Арбидол в капсулах 100 мг: инструкция по применению

Содержимое капсул – смесь, содержащая гранулы и порошок от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремоватым оттенком цвета.

• Лечение: 100 мг x 4 р/сут, 5 дней
• Постконтактная профилактика: 100 мг x 1 р/сут, 10-14 дней
• Сезонная профилактика: 100 мг x 2 раза в неделю, 3 недели

Скачать инструкцию

Активное вещество: Умифеновир (умифеновира гидрохлорида моногидрат (арбидол) в пересчете на умифеновира гидрохлорид) – 100 мг.

• Регистрационный номер: Р N003610/01
• Торговое наименование: Арбидол®
• Международное непатентованное наименование: умифеновир
• Лекарственная форма: капсулы

Состав на одну капсулу

Действующее вещество: умифеновира гидрохлорида моногидрат (в пересчете на умифеновира гидрохлорид) – 100 мг.

Вспомогательные вещества: ядро: крахмал картофельный – 30,14 мг, целлюлоза микрокристаллическая – 55,76 мг, кремния диоксид коллоидный (аэросил) – 2,0 мг, повидон К 25 (коллидон 25) – 10,1 мг, кальция стеарат — 2,0 мг.

Капсулы твердые желатиновые № 1:

Корпус: титана диоксид (Е 171) – 2,0000%, желатин – до 100%.

Крышечка: титана диоксид (Е 171) – 1,3333%, краситель солнечный закат желтый (Е 110) – 0,0044%, хинолиновый желтый (Е 104) – 0,9197%, желатин – до 100%.

Описание

Капсулы твердые желатиновые №1. Корпус белого цвета, крышечка желтого цвета. Содержимое капсул — смесь, содержащая гранулы и порошок от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремоватым оттенком цвета.

Фармакотерапевтическая группа: противовирусное средство

Код АТХ: J05AX13

Фармакологические свойства

Фармакодинамика.

Противовирусное средство. Специфически подавляет in vitro вирусы гриппа А и В (Influenzavirus A, B), включая высокопатогенные подтипы A(h2N1)pdm09 и A(H5N1), а также другие вирусы — возбудители острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) (коронавирус (Сoronavirus), ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС), риновирус (Rhinovirus), аденовирус (Adenovirus), респираторно-синцитиальный вирус (Pneumovirus) и вирус парагриппа (Paramyxovirus)). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Обладает интерферон-индуцирующей активностью – в исследовании на мышах индукция интерферонов отмечалась уже через 16 часов, а высокие титры интерферонов сохранялись в крови до 48 часов после введения. Стимулирует клеточные и гуморальные реакции иммунитета: повышает число лимфоцитов в крови, в особенности Т-клеток (СD3), повышает число Т-хелперов (CD4), не влияя на уровень Т-супрессоров (CD8), нормализует иммунорегуляторный индекс, стимулирует фагоцитарную функцию макрофагов и повышает число естественных киллеров (NKклеток).

Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в уменьшении продолжительности и тяжести течения болезни и ее основных симптомов, а также в снижении частоты развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, и обострений хронических бактериальных заболеваний.

При лечении гриппа или ОРВИ у взрослых пациентов в клиническом исследовании показано, что эффект препарата Арбидол® у взрослых пациентов наиболее выражен в остром периоде заболевания и проявляется сокращением сроков разрешения симптомов болезни, снижением тяжести проявлений заболевания и сокращением сроков элиминации вируса. Терапия препаратом Арбидол® приводит к более высокой частоте купирования симптомов заболевания на третьи сутки терапии по сравнению с плацебо. Через 60 ч после начала терапии разрешение всех симптомов лабораторно подтвержденного гриппа более чем в 5 раз превышает аналогичный показатель в группе плацебо.

Установлено значимое влияние препарата Арбидол® на скорость элиминации вируса гриппа, что, в частности, проявлялось уменьшением частоты выявления РНК вируса на 4е сутки.

Относится к малотоксичным препаратам (LD50 > 4 г/кг). Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах.

Фармакокинетика. Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови достигается через 1,5 ч. Метаболизируется в печени. Период полувыведения равен 17-21 ч. Около 40 % выводится в неизмененном виде, в основном с желчью (38,9 %) и в незначительном количестве почками (0,12 %). В течение первых суток выводится 90 % от введенной дозы.

Показания к применению

• Профилактика и лечение у взрослых и детей: грипп А и В, другие ОРВИ.
• Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции.
• Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений.
• Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к умифеновиру или любому компоненту препарата; детский возраст до 6 лет. Первый триместр беременности. Период грудного вскармливания.

С осторожностью:
Второй и третий триместры беременности

Применение при беременности и в период грудного вскармливания

В исследованиях на животных не было выявлено вредных воздействий на течение беременности, развитие эмбриона и плода, родовую деятельность и постнатальное развитие. Применение препарата Арбидол® в первом триместре беременности противопоказано. Во втором и третьем триместре беременности Арбидол® может применяться только для лечения и профилактики гриппа и в том случае, если предполагаемая польза для матери превышает потенциальный риск для плода. Соотношение польза/риск определяется лечащим врачом.

Неизвестно, проникает ли Арбидол® в грудное молоко у женщин в период лактации. При необходимости применения препарата Арбидол® следует прекратить грудное вскармливание.

Способ применения и дозы

Внутрь, до приема пищи.

Разовая доза препарата (в зависимости от возраста):

Возраст	Разовая доза
Дети с 6 до 12 лет	100 мг (1 капсула )
Дети старше 12 лет и взрослые	200 мг (2 капсулы)

Режим дозирования (в зависимости от возраста):

Показание	Схема приема препарата
У детей с 6 лет и взрослых:
Неспецифическая профилактика в период эпидемии гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе 2 раза в неделю в течение 3-х недель
Неспецифическая профилактика при непосредственном контакте с больными гриппом и другими ОРВИ	в разовой дозе 1 раз в день в течение 10-14 дней
Лечение гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток
Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю в течение 4-х недель
Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений	в разовой дозе за 2 суток до операции, затем на 2-е и 5-е сутки после операции
У детей с 6 лет:
Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии	в разовой дозе 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток

Применяйте препарат только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции.

Прием препарата начинают с момента появления первых симптомов заболевания гриппом и другими ОРВИ, желательно не позднее 3 суток от начала болезни.

Если после применения препарата Арбидол® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

При лечении гриппа и ОРВИ возможна сопутствующая симптоматическая терапия, включая прием жаропонижающих препаратов, муколитических и местных сосудосуживающих средств.

Побочное действие

Препарат Арбидол® относится к малотоксичным препаратам и обычно хорошо переносится.

Побочные эффекты возникают редко, обычно слабо или умеренно выражены и носят преходящий характер.

Частота возникновения нежелательных лекарственных реакций определена в соответствии с классификацией ВОЗ: очень часто (с частотой более 1/10), часто (с частотой не менее 1/100, но менее 1/10), нечасто (с частотой не менее 1/1000, но менее 1/100), редко (с частотой не менее 1/10000, но менее 1/1000), очень редко (с частотой менее 1/10000), частота неизвестна (не может быть установлена по имеющимся данным).

Нарушения со стороны иммунной системы: редко – аллергические реакции.

Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются, или Вы заметили любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, сообщите об этом врачу.

Передозировка
Не отмечена.

Взаимодействие с другими лекарственными препаратами

При назначении с другими лекарственными средствами отрицательных эффектов отмечено не было.

Специальные клинические исследования, посвященные изучению взаимодействий препарата Арбидол® с другими лекарственными средствами, не проводились.

Сведения о наличии нежелательного взаимодействия с жаропонижающими, муколитическими и местными сосудосуживающими лекарственными средствами в условиях клинического исследования не были выявлены.

Особые указания

Необходимо соблюдать рекомендованную в инструкции схему и длительность приема препарата. В случае пропуска приема одной дозы препарата, пропущенную дозу следует принять как можно раньше и продолжить курс приема препарата по начатой схеме. Если после применения препарата Арбидол® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

Влияние на способность управлять транспортными средствами и механизмами Не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике у лиц различных профессий, в т.ч. требующих повышенного внимания и координации движений (водители транспорта, операторы и т.д.).

Форма выпуска

Капсулы, 100 мг.

По 5 или 10 капсул в контурную ячейковую упаковку. 1, 2 или 4 контурные упаковки с инструкцией по применению в пачку из картона.

Условия хранения

Хранить при температуре не выше 25^оС.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности

3 года.

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Условия отпуска

Отпускают без рецепта.

Владелец регистрационного удостоверения/организация, принимающая претензии потребителей

ПАО «Отисифарм», Россия,

123317, г. Москва, ул. Тестовская, д. 10

Тел.: +7 (800) 775-98-19

Факс: +7 (495) 221-18-02

Производитель

ОАО «Фармстандарт-Лексредства»,

305022, Россия, г. Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18, тел./факс: (4712) 34-03-13

снижает длительность и тяжесть течения гриппа и других ОРВИ

Регистрационный номер: Р N003610/01

Торговое наименование: Арбидол^®

Международное непатентованное наименование: умифеновир

Лекарственная форма: капсулы

Состав на одну капсулу

Действующее вещество: умифеновира гидрохлорида моногидрат (в пересчете на умифеновира гидрохлорид) – 100 мг.

Вспомогательные вещества: ядро: крахмал картофельный – 30,14 мг, целлюлоза микрокристаллическая – 55,76 мг, кремния диоксид коллоидный (аэросил) – 2,0 мг, повидон К 25 (коллидон 25) – 10,1 мг, кальция стеарат — 2,0 мг.

Капсулы твердые желатиновые № 1:

Корпус: титана диоксид (Е 171) – 2,0000%, желатин – до 100%.

Крышечка: титана диоксид (Е 171) – 1,3333%, краситель солнечный закат желтый (Е 110) – 0,0044%, хинолиновый желтый (Е 104) – 0,9197%, желатин – до 100%.

Описание

Капсулы твердые желатиновые №1. Корпус белого цвета, крышечка желтого цвета. Содержимое капсул — смесь, содержащая гранулы и порошок от белого до белого с зеленовато-желтоватым или кремоватым оттенком цвета.

Фармакотерапевтическая группа: противовирусное средство

Код АТХ: J05AX13

Фармакологические свойства

Фармакодинамика. Противовирусное средство. Специфически подавляет in vitro вирусы гриппа А и В (Influenzavirus A, B), включая высокопатогенные подтипы A(h2N1)pdm09 и A(H5N1), а также другие вирусы — возбудители острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) (коронавирус (Сoronavirus), ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС), риновирус (Rhinovirus), аденовирус (Adenovirus), респираторно-синцитиальный вирус (Pneumovirus) и вирус парагриппа (Paramyxovirus)). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Обладает интерферон-индуцирующей активностью – в исследовании на мышах индукция интерферонов отмечалась уже через 16 часов, а высокие титры интерферонов сохранялись в крови до 48 часов после введения. Стимулирует клеточные и гуморальные реакции иммунитета: повышает число лимфоцитов в крови, в особенности Т-клеток (СD3), повышает число Т-хелперов (CD4), не влияя на уровень Т-супрессоров (CD8), нормализует иммунорегуляторный индекс, стимулирует фагоцитарную функцию макрофагов и повышает число естественных киллеров (NKклеток).

Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в уменьшении продолжительности и тяжести течения болезни и ее основных симптомов, а также в снижении частоты развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, и обострений хронических бактериальных заболеваний.

При лечении гриппа или ОРВИ у взрослых пациентов в клиническом исследовании показано, что эффект препарата Арбидол^® у взрослых пациентов наиболее выражен в остром периоде заболевания и проявляется сокращением сроков разрешения симптомов болезни, снижением тяжести проявлений заболевания и сокращением сроков элиминации вируса. Терапия препаратом Арбидол^® приводит к более высокой частоте купирования симптомов заболевания на третьи сутки терапии по сравнению с плацебо. Через 60 ч после начала терапии разрешение всех симптомов лабораторно подтвержденного гриппа более чем в 5 раз превышает аналогичный показатель в группе плацебо.

Установлено значимое влияние препарата Арбидол^® на скорость элиминации вируса гриппа, что, в частности, проявлялось уменьшением частоты выявления РНК вируса на 4е сутки.

Относится к малотоксичным препаратам (LD50 > 4 г/кг). Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах.

Фармакокинетика. Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови достигается через 1,5 ч. Метаболизируется в печени. Период полувыведения равен 17-21 ч. Около 40 % выводится в неизмененном виде, в основном с желчью (38,9 %) и в незначительном количестве почками (0,12 %). В течение первых суток выводится 90 % от введенной дозы. 

Показания к применению

Профилактика и лечение у взрослых и детей: грипп А и В, другие ОРВИ.

Комплексная терапия рецидивирующей герпетической инфекции.

Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений.

Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к умифеновиру или любому компоненту препарата; детский возраст до 6 лет. Первый триместр беременности. Период грудного вскармливания.

С осторожностью:        

Второй и третий триместры беременности

Применение при беременности и в период грудного вскармливания

В исследованиях на животных не было выявлено вредных воздействий на течение беременности, развитие эмбриона и плода, родовую деятельность и постнатальное развитие. Применение препарата Арбидол^® в первом триместре беременности противопоказано. Во втором и третьем триместре беременности Арбидол^®может применяться только для лечения и профилактики гриппа и в том случае, если предполагаемая польза для матери превышает потенциальный риск для плода. Соотношение польза/риск определяется лечащим врачом.

Неизвестно, проникает ли Арбидол^®в грудное молоко у женщин в период лактации. При необходимости применения препарата Арбидол^® следует прекратить грудное вскармливание.

Способ применения и дозы

Внутрь, до приема пищи.

Разовая доза препарата (в зависимости от возраста):

Возраст	Разовая доза
Дети с 6 до 12 лет	100 мг (1 капсула)
Дети старше 12 лет и взрослые	200 мг (2 капсулы)

Режим дозирования (в зависимости от возраста):

Показание	Схема приема препарата
У детей с 6 лет и взрослых:
Неспецифическая профилактика в  период эпидемии гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе  2 раза в неделю  в течение 3-х недель
Неспецифическая профилактика при непосредственном контакте с больными гриппом и другими ОРВИ	в разовой дозе  1 раз в день  в течение 10-14 дней
Лечение гриппа и других ОРВИ	в разовой дозе  4 раза в сутки  (каждые 6 часов)  в течение 5 суток
Комплексная терапия рецидивирующей герпетической  инфекции	в разовой дозе  4 раза в сутки  (каждые 6 часов) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю  в течение 4-х недель
Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений	в разовой дозе за 2 суток до операции, затем на  2-е и 5-е сутки после операции
У детей с 6 лет:
Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии	в разовой дозе  4 раза в сутки  (каждые 6 часов)  в течение 5 суток

Применяйте препарат только согласно тем показаниям, тому способу применения и в тех дозах, которые указаны в инструкции.

Прием препарата начинают с момента появления первых симптомов заболевания гриппом и другими ОРВИ, желательно не позднее 3 суток от начала болезни.

Если после применения препарата Арбидол^® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

При лечении гриппа и ОРВИ возможна сопутствующая симптоматическая терапия, включая прием жаропонижающих препаратов, муколитических и местных сосудосуживающих средств.

Побочное действие

Препарат Арбидол^®относится к малотоксичным препаратам и обычно хорошо переносится.

Побочные эффекты возникают редко, обычно слабо или умеренно выражены и носят преходящий характер.

Частота возникновения нежелательных лекарственных реакций определена в соответствии с классификацией ВОЗ: очень часто (с частотой более 1/10), часто (с частотой не менее 1/100, но менее 1/10), нечасто (с частотой не менее 1/1000, но менее 1/100), редко (с частотой не менее 1/10000, но менее 1/1000), очень редко (с частотой менее 1/10000), частота неизвестна (не может быть установлена по имеющимся данным).

Нарушения со стороны иммунной системы: редко – аллергические реакции.

Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются, или Вы заметили любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, сообщите об этом врачу.

Передозировка 

Не отмечена.

Взаимодействие с другими лекарственными препаратами

При назначении с другими лекарственными средствами отрицательных эффектов отмечено не было.

Специальные клинические исследования, посвященные изучению взаимодействий препарата Арбидол^®с другими лекарственными средствами, не проводились.

Сведения о наличии нежелательного взаимодействия с жаропонижающими, муколитическими и местными сосудосуживающими лекарственными средствами в условиях клинического исследования не были выявлены.

Особые указания

Необходимо соблюдать рекомендованную в инструкции схему и длительность приема препарата. В случае пропуска приема одной дозы препарата, пропущенную дозу следует принять как можно раньше и продолжить курс приема препарата по начатой схеме. Если после применения препарата Арбидол^® в течение трех суток при лечении гриппа и других ОРВИ сохраняется выраженность симптомов заболевания, в том числе высокая температура (38 °С и более), то необходимо обратиться к врачу для оценки обоснованности приема препарата.

Влияние на способность управлять транспортными средствами и механизмами   Не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике у лиц различных профессий, в т.ч. требующих повышенного внимания и координации движений (водители транспорта, операторы и т.д.).

Форма выпуска

Капсулы, 100 мг.

По 5 или 10 капсул в контурную ячейковую упаковку. 1, 2 или 4 контурные упаковки с инструкцией по применению в пачку из картона. 

Условия хранения

Хранить при температуре не выше 25^оС. 

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности

3 года. 

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Условия отпуска

Отпускают без рецепта.

Владелец регистрационного удостоверения/организация, принимающая претензии потребителей 

ПАО «Отисифарм», Россия,

123317, г. Москва, ул. Тестовская, д. 10

Тел.: +7 (800) 775-98-19

Факс: +7 (495) 221-18-02

Производитель

ОАО «Фармстандарт-Лексредства», 

305022, Россия, г. Курск, ул. 2-я Агрегатная, 1а/18, тел./факс: (4712) 34-03-13

Арбидол 100мг капсулы 20 шт.

Краткое описание

Противовирусное, иммуностимулирующее средство.

Состав

1 капсула содержит:
Активное вещество:
умифеновира гидрохлорида моногидрат (в пересчете на умифеновира гидрохлорид) — 100 мг.
Вспомогательные вещества:
крахмал картофельный,
целлюлоза микрокристаллическая,
кремния диоксид коллоидный (аэросил),
кросповидон (коллидон 25),
кальция стеарат.
Капсулы твердые желатиновые:
Корпус: титана диоксид (Е 171), желатин
Крышечка: титана диоксид (Е 171), хинолиновый желтый (Е 104), краситель солнечный закат желтый, желатин.

Фармакологическое действие

Противовирусный препарат. Специфически подавляет вирусы гриппа А и В, коронавирус, ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС-ассоциированный коронавирус). По механизму противовирусного действия относится к ингибиторам слияния (фузии), взаимодействует с гемагглютинином вируса и препятствует слиянию липидной оболочки вируса и клеточных мембран. Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие. Обладает интерферон-индуцирующей активностью, стимулирует гуморальные и клеточные реакции иммунитета, фагоцитарную функцию макрофагов, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Снижает частоту развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, а также обострений хронических бактериальных заболеваний.
Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в снижении выраженности общей интоксикации и клинических явлений, сокращении продолжительности болезни.
Оказывает умеренное иммуномодулирующее действие.
Относится к малотоксичным препаратам (LD50 >4 г/кг). Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах.

Показания

Профилактика и лечение у взрослых и детей:

• грипп А и В, ОРВИ, тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС), в т.ч. осложненный бронхитом и пневмонией;
• вторичные иммунодефицитные состояния;
• комплексная терапия хронического бронхита, пневмонии и рецидивирующей герпетической инфекции.

Профилактика послеоперационных инфекционных осложнений и нормализация иммунного статуса.
В составе комплексной терапии острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 6 лет.

Способ применения и дозировка

Препарат назначают внутрь, до приема пищи. Разовая доза для взрослых и детей старше 12 лет — 200 мг (2 капс. по 100 мг или 4 капс. по 50 мг), для детей в возрасте от 6 до 12 лет — 100 мг, от 3 до 6 лет — 50 мг.
Для неспецифической профилактики
При непосредственном контакте с больным гриппом и другими ОРВИ взрослым и детям старше 12 лет Арбидол назначают в дозе 200 мг/сут; детям в возрасте от 6 до 12 лет — 100 мг/сут; детям в возрасте от 3 до 6 лет — 50 мг/сут. Препарат принимают 1 раз/сут. Курс — 10-14 дней.
В период эпидемии гриппа и других ОРВИ, для профилактики обострения хронического бронхита и рецидива герпетической инфекции взрослым и детям старше 12 лет препарат назначают в разовой дозе 200 мг; детям в возрасте от 6 до 12 лет — 100 мг; детям в возрасте от 3 до 6 лет — 50 мг. Препарат принимают по 1 дозе 2 раза в неделю в течение 3 недель.
Для профилактики ТОРС (при контакте с больным) взрослым и детям старше 12 лет назначают по 200 мг 1 раз/сут в течение 12-14 дней; детям в возрасте от 6 до 12 лет — по 100 мг 1 раз/сут (до еды) в течение 12-14 дней.
Для профилактики послеоперационных инфекционных осложнений препарат назначают за двое суток до операции, затем на вторые и пятые сутки после операции по 1 дозе: взрослым и детям старше 12 лет — 200 мг, детям в возрасте от 6 до 12 лет — 100 мг, от 3 до 6 лет — 50 мг.
Для лечения
При гриппе и других ОРВИ без осложнений взрослым и детям старше 12 лет препарат назначают по 200 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч), детям в возрасте от 6 до 12 лет — по 100 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч), от 3 до 6 лет — по 50 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч). Курс лечения — 5 дней.
При гриппе и других ОРВИ с развитием осложнений (в т. ч. бронхит, пневмония) взрослым и детям старше 12 лет Арбидол назначают по 200 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 дней, затем — по 200 мг 1 раз/нед. в течение 4 недель. Детям в возрасте от 6 до 12 лет назначают по 100 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) затем — по 100 мг 1 раз/нед. в течение 4 недель. Детям в возрасте от 3 до 6 лет назначают по 50 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 дней, затем — по 50 мг 1 раз/нед. в течение 4 недель.
Для лечения ТОРС взрослым и детям старше 12 лет назначают по 200 мг 2 раза/сут в течение 8-10 дней.
В составе комплексной терапии хронического бронхита и рецидивирующей герпетической инфекции взрослым и детям старше 12 лет препарат назначают по 200 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5-7 сут, затем — по 200 мг 2 раза/нед. в течение 4 недель. Детям в возрасте от 6 до 12 лет по 100 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5-7 сут, затем — по 100 мг 2 раза/нед. в течение 4 недель. Детям в возрасте от 3 до 6 лет назначают 50 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5-7 сут; затем — по 50 мг 2 раза/нед. в течение 4 недель.
В составе комплексной терапии острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии детям старше 12 лет назначают по 200 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 сут, в возрасте от 6 до 12 лет — по 100 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 сут, в возрасте от 3 до 6 лет — по 50 мг 4 раза/сут (каждые 6 ч) в течение 5 сут.

Побочные действия

Редко: аллергические реакции.

Противопоказания

• детский возраст до 6 лет;
• повышенная чувствительность к компонентам препарата.

Передозировка

Случаи передозировки препарата не отмечены.

Особые указания

Влияние на способность к вождению автотранспорта и управлению механизмами
Препарат не проявляет центральной нейротропной активности и может применяться в медицинской практике в профилактических целях у практически здоровых лиц различных профессий, требующих повышенного внимания и быстроты психомоторных реакций (в т.ч. водители транспорта, операторы).

Взаимодействие с другими препаратами

При назначении с другими лекарственными средствами отрицательных эффектов не отмечено.

Условия хранения

class=»h4-mobile»>

Препарат следует хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 25°C. Срок годности – 2 года.

инструкция по применению, аналоги, состав, показания

Фармакодинамика
Противовирусное средство, оказывает иммуномодулирующее и противогриппозное действие, специфически подавляет вирусы типа А и В, коронавирус, ассоциированный с тяжелым острым респираторным синдромом (ТОРС). Препятствует контакту и проникновению вирусов в клетку, подавляя слияние липидной оболочки вируса с клеточными мембранами. Обладает интерферониндуцирующим действием, стимулирует гуморальные и клеточные реакции иммунитета, фагоцитарную функцию макрофагов, повышает устойчивость организма к вирусным инфекциям. Снижает частоту развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, а также обострений хронических бактериальных заболеваний.
Терапевтическая эффективность при вирусных инфекциях проявляется в снижении выраженности общей интоксикации и клинических явлений, сокращении продолжительности болезни.
Относится к малотоксичным препаратам. Не оказывает какого-либо отрицательного воздействия на организм человека при пероральном применении в рекомендуемых дозах.
Фармакокинетика
Быстро абсорбируется и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови при приеме в дозе 50 мг достигается через 1,2 ч, в дозе 100 мг – через 1,5 ч. Метаболизируется в печени. Период полувыведения равен 17-21 ч. Около 40 % выводится в неизменном виде, в основном с желчью (38,9 %) и в незначительном количестве почками (0,12 %). В течение первых суток выводится 90 % от введенной дозы.

Перед применением лекарственного средства проконсультируйтесь с вашим лечащим врачом.
Внутрь, до приема пищи. Разовая доза: детям от 3 до 6 лет – 50 мг, от 6 до 12 лет – 100 мг, старше 12 лет и взрослым – 200 мг (2 таблетки по 100 мг или 4 таблетки по 50 мг).
Для неспецифической профилактики
• При непосредственном контакте с больными гриппом и другими острыми респираторными вирусными инфекциями:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг один раз в день в течение 10-14 дней.
• Для предупреждения обострений хронического бронхита, рецидива герпетической инфекции в период эпидемии гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг два раза в неделю в течение 3 недель.
• Для профилактики тяжелого острого респираторного синдрома (при контакте с больными):
— детям от 6 до 12 лет – по 100 мг, взрослым и детям старше 12 лет – по 200 мг один раз в день (до еды), в течение 12-14 дней.
• Профилактика послеоперационных осложнений:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг за 2 суток до операции, затем на 2 и 5 сутки после операции.
Для лечения
• Грипп, другие острые респираторные вирусные инфекции без осложнений:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток.
• Грипп, другие острые респираторные вирусные инфекции с развитием осложнений (бронхит, пневмония и др.):
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток, затем разовую дозу 1 раз в неделю в течение 4 недель.
• Тяжелый острый респираторный синдром:
— детям старше 12 лет и взрослым – по 200 мг 2 раза в день в течение 8-10 суток.
• В комплексном лечении хронического бронхита, герпетической инфекции:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет и взрослым – по 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5-7 суток, затем разовую дозу 2 раза в неделю в течение 4 недель.
• Комплексная терапия острых кишечных инфекций ротавирусной этиологии у детей старше 3 лет:
— детям от 3 до 6 лет – по 50 мг, от 6 до 12 лет – по 100 мг, старше 12 лет – по 200 мг 4 раза в сутки (каждые 6 часов) в течение 5 суток.
Если у Вас возникли сомнения или вопросы, обратитесь к своему лечащему врачу.

Почему коронавирус опасен для детей не меньше, чем для взрослых

Принято считать, что для детей заболевание коронавирусной инфекцией нового типа является не настолько опасным, как для взрослых пациентов. Отчасти это действительно так — в большинстве случаев юные пациенты переносят COVID-19 в легкой форме или бессимптомно. Однако это не значит, что болезнь проходит бесследно для их здоровья. О том, чем заболевание коронавирусом опасно для детей и как защитить их от заражения в интервью «Газете.Ru» рассказала заведущая кафедрой педиатрии Московского государственного медико-стоматологического университета им. А. И. Евдокимова, профессор, доктор медицинских наук Ольга Зайцева.

— Как дети переносят коронавирусную инфекцию нового типа?

— Коронавирусную инфекцию SARS COV2 (COVID-19) дети переносят по-разному. Чаще всего они болеют легко. Более того, часть детей, и не малая, вообще переносит болезнь бессимптомно. Но это не значит, что нет проблем. Есть даже две проблемы. Во-первых, больные являются источником для инфицирования окружающих: в школе, семье, где угодно. Например, ребенок болел бессимптомно и инфицировал всех членов семьи, которые продолжают распространять вирус. Иногда COVID-19 напоминает легкое течение ОРВИ, и в этих случаях дети тоже являются разносчиками инфекции. Это первое.

Вторая проблема – через месяц-полтора у ребенка, который болел легко или бессимптомно, может развиться тяжелое осложнение – мультисистемный воспалительный синдром, который по клиническим проявлениям напоминает синдром Кавасаки: высокая лихорадка, дерматит, хейлит, стоматит, лимфоаденопатия, признаки системного васкулита. Причем происходит это внезапно: вот ребенок вроде бы выздоровел, а через месяц-полтора оказывается в больнице. Недавно у нас был такой случай — родители болели, ребенок был здоров. А через полтора месяца ребенок поступает к нам в тяжелейшем состоянии: лихорадка, температура 39 градусов, интоксикация, клиника мультисистемно-воспалительного синдрома, когда сразу страдают несколько органов. Это уже не инфекция, это тяжелые последствия инфекции.

close

100%

Заведущая кафедрой педиатрии Московского государственного медико-стоматологического университета им. А. И. Евдокимова, профессор, доктор медицинских наук Ольга Зайцева

Распознать COVID-19 у детей сложно, так как симптомы, наблюдаемые у взрослых при этом заболевании, частно не проявляются у детей. Как я уже говорила, большинство из них переносит коронавирусную инфекцию как легкое ОРВИ, кроме того, дети крайне редко теряют обоняние и вкусовые ощущения. Конечно, бывают и тяжелые случаи коронавирусной инфекции среди детей, но намного реже, чем у взрослых пациентов. Эти дети обязательно госпитализируются.

— Давайте немного подробнее остановимся на тех последствиях, которые наблюдаются у детей после перенесенного COVID-19…

— Дети, переболевшие COVID-19, в течение нескольких месяцев после выздоровления могут легко заболеть бактериальной инфекцией, например, пневмонией в тяжелой форме. Вроде бы здоровый ребенок, перенес коронавирусную инфекцию, перенес легко. Однако у него снижена сопротивляемость организма, причем снижена довольно долго.

— То есть получается, что COVID-19 оказывает какой-то комплексный угнетающий эффект на иммунную систему?

— Да. Этот аспект еще мало изучен, поэтому нельзя сказать точно, когда и какие возникают иммунологические последствия, но просто по опыту мы видим, что эти дети потом тяжелее болеют инфекционными заболеваниями. Сопротивляемость у них определенно ниже. На самом деле, это очень характерно и для других инфекций. Например, инфекционный мононуклеоз или корь тоже имеют иммуносупрессивный эффект. Это хорошо изученные болезни, когда снижение иммунитета наблюдается 2-3 месяца — достаточно долго. В случае с COVID-19 у меня складывается впечатление, что происходит аналогичный процесс, потому что в результате редко болеющие дети вдруг поступают к нам с тяжелейшей пневмонией. Некоторые дети на фоне мультисистемного синдрома дают тяжелое осложнение на почки и на сердце.

— То есть получается, что представление о том, что для детей COVID-19 не особенно опасен, на самом деле не соответствует действительности?

— Конечно.

— Что же тогда делать родителям, если где-то в очаге инфекции оказались дети? Например, если заболел кто-то из родителей, или инфекция появилась в коллективе, где находится ребенок? Что можно предпринять?

— Главная мысль заключается в том, что это все-таки респираторная вирусная инфекция, и методы профилактики для всех вирусных инфекций одинаковы. Они имеют два основных направления.

Первое направление – это уменьшить вероятность инфицирования или хотя бы количество инфекционного возбудителя.

Это то, чему мы сейчас научились – маски, мытье рук, орошение полости носа соленой водой, лучше всего морской. Для этого есть специальные растворы, позволяющие смыть, уменьшить количество вируса, попавшего в организм, если это вдруг произошло. Очень хорошо для профилактики использовать спрей, капли, гель или мазь на основе препаратов интерферона альфа.

Второе направление профилактики – это повышение иммунитета.

Вести здоровый образ жизни, гулять, дышать свежим воздухом, долго не сидеть у компьютера. Кстати, вести здоровый образ жизни — самое сложное. Кроме того, обязательно нужно, чтобы носоглотка и зубы были здоровы. Для этого ребенка надо регулярно показывать ЛОР-врачу и стоматологу. Иногда родители спрашивают: «Почему ребенок болеет?» А у него во рту все зубы кариозные, или в носоглотке запущенный аденоидит. Важно, чтобы в организме не было очагов хронической инфекции.

Если же ребенок находится в близком контакте с инфекцией, например, если заболел кто-то из членов семьи, то рекомендуется в профилактических целях назначить ему — пока существует опасность заболеть — Арбидол (умифеновир).

— Получается, детям, как и взрослым, необходимо носить маски?

— Конечно. Разумеется, маска полностью не спасет от вирусов, но она позволит уменьшить количество, попавших в организм. Недавно было опубликовано очень интересное исследование: ученые отметили, что в этом году практически не было гриппа и в разы снизилось количество случаев острых респираторных заболеваний. Почему? Да просто потому, что мы соблюдали эти, казалось бы, примитивные меры профилактики.

— Дети – это достаточно общее понятие. Можно ли говорить о том, что дети какого-то возраста больше подвержены тяжелому течению заболевания или у них чаще наступают какие-то негативные последствия после COVID-19?

— Есть группы детей, которые действительно склонны к частым заболеваниям. Во-первых, это младенцы, так как они еще плохо защищены собственным иммунитетом. Во-вторых, дети, которые родились недоношенными. В-третьих, дети раннего возраста, лет до 3-4. Кроме того, в группе риска дети из социально неблагополучных семей, дети с хроническими заболеваниями: болезнями ЛОР-органов, сердца, почек, аллергики. Они более подвержены заболеваниям любыми респираторными инфекциями, в том числе и коронавирусом. Дети, ослабленные по какой-то другой причине: например, они только что перенесли тяжелое заболевание. Очевидно, если снижена иммунная защита, то вероятность заразиться выше. И, разумеется, риск выше, если они посещают какие-то детские коллективы.

— Каковы клинические рекомендации Минздрава относительно профилактики и лечения детей от коронавирусной инфекции нового типа?

— В отношении профилактики и лечение COVID-19 у Минздрава есть очень четкие рекомендации, которые во многом отражают международные гайдлайны. В Клинических рекомендациях от 8 февраля 2021 года указано, что ребенку с легким течением коронавирусной инфекцией COVID-19 необходимо назначить препараты интерферона альфа. Например, эндоназально Генферон лайт в виде капель или спрея. Более сильное, системное действие оказывают свечи. Поэтому, если ребенок заболел, то есть смысл не только вводить препараты интерферона в носовые ходы, но и сочетать с введением ректальных свечей. Это рекомендации для детей с легким течением заболевания. Если же у ребенка заболевание средней степени тяжести, то мы должны одновременно назначить препараты интерферона и как раз Арбидол.

— А с какого возраста можно применять эти препараты?

— Собственно Арбидол — с двух лет, а интерфероны — с рождения, можно даже недоношенным детям. До двух лет — только препараты интерферона альфа. Ну и тут, конечно нельзя забывать, что если нет признаков бактериальной инфекции, то антибиотики не назначаются.

— Расскажите, пожалуйста, а насколько рекомендации Минздрава совпадают с подходами к лечению, принятыми в других странах? Например, тот же Арбидол используется только в России, или и в других странах мира тоже?

— Вообще он широко используется и в других странах. Например, в Китае, Иране. Китайцы провели широкомасштабные исследования по эффективности и безопасности умифеновира при COVID-19, и теперь сами производят умифеновир. Понятно, что препарат с успехом применяют в странах постсоветского пространства. Кроме того, очень интересное исследование провели ученые из США: они изучили in vitro антивирусную активность против коронавируса у 48 препаратов, в том числе и у умифеновира. Этот тест показал высокую эффективность умифеновира.

— Давайте мы попробуем подвести некий результирующий итог этой беседы. Что мы можем посоветовать родителям для профилактики заражения их детей COVID-19, и что делать, если ребенок все же заболел?

— Есть один важный нюанс, о котором необходимо упомянуть: лечение вируса надо начинать рано, при первых признаках заболевания. Если человек болеет уже несколько дней, то прием противовирусных препаратов менее эффективен. Согласно рекомендациям ВОЗ, противовирусная терапия должна начинаться в первые 48 часов с момента появления симптомов заболевания. Дело в том, что противовирусные препараты не уничтожают вирусы, они прекращают их размножение. Поэтому, при первых признаках респираторного заболевания нужно применять интерферон альфа и Арбидол, они продаются без рецепта. И желательно создать максимальную изоляцию больного от других членов семьи. И обязательно вызвать врача, чтобы спланировать дальнейшее лечение.

Что нужно знать о коронавирусе? Ответы на главные вопросы

• Николай Воронин
• Корреспондент по вопросам науки

20 марта 2020

Обновлено 7 апреля 2020

Автор фото, Getty Images

Наблюдая за развитием эпидемии Covid-19, большинство экспертов склоняется к тому, что рано или поздно коронавирус заразит значительную, если не большую часть населения планеты.

В конечном итоге число заразившихся может достичь, по разным оценкам, семи миллиардов.Есть версия, что инфекция закрепится и станет сезонной, как обычный грипп.

А если заражение — лишь вопрос времени, думать нужно не столько о том, как его избежать, сколько о том, как к нему подготовиться: врага нужно знать в лицо.

Русская служба Би-би-си отвечает на основные вопросы о коронавирусе SARS-CoV-2 (именно так он официально называется).

Что вообще представляет собой вирус?

Вирус — это крошечный обрывок генетического кода, завернутый в защитную белковую оболочку. Его частицы настолько малы, что их невозможно разглядеть даже в обычный микроскоп: 100 млн копий нового коронавируса легко помещаются на острие иголки.

Крошечный размер — одна из причин, по которым от вирусов так сложно защититься. При кашле от инфицированного больного разлетаются мельчайшие капли, в каждой из которых могут быть миллиарды вирусных частиц.

Проникнув в клетку, вирус заставляет ее производить вместо нормальных белков собственные копии — так развивается заражение.

Откуда взялся новый коронавирус?

Науке известны десятки миллионов вирусов, и постоянно открываются новые, ранее не известные виды.

При этом подавляющее большинство из них совершенно безвредны для человека — опасность представляют лишь несколько сотен вирусов, и со многими из них наша иммунная система научилась успешно бороться в ходе эволюции.

Автор фото, Getty Images

Однако вирусы тоже эволюционируют — и иногда в результате мутации инфекция, ранее встречавшаяся только у животных, получает возможность проникать и в организм человека.

Такие «новые» вирусы особенно опасны, поскольку наш иммунитет никогда с ними не сталкивался и еще не выработал защитный механизм.

В результате вирус начинает активно распространяться среди людей, провоцируя эпидемию. Именно это случилось с ВИЧ, SARS, MERS, а теперь и с новым коронавирусом.

Чем вирус отличается от своих предшественников SARS и MERS?

По словам директора Лондонской школы гигиены и тропической медицины Питера Пиота, у SARS-CoV-2 есть несколько важных отличий.

Во-первых, в течение нескольких дней после заражения человек не испытывает никаких симптомов, но уже может заражать других. Это особенно неприятная характеристика, так как она существенно затрудняет изоляцию вируса.

В случае с SARS, например, все было ровно наоборот: симптомы появлялись сразу, но опасность для окружающих больной начинал представлять лишь через несколько дней.

Автор фото, Getty Images

Во-вторых, до 80% заболевших ощущают лишь легкое недомогание вроде обычной простуды или гриппа, а почти каждый пятый (18%) и вовсе не испытывает никаких симптомов, но при этом остается источником заражения, даже не зная об этом.

В-третьих, на начальных этапах болезни вирус активно размножается именно в гортани, поэтому кашель распыляет вокруг зараженного миллиарды вирусных частиц. А кашлять больной начинает первым делом — все остальные симптомы проявляются (или не проявляются) позже.

Каковы симптомы болезни?

В легкой форме Covid-19 похож на грипп или любую другую ОРВИ (острую респираторно-вирусную инфекцию), поэтому многие заболевшие даже не подозревают, что стали носителями нового вируса.

Самые распространенные симптомы — кашель, температура и общая слабость. Реже пациенты жалуются на головные или мышечные боли.

Есть у Covid-19 и уникальный симптом: многие инфицированные временно перестают различать запахи, а иногда и вкусы. По всей видимости, коронавирус может поражать не только дыхательные органы, но и нервную систему — однако подробности этого механизма пока не изучены.

Обоняние пропадает не у всех зараженных, но этот симптом вполне может быть единственным или появиться раньше других — так что это повод насторожиться.

Когда ждать вакцины?

Короткий ответ — не ждите. Даже если ее удастся разработать в кратчайшие сроки, вам она уже вряд ли пригодится.

Хотя первые клинические испытания вакцины уже начались (причем в разных странах тестируют сразу несколько вариантов), даже при наилучшем раскладе массовое производство рабочей вакцины начнется не раньше конца 2021 года, когда значительная часть тех, кому угрожает вирус, скорее всего, уже им переболеет.

Автор фото, Getty Images

Более того, хотя большинство экспертов настроены оптимистично, у нас нет никакой гарантии, что вакцину удастся создать в принципе.

Поиски вакцины от ВИЧ, например, идут уже 35 лет — и по-прежнему безрезультатно. Впрочем, за это время появилось уже несколько препаратов для эффективной профилактики заболевания.

Насколько опасен вирус на самом деле?

Два основных фактора, которые определяют опасность любой болезни, — это ее заразность (скорость и легкость распространения) и летальность (как часто она приводит к смерти пациента).

Способность к заражению

По первоначальным подсчетам китайских врачей, в Ухане (городе в Китае, который считается исходной точкой пандемии нового коронавируса) каждый инфицированный успевал заразить в среднем 2,2 здоровых человека. Чтобы эпидемия пошла на спад, этот показатель должен быть ниже 1.

Однако нужно помнить, что Ухань быстро поместили в карантин, так что на самом деле заразность должна быть выше. Когда вспышка вируса началась в Италии, там каждый больной передавал инфекцию уже в среднем 3-4 здоровым людям.

Автор фото, Getty Images

И хотя новый вирус распространяется так же просто, как обычный сезонный грипп, он значительно более заразен. В воздухе он сохраняет жизнеспособность в течение трех часов, на пластиковых и стальных поверхностях — до трех дней.

Показатели смертности

Различные исследования оценивают летальность нового коронавируса на уровне около 1,5% от всех заболевших. Это примерно в 20 раз выше, чем у обычного сезонного гриппа, но даже близко не дотягивает до SARS (10%) и MERS (35%).

Наибольшую опасность вирус представляет для пожилых людей с ослабленным иммунитетом и хроническими заболеваниями. В возрастной группе старше 70 лет летальность Covid-19 превышает 5%, после 80 умирает в среднем каждый десятый зараженный вирусом пациент.

Почему где-то много жертв, а где-то мало?

В разных странах эпидемия развивается по-разному, и на это влияет множество факторов.

Где-то наибольшую роль играет средний возраст населения и принятые в обществе культурные и гигиенические нормы, где-то — общее состояние системы здравоохранения, где-то — опыт ранее пережитых эпидемий, который помог властям вовремя принять необходимые меры, и т.д.

Наибольшее число погибших зафиксировано в Италии, где эпидемию Covid-19 выявили почти с двухмесячной задержкой. В итоге буквально за пару недель число пациентов в стране взлетело до десятков тысяч, и итальянская система здравоохранения страны не выдержала пиковой нагрузки.

Кроме того, в Италии велика доля пожилого населения, а в преклонном возрасте болезнь протекает существенно тяжелее.

Правда ли, что для детей и молодых людей вирус не опасен?

Нет, это не так — хотя в среднем пациенты моложе 50 лет действительно переносят инфекцию легче, чем более пожилые.

Однако это не значит, что вирус не угрожает их здоровью и даже жизни. Среди жертв Covid-19 есть и дети, и подростки, и молодые люди — без каких-либо известных ранее дополнительных заболеваний.

Кроме того, даже если болезнь протекает в очень легкой форме — почти или совсем без симптомов, — инфицированный все равно остается разносчиком вируса и опасен для окружающих.

Ученые пока не знают этого наверняка, но такая теория существует, и многим экспертам она кажется правдоподобной.

Во всяком случае предварительные расчеты показывают сильную корреляцию между скоростью распространения эпидемии в той или иной стране (числа зараженных и погибших на душу населения) и проводимой там политикой вакцинации от туберкулеза.

Несколько стран сейчас проводят испытания, пытаясь понять, действительно ли эта корреляция вызвана действием вакцины и БЦЖ делает людей менее восприимчивыми к коронавирусу SARS-CoV-2.

Есть ли специфическая терапия против вируса?

Короткий ответ — пока нет. Зараженных лечат исключительно симптоматически, то есть борются не с самой болезнью, а с ее проявлениями.

Одновременно ученые испытывают сразу нескольких существующих противовирусных препаратов, чтобы понять, эффективны ли они в борьбе именно с Covid-19. Но убедительных результатов пока удалось достичь только в пробирке — опыты на животных оказываются менее удачными.

Впрочем, врачи подчеркивают, что это не дает оснований для паники. Большинству заболевших (более 80%) помощь медиков вообще не требуется. Они лечатся на дому, средствами от обычного гриппа — и выздоравливают, как обычно, примерно за неделю или чуть больше.

В недавнем исследовании, опубликованном в медицинском журнале Lancet, подсчитано, что в среднем Covid-19 длится почти три с половиной недели, но это касается только относительно тяжелых случаев, когда пациентов пришлось класть в больницу.

Автор фото, Getty Images

Но госпитализация требуется лишь примерно каждому пятому или шестому заболевшему — в основном людям пожилым и/или уже имеющим хронические заболевания.

В случае, если заражение перерастает в вирусную пневмонию и у пациента начинаются трудности с дыханием, его переводят в реанимацию. Доля таких больных составляет около 4% от всех диагностированных.

Что делать в случае заражения?

Как показывают многочисленные исследования и модели, самое эффективное средство борьбы с вирусом — карантин, чтобы не заразить окружающих.

При первом же подозрении на Covid-19 (первый симптом — кашель, затем может подняться температура) — самоизолируйтесь вместе с членами семьи и по возможности не выходите из дома до полного выздоровления.

Не принимайте каких-либо специфических лекарственных препаратов без назначения врача. В первую очередь, это касается антибиотиков — для борьбы с вирусами они неэффективны.

При любом личном общении носите защитную хирургическую маску. От нее не слишком много пользы с точки зрения профилактики, но она довольно неплохо защищает окружающих от самого больного, задерживая капли слюны.

Автор фото, Getty Images

Главное — не паниковать и быть готовым к тому, что рано или поздно вы, скорее всего, заразитесь, даже если будете принимать все необходимые профилактические меры.

Впрочем, не исключено, что вы уже переболели — отделавшись легким кашлем без температуры или вообще не заметив каких-либо симптомов «страшного вируса».

Арбидол детский: применение, инструкция, побочные эффекты

К сожалению, от вирусной инфекции не застрахован никто, особенно дети. В осенне-зимний период детский организм не всегда бывает готов к атаке респираторных вирусов, в результате чего развивается грипп и ОРВИ.В случае появления первых признаков заболевания, медицинские специалисты настоятельно рекомендуют использовать противовирусные лекарственные средства. Ярким представителем группы противовирусных лекарственных препаратов является Арбидол, выпускаемый для детей и взрослых.

Характеристики препарата

Лекарственный препарат Арбидол для детей относится к группе противовирусных средств прямого действия, применяемых для лечения вирусных заболеваний у детей различного возраста. Практические исследования показывают, что использование Арбидола безопасно ускоряет выздоровление и снижает риска развития осложнений. В клинические исследования эффективности и безопасности Арбидола было включено более 6500 детей. В исследованиях принимали участие ведущие научные институты и медицинские учреждения России.

Первыми разработчиками данного препарата была группа российских ученых-фармакологов. На сегодняшний день, выпуском Арбидола для детей занимаются как в России, так и за ее пределами.

Сферы применения

Лекарственный препарат Арбидол для детей имеет широкую сферу применения, что обусловлено его безопасностью и универсальностью. Арбидол назначается детям для борьбы с инфекционными заболеваниями, такими, как грипп, ОРВИ и другими видами респираторно-вирусных инфекций. Кроме того, Арбидол применяют в терапии вирусной пневмонии и кишечных инфекций вирусной природы.

Как действует препарат

Клинический эффект Арбидола для ребенка обусловлен его способностью вступать во взаимосвязь с белком, благодаря которому вирус имеет возможность прикрепиться к поверхности человеческой клетки.

Нарушая процесс прикрепления, Арбидол угнетает жизнедеятельность вируса, после чего тот погибает, и выводится из организма ребёнка. Если не начать этот процесс своевременно, вирусы проникнут внутрь клеток и нарушат их работу. В результате у ребёнка появится синдром общей интоксикации, повысится температура тела, возникнет насморк и другие симптомы респираторно-вирусной инфекции.

Важно помнить, что возбудители гриппа могут иметь несколько подвидов. Препарат Арбидол обладает доказанной активностью в отношении вирусов гриппа А и В (включая «свиной» и «птичий»), коронавируса, а также Рино вируса, аденовируса, энтеровируса, ротавирусной инфекции и др.

Распределение и выведение

Попадая в организм ребёнка, Арбидол проходит долгий и сложный путь. Процесс распределения и выведения средства выглядит следующим образом:

• После попадания лекарственного средства в организм, Арбидол для детей всасывается в кровяное русло через желудочно-кишечный тракт. Максимальное всасывание происходит через 1,5 часа после приёма.
• Следующим этапом является распределение лекарственного средства по органам и тканям. На этот процесс у Арбидола уходит мало времени.
• Преобразование лекарственного вещества происходит в печени ребёнка.
• Почти половина принятой дозировки Арбидола выводиться из организма в неизменном виде. Форма выпуска

Лекарственный препарат Арбидол для детей выпускается в форме таблеток и порошка для приготовления суспензии. Арбидол в форме суспензии разрешен к использованию детям, старше 2-х лет. Таблетки можно давать детям с 3-х лет.

Действующим компонентом препарата Арбидол является умифеновир. Это вещество зарекомендовало себя как эффективное средство для борьбы с заболеваниями дыхательных путей. Попадая в детский организм, оно быстро всасывается и оказывает противовирусный эффект. В конце 2013 года умифеновир был включен в группу противовирусных препаратов прямого действия (J05A – Direct acting antivirals) и ему был присвоен международный код АТХ J05AХ13.

Кроме того Арбидол способствует активации иммунитета для еще более успешной борьбы с заболеванием.

Особенности использования у детей

Дозировка детского противовирусного препарата Арбидол, соответствует всем нормам эффективности и безопасности. Принимать лекарственное средство целесообразно в начале заболевания, когда отмечается максимальная активность вируса. В этом случае оно своевременно предотвращает проникновение вирусов в клетки организма. Благодаря этому значительно сокращается продолжительность и тяжесть заболевания.

Благодаря быстрому всасыванию и выведению препарата из организма, Арбидол достигает нужной цели в кратчайшие сроки, не вызывая накопление и передозировку активного вещества.

Показания к применению

Противовирусное лекарственное средство Арбидол обладает широким спектром действия. Использование этого препарата для лечения детей показано при таких заболеваниях:

• при гриппе, вызванном вирусами типа А и В;
• при ОРВИ (риновирусной инфекции, аденовирусной инфекции, респираторно-синцитиальной инфекции, парагриппа и др)
• при осложненной вирусной инфекции с присоединением пневмонии или бронхита;
• при рецидивирующей герпетической инфекции;
• в составе комбинированной терапии при ротавирусной инфекции кишечника;
• с целью профилактики осложнений при перенесенном оперативном вмешательстве.

Арбидол не только борется с вирусами, но и повышает иммунитет, что позволяет использовать его при состояниях, связанных со снижением защитных сил организма.

Актуальность препарата Арбидол возрастает в осенне-зимний период, когда дети становятся максимально уязвимыми перед заболеваниями вирусной природы. Вероятность инфицирования возрастает, когда ребёнок находится среди сверстников (в школе или детском саду). Именно поэтому родителям необходимо быть во всеоружии, чтобы начать своевременное лечение.

Противопоказания к применению

Несмотря на высокий уровень безопасности Арбидола, данное средство имеет ряд противопоказаний, среди которых можно выделить:

• индивидуальная непереносимость компонентов лекарственного средства;
• возраст младше 2-х лет.

Во всех остальных случаях, Арбидол полностью безопасен для детского организма, что подтверждено исследованиями.

Побочные эффекты

Противовирусное средство Арбидол не является токсичным, и хорошо воспринимается детским организмом. Если у ребёнка наблюдается индивидуальная непереносимость одного из компонентов препарата, то проявиться она может в виде аллергической реакции. Признаками аллергии является покраснение кожных покровов, отёк и зуд.

При обнаружении тревожных симптомов, рекомендовано обратиться к специалисту и дать ребёнку противоаллергическое средство.

Во избежание развития побочных эффектов, не рекомендуется превышать указанную дозировку лекарственного препарата.

Инструкция по применению

Если родители обнаружили у своего ребёнка первые признаки вирусного заболевания, рекомендуется начать давать малышу Арбидол в форме таблеток по следующей схеме:

• В возрасте от 3 до 6 лет 50 мг препарата в сутки;
• С 6 до 12 лет суточная дозировка составляет 100 мг средства;
• Детям, старше 12 лет рекомендовано употреблять по 200 мг препарата в сутки.

Для достижения максимального терапевтического эффекта, необходимо придерживаться графика приёма. Арбидол необходимо употреблять в одно и то же время. Соблюдение дозировки и графика приёма, гарантирует быстрое наступление положительного результата.

Препарат Арбидол в форме суспензии дозируется следующим образом:

• в возрасте с 2 до 6 лет, рекомендованная дозировка составляет 10 мл суспензии 4 раза в сутки;
• с 6 до 12 лет разовая дозировка суспензии составляет 20 мл 4 раза в день;
• детям, старше 12 лет необходимо принимать по 40 мл суспензии Арбидол 4 раза в сутки (каждые 6 часов).

Суспензия Арбидол продается в виде порошка. Для её приготовления необходимо добавить 30 мл кипяченой воды во флакон с порошком. Флакон плотно закрывается крышкой, переворачивается и тщательно встряхивается до получения однородного раствора.

Далее, флакон заполняется водой до отметки 100 мл, после чего повторно встряхивается. Перед каждым использованием суспензии её необходимо встряхивать.

Продолжительность курса лечения Арбидолом составляет не менее 5 суток. Существуют ситуации, когда дозировку, кратность приёма и длительность лечения должен определять лечащий врач в индивидуальном порядке.

Лекарственный препарат Арбидол используется не только в лечебных, но и профилактических целях. Особенно это актуально, когда надвигается эпидемия гриппа и ОРВИ.

В целях профилактики рекомендовано использовать стандартную дозировку, снизив частоту приёма до 1 раза в сутки. Если малыш находится в постоянном контакте с человеком, болеющим вирусной инфекцией, то длительность приёма Арбидола составляет не менее 2 недель подряд. Во время эпидемии вирусных заболеваний, длительность профилактического курса составляет 7 дней.

Противовирусный лекарственный препарат Арбидол не оказывает скрытый негативный эффект на детский организм. Препарат не угнетает мозговую активность, не вызывает сонливость и привыкание.

Принимать Арбидол необходимо во время еды, запивая большим количеством жидкости. Препарат совместим с витаминами, антибактериальными и жаропонижающими средствами.

Несмотря на низкую стоимость, детский Арбидол может эффективно и безопасно лечить вирусные заболевания у детей.

Таблетки, капсулы или суспензия? Что выбрать?

Родители нередко задаются вопросом о том, в какой лекарственной форме Арбидол наиболее эффективен и удобен. Выбор формы препарата зависит от возраста малыша, а также его способности воспринимать лекарственные средства. Если возраст ребёнка находиться в диапазоне от 2 до 4 лет, то родителям рекомендовано отдать предпочтение суспензии Арбидол, так как это облегчит восприятие лекарственного препарата.

Малышу будет легче принимать лекарственное средство в виде суспензии, так как таблетки и капсулы маленькие дети зачастую выплёвывают. Приготовленная суспензия имеет сладковатый вкус и приятный аромат банана и вишни. Это ещё один аргумент в пользу детского сиропа Арбидол, ведь такое лекарство проще дать ребенку. Сроки хранения готовой суспензии сиропа Арбидол в холодильнике составляют до 10 дней, что достаточно для проведения курса лечения.

Если возраст малыша составляет от 3 до 6 лет, родители могут выбирать Арбидол в форме таблеток. В этом возрасте дети способны принимать лекарство в твердом виде. Чтобы улучшить вкусовые качества препарата, рекомендовано растолочь таблетку до порошкообразного состояния или высыпать содержимое капсулы, смешать с 1 ч. л. ягодного варенья и дать малышу во время еды. Такой вариант лечения не вызовет отторжения со стороны малыша.

Если возраст ребёнка перешагнул отметку в 12 лет, для лечения вирусных заболеваний рекомендовано использовать Арбидол в форме капсул. В таком возрасте дети могут получать лечение наравне с взрослыми, без риска передозировки.

Своевременное и правильно принимая препарат Арбидол, можно победить вирус в течение 5 дней. Кроме того, благодаря использованию этого средства появляется возможность снизить риск развития осложнений гриппа и ОРВИ и риск обострения сопутствующих заболеваний.

После прохождения курса лечения Арбидолом, иммунитет ребёнка получает надёжную поддержку в течение следующих 2-3 месяцев. На протяжении этого времени, ребенок становится мало восприимчивым к различным инфекционным заболеваниям.

Важно помнить, что организм каждого ребёнка индивидуален, поэтому перед началом использования препарата Арбидол, родители должны получить консультацию специалиста.

Влияние арбидола (умифеновира) на COVID-19: рандомизированное контролируемое исследование | BMC Infectious Diseases

С тех пор, как COVID-19 превратился в пандемию, на пациентах с COVID-19 были исследованы различные противовирусные препараты [13]. Арбидол — российский противовирусный препарат, который, по-видимому, эффективен против многих вирусов, включая грипп A, B и C, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), коронавирус, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом (SARS-CoV), аденовирус, парагрипп, полиовирус, риновирус. , вирус Коксаки, вирус Зика, вирусы гепатита В и С [14,15,16].Было продемонстрировано, что БРА оказывает двойное действие на прикрепление и репликацию клеток и, следовательно, на вирусы широкого спектра действия [8, 17], поэтому его применяют для постконтактной профилактики и лечения [18]. Поэтому БРА считается одним из противовирусных препаратов, которые могут быть эффективными при лечении пациентов с COVID-19. В настоящем рандомизированном контролируемом исследовании мы сравнили эффективность и безопасность противовирусных БРА с КАЛЕТРОЙ у пациентов с COVID-19 и показали несколько преимуществ в группе БРА по сравнению с группой КАЛЕТРА.В ходе исследования было назначено 100 пациентов, 50 пациентов были назначены для приема БРА, а 50 — для приема КАЛЕТРА.

Мы сообщили, что тошнота / рвота были наиболее частым побочным эффектом среди участников исследования. Данные также показали, что оба препарата не имели серьезных побочных эффектов. Аналогичным образом, в отчетах не было обнаружено опасных для жизни нежелательных явлений в группах ARB и KALETRA [19, 20], за исключением Li et al. исследование, в котором был представлен пожилой пациент мужского пола с историей сахарного диабета и гипертонии в группе КАЛЕТРА, у которого возникла тяжелая диарея на третий день от начала лечения [19].

COVID-19 Пациенты, получавшие КАЛЕТРА, с большей вероятностью покажут более высокие уровни лейкоцитов и уровни СРБ в сыворотке, чем пациенты, получавшие БРА. Что касается дифференциала лейкоцитов, количество нейтрофилов, по-видимому, выше, а количество лимфоцитов у пациентов, получавших КАЛЕТРА, ниже, чем у пациентов с БРА [20]. В настоящем отчете мы отметили, что КАЛЕТРА, по сравнению с БРА, была значительно связана с более высокими уровнями лейкоцитов и СОЭ в сыворотке крови после 7 дней приема. С другой стороны, хотя мы обнаружили, что пациенты в группе КАЛЕТРА имели более высокие доли СРБ ≥ 2+, чем в группе БРА через 7 дней после госпитализации, между ними не было значительной разницы.Через 7 дней приема количество нейтрофилов в группе КАЛЕТРА было значительно ниже, чем в группе БРА. Однако разные результаты между отчетами могут быть связаны с различиями в дизайне исследований, схемах лечения и размерах выборки.

Мы показали, что несколько большее количество пациентов в группе БРА имели тяжелый клинический статус по сравнению с группой КАЛЕТРА (24% против 22%, соответственно), хотя между группами он существенно не отличался. Однако считается, что БРА сводит к минимуму вероятность ухудшения клинического состояния.Сообщалось, что более низкая распространенность пациентов с COVID-19, получавших БРА (8,6%), ухудшилась до тяжелого клинического состояния по сравнению с пациентами, получавшими КАЛЕТРУ (23,5%) во время госпитализации, но существенной разницы между двумя группами лечения не было. найдено [19].

Хотя все пациенты в обеих группах имели одинаковую степень тяжести при поступлении, 18,6% пациентов в группе БРА были кандидатами для направления в отделение интенсивной терапии (ОИТ) при поступлении по сравнению с 81% пациентов в группе КАЛЕТРА.Пациенты в группе ARB провели меньшую продолжительность госпитализации (7,2 дня) по сравнению с группой KALETRA (9,6 дня, p -значение = 0,02). Кроме того, у 81% пациентов в группе ARB было легкое поражение при КТ грудной клетки через 30 дней госпитализации по сравнению с 53% в группе KALETRA ( p -значение = 0,004). Примечательно, что мы заметили несколько демографических, клинических и лабораторных детерминант продолжительности госпитализации пациентов с COVID-19, включая ИБС, сатурацию кислорода при поступлении, лечение БРА, уровни Na ​​в плазме и лимфоцитоз со значением вероятности 0.06. В связи с этим в двух когортных исследованиях из Ухани, Китай, было отмечено, что пациенты с COVID-19 в возрасте ≥80 лет и с лимфопенией (<1,1 × 10 ⁹ / л) имели более длительную госпитализацию [21, 22].

В совокупности наши результаты указывают на более низкую долю госпитализаций в ОИТ, более короткую продолжительность пребывания в больнице и более высокий процент легкого поражения КТ грудной клетки после 30 дней госпитализации среди пациентов с COVID-19, которые лечились с помощью БРА, по сравнению с КАЛЕТРОЙ. это означает, что БРА может превосходить КАЛЕТРУ в лечении пациентов с COVID-19.Хотя на сегодняшний день ни вакцины, ни противовирусные препараты не одобрены для лечения COVID-19, «Национальная комиссия здравоохранения и Национальное управление традиционной китайской медицины» недавно рекомендовали КАЛЕТРУ в сочетании с БРА и сообщили о его противовирусных эффектах [23]. Однако, насколько нам известно, ограниченное количество документов оценивает эффективность и безопасность БРА для пациентов с COVID-19. В соответствии с нашим исследованием, ретроспективное исследование, проведенное в Китае, сравнивало эффективность и безопасность КАЛЕТРА и БРА у пациентов с COVID-19 [20].Они не обнаружили вирусной нагрузки в группе БРА, в то время как вирусная нагрузка 44,1% была обнаружена в группе КАЛЕТРА, и пришли к выводу, что монотерапия БРА может быть более эффективной, чем КАЛЕТРА для лечения COVID-19. Точно так же другое ретроспективное исследование показало, что БРА в сочетании с КАЛЕТРОЙ, по сравнению с одним КАЛЕТРА, улучшит вирусный клиренс и КТ грудной клетки [24]. Когортное исследование 504 госпитализированных пациентов с COVID-19 со смешанной степенью тяжести заболевания показало, что БРА значительно снизила смертность (OR = 0.183, 95% ДИ = 0,075–0,446), и он с большей вероятностью поглощал поражения при КТ грудной клетки [25]. Однако рандомизированное контролируемое исследование Li et al. и ретроспективное исследование Chen et al. предположили, что ни симптомы COVID-19, ни вовлечение КТ грудной клетки, ни время до отрицательного результата ПЦР SARS-CoV-2 в респираторных образцах не было улучшено / уменьшено у пациентов, получавших КАЛЕТРА и БРА [19, 26]. Несмотря на небольшой размер выборки в Li et al. исследование [19], они не набирали пациентов с тяжелыми или критическими заболеваниями.Кроме того, в отличие от Li et al. [19], мы давали КАЛЕТРА и АРБ в сочетании с гидроксихлорохином каждой группе. Тем не менее, мы считаем, что наши результаты могут помочь врачам разработать соответствующие стратегии лечения среди новых доказательств в отношении лечения COVID-19.

Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro

С декабря 2019 года новое заболевание COVID-19, вызванное тяжелым острым респираторным синдромом, коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), быстро распространилось в более чем 200 стран и заразило более 1 страны.50 млн человек, в том числе 92798 погибших (данные на 10 апреля 2020 г.). 11 марта Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) охарактеризовала COVID-19 как пандемию и призвала ускорить разработку диагностических средств, вакцин и лекарств для борьбы с этим новым заболеванием. Помимо нового коронавируса, инфекции, вызванные вирусом гриппа, на протяжении многих лет представляли постоянную угрозу для здоровья населения мира. По оценкам Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) только в Соединенных Штатах, за зимний сезон 2019–2020 гг. Было зарегистрировано не менее 39 миллионов заболеваний, 400 000 госпитализаций и 24 000 смертей от гриппа (https: // www.cdc.gov/flu/weekly/index.htm). Учитывая текущую одновременную циркуляцию SARS-CoV-2 и вирусных инфекций гриппа, большой интерес представляет поиск доступных и жизнеспособных противогриппозных препаратов для лечения обоих заболеваний.

Фактически, на ранних стадиях вспышки COVID-19 для лечения пациентов с COVID-19 применялись некоторые противогриппозные препараты (например, осельтамивир) ^1,2 . Ранее мы сообщали, что фавипиравир (T705), препарат против гриппа, одобренный в Японии и Китае, показал определенную эффективность против SARS-CoV-2 in vitro ³ .Кроме того, арбидол, противогриппозный препарат, нацеленный на вирусный гемагглютинин (НА), используется в клинических испытаниях против COVID-19 (ChiCTR2000029573) и недавно был добавлен в Руководство по диагностике и лечению COVID-19 (шестое и седьмое издание) в Китае. Недавнее ретроспективное исследование показало, что лечение арбидолом показало тенденцию к улучшению скорости выделения и снижению смертности пациентов с COVID-19 ⁴ . Однако, насколько нам известно, систематического анализа эффективности противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2 не проводилось.

В этом исследовании мы оценили шесть доступных в настоящее время и лицензированных противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2. К препаратам относятся арбидол, балоксавир, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир ^5,6 . Ингибиторы M2 (амантадин и римантадин) не рассматривались в этом исследовании, поскольку они не были рекомендованы ВОЗ для лечения гриппа из-за лекарственной устойчивости. Во-первых, цитотоксичность соединений в клетках почек африканских зеленых мартышек, Vero E6 (ATCC-1586) была измерена с помощью стандартного набора для подсчета клеток-8 (CCK8).Затем клетки инфицировали SARS-CoV-2 при множественности инфицирования (MOI) 0,05 в присутствии либо соединения, либо диметилсульфоксида (DMSO) в качестве контроля. Кривые «доза-ответ» определяли путем количественной оценки числа копий вирусной РНК в супернатанте инфицированной клетки через 48 ч после инфицирования (p.i.). Как показано на рис. 1а, арбидол эффективно ингибировал вирусную инфекцию in vitro. 50% максимальная эффективная концентрация (EC ₅₀ ) и 50% цитотоксическая концентрация (CC ₅₀ ) арбидола составляли 4.11 (3,55–4,73) и 31,79 (29,89–33,81) мкМ соответственно, а индекс селективности (SI = CC ₅₀ / EC ₅₀ ) составил 7,73. Балоксавир частично подавлял инфекцию SARS-CoV-2 (~ 29%) при высокой концентрации 50 мкМ (рис. 1а). Напротив, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир не проявляли активности против SARS-CoV-2 даже при самых высоких концентрациях препарата (рис. 1а). Противовирусный эффект соединений также оценивали, наблюдая цитопатические эффекты (ЦПЭ) и иммунофлуоресцентное окрашивание инфицированных клеток.Как показано на дополнительном рисунке S1, при 48 часах на дюйм. только в клетках, обработанных арбидолом, но не другими пятью препаратами, экспрессия вирусных NP и CPE, вызванная SARS-CoV-2, была существенно снижена. Следует отметить, что мы также попробовали некоторые линии клеток легких человека, например фибробласты легких человеческого эмбриона MRC-5 и линию клеток рака легких Calu-3, однако они не были очень эффективны для репликации SARS-CoV-2 и, следовательно, не были использованный для этого исследования.

Рис. 1: Сравнительная противовирусная эффективность противогриппозных препаратов и механизм действия арбидола против инфекции SARS-CoV-2 in vitro.

а Противовирусная активность препаратов. Противовирусную эффективность оценивали на клетках Vero E6 с помощью qRT-PCR анализа выхода вируса через 48 ч p.i. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (SD) от двух независимых повторов. b , c Время добавления арбидола. Были созданы три экспериментальные группы (постоянная, начальная и пост-начальная), как описано в дополнительных методах. Через 16 ч p.i. выход вируса в клеточном супернатанте количественно оценивали с помощью qRT-PCR ( b ), а экспрессию NP в инфицированных клетках анализировали с помощью вестерн-блоттинга ( c ).Значения под блотом представляют собой относительную интенсивность полосы (NP / GAPDH), нормализованную по отношению к группе ДМСО. d Влияние арбидола на связывание SARS-CoV-2. Клетки Vero E6 обрабатывали арбидолом (10 мкМ) или ДМСО в течение 1 часа перед заражением SARS-CoV-2 при 4 ° C в течение 1 часа. Супернатант (несвязанные вирионы) и клетки, содержащие связанные вирионы (связанные вирионы), собирали для количественной оценки копий вирусной РНК с помощью qRT-PCR. e , f Влияние арбидола на внутриклеточный трафик SARS-CoV-2.Совместную локализацию вирионов с EE или LE анализировали с помощью иммунофлуоресцентных анализов, как описано в дополнительных методах. e Доля вирионов, которые совместно локализованы с EE или EL в каждой группе ( n > 150 клеток), была определена количественно с помощью изображения J. f Репрезентативные конфокальные микроскопические изображения вирионов (красный) и LAMP1 ⁺ EL. (зеленый) в каждой группе. Ядра (синие) окрашивали красителем Hoechst 33258. Белые стрелки: вирионы, локализованные вместе с EL; стержни: 10 мкм.Для ( b ) и ( e ) статистический анализ выполняли с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с GraphPad Prism. Для ( d ) был проведен статистический анализ и рассчитан непарный двусторонний тест t . * P <0,05; *** P <0,001; нс, не имеет значения.

Сообщается, что помимо вируса гриппа арбидол ингибирует широкий спектр вирусов, вмешиваясь в несколько этапов цикла репликации вируса. ⁷ .Стадия репликации SARS-CoV-2, на которую нацелена арбидол, была исследована путем проведения предварительного эксперимента по времени добавления с использованием вируса с MOI 0,05. Арбидол инкубировали с клетками во время процесса проникновения вируса (Entry), стадий после входа (Post-entry) или всего процесса инфицирования (Full-time), и выход потомства вируса определяли количественно с помощью qRT-PCR. Данные показали, что арбидол эффективно блокировал как проникновение вируса, так и пост-входную стадию. Он оказал сильное влияние на проникновение вируса (ингибирование ~ 75%) с меньшим влиянием на события после входа (уровень ингибирования ~ 55%) (рис.1б). Кроме того, вестерн-блоттинг (рис. 1c) и иммунофлуоресцентная микроскопия (дополнительный рис. S2) подтвердили, что уровень экспрессии вирусных NP резко снизился в течение полного рабочего дня (13% в группе DMSO, рис. 1c), и показал больший ингибирующий эффект на этапе входа (41%), чем на этапе после входа (61%).

Подробности того, как арбидол блокирует проникновение SARS-CoV-2 в клетки, были дополнительно исследованы. Вирусу (MOI = 0,05) позволяли связываться с клетками Vero E6 при 4 ° C в течение 1 ч в присутствии арбидола (10 мкМ) или контроля ДМСО.Частицы вируса, связанные с клеткой (связанные вирионы), и частицы в супернатанте (несвязанные вирионы) анализировали с помощью qRT-PCR. Результаты показали, что лечение арбидолом привело к значительному снижению эффективности связывания (67%) по сравнению с контрольной группой ( P <0,05) (рис. 1d). Соответственно, доля несвязавшихся вирионов достоверно увеличилась до 156% от контрольной группы после обработки арбидолом ( P <0,001) (рис. 1г).

Затем мы проанализировали внутриклеточный трафик вирусов.Как мы недавно сообщали, внутри инфицированных клеток SARS-CoV-2 подвергался транспортировке везикул, которая сначала осуществлялась ранними эндосомами (EE), а затем переносилась в эндолизосомы (EL) ⁸ . Совместную локализацию вирионов с EE или EL визуализировали с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии и статистически анализировали ( n > 150 клеток). Как показано на рис. 1e и дополнительном рис. S3, в каждой отслеживаемой временной точке не было значительной разницы в количествах вирионов, совместно локализованных с EE, при сравнении групп, обработанных ДМСО и арбидолом, хотя по мере того, как время заражения шло на (30, 60 и 90 мин с.i.), уровни совместной локализации значительно снизились в группах, обработанных как ДМСО- (24,0%, 5,1% и 3,2%), так и арбидолом (21,4%, 4,1% и 2,8%), что позволяет предположить, что некоторые вирионы уже были транспортируется от ЭЭ к следующему этапу транспорта везикул. Напротив, через 60 мин после введения немного более высокий процент вирионов переносился в EL в группе, обработанной арбидолом (22,4%), чем в группе, получавшей ДМСО (18,3%) ( P <0,05) (рис. 1e, f ). При 90 мин p.i. значительно меньше вирионов (~ 13.5%) были обнаружены в EL в группе ДМСО; тогда как значительно более высокие доли вирионов (~ 23,6%) оставались в пределах EL в группе, обработанной арбидолом, что позволяет предположить, что лекарство захватило вирус в ELs ( P <0,001) (рис. 1e, f). Взятые вместе, эти результаты свидетельствуют о том, что арбидол препятствует не только прикреплению вируса, но и высвобождению SARS-CoV-2 из внутриклеточных везикул (EL).

Среди протестированных препаратов ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир являются ингибиторами нейраминидазы (НА), которые наиболее широко назначаются для профилактики и лечения гриппа.Хотя у SARS-CoV-2 аналогов NA не существует, ингибиторы NA, такие как осельтамивир, тем не менее, клинически используются для лечения пациентов с COVID-19 ^1,2 . Наши данные показали, что эти ингибиторы NA не активны против SARS-CoV-2 (рис. 1a), что согласуется с выводом о том, что осельтамивир и занамивир неэффективны в ингибировании SARS-CoV ⁹ . Балоксавир марбоксил — это новое лекарство от гриппа, которое избирательно ингибирует эндонуклеазную активность вирусной полимеразы, ответственной за отрывание кэпированных праймеров от мРНК хозяина для инициации транскрипции вирусной мРНК.Однако этот эндонуклеазный механизм «захвата кэпа» не является общим для коронавирусов, которые кодируют свои собственные ферменты с образованием кэп-структур 5ʹ-мРНК ¹⁰ . Это может объяснить, почему балоксавир не смог блокировать инфекцию SARS-CoV-2 (рис. 1а). В процессе обзора этого исследования Choy et al. также показали, что осельтамивир и балоксавир не могут ингибировать SARS-CoV-2 in vitro ¹¹ .

Арбидол, производное индола, на протяжении десятилетий лицензировался в России и Китае против гриппа.Это препарат широкого спектра действия против широкого спектра вирусов в оболочке и без нее. Арбидол взаимодействует преимущественно с ароматическими аминокислотами и влияет на несколько стадий жизненного цикла вируса либо путем прямого воздействия на вирусные белки, либо за счет связанных с вирусом факторов хозяина ⁷ . Например, в вирусе гриппа кристаллические структуры показали, что арбидол вставлен в гидрофобный карман субъединицы слияния HA, тем самым препятствуя конформационному изменению HA при низком pH и блокируя процесс слияния ¹² .В вирусе гепатита С арбидол нарушает как прикрепление вируса, так и движение внутриклеточных пузырьков ¹³ . Сходным образом мы обнаружили, что арбидол играет роль в препятствовании связыванию SAS-CoV-2 (рис. 1d) и перемещению внутриклеточных пузырьков (рис. 1e, f). Арбидол также может связываться с липидными мембранами и может изменять конфигурацию мембран цитоплазмы или эндосомы, которые имеют решающее значение для прикрепления и слияния вирусов ⁷ . Можно дополнительно изучить, нацелен ли арбидол на вирус и / или клетки, используя опубликованный метод ¹⁴ .

Таким образом, из шести противогриппозных препаратов только арбидол эффективно подавлял инфекцию SARS-CoV-2. Функционально он, по-видимому, блокирует проникновение вируса, препятствуя прикреплению и высвобождению вируса из EL. Хотя SI арбидола относительно низок (SI = 7,73), его фармакокинетический профиль, такой как максимальная концентрация (Cmax), более важен для прогнозирования эффективности. Обычно считается, что если Cmax достигает EC ₉₀ , лекарство, скорее всего, будет эффективным; тогда как если Cmax достигает EC ₅₀ , лекарство, возможно, эффективно in vivo.У людей однократное пероральное введение 800 мг арбидола приводит к Cmax ~ 4,1 мкМ ¹⁵ , и эта доза является эффективной и безопасной в отношении различных вирусов гриппа со значениями EC ₅₀ в диапазоне 2,5–20 мкМ ^7,16 . Арбидол также показал противовоспалительную активность, что может повысить его эффективность in vivo ¹⁶ . Учитывая, что ЕС ₅₀ (4,11 мкМ) арбидола против SARS-CoV-2 сопоставим или даже ниже, чем у вирусов гриппа, мы, следовательно, предполагаем, что арбидол потенциально эффективен для лечения пациентов с COVID-19.Однако текущая доза арбидола (200 мг, 3 раза в день), рекомендованная китайскими руководящими принципами, может не обеспечить идеальной терапевтической эффективности для подавления инфекции SARS-CoV-2, и ее следует повысить. Это необходимо подтвердить клиническими испытаниями.

Ссылки

1. 1.

   Chen, N. et al. Эпидемиологические и клинические характеристики 99 случаев новой коронавирусной пневмонии 2019 г. в Ухане, Китай: описательное исследование. Ланцет 395 , 507–513 (2020).

   CAS Статья Google Scholar

2. 2.

   Huang, C. et al. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. Ланцет 395 , 497–506 (2020).

   CAS Статья Google Scholar

3. 3.

   Wang, M. et al. Ремдесивир и хлорохин эффективно подавляют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro. Cell Res. 30 , 269–271 (2020).

   CAS Статья Google Scholar

4. 4.

   Wang, Z., Yang, B., Li, Q., Wen, L. и Zhang, R. Клинические особенности 69 случаев коронавирусной болезни 2019 г. в Ухане, Китай. Clin. Заразить. Dis . ciaa272 (2020).

5. 5.

   De Clercq, E. & Li, G. Утвержденные противовирусные препараты за последние 50 лет. Clin. Microbiol. Ред. 29 , 695–747 (2016).

   Артикул Google Scholar

6. 6.

   Гаспарини, Р., Амициция, Д., Лай, П. Л., Брагацци, Н. Л. и Панатто, Д. Соединения с противогриппозной активностью: настоящее и будущее стратегий оптимального лечения и ведения гриппа. Часть I: Жизненный цикл гриппа и доступные в настоящее время лекарства. J. Prev. Med. Hyg. 55 , 69–85 (2014).

   CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

7. 7.

   Блейзинг Дж., Поляк С. Дж. И Пешер Э. И. Арбидол как противовирусное средство широкого спектра действия: обновленная информация. Антивирь. Res. 107 , 84–94 (2014).

   CAS Статья Google Scholar

8. 8.

   Liu, J. et al. Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно подавляет инфекцию SARS-CoV-2 in vitro. Cell Discov. 6 , 16 (2020).

   CAS Статья Google Scholar

9. 9.

   Tan, E. L. et al. Подавление коронавирусной инфекции SARS in vitro клинически одобренными противовирусными препаратами. Emerg. Заразить. Дис. 10 , 581–586 (2004).

   CAS Статья Google Scholar

10. 10.

    Декрол, Э., Феррон, Ф., Лескар, Дж. И Канард, Б. Обычные и нетрадиционные механизмы кепирования вирусной мРНК. Nat. Rev. Microbiol. 10 , 51–65 (2011).

    Артикул Google Scholar

11. 11.

    Choy, K. T. et al. Ремдесивир, лопинавир, эметин и гомохаррингтонин ингибируют репликацию SARS-CoV-2 in vitro. Antiviral Res. 178 , 104786 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

12. 12.

    Кадам Р. У. и Уилсон И. А. Структурные основы ингибирования слияния вируса гриппа противовирусным препаратом Арбидол. Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , 206–214 (2017).

    CAS Статья Google Scholar

13. 13.

    Blaising, J. et al. Арбидол подавляет проникновение вирусов, препятствуя клатрин-зависимому трафику. Антивирь. Res. 100 , 215–219 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

14. 14.

    Si, L. et al. Тритерпеноиды манипулируют широким спектром слияния вируса с хозяином посредством обертывания домена HR2, преобладающего в вирусных оболочках. Sci. Adv. 4 , eaau8408 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

15. 15.

    Sun, Y. et al. Фармакокинетика однократных и многократных пероральных доз арбидола у здоровых китайских добровольцев. Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. 51 , 423–432 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

16. 16.

    Liu, Q. et al. Противовирусная и противовоспалительная активность арбидола гидрохлорида при инфицировании вирусом гриппа A (h2N1). Acta Pharmacol. Грех. 34 , 1075–1083 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим профессора Чжэньхуа Чжэн из Уханьского института вирусологии за любезно предоставленные кроличьи поликлональные антитела против LAMP1; Beijing Savant Biotechnology Co., ltd за любезное предоставление моноклональных антител против NP; Цзя Ву, Цзюнь Лю и Хао Тан из лаборатории BSL-3 и доктору Дин Гао из основного факультета Уханьского института вирусологии за их критическую поддержку; ДокторВасилия Арифа за научное редактирование статьи. Эта работа была поддержана грантами Национального научно-технического проекта «Основные инновации и разработки новых лекарственных средств» (2018ZX09711003), Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (2020YFC0841700) и Национального фонда естественных наук Китая (31621061).

Информация об авторе

Заметки автора

1. Эти авторы внесли равный вклад: Си Ван, Жуйюань Цао, Хуанью Чжан

Принадлежности

1. Государственная ключевая лаборатория вирусологии, Институт вирусологии Ухани, Центр биобезопасности, мега-наука Китайская академия наук, Ухань, 430071, Китай

   Си Ван, Хуанью Чжан, Цзя Лю, Минюэ Сюй, Хенгруй Ху, Юйфэн Ли, Сюлянь Сунь, Синлоу Ян, Чжэнли Ши, Фэй Дэн, Чжихонг Ху и Манли Ван

Национальный инженерный исследовательский центр по лекарствам неотложной помощи, Пекинский институт фармакологии и токсикологии, Пекин, 100850, Китай

Жуйюань Цао, Лей Чжао, Вэй Ли и Ву Чжун

2. Университет Китайской академии наук, Пекин, 100049 , Китай

   Huanyu Zhang, Mingyue Xu, Hengrui Hu & Yufeng Li

3. Национальный центр вирусных ресурсов Уханьского института вирусологии Китайской академии наук, Ухань, 430071, Китай

   Фей Дэн

Вклады

М.W., W.Z. и Z.H. задумал и спланировал эксперименты. X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H., Y.L., L.Z., W.L., X.Y., Z.S. и F.D. участвовал во множестве экспериментов; M.W., Z.H., W.Z., X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H. Y.L. и X.S. проанализировали данные. M.W., R.C. и Z.H. написал газету. Z.H., M.W. и W.Z. обеспечил окончательное одобрение статьи.

Авторы-корреспонденты

Переписка на Чжихун Ху, У Чжун или Манли Ван.

Декларации этики

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​сведений об учреждениях.

Дополнительная информация

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или любом формате при условии, что вы надлежащим образом укажете автора (авторов) и источник, укажите ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения.Изображения или другие материалы третьих лиц в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законодательными актами или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Цитируйте эту статью

Wang, X., Cao, R., Zhang, H. et al. Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro. Cell Discov 6, 28 (2020). https://doi.org/10.1038/s41421-020-0169-8

Скачать цитату

Дополнительная литература

• Противовирусные препараты арбидол и интерферон альфа-1b способствуют снижению тяжести пациентов с COVID-19: ретроспективное когортное исследование

  • Пэн Инь
  • , Хуан Мэн
  • , Цзиньчэн Чен
  • , Цзюньсяо Гао
  • , Дунци Ван
  • , Шуянь Лю
  • , Цинлун Лиу
  Гэнчун Цзяньцзян Цзянь, Мугчунь Цзянь Цзянь 9015, Мугчунь 9015
  • , Е Ли
  • и Гуолян Чжан

  Журнал вирусологии (2021 год)

• Характеристики SARS-CoV-2 и COVID-19

  • Бен Ху
  • , Хуа Го
  • , Пэн Чжоу
  • и Чжэн-Ли Ши

  Обзоры природы Микробиология (2021 год)

• Перекрестно-связывающий пептид и повторно назначенные препараты ингибируют оба пути проникновения SARS-CoV-2.

  • Ханьцзюнь Чжао
  • , Кельвин К.W. To
  • , Hoiyan Lam
  • , Xinxin Zhou
  • , Jasper Fuk-Woo Chan
  • , Zheng Peng
  • , Andrew CY Lee
  • , Jianpiao Cai
  • , Wan -han 9014 Mui Chan, Wan -han 9014 Mui Chan,
  • , Крис Чунг-Синг Чан
  • , Ман Лунг Йунг
  • , Анна Цзинься Чжан
  • , Аллен Винг Хо Чу
  • , Шибо Цзян
  • и Квок-Юнг Юн

  Nature Communications (2021 год)

• Онтологическое моделирование и анализ экспериментально или клинически проверенных препаратов против коронавирусной инфекции

  • Yingtong Liu
  • , Junguk Hur
  • , Wallace K.Б. Чан
  • , Чжиган Ван
  • , Цзянган Се
  • , Дуксин Сан
  • , Самуэль Хендельман
  • , Джонатан Секстон
  • , Хун Ю
  • и Юнцюнь Хэ

  Научные данные (2021 год)

• CoViTris2020 и ChloViD2020: новая надежда на лечение COVID-19

  Молекулярное разнообразие (2021 год)

границ | Эффективность арбидола для профилактики COVID-19 у медицинских работников

Введение

Коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19) быстро распространилось по всему миру с момента его открытия в декабре 2019 г. (1).По состоянию на 14 апреля 2020 года SARS-CoV-2 поразил в общей сложности 1,8 миллиона человек, в том числе десятки тысяч медицинских работников (2). Медицинские работники восприимчивы к COVID-19. Предыдущая литература подтверждает, что область работы медицинских работников значительно влияет на вероятность заражения, когда они находятся в тесном контакте с коронавирусом (3). Более того, исследования показали значительную корреляцию между возрастом и прогнозом пациентов, инфицированных SARS-CoV-2 (4). Однако в настоящее время нет профилактических препаратов, подтвержденных клиническими исследованиями (5).Эксперименты показали, что арбидол, а именно умифеновир, подавляет репликацию вирусов SARS (6). Было также показано, что арбидол блокирует репликацию вируса, ингибируя слияние липидных мембран вируса гриппа с клетками-хозяевами (7). Основываясь на результатах вышеупомянутых исследований и доступности препарата, некоторые медицинские работники в больнице Тунцзи в профилактических целях приняли на себя пероральный противовирусный препарат арбидол в клинической практике, но его роль не ясна.

Таким образом, мы использовали сопоставимое по возрасту исследование случай-контроль для ретроспективного анализа корреляции между COVID-19 и профилактическим пероральным приемом арбидола медицинскими работниками в больнице Тонгцзи, чтобы изучить влияние арбидола на COVID-19 среди медицинских работников.

Методы

Дизайн исследования и участники

После вспышки в Ухане большое количество медицинских работников в нашей больнице были на передовой, что является хорошей выборкой для анализа. Таким образом, были ретроспективно отобраны работающие в больнице Тунцзи медицинские работники, которым был поставлен диагноз COVID-19 с помощью теста на нуклеиновую кислоту мазка из горла (инфекционная группа) до 9 февраля 2020 года. В зависимости от возраста и области работы они были сопоставлены по частоте, и было выбрано такое же количество неинфицированных медицинских работников, работающих в больнице Тунцзи (неинфицированная группа).Отделения высокого риска включали амбулаторное отделение и отделение неотложной помощи, отделение лихорадки, респираторное отделение, торакальное хирургическое и инфекционное отделение, тогда как другие отделения не относились к отделениям высокого риска. Неизвестно, принимали ли инфицированные и неинфицированные пациенты профилактически пероральный арбидол перед отбором. Защитные меры, принятые медицинскими работниками, были единодушно запрошены в том же отделении или на рабочем месте, например, защитный костюм, защитные очки, маски и т. Д.Пациенты в группе инфекции, которые принимали арбидол в течение 2 недель до появления первых симптомов, были определены как принимающие арбидол. Субъекты из неинфицированной группы, которые принимали пероральный арбидол в тот же период, также были определены как принимающие арбидол. Профилактическая доза была определена как 200 мг каждые сутки перорально, тогда как терапевтическая доза была определена как 600 мг каждые сутки перорально.

Это исследование было рассмотрено и одобрено Медицинским этическим комитетом больницы Тунцзи при Хуачжунском университете науки и технологий (идентификатор IRB: TJ-C20200133).

Сбор данных

Сбор информации осуществлялся в основном с помощью системы электронных медицинских карт нашей больницы и телефонных интервью. Индикаторы сбора данных включали в основном возраст, пол, сопутствующие заболевания, род занятий, отдел работы, время начала COVID-19, прием арбидола, место изоляции (больница / дом / гостиница), лабораторные параметры, наличие тяжелой пневмонии во время госпитализации и клинические исходы. . Клинические данные были получены с использованием стандартизованных форм для всех вовлеченных субъектов.Два исследователя независимо проанализировали данные.

Результатов

Определено распределение COVID-19 среди медицинских работников нашей больницы с 5 января 2020 года. Статистический анализ был включен для изучения взаимосвязи между исходными характеристиками медицинских работников и инфекцией SARS-CoV-2. В группе инфицированных оценивалась связь профилактического перорального приема арбидола с госпитализацией и развитием тяжелой пневмонии.

Статистический анализ

Статистическая программа SPSS 23.0 использовался в этом исследовании. Для проверки нормальности данных использовался однократный тест k-s. Категориальные переменные были описаны как частота и проценты, а непрерывные переменные были описаны с использованием средних или медианных значений и межквартильного диапазона (IQR). Средние значения для непрерывных переменных сравнивались с использованием независимых групп t -тестов, когда данные были нормально распределены; в противном случае использовался тест Манна – Уитни. Пропорции категориальных переменных сравнивались с использованием критерия χ2, хотя точный критерий Фишера использовался, когда данные были ограничены.Уровни безинфекционной выживаемости сравнивали с использованием лог-рангового теста. Тесты проводились при уровне α = 0,05 (обе стороны), и P <0,05 указывает на то, что разница статистически значима.

Результаты

После вспышки в Ухане количество подтвержденных случаев быстро увеличивалось: первоначальная оценка R ₀ составила 2,2 (95% ДИ 1,4–3,9) (8). Аналогичным образом, число подтвержденных случаев заболевания среди медицинского персонала продолжает расти.В это исследование были включены в общей сложности 164 человека, 82 случая в инфицированной группе и 82 контрольной группы в неинфицированной группе со средним возрастом 37 лет, в том числе 63 мужчины и 101 женщина (Таблица 1). Шестьдесят специалистов здравоохранения работали в отделениях высокого риска и 104 пациента работали в отделениях не высокого риска. Небольшое количество случаев сопровождалось основными заболеваниями, в основном гипертонией и диабетом. Распределение начала заболевания среди медицинских работников в инфицированной группе, включенной в исследование, показано на рисунках 1A, B.

Таблица 1 . Исходные характеристики медицинских работников, включенных в исследование.

Рисунок 1 . Распределение специалистов здравоохранения, участвовавших в расследовании. (A) Начало заболевания среди подтвержденных случаев COVID-19 в больнице Тунцзи. (B) Состав лиц, участвовавших в этом исследовании. (C) Уровень безинфекционной выживаемости людей, принимающих арбидол, и контрольных лиц в течение 45 дней после вспышки COVID-19.

Девятнадцать (23,2%) пациентов в инфицированной группе получали арбидол перорально с профилактической целью, а 48 (58,5%) пациентов в неинфицированной группе принимали арбидол. Сравнительный анализ инфицированных и неинфицированных групп показал, что не было никакой корреляции между инфекцией SARS-CoV-2 и полом, родом занятий и сопутствующими заболеваниями медицинских работников, но была значимая корреляция с арбидолом (23,2 против 58,5%). , OR = 0,214, 95% ДИ 0,109–0,420; P <0,001), что указывает на то, что арбидол защищает от COVID-19 у медицинских работников (таблица 1).Совокупное количество медицинских работников, заболевших COVID-19, в нашей больнице продолжало расти с 5 января 2020 года по 8 февраля 2020 года. Недостаточная осведомленность о защите и недостаточные медицинские средства защиты были важными причинами заражения медицинского персонала на ранней стадии. Совокупный уровень неинфицированных медицинских работников в группе, принимавшей арбидол, был значительно выше, чем у лиц в группе, не принимавшей арбидол (лог-ранговый тест, χ ² = 98,74; P <0,001) (рис. 1C).

48 пациентов (58,5%) в группе инфекции были госпитализированы со средним возрастом 39 (31–49) лет, из которых 7 (14,6%) принимали арбидол в профилактических целях. Тридцать четыре человека (41,5%) имели легкие симптомы и были изолированы за пределами больницы (дома или в отеле). Средний возраст составлял 34 (30–39) лет, двенадцать человек (35,3%) принимали арбидол перорально. Среди пациентов, инфицированных SARS-CoV-2, сравнительный анализ между госпитализированной группой и не госпитализированной группой показал, что частота госпитализаций была связана с возрастом ( P = 0.024) и пероральное применение арбидола (OR = 0,313, 95% ДИ 0,108–0,909; P = 0,029) (Таблица 2). Кроме того, пероральный прием арбидола также отрицательно коррелировал с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,286, P = 0,011). Между тем, не было никакой корреляции с полом, профессией или сопутствующими заболеваниями медицинских работников, что позволяет предположить, что более молодой возраст и профилактическое пероральное употребление арбидола могут защитить от прогрессирования заболевания.

Таблица 2 . Характеристики инфицированных медицинских работников, включенных в исследование.

Чтобы свести к минимуму возможные искажающие эффекты возраста, было проведено исследование типа случай-контроль. Однако в подобранном по возрасту исследовании случай-контроль частота госпитализаций не была достоверно связана с приемом арбидола ( P = 0,091) (таблица 3). Кроме того, пероральный прием арбидола не имел значимой корреляции с продолжительностью положительного мазка из зева ( r = -0,240, P = 0,056) в зависимости от возраста, что указывает на то, что профилактический пероральный прием арбидола не может замедлить прогрессирование COVID-19.У четырех из 48 госпитализированных пациентов развилась тяжелая пневмония со средним возрастом 51 (43–62) года, и все они не принимали пероральный арбидол с профилактической целью. Средний возраст 44 пациентов, не находящихся в критическом состоянии, составлял 39 (30–48) лет, 7 из них принимали арбидол перорально. Тяжелая пневмония была связана с возрастом ( P = 0,027), но не было обнаружено корреляции с полом, профессией, сопутствующими заболеваниями или пероральным приемом арбидола медицинских работников, что позволяет предположить, что пациенты пожилого возраста подвержены тяжелой пневмонии.Один из 82 заболевших умер от дыхательной недостаточности во время госпитализации, остальные пациенты вылечились.

Таблица 3 . Клинические характеристики инфицированных медицинских работников в подобранном исследовании случай-контроль.

Обсуждение

Чтобы преодолеть нынешнюю серьезную эпидемическую ситуацию, COVID-19 стал горячей точкой для исследований. В настоящее время имеется большое количество литературы, посвященной эпидемиологии, клиническим характеристикам и прогнозу заболевания (1, 4, 9).Однако исследований по лекарственной профилактике для этой особой группы медицинских работников не проводилось.

Это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола был значительно связан со снижением уровня инфицирования SARS-CoV-2 среди медицинских работников, что показало, что арбидол может играть профилактическую роль у медицинских работников. Арбидол представляет собой противовирусное соединение широкого спектра действия, которое блокирует контакт, адгезию и слияние вирусных липидных капсул и мембран клеток-хозяев и блокирует репликацию вируса (6, 10). In vivo и in vitro Эксперименты подтверждают, что арбидол оказывает ингибирующее действие на различные респираторные вирусы, включая вирусы с оболочкой и без оболочки, а также вирусы РНК и ДНК (11). Рандомизированное контролируемое исследование давало рабочим арбидол (200 мг / сут) перорально во время эпидемии гриппа в течение 10–18 дней и обнаружило, что арбидол оказывает значительный профилактический эффект (12). Аналогичным образом Титова и соавт. пероральный прием арбидола пациентам с астмой и хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) для профилактики вирусных инфекций (13).Недавно пероральное применение арбидола показало благоприятный клинический ответ у пациентов с COVID-19 (14). Эти результаты согласуются с результатами, полученными в нашем исследовании, о том, что арбидол отрицательно связан с инфекцией SARS-CoV-2.

Стоит отметить, что это исследование показало, что профилактический пероральный прием арбидола не был существенно связан с частотой госпитализаций и продолжительностью положительных мазков из зева у медицинских работников с COVID-19. Более того, нет статистической корреляции между профилактическим лечением и тяжелой пневмонией, что заслуживает дальнейшего рассмотрения.Возможные причины предполагались следующим образом. Арбидол эффективно блокирует проникновение вируса в клетки-хозяева и блокирует начальные стадии патогенного процесса вируса, обеспечивая профилактическую защиту (10, 11). Однако, когда в клетках-хозяевах реплицируется большое количество вирусов, защитный эффект арбидола ограничен. Поэтому перспективным вариантом может быть комбинированное применение арбидола и других противовирусных препаратов. Следует отметить, что профилактический пероральный прием арбидола чаще применялся среди не госпитализированных пациентов (35 vs.15%), хотя эта разница не была значимой после сопоставления с возрастом ( P = 0,091). Необходимы дальнейшие исследования, чтобы выяснить роль и механизм арбидола при инфекциях SARS-CoV-2.

Арбидол был допущен к продаже в Китае в 2006 году для лечения инфекций верхних дыхательных путей, вызванных вирусами гриппа A и B. Он хорошо переносится людьми и безопасен. Шестьдесят семь медицинских работников, которые принимали пероральный арбидол, могли переносить его (в среднем 6,7 дней) в нашем исследовании, среди которых мало людей имели легкую диарею даже в терапевтической дозе (~ 10%).О серьезных побочных эффектах, связанных с пероральным приемом арбидола, не сообщалось.

Ограничения этого исследования

Это исследование также имеет ограничения. Это одноцентровое ретроспективное исследование ограниченного размера, в котором отсутствует многоцентровое проспективное когортное исследование для улучшенной проверки. Кроме того, нет гарантии, что осведомленность участников о защите и меры защиты были полностью согласованы.

Заключение

Таким образом, арбидол был значительно связан с уменьшением инфицирования SARS-CoV-2 и может играть профилактическую роль среди медицинских работников.Этот вывод также имеет определенное значение для других групп высокого риска, таких как члены семей пациентов с COVID-19 и персонал по борьбе с инфекционными заболеваниями.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по медицинской этике больницы Тунцзи при университете науки и технологий Хуачжун.Письменное информированное согласие на участие не требовалось для этого исследования в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.

Авторские взносы

CY, WLi и ZH внесли существенный вклад в дизайн исследования. CK и DY отвечали за черновик рукописи. JL взяла на себя ответственность за получение этического одобрения. WLiu и SH взяли на себя ответственность за сбор данных. CY и ZH внесли основной вклад в анализ и интерпретацию данных.CY и JL участвовали в диагностике и лечении медицинских работников. SW внесла в рукопись существенные исправления.

Финансирование

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (№ 81702989).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

1.Zhu N, Zhang D, Wang W, Li X, Yang B, Song J и др. Новый коронавирус от пациентов с пневмонией в Китае, 2019 г. N Engl J Med. (2020). 382: 727–33. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Чо Си, Кан Дж. М., Ха Й. Е., Пак Г. Е., Ли Дж. Й., Ко Дж. Х. и др. Вспышка БВРС-КоВ после контакта с одним пациентом в отделении неотложной помощи в Южной Корее: эпидемиологическое исследование вспышки. Ланцет. (2016) 388: 994–1001.DOI: 10.1016 / S0140-6736 (16) 30623-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Ван Д., Ху Б., Ху Ц., Чжу Ф., Лю Х, Чжан Дж. И др. Клинические характеристики 138 госпитализированных пациентов с пневмонией, инфицированной новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. JAMA. (2020) 323: 1061–9. DOI: 10.1001 / jama.2020.1585

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Хамитов Р.А., Логинова С., Щукина В.Н., Борисевич С.В., Максимов В.А., Шустер А.М.[Противовирусная активность арбидола и его производных в отношении возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома в культурах клеток]. Vopr Virusol. (2008) 53: 9–13.

PubMed Аннотация | Google Scholar

7. Крамарев С.А., Мощич А.П. [Лечение гриппа и ОРВИ]. Лик Справа . (2013). 99–106.

PubMed Аннотация | Google Scholar

8. Ли Кью, Гуань Х, Ву П, Ван Х, Чжоу Л., Тонг И и др. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. (2020) 382: 1199–207. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001316

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Zhou F, Yu T, Du R, Fan G, Liu Y, Liu Z и др. Клиническое течение и факторы риска смертности взрослых пациентов с COVID-19 в Ухане, Китай: ретроспективное когортное исследование. Ланцет. (2020) 395: 1054–62. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30566-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10.Борискин Ю.С., Ленева И.А., Печер Е.И., Поляк С.Ю. Арбидол: противовирусное соединение широкого спектра действия, блокирующее слияние вирусов. Curr Med Chem. (2008) 15: 997–1005. DOI: 10.2174 / 092986708784049658

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Гагаринова В.М., Игнатьева Г.С., Синицкая Л.В., Иванова А.М., Родина М.А., Турьева А.В. [Новый химический препарат арбидол: его профилактическая эффективность во время эпидемий гриппа]. Ж Микробиол Эпидемиол Иммунобиол .(1993) 40–3.

PubMed Аннотация | Google Scholar

13. Титова О.Н., Петрова М.А., Шкляревич Н.А., Кузубова Н.А., Александров А.Л., Ковалева Л.Ф. и др. Эффективность арбидола в профилактике вирусных обострений бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких. Тер Арх. (2018) 90: 48–52. DOI: 10.26442 / terarkh3018-52

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Дэн Л., Ли Ц., Цзэн Ц., Лю Х, Ли Х, Чжан Х и др.Арбидол в сочетании с LPV / r по сравнению с одним LPV / r против коронавирусной болезни 2019: ретроспективное когортное исследование. J Заражение. (2020) S0163-4453 (20) 30113-4.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Арбидол — обзор | Темы ScienceDirect

Лечение и профилактика

Для подавляющего большинства патогенных инфекций hCoV используется поддерживающая терапия, которая включает отдых, прием жидкости и анальгетиков, и в основном зависит от поддержки органов и лечения осложнений.Иногда назначают антибиотики широкого спектра действия, противовирусные препараты, интерфероны и / или противогрибковые препараты, чтобы минимизировать риск коинфекции условно-патогенными микроорганизмами (Momattin et al., 2013).

Лечение SARS-CoV рибавирином и кортикостероидами оказалось в значительной степени неэффективным, поскольку кортикостероиды подавляют гуморальный и клеточный компоненты иммунной системы (Ferron et al., 2018). Другие препараты, такие как пентоксифиллин, были многообещающими терапевтическими кандидатами для лечения SARS-CoV из-за его противовоспалительного, противовирусного, иммуномодулирующего и бронхорасширяющего действия, но они оказались в значительной степени безуспешными при клиническом лечении инфекции SARS-CoV (Bermejo Martin et al. ., 2003). Многие антиоксидантные соединения демонстрируют активность против SARS-CoV, ингибируя 3C-подобную протеазу (3CLpro), фермент, жизненно важный для репликации SARS-CoV (Jo et al., 2020). Соответственно, несколько исследований антиоксидантных соединений, включая кверцетин и родственные кверцетину соединения, сообщили об эффективном ингибировании 3CLpro, в некоторых случаях снижая репликацию SARS-CoV (Ryu et al., 2010).

Для БВРС-КоВ мониторинг моделей эпидемии и расследование распространения инфекции позволяет эффективно выявлять, контролировать и предотвращать возможные пандемии.Комбинированное лечение БВРС-КоВ рибавирином и IFN-α2b было предложено в качестве раннего лечения после комбинации рибавирина и IFN. может подавлять репликацию БВРС-КоВ in vitro и улучшать клинические исходы у инфицированных БВРС-КоВ нечеловеческих приматов (Falzarano et al., 2013). Ограниченное эффективное терапевтическое окно инфекций БВРС-КоВ может также ограничивать эффективность противовирусных препаратов широкого спектра действия при лечении пациентов с тяжелым БВРС-КоВ (Widagdo et al., 2017). Алиспоривир, неиммуносупрессивный аналог циклоспорина А, ингибировал репликацию БВРС-КоВ in vitro и мог быть дополнительно усилен рибавирином, что подкрепляет потенциальное использование ингибиторов циклофилина в качестве направленных на хозяина ингибиторов широкого спектра репликации КоВ (de Wilde et al. ., 2017). Однако, поскольку ни один из этих потенциальных кандидатов против БВРС-КоВ не продемонстрировал значительного преимущества при лечении острых инфекций БВРС-КоВ последовательным и контролируемым образом, поддерживающее лечение, адаптированное из руководящих принципов SARS-CoV, стало основой для лечения БВРС-КоВ ( Моджаррад, 2016). Были разработаны различные вакцины против БВРС-КоВ, одна из которых прошла клинические испытания. Было показано, что современные вакцины против БВРС-КоВ вызывают эффективную защиту на нескольких моделях животных (см. Обзор Chafekar and Fielding, 2018).

И исследователи, и производители фармацевтической продукции проводят крупномасштабные клинические испытания для оценки различных вариантов лечения COVID-19. Некоторые препараты, такие как умифеновир (арбидол), нацелены на блокирование связывания SARS-CoV-2 с рецептором ACE2 для предотвращения проникновения, но его эффективность еще не установлена ​​(Wang et al., 2020e; Zhu et al., 2020c; Li et al., 2020b; Lian et al., 2020). Камостат мезилат также может блокировать проникновение SARS-CoV-2 в клетки легких человека (Hoffmann et al., 2020), но клинических данных, подтверждающих его эффективность, недостаточно (Kawase et al., 2012; Чжоу и др., 2015). Также рассматривались специфические моноклональные антитела (mAb), рекомбинантные человеческие рецепторы ACE2 или ингибиторы слияния, нацеленные на S-белок, но для клинических испытаний отсутствуют требуемые параметры безопасности и эффективности (Monteil et al., 2020; Tian et al., 2020; Xia et al., 2020b). Ингибиторы репликации вируса SARS-CoV-2 лопинавир и ритонавир (ингибиторы 3CLpro), а также ремдесивир, фавилавир и рибавирин (мишени RdRp) также были исследованы (Wang et al., 2020c; Tahir ul Qamar et al., 2020; Уильямсон и др., 2020; Grein et al., 2020; Cai et al., 2020; Цао и др., 2020; Hung et al., 2020).

Иммуномодуляторы используются для смягчения чрезмерной воспалительной реакции, вызванной SARS-CoV-2. Дексаметазон снизил смертность госпитализированных пациентов с COVID-19, которым была проведена инвазивная искусственная вентиляция легких, на 1/3 и на 1/5 для пациентов, получавших кислородную поддержку, но не было обнаружено никаких преимуществ у пациентов, которым не требовалась кислородная поддержка для лечения COVID-19 ( ВОССТАНОВЛЕНИЕ, 2020; The Recovery Collaborative Group, 2020).Тоцилизумаб и сарилумаб, антитела (Abs), специфичные к рецептору интерлейкина-6 (IL-6R), были эффективны при лечении тяжелой формы COVID-19 путем ослабления цитокинового шторма (Xu et al., 2020). Предварительные результаты с использованием экулизумаба, mAb, которое ингибирует провоспалительный белок комплемента C5, показали потенциал для лечения тяжелых случаев COVID-19 за счет снижения воспалительных маркеров и уровней C-реактивного белка (CRP) (Diurno et al., 2020). Сообщается, что SARS-CoV-2 более чувствителен к IFN типа I, чем SARS-CoV, что делает его многообещающим кандидатом для раннего лечения COVID-19 (Mantlo et al., 2020).

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) одобрило лечение плазмой выздоравливающих в качестве дополнительной терапии COVID-19, и предварительные результаты показывают, что состояние пациентов улучшилось после лечения, но есть возможные побочные эффекты (Duan et al., 2020; Shen et al. , 2020). И наоборот, mAb могут нейтрализовать инфекцию SARS-CoV-2 как in vitro, так и in vivo и имеют преимущество перед плазмотерапией выздоравливающих, поскольку они могут производиться в гораздо больших количествах для удовлетворения клинических требований (Wang et al., 2020a; Wu et al., 2020; Зост и др., 2020).

В настоящее время разрабатывается несколько вакцин против SARS-CoV-2 — рекомбинантные векторы, ДНК-вакцины, мРНК в липидных наночастицах, живые ослабленные вирусы и вакцины на основе белковых субъединиц (Smith et al., 2020; Zhu et al., 2020b; Гао и др., 2020). Некоторые из них проходят испытания в фазе II испытаний, а некоторые уже перешли в исследования фазы III (Hu et al., 2020). Вакцина с аденовирусом 5-го типа, экспрессирующая белок SARS-CoV-2 S, вызывает значительный гуморальный и клеточный иммунный ответ у большинства реципиентов после однократной иммунизации и оказалась безопасной (Zhu et al., 2020а). Начальная доза липидных наночастиц-кандидата в вакцину на основе мРНК, кодирующая предварительно слитый белок SARS-CoV-2 S (мРНК-1273), вызывает устойчивый нейтрализующий ответ антител дозозависимым образом, увеличиваясь после второй дозы (Jackson et al. др., 2020). Инактивированная вакцина на основе цельного вируса эффективно индуцирует выработку нейтрализующих антител и сообщает о низкой частоте побочных реакций (Xia et al., 2020a). Эти вакцины-кандидаты обещают предотвратить и контролировать распространение SARS-CoV-2, но сначала необходимо будет оценить их безопасность и иммуногенность с целью защиты здорового населения от инфекции SARS-CoV-2.

До тех пор, пока не будет произведена и распространена успешная эффективная вакцина, меры общественного здравоохранения будут наиболее эффективными для ограничения распространения SARS-CoV-2 и, в некоторой степени, MERS-CoV. Способность SARS-CoV-2 сохранять жизнеспособность на неодушевленных поверхностях подтверждает необходимость надлежащей санитарии путем регулярного мытья рук или использования дезинфицирующих средств для рук с содержанием этанола не менее 70%. Несмотря на некоторые разногласия по поводу эффективности масок в снижении передачи SARS-CoV-2, их простое присутствие действует как физический барьер, который может, по крайней мере, минимизировать распространение потенциально зараженных вирусом респираторных капель от одного человека к другому или на поверхности. .

Кампания по продвижению загадочного препарата советских времен как чудодейственного средства от коронавируса

Паоло Джеллано был в ресторане в Нью-Йорке, когда впервые услышал о «странном лекарстве из России». Препарат назывался Арбидол и, по словам других посетителей, якобы был эффективным средством лечения коронавируса. Когда он поискал это на YouTube, 45-летний Геллано нашел видео, в которых он провозглашал потенциальное чудо-решение пандемии Covid-19.

13 марта, когда вся Италия была заблокирована, Джеллано покинул U.С., чтобы присоединиться к своей семье в Умбрии, в центральной Италии. Практически все прямые рейсы в Рим были отменены, и Геллано был вынужден пойти в необычный объезд через Москву.

Во время дневной остановки в Московском международном аэропорту Джеллано и его друг засняли, как они проходят через терминал в масках и солнечных очках. «Мы находимся в московском аэропорту и собираемся купить этот знаменитый арбидол, который борется с коронавирусом», — сказал Джеллано в камеру. Они вошли в аптеку аэропорта, и Геллано купил две упаковки Арбидола: одну для него, одну для его жены.«Так много людей в Италии умирают — и у них нет этого препарата. Ты можешь сказать мне, почему?» — говорит он, подписывая видео «большим поцелуем из Москвы».

Геллано загрузил видео на Facebook. «Я не знаю, почему я это сделал, но я сделал это», — сказал Джеллано Coda Story. «Я сказал себе:« Я делаю это видео на благо моей страны, на благо мира ».

Gira sul web questo video: la super fake del farmaco Arbidol «anti-coronavirus».
L’Arbidol è, in realtà, un farmaco antivirale, utilizzato in Cina e в России.Il virologo Ruberto Burioni ha dichiarato: «Non serve a niente. Basta con le bufale, almeno ora «. Pic.twitter.com/BgfhUanKgM

— Francesco Borrelli (@NotizieFrance) 19 марта 2020 г.

Видео сразу же стало вирусным, набрав более 33 000 репостов на Facebook и широко распространившись по WhatsApp. «Ты знаменитость», — написал Геллано один из его друзей.

17 марта сенатор правящего в Италии Движения пяти звезд Элио Ланутти написал в Твиттере о препарате: «Арбидол — это препарат, используемый против наиболее распространенных вирусов гриппа, он работает, предотвращая проникновение вируса через клеточную мембрану и проникновение внутрь нее. воспроизвести себя.Абидол 20 мг, закупается в России в аптеках ».

Через WhatsApp и Facebook начали распространяться теории заговора о том, что итальянское правительство намеренно утаивает жизненно важные лекарства от своих граждан. Бывший министр здравоохранения Джулия Грилло еще раз обратилась к своим последователям: «Кому вы больше доверяете, — спросила она, — врачу или человеку в маске в московском аэропорту?»

По мере того, как мир подвергается безумным поискам эффективного лечения коронавируса, множество лекарств были названы потенциальными лекарствами.На прошлой неделе президент Трамп написал в Твиттере о гидроксихлорохине и азитромицине, несмотря на лишь неофициальные данные о его эффективности против Covid-19.

Тем временем в Италии наблюдается бурный интерес к арбидолу — противовирусному препарату от гриппа с клиническим названием «Умифеновир» — как к потенциальному чудодейственному лекарству. Но, по мнению российских экспертов, никаких доказательств его эффективности на практике мало.

Подпишитесь на рассылку новостей Coda

Авторитаристы замутят разговор.Уточняем это с помощью журналистики.

Арбидол, разработанный в Советском Союзе в 1970-х годах, не был одобрен для использования в США или Европе и никогда не проходил полных клинических испытаний, проводимых в соответствии с международными стандартами. Его эффективность против Covid-19 — или любого другого вируса — не доказана. Но это по-прежнему один из самых продаваемых безрецептурных препаратов в России.

Группа врачей в России в течение многих лет проводит кампанию против использования арбидола наряду с множеством других противовирусных препаратов российского производства.В 2007 году Российская академия медицинских наук признала препарат «устаревшим с недоказанной эффективностью».

«У нас есть много так называемых« противовирусных препаратов »и« иммуномодуляторов »с неизвестной эффективностью на российском рынке, — сказал Ярослав Ашихмин, московский терапевт и один из самых ярких критиков« Арбидола ». «Нет абсолютно никаких оснований для эффективности Арбидола», — сказал он. «Мы предполагаем, что если бы препарат был действительно эффективным, производитель провел бы клинические испытания, но они не хотят идти на клинические испытания, потому что их продажи очень велики.Ашихмин добавил: «Нельзя продавать надежду, и нам нужно предотвратить продажу надежды».

Арбидол

, производимый российской фармацевтической компанией «Отисифарм», уже давно продвигается российскими политиками. В 2010 году президент Владимир Путин лично одобрил это лекарство, попросив его предоставить его во время президентского визита в аптеку в городе Мурманск на северо-западе страны. Во время пандемии свиного гриппа в 2009 году тогдашний министр здравоохранения России Татьяна Голикова рекомендовала Арбидол для лечения вируса h2N1 и была обвинена в коррупции после того, как выяснилось, что она поддерживает тесную дружбу с миллиардером-владельцем Арбидола.Голикова получила в СМИ прозвище «Мадам Арбидол».

Последняя кампания по продвижению арбидола как чудодейственного средства началась еще в январе, когда Covid-19 начал распространяться за пределы Китая. В России странное и обнадеживающее послание было передано миллионам людей на четырех самых популярных радиостанциях страны. «Во всем мире растет число пациентов с новым коронавирусом, вызывающим опасную пневмонию», — говорилось в рекламе. «Исследования доказали: арбидол активен даже против коронавируса.”

После публикации объявления федеральное расследование заявлений фармацевтической компании показало, что они нарушают закон о рекламе. Российские СМИ сообщили, что компанию оштрафуют на сумму до 500 000 рублей: около 6300 долларов.

Сегодня на домашней странице Арбидола компания продолжает рекламировать препарат как «активный против гриппа, атипичной пневмонии и коронавирусов». OTCPharm не ответила на запросы о комментариях от Coda Story.

Торговая презентация сработала: аптеки по всей России сообщили о резком увеличении спроса — более одной аптеки.Только за февраль продано 3 миллиона упаковок Арбидола. Российские пользователи eBay продают препарат международным покупателям по 67 долларов за 20 капсул, что в 32 раза превышает первоначальную цену, составлявшую около 2 долларов, — списки постоянно удаляются.

В начале февраля один из ведущих эпидемиологов Пекина Ли Ланьцзюань рекомендовал Китаю включить арбидол в свой официальный план лечения, что вызвало бурю нового интереса к этому препарату. На прошлой неделе рандомизированное исследование, проведенное группой китайских врачей, показало, что Арбидол не показал каких-либо клинических преимуществ у пациентов, госпитализированных с Covid-19.

В Италии врач по имени Иво Бьянки, который часто пропагандирует «естественные» методы лечения, в начале марта разместил видео об Арбидоле среди своих 17 000 подписчиков на YouTube, отметив, что на данный момент жертвы коронавируса в России «очень быстро выздоравливают». «Я думаю, что интересно упомянуть этот препарат, хотя он не одобрен в Европе», — сказал Бьянки своим зрителям. «Как вы знаете, между Россией и Европой существуют политические конфликты, не должно быть такого разделения внутри научного сообщества.”

Бьянки снял видео о том, как Паоло Джеллано — уроженец Умбрии, который впервые услышал о наркотике в ресторане в Нью-Йорке, — узнал больше об арбидоле.

Доктор Рохин Фрэнсис — кардиолог из Великобритании, который отслеживал заявления о потенциальных средствах лечения Covid-19. Он объяснил, почему некоторые люди считают новости о потенциально жизнеспособном лечении психологически привлекательными. «Все, что мы можем предложить публике на данный момент, — это предположения и неуверенность», — сказал он. «Если кто-то может прийти и сказать:« Это сработает, это вылечит вас — люди просто будут тянуться к этому посланию ».”

На прошлой неделе российская пресса сообщила, что в скором времени в стране может возникнуть нехватка арбидола, поскольку некоторые из основных ингредиентов препарата производятся в Италии. Тем временем Россия отправила огромный военный конвой с припасами в пораженную коронавирусом Италию, которая на сегодняшний день потеряла более 10 тысяч человек из-за болезни.

Подпишитесь на рассылку новостей Coda

Авторитаристы замутят разговор. Уточняем это с помощью журналистики.

Паоло Джеллано наблюдал в Интернете из своего дома в Умбрии, как Россия отправляла посылку с гуманитарной помощью. «Я не знаю, почему они нам помогают — и есть ли за этим что-то, — сказал он. Геллано удалил свое видео на Facebook после того, как получил несколько угроз убийством, а также предложения купить Арбидол. «Люди хотели заплатить за это 10 000 евро, но я сказал:« Я не собираюсь его продавать », — сказал он. «Я никогда, никогда не думал, что это зайдет так далеко».

Геллано в настоящее время находится в изоляции со своей женой и семьей.Две его упаковки Арбидола остаются закрытыми. «Я еще не принимал его, потому что я немного скептически настроен, а моя жена — немного скептически», — сказал он. «Но в неприятной ситуации, когда у меня появится коронавирус, я приму его».

Катерина Фомина и Карина Левитина внесли свой вклад в исследование.

Оценка противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравира) на мышиной модели геморрагической лихорадки Крым-Конго

Аннотация

Фон

Мыши, лишенные рецептора интерферона типа I (мыши IFNAR ^{— / —} ), воспроизводят соответствующие аспекты Крымско-Конго геморрагической лихорадки (CCHF) у людей, включая повреждение печени.Мы стремились охарактеризовать патологию печени у мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных вирусом CCHF, с помощью иммуногистохимии и использовали модель для оценки противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 против вируса CCHF.

Методология / основные выводы

инфицированных вирусом CCHF IFNAR ^{— / —} мышей умерли через 2–6 дней после заражения с повышенным уровнем аминотрансферазы и высокими титрами вируса в крови и органах. Основным патологическим изменением был острый гепатит с обширным мостиковым некрозом, реактивная пролиферация гепатоцитов и легкая или умеренная воспалительная реакция с активацией моноцитов / макрофагов.Зараженные вирусом и апоптотические гепатоциты сгруппированы в некротических областях. Рибавирин, арбидол и Т-705 подавляли репликацию вируса in vitro на ≥3 логарифмических единиц (IC ₅₀ 0,6–2,8 мкг / мл; IC ₉₀ 1,2–4,7 мкг / мл). Рибавирин [100 мг / (кг × день)] не увеличивал выживаемость мышей IFNAR ^{— / —} , но увеличивал время до смерти (p <0,001) и снижал уровни аминотрансферазы и титры вируса. Арбидол [150 мг / (кг × сут)] не имел эффективности in vivo .Животные, получавшие Т-705 через 1 час [15, 30 и 300 мг / (кг × день)] или до 2 дней [300 мг / (кг × день)] после заражения, выжили, не проявили никаких признаков заболевания и вирусов в крови и органах не было. Совместное введение рибавирина и Т-705 дало скорее положительные, чем побочные эффекты.

Выводы / Значение

Активированные печеночные макрофаги и клетки, происходящие из моноцитов, могут играть роль в провоспалительном цитокиновом ответе при CCHF. Скопление инфицированных гепатоцитов в некротических областях без выраженного воспаления указывает на вирусные цитопатические эффекты.Т-705 очень эффективен против вируса CCHF in vitro и in vivo . Его in vivo эффективность превышает эффективность существующего стандартного препарата для лечения CCHF, рибавирина.

Сведения об авторе

Крымско-конголезская геморрагическая лихорадка (КГЛ) является эндемическим заболеванием в Африке, Азии, Юго-Восточной Европе и на Ближнем Востоке. Летальность составляет 30–50%. Исследования по патофизиологии и лечению CCHF были затруднены из-за отсутствия подходящей модели на животных. Мы использовали инфицированных вирусом CCHF трансгенных мышей с дефектом врожденного иммунного ответа в качестве модели заболевания.Эти мыши умирают от инфекции и проявляют признаки заболевания, аналогичные тем, которые обнаруживаются у людей. Во-первых, мы изучили патологию печени у животных, поскольку некроз печени является характерной чертой CCHF человека. Во-вторых, мы использовали модель для проверки эффективности противовирусных препаратов, которые используются в клинической практике или на продвинутой стадии клинических испытаний. Помимо рибавирина, стандартного препарата для лечения CCHF, мы протестировали арбидол, препарат, который используется в клинической практике против респираторных инфекций, и Т-705, новый препарат, находящийся в клинической разработке для лечения инфекции вируса гриппа.В то время как рибавирин и арбидол показали некоторый положительный эффект или не показали его, соответственно, Т-705 был очень эффективен в модели на животных. Эти данные обещают клиническую эффективность Т-705 при CCHF человека.

Образец цитирования: Oestereich L, Rieger T, Neumann M, Bernreuther C, Lehmann M, Krasemann S, et al. (2014) Оценка противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравир) на мышиной модели крымско-конголезской геморрагической лихорадки. PLoS Negl Trop Dis 8 (5): e2804.https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804

Редактор: Сунит Кумар Сингх, Центр клеточной и молекулярной биологии (CCMB), Индия

Поступила: 25 августа 2013 г .; Одобрена: 9 марта 2014 г .; Опубликовано: 1 мая 2014 г.

Авторские права: © 2014 Oestereich et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование было поддержано грантами FP7 228292 (Европейский вирусный архив) и 260644 (низкомолекулярные ингибиторы, ведущие по сравнению с появляющимися и забытыми РНК-вирусами) Европейского сообщества. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Вирус Крымско-Конго геморрагической лихорадки (CCHFV) представляет собой РНК-вирус с отрицательной цепью, принадлежащий к роду Nairovirus семейства Bunyaviridae .Вирус эндемичен в Африке, Азии, Юго-Восточной Европе и на Ближнем Востоке. Клещи Hyalomma передают вирус людям, диким животным и животным. Люди также могут заразиться при контакте с зараженным домашним скотом. Передача от человека к человеку происходит в основном в больничных условиях. У людей вирус вызывает лихорадочное заболевание, которое может быть связано с кровотечением, некрозом печени, шоком и полиорганной недостаточностью. Другими отличительными признаками заболевания являются повышенные уровни сывороточного аспартата и аланинаминотрансферазы (AST и ALT соответственно), тромбоцитопения и диссеминированная внутрисосудистая коагулопатия.Средняя летальность составляет 30–50%, но может быть выше при внутрибольничных вспышках [1] — [5].

Патофизиология болезни изучена недостаточно. Считается, что повреждение эндотелиальных клеток и клеток печени, индукция провоспалительных цитокинов и нарушение регуляции каскада коагуляции играют роль [3] — [8]. Исследования патофизиологии крымско-конголезской геморрагической лихорадки (КГЛ) затруднены из-за отсутствия подходящей модели на животных, поскольку до сих пор не описано ни одного млекопитающего с полностью функциональной иммунной системой, за исключением людей, у которого заболевание развивается при заражении.Первой животной моделью была новорожденная мышь [9]. Недавно были описаны две модели трансгенных мышей для CCHF: во-первых, у мышей, лишенных преобразователя сигнала и активатора транскрипции 1 (мыши STAT1 ^{— / —} ), и во-вторых, у мышей, лишенных рецептора интерферона типа I (альфа / бета) (IFNAR). ^{— / —} мышей) [10] — [12]. Обе мыши с нокаутом имеют дефект врожденного иммунного ответа, быстро умирают от инфекции CCHFV и воспроизводят соответствующие аспекты CCHF человека. В суррогатных моделях CCHF используются мыши IFNAR ^{— / —} , инфицированные вирусом Dugbe или Hazara [13], [14], двумя наировирусами, связанными с CCHFV, которые, как известно, не вызывают заболевания у человека.Работа с этими моделями может осуществляться на уровне биобезопасности (BSL) -2, в то время как для работы с инфекционными CCHFV необходимы средства BSL-4.

В настоящем исследовании мы стремились более подробно охарактеризовать патологические изменения в печени мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV. Кроме того, мы использовали эту модель для оценки противовирусной эффективности рибавирина, арбидола и Т-705 (фавипиравир) против CCHFV in vivo . Эти препараты либо используются в клинической практике, либо находятся на продвинутой стадии клинических испытаний.Рибавирин подавляет репликацию CCHFV в культуре клеток [15] и вводится пациентам с CCHF, хотя его клиническая польза не доказана и обсуждается спорно [16] — [19]. Он показывает положительные эффекты на неонатальных моделях мышей и STAT1 ^{— / —} [9], [10]. Рибавирин в настоящее время является единственным препаратом, доступным для лечения хронической сердечной недостаточности. Арбидол представляет собой противовирусный препарат широкого спектра действия, проявляющий активность против ряда РНК-вирусов in vitro и in vivo , в первую очередь вируса гриппа A [20] — [24].В России и Китае препарат клинически используется в основном для профилактики и лечения острых респираторных инфекций, в том числе гриппа. Предполагается, что арбидол действует посредством гидрофобных взаимодействий с мембранами и вирусными белками, таким образом подавляя слияние и проникновение вируса [25] — [27]. Т-705 является сильным ингибитором in vitro и на животных моделях вируса гриппа, флебовирусов, хантавирусов, аренавирусов, альфавирусов, пикорнавирусов и норовирусов [28] — [35]. После преобразования в Т-705-рибофуранозил-5′-трифосфат, он предположительно действует как аналог нуклеотида, который избирательно ингибирует вирусную РНК-зависимую РНК-полимеразу или вызывает летальный мутагенез при включении в вирусную РНК [36] — [40].Т-705 (фавипиравир) в настоящее время находится на поздней стадии клинических разработок для лечения вирусной инфекции гриппа.

Материалы и методы

Заявление об этике

Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями Немецкого общества лабораторных животных под наблюдением ветеринара. Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных города Гамбурга (разрешение № 44/11). Были предприняты все усилия, чтобы минимизировать количество животных, используемых для экспериментов, и уменьшить страдания животных во время экспериментов.Весь персонал, проводящий эксперименты на животных, прошел программу обучения и подготовки в соответствии с категорией B или C Федерации европейских ассоциаций лабораторных зоотехников. Об экспериментах на животных в этом исследовании сообщается в соответствии с рекомендациями ARRIVE [41]. В этом исследовании было использовано 162 мыши, и все мыши были включены в анализ.

Вирусы

Штамм

CCHFV Afg-09 2990 был выделен в 2009 году в нашей лаборатории от пациента со смертельным течением инфекции [42] и пересеян 2 раза, прежде чем он был использован в этом исследовании.Запас вируса выращивали на клетках Vero E6, количественно определяли с помощью иммунофокусного анализа (см. Ниже) и хранили при -70 ° C до использования в экспериментах in vitro, и in vivo, .

Противовирусные препараты

Рибавирин (номер CAS 36791-04-5; PubChem CID 37542) был получен от MP Biomedicals (номер заказа 02196066), арбидола гидрохлорид (номер CAS 131707-23-8; PubChem CID 131410) от Waterstone Technology, США ( номер заказа 49823), а Т-705 (фавипиравир; номер CAS 259793-96-9; PubChem CID 492405) был специально синтезирован BOC Sciences, Creative Dynamics, США.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности в культуре клеток

Соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) в концентрации примерно 10 мг / мл и хранили при -20 ° C. Конечная концентрация ДМСО в супернатанте клеточной культуры составляла 0,1%. Клетки Vero E6 выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) (PAA Laboratories) с добавлением 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и стрептомицином / пенициллином, и высевали с плотностью 4 × 10 ⁴ клеток на лунку 24- лунный планшет за 1 день до заражения.Клетки инокулировали CCHFV при множественности инфицирования (MOI) 0,01 в лаборатории BSL-4. Посевной материал удаляли через 1 ч и заменяли свежей средой с различными концентрациями соединения. Для экспериментов с арбидолом клетки дополнительно обрабатывали арбидолом за 18 ч до заражения. Концентрацию инфекционных вирусных частиц в супернатанте клеточной культуры измеряли через 2–4 дня после инфицирования (p.i.) с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенил-2H-тетразолийбромида (МТТ), как описано [43].Сигмоидальная кривая доза-ответ была подогнана к данным с использованием Prism GraphPad 6.0 (программное обеспечение GraphPad). Ингибирующие концентрации, которые снижали титр вируса на 50%, 90% и 99% (IC ₅₀ , IC ₉₀ и IC ₉₉ , соответственно) и цитотоксические концентрации, которые снижали рост клеток на 50% и 90%. % (CC ₅₀ и CC ₉₀ соответственно) были рассчитаны из сигмоидальных функций.

Для анализа комбинаций двух препаратов была протестирована матрица концентраций 8 × 8.Лекарства x и y испытывали в концентрациях c = 0; IC ₉₀ /8; IC ₉₀ /4; IC ₉₀ /2; IC ₉₀ ; IC ₉₀ • 2; IC ₉₀ • 4; IC ₉₀ • 8 во всех возможных комбинациях ( c _x , c _y ). Значения IC ₉₀ были получены из предыдущих экспериментов с одним лекарством. Данные комбинации лекарственных препаратов анализировали с использованием модели взаимодействия лекарственных средств независимости Блисса [44].Эта модель определяется уравнением E _xy = E _x + E _y — ( E _x • E _y ), где E _xy — это аддитивный эффект лекарств x и y , прогнозируемый по их индивидуальным эффектам E _x и E _y . E _x = ( V _obs (0,0) — V _obs ( c _x , 0)) / V _obs (0,0) и E _y = ( V _obs (0,0) — V _obs (0, c _y )) / V _obs (0,0), где V _obs ( c _x , c _y ) — наблюдаемое, т.е.е. экспериментально определенный титр вируса для ( c _x , c _y ). По аналогии с программой MacSynergy II [44], [45], которая оценивает антивирусные данные в соответствии с моделью независимости Блисса, трехмерный подход использовался для определения областей, в которых наблюдаемые эффекты больше (синергия) или меньше (антагонизм), чем предсказанные E _xy . С этой целью соотношение между прогнозируемым титром вируса V _pred ( c _x , c _y ) = V _obs (0,0) • (1− E _xy ) и наблюдаемый титр вируса V _obs ( c _x , c _y ) был рассчитан для каждой комбинации препаратов ( c _x , c _y ) .Отношение> 1 указывает на синергию (т.е. для ( c _x , c _y ) титр вируса, предсказанный для аддитивного эффекта, выше, чем экспериментально определенный титр вируса), соотношение <1 указывает на антагонизм (т.е. ( c _x , c _y ) титр вируса для прогнозируемого аддитивного эффекта ниже, чем титр вируса, определенный экспериментально).

Эксперименты на мышах

IFNAR ^{— / —} мышей (фон 129Sv) [46] были выведены в учреждении для животных, свободных от специфических патогенов, Института Бернхарда-Нохта.Во всех экспериментах использовались самки животных в возрасте от шести до двенадцати недель (средний вес 20 г, диапазон 15-24 г), за исключением девяти самцов, которые использовались для определения летальной дозы вируса. Ожидалось, что размер группы из 5 животных обеспечит достаточно точные оценки выживаемости, вирусемии и параметров клинической химии. Это позволяет обнаружить 80% -ную разницу в выживаемости между контрольной группой и группой лечения с p (альфа) = 0,05 и степенью (1 — бета) = 0,8. Экспериментальные группы были сопоставимы по возрасту.От трех до пяти животных в группе содержали вместе в обычной клетке без обогащения. У них был доступ к пище и воде ad libitum . Эксперименты по заражению CCHFV проводились в помещении для животных лаборатории BSL-4 с искусственными циклами свет / темнота.

От трех до десяти животных в группе (в зависимости от того, планировался ли сбор органов) инфицировали внутрибрюшинной (i.p.) инъекцией от 0,3 до 10 ⁴ фокусообразующих единиц (FFU) CCHFV в 100 или 200 мкл DMEM, содержащей 2% FCS.Способ введения был выбран для облегчения сопоставимости с ранее описанными моделями мышей CCHF [10], [11]. После заражения мышей ежедневно контролировали на предмет признаков заболевания, а массу тела и ректальную температуру тела измеряли с помощью термометра BIO-TK8851 с ректальным датчиком BIO-BRET-3 для мышей (Bioseb, Франция). Животных с тяжелыми признаками заболевания, такими как судороги, кровотечение, вздутие живота, диарея, агония или потеря веса> 15% в течение 2 дней, умерщвляли. Образцы крови в количестве 30–80 мкл на животное отбирали путем пункции хвостовой вены с интервалами 1–4 дня в течение 14 дней (всего ≤5 заборов крови) для клинической биохимии и измерения вирусемии.Что касается сбора органов, то при соблюдении критериев эвтаназии и в конце эксперимента животных умерщвляли передозировкой изофлурана с последующим смещением шейки матки. Органы собирали после смерти или на 3-й день после рождения. от 2–3 животных, которые были случайным образом выбраны из экспериментальных групп по 7–10 животных и проанализированы на титр инфекционного вируса и гистопатологические изменения. Опыты не повторялись.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности

in vivo

Рибавирин вводили один раз в день i.п. маршрут. Перед каждым применением готовили запас 10 мг / мл в 0,9% NaCl. Животные получали дозу рибавирина 100 мг / (кг × сут) (200 мкл для 20-граммовой мыши) или 200 мкл 0,9% NaCl в качестве плацебо. Доза рибавирина, смертельная для 50% мышей (LD ₅₀ ), составляет 220 мг / (кг × сут) [47]. Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или 8-го дня. Арбидол вводили перорально один раз в день с помощью желудочного зонда. Суспензии 15 или 30 мг / мл в 0,5% метилцеллюлозе готовили перед каждым применением.Животные получали арбидол в дозе 75 или 150 мг / (кг × сут) (100 мкл суспензии для 20-граммовой мыши) или 100 мкл 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали за 1 день до заражения и продолжали до смерти или 8-го дня. In vivo токсичность арбидола оценивали на 26 неинфицированных животных, получавших 0, 25, 75, 150, 300 или 600 мг / (кг × день) для 8 дн. В этом диапазоне доз токсических эффектов не наблюдалось. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Подвески 0.Ежедневно готовили 75, 1,5, 3 или 30 мг / мл в 0,5% метилцеллюлозе. Животные получали дозу Т-705 7,5, 15, 30 или 300 мг / (кг × сут) (100 мкл суспензии два раза в день для 20-граммовой мыши) или 100 мкл 0,5% метилцеллюлозы два раза в день. Лечение было начато через 1 час. или позже и продолжалось до смерти или 8 дня.

Титрование вирусов и антител

Частицы инфекционного вируса в крови и образцах органов определялись иммунофокусным методом. Образцы органов гомогенизировали в 500 мкл DMEM – 2% FCS с использованием Lysing Matrix D (MP Biomedicals) в битовой мельнице.Клетки Vero в 24-луночных планшетах инокулировали 200 мкл последовательных 10-кратных разведений образца. Посевной материал удаляли через 1 час и заменяли наложением 1% -метилцеллюлоза – DMEM – 6% FCS. После 5 дней инкубации клетки фиксировали 4% формальдегидом в фосфатно-солевом буфере (PBS), промывали водой и повышали проницаемость 0,5% Triton X-100 в PBS. После промывки и блокирования 10% FCS в PBS очаги инфицированных клеток выявляли с помощью специфичного к нуклеопротеину (NP) CCHFV моноклонального антитела A4 [48].После промывания клетки инкубировали с меченным пероксидазой антимышиным IgG. Очаги визуализировали с помощью тетраметилбензидина и подсчитывали.

Вирусспецифические антитела в крови были обнаружены с помощью иммунофлуоресцентного анализа (IFA) с использованием клеток, инфицированных штаммом CCHFV Afg-09 2990 в качестве антигена. Сыворотку мышей инактивировали в течение 1 ч при 60 ° C и тестировали при разведении 1∶20.

Клиническая химия

Образцы сыворотки разбавляли 1∶10 или выше, при необходимости, в 0,9% NaCl и анализировали на активность AST и ALT с использованием имеющихся в продаже наборов для колориметрического анализа при 25 ° C (предел обнаружения для неразбавленной сыворотки равен 2.25 Ед / л для АСТ и 2,65 Е / л для АЛТ) (Reflotron, Roche Diagnostics). Параметры измеряли для отдельных животных.

Гистология и иммуногистохимия

Легкие, почки, сердце, селезенка, мозг и печень собирали, фиксировали в 4% формальдегиде в PBS и заливали парафином с использованием процессора тканей Leica ASP300 S и станции для заливки Leica EG1160 (Leica). Срезы (4 мкм) окрашивали гематоксилин-эозином (H&E) или обрабатывали для иммуногистохимии (IHC). Срезы ИГХ окрашивали с использованием автоматической системы окрашивания Ventana BenchMark XT (Ventana Medical Systems) и раствора для кондиционирования клеток 1 или 2 (Ventana) в течение 30–60 мин.Срезы инкубировали с первичными антителами, направленными против B-клеточного маркера B220 (1-400; eBioscience), каспазы-3, расщепленной маркером апоптоза (1-100; R&D Systems), Т-клеточного маркера CD3 (1-100; Dako), миелоидного происхождения. клеточный (например, макрофагальный) маркер Iba-1 (1-2000; Wako Chemicals), индуцибельная синтаза оксида азота (iNOS), экспрессируемая активированными клетками, происходящими из моноцитов (1-50; Abcam), и маркер пролиферации клеток Ki67 (1-250; Abcam) на 1 час. Первичные антитела выявляли с помощью иммуноферментного полимера против IgG мыши, кроличьего IgG или IgG крысы. Комплект обнаружения DAB (Ventana).Клетки контрастировали гематоксилином. ИГХ с первичными антителами, направленными против NP CCHFV (моноклональное антитело A4 [48], 1–500) и маркера нейтрофилов Ly6G (1–1000; BD Bioscience), выполняли вручную. Срезы кипятили в цитратном буфере (pH 6) в течение 1 ч и инкубировали с антителом при 4 ° C в течение ночи. Первичные антитела выявляли с помощью иммуноферментного полимера против IgG мыши Histofine Simple Stain AP или иммуноферментного полимера против IgG G Histofine Simple Stain MAX PO и окрашивали субстратом Fast Red (Roche) или DAB (Sigma-Aldrich) соответственно.Для контрастного окрашивания использовали раствор гематоксилина Майера. Срезы закрывали монтажной средой Tissue Tek (Sakura Finetek).

Статистический анализ

Статистический анализ выполнялся с помощью GraphPad 6.0 (программное обеспечение GraphPad). Непарные группы сравнивались с двусторонним U-критерием Манна – Уитни для непрерывных параметров и с двусторонним точным критерием Фишера для частот. Кривые выживаемости сравнивались с логранговым тестом (Мантел-Кокса).

Результаты

Оптимизация модели мыши IFNAR

^{— / —} для противовирусного тестирования

Перед тестированием противовирусных препаратов на мышиной модели IFNAR ^{— / —} мы стремились определить оптимальную инфекционную дозу для штамма CCHFV Afg09-2990 и охарактеризовать заболевание, вызываемое этим конкретным штаммом.С этой целью мышей IFNAR ^{— / —} инфицировали i.p. с 0,3, 1, 3, 10, 100, 1000 и 10 000 FFU. Животные умерли от инфекции даже после инокуляции 0,3 FFU (посевной материал, погибшие / инфицированные: 0,3 FFU, 4/5; 1 FFU, 5/5; 3 FFU, 4/5; 10 FFU, 6/8; 100 FFU 13 / 13; 1000 FFU, 8/8; 10,000 FFU, 3/3). Это указывает на то, что только нескольких инфекционных вирусных частиц штамма CCHFV Afg09-2990 достаточно, чтобы инициировать продуктивную инфекцию. Летальный исход постоянно наблюдался при ≥100 FFU. Таким образом, модель была дополнительно охарактеризована для доз инокуляции 10, 100, 1000 и 10000 FFU (рис.1). Животные, инфицированные 100 или 1000 FFU, умирали между 3 и 6 днями, в то время как животные, инфицированные 10 000 FFU, равномерно умирали на 2 день. Перед смертью животные потеряли около 15% массы тела (рис. 1). На 2-й день средние значения АСТ и АЛТ составляли около 300 Ед / л и 100 Ед / л, соответственно, у животных, которым вводили 100–1000 FFU. Оба значения были выше в группе 10 000 FFU (AST 1,600 U / л и ALT 500 U / л) (рис. 1). Повышение АСТ и АЛТ указывает на повреждение клеток, в частности клеток печени. На 2-й день титр вируса в крови колебался от уровня ниже обнаруживаемой в группе 10 FFU, через 3 log ₁₀ FFU / мл в группах 100 и 1000 FFU, до 5 log ₁₀ FFU / мл в 10 000 FFU. группа (рис.1). На 3-й день вирус был обнаружен во всех проанализированных органах (селезенка, почки, печень, сердце, легкие и мозг) с титрами в диапазоне 4–7 log ₁₀ FFU / g независимо от дозы инокуляции (рис. 1). Максимальная концентрация вируса обнаружена в печени. Поскольку инокуляция ≤10 FFU не всегда была летальной, а инокуляция 10000 FFU оставляет только 2 дня между инфицированием и летальным исходом для терапевтического вмешательства, дальнейшие эксперименты были проведены с дозой 100 или 1000 FFU.

Рисунок 1.Выживаемость, масса тела, АСТ, АЛТ и титр вируса в крови и органах мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных различными дозами CCHFV.

Мышей инокулировали i.p. с 10, 100, 1000 или 10000 FFU вируса. Титры органов определяли у животных, которые умерли от инфекции или подверглись эвтаназии из-за тяжести заболевания. Среднее и стандартное отклонение показаны для титров органов, преобразованных по массе и логарифмически. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения.Данные для групп 100 и 1000 FFU наивных животных были объединены с соответствующими данными из контрольной группы плацебо, показанной на рис. 5, чтобы обеспечить более надежные оценки параметров. Серым цветом выделен диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59]. Примечания. Группа 10 FFU: 2 выживших животных не показали ни повышения AST / ALT, ни виремии на 4 день (значение ALT для одного животного не определялось). Группа 100 FFU: животное, которое умерло на 6-й день, не показало повышения уровня AST / ALT и виремии на 2-й и 4-й дни.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g001

Гистопатологические корреляты болезни

Легкие, сердце, почки, мозг, печень и селезенка мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, собирали на 3 день и оценивали на срезах, окрашенных H и E. Распределение вируса во всех органах и воспалительный ответ в печени визуализировали с помощью ИГХ. Наивные мыши IFNAR ^{— / —} служили контролем.

Печень.

В печени мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, обнаружен острый гепатит с обширным мостиковым гепатоцеллюлярным некрозом и воспалительной реакцией от легкой до умеренной (рис.2). В некротических областях было обнаружено накопление CCHFV NP в гепатоцитах (рис. 2) и расщепленных каспазо-3-положительных (апоптотических) гепатоцитах (рис. 3). Клеточная пролиферация, определяемая окрашиванием ядерного антигена Ki67, была увеличена. Хотя большинство Ki67-положительных клеток можно отнести к воспалительной реакции, пролиферация гепатоцитов также была очевидна (рис. 3). Архитектура Iba-1-положительных макрофагов (клеток Купфера) в некротических областях была нарушена; клетки показали увеличенные клеточные тела и очаговые скопления (рис.3). Кроме того, были обнаружены экспрессирующие iNOS активированные клетки, происходящие из моноцитов, которых нет в нормальной печени (рис. 3). Эти изменения указывают на активацию моноцитов / макрофагов. Количество CD3-позитивных Т-клеток, B220-позитивных В-клеток и Ly6G-позитивных гранулоцитов было немного увеличено (рис. 3).

Рисунок 2. Гистопатология и распределение вирусного антигена в печени и селезенке неопытных и инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} и эффект лечения рибавирином и Т-705.

Животных инокулировали i.p. с 100 FFU CCHFV. Вверху: печень была собрана (i) у наивных животных (ii) у животных, которые умерли от инфекции без лечения на 3-й день p.i., (iii) которые умерли от инфекции на 9-й день p.i. после обработки рибавирином 100 мг / (кг × сут) и (iv) умерщвлены на 3-й день p.i. во время обработки Т-705 300 мг / (кг × сут). Лечение рибавирином или Т-705 начинали через 1 час в день. и продолжали до смерти или 8-го дня. Внизу: селезенку собирали у наивных животных и животных, которые скончались от инфекции без лечения на 3-й день.я. Срезы окрашивали H&E, и распределение CCHFV в ткани визуализировали с использованием моноклональных антител против CCHFV NP. Патогистологические данные являются репрезентативными для 2–3 животных, анализируемых в каждой группе. Масштабная линейка = 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g002

Рис. 3. ИГХ для маркеров воспаления, апоптоза и пролиферации в печени наивных и инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} и эффект лечения рибавирином и Т-705.

Животных инокулировали i.p. с 100 FFU CCHFV. Печень собирали (i) у наивных животных (ii) у животных, которые умерли от инфекции без лечения на 3-й день p.i., (iii) которые умерли от инфекции на 9-й день p.i. после обработки рибавирином 100 мг / (кг × сут) и (iv) умерщвлены на 3-й день p.i. во время обработки Т-705 300 мг / (кг × сут). Лечение рибавирином или Т-705 начинали через 1 час в день. и продолжали до смерти или 8-го дня. Срезы окрашивали антителами против CD3, B220, Ly6G, Iba-1, iNOS, расщепленной каспазы-3 и Ki67.Т-клетки отмечены стрелками, поскольку антитело против CD3 демонстрирует некоторую ложную перекрестную реактивность. Патогистологические данные являются репрезентативными для 2–3 животных, анализируемых в каждой группе. Масштабная линейка = 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g003

Селезенка.

В селезенке мышей, инфицированных CCHFV, обнаружено умеренно пониженное количество лимфоцитов и повышенное количество клеточного дебриса в красной и белой пульпе. Кроме того, количество мегакариоцитов уменьшилось (рис.2). CCHFV NP был обнаружен в клетках селезенки, хотя сигналы были гораздо менее интенсивными, чем в печени (рис. 2).

Легкое, сердце, почки и мозг.

Гистопатологический анализ не выявил каких-либо явных различий в тканях легких, сердца, почек и головного мозга у мышей, инфицированных CCHFV, и наивных мышей. Уровень антигена вируса был ниже предела обнаружения ИГХ (данные не показаны).

Таким образом, у мышей IFNAR ^{— / —} , инфицированных CCHFV, наблюдались патологические изменения в печени и селезенке.Основным результатом был острый гепатит с обширным некрозом, реактивной пролиферацией гепатоцитов, легкой или умеренной воспалительной реакцией и морфологическими признаками активации моноцитов / макрофагов. CCHFV-инфицированные и апоптотические гепатоциты сгруппированы в некротических областях.

Тестирование противовирусных препаратов и токсичности

in vitro

Противовирусная активность рибавирина, арбидола гидрохлорида и Т-705 против штамма CCHFV Afg09-2990 была протестирована на клетках Vero E6. Все три соединения были способны подавлять репликацию вируса на 3–4 log ₁₀ единиц при концентрациях ≥10 мкг / мл (рис.4). Значения IC ₅₀ и IC ₉₀ находились в диапазоне 0,6–2,8 мкг / мл и 1,2–4,7 мкг / мл соответственно. Значения IC ₉₉ находились в диапазоне 2,0–9,5 мкг / мл. Токсичность клеток в тестовом диапазоне, измеренная с помощью теста МТТ, была очевидна только для арбидола гидрохлорида (рибавирин CC ₅₀ > 32 мкг / мл; арбидола гидрохлорид CC ₅₀ 8,3 мкг / мл, CC ₉₀ 20 мкг / мл; T -705 CC ₅₀ > 15 мкг / мл) (рис. 4). В заключение, все три соединения показали мощный противовирусный эффект против CCHFV Afg09-2990 в культуре клеток.Арбидол проявил токсичность с терапевтическим индексом около 10.

.

Рисунок 4. Тестирование противовирусной активности рибавирина, арбидола гидрохлорида и Т-705 в культуре клеток.

Клетки Vero E6 инокулировали CCHFV с MOI 0,01 и добавляли соединение 1–4 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом МТТ. Кривые доза-реакция были подогнаны к данным. На графиках показаны репрезентативные эксперименты с точками данных, представляющими среднее значение и стандартное отклонение ≥3 повторов.Значения IC ₅₀ , IC ₉₀ и IC ₉₉ были рассчитаны из сигмоидальных функций 2–3 независимых экспериментов и показаны под графиками (среднее значение и диапазон).

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g004

Противовирусное тестирование

in vivo

Рибавирин сравнивали с группой плацебо, получавшей носитель (0,9% раствор NaCl) (рис. 5). Обе группы мышей IFNAR ^{— / —} были инфицированы 100 FFU CCHFV.Хотя одно животное выжило после лечения, рибавирин существенно не увеличил выживаемость (p = 0,4). Однако препарат увеличивал время до смерти (медиана 3 против 6 дней для плацебо по сравнению с рибавирином, p = 0,0007), снижал уровни AST (p = 0,001) и ALT (p = 0,006) на 2-й день, уменьшал титр вируса в крови на 2-й день (p = 0,0007), увеличение веса на 2-й и 3-й день (p = 0,03 и p = 0,002, соответственно) и снижение конечной концентрации вируса во всех органах по сравнению с плацебо на 3-й день ( р <0.001 отдельно для каждого органа). Гистопатологический анализ органов, собранных на 3-й день у мышей, получавших рибавирин, выявил только небольшие диссеминированные очаги некроза; большая часть паренхимы печени напоминала наивных мышей. Заметное снижение гепатоцеллюлярного некроза коррелировало с низким количеством апоптозных гепатоцитов (расщепленная каспаза-3), Т-клеток (CD3), B-клеток (B220) и активированных клеток, полученных из моноцитов (iNOS). Антиген-положительные клетки (NP) вируса были значительно уменьшены в печени и селезенке по сравнению с необработанными мышами или мышами, получавшими плацебо (данные не показаны).Однако у мышей, получавших рибавирин, которые умерли от инфекции на 4–9 дни, к моменту смерти был обнаружен обширный мостиковый гепатоцеллюлярный некроз (рис. 2). Как и у нелеченных мышей, некроз сопровождался присутствием многочисленных Iba-1-положительных макрофагов (клеток Купфера), демонстрирующих увеличенные тела клеток и очаговую кластеризацию, а также экспрессирующие iNOS активированные клетки, происходящие из моноцитов (рис. 3). Оба изменения указывают на сильную активацию моноцитов / макрофагов. Однако, в отличие от необработанных мышей, вирусный антиген с трудом обнаруживался в ткани печени обработанных мышей (рис.2), что соответствует низкому титру вируса во всех органах (рис. 5, внизу). Таким образом, рибавирин снижает нагрузку CCHFV и задерживает прогрессирование заболевания, но не предотвращает терминальный некроз печени, активацию моноцитов / макрофагов и летальный исход на мышиной модели IFNAR ^{— / —} .

Рисунок 5. Лечение инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} рибавирином и арбидол гидрохлоридом.

Мышей инокулировали i.p. с 10, 100 или 1000 FFU вируса. Рибавирин вводили i.п. раз в день. Животные получали дозу рибавирина 100 / (кг × сут) или 0,9% NaCl в качестве плацебо. Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или 8-го дня. Арбидол вводили перорально один раз в день с помощью желудочного зонда. Животные получали арбидол в дозе 150 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали за 1 день до инфицирования и продолжали до смерти или 8-го дня. Титры органов определяли у животных, которые умерли от инфекции или должны были быть подвергнуты эвтаназии из-за тяжести заболевания.Кроме того, три животных из группы, получавшей рибавирин, были случайным образом умерщвлены на 3-й день p.i. для определения титра вируса в органах (данные о весе, AST, ALT и виремии, полученные от этих мышей до дня 3, были включены в соответствующие графики). Среднее и стандартное отклонение показаны для титров органов, преобразованных по массе и логарифмически. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом.Примечания. Группа 100 FFU-плацебо: животное, которое умерло на 6-й день, не показало повышения AST / ALT и виремии на 4-й день. Группа 100 FFU рибавирина: у выжившего животного не обнаруживалась виремия, но наблюдалось повышение AST. Виремия не определялась на 11 день. Группа 10 FFU арбидола: у выжившего животного не было повышения уровня АСТ и виремии на 4 день. Некоторые значения для дней 4, 8 и 11 не определялись из-за недостаточного количества крови.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g005

Гидрохлорид арбидола [75 и 150 мг / (кг × сут)] был протестирован по сравнению с группой плацебо, получавшей носитель (0,5% метилцеллюлозы) [Рис. 5 и данные не показаны для 75 мг / (кг × сут)]. Обе группы были инфицированы 1000 FFU CCHFV. За день до инокуляции мышей предварительно обрабатывали. Однако препарат не изменил ни выживаемость, ни время выживания, ни какой-либо другой измеренный параметр. Даже снижение дозы инокуляции до 10 FFU не имело никакого эффекта по сравнению с исторической контрольной группой.

T-705 был протестирован в сравнении с группой плацебо, получавшей носитель (0,5% метилцеллюлозы) (фиг. 6). Все группы были инфицированы 100 FFU CCHFV. Первоначально была протестирована высокая доза Т-705 [300 мг / (кг × сут)]. Препарат вводили с 0 по 8 день. Животные, получавшие плацебо, умерли между 3 и 4 днями. На 3 день они показали потерю веса почти на 20%, повышение температуры тела до 40 ° C, значения AST 1 200–2 51 000 Ед / л и значения АЛТ 260–6 700 Ед / л. Все животные экспериментальной группы пережили инфекцию и не проявили никаких признаков заболевания.Вирус не обнаружен ни в крови, ни в органах на протяжении всего периода наблюдения (рис. 6 и данные не представлены). Гистопатология и ИГХ на 3-й день выявили в основном нормальную ткань печени без вирусного антигена и воспалительных клеток (рис. 2 и 3).

Фигура 6. Обработка инфицированных CCHFV мышей IFNAR ^{— / —} Т-705 и эксперименты по времени добавления.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда.Животные получали дозу Т-705 300 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начинали через 1 час, 1 день или 2 дня каждый день. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Двое животных на схему лечения были умерщвлены на 3-й день p.i. для определения титра вируса в органах. Среднее и стандартное отклонение показаны для веса и температуры. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g006

Для определения эффективности препарата на поздней стадии инфекции были проведены эксперименты по времени добавления (рис. 6). Лечение высокой дозой лекарственного средства начинали через 1 день или 2 дня после инокуляции вируса и продолжали до 8 дня. Выживаемость составляла 100% в обеих группах, и животные почти не проявляли никаких признаков заболевания. Только если лечение начиналось через 2 дня p.i., незначительные изменения веса, температуры и AST наблюдались на 3 день.Вирус оставался не обнаруживаемым в крови и органах в обеих группах времени добавления на протяжении всего периода наблюдения. Чтобы предоставить доказательства инфицирования животных в группах лечения Т-705, развитие CCHFV-специфических антител измеряли 21 день p.i. Только 1/10 (10%) животных, получавших лечение после контакта, но 10/10 (100%) животных, получавших лечение с 1-го дня или 2 p.i. выработали антитела, что указывает на то, что репликации вируса при постэкспозиционной обработке Т-705 было недостаточно даже для выработки антител.

Чтобы определить наименьшую эффективную дозу Т-705, животные получали 30, 15 или 7,5 мг / (кг × сут) Т-705 или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо (рис. 7). Лечение было начато через 1 час. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Все животные из групп, получавших 30 и 15 мг / (кг × день), выжили и почти не проявляли никаких признаков заболевания. Вирус был обнаружен на низком уровне только в крови одного животного из группы, получавшей 15 мг / (кг × сут), на 11 день (фиг. 7). Доза 7,5 мг / (кг × сут) не предотвратила летального исхода, хотя и увеличила время до смерти (p = 0.0007) и снижал уровни AST (p = 0,0007) и ALT (p = 0,004) на 3-й день. Вместе взятые, T-705 высокоэффективен против CCHFV в мышиной модели IFNAR ^{— / —} .

Рисунок 7. Определение наименьшей эффективной дозы Т-705.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Животные получали дозу Т-705 30, 15 или 7,5 мг / (кг × сут) или 0,5% метилцеллюлозы в качестве плацебо. Лечение начато 1 ч. Р.я. и продолжали до смерти или до 8-го дня. Титр вируса в органах определяли у животных, которые умерли от инфекции, и у 3 животных из группы 30 мг / (кг × сут), которые были умерщвлены на 3-й день. Анализ органов не проводился для группа 15 мг / (кг × сут) (nd). Среднее и стандартное отклонение (или диапазон для n = 2) показаны для веса, температуры и логарифмически преобразованных титров органов. Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения.Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом. Примечания. Группа плацебо: животное, которое умерло на 5-й день, не показало повышения AST / ALT и виремии на 3-й день. 7,5 мг / (кг × день) Группа T-705: выжившее животное не показало ни повышения AST / ALT, ни виремии. время.

https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002804.g007

Комбинация рибавирина и Т-705

in vitro и in vivo

Рибавирин в настоящее время клинически используется для лечения хронической сердечной недостаточности [16] — [19].Поэтому важно знать, можно ли назначать Т-705 в комбинации с рибавирином и как оба препарата взаимодействуют. Сначала в культуре клеток определяли противовирусную активность 64 комбинаций рибавирина и Т-705. Матрица концентраций 8 × 8 была разработана на основе значений IC ₉₀ для обоих препаратов, как определено выше. Частицы инфекционного вируса измеряли через 3 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа и жизнеспособность клеток определяли методом МТТ. Поверхность доза-ответ демонстрирует, что комбинации рибавирина и Т-705 проявляют сильные противовирусные эффекты с подавлением репликации вируса более чем на 5 логарифмических единиц (рис.8А). Возможные антагонистические или синергетические эффекты оценивались с использованием модели независимости Bliss по аналогии с алгоритмами программы MacSynergy II [44], [45]. Этот анализ выявил явные синергетические эффекты, когда лекарства были объединены в концентрациях, близких к их IC ₉₀ . В этой области матрицы экспериментальный титр вируса был на 2 логарифмических единицы ниже, чем титр, предсказанный в соответствии с моделью независимости Блисса для аддитивного эффекта (фиг. 8B). МТТ-тест не выявил токсичности препарата по всей матрице (рис.8Б).

Рисунок 8. Тестирование противовирусной активности комбинации рибавирина и Т-705 в культуре клеток.

Клетки Vero E6 инокулировали CCHFV с MOI 0,01 и добавляли соединения. Матрица комбинации лекарств 1 × 8 была разработана, как описано в разделе «Материалы и методы». Концентрацию инфекционных вирусных частиц в супернатанте клеточной культуры измеряли через 3 дня p.i. с помощью иммунофокусного анализа. Рост и жизнеспособность клеток при обработке соединением определяли методом МТТ.(A) Поверхность «доза-реакция» для комбинации рибавирина и Т-705. Сигмоидальные кривые доза-ответ были подогнаны к данным для одного лекарства, и значения IC ₅₀ и IC ₉₀ для рибавирина и Т-705 были рассчитаны на основе функций. (B) По аналогии с программой MacSynergy II [44], [45], трехмерный подход использовался для определения областей, где наблюдаемые эффекты больше (синергия) или меньше (антагонизм), чем предсказано моделью независимости Блисса. С этой целью соотношение между предсказанным титром вируса и наблюдаемым титром вируса было рассчитано для каждой комбинации лекарственных средств.Отношение> 1 указывает на синергию (т. Е. Титр вируса, предсказанный для аддитивного эффекта, выше, чем титр вируса, определенный экспериментально), отношение <1 указывает на антагонизм (т. Е. Титр вируса для предсказанного аддитивного эффекта ниже, чем титр вируса, определенный экспериментально) . Комбинации лекарств, показывающие явное различие между экспериментальным и прогнозируемым титром (≥4-кратное), отмечены желтым цветом, а соотношение указано красным. Значения МТТ показаны синим цветом для каждой комбинации препаратов.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pntd.0002804.g008

Для тестирования эффектов комбинации препаратов in vivo животные получали дозу Т-705 30 или 7,5 мг / (кг × сут) в комбинации с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сут). Доза 30 мг / (кг × сут) Т-705, которая является защитной при введении одного лекарственного средства, была выбрана для проверки того, влияет ли добавление рибавирина на эффективность Т-705. Чтобы выяснить, может ли комбинация двух малоэффективных доз привести к эффективному лечению, одновременно вводили 7,5 мг / (кг × сутки) Т-705 и 100 мг / (кг × сутки) рибавирина.Ни один из параметров в группе 30 мг / (кг × сутки) Т-705 плюс 100 мг / (кг × сутки) рибавирина (рис.9, слева) не отличался статистически значимо от параметров группы 30 мг / (кг × сутки). г) Группа монотерапии Т-705 (рис. 7). С другой стороны, комбинация дозы 7,5 мг / (кг × сутки) Т-705 с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сутки) (рис.9 справа) улучшила выживаемость по сравнению с монотерапией. лечения (рис. 5 и 7), хотя увеличение не достигло статистической значимости (p = 0,08 для T-705 + рибавирин vs.Только Т-705 и p = 0,07 для Т-705 + рибавирин по сравнению с одним рибавирином; двусторонний точный тест Фишера). В заключение, Т-705 и рибавирин проявляют синергетические эффекты в соответствии с моделью независимости Блисса при объединении в концентрациях, близких к их IC ₉₀ in vitro . Совместное введение обоих препаратов на животной модели предполагает, что комбинированное лечение дает скорее положительные, чем побочные эффекты.

Рисунок 9. Лечение мышей комбинацией рибавирина и Т-705.

Мышей инокулировали i.p. с 100 FFU вируса. Т-705 вводили перорально дважды в день с помощью желудочного зонда. Рибавирин вводили внутрибрюшинно. раз в день. Животные получали дозу Т-705 30 или 7,5 мг / (кг × сутки) в сочетании с дозой рибавирина 100 мг / (кг × сутки). Контрольные группы плацебо показаны на рис. 7, так как оба эксперимента проводились параллельно. Лечение было начато через 1 час. и продолжалось до смерти или до 8-го дня. Для веса и температуры показаны среднее и стандартное отклонение.Вертикальные полосы на графиках для AST и ALT (обратите внимание на логарифмическую шкалу оси Y) и логарифмически преобразованные титры вирусов в крови представляют собой средние значения. Продолжительность лечения на графиках выживаемости, диапазон виремии ниже предела обнаружения иммунофокусного анализа, а также нормальный референсный диапазон АСТ и АЛТ у мышей [59] заштрихованы серым цветом. Примечания. У двух животных, умерших на 6-й день, не было обнаруживаемого вируса в органах или крови и не было повышения уровня АСТ / АЛТ.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pntd.0002804.g009

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали IFNAR ^{— / —} мышей в качестве модели in vivo для оценки эффективности противовирусных препаратов против CCHFV. Основным патологическим изменением у мышей, инфицированных недавно выделенным штаммом CCHFV Afg09-2990, был острый гепатит с обширным некрозом, реактивная пролиферация гепатоцитов, легкая или умеренная воспалительная реакция и морфологические признаки активации моноцитов / макрофагов.В некротических областях были обнаружены гепатоциты, инфицированные CCHFV и апоптозные. Рибавирин, арбидола гидрохлорид и Т-705 были активны против CCHFV Afg09-2990 в культуре клеток. Однако гидрохлорид арбидола был неактивным in vivo . Рибавирин был частично активен, тогда как Т-705 был высокоэффективным на мышиной модели. Последний препарат был эффективен, даже если окно для терапевтического вмешательства составляло менее 2 дней.

В прошлом были описаны три мышиные модели CCHF: модель новорожденных мышей, мыши STAT1 ^{— / —} и мыши IFNAR ^{— / —} [9] — [12].Последние модели используют дефект врожденного иммунного ответа, который, по-видимому, необходим для защиты мышей от продуктивной инфекции CCHFV. Во всех трех моделях мыши умирают от инфекции в течение нескольких дней. Мы предпочитаем работать с мышами IFNAR ^{— / —} , поскольку генетический дефект касается только передачи сигналов интерферона I типа, в то время как дефицит STAT1 предотвращает активацию генов из-за сигнала интерферонов I или II типа, а новорожденные мыши иммунологически иммунны. толерантный (неонатальная толерантность).Мыши IFNAR ^{— / —} очень восприимчивы к инфекции CCHFV. Посевной материал, достаточный для инициации продуктивной инфекции, очень низкий — 0,3 FFU, что предположительно соответствует всего нескольким инфекционным вирусным частицам. Это согласуется с экспериментами на мышах AG129, лишенных рецепторов интерферона типа I и типа II, в которых инокулята 0,1 БОЕ вируса лимфоцитарного хориоменингита было достаточно для заражения животных [49].

Совсем недавно было показано, что модель IFNAR ^{— / —} имитирует признаки заболевания CCHF человека [12].Эти результаты расширены здесь более подробным иммуногистопатологическим анализом печени. Гистопатология, измерение вирусной нагрузки, окрашивание антигенов в различных органах и измерение AST и ALT демонстрируют, что печень является основным органом-мишенью CCHFV. Хотя вирус был обнаружен во всех органах, его титр в печени самый высокий и в некоторых экспериментах превышает 7 log ₁₀ FFU / g. Более высокий титр вируса в печени по сравнению с другими органами может объяснить, почему анализ ИГХ на вирусный антиген выявил четко положительные клетки только в печени, в то время как сигналы в других органах были слабыми или отсутствовали.В исключительных случаях значения АСТ и АЛТ достигали 10 000 Ед / л и 1000 Ед / л соответственно, что свидетельствует о массивном повреждении клеток печени. Однако, хотя АЛТ специфичен для этого органа, АСТ также присутствует на высоком уровне в сердце, скелетных мышцах, почках, головном мозге и эритроцитах [50]. Следовательно, высокое соотношение AST / ALT также может указывать на повреждение внепеченочных клеток. В целом, гистологические и биохимические данные совместимы с диагнозом молниеносного поражения печени. Наши результаты также согласуются с патологическими наблюдениями при CCHF человека; гепатоцеллюлярный некроз с гиперпластическими и гипертрофическими клетками Купфера и легкими или отсутствующими воспалительными клеточными инфильтратами является выдающейся гистопатологической находкой у людей [3].Заслуживают внимания два новых аспекта, которые могут дать некоторые ключи к разгадке патофизиологии CCHF. Во-первых, в некротических поражениях печени скопились как гепатоциты, инфицированные CCHFV, так и апоптотические гепатоциты. Это может указывать на то, что клетки, инфицированные CCHFV, подвергаются апоптозу и некрозу. Поскольку воспалительная реакция была от легкой до умеренной, прямое цитопатическое действие вируса на гепатоциты может быть связано с индукцией апоптоза и некроза. Важно отметить, что эта гипотеза была выдвинута в ранних исследованиях ИГХ на людях с CCHF [3].Во-вторых, в печени были обнаружены активированные Iba-1-положительные макрофаги и активированные клетки, происходящие из моноцитов, экспрессирующие iNOS. Эти клетки могут играть решающую роль в сильных провоспалительных иммунных ответах после инфекции CCHFV, о чем свидетельствует значительное увеличение сывороточных провоспалительных цитокинов и молекул хемоаттрактантов у мышей IFNAR ^{— / —} и STAT1 ^{— / —} , а также у людей. [6] — [8], [10], [12].

В этом исследовании мы использовали модель мыши IFNAR ^{— / —} для тестирования противовирусных препаратов против CCHFV in vivo .Рибавирин является стандартным лечением при ГКГН у человека, хотя его клиническая эффективность не доказана [16] — [19], и показывает положительные эффекты на неонатальных моделях и моделях мышей STAT1 ^{— / —} [9], [10]. Поэтому мы сначала оценили модель мыши IFNAR ^{— / —} с использованием этого препарата. Время выживания было увеличено, в то время как выживаемость не увеличилась, что в значительной степени соответствует результатам экспериментов с высокими дозами заражения на мышах STAT1 ^{— / —} [10]. Несмотря на задержку прогрессирования заболевания и снижение вирусной нагрузки в крови и органах, о чем свидетельствуют титрование вируса и ИГХ, рибавирин не смог предотвратить летальный патофизиологический каскад.Важно отметить, что развитие терминального некроза печени с заметной активацией моноцитов / макрофагов при фактическом отсутствии вируса в органе демонстрирует, что пути хозяина, когда они запускаются вирусом, опосредуют патологию и смерть независимо от наличия триггера.

Вторым испытанным соединением был арбидол гидрохлорид, противовирусный препарат широкого спектра действия, применяемый в клинической практике против гриппа [20] — [24]. Арбидола гидрохлорид эффективно подавлял CCHFV в культуре клеток. Однако никаких положительных эффектов на мышиной модели IFNAR ^{— / —} не наблюдалось.Препарат вводили тем же путем, но в более высоких дозах, чем в предыдущих исследованиях, которые показали положительный эффект против гриппа A, вируса Коксаки B и вируса хантаана у мышей [20], [22]. Соединение обладало значительной токсичностью при более высоких концентрациях в культуре клеток. Возможно, что его противовирусный эффект in vitro , по крайней мере, частично объясняется общеклеточными токсическими эффектами, которые не обнаруживаются в анализе МТТ, используемом для оценки жизнеспособности клеток. Следовательно, возможно, что данные in vitro и переоценивают истинный противовирусный эффект препарата против CCHFV.Кроме того, арбидол чрезвычайно гидрофобен, что может снизить его пероральную биодоступность у мышей. Возможно, в будущем стоит испытать арбидол в составе фармацевтических препаратов с повышенной растворимостью [51].

Важным наблюдением в нашем исследовании является сильный противовирусный эффект Т-705 против CCHFV в культуре клеток и на мышиной модели IFNAR ^{— / —} . Было показано, что это соединение высокоактивно против ряда вирусов in vitro и in vivo , включая ортомиксовирусы, аренавирусы и буньявирусы родов hantavirus и phlebovirus [28] — [34].Следовательно, его активность против CCHFV, буньявируса из рода nairovirus , не является неожиданной. Однако ввиду низкой или недостаточной активности рибавирина и арбидола in vivo — оба из которых имеют почти такие же значения IC ₅₀ и IC ₉₀ , чем T-705, — высокая эффективность in vivo T -705 удивительно. IC ₅₀ для CCHFV в 5–30 раз ниже, чем значения IC ₅₀ для других буньявирусов [35], что может указывать на особую чувствительность этого вируса к T-705.Даже если его вводили за 2 дня до предполагаемого времени смерти, животные выживали и почти не проявляли признаков болезни. Если препарат вводится сразу после контакта, он подавляет репликацию вируса ниже уровня, необходимого для выработки антител. Мы могли снизить дозу в 20 раз [с 300 до 15 мг / (кг × сут)], при этом лекарство все еще показывало эффективность после воздействия.

Механизм действия Т-705 против CCHFV неизвестен. По аналогии с другими сегментированными вирусами с отрицательной цепью, Т-705-рибофуранозил-5′-трифосфат может быть включен в формирующуюся цепь РНК и ингибировать дальнейшее удлинение цепи или вызвать летальный мутагенез [36] — [40].Как рибавирин действует против CCHFV, до сих пор не известно, хотя препарат используется в клинической практике уже несколько десятилетий. Для других вирусов было предложено несколько механизмов: он может быть включен в вирусную РНК, вызывая летальный мутагенез [52], препятствовать кэппированию [53], ингибировать вирусную РНК-полимеразу [54], [55] или ингибировать фермент клетки-хозяина инозин. монофосфатдегидрогеназа (IMPDH) приводит к снижению уровня GTP [56] — [58]. T-705-рибофуранозил-5′-монофосфат был в 150 раз слабее рибавирин-5′-монофосфата по своему ингибирующему эффекту IMPDH, что позволяет предположить, что IMPDH не является основным ферментом-мишенью для T-705 [39], [40].Учитывая, что механизм действия обоих препаратов плохо изучен, трудно предсказать, как они взаимодействуют. Однако, поскольку рибавирин является стандартным препаратом для лечения CCHF [16] — [19], комбинированное лечение рибавирин / T-705 было бы очевидным вариантом в клинической практике. Наши эксперименты показывают, что оба препарата не действуют антагонистически in vitro и in vivo . Согласно модели независимости Блисса есть даже свидетельства синергического взаимодействия in vitro , а эксперименты на модели животных указывают на полезное, а не неблагоприятное взаимодействие in vivo .В заключение, наши данные обещают клиническую эффективность комбинированного лечения Т-705 или рибавирин / Т-705 при ГКГН человека.

Благодарности

Авторы благодарят Cesar Munoz-Fontela за плодотворные обсуждения. Отделение вирусологии Института Бернхарда-Нохта — это центр, сотрудничающий с ВОЗ по справочным материалам и исследованиям по арбовирусам и геморрагической лихорадке (DEU-115).

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: LO TR XdL SÖ SG.Проведены эксперименты: LO TR MN ML SK SW SÖ. Проанализированы данные: LO TR MN CB ML SK SÖ SG. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: PE. Написал статью: LO TR MN CB SÖ SG.

Список литературы

1. 1. Joubert JR, King JB, Rossouw DJ, Cooper R (1985) Нозокомиальная вспышка крымско-конголезской геморрагической лихорадки в больнице Tygerberg. Часть III. Клиническая патология и патогенез. S Afr Med J 68: 722–728.
2. 2. Свейнпол Р., Гилл Д.Е., Шеперд А.Дж., Леман П.А., Минхардт Дж. Х. и др.(1989) Клиническая патология Крымско-Конго геморрагической лихорадки. Rev Infect Dis 11 Suppl 4: S794–800.
3. 3. Берт Ф. Дж., Свейнпол Р., Ши В. Дж., Смит Дж. Ф., Леман П. А. и др. (1997) Иммуногистохимическая локализация и локализация in situ вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки (CCHF) в тканях человека и значение для патогенеза CCHF. Arch Pathol Lab Med 121: 839–846.
4. 4. Whitehouse CA (2004) Крымско-конголезская геморрагическая лихорадка. Antiviral Res 64: 145–160.
5. 5.Эргонул О. (2006) Крымско-Конго геморрагическая лихорадка. Lancet Infect Dis 6: 203–214.
6. 6. Ergonul O, Tuncbilek S, Baykam N, Celikbas A, Dokuzoguz B (2006) Оценка сывороточных уровней интерлейкина (IL) -6, IL-10 и фактора некроза опухоли альфа у пациентов с Крымско-Конго геморрагической лихорадкой. J Infect Dis 193: 941–944.
7. 7. Саксида А., Дух Д., Врабер Б., Дедушадж И., Ахмети С. и др. (2010) Взаимодействие иммунных механизмов и вирусной нагрузки в патогенезе крымско-конго геморрагической лихорадки.Clin Vaccine Immunol 17: 1086–1093.
8. 8. Папа А., Бино С., Вело Э, Харкси А., Кота М. и др. (2006) Уровни цитокинов при Крымско-Конго геморрагической лихорадке. J Clin Virol 36: 272–276.
9. 9. Tignor GH, Hanham CA (1993) Эффективность рибавирина в модели инфекции вируса крымско-конголезской геморрагической лихорадки (CCHF) in vivo. Antiviral Res 22: 309–325.
10. 10. Бенте Д.А., Алимонти Дж. Б., Шие В. Дж., Камю Дж., Штрохер У. и др. (2010) Патогенез и иммунный ответ вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки на модели мышей с нокаутом STAT-1.J Virol 84: 11089–11100.
11. 11. Bereczky S, Lindegren G, Karlberg H, Akerstrom S, Klingstrom J, et al. (2010) Инфекция, вызванная вирусом крымско-конголезской геморрагической лихорадки, смертельна для взрослых мышей с нокаутом рецепторов интерферона I типа. J Gen Virol 91: 1473–1477.
12. 12. Зивчек М., Сафронец Д., Скотт Д., Робертсон С., Эбихара Н. и др. (2013) Смертельная вирусная инфекция крымско-конголезской геморрагической лихорадки у мышей с нокаутом рецепторов интерферона альфа / бета связана с высокой вирусной нагрузкой, провоспалительными реакциями и коагулопатией.J Infect Dis 207: 1909–1921.
13. 13. Boyd A, Fazakerley JK, Bridgen A (2006) Патогенез инфекции вирусом Дугбе у мышей дикого типа и мышей с дефицитом интерферона. J Gen Virol 87: 2005–2009.
14. 14. Доуэлл С.Д., Финдли-Уилсон С., Рейнер Э., Пирсон Г., Пикерсгилл Дж. И др. (2012) Инфекция вирусом Хазара является смертельной для взрослых мышей с нокаутом рецепторов интерферона I типа и может действовать как суррогат для инфицирования патогенным для человека вирусом крымско-конголезской геморрагической лихорадки.J Gen Virol 93: 560–564.
15. 15. Watts DM, Ussery MA, Nash D, Peters CJ (1989) Ингибирование вирусной инфекционности крымско-конголезской геморрагической лихорадки дает in vitro рибавирин. Am J Trop Med Hyg 41: 581–585.
16. 16. Фишер-Хох С.П., Хан Дж. А., Рехман С., Мирза С., Хуршид М. и др. (1995) Крымская конго-геморрагическая лихорадка, леченная пероральным рибавирином. Ланцет 346: 472–475.
17. 17. Элалди Н., Бодур Х., Ачиоглу С., Челикбас А., Озкурт З. и др. (2009) Эффективность перорального лечения рибавирином при Крымско-Конго геморрагической лихорадке: квазиэкспериментальное исследование, проведенное в Турции.J Заражение 58: 238–244.
18. 18. Ascioglu S, Leblebicioglu H, Vahaboglu H, Chan KA (2011) Рибавирин для пациентов с Крымско-Конго геморрагической лихорадкой: систематический обзор и метаанализ. J Antimicrob Chemother 66: 1215–1222.
19. 19. Дуйгу Ф., Кая Т., Байсан П. (2012) Переоценка 400 случаев крымско-конголезской геморрагической лихорадки в эндемичной зоне: подходит ли лечение рибавирином? Переносимые переносчиками зоонозы Dis 12: 812–816.
20. 20. Shi L, Xiong H, He J, Deng H, Li Q и др.(2007) Противовирусная активность арбидола против вируса гриппа A, респираторно-синцитиального вируса, риновируса, вируса Коксаки и аденовируса in vitro и in vivo. Arch Virol 152: 1447–1455.
21. 21. Чжун Ц., Ян З., Лю И, Дэн Х, Сяо Х и др. (2009) Противовирусная активность арбидола против вируса Коксаки B5 in vitro и in vivo. Arch Virol 154: 601–607.
22. 22. Deng HY, Luo F, Shi LQ, Zhong Q, Liu YJ и др. (2009) Эффективность арбидола в отношении смертельных инфекций вируса Хантаана у мышей-сосунков и in vitro.Acta Pharmacol Sin 30: 1015–1024.
23. 23. Delogu I, Pastorino B, Baronti C, Nougairede A, Bonnet E и др. (2011) Противовирусная активность арбидола против вируса чикунгунья in vitro и характеристики выбранного устойчивого мутанта. Antiviral Res 90: 99–107.
24. 24. Брукс М.Дж., Бурцева Е.И., Эллери П.Дж., Марш Г.А., Лью А.М. и др. (2012) Противовирусная активность арбидола, препарата широкого спектра действия против респираторных вирусов, варьируется в зависимости от условий испытаний.J Med Virol 84: 170–181.
25. 25. Борискин Ю.С., Ленева И.А., Печер Е.И., Поляк С.Ю. (2008) Арбидол: противовирусное соединение широкого спектра действия, блокирующее слияние вирусов. Curr Med Chem 15: 997–1005.
26. 26. Ленева И.А., Рассел Р.Дж., Борискин Ю.С., Хэй А.Дж. (2009) Характеристики устойчивых к арбидолу мутантов вируса гриппа: значение для механизма противогриппозного действия арбидола. Противовирусный Res 81: 132–140.
27. 27. Teissier E, Zandomeneghi G, Loquet A, Lavillette D, Lavergne JP, et al.(2011) Механизм ингибирования слияния оболочечной вирусной мембраны противовирусным препаратом арбидол. PLoS One 6: e15874.
28. 28. Фурута Ю., Такахаши К., Фукуда Ю., Куно М., Камияма Т. и др. (2002) Активность соединения Т-705 против вируса гриппа in vitro и in vivo. Антимикробные агенты Chemother 46: 977–981.
29. 29. Гоуэн Б. Б., Вонг М. Х., Юнг К. Х., Сандерс А. Б., Менденхолл М. и др. (2007) Активность Т-705 in vitro и in vivo против аренавирусных и буньявирусных инфекций.Антимикробные агенты Chemother 51: 3168–3176.
30. 30. Gowen BB, Smee DF, Wong MH, Hall JO, Jung KH и др. (2008) Лечение поздней стадии заболевания на модели аренавирусной геморрагической лихорадки: эффективность и снижение токсичности Т-705 предлагает альтернативу рибавирину. PLoS One 3: e3725.
31. 31. Кисо М., Такахаши К., Сакаи-Тагава Ю., Шинья К., Сакабе С. и др. (2010) Активность Т-705 (фавипиравира) против летальных вирусов гриппа A H5N1. Proc Natl Acad Sci U S A 107: 882–887.
32. 32. Gowen BB, Wong MH, Jung KH, Smee DF, Morrey JD и др. (2010) Эффективность фавипиравира (Т-705) и производных пиразина Т-1106 на моделях флебовирусных заболеваний. Antiviral Res 86: 121–127.
33. 33. Менденхолл М., Рассел А., Сми Д.Ф., Холл Дж. О., Скирпстунас Р. и др. (2011) Эффективная пероральная терапия фавипиравиром (Т-705), начатая после начала клинического заболевания на модели аренавирусной геморрагической лихорадки. PLoS Negl Trop Dis 5: e1342.
34. 34. Safronetz D, Falzarano D, Scott DP, Furuta Y, Feldmann H, et al.(2013) Противовирусная эффективность фавипиравира против двух известных этиологических агентов хантавирусного легочного синдрома. Антимикробные агенты Chemother 57: 4673–4680.
35. 35. Furuta Y, Gowen BB, Takahashi K, Shiraki K, Smee DF и др. (2013) Фавипиравир (Т-705), новый ингибитор вирусной РНК-полимеразы. Antiviral Res 100: 446–454.
36. 36. Баранович Т., Вонг С.С., Армстронг Дж., Марджуки Х., Уэбби Р.Дж. и др. (2013) Т-705 (фавипиравир) индуцирует летальный мутагенез вирусов гриппа A h2N1 in vitro.J Virol 87: 3741–3751.
37. 37. Джин З., Смит Л.К., Раджванши В.К., Ким Б., Девал Дж. (2013) Неоднозначное спаривание оснований и высокая субстратная эффективность рибофуранозил-5′-трифосфата Т-705 (фавипиравира) по отношению к полимеразе вируса гриппа А. PLoS One 8: e68347.
38. 38. Naesens L, Guddat LW, Keough DT, van Kuilenburg AB, Meijer J, et al. (2013) Роль гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазы человека в активации противовирусного агента Т-705 (фавипиравир). Mol Pharmacol 84: 615–629.
39. 39. Сми Д.Ф., Херст Б.Л., Эгава Х., Такахаши К., Кадота Т. и др. (2009) Внутриклеточный метаболизм фавипиравира (T-705) в неинфицированных и инфицированных вирусом гриппа A (H5N1) клетках. J Antimicrob Chemother 64: 741–746.
40. 40. Фурута Ю., Такахаши К., Куно-Маекава М., Сангава Х., Уехара С. и др. (2005) Механизм действия Т-705 против вируса гриппа. Антимикробные агенты Chemother 49: 981–986.
41. 41. Килкенни С., Браун В.Дж., Катхилл И.К., Эмерсон М., Альтман Д.Г. (2010) Улучшение отчетности по бионаучным исследованиям: рекомендации ARRIVE по отчетности об исследованиях на животных.PLoS Biol 8: e1000412.
42. 42. Ölschläger S, Gabriel M, Schmidt-Chanasit J, Meyer M, Osborn E, et al. (2011) Полная последовательность и филогенетическая характеристика вируса Крымско-Конго геморрагической лихорадки из Афганистана. J Clin Virol 50: 90–92.
43. 43. Günther S, Asper M, Roser C, Luna LK, Drosten C и др. (2004) Применение ПЦР в реальном времени для тестирования антивирусных соединений против вируса Ласса, коронавируса SARS и вируса Эбола in vitro. Antiviral Res 63: 209–215.
44. 44. Greco WR, Bravo G, Parsons JC (1995) Поиск синергизма: критический обзор с точки зрения поверхности отклика. Pharmacol Rev 47: 331–385.
45. 45. Причард М.Н., Шипман С.-младший (1990) Трехмерная модель для анализа лекарственного взаимодействия. Antiviral Res 14: 181–205.
46. 46. Muller U, Steinhoff U, Reis LF, Hemmi S, Pavlovic J, et al. (1994) Функциональная роль интерферонов типа I и типа II в противовирусной защите. Наука 264: 1918–1921.
47. 47. Sidwell RW, Bailey KW, Wong MH, Barnard DL, Smee DF (2005) Эффекты вирамидина, ингибирующие вирус гриппа in vitro и in vivo. Противовирусный Res 68: 10–17.
48. 48. Эммерих П., Авшич-Зупанк Т., Чиникар С., Саксида А., Том-Болдуан С. и др. (2010) Ранняя серодиагностика острых вирусных инфекций Крымско-Конго геморрагической лихорадки человека с помощью новых методов захвата. Дж. Клин Вирол 48: 294–295.
49. 49. Ciurea A, Klenerman P, Hunziker L, Horvath E, Odermatt B и др.(1999) Персистенция вируса лимфоцитарного хориоменингита на очень низких уровнях у иммунных мышей. Proc Natl Acad Sci U S A 96: 11964–11969.
50. 50. Джаннини EG, Testa R, Savarino V (2005) Изменение ферментов печени: руководство для клиницистов. Cmaj 172: 367–379.
51. 51. Еропкин М.Ю., Соловский М.В., Смирнова М.Ю., Брязжикова Т.С., Гудкова Т.М. и др. (2009) Синтез и биологическая активность водорастворимых полимерных комплексов арбидола. Pharm Chem J 43: 563–567.
52. 52.Кротти С., Мааг Д., Арнольд Дж. Дж., Чжун В., Лау Дж. Й. и др. (2000) Противовирусный рибонуклеозид рибавирин широкого спектра действия представляет собой мутаген РНК вируса. Nat Med 6: 1375–1379.
53. 53. Госвами BB, Borek E, Sharma OK, Fujitaki J, Smith RA (1979) Противовирусный агент широкого спектра действия рибавирин ингибирует кэппирование мРНК. Biochem Biophys Res. Commun. 89: 830–836.
54. 54. Эрикссон Б., Хельгстранд Э., Йоханссон Н.Г., Ларссон А., Мисиорни А. и др. (1977) Ингибирование полимеразы рибонуклеиновой кислоты вируса гриппа рибавиринтрифосфатом.Антимикробные агенты Chemother 11: 946–951.
55. 55. Fernandez-Larsson R, O’Connell K, Koumans E, Patterson JL (1989) Молекулярный анализ ингибирующего действия фосфорилированного рибавирина на полимеразную реакцию in vitro вируса везикулярного стоматита. Антимикробные агенты Chemother 33: 1668–1673.
56. 56. Стритер Д.Г., Витковски Д.Т., Харе Г.П., Сидвелл Р.В., Бауэр Р.Дж. и др. (1973) Механизм действия 1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамида (виразол), нового противовирусного агента широкого спектра действия.Proc Natl Acad Sci U S A 70: 1174–1178.
57. 57. Leyssen P, Balzarini J, De Clercq E, Neyts J (2005) Преобладающий механизм, с помощью которого рибавирин проявляет свою противовирусную активность in vitro против флавивирусов и парамиксовирусов, опосредуется ингибированием дегидрогеназы IMP. J Virol 79: 1943–1947.
58. 58. Smee DF, Bray M, Huggins JW (2001) Исследования противовирусной активности и механизма действия рибавирина и микофеноловой кислоты против ортопоксвирусов in vitro. Antivir Chem Chemother 12: 327–335.
59. 59. Zhou X, Hansson GK (2004) Влияние пола и возраста на биохимические контрольные диапазоны сыворотки у мышей C57BL / 6J. Comp Med 54: 176–178.

Структурная основа ингибирования слияния вируса гриппа противовирусным препаратом Арбидол

Значение

Вирус гриппа является важным патогеном для человека. Циркулирующие штаммы вируса гриппа постоянно мутируют и приобретают устойчивость ко всем одобренным лекарствам. Следовательно, срочно требуется разработка лекарственных средств против гриппа против новых мишеней.Гликопротеин оболочки гемагглютинина (НА) является многообещающей мишенью для дизайна малых молекул. Однако арбидол — единственный доступный противовирусный препарат, нацеленный на HA. Отсутствие структурной информации о комплексах лекарство-НА препятствует дальнейшим терапевтическим разработкам против этого вирусного патогена. Здесь мы сообщаем о кристаллических структурах арбидола в комплексе с ГК гриппа. Эта структурная информация способствует нашему пониманию того, как небольшие молекулы, такие как арбидол, могут действовать как ингибиторы слияния гриппа и могут использоваться для разработки низкомолекулярных терапевтических средств широкого спектра действия.

Abstract

Противовирусный препарат широкого спектра действия Арбидол демонстрирует эффективность против вирусов гриппа, воздействуя на механизм слияния гемагглютинина (НА). Однако структурная основа механизма, лежащего в основе ингибирования слияния арбидолом, остается неясной, что препятствует его дальнейшему развитию в качестве специфического и оптимизированного противогриппозного препарата. Мы определили кристаллические структуры арбидола в комплексе с HA вируса гриппа из пандемического вируса h4N2 1968 года и недавнего вируса H7N9 2013 года.Арбидол связывается в гидрофобной полости в стержне тримера НА на границе раздела между двумя протомерами. Эта полость дистальна по отношению к консервативному эпитопу, на который нацелены широко нейтрализующие стволовые антитела, и находится на ∼16 Å от слитого пептида. Арбидол в первую очередь осуществляет гидрофобные взаимодействия с сайтом связывания, но также вызывает некоторые конформационные перестройки с образованием сети меж- и внутрипротомерных солевых мостиков. Действуя как молекулярный клей, арбидол стабилизирует предварительную конформацию HA, которая ингибирует большие конформационные перестройки, связанные со слиянием мембран при низком pH эндосомы.Этот уникальный способ связывания по сравнению с низкомолекулярными ингибиторами других слитых белков класса I улучшает наше понимание того, как небольшие молекулы могут функционировать как ингибиторы слияния, и направляет разработку терапевтических средств широкого спектра действия против вируса гриппа.