосомной FISH значительно сократилось в пользу более точных и надежных методов комплексного хромосомного скрининга (CCS), биопсия бластомера по-прежнему остается методом, в основном используемым для ПГД. Использование биопсии PB не получило широкого распространения из-за ее внутренних логистических, клинических и технических недостатков, которые ставят под угрозу ее точность, особенно по сравнению со стратегией биопсии TE.

2. Биопсия на стадии расщепления

Биопсия на стадии расщепления обычно выполняется на эмбрионах 3-го дня с минимум 6 бластомерами.Пеллюцидную оболочку открывают и используют среду, не содержащую Ca ⁺⁺ / Mg ⁺⁺ , для ослабления межклеточной адгезии и облегчения удаления выбранных бластомеров. Менее травматичное воздействие на растущий эмбрион теоретически не должно влиять на бластуляцию [5]. Однако это спорный вопрос, поскольку несколько исследований на мышах показали, что истощение Ca ⁺⁺ вызывает ремоделирование клеточного цитоскелета, неизбежно влияя на уплотнение [6–9].

Биопсия в основном проводится по трем методам взлома зоны, а именно лазерному [10], механическому [11] и сверлению Тироде [12].Использование метода с использованием лазера составляет 75% всех процедур биопсии, заявленных в сборе данных XII консорциума ESHRE PGD [2]; таким образом, это наиболее используемый подход. Однако очевидно, что все три метода не влияют на клинические исходы, как показали рандомизированные контролируемые испытания (РКИ) на родственных эмбрионах [13–16]. Вероятно, тогда причина преобладания метода с использованием лазера заключается в стандартизации и воспроизводимости отверстия, произведенного в блестящей оболочке, что меньше зависит от оператора, чем использование подкисленного Тироде [14].Кроме того, лазерная штриховка не только более точна и требует меньше времени, но и требует более короткого периода обучения. Фактически, отверстие, созданное подкисленным Тиродом, зависит от таких переменных, как количество нанесенного раствора, время воздействия и навыки оператора; Напротив, при использовании лазерного метода достаточно нескольких предустановленных обжигов.

Было подсчитано, что температура среды, окружающей эмбрион, увеличивается до 60–80 ° C в зависимости от интенсивности лазерного луча [17].Однако Тейлор и его коллеги [18] подчеркнули, что даже при изменении лазерного импульса от 20 до 400 мВт операторы биопсии не оказывали отрицательного воздействия как на технические, так и на клинические результаты после биопсии.

Тем не менее, нарушение zona pellucida само по себе может повлиять на последующие процессы на протяжении доимплантационного развития вплоть до стадии бластоцисты. В частности, в нескольких исследованиях было выявлено нарушение процесса вылупления бластоцисты, серьезность которого зависит от количества и размера производимых отверстий [19–21].Серьезность этой проблемы усугубляется одновременным удалением одного бластомера [22, 23]. В частности, Kirkegaard и его коллеги [23] сравнили развитие на стадии бластоцисты биопсированных эмбрионов на стадии дробления с контрольными небиопсийными эмбрионами с помощью покадровой микроскопии (TLM). Они подчеркнули, что бластоцисты, полученные из биопсированных эмбрионов, показали замедленный процесс уплотнения и вылупились нефизиологическим способом, минуя длительный период истончения блестящей оболочки. Это привело к уменьшению размера бластоцисты с более толстой пеллюцидной оболочкой.

На биопсию бластомера также влияют проблемы, связанные с анализом отдельных клеток, как технические (например, высокая частота неудач амплификации) [24, 25], так и биологические. В частности, хромосомный мозаицизм, а именно наличие клеток с разными кариотипами в одном и том же эмбрионе, по-видимому, достигает своего максимального уровня на этой стадии доимплантационного развития [26–29]. Чтобы компенсировать это, была предложена стратегия биопсии с двумя бластомерами. Однако эта стратегия может привести к истощению эмбриональной массы примерно на 25% и, в свою очередь, повлиять на клинические результаты [30, 31].Напротив, первоначальные данные не продемонстрировали пагубного влияния потери бластомера (ов) (после биопсии и / или криоконсервации) на развитие эмбриона и потенциал имплантации [32–35]. Фактически, в рекомендациях ESHRE 2010 г. было высказано предположение, что эту процедуру можно безопасно применять, когда эмбрионы состоят из ≥6 клеток с менее чем 30% фрагментации [36].

В 2013 г. убедительные доказательства против этого подхода возникли в результате парного рандомизированного контролируемого исследования, проведенного Скоттом-младшим и его коллегами [37], и полностью изменили предыдущий сценарий.В частности, здесь были выбраны два эмбриона наилучшего качества, полученные в одной когорте во время цикла ЭКО, для переноса либо на стадии дробления, либо на стадии бластоцисты. Один эмбрион был рандомизирован для биопсии без тестирования на анеуплоидию, а другой вместо этого использовался в качестве парного контроля. Затем были перенесены оба эмбриона. В случае имплантации одного эмбриона фрагмент биопсии подвергался дактилоскопии на основе aSNP, а также ДНК плода из материнской крови или буккальная ДНК новорожденного после родов.Результаты сопоставления показали, что имплантированный эмбрион был эмбрионом, взятым после биопсии, а несоответствие — контрольный эмбрион, который привел к родам. Сообщалось о резком 39% относительном снижении скорости имплантации, когда биопсия на стадии расщепления проводилась по сравнению с контролем.

Интересная теория состоит в том, что эмбрионы на этой стадии доимплантационного развития относительно хрупки, поскольку процессы активации эмбрионального генома и дифференцировки клеток еще не произошли.Таким образом, последующие процессы развития могут быть безвозвратно нарушены путем удаления клетки из эмбриона. Такое влияние фактически отражается также в более низком уровне бластоцист после биопсии на стадии дробления по отношению к нетронутым эмбрионам, как сообщается в нескольких статьях [38-40].

Учитывая количество исследований, показывающих неэффективность и потенциальное нарушение биопсии на стадии расщепления, неудивительно, что Мастенбрук и его коллеги [4] в своем обзоре и метаанализе подчеркнули неэффективность PGS при проведении 9-хромосомной FISH на биопсии. бластомер (ы).

Однако многие эмбриологи и молекулярные биологи по-прежнему уверены в потенциале тестирования на анеуплоидию при ЭКО. Таким образом, для достижения этой цели реализуются новые стратегии. В настоящее время готовятся РКИ для оценки клинической ценности биопсии бластомера, когда она связана с CCS, а не с FISH (NCT01571076, NCT01950104, зарегистрированные на https://www.clinicaltrials.gov/). Более того, исследуются новые стратегии биопсии, двигаясь назад или вперед по временной шкале доимплантационного развития.

3. Биопсия полярного тела

Биопсия полярного тела (PB) ооцитов и / или зигот MII была рекомендована как ценная альтернатива биопсии бластомера [41, 42]. В некоторых странах это произошло в основном по юридическим причинам, поскольку биопсия эмбриона запрещена. Биопсия PB потенциально менее инвазивна, чем любая другая стадия доимплантационного развития, поскольку влечет за собой удаление продуктов жизнедеятельности мейоза. Однако применимость этой стратегии всегда обсуждалась, что подтверждается данными Консорциума ESHRE PGD.Фактически, биопсия PB использовалась только в 10–15% всех процедур, выполненных в Европе за последнее десятилетие. В настоящее время этот показатель продолжает снижаться, вероятно, из-за количества исследований, в которых выявлены технические, экономические, биологические и клинические недостатки, лежащие в основе этого подхода. Например, Capalbo и его коллеги [43] сообщили о высоком уровне ложноположительных и отрицательных ошибок при принятии этой стратегии биопсии. В этом отношении митотические и отцовские анеуплоидии фактически не могут быть обнаружены.Авторы также подчеркнули, что оба PB из всех ооцитов и / или зигот MII необходимы независимо от их потенциала развития, что делает процедуру трудоемкой. Это, в свою очередь, увеличивает рабочую нагрузку лаборатории, что является еще одним важным недостатком, связанным с этой стратегией.

Методы сверления зоны такие же, как ранее описанные для биопсии бластомера. В нескольких статьях в литературе описывается их применение для биопсии PBs и не сообщается об отрицательном влиянии на параметры качества, такие как скорость лизиса и активации ооцитов, развитие после обработки ионофором кальция, частота поломки хромосомы эмбриона после препарата Тарковского и / или развитие эмбриона [44– 47].Неонатальные исходы после ПГД на основе биопсии ПБ также сравнимы с таковыми, полученными при использовании подхода, основанного на стадии расщепления [13]. Напротив, Levin с коллегами [48] сообщили о более высокой скорости фрагментации, более низком качестве эмбриона, более высокой скорости остановки дробления и более низком среднем количестве бластомеров на 3-й день, когда выполняется биопсия PB по сравнению с контролем. Однако авторы не оценивали возможность имплантации эмбриона после этого подхода к биопсии, ограничение, разделяемое всеми статьями, посвященными этой теме.Не было опубликовано достаточно мощных и хорошо контролируемых исследований, в которых сообщалось бы об отсутствии влияния биопсии PB на потенциал имплантации эмбриона. В свете этого отсутствия безопасность процедуры все еще остается спорным предположением [49]. В связи с этим на веб-сайте https://www.clinicaltrials.gov/ в настоящее время зарегистрированы два продолжающихся исследования, посвященных биопсии ПБ: РКИ ESHRE ESTEEM (NCT01532284) и исследование Медицинского колледжа Вейля (Корнельский университет) ( NCT01574404). Надеюсь, они сообщат убедительные данные о клинической эффективности биопсии PB для решения оставшихся проблем.

Последнее оперативное беспокойство касается того, следует ли использовать последовательную или одновременную биопсию. В частности, согласно первому, PB извлекаются в разное время, а в соответствии со вторым извлекаются оба сразу. Несмотря на то, что рекомендации относительно правильного времени проведения биопсии не установлены, ее следует проводить через 8–14 часов после оплодотворения. При выполнении биопсии до этого временного диапазона существует риск энуклеации из-за остатков веретена во втором PB (рис. 1), в то время как распад или дегенерация PB может произойти, если биопсия будет выполнена позже [42, 50].После одновременной биопсии, а не последовательной, также можно предотвратить двойное воздействие неоптимальных условий окружающей среды. Однако до настоящего времени не было получено никаких клинических данных для решения этой проблемы.

В заключение, применение биопсии PB постепенно сокращалось в пользу биопсии TE из-за отсутствия надежных подтверждающих данных и возможности диагностической неточности.

4. Биопсия на стадии морулы

Недавно была предложена биопсия на стадии морулы [51].Было получено мало данных для оценки его реальной осуществимости; однако технически он аналогичен биопсии на стадии расщепления и, таким образом, имеет те же недостатки (например, необходимость в буфере, не содержащем Ca ⁺⁺ / Mg ⁺⁺ , для ослабления уплотнения). Основное преимущество биопсии на стадии морулы разделяется с подходом биопсии TE, а именно, количество извлеченных клеток. Фактически, анализ более чем одной клетки приводит к более надежному молекулярному исследованию, которое устанавливает одну из причин, побудивших к стратегии биопсии на стадии бластоцисты.

5. Биопсия на стадии бластоцисты

Стратегия биопсии на стадии бластоцисты стала важным прорывом в современном ЭКО. Впервые об этом сообщили де Боер и его коллеги в 2004 году [52], а о первых живорождениях после этого подхода сообщили в 2005 году Коккали и его коллеги [53] и МакАртур и его коллеги [30], соответственно. Несколько доклинических и клинических исследований вскоре признали его ценность, так что в настоящее время он постепенно заменяет как стадию расщепления, так и подходы к биопсии ПБ.

Сила биопсии TE заключается в ее более высокой технической и биологической устойчивости. Фактически, этот подход влечет за собой меньшее влияние процедурных ошибок и меньшее влияние мозаицизма на молекулярный анализ.

Однако высокие стандарты необходимы для культивирования бластоцист и криоконсервации, что является важным ограничивающим фактором для широкого внедрения этой стратегии. Тем не менее, как только установлена ​​надлежащая система культивирования, сама культура бластоцисты обеспечивает более высокую частоту живорождения на перенос эмбриона, чем на стадии дробления.Этот аспект, в частности, был подчеркнут Glujovsky и его коллегами в их Кокрановском обзоре 12 РКИ [54]. Более того, важно подчеркнуть, что биопсия на стадии дробления также перенесла культуру на стадию бластоцисты, если нацелена на выполнение переноса свежих эмбрионов эуплоидных эмбрионов [37–39]. Таким образом, если какой-либо риск связан с системой культивирования, он будет разделен на оба подхода к биопсии.

Чтобы не потерять драгоценные эуплоидные бластоцисты после нагревания, также необходима отличная программа витрификации.В связи с этим в нескольких публикациях в литературе сообщалось об отсутствии дегенерации бластоцисты после биопсии [30, 55, 56] и выживаемости после нагревания всегда выше 95% [30, 57, 58].

Следуя сегментированию цикла и политике SET, эуплоидный криоконсервированный перенос бластоцисты также предотвращает синдром гиперстимуляции и многоплодную беременность [59, 60], что является еще одним важным преимуществом.

Мы недавно оценили нашу клиническую практику в течение 4-летнего периода, в течение которого постепенно применялась политика PGD / PGS плюс эуплоидный SET на стадии бластоцисты, особенно для пациентов пожилого возраста матери.Такие клинические условия не повлияли на общую эффективность наших методов лечения; а именно, частота наступления беременности на один забор ооцитов оставалась неизменной по сравнению с прошлым, но увеличивала их общую эффективность. В частности, сообщалось о значительном увеличении общего числа беременностей за один перевод и снижении числа многоплодных беременностей после внедрения этого нового метода [59]. В этом сценарии Forman et al. [61] также продемонстрировали, что перенос одиночной эуплоидной бластоцисты равен частоте имплантации двойного непроверенного переноса бластоцисты, но дает лучшие акушерские и перинатальные исходы [62].

Наконец, парное рандомизированное контролируемое исследование, проведенное Скоттом-младшим и его коллегами [37], снова стало настоящей вехой, которая определила биопсию на стадии бластоцисты как процедуру, не влияющую на жизнеспособность эмбриона и потенциал имплантации. Сообщалось, что биопсия TE не оказала никакого воздействия, в отличие от того, что было обнаружено при биопсии бластомера. Возможное объяснение этого различия состоит в том, что меньшая часть всей клеточной конституции эмбриона удаляется из неэмбриональной части бластоцисты и на стадии доимплантационного развития, возможно, более терпима к манипуляциям.

Эти данные сыграли решающую роль в растущем внедрении во всем мире новой политики PGS на основе биопсии TE, основанной на CCS. Dahdouh и его коллеги недавно подчеркнули в метаанализе и обзоре положительную клиническую прогностическую ценность, лежащую в основе этой политики [63, 64]. Несколько РКИ также находятся в стадии разработки, и они предоставят дополнительные доказательства в течение следующих лет (NCT01219283, NCT02032264, NCT02268786, NCT01977144 и NCT01917240, зарегистрированные на https://www.clinicaltrials.gov/; ISRCTN81216689, зарегистрированные на http: // www.isrctn.com/). В частности, биопсия на стадии бластоцисты будет оцениваться вместе с секвенированием следующего поколения или количественными анализами полимеразной цепной реакции. Также будет исследована дополнительная прогностическая ценность принятой системы культивирования бластоцист и морфологии эуплоидных бластоцист.

Систематический обзор Lee и коллег [65] суммировал все наблюдательные, проспективные анализы и РКИ, опубликованные на сегодняшний день. Однако здесь авторы подчеркнули важное ограничение многих исследований, в которых конкретно сравниваются клинические результаты между методами биопсии TE и биопсии бластомера.В частности, даже если при первом подходе всегда сообщалось о более высоком уровне продолжающейся / клинической беременности, не производилась коррекция характеристик пациентки и / или эмбриона и не применялась проспективная рандомизация. Проспективное двойное слепое исследование без отбора, проведенное Скоттом-младшим и его коллегами [66], тогда, по крайней мере, насколько нам известно, единственная статья, должным образом разработанная для проведения этого исследования. Здесь, сравнивая положительные клинические прогностические значения (количество эмбрионов, фактически ведущих к продолжающейся беременности после эуплоидной диагностики на основе CCS) двух подходов, они подтверждают более высокую надежность анализа стадии бластоцисты по сравнению с первой стадией дробления (48.2% против 29,2%,).

Тем не менее, наиболее часто используемая стратегия проведения PGD / PGS в Европе по-прежнему предполагает стадию расщепления, а не биопсию TE. Восприятие первого как менее зависимого от оператора и более воспроизводимого, возможно, лежит в основе этой тенденции. В частности, эмбрионы достигают стадии дробления синхронно и схожи с точки зрения морфологического качества, а в литературе описан единый протокол биопсии. Биопсия на стадии бластоцисты вместо этого характеризуется неоднородной когортой эмбрионов с точки зрения как морфологии, так и скорости развития, и на сегодняшний день опубликованы два различных метода ее выполнения.Первый метод был описан McArthur и его коллегами [30] и включает в себя отверстие в блестящей оболочке, выполненное на 3-й день доимплантационного развития. Последующее нефизиологическое вылупление на стадии бластоцисты упрощает процедуру, но также подвергает эмбрион потенциальному стрессу во время доимплантационного развития [23]. Второй метод был описан Capalbo и коллегами [67] и предусматривает одновременное вскрытие зоны и биопсию TE. Таким образом, эмбрион остается нетронутым до 5-го, 6-го или даже 7-го дня, и его биопсия проводится только после достижения полного разрастания (рис. 2).Мы исследовали точность и воспроизводимость этого второго подхода, связанного с CCS на основе qPCR. Не было зарегистрировано никаких существенных различий между 7 разными операторами из 3 центров ЭКО с точки зрения как технических, так и клинических результатов. В частности, были сопоставимы скорость амплификации, совпадение данных кПЦР и оценочное количество извлеченных клеток, а также частота продолжающейся имплантации, биохимические показатели и частота выкидышей [68].

Скорость амплификации, в частности, является важным параметром, поскольку в случае неокончательного результата потребуется повторная биопсия.Важно отметить, что во всех статьях, в которых использовался анализ CCS на основе TE, всегда сообщалось о менее 3,0% недиагностированных бластоцист [56, 58, 62, 67, 68]. Этот момент представляет собой дополнительное преимущество этого подхода по сравнению с предыдущими подходами на основе одной ячейки.

6. Перспективы на будущее

Идеальным результатом было бы обойти этап биопсии эмбриона и предсказать эуплоидию и / или репродуктивную компетентность с помощью неинвазивных методов. Например, в качестве многообещающих инструментов были предложены статическая морфологическая оценка, критерии TLM и генетический / протеомный / метаболомный скрининг отработанных питательных сред ЭКО.К сожалению, в нескольких статьях общепринятые параметры оценки эмбриона были определены как слегка коррелированные с частотой анеуплоидии [67, 69, 70], TLM как ограниченный инструмент для прогнозирования эуплоидии / имплантации [71–73], а проведенный анализ культуральной среды ЭКО как увлекательный теория, которая на сегодняшний день не принесла клинической пользы [74, 75].

В настоящее время считается, что неинвазивные методы могут предоставить новые параметры для повышения нашей прогнозирующей способности после имплантации сверх уровня, гарантированного PGD / PGS, вместо того, чтобы пытаться заменить этот инструмент.

7. Заключение

Амниоцентез и взятие проб ворсинок хориона — методы, доступные для выявления жизненно важных хромосомных синдромов у плода во время вынашивания; однако эти подходы подвергают женщин высокому риску выкидыша — от 1 до 3% [76–80]. Чан и его коллеги [81] подчеркнули важность безопасности для пациентов, сообщив, что беременные китайские женщины более склонны принимать умеренный риск недиагностированных анеуплоидий, чем риск выкидыша, связанного с процедурой, ≥1%.В сочетании с возможностью значительного снижения частоты неудач имплантации и / или выкидышей с помощью PGS необходимо обязательно использовать безопасный метод биопсии. Точно так же эта потребность относится к ПГД для выявления моногенных мутаций, методике, которая требует дополнительных затрат из-за создания молекулярных зондов для диагностики эмбрионов.

Доказательства, полученные в последние десятилетия, широко подчеркивают недостатки подхода стадии расщепления в PGD / PGS. Значительное снижение клинических исходов происходит из-за использования такой вредной стратегии биопсии.

Исследования с достаточной мощностью, подчеркивающие аналогичное негативное влияние биопсии PB, все еще отсутствуют. Однако эта стратегия страдает важными диагностическими проблемами, которые приводят к высокому уровню ложноположительных и ложноотрицательных ошибок [43].

Бластоцистный подход вместо этого обеспечивает точность, надежность и воспроизводимость и, что важно, не оказывает влияния на жизнеспособность эмбриона и репродуктивный потенциал. Сравнение стратегии биопсии TE с предыдущими (суммированными на рисунке 3) убедительно свидетельствует о том, что это наиболее многообещающий подход к PGD / PGS.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в отношении публикации данной статьи.

Границы | Биопсия эмбриона может предложить больше информации, чем просто Ploidy Status

Введение

Бесплодие и ЭКО

Бесплодие — это все более распространенное состояние, характеризующее неспособность пары зачать ребенка. К сожалению, бесплодие подвергается все большей стигматизации и часто приводит к дискриминации, депрессии и остракизму для пациентов и их супругов (Cui, 2010).Такие факторы, как изменение культурных норм (которые подталкивают беременность к более позднему возрасту), рост ожирения, курения, употребления алкоголя и наркотиков, а также загрязнение окружающей среды, играют определенную роль в снижении показателей фертильности; число бесплодных людей быстро превысило 15% пар репродуктивного возраста (Agarwal et al., 2015; Shreffler et al., 2017). В результате медикаментозное оплодотворение (MAR) и, в частности, in vitro, оплодотворение (ЭКО) взяли на себя бремя этого растущего спроса — эти методы становятся все более распространенным средством зачатия ребенка (Sunderam et al., 2019).

В то время как ЭКО является вариантом для многих пар, показатели успешной имплантации и живорождения колеблются около 50%, уменьшаясь по мере увеличения возраста матери и / или других медицинских осложнений (Fragouli et al., 2018). Обычно эмбрионы отбираются для переноса на основе морфологии (Gardner and Schoolcraft, 1999). В случае множественных выкидышей или преклонного возраста матери эмбрионы пациентов часто подвергаются биопсии и последующему хромосомному анализу. Эта процедура называется PGT-A (Brezina et al., 2016). PGT-A включает биопсию 5-6 клеток трофэктодермы (TE) (составляющих приблизительно 3% от общего количества TE клеток) из эмбриона на стадии бластоцисты на 5/6 день (Stern, 2014). Последующий анализ генетического материала внутри клеток приводит к идентификации и скринингу доимплантационных эмбрионов по их статусу плоидности. Известно, что PGT-A улучшает исходы беременности у женщин с повторным невынашиванием беременности (Bhatt et al., 2019; Kim et al., 2019). Важно отметить, что анализ PGT-M / SR (доимплантационное генетическое тестирование на моногенные расстройства / структурные перестройки хромосом) все чаще используется вместе с ЭКО, выходя за рамки анеуплоидного анализа и охватывая анализ наследственных заболеваний, нарушений одного гена, немедицинского определения пола и структурных хромосом. исследования перегруппировки (Lathi et al., 2012; Стерн, 2014). Несмотря на значительные технические возможности, которые в настоящее время используют ученые-клиницисты для точной идентификации генетического статуса (распространенным примером является секвенирование следующего поколения), вероятность успешной имплантации эуплоидных эмбрионов, созданных ЭКО, остается менее 60% (Fragouli et al., 2018).

Мозаицизм эмбрионов представляет потенциальные проблемы с достоверностью результата PGT-A (Stern, 2014). В мозаичных эмбрионах клетки одного и того же эмбриона отличаются друг от друга по своему генетическому составу и, следовательно, имеют разный статус плоидности.Несмотря на то, что для PGT-A проводится биопсия от 3 до 10 клеток, биопсия ТЕ составляет около 3% ТЕ-клеток и> 3% всех клеток эмбриона. Различия внутри одного доимплантационного эмбриона были продемонстрированы и подтверждены множеством генетических методов, включая анализ микроматриц, который продемонстрировал огромные различия даже соседних клеток в мозаичных эмбрионах (Mertzanidou et al., 2012). Учитывая, что частота мозаицизма у человеческих эмбрионов оценивается примерно в 20% (по шкале мозаицизма от 15 до 80% в течение третьего дня эмбрионов), наряду с доказательствами того, что частота анеуплоидии снижается на стадии развития эмбриона бластоцисты, способность к Эмбрион, чтобы избавиться от анеуплоидных клеток с помощью регулируемых и систематических средств до имплантации, является вероятной гипотезой (Brill et al., 1999; Mertzanidou et al., 2012; Стерн, 2014). Мозаицизм доимплантационного эмбриона представляет собой серьезную проблему для точности методов PGT-A, тем более, если эмбрион имеет способность к самокоррекции (Bolton et al., 2016).

Совсем недавно было проведено рандомизированное контрольное исследование для определения преимуществ PGT-A, измеренных по частоте продолжающихся беременностей (Munné et al., 2019). Это исследование показало, что PGT-A не улучшил частоту продолжающейся беременности у женщин в возрасте 25-40 лет, но действительно улучшил частоту продолжающейся беременности у женщин в возрасте 35-40 лет.Эти результаты поднимают вопрос о том, почему PGT-A не улучшает исходы беременности, как ожидалось, поскольку теперь идентифицированный эуплоидный эмбрион переносится. Один из ответов может заключаться в том, что существуют настоящие мозаичные доимплантационные эмбрионы, которые идентифицированы PGT-A как эуплоидные. Точно так же, вероятно, существуют и другие факторы, помимо статуса плоидности, которые позволяют преимплантационному эмбриону успешно имплантироваться и приводить к продолжающейся беременности. Следовательно, наиболее жизнеспособный доимплантационный эмбрион может быть выбран путем наблюдения за состоянием эуплоидной плоидности с помощью анализа PGT-A и обнаружения специфических белков, мРНК или метаболитов в его бластоцельной жидкости.Эти компоненты могут отражать способность эмбриона до имплантации и объем самокоррекции до имплантации (Brill et al., 1999; Mertzanidou et al., 2012). Получение жидкости бластоцеля для анализа этих компонентов несложно для доимплантационных эмбрионов, подвергающихся PGT-A, так как это тестирование требует биопсии эмбриона и последующего высвобождения этой жидкости бластоцеля в окружающую каплю среды. Следовательно, биопсия эмбриона может выявить больше информации в дополнение к статусу плоидности (которое встречается только при PGT-A), чтобы помочь эмбриологу выбрать наиболее жизнеспособный эмбрион для переноса.Более того, объем этого исследования жидкости бластоцеля можно легко расширить, включив в него эмбрионы, замороженные для последующего переноса — перенос замороженных эмбрионов (FET).

Компоненты жидкости Blastocoel

В случае биопсии PGT-A, лазерный импульс разрезает между ТЕ-клетками, которые были выдавлены за пределы блестящей оболочки, что позволяет вытеснить внутреннюю жидкость бластоцеля в окружающую среду биопсии (Рисунки 1A – E). В случае эмбрионов FET (не подвергающихся PGT-A) перед криоконсервацией эмбриона жидкость бластоцеля должна быть удалена, чтобы предотвратить образование кристаллов льда, которое достигается с помощью лазерного импульса между TE клетками (Рисунки 1A – C).После изгнания жидкости бластоцеля эмбрион замораживается, а кондиционированная жидкостью среда бластоцеля обычно выбрасывается (Рисунки 1F, G). Кроме того, жидкость бластоцисты также можно получить непосредственно из бластоцист с помощью бластоцентеза, минимально инвазивного процесса, в котором используется пипетка для аспирации жидкости бластоцисты непосредственно из полости бластоцеля и передачи ее в пробирку для сбора (Gianaroli et al., 2014). Эту жидкость бластоцеля также можно сохранить, заморозить и оценить. Интересно, что жидкость бластоцеля доимплантационного эмбриона признана источником внеклеточной ДНК (вкДНК) (Capalbo et al., 2018; Ли и др., 2018; Цуйко и др., 2018; Magli et al., 2019). Обратите внимание, что среда для биопсии, кондиционированная жидкостью бластоцеля, отличается от отработанной культуральной среды. Отработанная питательная среда представляет собой среду для выращивания, кондиционированную эмбрионом (т.е. высвобожденные молекулы во время развития стадии расщепления).

Рисунок 1. Обзор сбора бластоцельной жидкости. (A) Бластоциста Day5 / 6 включает заполненную жидкостью полость бластоцеля, контактирующую с внутренней клеточной массой.Эритроциты во внутренней клеточной массе представляют собой анеуплоидные клетки, которые будут или подверглись апоптозу. (B) Клетки, подвергшиеся апоптозу, высвободили свое содержимое (внеклеточную ДНК, мРНК, белки, метаболиты и экзосомы) в жидкость бластоцеля. (C) Бластоцисты, которые не будут подвергаться биопсии или переносу эмбрионов, подготавливаются для криоконсервации с использованием лазера для высвобождения жидкости бластоцеля в окружающую каплю среды. (D, E) Бластоцисты, которые будут подвергаться биопсии эмбриона для PGT-A, обычно будут иметь 3–10 клеток трофэктодермы (TE), удаленных с помощью лазерного лизиса клеток и отсасывания пипеткой, а биопсированные клетки отправляются за пределы участка для генетического анализа . (F) После любого процесса микроманипуляции жидкость бластоцеля выталкивается из бластоцисты в окружающую среду, и эта кондиционированная среда бластоцеля может быть собрана и сохранена для последующих анализов молекул, как указано. (G) Бластоциста замораживается и хранится. Бластоцисты размораживают, как только становятся известны результаты PGT-A для переноса эмбрионов.

Присутствие вкДНК в кровообращении человека было впервые зарегистрировано в сыворотке взрослых еще в 1947 году и, скорее всего, связано с лизисом циркулирующих клеток или апоптотической активностью (Swaminathan and Butt, 2006; Norwitz and Levy, 2013).В контексте эмбриологии человека существуют два различных типа вкДНК: вкДНК плода и вкДНК эмбриона после имплантации. ВКДНК эмбриона после имплантации присутствует в желточном мешке, тогда как вкДНК плода присутствует в околоплодных водах и в кровотоке матери (Lo et al., 1997; Bianchi et al., 2001, 2014; Larrabee et al., 2004; Reece et al., 2006). ). Преимплантационная эмбриональная вкДНК — относительно недавнее открытие (2013 г.) с идентификацией вкДНК в бластоцельной жидкости бластоцисты человека 5-го дня (Palini et al., 2013). Присутствие вкДНК может указывать на то, что апоптотическая активность имела место во время раннего развития эмбриона (Hardy, 1999; Jurisicova and Acton, 2004). Более того, белки, митохондриальная ДНК и миРНК также были обнаружены в жидкости бластоцелей. Предыдущая литература указывает на то, что источником этих молекул потенциально могут быть остатки клеток из развивающейся бластоцисты, которые подверглись апоптозу во время развития преимплантационного расщепления клеток (Palini et al., 2013; Tobler et al., 2014; Poli et al., 2015; Hammond et al., 2017; Capalbo et al., 2018). Соответственно, микроРНК, некоторые из которых были связаны с апоптозом, и внеклеточные везикулы также были обнаружены в жидкости бластоцелей из доимплантационных эмбрионов человека (Battaglia et al., 2019). Открытие микроРНК, связанной с апоптозом, а также внеклеточных везикул лишь дополнительно подтверждает существование доимплантационного механизма самокоррекции эмбриона. Более того, связь с апоптозом представляет собой вероятный механизм, который потенциально очищает развивающиеся доимплантационные эмбрионы от анеуплоидных клеток (Bolton et al., 2016).

Недавняя литература указывает на повышенный интерес к использованию информации, предоставляемой вкДНК бластоцеля наряду с PGT-A, в качестве совокупного показателя качества доимплантационного эмбриона (Rule et al., 2018). В нескольких сообщениях постулируется, что компетентные доимплантационные эмбрионы могут быть идентифицированы по содержанию вкДНК в жидкости бластоцеля или отработанной среде (Assou et al., 2014; Werner et al., 2014). Этот интерес в последнее время привел к увеличению количества исследований, в которых анализируется общий потенциал конкретных исследований вкДНК для выявления специфических представлений об эмбрионе.Хотя в некоторых исследованиях сообщается по крайней мере об ограниченном соответствии между хромосомным статусом, обнаруженным с помощью вкДНК бластоцеля, по сравнению с PGT-A из эмбриональной биопсии TE, недостаточно литературы или доказательств, чтобы гарантировать, что анализ вкДНК бластоцеля точно подтверждает статус плоидности (Ho et al. др., 2018; Zhang et al., 2019). Преимущества анализа, использующего данные вкДНК бластоцеля, а не PGT-A, очевидны (прежде всего, способность проверять анеуплоидию без выполнения биопсии эмбриона), но теоретическая концепция остается недоказанной, поскольку прагматическое соответствие еще не достигло удовлетворительного уровня.Подлинно неинвазивный подход к оценке доимплантационного статуса плоидности эмбриона (неинвазивный PGT-A) будет включать анализ отработанной среды от доимплантационных эмбрионов, культивированных от ранних стадий клеточного расщепления до стадии бластоцисты, которые не подвергались биопсии эмбриона. В рамках исследования, подтверждающего концепцию, размораживали и культивировали ранее замороженные донорские бластоцисты (с известным статусом плоидности из биопсии эмбриона), а затем собирали их отработанную среду, которая, вероятно, содержала вкДНК из жидкости бластоцеля (Huang et al., 2019).Затем израсходованную среду оценивали на PGT-A и выявляли высокую согласованность с результатами PGT-A из биопсии TE. Хотя это исследование предполагает, что неинвазивный PGT-A из отработанной среды является многообещающим, способ, которым среда была собрана в исследовании, не является стандартной процедурой для случаев ЭКО. Однако сочетание PGT-A из биопсии TE с анализом эмбриональной вкДНК (ДНК, полученной из отработанной среды для бластоцисты) улучшило частоту имплантации (Rubio et al., 2019), а дополнительные анализы компонентов бластоцеля могут еще больше повысить частоту имплантации.

Возможные применения компонентов бластоэля

Хотя применение анализа cfDNA из отработанной среды в качестве замены PGT-A в лучшем случае проблематично и рискованно, все же могут существовать средства, с помощью которых cfDNA может предоставить важную информацию о доимплантационном эмбрионе наряду с PGT-A. В исследованиях нашей лаборатории мы обнаружили, что количественный анализ содержания вкДНК напрямую коррелировал как с доимплантационной морфологией эмбриона, так и со статусом плоидности (Rule et al., 2018; Chosed et al., 2019). Поскольку сообщалось, что количество вкДНК коррелирует со статусом плоидности, одним из способов использования жидкости бластоцеля может быть измерение количества вкДНК в качестве подтверждающей проверки любого результата PGT-A, потенциально обеспечивающего второй детерминант качества эмбриона (Chosed et al. др., 2019). Как показано на примере, эта корреляция, полученная из жидкости бластоцеля, может быть полезна для получения дополнительных данных и рекомендаций для выбора переноса эмбриона помимо результатов PGT-A.

Так как вкДНК и другие молекулярные остатки в жидкости бластоцеля, вероятно, происходят из апоптоза, происходящего в доимплантационном эмбрионе, идентификация и анализ этих молекул также может дать представление о состоянии самокоррекции бластоцисты. мРНК, экспрессируемые во время программы апоптоза в развивающемся эмбрионе, также находятся в жидкости бластоцеля (Athavale et al., 2019; Barré et al., 2019; Kranyak et al., 2019). Различия в экспрессии генов могут быть обнаружены в жидкости бластоцелей от доимплантационных эмбрионов с различным статусом плоидности или потенциалом имплантации.Таким образом, можно анализировать жидкость бластоцеля, чтобы получить дополнительную информацию о жизнеспособности эмбриона. Battaglia et al. Идентифицировали внеклеточные везикулы, содержащие микроРНК в жидкости бластоцеля, поэтому эти молекулы являются еще одним источником информации, которая может дать представление о жизнеспособности доимплантационного эуплоидного эмбриона. Более сфокусированный анализ компонентов бластоцеля и / или отработанной среды даст ключ к пониманию того, что представляют собой эти молекулы, и предоставит беспрецедентную возможность раскрыть процессы развития, которые гарантируют, что жизнеспособный предимплантационный эмбрион доступен для успешной имплантации.

Обсуждение

Поскольку MAR продолжает применяться во всем мире, растет потребность в разработке методов, которые помогают максимизировать вероятность имплантации при минимальном количестве циклов. Анализ компонентов жидкости бластоцеля может предоставить клиницисту еще одну меру в дополнение к доимплантационной морфологии эмбриона и статусу плоидности, полученным с помощью PGT-A. Кроме того, более тщательный анализ может привести к дополнительному пониманию механизмов самокоррекции эмбрионов или возможностей имплантации конкретных доимплантационных эмбрионов.Изучение компонентов жидкости бластоцеля может дать клиницисту более полное представление об общем потенциале предимплантационного эмбриона для рождения живого ребенка. В целом, учитывая возможность предоставить дополнительную информацию о текущих тестах качества эмбриона без дополнительного вмешательства в рост эмбриона, мы утверждаем, что изучение дополнительной молекулярной информации, полученной из жидкости бластоцеля во время биопсии, может помочь в выборе наиболее жизнеспособной доимплантации. эмбрион для переноса требует дальнейшего анализа и возможного клинического применения.

Авторские взносы

AL руководил написанием рукописи при содействии WR и RC. Все авторы внесли свой вклад в процесс редактирования.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

Ассу, С., Айт-Ахмед, О., Эль-Мессауди, С., Тьерри, А. Р., Хамама, С. (2014).Неинвазивная предимплантационная генетическая диагностика Х-сцепленных заболеваний. Med. Гипотезы 83, 506–508. DOI: 10.1016 / j.mehy.2014.08.019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Атавале Д., Барре А., Караньяк А., Лал А., Блалок Дж., Чанг Т. А. и др. (2019). Экспрессия проапоптотических генов в жидкости бластоцелей эуплоидных эмбрионов 5-го дня связана с отрицательными исходами беременности. Fertil. Стерил. 112: e261. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.07.788

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Барре А., Караньяк А., Атавале Д., Тайлер Л., Лал А., Циммерман С. и др. (2019). «Анализ РНК-Seq жидкости бластоцеля выявляет уникальный профиль сигнатуры экспрессии генов в эуплоидных эмбрионах, которые успешно имплантируются», в материалах Ежегодной конференции Фонда репродуктивной медицины , Нью-Йорк, Нью-Йорк.

Google Scholar

Батталья, Р., Палини, С., Венто, М.E., La, Ferlita A, Lo, Faro MJ, Caroppo, E., et al. (2019). Идентификация внеклеточных везикул и характеристика профилей экспрессии miRNA в жидкости бластоцелей человека. Sci. Реп. 9:84. DOI: 10.1038 / s41598-018-36452-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бхатт, С., Рой, Дж., Морелли, С.С., и Макговерн, П. (2019). Исходы беременности после экстракорпорального оплодотворения с переносом замороженных эмбрионов (ЭКО-ФЭТ) с или без доимплантационного генетического тестирования на анеуплоидию (PGT-A) у женщин с повторной потерей беременности (RPL): исследование SART-CORS. Fertil. Стерил. 112: e32. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.07.215

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бианки, Д. У., ЛеШейн, Э. С., и Коуэн, Дж. М. (2001). В околоплодных водах присутствует большое количество внеклеточной ДНК плода. Clin. Chem. 47, 1867–1869. DOI: 10.1093 / Clinchem / 47.10.1867

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бианки, Д. У., Паркер, Р. Л., Вентворт, Дж., Маданкумар, Р., Саффер, К., Дас, А. Ф. и др.(2014). Секвенирование ДНК по сравнению со стандартным пренатальным скринингом на анеуплоидию. N. Engl. J. Med. 370, 799–808. DOI: 10.1056 / nejmoa1311037

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Болтон, Х., Грэм, С. Дж., Ван дер Аа, Н., Кумар, П., Теунис, К., Фернандес Галлардо, Э. и др. (2016). Мышиная модель хромосомного мозаицизма выявляет клон-специфическое истощение анеуплоидных клеток и нормальный потенциал развития. Nat. Commun. 7: 11165. DOI: 10.1038 / ncomms11165

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Брезина, П. Р., Анчан, Р., Кернс, В. Г. (2016). Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию: какую технологию следует использовать и в чем различия? J. Assis. Репрод. Genet. 33, 823–832. DOI: 10.1007 / s10815-016-0740-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Брилл А., Торчинский А., Карп Х. и Тодер В. (1999). Роль апоптоза в нормальном и аномальном эмбриональном развитии. J. Assist. Репрод. Genet. 16, 512–519.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Capalbo, A., Romanelli, V., Patassini, C., Poli, M., Girardi, L., Giancani, A., et al. (2018). Диагностическая эффективность жидкости бластоцеля и отработанной среды как источников ДНК для преимплантационного генетического тестирования в стандартных клинических условиях. Fertil. Стерил. 110, 870–879. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2018.05.031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чосед, Р.Дж., Лал, А., Блэлок, Дж., Чанг, Т. А., Робинсон, Р. Д., Циммерман, С., и др. (2019). Содержание бесклеточной ДНК в медиальной части бластоцеля человека, кондиционированной жидкостью, отличает эуплоидные эмбрионы от анеуплоидных. Integr. Мол. Med. 6, 1–4. DOI: 10.15761 / IMM.1000372

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фрагули, Э., Мунн, С., и Уэллс, Д. (2018). Цитогенетическая конституция бластоцист человека: выводы из всеобъемлющих стратегий скрининга хромосом. Hum.Репрод. Обновление 25, 15–33. DOI: 10.1093 / humupd / dmy036

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарднер, Д. К., Скулкрафт, В. Б. (1999). «Культивирование бластоцисты человека in vitro», в На пути к репродуктивной уверенности: бесплодие и генетика после 1999 г. , ред. Р. Янсон и Д. Мортимер (Карнфорт: Parthenon Press), 378–388.

Google Scholar

Джанароли, Л., Магли, М. К., Поманте, А., Кривелло, А. М., Кафуэри, Г., Валерио М. и др. (2014). Бластоцентез: источник ДНК для преимплантационного генетического тестирования. Результаты пилотного исследования. Fertil. Стерил. 102, 1692–1699. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2014.08.021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хаммонд, Э. Р., Макгилливрей, Б. К., Уикер, С. М., Пик, Дж. К., Шеллинг, А. Н., Стоун, П. и др. (2017). Характеристика ядерной и митохондриальной ДНК в отработанной культуральной среде эмбрионов: выявлено генетическое загрязнение. Fertil. Стерил. 107, 220–228. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2016.10.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хо, Дж. Р., Аррач, Н., Родс-Лонг, К., Ахмади, А., Инглес, С., Чанг, К. и др. (2018). Расширяя границы обнаружения: исследование внеклеточной ДНК для скрининга анеуплоидии у эмбрионов. Fertil. Стерил. 110, 467–475. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2018.03.036

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг, Л., Богале, Б., Тан, Ю., Лу, С., Се, X.С., и Раковски, К. (2019). Неинвазивное доимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию в отработанной среде может быть более надежным, чем биопсия трофэктодермы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 116, 14105–14112. DOI: 10.1073 / pnas.1

2116

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Юрисикова А., Актон Б. М. (2004). Смертельные решения: роль генов, регулирующих запрограммированную гибель клеток в преимплантационном развитии эмбриона человека. Репродукция 128, 281–291. DOI: 10.1530 / rep.1.00241

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Дж. Г., Муругаппан, Г., Лати, Р. Б., Корт, Дж. Д., Хансон, Б. М., Тигс, А. В. и др. (2019). Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию (PGT-A) снижает вероятность выкидыша и улучшает уровень живорождений у пациенток с повторной потерей беременности. Fertil. Стерил. 112: e401. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.07.1141

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Краняк, А., Барре А., Атавале Д., Лал А., Блэлок Дж., Чанг Т. А. и др. (2019). Есть ли какие-либо сходства в экспрессии генов между эуплоидными эмбрионами и анеуплоидными эмбрионами, совместимыми с жизнью? Fertil. Стерил. 112: e259. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.07.783

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ларраби, П. Б., Джонсон, К. Л., Пестова, Э., Лукас, М., Уилбер, К., ЛеШейн, Э. С. и др. (2004). Микроматричный анализ внеклеточной ДНК плода в околоплодных водах: пренатальный молекулярный кариотип. Am. J. Hum. Genet. 75, 485–491. DOI: 10.1086 / 423288

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лати, Р. Б., Масси, Дж. А., Гилани, М., Милки, А. А., Вестфаль, Л. М., Бейкер, В. Л. и др. (2012). Результаты биопсии трофэктодермы на криоконсервированных бластоцистах: серия случаев. Репродукция. Биомед. 25, 504–507. DOI: 10.1016 / j.rbmo.2012.06.021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли П., Сонг З., Yao, Y., Huang, T., Mao, R., Huang, J., et al. (2018). Преимплантационный генетический скрининг с использованной питательной средой / жидкостью Blastocoel для экстракорпорального оплодотворения. Sci. Реп. 8: 9275. DOI: 10.1038 / s41598-018-27367-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ло Ю. М., Корбетта Н., Чемберлен П. Ф., Рай В., Сарджент И. Л., Редман К. В. и др. (1997). Наличие ДНК плода в плазме и сыворотке матери. Ланцет 350, 485–487.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Магли, М.К., Альбанезе, К., Криппа, А., Табанелли, К., Ферраретти, А. П., и Джанароли, Л. (2019). Обнаружение дезоксирибонуклеиновой кислоты в бластоцельной жидкости: новый предиктор плоидности эмбриона и жизнеспособной беременности. Fertil. Стерил. 111, 77–85. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2018.09.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mertzanidou, A., Wilton, L., Cheng, J., Spits, C., Vanneste, E., Moreau, Y., et al. (2012). Анализ микроматрицы выявляет аномальные хромосомные комплексы более чем у 70% из 14 нормально развивающихся эмбрионов человека. Hum. Репрод. 28, 256–264. DOI: 10.1093 / humrep / des362

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Munné, S., Kaplan, B., Frattarelli, J. L., Child, T., Nakhuda, G., Shamma, F. N., et al. (2019). Преимплантационное генетическое тестирование анеуплоидии по сравнению с морфологией как критерий отбора для переноса одного замороженного эмбриона у пациентов с хорошим прогнозом: многоцентровое рандомизированное клиническое исследование. Fertil. Стерил. 112, 1071–1079. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.07.1346

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Норвиц, Э. Р., и Леви, Б. (2013). Неинвазивное пренатальное тестирование: будущее уже наступило. Rev. Obstetr. Гинеколь. 6:48.

Google Scholar

Палини С., Галлуцци Л., Де, Стефани С., Бьянки М., Уэллс Д., Маньяни М. и др. (2013). Геномная ДНК в жидкости бластоцели человека. Репродукция. Биомед. 26, 603–610. DOI: 10.1016 / j.rbmo.2013.02.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Поли, м., Ори, А., Чайлд, Т., Джаруди, С., Спат, К., Бек, М., и др. (2015). Характеристика и количественная оценка белков, секретируемых отдельными человеческими эмбрионами до имплантации. EMBO Mol. Med. 7, 1465–1479. DOI: 10.15252 / emmm.201505344

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рис, Э. А., Цзи, И., Ву, Ю. К., и Чжао, З. (2006). Характеристика профилей дифференциальной экспрессии генов при диабетической эмбриопатии с использованием анализа микрочипов ДНК. Am.J. Obstet. Гинеколь. 195, 1075–1080. DOI: 10.1016 / j.ajog.2006.05.054

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рубио, К., Риенци, Л., Наварро-Санчес, Л., Чимадомо, Д., Гарсиа-Паскуаль, К. М., Альбриччи, Л. и др. (2019). Эмбриональная бесклеточная ДНК в сравнении с биопсией трофэктодермы для тестирования анеуплоидии: частота соответствия и клинические последствия. Fertil. Стерил. 112, 510–519. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2019.04.038

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Правило, К., Чосед, Р. Дж., Чанг, Т. А., Винингер, Дж. Д., и Рудебуш, В. Е. (2018). Связь между внеклеточной ДНК бластоцеля и морфологией бластоцисты 5-го дня. J. Assist. Репрод. Genet. 35, 1497–1501. DOI: 10.1007 / s10815-018-1223-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шреффлер, К. М., Грейл, А. Л., и Маккуиллан, Дж. (2017). Реагирование на бесплодие: уроки растущего объема исследований и предлагаемые практические рекомендации. Fam.Relat. 66, 644–658. DOI: 10.1111 / тариф.12281

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sunderam, S., Kissin, D. M., Zhang, Y., Folger, S. G., Boulet, S. L., Warner, L., et al. (2019). Надзор за вспомогательными репродуктивными технологиями — США, 2016 г. MMWR Surveill. Сумм. 68, 1–23.

Google Scholar

Сваминатан Р. и Батт А. Н. (2006). Циркулирующие нуклеиновые кислоты в плазме и сыворотке. Ann. Акад.Sci. 1075, 1–9.

Google Scholar

Tobler, K.J., Zhao, Y., Ross, R., Benner, A.T., Xu, X., Du, L., et al. (2014). Бластоцельная жидкость (bf) содержит эмбриональную ДНК, которая может быть результатом маргинализации анеуплоидных клеток во время эмбриогенеза. Fertil. Стерил. 102: e205. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2014.07.692

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цуйко О., Жигалина Д. И., Яценко Т., Скрябин Н. А., Канбекова О. Р., Артюхова В.G., et al. (2018). Кариотип жидкости бластоцеля демонстрирует низкое соответствие как трофэктодерме, так и внутренней клеточной массе. Fertil. Стерил. 109, 1127–1134. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2018.02.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вернер, М. Д., Скотт, К., Борер, К., Габриэле, Д., Тао, X., Хонг, К. Х. и др. (2014). Точность комплексного хромосомного скрининга (CCS) жидкости бластоцеля зависит от выхода амплификации и глубины секвенирования при использовании секвенирования следующего поколения. Fertil. Стерил. 102: e00308-9.

Google Scholar

Zhang, J., Xia, H., Chen, H., Yao, C., Feng, L., Song, X., et al. (2019). Менее инвазивный хромосомный скрининг эмбрионов и оценка эмбрионов путем генетических исследований ДНК в среде для культивирования эмбрионов. J. Assis. Репрод. Genet. 36, 2505–2513. DOI: 10.1007 / s10815-019-01603-w

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Биопсия бластоцисты: новая процедура

! [] (Http: // www.pacificfertilitycenter.com/fertilityflash/vol7-5/figure1.jpg)

Этим летом мы представляем новую процедуру в нашей лаборатории, которая позволит нам проводить генетическое тестирование эмбрионов, достигших стадии развития бластоцисты. Традиционно эмбрионы берут на биопсию, когда им всего 3 дня, когда они должны были достичь 8-клеточной стадии (см. Рисунок 1). Биопсия клетки отправляется в лабораторию генетики для тестирования, в то время как оставшаяся часть эмбриона продолжает расти в нашей лаборатории.Результаты генетического тестирования получены через 48 часов, когда мы надеемся, что эмбрион достигнет стадии бластоцисты (см. Рисунок 2). Бластоцисты, прошедшие генетический скрининг, могут быть перенесены или заморожены для дальнейшего использования. Выполнение биопсии, когда эмбрион превратился в бластоцист, технически сложнее, и у генетической лаборатории остается меньше времени для проведения тестирования. Однако в бластоцисте мы можем проводить биопсию из той части эмбриона, которая станет плацентой, и мы можем получить более 1 клетки, что позволяет повысить точность генетического тестирования.В зависимости от того, как быстро будет проведен тест, эмбрион, возможно, придется заморозить, пока мы ждем результатов.

! [] (Http://www.pacificfertilitycenter.com/fertilityflash/vol7-5/figure2.jpg)

Хотя замораживание неудобно, оно позволяет провести более сложное генетическое тестирование и, при необходимости, провести несколько тестов. И с успехом витрификации для сохранения эмбрионов [(см. Fertility Flash Vol. 7, Issue 3)] (http://www.pacificfertilitycenter.com/fertilityflash/vol7_issue3.htm#Article1 «Витрификация бластоцисты: первые два года» ), мы уверены, что замороженные эмбрионы выживут и быстро имплантируются при оттаивании.В ближайшие несколько лет мы ожидаем, что традиционные методы биопсии и генетического тестирования исчезнут, а биопсия бластоцисты станет стандартной процедурой. По мере развития генетического тестирования будет невозможно полагаться только на одну клетку эмбриона для получения надежных результатов. Мы уже знаем, что существует генетическая изменчивость среди клеток в отдельном эмбрионе, явление, известное как мозаицизм, и наша новая процедура решит эту проблему. В ближайшие месяцы мы объявим о новом захватывающем партнерстве с лабораторией генетического тестирования Bay Area и будем держать читателей в курсе нашего прогресса в области генетического тестирования эмбрионов.Это захватывающая область, которая продолжает развиваться.

Биопсия эмбриона и генетическое тестирование PGS

Преимплантационное генетическое тестирование

Что такое преимплантационное генетическое тестирование?

Преимплантационное генетическое тестирование (PGT) — это метод, используемый при ЭКО для проверки генетических аномалий в ваших эмбрионах. PGT включает выполнение биопсии эмбриона бластоцист на 5 или 6 день перед их переносом обратно в матку. Цель PGT — снизить риск переноса аномального эмбриона, который может привести к неудачному переносу эмбриона, биохимической беременности, выкидышу, гибели плода или рождению ребенка с аномалиями.

Типы PGT

Существуют разные типы PGT:

1. Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидию ( PGT-A )

Нормальный человеческий эмбрион содержит 23 пары хромосом, одну пару из яйцеклетки и одну пару из сперматозоидов. К сожалению, не все наши яйцеклетки и сперматозоиды имеют нормальное количество хромосом (так называемых эуплоидных). Наличие эмбрионов с лишними или отсутствующими хромосомами, известное как анеуплоидия, происходит случайно и является наиболее частой причиной потери беременности.Анеуплоидные эмбрионы также могут привести к рождению ребенка с различными аномалиями. PGT-A включает тестирование эмбрионов на правильное количество хромосом, чтобы максимизировать ваши шансы на здоровую беременность

2. Преимплантационное генетическое исследование моногенных заболеваний ( PGT-M )

Многие болезни связаны с дефектом одного гена (или моногенным дефектом), который передается от родителей. Родители, которые, как известно, являются носителями генетической мутации, которая может передаваться по наследству, могут тестировать свои эмбрионы, чтобы снизить риск рождения пострадавшего ребенка, с помощью процесса, известного как PGT-M, ранее известного как PGD (предимплантационная генетическая диагностика).

Общие примеры необходимости использования PGT-M включают:

• Оба родителя являются скрытыми носителями аутосомного рецессивного заболевания , при котором две копии мутации наследуются (по одной от каждого родителя), что приводит к заболеванию ребенка (например, муковисцидоз, серповидноклеточная анемия, мышечная атрофия позвоночника). Статус родителя-носителя часто выявляется во время обычного генетического скрининга носительства, до ЭКО или в семейном анамнезе.
• Являясь носителем Х-сцепленного заболевания , мутация которого передается от Х-хромосомы (например,Синдром ломкой Х-хромосомы).
• Наличие аутосомного -доминантного состояния у одного из родителей (например, болезнь Хантингтона). Это даст 50% шанс родить больного ребенка.
• Родители с предыдущим ребенком, страдающие одним генным заболеванием
• Один из родителей имеет мутацию, связанную с синдромом наследственного рака (например, BRCA1 / 2, синдром Линча)

3. Преимплантационное генетическое тестирование структурных перестроек ( PGT-SR )

Этот тип тестирования предназначен для пациентов, у которых известно о перестройке собственных хромосом.Например, при реципрокной транслокации часть хромосомы отрывается и повторно присоединяет другую хромосому, что не приводит к чистой потере или приросту генетического материала для родителя, но может привести к потере или приросту генетического материала для эмбриона. Классическое клиническое проявление хромосомной транслокации или инверсии в анамнезе — это повторная потеря беременности в анамнезе, которая диагностируется путем анализа родительского кариотипа (ов). Эмбрионы с лишним или отсутствующим участком хромосомы имеют более высокий риск выкидыша или рождения ребенка с ограниченными возможностями.

Кандидаты в ПГТ

PGT может выполняться только во время цикла ЭКО. Решение о продолжении PGT может быть довольно сложным и потребовать серьезной консультации. Вообще говоря, пары с историей повторного невынашивания беременности, неудачных циклов ЭКО, преклонного возраста матери (> 35 лет) или предшествующей беременности или ребенка, страдающего хромосомным дефектом или дефектом одного гена.

Как проводится ПГТ?

Шаг 1.Пациенты проходят ЭКО, начиная со стимуляции яичников (если не используются донорские яйцеклетки). После извлечения яйцеклетки зрелые яйцеклетки оплодотворяются с использованием спермы вашего партнера (или донорской спермы) в процессе, известном как интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов [ссылка на вкладку ИКСИ] (ИКСИ).

ИКСИ необходимо перед выполнением ПГТ, чтобы снизить риск заражения, которое может произойти от других окружающих сперматозоидов в чашке Петри во время обычного ЭКО. Это помогает повысить точность генетического тестирования

Шаг 2.Эмбрионы культивируются в лаборатории и наблюдаются в течение 5-6 дней, пока клетки не разделятся достаточно, чтобы сформировать бластоцисту (состоит примерно из 70-100 клеток). Бластоциста включает внешний слой клеток, известный как трофэктодерма, который в конечном итоге разовьется в плаценту, и внутреннюю клеточную массу, которая станет плодом. Обученный эмбриолог проведет биопсию 5-10 клеток трофэктодермы и перенесет образец во внешнее учреждение для анализа.

Шаг 3.В ожидании результатов эмбрионы замораживаются. Результаты обычно доступны через 7-10 дней.

Шаг 4. За один раз выбирается один эуплоидный эмбрион для переноса обратно в матку.

Шаг 5. Анеуплоидные или аномальные эмбрионы либо выбрасываются, либо передаются для исследования (с вашего согласия).

Риски тестирования PGS

Содержание

Тестирование PGS (также известное как PGT-A) сопряжено с риском.Это распространенный инструмент для выбора лучшего эмбриона для переноса во время экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). С помощью лазера берется небольшая биопсия эмбриона и анализируется ДНК внутри образца. Вредит ли эта биопсия эмбриону? Работает ли тестирование PGS? Это гарантированная беременность?

Краткие сведения о рисках тестирования PGS

• Тестирование PGS (также известное как PGT-A) — это метод, помогающий выбрать лучший эмбрион для переноса эмбриона
• Эмбрионы с правильным числом хромосом называются эуплоидными и могут иметь более высокие шансы на зачатие, хотя доказательства этого противоречивы.Женщины старше 35, похоже, получают наибольшую пользу от тестирования PGS.
• Есть некоторые свидетельства того, что эмбрион может быть поврежден во время этого процесса, но это не ясно.
• Путь к эуплоидному эмбриону может быть трудным: не все эмбрионы становятся бластоцистами, и не все бластоцисты будут эуплоидными.
• Передача эуплоида может иметь более высокие шансы на зачатие, но они все еще могут потерпеть неудачу
Результаты тестирования
• PGS могут быть неточными, а иногда аномальные эмбрионы могут и не быть аномальными.

Что такое PGS-тестирование (PGT-A) и как оно проводится?

Для проведения PGS-тестирования эмбрион необходимо вырастить до стадии бластоцисты, которая обычно занимает 5-7 дней после извлечения и оплодотворения яйцеклетки.

На этой стадии у эмбриона много трофэктодермы — клеток, которые в конечном итоге становятся плацентой, — и из трофэктодермы берется биопсия. Это считается безопасной практикой. В конце концов, вы не берете клетки из внутренней клеточной массы — той части, которая становится младенцем, — поэтому несколько клеток из трофэктодермы (которая состоит из сотен) должно быть в порядке.

Для биопсии эмбриона обычно используется лазер. Этот лазер может создавать небольшие и концентрированные тепловые импульсы, которые помогают отделить клетки от остальной части эмбриона. Образец также тянут, чтобы помочь разобрать его. Посмотрите следующее видео, чтобы увидеть это в действии:

Все это выглядит впечатляюще, но действительно ли удаление нескольких клеток вредит эмбриону?

Вредит ли эмбриону тестирование PGS?

Может быть, да, может, нет. На самом деле не все так однозначно.Но давайте ненадолго вернемся во времени и взглянем на эмбрионы на стадии дробления.

Вредит ли эмбрион на стадии дробления биопсии?

Давным-давно, в не столь далекой стране, эмбрионы культивировали до 3-го дня, а не до бластоцисты. Мы просто не знали, как это делать. Точно так же, как пещерные люди еще не изобрели огонь, клиники ЭКО не придумали, как создать благоприятную среду для эмбрионов, чтобы добраться до бластоцисты.

Итак, тогда биопсия эмбриона на стадии дробления была нормой.Вот изображение эмбриона на стадии дробления около 3-го дня с примерно 8 клетками:

Тестирование

PGS на эмбрионе на стадии дробления проводилось путем взятия одной или двух клеток и отправки их на тестирование. Но может ли это повредить эмбрион при наличии всего небольшого количества клеток? Исследование 2013 года сказал «да» и обнаружил, что имплантация сократилась на 39%, если была проведена биопсия эмбриона на стадии дробления.

Легко понять, как это может быть вредным для эмбриона — что, если удаляемая клетка оказывается критически важной для развития? Без большого количества клеток на этом этапе больше нечем компенсировать, и в этом случае тестирование PGS может нанести вред эмбриону.А вот с бластоцистами клеток много.

Вредит ли эмбрион на стадии биопсии эмбриона на стадии бластоцисты?

Культура бластоцисты уже некоторое время является нормой, и биопсия эмбриона с использованием бластоцисты считается более эффективной, чем биопсия на стадии дробления.

Как мы видели выше, биопсия эмбриона на стадии дробления эмбриона может повредить эмбрион, вероятно, потому, что изначально не так много клеток. С бластоцистами в трофэктодерме много (сотни) клеток, поэтому взятие небольшого кусочка не должно причинить большого вреда, верно? Вообще-то непонятно!

Исследование 2013 г. обнаружили, что не было повреждений , вызванных биопсией эмбриона, а эмбрионы, подвергнутые биопсии, имели такой же потенциал имплантации, как и эмбрионы, не подвергшиеся биопсии.Но по крайней мере несколько других исследований говорят об обратном.

Во время биопсии эмбриона берется около 5 клеток, но что, если взять кусок побольше? Исследование 2014 г. посмотрел только на это. Они обнаружили, что частота продолжающихся беременностей снижалась при биопсии большого кусочка эмбриона, предположительно из-за того, что эмбрион не мог восстановиться.

Насколько развит эмбрион во время биопсии, также может иметь значение. Исследование 2019 года обнаружили, что у эмбрионов были лучшие результаты, если бы они были взяты биопсией при расширении и вылуплении из зоны.Слишком ранняя биопсия эмбрионов имела значительно более низкие показатели успешности, и авторы предполагают, что это связано с повреждением, вызванным самой биопсией.

Еще одна статья 2020 года предсказал, что 17-39% эмбрионов могут быть потеряны из-за самого процесса биопсии эмбриона. Они получили эту цифру после просмотра результатов большого исследования, в котором тестирование PGS оказалось не так хорошо, как предполагалось.

Таким образом, тестирование PGS может повредить бластоцисту, и это может повлиять на показатели успеха. Если взять кусок правильного размера и провести биопсию в нужное время, это может уменьшить повреждение, но могут быть и другие факторы, о которых мы не знаем.

Действительно ли работает тестирование PGS?

Если мы говорим о рисках тестирования PGS, мы должны взвесить это в его пользу. Тестирование PGS основано на основной идее о том, что перенос хромосомно нормальных или эуплоидных эмбрионов увеличивает вероятность успеха и снижает количество выкидышей. Итак, что мы видим на практике?

Это на самом деле довольно спорно! Некоторые исследования находят пользу, а некоторые — нет.

Повышает ли тестирование PGS вероятность успеха?

Исследование 2015 г. проанализировали несколько исследований, в которых сравнивали тестирование PGS с отсутствием тестирования, и обнаружили общее преимущество, однако эти исследования были небольшими и использовали женщин с хорошим прогнозом (<35 лет, извлечено много яйцеклеток и проведена биопсия), у которых в любом случае могла быть лучше прививка.

Исследование 2016 г. и исследование 2017 года обнаружил пользу, но только у женщин старше 37 лет.

Большое исследование 2019 г. обнаружил без разницы при использовании тестирования PGS в возрасте 25-40 лет. Однако дальнейший анализ показал, что в группе 35-40 лет частота продолжающихся беременностей улучшилась (с 37,2% до 50,8%).

Снижает ли тестирование PGS уровень выкидышей?

Так что насчет количества выкидышей?

Отчет комитета за 2018 г. показывает данные о том, что тестирование PGS снижает вероятность выкидышей.Большое исследование 2019 года не нашел разницы.

Итак, в целом, тестирование PGS может иметь смысл для женщин старше 35 лет. Идея заключается в том, что качество яйцеклеток с возрастом снижается и приводит к тому, что большее количество эмбрионов оказывается хромосомно аномальным или анеуплоидным. Однако во всем этом есть одна загвоздка — вам нужно создать эуплоидные эмбрионы, чтобы это сработало! И даже тогда нет никаких гарантий.

Тестирование PGS не является гарантией

Тестирование

PGS может сработать для некоторых, особенно для людей старше 35 лет, но есть несколько препятствий, которые необходимо преодолеть в первую очередь.Один из самых больших рисков при проведении PGS-тестирования — это вполне реальная вероятность того, что не будет никаких эуплоидов для передачи — и даже с одним из них нет гарантии, что он станет младенцем.

Не все производят бластоцисты

Это кажется очевидным, но часто упускается из виду, особенно тем, кто впервые делает ЭКО. Бластоцисты — это продвинутая стадия развития эмбриона, и не все эмбрионы доживают до этой стадии. Фактически, до 50-70% эмбрионов задерживаются. , или прекратить разработку, прежде чем они дойдут до этой стадии.Таким образом, от человека с 10 эмбрионами можно ожидать около 3-5 бластоцист. Но это верно не для всех, и для некоторых женщин их эмбрионы просто не дойдут до этой стадии. С возрастом может даже ухудшиться .

Не все делают эуплоидов

Даже с бластоцистами есть шанс, что они будут хромосомно аномальными (анеуплоидными), и вы не сможете их использовать. Шансы получить эуплоид снижается с примерно 60% на эмбрион (для женщин <35) до примерно 10% в 45 лет. А для некоторых женщин эти цифры неприменимы - некоторые могут получить больше, меньше или даже не получить! Невозможно точно предсказать, что произойдет в конкретной ситуации.

Перенос эуплоида не означает, что он будет работать

Распространенное заблуждение состоит в том, что перенос эуплоидной беременности — это гарантированная беременность. Это не так. Исследование 2018 года обнаружили, что вероятность успеха у эуплоидов составляет около 60-70%, независимо от возраста. И сорта эмбриона все еще, кажется, тоже имеет значение!

Эмбрион — это еще не все — мы не можем игнорировать роль эндометрия (слизистой оболочки матки). Если принятие эмбриона для имплантации не является оптимальным, он может не привести к беременности.

«Аномальные» эмбрионы не могут быть ненормальными

Мозаичные эмбрионы

Технология, используемая для тестирования PGS, постоянно меняется. В наши дни для анализа ДНК используется так называемое «секвенирование следующего поколения» или NGS. Он намного надежнее старой технологии, потому что имеет более высокое разрешение. Это привело к открытию «мозаичных» эмбрионов или эмбрионов, которые имеют смесь анеуплоидных и эуплоидных клеток:

При использовании более старых технологий они могли быть признаны ненормальными и выброшены.С помощью новой, более чувствительной технологии мы можем улавливать крошечные отличия и маркировать их как мозаику. Мозаичные эмбрионы имеют промежуточный успех по сравнению с эуплоидами, и мы все еще много о них узнаем.

Мозаичные эмбрионы могут «самокорректироваться»

Есть некоторые доказательства эти мозаичные эмбрионы могут самокорректироваться, когда аномальные клетки перерастают эуплоидные клетки, что со временем приводит к эуплоидному эмбриону. Есть даже люди, которые верят что все эмбрионы проходят стадию мозаики и что это нормальная часть их развития! Об этом еще предстоит многое узнать, и это заставляет задуматься о том, что принесет будущее.10 лет назад мы выбрасывали эмбрионы, которые с помощью сегодняшних технологий мы могли бы перенести (в виде мозаики). Так что же будет в следующие 10 лет?

Представляет ли небольшая биопсия всего эмбриона?

Другая проблема заключается в том, что диагноз вашего эмбриона основан на крошечной части самого эмбриона. Это может быть всего 5 или около того клеток по сравнению с гораздо более крупным эмбрионом из 300 клеток. Достаточно ли этого для диагностики всего эмбриона? Помните, некоторые люди выбрасывают свои эмбрионы, если они ненормальные — но что, если образец биопсии был ненормальным, а ICM (внутренняя клеточная масса и часть, которая становится ребенком) была эуплоидной?

Трудно сказать наверняка, произойдет это или нет, поскольку мы не проводим биопсию ICM, но мы можем ясно видеть из этого изображения, что результаты биопсии зависят от того, из какой части эмбриона взята биопсия.И есть доказательства того, что результаты повторной биопсии эмбрионов могут отличаться от результатов исходной биопсии. .

Вероятно, это все из-за проблемы с размером взятой пробы. Он может не соответствовать остальной части эмбриона. Одно исследование обнаружили, что вам потребуется биопсия не менее 27 клеток, чтобы быть уверенным, что результаты биопсии соответствуют остальной части эмбриона. Проблема в том, что это может быть слишком много клеток, и это может повредить эмбрион!

Будущее может быть за неинвазивным тестированием PGS, при котором жидкость внутри бластоцисты анализируется, а не лазерным излучением части эмбриона.Это может улучшить показатели успеха, ограничив ущерб, нанесенный эмбриону. Или, может быть, у нас просто будут еще вопросы.

Итог

Тестирование

PGS сопряжено с риском. Что касается повреждения реального эмбриона, да, это возможно, и некоторые данные показывают, что эмбрионы могут быть потеряны во время процесса. С точки зрения более широкой картины, когда мы спрашиваем: «Это вообще работает?», Ответ неоднозначен, но, похоже, показывает пользу для женщин старше 35 лет. Здесь выбор эуплоидного эмбриона даст больше шансов на беременность, но помните , не все женщины получат бластоцисты, необходимые для тестирования PGS, и не все бластоцисты будут эуплоидными! Даже после переноса эуплоида нет гарантии беременности.Технология несовершенна, и «эуплоидные» эмбрионы в конце концов могут даже не быть эуплоидными. И это даже без упоминания стоимости. Учитывая, что генетическое тестирование может стоить тысячи долларов из-за платы за биопсию, генетическое тестирование / лабораторные сборы, а также того факта, что для этого требуется перенос замороженных эмбрионов (FET), он может легко составить большую часть общей стоимости ЭКО.

Учитывая все это, легко увидеть, как ответ на вопрос «Следует ли мне заниматься PGS» может оказаться по обе стороны от уравнения.Из-за огромной сложности тестирования PGT-A / PGS мы всегда рекомендуем, чтобы любое решение, принятое в отношении генетического тестирования, будь то в надежде уменьшить выкидыш, выбор пола ребенка или по другой причине, принималось после консультации.