Журнал публикует комментарии, обзоры и исследования во всех областях интенсивной терапии и неотложной медицины.Critical Care стремится предоставить всесторонний обзор области интенсивной терапии и способствовать международному обмену идеями в этой и смежных областях. Кроме того, Журнал поощряет рассмотрение различных культурных аспектов практики интенсивной терапии.

Intensive and Critical Care Journals имеет один из самых быстрых сроков обработки среди всех медицинских журналов в мире. Обычно рецензирование выполняется в течение 2–3 недель, а решение редактора — в течение 2–7 дней после этого.Поэтому очень редко приходится ждать окончательного решения более 4 недель.

Для подачи новой рукописи авторам следует использовать систему онлайн-подачи. Авторы могут отправить свои рукописи, щелкнув ссылку «Система подачи рукописей в Интернете» или отправив электронное письмо по адресу [адрес электронной почты защищен]

Сестринский уход

Медсестринский уход за неотложной медицинской помощью предназначен специально для пациентов, которые подвергаются высокому риску возникновения опасных для жизни проблем. Пациент находится под постоянным наблюдением и ему оказывается соответствующая помощь.Врачи интенсивной терапии следят за тем, чтобы пациент получал прямое лечение, интенсивные вмешательства и терапию, а также ежедневные осмотры. Медсестринский уход за неотложной медицинской помощью предназначен для защиты и контроля качества ухода, получаемого пациентом. Медсестринский уход за неотложной медицинской помощью включает в себя под-специальности педиатрической, неонатальной и взрослой сестринской практики.

Медицина интенсивной и реанимации

Медицина интенсивной терапии и интенсивной терапии — это медицинская специальность, охватывающая лечение клинических проблем пациентов с опасными для жизни заболеваниями или травмами.Некоторые из специалистов по интенсивной терапии включают эндотрахеальную интубацию, использование механических и фармакологических методов жизнеобеспечения, усовершенствованную систему жизнеобеспечения сердца, прикроватную функцию легких, установку кардиостимуляторов и наличие инвазивного мониторинга.

Фельдшер интенсивной терапии

Парамедики интенсивной терапии — это практикующие врачи, которые оказывают медицинскую помощь, лечение и уход тяжелобольным пациентам, находящимся вне больницы. Их цель — обеспечить быструю клиническую оценку и помощь пациентам, сталкивающимся с опасными для жизни проблемами.Они быстро выносят критические клинические суждения без непосредственного надзора. Они проходят специальную подготовку для оказания наилучшей доврачебной и внутрибольничной помощи.

Высшая флора Critical Care 50 миллиардов

Это пробиотик, разработанный специально для лечения проблем с пищеварением, таких как периодические запоры, вздутие живота, газы и дискомфорт пищеварения. Эти проблемы могут быть связаны с возрастом, стрессом и неправильным питанием. Он содержит 10 полезных штаммов пробиотиков и около 50 миллиардов живых культур.Его миссия — облегчить пищеварительный дискомфорт.

Отделение реанимации легких

Отделение реанимации легких состоит из группы пульмонологов, обладающих специальными знаниями и навыками в лечении серьезных проблем с легкими и дыханием, таких как острая и хроническая легочная эмболия, рак легких, легочные сосудистые заболевания, трансплантация легких, эмфизема легких и т. Д. Специалист в области легких имеет опыт при опухолевых, воспалительных и инфекционных заболеваниях. Обычно они работают в отделениях интенсивной терапии больниц и занимаются тяжелыми заболеваниями и состояниями.

Скорая педиатрическая помощь

Специалисты детской реанимации диагностируют, лечат и стабилизируют состояние детей с опасными для жизни заболеваниями. Детское отделение интенсивной терапии включает в себя оборудование для жизнеобеспечения, кардиохирургию, лечение рака и трансплантацию органов для тяжелобольных детей со сложными медицинскими проблемами. Некоторые из медицинских проблем включают: глубокий диабетический кетоацидоз, серьезные травмы в результате несчастных случаев, тяжелую пневмонию, тяжелую астму, инфекции, аллергии.

Хирургическая реанимация

Хирургическая реанимация предназначена для ухода за пациентами с потенциально опасными для жизни хирургическими состояниями. Специалисты в области хирургической реанимации обладают передовыми знаниями и опытом, которые позволяют им оказывать необходимую помощь тяжелобольным пациентам. Хирургическая реанимация специализируется на лечении повреждений тканей в результате травм, несчастных случаев, пациентов, которые могут испытывать дисфункцию мультисистемных органов, инфекции, ожоги, сепсис, острое воспаление, операцию или ишемию.Миссия состоит в том, чтобы обеспечить и гарантировать наилучшие результаты для пациентов с использованием современных передовых практик.

Скорая ветеринарная и реанимация

Ветеринарная служба неотложной помощи и интенсивной терапии предназначена для оказания качественной помощи тяжелобольным животным, нуждающимся в интенсивном наблюдении. Ветеринарные отделения интенсивной терапии предлагают большое количество процедур, включая непрерывный инвазивный мониторинг, вентиляцию, инотропы и вазопрессоры, нутритивную поддержку через питательные трубки, жидкостную и коллоидную терапию, переливание крови и плазмы, прикроватный мониторинг газов крови, гематокрита, гемоглобина, электролитов и осмотического давления коллоидов. .

Ветеринарное отделение интенсивной терапии направлено на обеспечение условий ухода за тяжелобольными животными и наблюдения с использованием самых современных доступных ветеринарных методов лечения.

Отделение интенсивной терапии

Отделение интенсивной терапии — это специализированное отделение в больнице, где тяжелобольные пациенты получают постоянную медицинскую помощь и поддержку квалифицированных врачей. Того, кто получил серьезную травму или серьезно заболел, сначала помещают в отделение интенсивной терапии, чтобы он мог получать постоянное наблюдение, лечение, наблюдение и специализированную помощь.К тяжелым заболеваниям относятся сердечный приступ, отравление, сложные операции, преждевременные роды, инсульт и хирургические осложнения.

Отделение интенсивной терапии новорожденных

Это специализированное отделение для недоношенных или новорожденных детей с медицинскими осложнениями. ОИТН предоставляет передовые технологии и специализированную помощь неонатологам. Оборудование, используемое в отделении интенсивной терапии, включает: монитор артериального давления, респиратор-вентилятор, сердечно-легочный монитор, пупочный катетер, C-PAP (постоянное положительное давление в дыхательных путях), назальную канюлю или носовые канюли.

Медицина интенсивной терапии

Интенсивная терапия — это практика, связанная с лечением пациентов в критическом состоянии и пациентов, нуждающихся в лечении с высокой степенью зависимости. Медицинские специальности включают определенные органы или системы организма, охватывают пациентов со всем спектром медицинской и хирургической патологии. Специалисты обеспечивают все аспекты ухода за тяжелобольными пациентами хирургического, медицинского и травматологического профиля. Предоставляется расширенная поддержка органов во время критических заболеваний, спасающая жизнь помощь, которая лежит в основе всех других отделений больницы и взаимодействует с ними.

Детская интенсивная терапия

Педиатрическое отделение интенсивной терапии (PICU) обеспечивает передовую помощь тяжелобольным или травмированным младенцам и детям с тщательным постоянным наблюдением, приемом лекарств и лечением. Он оснащен передовыми технологиями для достижения наилучших результатов, обеспечивая быстрое выздоровление, улучшая выживаемость, облегчая боль и сводя к минимуму страдания. Некоторые из состояний, которые вызывают тяжелое заболевание у детей: проблемы с дыханием или легкими, травмы, эпилепсия и другие состояния нервной системы, генетические и хромосомные состояния, иммунная система и ревматические состояния, инфекции, такие как бактериальный менингит или сепсис, острые заболевания почек или печени. отказ и т. д.

Инфлавоноиды интенсивной терапии

Инфлаваноид для интенсивной терапии — это смесь аюрведических трав, таких как босвеллия, куркума, имбирь и т. Д., Используемых для облегчения острой боли. Некоторые из этих трав обладают важными свойствами, такими как антиоксидантные свойства, включая витамин С, кверцетин и биофлавоноидный комплекс. Он используется для снятия болей в суставах, воспалений суставов, а также для временного облегчения боли при артрите.

Нейроинтенсив

В отделении нейрокритической помощи врачи и медсестры оказывают помощь пациентам с опасными для жизни неврологическими и нейрохирургическими заболеваниями, такими как массивный инсульт, кровотечение в мозг (внутримозговое кровоизлияние, субарахноидальное кровоизлияние, субдуральное кровоизлияние, внутрижелудочковое кровоизлияние), травмы головного мозга, опухоли головного мозга, эпилептические состояния , нервные и мышечные заболевания, заболевания спинного мозга, травмы головного и спинного мозга или осложнения черепно-мозговой травмы.Это отделение предназначено для лечения пациентов с тяжелыми и острыми неврологическими заболеваниями.

Анестезия и интенсивная терапия

Это отделение отвечает за обеспечение анестезии при всех типах операций в операционной. Он оснащен наркозными аппаратами и системами наблюдения за тяжелобольными. Это отделение предназначено для пациентов, подвергающихся общей хирургии, нейрохирургии, сосудистой хирургии, электросудорожной терапии, отоларингологии, пластическим операциям и т. Д. Его миссия — поддерживать безопасность пациентов, облегчать боль, минимизировать дискомфорт и минимизировать психологические реакции.

Амброксол для лечения пациентов с болезнью Паркинсона с мутациями гена глюкоцереброзидазы и без них: нерандомизированное, неконтролируемое исследование | Генетика и геномика | JAMA Neurology

Вопрос Проникает ли амброксол через гематоэнцефалический барьер и каковы биохимические изменения, связанные с терапией амброксолом у пациентов с болезнью Паркинсона с мутациями гена глюкоцереброзидазы и без них?

Выводы В этом открытом клиническом исследовании 17 пациентов с болезнью Паркинсона амброксол пересек гематоэнцефалический барьер и связался с ферментом β-глюкоцереброзидазы, и он увеличил уровни белка фермента β-глюкоцереброзидазы и уровни α-синуклеина в спинномозговой жидкости у пациентов как с и без мутаций гена глюкоцереброзидазы.

Значение Терапия амброксолом имеет потенциал для изучения в качестве нейропротективного соединения для лечения пациентов с болезнью Паркинсона как с мутациями гена глюкоцереброзидазы, так и без них.

Важность Мутации гена глюкоцереброзидазы GBA1 (OMIM 606463) являются наиболее важным фактором риска болезни Паркинсона (БП). Исследования in vitro и in vivo показали, что амброксол увеличивает активность фермента β-глюкоцереброзидазы (GCase) и снижает уровни α-синуклеина.Эти наблюдения подтверждают потенциальную роль терапии амброксолом в изменении соответствующего патогенетического пути БП.

Объектив Оценить безопасность, переносимость, проникновение в спинномозговую жидкость (CSF) и целевое применение терапии амброксолом с GCase у пациентов с БП с мутациями GBA1 и без них.

Вмешательства Увеличение дозы амброксола перорально до 1,26 г в день.

Дизайн, обстановка и участники Это одноцентровое открытое неконтролируемое клиническое исследование проводилось в период с 11 января 2017 г. по 25 апреля 2018 г. в Центре экспериментальной нейробиологии Леонарда Вольфсона, специализированном центре клинических исследований, входящем в состав Института неврологии Университетского колледжа Лондона на Королевской площади в г. Лондон, Соединенное Королевство.Участники были набраны из установленных баз данных Королевской свободной лондонской больницы и Национальной больницы неврологии и нейрохирургии в Лондоне. Двадцать четыре пациента с БП средней степени тяжести были оценены на соответствие критериям отбора, и 23 пациента приняли участие в исследовании. Из них 18 пациентов завершили исследование; 1 пациент был исключен (неудавшаяся люмбальная пункция) и 4 пациента выбыли (преимущественно из-за осложнений, связанных с люмбальной пункцией). Анализ всех данных проводился с 1 ноября по 14 декабря 2018 г.

Основные результаты и меры Первичные результаты через 186 дней заключались в обнаружении амброксола в ЦСЖ и изменении активности ГКазы в ЦСЖ.

Результаты Из 18 участников (15 мужчин [83,3%]; средний возраст [SD] 60,2 [9,7] лет), завершивших исследование, 17 (8 с мутациями GBA1 и 9 без мутаций GBA1 ) были включены в первичный анализ. Между 0 и 186 днями наблюдалось повышение уровня амброксола в спинномозговой жидкости на 156 нг / мл (нижний 95% доверительный интервал, 129 нг / мл; P <0,001). Активность CSF GCase снизилась на 19% (0,059 нмоль / мл в час; 95% ДИ, –0.115 до –0,002; P = 0,04). Терапия амброксолом хорошо переносилась без серьезных побочных эффектов. Увеличение на 50 пг / мл (13%) концентрации α-синуклеина в ЦСЖ (95% ДИ, 14-87; P = 0,01) и увеличение на 88 нг / моль (35%) в CSF GCase наблюдались уровни белка (95% ДИ, 40–137; P = 0,002). Средние (SD) баллы по части 3 Объединенной шкалы оценки болезни Паркинсона Общества двигательных расстройств снизились (т.е. улучшились) на 6,8 (7,1) балла (95% ДИ, от –10,4 до –3.1; P = 0,001). Эти изменения наблюдались у пациентов с мутациями GBA1 и без них.

Выводы и значимость Результаты исследования показывают, что терапия амброксолом была безопасной и хорошо переносимой; Проникновение в спинномозговую жидкость и целевое воздействие амброксола были достигнуты, а уровни α-синуклеина в спинномозговой жидкости были увеличены. Необходимы плацебо-контролируемые клинические испытания, чтобы изучить, связана ли терапия амброксолом с изменениями естественного прогрессирования БП.

Регистрация пробной версии Идентификатор ClinicalTrials.gov: NCT02941822; Идентификатор EudraCT: 2015-002571-24

Мутации в гене глюкоцереброзидазы, GBA1 (OMIM 606463), вызывают аутосомно-рецессивное лизосомное нарушение накопления, болезнь Гоше. ¹ Эти мутации являются наиболее важным генетическим фактором риска болезни Паркинсона (БП), ² проявляя пенетрантность от 10% до 30%. ^{3 , 4} Они присутствуют у 5–15% пациентов европеоидной расы с БП, у 25% пациентов из числа евреев-ашкенази с БП и у 1% лиц без БП. ⁵

В моделях клеток и животных GBA1 сообщалось об увеличении накопления α-синуклеина и обратной связи между уровнями α-синуклеина и активностью фермента β-глюкоцереброзидазы (GCase). ^{6 -11} Хотя активность GCase снижена в мозге пациентов с БП с мутациями GBA1 и без них, она ниже у пациентов с мутациями. ¹² Снижение активности GCase в головном мозге связано с повышенным уровнем α-синуклеина. ¹³ Кроме того, активность GCase снижена в спинномозговой жидкости (CSF) пациентов с PD с мутациями GBA1 и без них по сравнению с контрольной группой. ¹⁴ Повышение активности цитозольной / лизосомальной GCase мозга может снижать уровни α-синуклеина, опосредуя нейропротекторный эффект у пациентов с БП как с мутациями GBA1 , так и без них. ^{15 -17}

Терапия амброксолом безопасно используется в качестве средства от кашля с 1970-х годов (краткое изложение характеристик продукта в eMethods 1 в Приложении 2).Его основные побочные эффекты — желудочно-кишечные расстройства и небольшой риск анафилаксии. Оценка соединения с высокой пропускной способностью показала, что амброксол вызывает pH-зависимое повышение активности GCase. ¹⁸

увеличивает активность GCase и снижает уровни α-синуклеина in vitro и in vivo. ^{6 -11} Амброксол представляет собой ингибирующий шаперон, который мобилизует изолированную мутантную GCase из эндоплазматического ретикулума путем связывания и ингибирования активного сайта фермента, вызывая конформационные изменения и облегчая транспортировку к лизосомам. ^{19 , 20} В кислой лизосоме элюируется амброксол, позволяя возобновить нормальный катализ и восстановить лизосомную функцию.

Амброксол может модулировать уровни α-синуклеина с помощью нескольких механизмов. GCase может играть прямую роль в утилизации белка α-синуклеина, ^{, 21,} , ^{, 22,} , и было показано, что амброксол усиливает экспрессию GCase посредством пути транскрипционного фактора EB и стимуляции лизосомного экзоцитоза. ^{9 , 23} В качестве альтернативы мутации GBA1 могут прерывать физиологический посттрансляционный фолдинг, предотвращая транспортировку фермента в лизосому. ^{19 , 20,24 , 25} Это прерывание, по-видимому, приводит к секвестрации в эндоплазматическом ретикулуме и ответу развернутого белка, который может вызывать агрегацию α-синуклеина. ²⁴ Имеющиеся данные также свидетельствуют о том, что амброксол корректирует посттрансляционный фолдинг, смягчая ответ развернутого белка. ¹⁹

Мы исследовали биологические изменения, связанные с терапией амброксолом у людей, и ее влияние на биохимические и клинические маркеры БП.Основными конечными точками были безопасность и переносимость терапии амброксолом, проникновение в центральную нервную систему и изменение активности ГКазы в спинномозговой жидкости между исходным уровнем и 186 днями.

Дизайн исследования и участники

Мы провели одноцентровое открытое неконтролируемое клиническое испытание пероральной терапии амброксолом (доза увеличивалась до 1.26 г в сутки [420 мг 3 раза в сутки]) пациентам с БП средней степени тяжести. Клиническое испытание проводилось в Центре экспериментальной нейробиологии Леонарда Вольфсона, специализированном центре клинических исследований при Университетском колледже Лондонского института неврологии на Квин-сквер с 11 января 2017 года по 25 апреля 2018 года. Руководящий комитет клинических испытаний осуществлял клинический надзор. Статистическая поддержка была предоставлена ​​Отделением клинических испытаний полуострова Плимутского университета в Соединенном Королевстве.Исследование было одобрено Институтом совместных исследований Университетского колледжа Лондона, Управлением по регулированию лекарственных средств и товаров медицинского назначения Великобритании и Комитетом по этике исследований Лондон-Блумсбери. Письменное информированное согласие было получено от всех участников до начала процедур, связанных с исследованием. Исследование было проведено в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации ²⁶ и Руководства по надлежащей клинической практике . ²⁷ Протокол исследования доступен в Приложении 1, а подробный обзор посещений в рамках исследования доступен в электронной таблице 1 в Приложении 2.

пациентов были набраны из установленных исследовательских баз данных Национальной больницы неврологии и нейрохирургии и Королевской свободной лондонской больницы. Подходящие участники были в возрасте от 40 до 80 лет, страдали идиопатической болезнью Паркинсона в соответствии с критериями Банка мозга Королевы Сквер, ²⁸ были признаны способными самостоятельно вводить препарат для клинических испытаний и находились на стадии 3 или менее по шкале Хоэна и Яра. который классифицирует прогрессирование симптомов БП на 5 стадий (стадия 1 указывает только на одностороннее поражение, а стадия 5 указывает на прикованность к инвалидному креслу или прикованность к постели без дополнительной помощи).Часть участников была предварительно отобрана на основании их известного статуса носителя мутации GBA1 . Ключевые критерии исключения включали использование интервенционного лекарственного средства в течение последних 30 дней или воздействие 3 или более интервенционных лекарственных средств в течение последних 12 месяцев. Все участники прошли подтверждающее секвенирование экзонов с 1 по 11 гена GBA1 . Полный список критериев исключения и включения можно найти в eMethods 2 в Приложении 2.

При оценке для включения в клиническое исследование каждый пациент прошел физикальное и неврологическое обследование, электрокардиограмму и забор крови для клинических лабораторных исследований.Женщины детородного возраста также прошли тест на беременность. После подтверждения права пациента на участие в исследовании проводились клинические визиты на исходный уровень, на 11-й, 93-й, 186-й и 279-й дни с телефонным контактом с заранее установленными интервалами (eTable 1 в Приложении 2). Помимо обычных клинических анализов крови, при каждой оценке брали образцы крови. Исследование спинномозговой жидкости проводилось на исходном уровне и через 186 дней, с третьей необязательной люмбальной пункцией (LP) через 279 дней.

186-дневный период воздействия включал 28 дней повышения дозы, каждая доза вводилась 3 раза в день следующим образом: 60 мг (дни 1-7), 120 мг (дни 8-14), 180 мг (дни 15-21). ) и 300 мг (22-28 дни).За этим периодом воздействия следовали 158 дней приема амброксола в дозе 1,26 г в день (420 мг 3 раза в день). Пациентам была назначена терапия амброксолом 2 группами: 1 на исходном уровне и 1 через 93 дня. Таблетки амброксола были подарены PRO.MED.CS Praha a. с. (Прага, Чешская Республика).

Все пациенты получали дофаминергическую терапию, и эквиваленты дозировки леводопы были включены в Таблицу 1. Пациенты посещали каждое посещение без приема лекарств, определяемого как более 8 часов (в течение ночи) после отмены леводопы или более 24 часов после отмены. леводопы для тех, кто принимает агонисты дофамина с модифицированным высвобождением.

Оценка проводилась с 8:00 до 9:00 одним экспертом (S.M.). Инструменты измерения включали (1) Объединенную шкалу оценки болезни Паркинсона (MDS-UPDRS; диапазон баллов от 0 до 272, где 0 указывает на отсутствие инвалидности, а 272 — на полную инвалидность), которая применялась в дни 0, 93, 186, и 279; (2) Монреальская когнитивная оценка (MoCA; диапазон баллов от 0 до 30, где ≥26 указывает на нормальную когнитивную функцию), которая проводилась в дни 0 и 186; (3) Шкала немоторных симптомов (NMSS; диапазон оценок от 0 до 360, где 0 указывает на отсутствие серьезности и частоты симптомов, а 360 указывает на высокую степень тяжести и частоту симптомов), которую вводили в дни 0 и 186; и (4) опросник немоторных симптомов (NMSQuest; 30 пунктов, оценивающих наличие немоторных симптомов, где 0 указывает на отсутствие симптомов, а 30 указывает на максимальное наличие симптомов), который вводили в дни 0 и 186.

Пустые блистерные упаковки амброксола были собраны на 93 и 186 днях для оценки приверженности участников к лечению. Регистрировались все нежелательные явления (НЯ), биохимические результаты (таблица 2 в Приложении 2) и измерения артериального давления, частоты сердечных сокращений и веса.

Первичные исходы, все оцененные через 186 дней, включали изменение уровней амброксола в спинномозговой жидкости и изменение активности GCase в спинномозговой жидкости. Предварительно определенные вторичные исходы, все оцененные через 186 дней, включали безопасность и переносимость амброксола в исследуемой популяции (измеряемые частотой и тяжестью НЯ и отклонениями от нормы при клинических обследованиях, анализах крови или электрокардиограмме), изменение лейкоцитов в крови. Активность GCase, изменение уровней белка GCase в CSF, уровни общего глюкозилцерамида в CSF, уровни α-синуклеина в CSF и сыворотке, а также уровни CSF и сывороточного тау-белка.Мы также записали результаты оценок MoCA, NMSS и NMSQuest, которые проводились на исходном уровне и в течение 186 дней.

Сбор образцов, анализы и статистика

Цереброспинальная жидкость была собрана до 10 часов утра у участников после того, как они голодали в течение ночи. Образцы замораживали при температуре — 80 ° C в течение 60 минут после сбора в случае CSF и в течение 90 минут после сбора в случае гранул лейкоцитов.Образцы размораживали только непосредственно перед проведением анализа. Все анализы GCase спинномозговой жидкости проводили в течение 7 и 14 дней после сбора образцов. Анализ лейкоцитов на GCase проводили между 7 и 28 днями сбора образцов.

Подробная информация о биохимических анализах представлена ​​в eMethods 3 и 4 в Приложении 2.

Статистический анализ проводился в соответствии с заранее определенным планом статистического анализа, составленным статистиками клинических испытаний (А.H.V.S. и Дж. Хоскинг). В результате непредвиденных обстоятельств статистик, указанный в исходном протоколе, не был доступен для проведения окончательного анализа. Поэтому пересмотренный план статистического анализа (eMethods 5 в Приложении 2) был подготовлен до того, как был проведен анализ данных и исследование было завершено. Все анализы данных были выполнены с использованием программного обеспечения Stata, версия 14.2 (StataCorp LLC). Распределение результатов оценивалось путем изучения нанесенных на график данных (электронные рисунки 1, 2 и 3 в Приложении 2).Для первичного анализа 95% доверительные интервалы были представлены вместе с результатами двустороннего теста t (порог значимости P <0,05) изменения активности CSF GCase. Более низкий ДИ и односторонние результаты теста t (порог значимости P <0,05), которые были представлены для изменения уровней амброксола в спинномозговой жидкости, отражали тот факт, что изменение было ниже, ограниченным 0 из-за ожидаемых концентраций 0 при исходный уровень. Для регистрации изменения концентрации амброксола должны были быть больше, чем предел обнаружения анализа, равный 0.5 нг / мл через 186 дней. Также был проведен описательный анализ, который коррелировал изменение (коэффициент Пирсона) уровней амброксола и изменение активности CSF GCase. Изменения вторичных исходов между исходным уровнем и 186 днями были представлены с 95% доверительным интервалом. Анализ всех данных проводился с 1 ноября по 14 декабря 2018 г.

В общей сложности 24 пациента с БП средней степени тяжести были оценены на соответствие критериям участия в исследовании. Из них 23 пациента принимали амброксол в исследовании модификации болезни Паркинсона.В общей сложности 18 пациентов (15 мужчин [83,3%]; средний [SD] возраст 60,2 [9,7] лет) завершили исследование. Один пациент был исключен после неудачных попыток LP, выполненных двумя опытными операторами. Двое пациентов выбыли из исследования, потому что у них возникли головные боли после ЛП и до начала лечения амброксолом. Один участник выбыл на 1 день после начала лечения, сославшись на высокое количество таблеток амброксола (21 таблетка в день), и 1 отказался через 93 дня после начала лечения, сославшись на семейную болезнь.Из 18 пациентов, завершивших исследование, 1 был исключен из анализов CSF (включая первичный анализ) из-за контаминации эритроцитами более 500 клеток на см ³ в исходном образце CSF (блок-схема набора участников и удержание на рисунке 1).

Участники с мутациями GBA1 имели следующие варианты (звездочка указывает на фенотип, который, как известно, вызывает тяжелую болезнь Гоше): p.E326K дикого типа (3 пациента), p.N370S дикого типа (1 пациент), p.R463C * дикого типа (2 пациента), p.T369M / p.W393X * (1 пациент) и RecNcil (p.L444P, p.A456P и p.V460V) * wild тип (1 пациент).

Семь участников (3 с мутациями GBA1, [ GBA1 ⁺ ] и 4 без мутаций [ GBA1 ^— ]) прошли третью LP через 279 дней. Эти 7 участников включали пациента, который был исключен из анализов из-за зараженной крови исходной пробы спинномозговой жидкости.В результате 18 участников (8 GBA1 ⁺ и 10 GBA1 ^— ) были включены в анализ крови и клинические анализы через 186 и 279 дней. Семнадцать участников (8 GBA1 ⁺ и 9 GBA1 ^— ) были включены в анализ CSF через 186 дней, а 6 участников (3 GBA1 ⁺ и 3 GBA1 ^— ) были включены в анализ ЦСЖ через 279 дней.

Основываясь на количестве собранных пустых блистерных упаковок амброксола, мы оценили среднее (SD) соблюдение режима лечения в 89% (13%).Исходные уровни амброксола в крови и спинномозговой жидкости подтвердили, что ни один из участников не принимал препарат до даты начала лечения.

В таблице 2 представлена ​​сводка результатов для участников, завершивших исследование. Результаты для подгрупп GBA1 ⁺ и GBA1 ^— доступны в таблицах 3 и 4 в Приложении 2.

Первичные и вторичные результаты

Амброксол не обнаруживался в сыворотке крови и спинномозговой жидкости на исходном уровне.На 186 день уровень амброксола в спинномозговой жидкости составил 156 нг / мл (нижний предел достоверности 95%, 129 нг / мл; односторонний парный тест t , P <0,001). Через 186 дней средний уровень амброксола в спинномозговой жидкости составил 11% (6%) от среднего уровня в крови. Как и ожидалось в наших предварительных исследованиях CSF, которые показали ингибирование GCase в CSF, а не усиление в тканях, средняя (SE) активность CSF GCase снизилась на 0,059 (0,026) нмоль / мл в час (95% ДИ, от -0,115 до -0,002 ; Двусторонний парный t тест, P =.04; Рисунок 2A), что на 19% ниже средней базовой активности GCase.

Препарат переносился хорошо, о серьезных НЯ не сообщалось. Всего произошло 176 НЯ, из которых 121 были сочтены неродственными, 32 — маловероятными, 15 — возможно связанными, 5 — вероятно связанными и 3 — определенно связанными с лечением. НЯ, которые, вероятно, были связаны с интервенционным лекарственным средством, были тошнота (1 пациент), рвота (2 пациента), ощущение жжения после проглатывания интервенционного лекарственного средства (1 пациент) и жидкий стул (1 пациент).Определенно связанными НЯ были кислотный рефлюкс (1 пациент), тошнота (1 пациент) и временное состояние кожи на груди, спине и руках (1 пациент). Полный список НЯ доступен в электронной таблице 5, а список зарегистрированных НЯ доступен в электронной таблице 6 в Приложении 2. Средняя (СО) потеря веса 1,3 (2,5) кг наблюдалась между исходным уровнем и 186 днями (95% ДИ, –2,59 до 0,01). Отклонений от протокола не было.

Между исходным уровнем и 186 днями среднее (SE) увеличение на 50 (17) пг / мл (13%) общей концентрации α-синуклеина в спинномозговой жидкости (95% ДИ, 14-87; P =.01; Фигура 2B) и 88 (22) пмоль / л (35%) в CSF GCase уровни белка (95% ДИ, 40-137; P = 0,002; Рисунок 2C). Величина эффекта не указывала на значительное изменение тау-белка в спинномозговой жидкости (среднее [SE] изменение, 5 [8] пг / мл; 95% ДИ, от –7 до 17; P = 0,36) или уровней глюкозилцерамида (среднее [SE] изменение, 14 [9] пмоль / л; 95% ДИ, от –6 до 35; P = 0,16). Корреляция между концентрацией амброксола и изменением активности GCase в спинномозговой жидкости не была значимой (коэффициент Пирсона, r = –0.161; P = 0,52). Анализ CSF 6 участников, у которых CSF был собран на исходном уровне, через 186 дней и 279 дней, представлен в электронной таблице 4 в Приложении 2.

Между исходным уровнем и 186 днями средняя (SE) активность лейкоцитов крови увеличилась на 1,0 (1,4) нмоль / мг / ч (95% ДИ, от –2,0 до 4,0; P = 0,48) (Таблица 2 и Рисунок 2D) . Был отмечен широкий разброс в зарегистрированном изменении концентрации α-синуклеина в сыворотке (среднее изменение [SE], 2602 [3649] пг / мл; 95% ДИ, от –4689 до 9893; P =.46), хотя среднее (SE) снижение уровней тау-белка в сыворотке наблюдалось на 0,20 (0,08) пг / мл (95% ДИ, от –0,37 до -0,05; P = 0,01).

Между исходным уровнем и 186 днями средний (SD) общий балл MDS-UPDRS снизился (т.е. улучшился) на 8,7 (11,8) пункта (95% ДИ, от –15,3 до –2,2; P = 0,01) со средним значением (SD) отскок на 7,2 (9,8) пункта между 186 и 279 днями. Это изменение, по-видимому, связано в первую очередь с моторным баллом MDS-UPDRS, часть 3 (диапазон баллов от 0 до 56, где 0 указывает на отсутствие двигательных нарушений, а 56 указывает на тяжелые двигательные нарушения), средний балл (SD) снизился на 6.8 (7,1) баллов между исходным уровнем и 186 днями (95% ДИ, от –10,4 до –3,1; P = 0,001) и среднее (SD) увеличение на 7,6 (7,0) баллов между 186 и 279 днями. Семь из 18 пациентов увеличили свою дофаминергическую терапию в ходе исследования, и такое же отклонение изменений MDS-UPDRS наблюдалось у тех, кто получал стабильную терапию, и у тех, кто увеличивал свою медикаментозную терапию (электронные рисунки 4 и 5 в Приложении 2).

Как и ожидалось, изменение оценок MoCA было искажено и ограничено 0 из-за преобладания участников, которые сохранили свои оценки по сравнению с исходным уровнем.Увеличение (т.е. улучшение) среднего (SD) балла MoCA на 1,7 (1,3) балла было зарегистрировано между исходным уровнем и 186 днями. Кроме того, средний балл (SD) NMSS увеличился (т.е. ухудшился) на 11,5 (18,5) баллов (95% ДИ, 2,4-20,8; P = 0,02), но среднее (SD) изменение балла NMSQuest составляла всего 0,2 (2,6) балла (95% ДИ, –1,5–1,0; P = 0,72) между исходным уровнем и 186 днями.

Перед клиническим испытанием мы провели тесты in vitro, чтобы оценить связь амброксола, ингибирующего шаперона, с изменениями активности GCase в бесклеточной спинномозговой жидкости.Мы добавили 500 нМ (189 нг / мл, выбранных на основе уровней амброксола в спинномозговой жидкости, сообщенных в предыдущем клиническом испытании) ¹⁷ амброксола к человеческому спинномозговой жидкости, взятой у здоровых участников (через диагностические LP для подозрения на идиопатическую внутричерепную гипертензию).

Кроме того, мы выполнили положительный контроль путем термодинамической денатурации и химического ингибирования GCase эпоксидом кондуритола B. ²⁹ Эксперимент состоял из 5 технических повторов CSF, полученных от 5 участников для каждого состояния.По сравнению с контрольными образцами, среднее (SD) снижение активности CSF GCase на 42% (12%) (среднее [SD] изменение активности, –0,093 [0,026]; 95% ДИ, 0,046-0,140 нмоль / мл в час ; P = 0,01) наблюдали после добавления амброксола. Денатурированные образцы и образцы, ингибированные эпоксидом кондуритола В, не зарегистрировали остаточной активности.

Насколько нам известно, это исследование представляет собой первое клиническое испытание персонализированной терапии стратифицированного (генетически определенного) подтипа БП и первое применение терапии амброксолом у пациентов с БП.Исследование достигло своих основных результатов, которые должны были подтвердить, что амброксол способен проникать в CSF и что он оказывает модулирующее действие на CSF GCase. Открытие того, что амброксол проникает в спинномозговую жидкость, согласуется с недавним клиническим испытанием амброксола (в эквивалентной дозе) у 5 пациентов со средним возрастом 18 лет, страдающих нейронопатической болезнью Гоше. ¹⁷ Наше исследование показывает, что терапия амброксолом хорошо переносится пациентами с БП. Этот результат важен, так как введенная доза была примерно в 10 раз выше и вводилась в течение более длительного времени, чем указано в лицензии.

Амброксол оказывает ингибирующее действие на активность GCase в бесклеточном СМЖ человека, что согласуется с его известной активностью как ингибиторный шаперон с нейтральным pH. В основном в бесклеточном СМЖ белок GCase является свободным, что контрастирует с его нормальным внутриклеточным лизосомным расположением. Амброксол представляет собой pH-зависимый ингибирующий мелкомолекулярный шаперон, который связывается с активным центром белка GCase и снижает активность. Связывание обеспечивает транспортировку к лизосомам и элюирование свободных активных ферментов в кислых условиях.Следовательно, в бесклеточной CSF амброксол будет связываться со свободной GCase и ингибировать ее. Однако в тканях, в том числе в головном мозге, амброксол будет увеличивать внутриклеточную активность GCase, как сообщалось в исследованиях на моделях грызунов и приматов ^{7 , 8}

Устойчивая повышающая регуляция экспрессии уровней белка GCase в CSF указывает на целевое участие амброксола в пути GCase. Увеличение общей концентрации α-синуклеина в ЦСЖ предполагает, на основании предыдущих данных in vitro и in vivo, ^{6 -9,11 , 15} , что амброксол также имел связь с метаболизмом α-синуклеина.Эти результаты предполагают увеличение активности GCase в самом мозгу, хотя эту активность, конечно, нельзя измерить in vivo. Нет четкого консенсуса относительно ассоциации БП с изменениями общего α-синуклеина в ЦСЖ, но были описаны пониженные уровни общего α-синуклеина в ЦСЖ, в то время как олигомерный и фосфорилированный α-синуклеин увеличился. ³⁰ Амброксол усиливает экспрессию GCase, вероятно, через путь транскрипционного фактора EB, и увеличивает везикулярный экспорт. ^{9 , 23} Увеличение α-синуклеина в спинномозговой жидкости можно интерпретировать как увеличение внеклеточного экспорта белка из паренхимы головного мозга.

Интерпретация изменений в результатах MDS-UPDRS и MoCA затруднена в контексте исследования, не контролируемого плацебо. Однако изменения подтверждают клиническое впечатление о том, что у участников, принимавших амброксол, не наблюдалось значительного вредного воздействия амброксола, включая какое-либо неблагоприятное влияние на двигательные особенности их БП.

У нашего исследования есть несколько ограничений. Выборка была относительно небольшой, хотя сложность исследования и его характер как клинического испытания, подтверждающего концепцию, были факторами в его дизайне. Группа плацебо не использовалась, поэтому клинические результаты следует интерпретировать с осторожностью. Мы могли бы выбрать более генетически однородную исследовательскую группу GBA1 , но эта однородность могла ограничить интерпретацию данных. Средний возраст наших участников составлял 60 лет.2 года, что относительно мало для пациентов с БП. Однако этот средний возраст соответствовал нашим критериям включения стадии Хоэна и Яра 3 или меньше и был сопоставим со многими исследованиями лекарственного вмешательства у пациентов с БП. Участники были набраны из баз данных пациентов с БП с мутациями GBA1 и без них, но мы не считаем, что этот метод набора привел к систематической ошибке, связанной с биохимическими биомаркерами, используемыми в качестве конечных точек в этом исследовании.

В заключение мы подтверждаем, что амброксол имеет потенциал в качестве лекарственного средства для воздействия на путь глюкоцереброзидазы при БП и повышения активности ГКазы в головном мозге.Эти результаты согласуются с моделями клеток и животных, которые показывают, что амброксол модулирует уровни α-синуклеина. Мы считаем, что терапия амброксолом перспективна для дальнейших исследований в качестве лекарственного средства для улучшения результатов, особенно у пациентов с БП с мутацией GBA1 и, возможно, без мутации GBA1 . Необходимы более масштабные плацебо-контролируемые исследования.

Принята к публикации: 8 ноября 2019 г.

Опубликовано в Интернете: 13 января 2020 г. doi: 10.1001 / jamaneurol.2019.4611

Открытый доступ: Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии CC-BY. © 2020 Mullin S et al. JAMA Neurology .

Автор, ответственный за переписку: Энтони Х. В. Шапира, доктор медицинских наук, FRCP, FMedSci, Институт неврологии Калифорнийского университета в Квин-сквер, Роуленд-Хилл-стрит, Королевский свободный кампус, Хэмпстед, Лондон, NW3 2PF, Соединенное Королевство ([email protected]).

Вклад авторов: Доктора Муллин и Шапира имели полный доступ ко всем данным в исследовании и несли ответственность за целостность данных и точность анализа данных.

Концепция и дизайн: Mullin, D’Souza, Woodgate, Elflein, Limousin, Libri, Schapira.

Сбор, анализ или интерпретация данных: Mullin, Smith, Lee, Woodgate, Elflein, Hällqvist, Toffoli, Streeter, Hosking, Heywood, Khengar, Campbell, Hehir, Cable, Mills, Zetterberg, Libri, Foltynie, Schapira .

Составление рукописи: Маллин, Смит, Д’Суза, Хеллквист, Стритер, Кенгар, Кэмпбелл, Миллс, Либри, Шапира.

Критический пересмотр рукописи для важного интеллектуального содержания: Маллин, Смит, Ли, Вудгейт, Эльфлейн, Тоффоли, Стритер, Хоскинг, Хейвуд, Кэмпбелл, Хехир, Кейбл, Зеттерберг, Лимузен, Либри, Фолтини.

Статистический анализ: Маллин, Стритер, Хоскинг.

Получено финансирование: Муллин, Либри, Шапира.

Административная, техническая или материальная поддержка: Mullin, Lee, D’Souza, Woodgate, Elflein, Hällqvist, Toffoli, Heywood, Khengar, Hehir, Cable, Mills, Zetterberg.

Надзор: Эльфляйн, Лимузен, Шапира.

Раскрытие информации о конфликте интересов: Д-р Foltynie сообщил, что получил гонорары за выступления на собраниях, проводимых при поддержке Profile Pharma, BIAL, AbbVie; работал в консультативных советах BIAL, Oxford Biomedica, Living Cell Technologies и Peptron.Д-р Зеттерберг сообщил, что работал в научных консультативных советах компаний Roche Diagnostics, Wave, Samumed и CogRx; прочитал лекции на симпозиумах, спонсируемых Alzecure и Biogen; и сообщил, что является соучредителем Brain Biomarker Solutions в Гетеборге, AB, компании-разработчика платформы GU Ventures при Гетеборгском университете. Д-р Лимузен сообщил, что получил поддержку в командировке и гонорары от Boston Scientific и Medtronic. Д-р Хейвуд сообщил, что получил финансирование и поддержку командировок от Shire Pharmaceuticals; и сообщили, что получали гонорары от Freeline Therapeutics.Доктор Миллс сообщил, что получил гонорары от Freeline Therapeutics; и получив поддержку в командировке от Actelion и Genzyme Sanofi. Д-р Либри сообщил, что работал в консультативных советах Biogen и Nova Laboratories Ltd. Д-р Стритер сообщил, что был консультантом в Sanofi, Prevail, Inflazome и Kyowa. О других раскрытиях информации не сообщалось.

Финансирование / поддержка: Это исследование финансировалось за счет гранта 555854 от Cure Parkinson’s Disease Trust, грантов MR / L50 / 499/1 и MR / M006646 / 1 от Совета медицинских исследований, гранта 2018-02532 от Swedish Research Совет (д-р Зеттерберг), грант 681712 от Европейского исследовательского совета (д-р Зеттерберг) и грант ALFGBG-720931 от Шведской государственной поддержки клинических исследований (д-р Зеттерберг).Это исследование также было поддержано Центром биомедицинских исследований больниц Лондонского национального института исследований в области здравоохранения, Центром экспериментальной неврологии Леонарда Вольфсона, Центром биомедицинских исследований больницы Грейт-Ормонд-стрит (доктор Миллс) и Британским научно-исследовательским институтом деменции (доктор Зеттерберг) ,

Роль спонсора / спонсора: Спонсоры не играли никакой роли в разработке и проведении исследования; сбор, управление, анализ и интерпретация данных; подготовка, рецензирование или утверждение рукописи; и решение представить рукопись для публикации.

Влияние амброксола на путь аутофагии-лизосомы и митохондрии в первичных кортикальных нейронах

Амброксол изменяет содержание и функцию лизосом

Оптимальная концентрация амброксола для лечения нейронов была установлена ​​путем обработки первичных корковых нейронов мышей дикого типа тремя различными дозы амброксола: 10, 30 и 60 мкМ в течение 5 дней.Жизнеспособность клеток измеряли с помощью анализа «живые / мертвые». Доза 60 мкМ вызвала гибель клеток (уменьшение количества живых клеток на 63%, p = 0,003, рис. SI 1A), в то время как 10 или 30 мкМ не оказали значительного влияния на гибель клеток. Следовательно, мы исключили самую высокую дозу из дальнейших исследований. Морфологию нейронов дополнительно анализировали путем измерения длины нейритов после обработки амброксолом в дозах 10 и 30 мкМ. Не было доказательств значительных изменений длины нейритов при этих двух дозировках (рис. SI 1B), поэтому мы продолжили наше исследование, обрабатывая нейроны 10 и 30 мкМ амброксола в течение 5 дней.

Во-первых, мы изучили влияние амброксола на содержание и функцию лизосом. Поскольку амброксол является шапероном GCase ¹⁶ , мы начали с анализа активности эндогенной GCase дикого типа после обработки амброксолом. Мы обнаружили аналогичное увеличение активности GCase как в дозах 10 мкМ (39%, p = 0,05), так и в дозах 30 мкМ (47%, p = 0,05) (рис. 1A). Чтобы оценить, можно ли использовать более низкую дозировку, активность GCase измеряли после обработки 5 мкМ амброксола, однако при этой дозировке не наблюдалось значительного увеличения активности GCase, поэтому мы продолжили наши исследования с использованием дозировок 10 мкМ и 30 мкМ.

Изменения содержания лизосом, вызванные амброксолом. ( A) Активность GCase (n = 4) и ( B ). Уровень мРНК Gba1 (n = 3) увеличивался в нейронах, обработанных 10 мкМ и 30 мкМ. ( C ) Уровни активности Hex A не изменились при обработке 10 мкМ и 30 мкМ амброксола (n = 4). ( D ) Катепсин D и ( E) . Уровни белка Lamp1 увеличивались после обработки 30 мкМ амброксола по сравнению с контролем (n = 5 и n = 6 соответственно).( F) Окрашивание Lyso ID показывает увеличение кислых везикул после обработки 10 мкМ и 30 мкМ амброксола (n = 4). ( G) Уровни белка LIMP2 повышались при обработке 30 мкМ амброксола, но не 10 мкМ (n = 4). Кляксы обрезаны. Данные представлены в% от CTR. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Уровни экспрессии мРНК Gba1 также были значительно увеличены как при 10 мкМ (42%, p = 0,02), так и 30 мкМ (46%, p = 0.0007) (рис. 1B), что может объяснить увеличение активности GCase. Затем мы проанализировали активность другого лизосомального фермента, β-гексозаминидазы A (HEX A). Никаких различий между контрольными клетками и клетками, обработанными амброксолом, не наблюдалось (фиг. 1С). Было обнаружено, что уровни зрелого катепсина D (CatD; полоса 28 кДа) увеличиваются при более высокой концентрации амброксола (10 мкМ: нет различий; 30 мкМ: увеличение 82%, p = 0,003) (фиг. 1D). Уровни белка LAMP1 также увеличивались при обеих дозах, однако значительно увеличивались только при 30 мкМ (10 мкМ: увеличение на 14%, несущественно; 30 мкМ: увеличение на 62%, p = 0.0006, рис. 1E). Используя зонд Lyso-ID, мы измерили количество кислых везикул, таких как поздние эндосомы и лизосомы в нейронах. После обработки 10 мкМ амброксола количество кислых везикул увеличилось на 20% (p = 0,05), тогда как доза 30 мкМ увеличила количество на 102% (p = 0,007) по сравнению с контролем (рис. 1F). Поскольку LIMP2 отвечает за транспорт GCase в лизосому, мы проанализировали его уровни при лечении амброксолом. Не было изменений при 10 мкМ по сравнению с контролем, однако при 30 мкМ амброксола уровни LIMP2 были значительно выше (10 мкМ: нет разницы; 30 мкМ: увеличение на 56%, p = 0.04, рис. 1Г). В целом данные свидетельствуют о том, что амброксол увеличивает активность GCase и содержание лизосом в корковых нейронах мышей.

Амброксол влияет на путь аутофагии

Для анализа потока аутофагии мы обнаружили уровни белка LC3B-II в нейронах после лечения амброксолом. Мы обнаружили, что амброксол значительно увеличивал LC3B-II до аналогичных уровней в обеих дозах (при 10 мкМ: 199%, p = 0,02; при 30 мкМ: 203%, p = 0,003, рис. 2A). После обработки 100 нМ бафиломицина A1 (BAF) в течение 6 часов, который увеличивает лизосомный pH и ухудшает поток аутофагии за счет ингибирования слияния лизосом и аутофагосом, уровни LC3B-II в контрольных клетках, как и ожидалось, были увеличены и были аналогичны уровням. в клетках, обработанных одним амброксолом.Однако в клетках, обработанных амброксолом, уровни LC3B-II не были значительно увеличены после лечения BAF по сравнению с обработкой только амброксолом (рис. 2A, верхняя панель). Это также было замечено, когда данные LC3B-II были выражены как отношение + BAF / -BAF (рис. 2A, средняя панель). Это говорит о том, что поток аутофагии блокируется амброксолом. Для дальнейшего исследования мы измерили уровни P62 / SQSTM1. P62 связывает белки, идентифицированные для деградации макроаутофагией, и помогает рекрутировать их на фагофор, который затем изолируется внутри аутофагосомы с грузом и в конечном итоге разрушается после слияния с лизосомой.Мы обнаружили, что уровни белка P62 имели тенденцию к увеличению после лечения амброксолом, хотя это не было значительным (рис. 2B). Мы также оценили уровни белков двух ключевых медиаторов аутофагии, опосредованной шапероном, hsc70 и Lamp2a. Lamp2a не изменилась после обработки амброксолом (данные не показаны), тогда как hsc70 увеличивалось, когда нейроны обрабатывали 30 мкМ амброксола (10 мкМ: без различий, 30 мкМ: 195%, p = 0,008; фиг. 2C).

Изменение аутофагии из-за лечения амброксолом.( A) Базальные уровни LC3B-II увеличились в нейронах, обработанных амброксолом (10 мкМ и 30 мкМ), по сравнению с контролем (n = 3). После обработки BAF контрольные нейроны (без амброксола) показали ожидаемое повышение уровней LC3B-II, тогда как в нейронах, обработанных амброксолом, которые представили и увеличили уровень LC3B-II, BAF не вызывал изменения уровней LC3B-II (n = 3 ). Графики представляют общие уровни LC3B-II (верхняя панель) и соотношение LC3B-II между образцами BAF + / BAF- (средняя панель) в каждом состоянии. ( B ) Уровни P62 демонстрируют тенденцию к увеличению при обработке 10 и 30 мкМ амброксола, обработка BAF вызывает повышение во всех состояниях (WT, 10 мкМ и 30 мкМ) (n = 3).( C) Уровни Hsc70 увеличивались только с 30 мкМ амброксола, поскольку 10 мкМ не вызывали изменений по сравнению с контрольными нейронами (n = 4). Кляксы обрезаны. Данные представлены в% от CTR. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Амброксол активирует фактор транскрипции EB (TFEB)

Поскольку мы обнаружили изменения в лизосомном составе и путях аутофагии в нейронах, обработанных амброксолом, и хорошо описано, что TFEB является главным регулятором лизосомального пути и пути аутофагии ^21,28 мы оценили активацию TFEB при лечении амброксолом.Активация TFEB измеряется по его перемещению в ядро. Мы проанализировали уровни TFEB в цитозольных лизатах Triton X-100 нейронов, обработанных амброксолом, и обнаружили снижение уровней TFEB после обработки (10 мкМ: 10%, NS; 30 мкМ: 38%, p <0,05, рис. 3A). Это может указывать на транслокацию TFEB в ядро. Затем мы разделили цитозольную и ядерную фракции субклеточным фракционированием и количественно оценили количество TFEB в ядрах нейронов, обработанных амброксолом, и обнаружили умеренное увеличение ядерного TFEB как при дозах 10, так и 30 мкМ (10 мкМ: 181%, p = 0. .006; 30 мкМ: 137%, p = 0,01, фиг. 3B). К сожалению, нам не удалось достоверно обнаружить эндогенный TFEB мыши, перемещающийся в ядро ​​нейронов с помощью иммунофлуоресценции.

Активация TFEB амброксолом. ( A ) Уровни TFEB в цитозольных лизатах Triton X-100 показывают значительное снижение уровней TFEB при обработке 30 мкМ амброксола и тенденцию к снижению при дозе 10 мкМ (n = 4). ( B) Транслокация TFEB в ядро ​​увеличивалась после обработки обеими дозами амброксола (10 мкМ и 30 мкМ) (n = 3).Кляксы обрезаны. (C ) мРНК катепсина D также увеличивалась после обработки 10 мкМ и 30 мкМ амброксола (n = 4). Данные представлены в% от CTR. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Мы также измерили уровни мРНК катепсина D, который является одним из лизосомных генов, регулируемых TFEB, и обнаружили, что он значительно увеличился при обеих дозах (10 мкМ: 114%, p = 0,01; 30 мкМ: 138%, р = 0,01, рис. 3В). Это открытие в сочетании с повышенными уровнями мРНК Gba1 и экспрессией лизосомального белка (рис.1) предполагают, что амброксол активирует TFEB.

Влияние амброксола на содержание митохондрий

Поскольку было показано, что TFEB находится выше PGC-1α ^26,27 , который, помимо прочего, участвует в биогенезе митохондрий ²⁹ , и поскольку дисфункция митохондрий является признаком БП, мы проанализировали уровни мРНК PGC-1α. Мы обнаружили, что уровни мРНК PGC-1α увеличивались после обработки нейронов 10 мкМ (183%, p = 0,03) и 30 мкМ амброксолом (195%, p = 0,05) (рис. 4A). Анализ уровней мРНК COX3 и ND6, кодируемой митохондриальной ДНК, показал повышение уровней после обработки 30 мкМ амброксола.Никаких изменений не наблюдалось при лечении низкой дозой 10 мкМ по сравнению с контролем (СОХ3: 10 мкМ: нет разницы, 30 мкМ: 207%, p = 0,04; ND6: 10 мкМ: нет разницы, 30 мкМ: 180%, p = 0,02; рис. 4Б, В). Точно так же уровни белка COXIV (кодируемого ядром) повышались при обработке 30 мкМ, но не наблюдали различий при дозе 10 мкМ (10 мкМ: нет разницы; 30 мкМ: 200%, p = 0,03; фиг. 4D). Доза 10 мкМ вызвала увеличение на 60% (p = 0,02), тогда как доза 30 мкМ вызвала увеличение на 147% (p = 0,001) уровней митохондриального белка Prohibitin I по сравнению с контрольными нейронами (рис.4E). Вместе эти результаты предполагают, что содержание митохондрий и белков, кодируемых как митохондриями, так и ядром, увеличивается под действием амброксола.

Изменение содержания митохондрий под действием амброксола ( A ). Pcg1α мРНК увеличивается в нейронах, обработанных как 10 мкМ, так и 30 мкМ амброксола (n = 3). Оба ( B) . Cox3 (n = 3) и ( C) . mt-Nd6 (n = 4) мРНК были увеличены с 30 мкМ амброксола, но не с 10 мкМ, по сравнению с контролем.( D ) Уровни белка COX IV увеличивались с 30 мкМ амброксола по сравнению с контролем, но не с 10 мкМ амброксола (n = 5). ( E) Prohibitin 1 (PHB1) увеличивался при обеих обработках амброксолом, 10 и 30 мкМ (n = 4). Кляксы обрезаны. Данные представлены в% от CTR. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Влияние амброксола на метаболизм α-синуклеина

В качестве потенциального терапевтического препарата для повышения уровня белка GCase при БП важно понимать влияние амброксола на метаболизм α-синуклеина.Мы оценили уровни общего мономерного α-синуклеина в нейронах после лечения амброксолом. И 10 мкМ, и 30 мкМ амброксол приводят к значительному увеличению внутриклеточных уровней общего α-синуклеина (10 мкМ: 183%, p = 0,02; 30 мкМ: 132%, p = 0,02, фиг. 5A). Частично это можно объяснить увеличением уровней мРНК α-синуклеина (10 мкМ: 195%, p = 0,004; 30 мкМ: 193%, p = 0,001, фиг. 5B). Никаких заметных различий в мономерном α-синуклеине во фракциях мочевина-SDS после обработки амброксолом не наблюдалось (рис. SI 2).

Амброксол вызывает изменения в метаболизме α-синуклеина (A) . Общий α-синуклеин увеличивался, когда нейроны обрабатывали амброксолом 10 мкМ и 30 мкМ (n = 4). Кляксы обрезаны. ( B ) Уровни мРНК α-синуклеина также увеличиваются в нейронах после обработки 10 и 30 мкМ амброксола (n = 5). ( C) Внеклеточные уровни α-синуклеина измеряли с помощью ELISA, увеличение высвобождения наблюдали как для 10, так и для 30 мкМ амброксола (n = 5).( D ) Уровень фосфорилированного (S129) α-синуклеина снижался в нейронах как при 10, так и при 30 мкМ амброксола (n = 3). Блот был вырезан из разных частей одного и того же блота, полноразмерный блот показан на рис. SI 3. Данные представлены в% от CTR. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Однако мы обнаружили, что уровни альфа-синуклеина, высвобождаемого в среду для культивирования клеток, были значительно увеличены (10 мкМ: 440%, p = 0,04; 30 мкМ: 703%, p = 0,03, рис.5С). Хотя внутриклеточный α-синуклеин был повышен, внутриклеточные уровни фосфорилированного α-синуклеина (Ser129; вовлечены в патогенез БП) были снижены после лечения амброксолом (нормализовано для общего α-синуклеина: 10 мкМ: 50%, p = 0,0005; 30 мкМ: 45%, p = 0,002; нормализовано для β-актина: 10 мкМ: 84%, p = 0,03; 30 мкМ: 61%, p = 0,05 (рис. 5D) по сравнению с контролем.

Влияние амброксола на экзоцитоз

Поскольку мы обнаружили увеличение внеклеточных уровней α-синуклеина при лечении амброксолом, а α-синуклеин, как известно, секретируется через экзосомы, мы изучили возможность того, что амброксол может вызывать экзоцитоз.Обработку BAF использовали в качестве положительного контроля для высвобождения экзосом ³⁰ . CD63 и флотилин, два белка, присутствующие в экзосомах, были количественно определены во внеклеточной среде нейронов. И 10, и 30 мкМ амброксола увеличивали уровни этих маркеров экзосом. Более низкая доза амброксола 10 мкМ привела к увеличению CD63 на 44% (p = 0,04) и на 24% к увеличению Flotilin1 (p = 0,03), тогда как 30 мкM амброксола увеличили CD63 на 62% (p = 0,008), а Flotillin1 на 53% (p = 0,04) по сравнению с контролем (рис.6A, B) Мы также проанализировали уровни LAMP1, который обнаружен в экзосомах. Мы снова обнаружили, что обе дозы амброксола увеличивают внеклеточное присутствие LAMP1 во внеклеточной нейрональной среде. Более низкая доза амброксола (10 мкМ) увеличивала уровни LAMP1 на 38% (p = 0,02), тогда как 30 мкМ амброксола увеличивали высвобождение LAMP1 на 172% (p = 0,03) (рис. 6C). Мы также оценили внутриклеточные уровни Rab11, поскольку это белок, необходимый для экзоцитоза и рециклинга эндосом. Мы обнаружили, что уровни Rab11 были увеличены с обеими дозами по сравнению с контролем (10 мкМ: 163%, p = 0.02; 30 мкМ: 178%, p = 0,02, фиг. 6D), что подтверждает гипотезу о том, что амброксол вызывает экзоцитоз.

Повышенный экзоцитоз после лечения амброксолом. ( A) CD63 (n = 5), ( B) Flotillin 1 (n = 3) и ( C) высвобождение Lamp1 (n = 3) увеличивалось при обработке нейронов 10 или 30 мкМ амброксола. Бафиломицин А1 использовали в качестве положительного контроля экзоцитоза. ( D) Внутриклеточные уровни Rab 11 также были увеличены в нейронах, обработанных 10 или 30 мкМ амброксола (n = 4).Данные представлены в% от CTR. Кляксы обрезаны. Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Влияние амброксола на нейроны с дефицитом Gba1

Чтобы понять, зависят ли некоторые эффекты амброксола от экспрессии и активности GCase, мы оценили эффект на Gba1 ^{— / —} (GBA KO) и Gba1 ^{— / +} (GBA HET) первичные культуры. Нейроны GBA HET показали значительное снижение активности GCase (снижение на 58%, p = 0.003), тогда как нейроны GBA KO имели незначительную активность GCase (KO: 1,19 нмоль / ч / мг по сравнению с WT: 159 нмоль / ч / мг). Обработка 30 мкМ амброксола увеличивала активность GCase нейронов дикого типа на 37% (p = 0,004) и нейронов GBA HET на 50% (p = 0,001), тогда как в GBA KO изменений не наблюдалось (фиг. 7A). Никаких различий в активности Hex A в нейронах WT, HET или KO GBA не наблюдалось (фиг. 7B). Внеклеточное высвобождение α-синуклеина также увеличивалось в GBA HET и GBA KO после обработки 30 мкМ амброксола (фиг. 7D). Вместе наши данные показывают, что некоторые эффекты амброксола на нейроны происходят независимо от активности GCase.

Обработка амброксолом нейронов с дефицитом Gba1. ( A) GCase-активность нейронов WT и GBA HET увеличивалась при обработке амброксолом, тогда как GCase-активность не изменялась при GBA KO, обработанном амброксолом (n = 5). ( B) Активность Hex A не изменяется амброксолом ни у одного из генотипов (WT, GBA HET или KO) (n = 4). (C) Высвобождение α-синуклеина также увеличивалось после обработки амброксолом в нейронах WT, GBA HET и GBA KO (n = 3). Данные представлены в% от CTR.Все данные представляют собой среднее значение ± S.E.M. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001.

Амброксол | Побочные эффекты | Дозировка | Меры предосторожности | Предупреждения

Что такое амброксол?

Амброксол — это клинически подтвержденный муколитический агент, обладающий системной активностью.Начало действия происходит примерно через 30 минут при пероральном приеме. Разложение волокон кислого мукополисахарида делает мокроту более жидкой и менее вязкой, и поэтому ее легче извлекать при кашле. Хотя объем мокроты постепенно уменьшается, до тех пор, пока продолжается лечение, ее вязкость остается низкой.

Сироп применяется при острых и хронических респираторных заболеваниях.

Амброксола гидрохлорид

Лекарственная форма: таблетки, чай, сироп

Состав: Каждая таблетка содержит 30 мг амброксола гидрохлорида; каждые 5 мл сиропа содержат 15 мг амброксола гидрохлорида.

Это муколитическое средство, уменьшающее толщину мокроты. Применяется для лечения патологических нарушений секреции слизи, позволяя пациенту дышать глубоко и свободно. У пациентов с подтвержденной язвой желудка в анамнезе его следует применять с осторожностью.

1. Амброксол использует
2. Амброксол побочные эффекты
3. Дозировка амброксола
4. Меры предосторожности
5. Хранилище
6. Амброксол против ацетилцистеина
7. Часто задаваемые вопросы
8. Цитаты

Амброксол Использование:

Эмфизема с пневмокониозным бронхитом

Делая мокроту жидкой, менее вязкой и быстро откашливаемой, это лекарство используется для облегчения состояния одышки, постоянного кашля и воспаления дыхательных путей легких.

Трахеобронхит, трахеобронхит

Этот препарат используется для симптоматического лечения трахеобронхита — инфекции, вызывающей воспаление трахеи (дыхательного горла) и легочных дыхательных путей. Амброксол в этом случае избавляет пациента от обильного кашля и густой мокроты.

Обострения острого бронхита

В случае обострения бронхита этот препарат следует назначать с необходимым антибиотиком, так как он способствует секреции слизи, помогает улучшить кашель, проблемы с отхаркиванием и другие симптомы.

Амброксол Побочные эффекты:

Основные и второстепенные побочные эффекты амброксола:

• Тошнота
• Рвота
• Диарея
• Побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта
• Кожная сыпь
• зуд
• Инфекции
• Аллергия
• Расстройство желудка
• Головокружение
• Слабость
• Сухость во рту
• Расстройство желудка
• Онемение в горле
• Онемение во рту
• Нарушение вкуса

Амброксол Дозировка:

Взрослые: обычная дозировка от 30 мг (одна таблетка амброксола) до 120 мг (4 таблетки амброксола), разделенная на 2-3 приема.

Дети до 2 лет: пол чайной ложки сиропа амброксола дважды регулярно

Дети от 2 до 5 лет: по половине чайной ложки сиропа амброксола три раза в день.

Детям от 5 лет и старше: по одной чайной ложке сиропа амброксола 2–3 раза в день.

Меры предосторожности:

Если у вас есть какие-либо из следующих состояний или симптомов, перед применением проконсультируйтесь с врачом:

Симптомы, указывающие на пневмонию или другие легочные инфекции (например,грамм. затрудненное дыхание во время сна, густая желтая или зеленая слизь, окрашенная кровью слизь, высокая температура выше 38 ° C, боль в груди), симптомы низкой иммунной системы из-за других состояний здоровья (например, ВИЧ) или лекарств (например, химиотерапии, лекарств иммунная система) или текущие заболевания легких, такие как ХОЛОД (хроническая непроходимость)

Если у вас серьезные проблемы с язвой желудка, печенью или почками, сообщите об этом своему лечащему врачу.

Если у вас есть подтвержденная история аллергии на амброксол или бромгексин или любой другой ингредиент, упомянутый в лекарстве, этого препарата следует избегать.Некоторые таблетки амброксола могут содержать лактозу в качестве неактивного ингредиента, поэтому людям с унаследованной непереносимостью галактозы, дефицитом лактазы (пищеварительный фермент лактозы) или проблемами всасывания галактозы не рекомендуется их принимать.

Не рекомендуется применять амброксол в первом триместре беременности. Не рекомендуется принимать амброксол при грудном вскармливании, так как амброксол выделяется с грудным молоком.

Перед приемом этого препарата проконсультируйтесь с врачом или фармацевтом, если вы беременны или кормите грудью.

Принцип действия амброксола гидрохлорида

Болезнь Гоше вызывается мутациями гена GBA, кодирующего фермент глюкоцереброзидазу. В определенном отделе клетки, называемом лизосомой, этот фермент обычно расщепляет сложную липидную молекулу, называемую глюкоцереброзидом. Мутация приводит к неправильному сворачиванию вновь синтезированного фермента. Таким образом, фермент нацелен на деградацию с помощью механизма контроля качества клеток, который не позволяет ему достичь своей цели — лизосом.Субстрат глюкоцереброзидазы также накапливается в лизосомах, вызывая такие симптомы, как опухание печени и селезенки, боль и ломкость костей, снижение количества эритроцитов (анемия) и количества тромбоцитов (тромбоцитопения) и невропатию.

Амброксола гидрохлорид представляет собой небольшую молекулу, которая связывается с ферментом глюкоцереброзидазой и способствует его правильной укладке. Это будет способствовать транслокации глюкоцереброзидазы в лизосомы, где она поможет в метаболизме глюкоцереброзида и облегчит симптомы болезни.

Предупреждения:

• Если у вас длительный кашель, обратитесь к врачу
• Не принимайте, если у вас астма или приступ астмы
• Если у вас проблемы с печенью, поговорите об этом со своим врачом
• Если у вас проблемы с почками, обратитесь к
.
• Не принимайте это лекарство, если у вас есть язвы.
• Избегайте, если вы беременны или планируете родить ребенка
• Перед кормлением грудью проконсультируйтесь с врачом

Пропущенная доза

Если вы пропустите прием, используйте этот препарат, как только найдете его.Пропустите пропущенную дозу и перезапустите график дозирования, если он приближается к времени приема следующей дозы. Не используйте дополнительную дозу, чтобы восполнить пропущенную дозу. Попробуйте установить будильник или попросите члена семьи предупредить вас, если вы часто пропускаете дозы. Если вы пропустили слишком много доз в последнее время, обратитесь к своему врачу, чтобы предложить корректировки в вашем графике дозирования или новый график, чтобы компенсировать пропущенные дозы.

Передозировка

Не принимайте больше указанной дозировки.Принятие большего количества лекарств не изменит ваши симптомы; вместо этого они могут вызвать отравление или серьезные побочные эффекты. Если вы считаете, что вы или кто-то другой могли принять передозировку сиропа амброксола гидрохлорида, обратитесь в ближайшую больницу или отделение неотложной помощи дома престарелых. Принесите с собой коробку с лекарствами, бутылку или этикетку, чтобы помочь врачам сообщить необходимые детали.

Даже если вы знаете, что у них такое же заболевание, или вам кажется, что у них могут быть похожие заболевания, не давайте свои лекарства другим людям.Это может способствовать передозировке.

За более подробной информацией обращайтесь к своему врачу, фармацевту или на упаковке продукта.

Амброксол Хранение:

Лекарства следует хранить при комнатной температуре, вдали от источников тепла и прямого света. За исключением случаев, предусмотренных инструкцией по применению, не замораживайте лекарства. Храните лекарства в недоступном для домашних животных и детей месте.

Если не указано иное, не смывайте лекарства в унитаз и не проливайте их в канализацию.Атмосфера может быть загрязнена лекарствами, выброшенными таким образом. Для получения дополнительной информации о том, как безопасно отказаться от сиропа амброксола гидрохлорида, обратитесь к фармацевту или врачу.

Ambroxol Hydrochloride Syrup с истекшим сроком годности

При приеме однократной дозы сиропа амброксола гидрохлорида с истекшим сроком годности возникновение неблагоприятных условий маловероятно. Однако для получения лучшего совета, пожалуйста, поговорите со своим лечащим врачом или фармацевтом, или если вы чувствуете себя плохо или плохо себя чувствуете.При лечении состояний, отпускаемых по рецепту, лекарства с истекшим сроком годности могут стать неэффективными. В целях безопасности необходимо не принимать лекарства с истекшим сроком годности. Если у вас хроническое заболевание, при котором регулярно требуются лекарства, например сердечная недостаточность, инсульты и опасные для жизни аллергии, вам гораздо лучше оставаться в контакте со своим основным лечащим врачом, чтобы у вас был новый запас лекарств, которые истекший.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

Если вы принимаете, недавно принимали или планируете принимать какие-либо лекарства, диетические добавки или растительные продукты, обязательно сообщите об этом своему врачу и / или фармацевту.

Экстремальные взаимодействия, при которых следует избегать одновременного использования, в настоящее время неизвестны. Однако, если вы принимаете какие-либо антибиотики, предупредите своего врача или фармацевта, поскольку амброксол увеличивает проникновение антибиотика.

Амброксол против ацетилцистеина

Часто задаваемые вопросы:

Этот препарат используется для симптоматического лечения трахеобронхита — инфекции, вызывающей воспаление трахеи (дыхательного горла) и легких.