.pylori

Большинство признаков слизистой оболочки желудка, таких как покраснение, отек слизистой оболочки или узелковое изменение, при обычной эндоскопии недостаточно специфичны для диагностики инфекции H. pylori и не имеют большого значения для точного диагноза [8].Хотя тщательное наблюдение за картиной слизистой оболочки желудка с помощью стандартной эндоскопии может повысить точность диагностики, но это может занять много времени и не дать лучших результатов, чем другие инвазивные тесты [9]. В дополнение к традиционной эндоскопии, хромоэндоскопия с феноловым красным также была оценена для диагностики инфекции H. pylori на основе специфической уреазной активности H. pylori . Однако этот метод не является надежным тестом из-за его низкой чувствительности (73% -81%) и низкой специфичности (76% -81%) [10,11].Эндоскопия с увеличением обеспечивает прямое наблюдение микроструктуры поверхности слизистой оболочки желудка, а эндоскопические изображения слизистой оболочки с высоким разрешением тесно связаны с гистопатологическими изменениями, включая инфекцию H. pylori . Чувствительность и специфичность для прогнозирования телесного гастрита с положительным результатом на H. pylori с помощью увеличительной эндоскопии с окрашиванием индигокармином составили 97,6% и 100% соответственно. Однако чувствительность и специфичность снизились до 88.4% и 75,0% соответственно у H. pylori -положительного антрального гастрита [12]. Конфокальная лазерная эндомикроскопия (CLE) — это еще один увеличительный эндоскопический метод, который обеспечивает подповерхностный анализ и in vivo, гистологическое исследование слизистой оболочки желудка во время эндоскопии. Три характеристики, включая белые пятна, нейтрофилы и микроабсцессы, основанные на данных CLE, были использованы для диагностики H. pylori , а точность, чувствительность и специфичность составили 92,8%, 89,2% и 95,7% соответственно [13].Увеличивающая узкополосная визуализация и I-сканирование также использовались для обнаружения инфекции H. pylori , но были представлены различные результаты [14–16]. Различные классификации характеристик изображений от увеличительной эндоскопии обеспечивают различную диагностическую точность, а точность эндоскопического теста также зависит от оператора, что означает, что его использование требует процесса обучения со стороны опытного супервизора и наличия оборудования от местного отделения эндоскопии [17-20]. Более того, тщательное обследование с использованием увеличения с использованием метода улучшения изображения или без него также требует много времени и может причинить больший дискомфорт пациенту, чем другие тесты на основе биопсии.Эти факторы обычно ограничивают клиническое использование увеличительной эндоскопии для выявления инфекции H. pylori в повседневной практике.

Гистология

Гистология обычно считается золотым стандартом при прямом обнаружении инфекции H. pylori , а также первым методом, используемым для обнаружения H. pylori . Однако на диагностическую точность гистологии влияет несколько факторов, таких как место, размер и количество биопсий, методы окрашивания, ингибитор протонной помпы (ИПП), антибиотики и опыт исследующего патолога.Использование ИПП может привести к противоречивым результатам гистологического исследования, поэтому рекомендуется отменить ИПП за 2 недели до проведения гистологического исследования [21]. Дополнительные образцы биопсии, собранные в соответствующем месте для анализа, могут уменьшить количество ошибок выборки и ложноотрицательных результатов в гистологическом тесте, а также в других тестах, основанных на биопсии. В клинической практике обычно рекомендуются биопсии как антрального отдела, так и тела, и получение как минимум двух биоптатов из антрального отдела и тела является наиболее разумной стратегией, гарантирующей максимальный диагностический результат [22,23].Как упоминалось выше, биопсия тела важна для диагностики H. pylori . на фоне атрофического гастрита [7].

Окрашивание является важной частью гистологического исследования, и несколько красок, таких как обычное окрашивание HE, окраска по Гимзе, Вартина-Старри, Hp серебром, толуидиновым синим, акридиновым оранжевым, Макмалленом, Гента, Дитерле и иммуногистохимическим окрашиванием, были использованы для обнаружения H pylori . Хотя иммуногистохимическое окрашивание является наиболее чувствительным и специфическим красителем, окрашивания HE обычно достаточно для диагностики H.pylori в повседневной клинической практике. Дополнительное окрашивание обычно рекомендуется для образцов биопсии, которые выявляют умеренный или тяжелый хронический гастрит, но не H. pylori , идентифицированные при окрашивании HE. Кроме того, иммуногистохимическое окрашивание должно быть первым выбором, если решено использовать вспомогательное окрашивание для обнаружения H. pylori [24,25]. Если иммуногистохимические окрашивания недоступны, окрашивание по Гимзе является предпочтительным методом в клинической практике, поскольку оно простое, высокочувствительное и менее затратное [26].

Пептидная флуоресцентная нуклеиновая кислота in situ Гибридизация (PNA-FISH), которую можно использовать на гистологических препаратах, является высокочувствительным (чувствительность 97%) и специфическим (специфичность 100%) методом диагностики H. pylori. инфекция. PNA-FISH может идентифицировать кокковидную форму H. pylori , которую обычно невозможно обнаружить при рутинном гистологическом исследовании, поскольку этот метод позволяет избежать индивидуальной предвзятости от морфологической идентификации. Кроме того, PNA-FISH — это быстрый, точный и экономичный метод обнаружения H.pylori устойчивость к кларитромицину в образцах биопсии желудка [27–29]. FISH также может сыграть потенциальную роль в обнаружении H. pylori в пробах окружающей среды, и дальнейшие исследования передачи и резервуаров H. pylori в окружающей среде могут быть проведены с использованием FISH [30,31]. Несмотря на преимущества обнаружения H. pylori и устойчивости к кларитромицину одновременно, недостатки PNA-FISH, такие как трудоемкая подготовка, требующая флуоресцентного микроскопа и специальных знаний для чтения слайдов, могут ограничивать широкое использование этого метода. .

БЫСТРЫЕ ИСПЫТАНИЯ МОЧЕИ

Для повседневной клинической практики экспресс-тест на уреазу (RUT) является наиболее полезным инвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori , поскольку он недорогой, быстрый, простой в выполнении, высокоспецифичный и широко доступный . Основываясь на активности фермента уреазы H. pylori , присутствие H. pylori в образце биопсии превращает реагент теста мочевины в аммиак, что приводит к увеличению pH и изменению цвета на мониторе pH.В настоящее время доступны несколько коммерческих тестов на уреазу, включая тесты на геле (CLOtest, HpFast), бумажные тесты (PyloriTek, ProntoDry) и тесты на жидкой основе (UFT300, EndoscHp), а различные коммерческие тестовые тестеры имеют разное время реакции для получения результатов. CLOtest обычно занимает 24 часа, чтобы получить точный результат, тогда как PyloriTek занимает 1 час, а UFT 300 — 5 минут, чтобы обеспечить более быстрые результаты. Считывание тестов на уреазу раньше рекомендованного времени может привести к ложноотрицательным результатам [32]. Помимо дизайна коммерческих наборов, плотность бактерий, присутствующих в образце биопсии, также влияет на время реакции и диагностическую точность RUT, в то время как для получения положительного результата RUT обычно требуется минимум 10000 организмов.Другие факторы, влияющие на диагностическую точность тестов на уреазу, включают антагонисты рецепторов H ₂ , ИПП, соединения висмута, антибиотики, ахлоргидрию и наличие крови, все из которых увеличивают вероятность ложноотрицательных результатов. Кроме того, контаминация биоптатов формалином также снижает чувствительность RUT [21,33-35].

Обычно коммерческие экспресс-тесты на уреазу имеют специфичность выше 95% -100% и чувствительность выше 85% -95%. Увеличение количества биопсий антрального отдела желудка может повысить чувствительность RUT, и образцы двойной биопсии из тела желудка и антрального отдела предпочтительнее, чем образцы биопсии только антрального отдела желудка, поскольку дополнительная биопсия тела увеличивает диагностическую точность и позволяет избежать систематической ошибки выборки из-за неравномерного распределения H.pylori в желудке. Более того, объединение образцов антрального отдела и тела перед RUT, а не отдельных образцов, также увеличило чувствительность RUT и ускорило время реакции [32,36-39]. Перед RUT рекомендуется избегать приема лекарств, влияющих на активность уреазы, а плотность бактерий — для уменьшения ложноотрицательных результатов, например, 2 недели для ИПП и 4 недели для антибиотиков. Кровотечение значительно снижает чувствительность и специфичность RUT и делает RUT более ненадежным тестом, чем другие тесты в этом клиническом состоянии [40].В исследовании, посвященном оценке влияния различного количества и места биопсии на результаты RUT у пациентов с кровотечением из язвенной болезни, было показано, что четыре биопсии из антрального отдела или одна биопсия из тела увеличивают чувствительность RUT по сравнению с только одной биопсией из антрального отдела. В этом исследовании чувствительность одной биопсии антрального отдела составила 64%, тогда как чувствительность четырех биопсий антрального отдела и одной биопсии тела составила 74% и 73% соответственно [41]. Если для пациента с желудочно-кишечным кровотечением по-прежнему выбирается RUT, для повышения точности диагностики предлагалось выполнить биопсию как антрального отдела, так и тела.

Культура

Культивирование H. pylori из образца биопсии желудка — высокоспецифичный, но менее чувствительный метод. В целом, культивирование имеет почти 100% специфичность, но чувствительность культуры значительно варьируется, от 85% до 95%. Из-за деликатной и требовательной природы H. pylori для культивирования in vitro требуется определенная транспортная среда, среда для выращивания и среда для инкубации. Образцы биопсии можно хранить в транспортной среде, такой как Portagerm pylori или транспортная среда Стюарта, до 24 часов при 4 ° C.Для культивирования можно использовать несколько типов агара, поскольку H. pylori выделены. Обычно используемые среды включают агар Pylori, агар Скирроу, кровяной агар Columbia, агар Brucella, инфузию сердца мозга или соевый агар с триптиказой, дополненный кровью овцы или лошади. Чашки с агаром обычно инкубируют в микроаэробной среде (80-90% N ₂ , 5-10% CO ₂ , 5-10% O ₂ ) при температуре от 35 до 37 ° C в течение не менее 5-7 дней, потому что H. pylori считается микроаэрофилом.Однако недавнее исследование показало, что росту H. pylori способствует уровень кислорода в атмосфере с присутствием 10% CO ₂ , в результате чего появилась новая концепция, согласно которой H. pylori может быть капногильным аэробом [42]. Диагностика H. pylori из культуральной среды основана на морфологических характеристиках, а также положительных реакциях на уреазу, каталазу и оксидазу, что означает, что микробиологические лаборатории должны быть оборудованы и обучены для выделения этой бактерии.

Такие условия, как низкое качество образцов, отложенная транспортировка, воздействие аэробной среды или неопытного микробиолога, оказывают неблагоприятное влияние на производительность посева и снижают диагностическую точность [43].Недавнее исследование, проведенное в 26 больницах для анализа влияния времени транспортировки, а также температуры на скорость культивирования, показало, что положительная скорость культивирования снизилась до 26,3% в 48-часовой транспортной группе по сравнению с 32,8% в 24-часовой транспортной группе ( P <0,001 ). Это исследование также показало, что средняя температура повысилась с 4,7 ° C до 29,1 ° C во время транспортировки, что привело к снижению уровня положительных культур с 36,7% до 24,1% [44]. Недавнее развитие транспортной среды - это новая транспортная среда, транспортная среда GESA.Транспортная среда GESA представляет собой полутвердую среду, в которой образцы биопсии желудка могут храниться при 4 ° C в течение до 10 дней и обеспечивать поддающуюся количественной оценке степень восстановления H. pylori (90,7%) [45]. Для культивирования H. pylori в биопсии желудка был также разработан новый двухфазный тест, который сочетал селективный обогащающий бульон и биохимический тест с использованием агара с мочевиной в одном сосуде. В этом небольшом исследовании двухфазный тест был проведен на 55 образцах биопсии и показал 100% положительный прогностический клапан после 48 часов инкубации.Более того, этот метод имел более низкую частоту ложноположительных результатов и требовал более низкой бактериальной нагрузки, примерно 10 ⁵ КОЕ / мл, по сравнению с CLOtest. В то же время этот тест можно было использовать в аэробных условиях и позволять культивирование, а также тестирование чувствительности к антибиотикам [46].

Факторы-хозяева, такие как высокая активность гастрита, низкая бактериальная нагрузка, кровотечение, употребление алкоголя и употребление H ₂ — антагонистов рецепторов, ИПП, антибиотиков, оказывают отрицательное влияние на положительный результат посева.Эти препараты, за исключением антибиотиков, которых следует избегать по крайней мере за 4 недели, также рекомендуется избегать за 2 недели до посева. Чтобы избежать систематической ошибки при выборке из-за неоднородного распределения H. pylori в желудке, было рекомендовано как минимум 2 образца биопсии из антрального отдела и 2 образца биопсии из тела [47,48].

Хотя посев — трудоемкий, дорогой и трудоемкий тест для диагностики H. pylori , тест на чувствительность к антибиотикам H. pylori , полученный с помощью посева, является особым преимуществом в клинической практике.В соответствии с рекомендациями консенсусного отчета Маастрихт IV, культура H. pylori и определение чувствительности к антибиотикам следует проводить, если первичная резистентность к кларитромицину превышает 20% в данном географическом районе или после неэффективности лечения препаратами второй линии [21]. Кроме того, культивирование также позволяет изолировать H. pylori для дальнейшего анализа фенотипических и генотипических характеристик, чтобы лучше понять патогены и, следовательно, предложить оценку терапии.С ростом распространенности устойчивости к антибиотикам культивирование по-прежнему остается надежным методом лечения неэффективности лечения H. pylori , а также изучения устойчивости к антибиотикам в популяционных исследованиях до того, как другие молекулярные тесты станут более доступными.

Полимеразная цепная реакция

С момента применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения инфекции H. pylori , ПЦР широко использовалась для диагностики H. pylori из образцов биопсии желудка, слюны, стула, желудочного сока. сок и разные экземпляры.ПЦР обеспечивает превосходную чувствительность и специфичность, превышающую 95%, по сравнению с другими традиционными тестами и дает более точные результаты обнаружения H. pylori у пациентов с кровотечением. Несколько генов-мишеней, включая UreA , glmM , UreC , 16S рРНК , 23S рРНК , HSP60 и VacA , были использованы для обнаружения H. различные консервативные гены-мишени могут повысить специфичность, что, в свою очередь, позволяет избежать ложноположительных результатов, особенно для образцов, отличных от образцов биопсии желудка.Другие преимущества ПЦР, в том числе меньшее количество бактерий, требуемых в образце, более быстрые результаты и отсутствие необходимости в специальных материалах для обработки или транспортировке, позволяют врачам принимать более быстрое и точное решение о лечении пациента. Кроме того, ПЦР также позволяет одновременно обнаруживать специфические мутации, приводящие к устойчивости к антибиотикам, такие как устойчивость к макролидам и фторхинолонам, и факторы вирулентности, такие как CagA и VacA [49-51].

По сравнению с методом разведения в агаре (Etest), который обычно считается золотым стандартом теста на чувствительность к антибиотикам, ПЦР в реальном времени (RT-PCR) имеет несколько преимуществ.Во-первых, использование фиксированной формальдегидом залитой парафином ткани желудка в ПЦР-тесте более удобно, быстро и чувствительно, чем использование свежего биоптата в Etest, более того, в этих условиях RT-PCR также показала не худшие результаты тестирования чувствительности к антибиотикам, чем Etest. Кроме того, ПЦР более надежна для выявления гетерорезистентного статуса, который часто приводит к ложноотрицательному результату в Etest, следовательно, ПЦР может предоставить более точную информацию для клиницистов перед началом лечения антибиотиками [52].В недавнем исследовании, в котором использовалась ОТ-ПЦР в фиксированных формалином и залитых парафином образцах для выявления инфекции H. pylori и ассоциированного статуса устойчивости к кларитромицину, изучалась эффективность четырехкомпонентной терапии на основе генотипической резистентности в качестве лечения первой линии для 385 пациентов с функциональная диспепсия. В этом исследовании у 136 пациентов (35,3%) была диагностирована инфекция H. pylori , а чувствительность ОТ-ПЦР и гистологического исследования составила 95,6% и 69,9% соответственно.Четырехкратная терапия цитратом калия висмута, рабепразолом, амоксициллином и кларитромицином использовалась для генотипически чувствительных пациентов, в отличие от генотипически резистентных пациентов лечили цитратом висмута калия, рабепразолом, амоксициллином и фуразолидоном. Авторы обнаружили, что уровень эрадикации составил 100% для пациентов с чувствительным к кларитромицину H. pylori и 94% для пациентов с устойчивым к кларитромицину H. pylori соответственно для анализа по протоколу [53].Во-вторых, ОТ-ПЦР также является удобным методом эпидемиологического исследования региональной степени устойчивости к антибиотикам в качестве руководства для эмпирического лечения первой линии. Кроме того, ОТ-ПЦР может обнаруживать точечные мутации, которые вызывают устойчивость к антибиотикам, а также обнаруживать изменение точечной мутации или появление новой мутации, что дает дополнительную информацию для эпидемиологических и молекулярных исследований взаимосвязи генотип-фенотип. Из-за возможного изменения мутаций, которые вызывают устойчивость к антибиотикам со временем, определение более 5 точечных мутаций при использовании методов на основе ПЦР важно для достижения хорошей точности при обнаружении устойчивости к антибиотикам [54-56].

Были описаны генетические мутации, вызывающие устойчивость к кларитромицину (23S рРНК), хинолонам ( gyrA ген), тетрациклину (16S рРНК), рифабутину ( rpoB ген) и амоксициллину ( pbp-1a в предыдущем гене). исследования и несколько коммерческих наборов, таких как набор MutaREAL H. pylori , анализ ПЦР в реальном времени ClariRes и система обнаружения АПФ Seeplex ClaR- H. pylori [57]. Однако точный механизм устойчивости к метронидазолу менее ясен, и гены восприимчивости, такие как rdxA и frxA, участвовали в предыдущих исследованиях с спорными результатами.Недавнее исследование с использованием секвенирования нового поколения Illumina для поиска мутаций-кандидатов на устойчивость к метронидазолу. Это исследование подтвердило, что мутации в гене rdxA играют основную роль в устойчивости к метронидазолу у H. pylori , а мутации в гене frxA могут усиливать устойчивость к метронидазолу только при наличии мутаций rdxA. Кроме того, новое открытие мутаций в гене rpsU может сыграть роль в устойчивости к метронидазолу для объяснения устойчивых к метронидазолу штаммов без мутаций в генах rdxA и frxA [58].Анализ GenoType HelicoDR — это молекулярный тест, сочетающий ПЦР и гибридизацию, позволяющий провести молекулярную дефекацию H. pylori , а также устойчивость к кларитромицину и фторхинолонам в течение 6 часов. В предыдущих исследованиях анализ GenoType HelicoDR с использованием штаммов бактерий или образцов биопсии желудка был высокоточным для устойчивости к кларитромицину с чувствительностью 94–100% и специфичностью 86–99% соответственно; Анализ GenoType HelicoDR также точен для устойчивости к фторхинолонам с чувствительностью 83% -87% и 95% -98.Специфичность 5% соответственно по сравнению с методом на основе культуры [59,60]. Однако недавнее исследование по оценке клинической применимости GenoType HelicoDR в Корее показало, что чувствительность и специфичность в отношении устойчивости к кларитромицину составляли только 55,0% и 80,0% соответственно. GenoType HelicoDR также не был точным для устойчивости к фторхинолонам, показывая чувствительность и специфичность 74,4% и 70,0% соответственно. Клиническая применимость GenoType HelicoDR для определения устойчивости к антибиотикам может иметь некоторые ограничения, которые требуют дальнейшего изучения [61].ОТ-ПЦР обычно используется для количественного определения ДНК H. pylori в образцах биопсии, но выполнение ОТ-ПЦР может быть проблемой для клинических лабораторий из-за дорогостоящих термоциклеров. Мультиплексная ПЦР на основе двойного примирования олигонуклеотидов (DPO) была разработана для обнаружения инфекции H. pylori и устойчивости к кларитромицину, и этот тест можно проводить в любом стандартном термоциклере, который стоит меньше, чем RT-PCR. Благодаря особой конструкции праймера DPO для амплификации рДНК H. pylori 23S и обнаружения наиболее распространенных мутаций, A2142G и A2143G, придающих устойчивость к кларитромицину, DPO-PCR оказалась быстрой и точной для H.pylori диагностика и определение чувствительности к кларитромицину с помощью биоптатов желудка [62,63]. Кроме того, недавнее исследование с использованием образцов тканей, обработанных RUT для оценки диагностической точности DPO-PCR, показало, что DPO-PCR имеет более высокую чувствительность, чем RUT и гистология, а DPO-PCR может обнаружить инфекцию H. pylori в RUT- отрицательные образцы, что означает, что этот тест может уменьшить ложноотрицательный результат и уменьшить необходимость повторного эндоскопического обследования.Степень согласованности DPO-PCR между образцами биопсии желудка и образцами, обработанными RUT, составила 94,4% [64].

Обнаружение факторов вирулентности с помощью ПЦР помогает оценить генетические вариации факторов вирулентности H. pylori и дает больше информации для понимания клинических различий между пациентами, инфицированными разными штаммами H. pylori . Несколько исследований показали, что наличие факторов вирулентности, таких как ген CagA и VacA , связано с более тяжелым воспалением желудка и более высокой распространенностью язвенной болезни и рака желудка [65–67].Ген А промотора язвы двенадцатиперстной кишки (DupA) также предполагалось связать с образованием язв, индуцированным H. pylori , но в предыдущих исследованиях сообщалось о противоречивых результатах, которые предположительно были вызваны несовпадением праймеров. Недавно разработанная ОТ-ПЦР со специальным праймером, разработанным на основе выравнивания всех 221 последовательностей гена DupA, была введена недавно для повышения скорости обнаружения гена DupA. Этот метод повысил уровень обнаружения до 64,2%, независимо от того, имели ли обычно используемые ПЦР уровень обнаружения между 29.От 9% до 37,8%. Авторы указали, что дизайн ПЦР оказал большое влияние на обнаружение фактора вирулентности, и обнаружение специфического аллеля DupA не то же самое, что обнаружение фактического гена DupA [68].

ПЦР также помогает обнаружить H. pylori в пробах окружающей среды для эпидемиологических исследований. Высокая распространенность H. pylori , обнаруженная в образцах питьевой воды с помощью ПЦР, предоставила дополнительную информацию о передаче H. pylori через питьевую воду [69].Более высокий уровень обнаружения заражения H. pylori в немытых овощах свидетельствует о том, что точное мытье овощей снижает загрязнение H. pylori [70]. ПЦР также использовалась для определения генотипирования H. pylori в овощах, и высокая степень сходства в образце генотипирования H. pylori среди образцов овощей и образцов человека позволила предположить, что овощи могут быть источниками бактерий [71].

За исключением более быстрых и высокоточных результатов ПЦР для обнаружения H.pylori и штаммы, устойчивые к антибиотикам, опасения по поводу стоимости, доступного местного оборудования и опыта в области молекулярных методов неизбежно влияют на возможность проведения ПЦР в местных лабораториях.

НЕИНВАЗИВНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

Было сделано несколько попыток избежать использования эндоскопических методов диагностики по нескольким причинам. Прежде всего, эндоскопия — это инвазивная процедура, которая вызывает дискомфорт и не подходит для пациентов с тяжелыми сопутствующими заболеваниями или противопоказаниями. Кроме того, стоимость эндоскопии и дополнительные расходы на эндоскопию, такие как одноразовые щипцы и анестезия, могут быть высокими.И последнее, но не менее важное: систематическая ошибка выборки почти неизбежно встречается в методах, основанных на биопсии, из-за неравномерного распределения H. pylori в желудке.

Дыхательный тест на мочевину

Дыхательный тест на мочевину (UBT) используется уже почти 30 лет и до сих пор остается самым популярным и точным неинвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori . За счет уреазной активности H. pylori , ¹³ C- или ¹⁴ C-меченная мочевина, проглоченная пациентом, гидролизуется до меченого CO ₂ в желудке, затем меченый CO ₂ абсорбируется в желудке. кровь и выдыхаемый при дыхании, в котором можно измерить помеченный CO ₂ .Хотя несколько факторов, включая пациента, бактерии и сам тест, влияют на результаты UBT, UBT — это высокоточный и воспроизводимый тест с чувствительностью и специфичностью около 95% при стандартных процедурах. Недавно опубликованный метаанализ для оценки диагностической точности UBT у взрослых пациентов с диспепсическими симптомами показал, что совокупная чувствительность составила 96% (95% ДИ: 0,95-0,97), а совокупная специфичность составила 93% (95% ДИ: 0,91-0,94). [72]. UBT также полезен для эпидемиологических исследований и для оценки эффективности эрадикационной терапии [21,73].Пациенту следует прекратить прием ИПП за 2 недели и антибиотик за 4 недели до обследования, чтобы избежать ложноотрицательных результатов [74]. Кровотечение также влияет на диагностическую точность UBT, и отсроченное UBT после восстановления после кровотечения обязательно для уменьшения ложноотрицательного результата [75]. Иногда, хотя и редко, присутствие в желудке других патогенов, продуцирующих уреазу, также вызывает ложноположительные результаты.

UBT — подходящий метод со многими преимуществами, такими как простой, неинвазивный и безопасный, для обнаружения H.pylori у педиатрических пациентов, хотя точность UBT у педиатрических пациентов не так хороша, как у взрослых пациентов, особенно для детей младше 6 лет, с чувствительностью и специфичностью от 75% до 100% [76].

¹³ C-UBT предпочтительнее ¹⁴ C-UBT, чтобы избежать воздействия радиации, хотя ¹⁴ C-UBT безопасен для детей и беременных женщин, потому что излучение от ¹⁴ C-UBT ниже чем радиация, полученная из окружающей среды.Однако из-за отсутствия дорогостоящего оборудования и возможности платить высокую стоимость в размере ¹³ C-UBT, ¹⁴ C-UBT более популярны в развивающихся странах. Диагностическая точность между ¹³ C-UBT и ¹⁴ C-UBT не отличается, и оба теста можно считать золотым стандартом среди различных неинвазивных тестов для диагностики инфекции H. pylori [77]. Существует два протокола, некапсулированный и инкапсулированный, которые используются для перорального введения ¹⁴ С-мочевины пациентам для H.pylori диагноз. Первоначально инкапсулированный ¹⁴ C-UBT был разработан, чтобы избежать проблемы гидролиза ¹⁴ C-мочевины под действием продуцирующей уреазу флоры полости рта, и этот метод устранил проблему ложноположительных результатов в пробах из раннего дыхания [78] . Тем не менее, быстрый транзит капсулы, содержащей ¹⁴ C-мочевину, из желудочного тракта или ее неполное рассасывание в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха приводит к инкапсулированию ¹⁴ C-UBT, возможно, не лучшим вариантом, чем протокол без капсул [79 ].В недавнем исследовании использовалась методика динамического сцинтискана для мониторинга судьбы капсулы в желудке и сравнивалась чувствительность между протоколами без инкапсулирования и инкапсулирования у 100 пациентов с диспепсией. Это исследование показало, что неинкапсулированный протокол имел более высокую чувствительность, чем инкапсулированный протокол, а чувствительность инкапсулированного и неинкапсулированного ¹⁴ C-UBT составляла 90,5% и 98,6% через 10 минут и 91,8% и 97,2% через 15 минут соответственно. Неполное разрешение или отсутствие разрешения капсулы ¹⁴ C-мочевины в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха, отмеченное динамическими изображениями сцинтискана, послужило объяснением более низкой чувствительности инкапсулированного ¹⁴ C-UBT по сравнению с неинкапсулированным ¹⁴ C-UBT [80].

Точное значение отсечения для значения дельта по сравнению с исходным уровнем (DOB) для различения между H. pylori -положительными и H. pylori -отрицательными результатами является другой спорной проблемой. Отсечной клапан для UBT был первоначально определен как 5,0, что было наиболее широко рекомендовано, тогда как более низкие значения, 3,0 или 3,5, также были предложены для повышения его точности без ущерба для чувствительности и специфичности этого теста. «Серая зона», в которой результаты UBT неубедительны, упоминалась в предыдущих исследованиях, и пограничное значение DOB, например, очень близкое к выбранной точке отсечения, следует интерпретировать с осторожностью [81].Недавно был представлен новый метод UBT с использованием интегрированной системы выходной спектроскопии с оптическим резонатором, обеспечивающей оптимальную диагностическую точку отсечки. Этот предварительный тест определил диагностическую точку отсечения как совокупный процент восстановленной дозы ¹³ C (c-PDR) = 1,47% через 60 минут и продемонстрировал 100% чувствительность и 100% специфичность с точностью 100% по сравнению с инвазивной эндоскопией. тесты. Однако в этом исследовании используется небольшое количество образцов, и для подтверждения этих результатов необходимы дальнейшие более масштабные исследования [82].

STOOL ANTIGEN TEST

Тест на антиген кала (SAT) — другой неинвазивный метод с хорошей чувствительностью и специфичностью, 94% и 97% соответственно в глобальном метаанализе, при диагностике инфекции H. pylori [83]. Этот метод определяет присутствие H. pylori антигена в образцах стула. Существует два типа SAT, используемых для обнаружения H. pylori, методы, основанные на иммуноферментном анализе (EIA) и иммунохроматографическом анализе (ICA), с использованием либо поликлональных антител, либо моноклональных антител.В настоящее время доступно множество SAT для диагностики инфекции H. pylori , и различная диагностическая точность показана в разных исследованиях с разными SAT и разным дизайном исследований. В целом тесты на основе моноклональных антител более точны, чем тесты на основе поликлональных антител [83], а тесты на основе EIA обеспечивают более надежные результаты, чем тесты на основе ICA [84,85]. В недавнем исследовании EIA на антиген Tesmate pylori (TPAg) с использованием моноклональных антител для проверки нативной каталазы H. pylori было выявлено 92.4% чувствительность и 100% специфичность у взрослых по сравнению с ОТ-ПЦР, а точность этого теста составила 94,9% [86]. Тест Premier Platinum HpSA Plus, другой моноклональный тест на основе EIA, также показал надежные диагностические результаты с чувствительностью 92,2%, специфичностью 94,4% и точностью 93,4% для диагностики инфекции H. pylori по сравнению с другими 4 тестами SAT, включая 1 моноклональный На основе EIA (тест на антиген H. pylori ), на основе 2 моноклональных ICA (тест ImmunoCard STAT! HpSA и H.pylori фекального антигена) и 1 теста на основе поликлонального ICA (одноэтапный тест на антиген H. pylori ), точность которых была ниже 90% [84]. Однако тесты на основе ICA просты в выполнении и не требуют специального оборудования, что делает его подходящим для тестирования в офисе и в развивающихся странах. Новый тест SAT на основе моноклональных ICA, Atlas H. pylori Antigen Test, также был недавно представлен и обеспечивает лучшие результаты, чем предыдущие SAT на основе моноклональных ICA, с 91.Чувствительность 7%, специфичность 100% и точность 96,6% [87].

Помимо UBT, SAT на основе моноклонального EIA также является надежным тестом, рекомендованным руководящими принципами для оценки эффективности эрадикационной терапии H. pylori , и время для тестирования после окончания лечения должно составлять не менее 4 недель [21 , 88]. В предыдущем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность моноклонального SAT для подтверждения эрадикации после терапии составляли 93% и 96% соответственно [83]. В недавних исследованиях было подтверждено, что SAT на основе моноклональных EIA является полезным и точным инструментом для определения результатов H.pylori с чувствительностью 91,6–100% и специфичностью 93,6–98,4% [89, 90]. Кроме того, моноклональные тесты SAT на основе ICA, RAPID Hp StAR и ImmunoCard STAT! HpSA также дает многообещающие результаты с чувствительностью 90,0–100% и специфичностью 93,6–94,9%.

В дополнение к оценке эрадикационной терапии, моноклональный САТ является удобным, неинвазивным и полезным тестом для диагностики инфекции H. pylori у педиатрических пациентов [91]. Исследование с применением SAT у детей в возрасте от 6 до 30 месяцев показало надежные результаты SAT для диагностики H.pylori у детей раннего возраста [92]. Недавний метаанализ, включающий 45 исследований и 5931 пациента, для оценки эффективности SATS у детей показал, что совокупная чувствительность и специфичность составили 92,1% и 94,1% соответственно. В анализе подгрупп чувствительность и специфичность моноклонального SAT, поликлонального SAT и одноэтапного быстрого моноклонального SAT составила 96,2% и 94,7%, 88,0% и 93,0% и 88,1% и 94,2% соответственно. Моноклональная SAT — надежный тест для диагностики инфекции H. pylori у детей [93].Более того, SAT — полезный инструмент для программ эпидемиологического исследования и скрининга [94,95]. По стоимости и оснащению SAT больше подходит для массовых опросов, чем UBT. По сравнению с серологическими тестами, которые обычно используются для скрининга, SAT дает более надежные результаты в диагностике инфекции H. pylori . Однако предыдущее исследование показало, что SAT был менее точным, чем серологический тест у пациентов с тяжелым атрофическим гастритом, и влияние этого результата требует дальнейшей оценки для оценки роли SAT в скрининге H.pylori -ассоциированные заболевания, такие как рак желудка [96]. В то время как другое исследование с использованием нового SAT на основе поликлонального EIA (EZ-STEP H. pylori ) обнаружило наличие атрофического гастрита и / или кишечной метаплазии, которые существенно не повлияли на результаты SAT [97].

На точность SAT влияет несколько факторов, таких как антибиотик, ИПП, N-ацетилцистеин, дефекация и кровотечение из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Сохранность образца, такая как температура и время транспортировки перед испытанием, а также отсечной клапан также влияют на диагностическую точность SAT [98-100].

ИСПЫТАНИЯ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛ

Для диагностики H. pylori широко доступны многочисленные серологические тесты, основанные на обнаружении антител IgG к H. pylori, и тест EIA является наиболее распространенным и точным методом среди них. Серологические тесты также часто используются при скрининге для эпидемиологических исследований из-за их недорогой, быстрой и приемлемости для пациентов. Кроме того, серологический тест полезен для оценки инфекции H. pylori у детей.Недавнее исследование с использованием E-Plate, коммерческого набора сывороточных антител, для сравнения эффективности серологического теста с SAT у 73 детей показало, что чувствительность, специфичность и отношение правдоподобия для серологического теста составили 91,2%, 97,4% и 35,6%. , соответственно. Эти результаты были получены при использовании запорного клапана, рекомендованного для взрослых, у детей [101]. Поскольку точность серологических тестов зависит от антигена, используемого в коммерческом наборе, и степени распространенности конкретных штаммов H. pylori , используемых в качестве источника антигена.Надлежащие антигены, используя либо местные штаммы в качестве источника антигена, либо объединяющие антигены из штаммов разных групп, а также надежное пороговое значение серологического теста должны быть проверены на местном уровне перед исследованием популяции [102,103]. Некоторые иммуногенные белки, такие как CagA, VacA, UreA, Omp и GroEL, были использованы в качестве кандидатов для обнаружения инфекции. Белок H. pylori FliD, важный элемент в сборке функциональных жгутиков, также признан новым маркером для серологической диагностики H.pylori с чувствительностью и специфичностью 99% и 97% соответственно [104]. Недавно для серологической диагностики инфекции H. pylori был введен новый метод иммуноанализа «РекомЛайн H. pylori » с использованием шести высокоиммуногенных факторов вирулентности (CagA, VacA, GroEL, gGT, HcpC и UreA). В отличие от EIA и иммуноблоттинга, RecomLine позволяет идентифицировать специфический ответ антител против различных антигенов H. pylori и увеличивает дискриминирующую способность.По сравнению с гистологией, рекомЛайн показала чувствительность и специфичность 97,6% и 96,2% соответственно. РекомЛайн также является полезным инструментом для идентификации специфических факторов вирулентности H. pylori [105,106].

Другое преимущество серологического теста заключается в том, что на точность серологических тестов не влияют язвенное кровотечение, атрофия желудка, а также использование ИПП или антибиотиков, которые вызывают ложноотрицательные результаты в других инвазивных или неинвазивных тестах. Однако серологический тест не является надежным тестом для оценки эрадикационной терапии, поскольку уровни антител могут сохраняться в крови в течение длительных периодов времени даже после успешной эрадикации [21].Поскольку серологические тесты не различают активную инфекцию и прошлое воздействие H. pylori , перед эрадикационной терапией требуется дополнительное подтверждение другими тестами.

Как и SAT, серологические тесты на основе EIA имеют лучшую точность, чем тесты на основе ICA. Недавнее исследование, сравнивающее 29 коммерческих серологических тестов (17 на основе EIA и 12 на основе ICA), показало, что точность 9 из 17 тестов на основе EIA была выше 90%, тогда как только один из 12 тестов на основе ICA имел точность> 90 %.Гетерогенные характеристики также наблюдались между различными серологическими тестами, выявление чувствительности варьировалось от 57,8% до 100%, а специфичность варьировалась от 58,7% до 96,8% в тестах на основе EIA; Чувствительность варьировала от 55,6% до 97,8%, а специфичность — от 60,3% до 96,8% в тестах на основе ICA. Серологические тесты следует выбирать правильно в соответствии с их конкретными рабочими параметрами для достижения различных целей, таких как скрининг, первоначальный диагноз или подтверждение другого теста [107].

Серологический тест также играет важную роль в изучении факторов патогенеза и вирулентности, поскольку некоторые антигенные белки могут быть обнаружены иммунологическими методами и имеют дополнительную диагностическую ценность.Было предпринято несколько попыток найти потенциальные биомаркеры для идентификации пациента, инфицированного штаммом H. pylori высокого риска, с помощью серологических тестов. Уровни пепсиногена (PG) I, PG II и соотношения PG I / II в сочетании с антителом H. pylori широко используются для прогнозирования атрофического гастрита и риска рака желудка [108,109]. Соотношение PG I / II также может быть полезно для наблюдения за раком желудка у пациентов после эрадикационной терапии [110]. Однако получены противоречивые результаты по клиническому применению этих серологических препаратов.Недавнее исследование, оценивающее точность GastroPanel, который измеряет гастрин-17, антитела H. pylori , PG I и PG II, для выявления атрофического гастрита, показало только 50% чувствительность и 80% специфичность, что было хуже, чем в предыдущих исследованиях [111 ]. Пепсиногеновый тест также оказался недостаточно точным для диагностики рака желудка с чувствительностью 71,0% и специфичностью 69,2% [112]. Некоторые факторы вирулентности также были оценены для прогнозирования заболеваний, ассоциированных с H. pylori .Присутствие сывороточных антител CagA, VacA и GroEL у пациентов с инфекцией H. pylori связано с предраковыми поражениями желудка, а также с раком желудка, и эти сывороточные маркеры могут служить потенциальными предикторами для пациентов, инфицированных штаммами высокого риска, которые могут быть связано с развитием рака желудка [106,113]. Хотя связь между факторами вирулентности и клиническими проявлениями была обнаружена в ходе предыдущих эпидемиологических исследований, серологические тесты все еще недостаточно надежны для диагностики рака желудка.В недавнем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность антител CagA, используемых для диагностики рака желудка, составила 71% и 40% соответственно, а диагностическое отношение шансов составило 2,11 [114].

Обнаружение H. pylori IgG в моче также оценивалось у детей в предыдущих исследованиях, однако были представлены различные результаты [115,116]. Кроме того, диагностическая точность теста на основе ИФА для выявления IgG в слюне H. pylori также была недостаточной в качестве надежного теста [117,118].Определение антител в моче или слюне менее точное, чем другие тесты, и его не рекомендуется использовать при ведении пациентов [119].

ДИАГНОСТИКА

Использование ПЦР для обнаружения H. pylori в кале является надежным и быстрым методом, особенно привлекательным для детей в качестве неинвазивного теста. ПЦР стула также дает преимущества в идентификации конкретных генотипов и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам [120,121].Полость рта считается внегастральным резервуаром H. pylori , хотя значение H. pylori в полости рта как источника повторного инфицирования или пути передачи все еще неясно. Слюна и зубной налет были образцами, обычно используемыми для обнаружения H. pylori в полости рта, а ПЦР была наиболее распространенным и надежным тестом, используемым в недавних исследованиях. RUT и посев также были выполнены для выявления орального H. pylori в ранних исследованиях.Распространенность обнаружения H. pylori в полости рта сильно варьировала, от 0% до 100%, и обычно обнаруживалась более низкая распространенность в слюне по сравнению с зубным налетом [122]. Широкие различия в распространенности H. pylori в полости рта могут быть связаны с разными методологиями, разными популяциями и разными праймерами, использованными в исследованиях. Недавние исследования были сосредоточены на модификации праймера для повышения диагностической точности или оценке нового метода преодоления ограничений ПЦР.Недавно была разработана новая система ПЦР с использованием наборов праймеров, специфичных для H. pylori на основе высококонсервативных последовательностей полных геномов 48 штаммов H. pylori , для повышения диагностической точности ПЦР в полости рта [123] . Петлевая изотермическая амплификация (LAMP), новый метод высокоспецифичной и чувствительной амплификации ДНК, сравнивалась с ПЦР по скорости обнаружения H. pylori в образцах зубного налета в небольшом исследовании, в котором приняли участие 45 участников.Это исследование показало, что LAMP имеет более высокий уровень обнаружения, чем ПЦР, и уровень обнаружения H. pylori в образцах зубного налета с помощью LAMP и ПЦР составляет 66,67% и 44% соответственно [124].

ДИАГНОСТИКА

Основной наконечник: В настоящее время доступны несколько тестов для диагностики Helicobacter pylori (H. pylori ).pylori ) инфекция. В этом обзоре мы сосредоточимся на полезности и ограничениях современных диагностических методов, а также на последних разработках этих тестов, которые способствуют повышению диагностической точности. Кроме того, мы также подчеркиваем обнаружение H. pylori в образцах из полости рта и у пациентов с различными клиническими обстоятельствами, включая кровотечение, постгастрэктомию и постэрадикационную терапию.

ВВЕДЕНИЕ

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является грамотрицательным микроаэробным патогеном человека, а инфекция H. pylori тесно связана со многими гастродуоденальными заболеваниями, включая хронический активный гастрит, язвенную болезнь, атрофический гастрит, лимфому лимфоидной ткани слизистой оболочки (MALT) и некардиальный рак желудка. . Инфекция H. pylori поражает более половины взрослого населения во всем мире, но распространенность инфекции H. pylori широко варьируется в зависимости от географического региона, возраста, расы и социально-экономического статуса.Обычно распространенность инфекции H. pylori увеличивается с возрастом в большинстве стран, однако в последние десятилетия при анализе временных тенденций в нескольких крупных популяциях наблюдалось снижение распространенности инфекции H. pylori [1]. Более 80% язвенной болезни вызывается инфекцией H. pylori , а предполагаемый риск развития язвенной болезни в течение жизни у пациентов, инфицированных H. pylori , составляет примерно 15% [2]. Рак желудка является третьей по значимости причиной смерти от рака во всем мире, а случаев H.pylori является причиной 74,7% всех случаев некардиального рака желудка [3,4]. Рак желудка и язвенная болезнь вместе вызывают более миллиона смертей в год в мире, и инфекция H. pylori всегда является важной проблемой для здоровья [5]. Для выявления инфекции H. pylori разработаны различные диагностические методы, и диагностические тесты с высокой чувствительностью и специфичностью, превышающей 90%, необходимы для точной диагностики инфекции H. pylori в клинической практике.Хотя сейчас доступно множество диагностических тестов, каждый метод имеет свои преимущества, недостатки и ограничения. Выбор того или иного метода может зависеть от наличия и доступности диагностических тестов, уровня лабораторий, клинического состояния пациентов и отношения вероятности положительных и отрицательных тестов при различных клинических обстоятельствах. Диагностические тесты обычно делятся на инвазивные (эндоскопические) и неинвазивные методы. Инвазивные диагностические тесты включают эндоскопическое изображение, гистологию, экспресс-тест на уреазу, культивирование и молекулярные методы.Неинвазивные диагностические тесты включали дыхательный тест на мочевину, тест на антиген стула, серологические и молекулярные исследования. В данной статье мы кратко рассмотрим текущие варианты и разработки диагностических тестов и связанных с ними приложений в клинической практике, а также выбор диагностических тестов для различных клинических состояний (таблица).

Таблица 1

Варианты диагностики инфекции Helicobacter pylori при различных клинических обстоятельствах и особые применения диагностических тестов

.pylori

Большинство признаков слизистой оболочки желудка, таких как покраснение, отек слизистой оболочки или узелковое изменение, при обычной эндоскопии недостаточно специфичны для диагностики инфекции H. pylori и не имеют большого значения для точного диагноза [8].Хотя тщательное наблюдение за картиной слизистой оболочки желудка с помощью стандартной эндоскопии может повысить точность диагностики, но это может занять много времени и не дать лучших результатов, чем другие инвазивные тесты [9]. В дополнение к традиционной эндоскопии, хромоэндоскопия с феноловым красным также была оценена для диагностики инфекции H. pylori на основе специфической уреазной активности H. pylori . Однако этот метод не является надежным тестом из-за его низкой чувствительности (73% -81%) и низкой специфичности (76% -81%) [10,11].Эндоскопия с увеличением обеспечивает прямое наблюдение микроструктуры поверхности слизистой оболочки желудка, а эндоскопические изображения слизистой оболочки с высоким разрешением тесно связаны с гистопатологическими изменениями, включая инфекцию H. pylori . Чувствительность и специфичность для прогнозирования телесного гастрита с положительным результатом на H. pylori с помощью увеличительной эндоскопии с окрашиванием индигокармином составили 97,6% и 100% соответственно. Однако чувствительность и специфичность снизились до 88.4% и 75,0% соответственно у H. pylori -положительного антрального гастрита [12]. Конфокальная лазерная эндомикроскопия (CLE) — это еще один увеличительный эндоскопический метод, который обеспечивает подповерхностный анализ и in vivo, гистологическое исследование слизистой оболочки желудка во время эндоскопии. Три характеристики, включая белые пятна, нейтрофилы и микроабсцессы, основанные на данных CLE, были использованы для диагностики H. pylori , а точность, чувствительность и специфичность составили 92,8%, 89,2% и 95,7% соответственно [13].Увеличивающая узкополосная визуализация и I-сканирование также использовались для обнаружения инфекции H. pylori , но были представлены различные результаты [14–16]. Различные классификации характеристик изображений от увеличительной эндоскопии обеспечивают различную диагностическую точность, а точность эндоскопического теста также зависит от оператора, что означает, что его использование требует процесса обучения со стороны опытного супервизора и наличия оборудования от местного отделения эндоскопии [17-20]. Более того, тщательное обследование с использованием увеличения с использованием метода улучшения изображения или без него также требует много времени и может причинить больший дискомфорт пациенту, чем другие тесты на основе биопсии.Эти факторы обычно ограничивают клиническое использование увеличительной эндоскопии для выявления инфекции H. pylori в повседневной практике.

Гистология

Гистология обычно считается золотым стандартом при прямом обнаружении инфекции H. pylori , а также первым методом, используемым для обнаружения H. pylori . Однако на диагностическую точность гистологии влияет несколько факторов, таких как место, размер и количество биопсий, методы окрашивания, ингибитор протонной помпы (ИПП), антибиотики и опыт исследующего патолога.Использование ИПП может привести к противоречивым результатам гистологического исследования, поэтому рекомендуется отменить ИПП за 2 недели до проведения гистологического исследования [21]. Дополнительные образцы биопсии, собранные в соответствующем месте для анализа, могут уменьшить количество ошибок выборки и ложноотрицательных результатов в гистологическом тесте, а также в других тестах, основанных на биопсии. В клинической практике обычно рекомендуются биопсии как антрального отдела, так и тела, и получение как минимум двух биоптатов из антрального отдела и тела является наиболее разумной стратегией, гарантирующей максимальный диагностический результат [22,23].Как упоминалось выше, биопсия тела важна для диагностики H. pylori . на фоне атрофического гастрита [7].

Окрашивание является важной частью гистологического исследования, и несколько красок, таких как обычное окрашивание HE, окраска по Гимзе, Вартина-Старри, Hp серебром, толуидиновым синим, акридиновым оранжевым, Макмалленом, Гента, Дитерле и иммуногистохимическим окрашиванием, были использованы для обнаружения H pylori . Хотя иммуногистохимическое окрашивание является наиболее чувствительным и специфическим красителем, окрашивания HE обычно достаточно для диагностики H.pylori в повседневной клинической практике. Дополнительное окрашивание обычно рекомендуется для образцов биопсии, которые выявляют умеренный или тяжелый хронический гастрит, но не H. pylori , идентифицированные при окрашивании HE. Кроме того, иммуногистохимическое окрашивание должно быть первым выбором, если решено использовать вспомогательное окрашивание для обнаружения H. pylori [24,25]. Если иммуногистохимические окрашивания недоступны, окрашивание по Гимзе является предпочтительным методом в клинической практике, поскольку оно простое, высокочувствительное и менее затратное [26].

Пептидная флуоресцентная нуклеиновая кислота in situ Гибридизация (PNA-FISH), которую можно использовать на гистологических препаратах, является высокочувствительным (чувствительность 97%) и специфическим (специфичность 100%) методом диагностики H. pylori. инфекция. PNA-FISH может идентифицировать кокковидную форму H. pylori , которую обычно невозможно обнаружить при рутинном гистологическом исследовании, поскольку этот метод позволяет избежать индивидуальной предвзятости от морфологической идентификации. Кроме того, PNA-FISH — это быстрый, точный и экономичный метод обнаружения H.pylori устойчивость к кларитромицину в образцах биопсии желудка [27–29]. FISH также может сыграть потенциальную роль в обнаружении H. pylori в пробах окружающей среды, и дальнейшие исследования передачи и резервуаров H. pylori в окружающей среде могут быть проведены с использованием FISH [30,31]. Несмотря на преимущества обнаружения H. pylori и устойчивости к кларитромицину одновременно, недостатки PNA-FISH, такие как трудоемкая подготовка, требующая флуоресцентного микроскопа и специальных знаний для чтения слайдов, могут ограничивать широкое использование этого метода. .

БЫСТРЫЕ ИСПЫТАНИЯ МОЧЕИ

Для повседневной клинической практики экспресс-тест на уреазу (RUT) является наиболее полезным инвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori , поскольку он недорогой, быстрый, простой в выполнении, высокоспецифичный и широко доступный . Основываясь на активности фермента уреазы H. pylori , присутствие H. pylori в образце биопсии превращает реагент теста мочевины в аммиак, что приводит к увеличению pH и изменению цвета на мониторе pH.В настоящее время доступны несколько коммерческих тестов на уреазу, включая тесты на геле (CLOtest, HpFast), бумажные тесты (PyloriTek, ProntoDry) и тесты на жидкой основе (UFT300, EndoscHp), а различные коммерческие тестовые тестеры имеют разное время реакции для получения результатов. CLOtest обычно занимает 24 часа, чтобы получить точный результат, тогда как PyloriTek занимает 1 час, а UFT 300 — 5 минут, чтобы обеспечить более быстрые результаты. Считывание тестов на уреазу раньше рекомендованного времени может привести к ложноотрицательным результатам [32]. Помимо дизайна коммерческих наборов, плотность бактерий, присутствующих в образце биопсии, также влияет на время реакции и диагностическую точность RUT, в то время как для получения положительного результата RUT обычно требуется минимум 10000 организмов.Другие факторы, влияющие на диагностическую точность тестов на уреазу, включают антагонисты рецепторов H ₂ , ИПП, соединения висмута, антибиотики, ахлоргидрию и наличие крови, все из которых увеличивают вероятность ложноотрицательных результатов. Кроме того, контаминация биоптатов формалином также снижает чувствительность RUT [21,33-35].

Обычно коммерческие экспресс-тесты на уреазу имеют специфичность выше 95% -100% и чувствительность выше 85% -95%. Увеличение количества биопсий антрального отдела желудка может повысить чувствительность RUT, и образцы двойной биопсии из тела желудка и антрального отдела предпочтительнее, чем образцы биопсии только антрального отдела желудка, поскольку дополнительная биопсия тела увеличивает диагностическую точность и позволяет избежать систематической ошибки выборки из-за неравномерного распределения H.pylori в желудке. Более того, объединение образцов антрального отдела и тела перед RUT, а не отдельных образцов, также увеличило чувствительность RUT и ускорило время реакции [32,36-39]. Перед RUT рекомендуется избегать приема лекарств, влияющих на активность уреазы, а плотность бактерий — для уменьшения ложноотрицательных результатов, например, 2 недели для ИПП и 4 недели для антибиотиков. Кровотечение значительно снижает чувствительность и специфичность RUT и делает RUT более ненадежным тестом, чем другие тесты в этом клиническом состоянии [40].В исследовании, посвященном оценке влияния различного количества и места биопсии на результаты RUT у пациентов с кровотечением из язвенной болезни, было показано, что четыре биопсии из антрального отдела или одна биопсия из тела увеличивают чувствительность RUT по сравнению с только одной биопсией из антрального отдела. В этом исследовании чувствительность одной биопсии антрального отдела составила 64%, тогда как чувствительность четырех биопсий антрального отдела и одной биопсии тела составила 74% и 73% соответственно [41]. Если для пациента с желудочно-кишечным кровотечением по-прежнему выбирается RUT, для повышения точности диагностики предлагалось выполнить биопсию как антрального отдела, так и тела.

Культура

Культивирование H. pylori из образца биопсии желудка — высокоспецифичный, но менее чувствительный метод. В целом, культивирование имеет почти 100% специфичность, но чувствительность культуры значительно варьируется, от 85% до 95%. Из-за деликатной и требовательной природы H. pylori для культивирования in vitro требуется определенная транспортная среда, среда для выращивания и среда для инкубации. Образцы биопсии можно хранить в транспортной среде, такой как Portagerm pylori или транспортная среда Стюарта, до 24 часов при 4 ° C.Для культивирования можно использовать несколько типов агара, поскольку H. pylori выделены. Обычно используемые среды включают агар Pylori, агар Скирроу, кровяной агар Columbia, агар Brucella, инфузию сердца мозга или соевый агар с триптиказой, дополненный кровью овцы или лошади. Чашки с агаром обычно инкубируют в микроаэробной среде (80-90% N ₂ , 5-10% CO ₂ , 5-10% O ₂ ) при температуре от 35 до 37 ° C в течение не менее 5-7 дней, потому что H. pylori считается микроаэрофилом.Однако недавнее исследование показало, что росту H. pylori способствует уровень кислорода в атмосфере с присутствием 10% CO ₂ , в результате чего появилась новая концепция, согласно которой H. pylori может быть капногильным аэробом [42]. Диагностика H. pylori из культуральной среды основана на морфологических характеристиках, а также положительных реакциях на уреазу, каталазу и оксидазу, что означает, что микробиологические лаборатории должны быть оборудованы и обучены для выделения этой бактерии.

Такие условия, как низкое качество образцов, отложенная транспортировка, воздействие аэробной среды или неопытного микробиолога, оказывают неблагоприятное влияние на производительность посева и снижают диагностическую точность [43].Недавнее исследование, проведенное в 26 больницах для анализа влияния времени транспортировки, а также температуры на скорость культивирования, показало, что положительная скорость культивирования снизилась до 26,3% в 48-часовой транспортной группе по сравнению с 32,8% в 24-часовой транспортной группе ( P <0,001 ). Это исследование также показало, что средняя температура повысилась с 4,7 ° C до 29,1 ° C во время транспортировки, что привело к снижению уровня положительных культур с 36,7% до 24,1% [44]. Недавнее развитие транспортной среды - это новая транспортная среда, транспортная среда GESA.Транспортная среда GESA представляет собой полутвердую среду, в которой образцы биопсии желудка могут храниться при 4 ° C в течение до 10 дней и обеспечивать поддающуюся количественной оценке степень восстановления H. pylori (90,7%) [45]. Для культивирования H. pylori в биопсии желудка был также разработан новый двухфазный тест, который сочетал селективный обогащающий бульон и биохимический тест с использованием агара с мочевиной в одном сосуде. В этом небольшом исследовании двухфазный тест был проведен на 55 образцах биопсии и показал 100% положительный прогностический клапан после 48 часов инкубации.Более того, этот метод имел более низкую частоту ложноположительных результатов и требовал более низкой бактериальной нагрузки, примерно 10 ⁵ КОЕ / мл, по сравнению с CLOtest. В то же время этот тест можно было использовать в аэробных условиях и позволять культивирование, а также тестирование чувствительности к антибиотикам [46].

Факторы-хозяева, такие как высокая активность гастрита, низкая бактериальная нагрузка, кровотечение, употребление алкоголя и употребление H ₂ — антагонистов рецепторов, ИПП, антибиотиков, оказывают отрицательное влияние на положительный результат посева.Эти препараты, за исключением антибиотиков, которых следует избегать по крайней мере за 4 недели, также рекомендуется избегать за 2 недели до посева. Чтобы избежать систематической ошибки при выборке из-за неоднородного распределения H. pylori в желудке, было рекомендовано как минимум 2 образца биопсии из антрального отдела и 2 образца биопсии из тела [47,48].

Хотя посев — трудоемкий, дорогой и трудоемкий тест для диагностики H. pylori , тест на чувствительность к антибиотикам H. pylori , полученный с помощью посева, является особым преимуществом в клинической практике.В соответствии с рекомендациями консенсусного отчета Маастрихт IV, культура H. pylori и определение чувствительности к антибиотикам следует проводить, если первичная резистентность к кларитромицину превышает 20% в данном географическом районе или после неэффективности лечения препаратами второй линии [21]. Кроме того, культивирование также позволяет изолировать H. pylori для дальнейшего анализа фенотипических и генотипических характеристик, чтобы лучше понять патогены и, следовательно, предложить оценку терапии.С ростом распространенности устойчивости к антибиотикам культивирование по-прежнему остается надежным методом лечения неэффективности лечения H. pylori , а также изучения устойчивости к антибиотикам в популяционных исследованиях до того, как другие молекулярные тесты станут более доступными.

Полимеразная цепная реакция

С момента применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения инфекции H. pylori , ПЦР широко использовалась для диагностики H. pylori из образцов биопсии желудка, слюны, стула, желудочного сока. сок и разные экземпляры.ПЦР обеспечивает превосходную чувствительность и специфичность, превышающую 95%, по сравнению с другими традиционными тестами и дает более точные результаты обнаружения H. pylori у пациентов с кровотечением. Несколько генов-мишеней, включая UreA , glmM , UreC , 16S рРНК , 23S рРНК , HSP60 и VacA , были использованы для обнаружения H. различные консервативные гены-мишени могут повысить специфичность, что, в свою очередь, позволяет избежать ложноположительных результатов, особенно для образцов, отличных от образцов биопсии желудка.Другие преимущества ПЦР, в том числе меньшее количество бактерий, требуемых в образце, более быстрые результаты и отсутствие необходимости в специальных материалах для обработки или транспортировке, позволяют врачам принимать более быстрое и точное решение о лечении пациента. Кроме того, ПЦР также позволяет одновременно обнаруживать специфические мутации, приводящие к устойчивости к антибиотикам, такие как устойчивость к макролидам и фторхинолонам, и факторы вирулентности, такие как CagA и VacA [49-51].

По сравнению с методом разведения в агаре (Etest), который обычно считается золотым стандартом теста на чувствительность к антибиотикам, ПЦР в реальном времени (RT-PCR) имеет несколько преимуществ.Во-первых, использование фиксированной формальдегидом залитой парафином ткани желудка в ПЦР-тесте более удобно, быстро и чувствительно, чем использование свежего биоптата в Etest, более того, в этих условиях RT-PCR также показала не худшие результаты тестирования чувствительности к антибиотикам, чем Etest. Кроме того, ПЦР более надежна для выявления гетерорезистентного статуса, который часто приводит к ложноотрицательному результату в Etest, следовательно, ПЦР может предоставить более точную информацию для клиницистов перед началом лечения антибиотиками [52].В недавнем исследовании, в котором использовалась ОТ-ПЦР в фиксированных формалином и залитых парафином образцах для выявления инфекции H. pylori и ассоциированного статуса устойчивости к кларитромицину, изучалась эффективность четырехкомпонентной терапии на основе генотипической резистентности в качестве лечения первой линии для 385 пациентов с функциональная диспепсия. В этом исследовании у 136 пациентов (35,3%) была диагностирована инфекция H. pylori , а чувствительность ОТ-ПЦР и гистологического исследования составила 95,6% и 69,9% соответственно.Четырехкратная терапия цитратом калия висмута, рабепразолом, амоксициллином и кларитромицином использовалась для генотипически чувствительных пациентов, в отличие от генотипически резистентных пациентов лечили цитратом висмута калия, рабепразолом, амоксициллином и фуразолидоном. Авторы обнаружили, что уровень эрадикации составил 100% для пациентов с чувствительным к кларитромицину H. pylori и 94% для пациентов с устойчивым к кларитромицину H. pylori соответственно для анализа по протоколу [53].Во-вторых, ОТ-ПЦР также является удобным методом эпидемиологического исследования региональной степени устойчивости к антибиотикам в качестве руководства для эмпирического лечения первой линии. Кроме того, ОТ-ПЦР может обнаруживать точечные мутации, которые вызывают устойчивость к антибиотикам, а также обнаруживать изменение точечной мутации или появление новой мутации, что дает дополнительную информацию для эпидемиологических и молекулярных исследований взаимосвязи генотип-фенотип. Из-за возможного изменения мутаций, которые вызывают устойчивость к антибиотикам со временем, определение более 5 точечных мутаций при использовании методов на основе ПЦР важно для достижения хорошей точности при обнаружении устойчивости к антибиотикам [54-56].

Были описаны генетические мутации, вызывающие устойчивость к кларитромицину (23S рРНК), хинолонам ( gyrA ген), тетрациклину (16S рРНК), рифабутину ( rpoB ген) и амоксициллину ( pbp-1a в предыдущем гене). исследования и несколько коммерческих наборов, таких как набор MutaREAL H. pylori , анализ ПЦР в реальном времени ClariRes и система обнаружения АПФ Seeplex ClaR- H. pylori [57]. Однако точный механизм устойчивости к метронидазолу менее ясен, и гены восприимчивости, такие как rdxA и frxA, участвовали в предыдущих исследованиях с спорными результатами.Недавнее исследование с использованием секвенирования нового поколения Illumina для поиска мутаций-кандидатов на устойчивость к метронидазолу. Это исследование подтвердило, что мутации в гене rdxA играют основную роль в устойчивости к метронидазолу у H. pylori , а мутации в гене frxA могут усиливать устойчивость к метронидазолу только при наличии мутаций rdxA. Кроме того, новое открытие мутаций в гене rpsU может сыграть роль в устойчивости к метронидазолу для объяснения устойчивых к метронидазолу штаммов без мутаций в генах rdxA и frxA [58].Анализ GenoType HelicoDR — это молекулярный тест, сочетающий ПЦР и гибридизацию, позволяющий провести молекулярную дефекацию H. pylori , а также устойчивость к кларитромицину и фторхинолонам в течение 6 часов. В предыдущих исследованиях анализ GenoType HelicoDR с использованием штаммов бактерий или образцов биопсии желудка был высокоточным для устойчивости к кларитромицину с чувствительностью 94–100% и специфичностью 86–99% соответственно; Анализ GenoType HelicoDR также точен для устойчивости к фторхинолонам с чувствительностью 83% -87% и 95% -98.Специфичность 5% соответственно по сравнению с методом на основе культуры [59,60]. Однако недавнее исследование по оценке клинической применимости GenoType HelicoDR в Корее показало, что чувствительность и специфичность в отношении устойчивости к кларитромицину составляли только 55,0% и 80,0% соответственно. GenoType HelicoDR также не был точным для устойчивости к фторхинолонам, показывая чувствительность и специфичность 74,4% и 70,0% соответственно. Клиническая применимость GenoType HelicoDR для определения устойчивости к антибиотикам может иметь некоторые ограничения, которые требуют дальнейшего изучения [61].ОТ-ПЦР обычно используется для количественного определения ДНК H. pylori в образцах биопсии, но выполнение ОТ-ПЦР может быть проблемой для клинических лабораторий из-за дорогостоящих термоциклеров. Мультиплексная ПЦР на основе двойного примирования олигонуклеотидов (DPO) была разработана для обнаружения инфекции H. pylori и устойчивости к кларитромицину, и этот тест можно проводить в любом стандартном термоциклере, который стоит меньше, чем RT-PCR. Благодаря особой конструкции праймера DPO для амплификации рДНК H. pylori 23S и обнаружения наиболее распространенных мутаций, A2142G и A2143G, придающих устойчивость к кларитромицину, DPO-PCR оказалась быстрой и точной для H.pylori диагностика и определение чувствительности к кларитромицину с помощью биоптатов желудка [62,63]. Кроме того, недавнее исследование с использованием образцов тканей, обработанных RUT для оценки диагностической точности DPO-PCR, показало, что DPO-PCR имеет более высокую чувствительность, чем RUT и гистология, а DPO-PCR может обнаружить инфекцию H. pylori в RUT- отрицательные образцы, что означает, что этот тест может уменьшить ложноотрицательный результат и уменьшить необходимость повторного эндоскопического обследования.Степень согласованности DPO-PCR между образцами биопсии желудка и образцами, обработанными RUT, составила 94,4% [64].

Обнаружение факторов вирулентности с помощью ПЦР помогает оценить генетические вариации факторов вирулентности H. pylori и дает больше информации для понимания клинических различий между пациентами, инфицированными разными штаммами H. pylori . Несколько исследований показали, что наличие факторов вирулентности, таких как ген CagA и VacA , связано с более тяжелым воспалением желудка и более высокой распространенностью язвенной болезни и рака желудка [65–67].Ген А промотора язвы двенадцатиперстной кишки (DupA) также предполагалось связать с образованием язв, индуцированным H. pylori , но в предыдущих исследованиях сообщалось о противоречивых результатах, которые предположительно были вызваны несовпадением праймеров. Недавно разработанная ОТ-ПЦР со специальным праймером, разработанным на основе выравнивания всех 221 последовательностей гена DupA, была введена недавно для повышения скорости обнаружения гена DupA. Этот метод повысил уровень обнаружения до 64,2%, независимо от того, имели ли обычно используемые ПЦР уровень обнаружения между 29.От 9% до 37,8%. Авторы указали, что дизайн ПЦР оказал большое влияние на обнаружение фактора вирулентности, и обнаружение специфического аллеля DupA не то же самое, что обнаружение фактического гена DupA [68].

ПЦР также помогает обнаружить H. pylori в пробах окружающей среды для эпидемиологических исследований. Высокая распространенность H. pylori , обнаруженная в образцах питьевой воды с помощью ПЦР, предоставила дополнительную информацию о передаче H. pylori через питьевую воду [69].Более высокий уровень обнаружения заражения H. pylori в немытых овощах свидетельствует о том, что точное мытье овощей снижает загрязнение H. pylori [70]. ПЦР также использовалась для определения генотипирования H. pylori в овощах, и высокая степень сходства в образце генотипирования H. pylori среди образцов овощей и образцов человека позволила предположить, что овощи могут быть источниками бактерий [71].

За исключением более быстрых и высокоточных результатов ПЦР для обнаружения H.pylori и штаммы, устойчивые к антибиотикам, опасения по поводу стоимости, доступного местного оборудования и опыта в области молекулярных методов неизбежно влияют на возможность проведения ПЦР в местных лабораториях.

НЕИНВАЗИВНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

Было сделано несколько попыток избежать использования эндоскопических методов диагностики по нескольким причинам. Прежде всего, эндоскопия — это инвазивная процедура, которая вызывает дискомфорт и не подходит для пациентов с тяжелыми сопутствующими заболеваниями или противопоказаниями. Кроме того, стоимость эндоскопии и дополнительные расходы на эндоскопию, такие как одноразовые щипцы и анестезия, могут быть высокими.И последнее, но не менее важное: систематическая ошибка выборки почти неизбежно встречается в методах, основанных на биопсии, из-за неравномерного распределения H. pylori в желудке.

Дыхательный тест на мочевину

Дыхательный тест на мочевину (UBT) используется уже почти 30 лет и до сих пор остается самым популярным и точным неинвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori . За счет уреазной активности H. pylori , ¹³ C- или ¹⁴ C-меченная мочевина, проглоченная пациентом, гидролизуется до меченого CO ₂ в желудке, затем меченый CO ₂ абсорбируется в желудке. кровь и выдыхаемый при дыхании, в котором можно измерить помеченный CO ₂ .Хотя несколько факторов, включая пациента, бактерии и сам тест, влияют на результаты UBT, UBT — это высокоточный и воспроизводимый тест с чувствительностью и специфичностью около 95% при стандартных процедурах. Недавно опубликованный метаанализ для оценки диагностической точности UBT у взрослых пациентов с диспепсическими симптомами показал, что совокупная чувствительность составила 96% (95% ДИ: 0,95-0,97), а совокупная специфичность составила 93% (95% ДИ: 0,91-0,94). [72]. UBT также полезен для эпидемиологических исследований и для оценки эффективности эрадикационной терапии [21,73].Пациенту следует прекратить прием ИПП за 2 недели и антибиотик за 4 недели до обследования, чтобы избежать ложноотрицательных результатов [74]. Кровотечение также влияет на диагностическую точность UBT, и отсроченное UBT после восстановления после кровотечения обязательно для уменьшения ложноотрицательного результата [75]. Иногда, хотя и редко, присутствие в желудке других патогенов, продуцирующих уреазу, также вызывает ложноположительные результаты.

UBT — подходящий метод со многими преимуществами, такими как простой, неинвазивный и безопасный, для обнаружения H.pylori у педиатрических пациентов, хотя точность UBT у педиатрических пациентов не так хороша, как у взрослых пациентов, особенно для детей младше 6 лет, с чувствительностью и специфичностью от 75% до 100% [76].

¹³ C-UBT предпочтительнее ¹⁴ C-UBT, чтобы избежать воздействия радиации, хотя ¹⁴ C-UBT безопасен для детей и беременных женщин, потому что излучение от ¹⁴ C-UBT ниже чем радиация, полученная из окружающей среды.Однако из-за отсутствия дорогостоящего оборудования и возможности платить высокую стоимость в размере ¹³ C-UBT, ¹⁴ C-UBT более популярны в развивающихся странах. Диагностическая точность между ¹³ C-UBT и ¹⁴ C-UBT не отличается, и оба теста можно считать золотым стандартом среди различных неинвазивных тестов для диагностики инфекции H. pylori [77]. Существует два протокола, некапсулированный и инкапсулированный, которые используются для перорального введения ¹⁴ С-мочевины пациентам для H.pylori диагноз. Первоначально инкапсулированный ¹⁴ C-UBT был разработан, чтобы избежать проблемы гидролиза ¹⁴ C-мочевины под действием продуцирующей уреазу флоры полости рта, и этот метод устранил проблему ложноположительных результатов в пробах из раннего дыхания [78] . Тем не менее, быстрый транзит капсулы, содержащей ¹⁴ C-мочевину, из желудочного тракта или ее неполное рассасывание в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха приводит к инкапсулированию ¹⁴ C-UBT, возможно, не лучшим вариантом, чем протокол без капсул [79 ].В недавнем исследовании использовалась методика динамического сцинтискана для мониторинга судьбы капсулы в желудке и сравнивалась чувствительность между протоколами без инкапсулирования и инкапсулирования у 100 пациентов с диспепсией. Это исследование показало, что неинкапсулированный протокол имел более высокую чувствительность, чем инкапсулированный протокол, а чувствительность инкапсулированного и неинкапсулированного ¹⁴ C-UBT составляла 90,5% и 98,6% через 10 минут и 91,8% и 97,2% через 15 минут соответственно. Неполное разрешение или отсутствие разрешения капсулы ¹⁴ C-мочевины в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха, отмеченное динамическими изображениями сцинтискана, послужило объяснением более низкой чувствительности инкапсулированного ¹⁴ C-UBT по сравнению с неинкапсулированным ¹⁴ C-UBT [80].

Точное значение отсечения для значения дельта по сравнению с исходным уровнем (DOB) для различения между H. pylori -положительными и H. pylori -отрицательными результатами является другой спорной проблемой. Отсечной клапан для UBT был первоначально определен как 5,0, что было наиболее широко рекомендовано, тогда как более низкие значения, 3,0 или 3,5, также были предложены для повышения его точности без ущерба для чувствительности и специфичности этого теста. «Серая зона», в которой результаты UBT неубедительны, упоминалась в предыдущих исследованиях, и пограничное значение DOB, например, очень близкое к выбранной точке отсечения, следует интерпретировать с осторожностью [81].Недавно был представлен новый метод UBT с использованием интегрированной системы выходной спектроскопии с оптическим резонатором, обеспечивающей оптимальную диагностическую точку отсечки. Этот предварительный тест определил диагностическую точку отсечения как совокупный процент восстановленной дозы ¹³ C (c-PDR) = 1,47% через 60 минут и продемонстрировал 100% чувствительность и 100% специфичность с точностью 100% по сравнению с инвазивной эндоскопией. тесты. Однако в этом исследовании используется небольшое количество образцов, и для подтверждения этих результатов необходимы дальнейшие более масштабные исследования [82].

STOOL ANTIGEN TEST

Тест на антиген кала (SAT) — другой неинвазивный метод с хорошей чувствительностью и специфичностью, 94% и 97% соответственно в глобальном метаанализе, при диагностике инфекции H. pylori [83]. Этот метод определяет присутствие H. pylori антигена в образцах стула. Существует два типа SAT, используемых для обнаружения H. pylori, методы, основанные на иммуноферментном анализе (EIA) и иммунохроматографическом анализе (ICA), с использованием либо поликлональных антител, либо моноклональных антител.В настоящее время доступно множество SAT для диагностики инфекции H. pylori , и различная диагностическая точность показана в разных исследованиях с разными SAT и разным дизайном исследований. В целом тесты на основе моноклональных антител более точны, чем тесты на основе поликлональных антител [83], а тесты на основе EIA обеспечивают более надежные результаты, чем тесты на основе ICA [84,85]. В недавнем исследовании EIA на антиген Tesmate pylori (TPAg) с использованием моноклональных антител для проверки нативной каталазы H. pylori было выявлено 92.4% чувствительность и 100% специфичность у взрослых по сравнению с ОТ-ПЦР, а точность этого теста составила 94,9% [86]. Тест Premier Platinum HpSA Plus, другой моноклональный тест на основе EIA, также показал надежные диагностические результаты с чувствительностью 92,2%, специфичностью 94,4% и точностью 93,4% для диагностики инфекции H. pylori по сравнению с другими 4 тестами SAT, включая 1 моноклональный На основе EIA (тест на антиген H. pylori ), на основе 2 моноклональных ICA (тест ImmunoCard STAT! HpSA и H.pylori фекального антигена) и 1 теста на основе поликлонального ICA (одноэтапный тест на антиген H. pylori ), точность которых была ниже 90% [84]. Однако тесты на основе ICA просты в выполнении и не требуют специального оборудования, что делает его подходящим для тестирования в офисе и в развивающихся странах. Новый тест SAT на основе моноклональных ICA, Atlas H. pylori Antigen Test, также был недавно представлен и обеспечивает лучшие результаты, чем предыдущие SAT на основе моноклональных ICA, с 91.Чувствительность 7%, специфичность 100% и точность 96,6% [87].

Помимо UBT, SAT на основе моноклонального EIA также является надежным тестом, рекомендованным руководящими принципами для оценки эффективности эрадикационной терапии H. pylori , и время для тестирования после окончания лечения должно составлять не менее 4 недель [21 , 88]. В предыдущем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность моноклонального SAT для подтверждения эрадикации после терапии составляли 93% и 96% соответственно [83]. В недавних исследованиях было подтверждено, что SAT на основе моноклональных EIA является полезным и точным инструментом для определения результатов H.pylori с чувствительностью 91,6–100% и специфичностью 93,6–98,4% [89, 90]. Кроме того, моноклональные тесты SAT на основе ICA, RAPID Hp StAR и ImmunoCard STAT! HpSA также дает многообещающие результаты с чувствительностью 90,0–100% и специфичностью 93,6–94,9%.

В дополнение к оценке эрадикационной терапии, моноклональный САТ является удобным, неинвазивным и полезным тестом для диагностики инфекции H. pylori у педиатрических пациентов [91]. Исследование с применением SAT у детей в возрасте от 6 до 30 месяцев показало надежные результаты SAT для диагностики H.pylori у детей раннего возраста [92]. Недавний метаанализ, включающий 45 исследований и 5931 пациента, для оценки эффективности SATS у детей показал, что совокупная чувствительность и специфичность составили 92,1% и 94,1% соответственно. В анализе подгрупп чувствительность и специфичность моноклонального SAT, поликлонального SAT и одноэтапного быстрого моноклонального SAT составила 96,2% и 94,7%, 88,0% и 93,0% и 88,1% и 94,2% соответственно. Моноклональная SAT — надежный тест для диагностики инфекции H. pylori у детей [93].Более того, SAT — полезный инструмент для программ эпидемиологического исследования и скрининга [94,95]. По стоимости и оснащению SAT больше подходит для массовых опросов, чем UBT. По сравнению с серологическими тестами, которые обычно используются для скрининга, SAT дает более надежные результаты в диагностике инфекции H. pylori . Однако предыдущее исследование показало, что SAT был менее точным, чем серологический тест у пациентов с тяжелым атрофическим гастритом, и влияние этого результата требует дальнейшей оценки для оценки роли SAT в скрининге H.pylori -ассоциированные заболевания, такие как рак желудка [96]. В то время как другое исследование с использованием нового SAT на основе поликлонального EIA (EZ-STEP H. pylori ) обнаружило наличие атрофического гастрита и / или кишечной метаплазии, которые существенно не повлияли на результаты SAT [97].

На точность SAT влияет несколько факторов, таких как антибиотик, ИПП, N-ацетилцистеин, дефекация и кровотечение из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Сохранность образца, такая как температура и время транспортировки перед испытанием, а также отсечной клапан также влияют на диагностическую точность SAT [98-100].

ИСПЫТАНИЯ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛ

Для диагностики H. pylori широко доступны многочисленные серологические тесты, основанные на обнаружении антител IgG к H. pylori, и тест EIA является наиболее распространенным и точным методом среди них. Серологические тесты также часто используются при скрининге для эпидемиологических исследований из-за их недорогой, быстрой и приемлемости для пациентов. Кроме того, серологический тест полезен для оценки инфекции H. pylori у детей.Недавнее исследование с использованием E-Plate, коммерческого набора сывороточных антител, для сравнения эффективности серологического теста с SAT у 73 детей показало, что чувствительность, специфичность и отношение правдоподобия для серологического теста составили 91,2%, 97,4% и 35,6%. , соответственно. Эти результаты были получены при использовании запорного клапана, рекомендованного для взрослых, у детей [101]. Поскольку точность серологических тестов зависит от антигена, используемого в коммерческом наборе, и степени распространенности конкретных штаммов H. pylori , используемых в качестве источника антигена.Надлежащие антигены, используя либо местные штаммы в качестве источника антигена, либо объединяющие антигены из штаммов разных групп, а также надежное пороговое значение серологического теста должны быть проверены на местном уровне перед исследованием популяции [102,103]. Некоторые иммуногенные белки, такие как CagA, VacA, UreA, Omp и GroEL, были использованы в качестве кандидатов для обнаружения инфекции. Белок H. pylori FliD, важный элемент в сборке функциональных жгутиков, также признан новым маркером для серологической диагностики H.pylori с чувствительностью и специфичностью 99% и 97% соответственно [104]. Недавно для серологической диагностики инфекции H. pylori был введен новый метод иммуноанализа «РекомЛайн H. pylori » с использованием шести высокоиммуногенных факторов вирулентности (CagA, VacA, GroEL, gGT, HcpC и UreA). В отличие от EIA и иммуноблоттинга, RecomLine позволяет идентифицировать специфический ответ антител против различных антигенов H. pylori и увеличивает дискриминирующую способность.По сравнению с гистологией, рекомЛайн показала чувствительность и специфичность 97,6% и 96,2% соответственно. РекомЛайн также является полезным инструментом для идентификации специфических факторов вирулентности H. pylori [105,106].

Другое преимущество серологического теста заключается в том, что на точность серологических тестов не влияют язвенное кровотечение, атрофия желудка, а также использование ИПП или антибиотиков, которые вызывают ложноотрицательные результаты в других инвазивных или неинвазивных тестах. Однако серологический тест не является надежным тестом для оценки эрадикационной терапии, поскольку уровни антител могут сохраняться в крови в течение длительных периодов времени даже после успешной эрадикации [21].Поскольку серологические тесты не различают активную инфекцию и прошлое воздействие H. pylori , перед эрадикационной терапией требуется дополнительное подтверждение другими тестами.

Как и SAT, серологические тесты на основе EIA имеют лучшую точность, чем тесты на основе ICA. Недавнее исследование, сравнивающее 29 коммерческих серологических тестов (17 на основе EIA и 12 на основе ICA), показало, что точность 9 из 17 тестов на основе EIA была выше 90%, тогда как только один из 12 тестов на основе ICA имел точность> 90 %.Гетерогенные характеристики также наблюдались между различными серологическими тестами, выявление чувствительности варьировалось от 57,8% до 100%, а специфичность варьировалась от 58,7% до 96,8% в тестах на основе EIA; Чувствительность варьировала от 55,6% до 97,8%, а специфичность — от 60,3% до 96,8% в тестах на основе ICA. Серологические тесты следует выбирать правильно в соответствии с их конкретными рабочими параметрами для достижения различных целей, таких как скрининг, первоначальный диагноз или подтверждение другого теста [107].

Серологический тест также играет важную роль в изучении факторов патогенеза и вирулентности, поскольку некоторые антигенные белки могут быть обнаружены иммунологическими методами и имеют дополнительную диагностическую ценность.Было предпринято несколько попыток найти потенциальные биомаркеры для идентификации пациента, инфицированного штаммом H. pylori высокого риска, с помощью серологических тестов. Уровни пепсиногена (PG) I, PG II и соотношения PG I / II в сочетании с антителом H. pylori широко используются для прогнозирования атрофического гастрита и риска рака желудка [108,109]. Соотношение PG I / II также может быть полезно для наблюдения за раком желудка у пациентов после эрадикационной терапии [110]. Однако получены противоречивые результаты по клиническому применению этих серологических препаратов.Недавнее исследование, оценивающее точность GastroPanel, который измеряет гастрин-17, антитела H. pylori , PG I и PG II, для выявления атрофического гастрита, показало только 50% чувствительность и 80% специфичность, что было хуже, чем в предыдущих исследованиях [111 ]. Пепсиногеновый тест также оказался недостаточно точным для диагностики рака желудка с чувствительностью 71,0% и специфичностью 69,2% [112]. Некоторые факторы вирулентности также были оценены для прогнозирования заболеваний, ассоциированных с H. pylori .Присутствие сывороточных антител CagA, VacA и GroEL у пациентов с инфекцией H. pylori связано с предраковыми поражениями желудка, а также с раком желудка, и эти сывороточные маркеры могут служить потенциальными предикторами для пациентов, инфицированных штаммами высокого риска, которые могут быть связано с развитием рака желудка [106,113]. Хотя связь между факторами вирулентности и клиническими проявлениями была обнаружена в ходе предыдущих эпидемиологических исследований, серологические тесты все еще недостаточно надежны для диагностики рака желудка.В недавнем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность антител CagA, используемых для диагностики рака желудка, составила 71% и 40% соответственно, а диагностическое отношение шансов составило 2,11 [114].

Обнаружение H. pylori IgG в моче также оценивалось у детей в предыдущих исследованиях, однако были представлены различные результаты [115,116]. Кроме того, диагностическая точность теста на основе ИФА для выявления IgG в слюне H. pylori также была недостаточной в качестве надежного теста [117,118].Определение антител в моче или слюне менее точное, чем другие тесты, и его не рекомендуется использовать при ведении пациентов [119].

ДИАГНОСТИКА

Использование ПЦР для обнаружения H. pylori в кале является надежным и быстрым методом, особенно привлекательным для детей в качестве неинвазивного теста. ПЦР стула также дает преимущества в идентификации конкретных генотипов и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам [120,121].Полость рта считается внегастральным резервуаром H. pylori , хотя значение H. pylori в полости рта как источника повторного инфицирования или пути передачи все еще неясно. Слюна и зубной налет были образцами, обычно используемыми для обнаружения H. pylori в полости рта, а ПЦР была наиболее распространенным и надежным тестом, используемым в недавних исследованиях. RUT и посев также были выполнены для выявления орального H. pylori в ранних исследованиях.Распространенность обнаружения H. pylori в полости рта сильно варьировала, от 0% до 100%, и обычно обнаруживалась более низкая распространенность в слюне по сравнению с зубным налетом [122]. Широкие различия в распространенности H. pylori в полости рта могут быть связаны с разными методологиями, разными популяциями и разными праймерами, использованными в исследованиях. Недавние исследования были сосредоточены на модификации праймера для повышения диагностической точности или оценке нового метода преодоления ограничений ПЦР.Недавно была разработана новая система ПЦР с использованием наборов праймеров, специфичных для H. pylori на основе высококонсервативных последовательностей полных геномов 48 штаммов H. pylori , для повышения диагностической точности ПЦР в полости рта [123] . Петлевая изотермическая амплификация (LAMP), новый метод высокоспецифичной и чувствительной амплификации ДНК, сравнивалась с ПЦР по скорости обнаружения H. pylori в образцах зубного налета в небольшом исследовании, в котором приняли участие 45 участников.Это исследование показало, что LAMP имеет более высокий уровень обнаружения, чем ПЦР, и уровень обнаружения H. pylori в образцах зубного налета с помощью LAMP и ПЦР составляет 66,67% и 44% соответственно [124].

ДИАГНОСТИКА

Основной наконечник: В настоящее время доступны несколько тестов для диагностики Helicobacter pylori (H. pylori ).pylori ) инфекция. В этом обзоре мы сосредоточимся на полезности и ограничениях современных диагностических методов, а также на последних разработках этих тестов, которые способствуют повышению диагностической точности. Кроме того, мы также подчеркиваем обнаружение H. pylori в образцах из полости рта и у пациентов с различными клиническими обстоятельствами, включая кровотечение, постгастрэктомию и постэрадикационную терапию.

ВВЕДЕНИЕ

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является грамотрицательным микроаэробным патогеном человека, а инфекция H. pylori тесно связана со многими гастродуоденальными заболеваниями, включая хронический активный гастрит, язвенную болезнь, атрофический гастрит, лимфому лимфоидной ткани слизистой оболочки (MALT) и некардиальный рак желудка. . Инфекция H. pylori поражает более половины взрослого населения во всем мире, но распространенность инфекции H. pylori широко варьируется в зависимости от географического региона, возраста, расы и социально-экономического статуса.Обычно распространенность инфекции H. pylori увеличивается с возрастом в большинстве стран, однако в последние десятилетия при анализе временных тенденций в нескольких крупных популяциях наблюдалось снижение распространенности инфекции H. pylori [1]. Более 80% язвенной болезни вызывается инфекцией H. pylori , а предполагаемый риск развития язвенной болезни в течение жизни у пациентов, инфицированных H. pylori , составляет примерно 15% [2]. Рак желудка является третьей по значимости причиной смерти от рака во всем мире, а случаев H.pylori является причиной 74,7% всех случаев некардиального рака желудка [3,4]. Рак желудка и язвенная болезнь вместе вызывают более миллиона смертей в год в мире, и инфекция H. pylori всегда является важной проблемой для здоровья [5]. Для выявления инфекции H. pylori разработаны различные диагностические методы, и диагностические тесты с высокой чувствительностью и специфичностью, превышающей 90%, необходимы для точной диагностики инфекции H. pylori в клинической практике.Хотя сейчас доступно множество диагностических тестов, каждый метод имеет свои преимущества, недостатки и ограничения. Выбор того или иного метода может зависеть от наличия и доступности диагностических тестов, уровня лабораторий, клинического состояния пациентов и отношения вероятности положительных и отрицательных тестов при различных клинических обстоятельствах. Диагностические тесты обычно делятся на инвазивные (эндоскопические) и неинвазивные методы. Инвазивные диагностические тесты включают эндоскопическое изображение, гистологию, экспресс-тест на уреазу, культивирование и молекулярные методы.Неинвазивные диагностические тесты включали дыхательный тест на мочевину, тест на антиген стула, серологические и молекулярные исследования. В данной статье мы кратко рассмотрим текущие варианты и разработки диагностических тестов и связанных с ними приложений в клинической практике, а также выбор диагностических тестов для различных клинических состояний (таблица).

Таблица 1

Варианты диагностики инфекции Helicobacter pylori при различных клинических обстоятельствах и особые применения диагностических тестов

.pylori

Большинство признаков слизистой оболочки желудка, таких как покраснение, отек слизистой оболочки или узелковое изменение, при обычной эндоскопии недостаточно специфичны для диагностики инфекции H. pylori и не имеют большого значения для точного диагноза [8].Хотя тщательное наблюдение за картиной слизистой оболочки желудка с помощью стандартной эндоскопии может повысить точность диагностики, но это может занять много времени и не дать лучших результатов, чем другие инвазивные тесты [9]. В дополнение к традиционной эндоскопии, хромоэндоскопия с феноловым красным также была оценена для диагностики инфекции H. pylori на основе специфической уреазной активности H. pylori . Однако этот метод не является надежным тестом из-за его низкой чувствительности (73% -81%) и низкой специфичности (76% -81%) [10,11].Эндоскопия с увеличением обеспечивает прямое наблюдение микроструктуры поверхности слизистой оболочки желудка, а эндоскопические изображения слизистой оболочки с высоким разрешением тесно связаны с гистопатологическими изменениями, включая инфекцию H. pylori . Чувствительность и специфичность для прогнозирования телесного гастрита с положительным результатом на H. pylori с помощью увеличительной эндоскопии с окрашиванием индигокармином составили 97,6% и 100% соответственно. Однако чувствительность и специфичность снизились до 88.4% и 75,0% соответственно у H. pylori -положительного антрального гастрита [12]. Конфокальная лазерная эндомикроскопия (CLE) — это еще один увеличительный эндоскопический метод, который обеспечивает подповерхностный анализ и in vivo, гистологическое исследование слизистой оболочки желудка во время эндоскопии. Три характеристики, включая белые пятна, нейтрофилы и микроабсцессы, основанные на данных CLE, были использованы для диагностики H. pylori , а точность, чувствительность и специфичность составили 92,8%, 89,2% и 95,7% соответственно [13].Увеличивающая узкополосная визуализация и I-сканирование также использовались для обнаружения инфекции H. pylori , но были представлены различные результаты [14–16]. Различные классификации характеристик изображений от увеличительной эндоскопии обеспечивают различную диагностическую точность, а точность эндоскопического теста также зависит от оператора, что означает, что его использование требует процесса обучения со стороны опытного супервизора и наличия оборудования от местного отделения эндоскопии [17-20]. Более того, тщательное обследование с использованием увеличения с использованием метода улучшения изображения или без него также требует много времени и может причинить больший дискомфорт пациенту, чем другие тесты на основе биопсии.Эти факторы обычно ограничивают клиническое использование увеличительной эндоскопии для выявления инфекции H. pylori в повседневной практике.

Гистология

Гистология обычно считается золотым стандартом при прямом обнаружении инфекции H. pylori , а также первым методом, используемым для обнаружения H. pylori . Однако на диагностическую точность гистологии влияет несколько факторов, таких как место, размер и количество биопсий, методы окрашивания, ингибитор протонной помпы (ИПП), антибиотики и опыт исследующего патолога.Использование ИПП может привести к противоречивым результатам гистологического исследования, поэтому рекомендуется отменить ИПП за 2 недели до проведения гистологического исследования [21]. Дополнительные образцы биопсии, собранные в соответствующем месте для анализа, могут уменьшить количество ошибок выборки и ложноотрицательных результатов в гистологическом тесте, а также в других тестах, основанных на биопсии. В клинической практике обычно рекомендуются биопсии как антрального отдела, так и тела, и получение как минимум двух биоптатов из антрального отдела и тела является наиболее разумной стратегией, гарантирующей максимальный диагностический результат [22,23].Как упоминалось выше, биопсия тела важна для диагностики H. pylori . на фоне атрофического гастрита [7].

Окрашивание является важной частью гистологического исследования, и несколько красок, таких как обычное окрашивание HE, окраска по Гимзе, Вартина-Старри, Hp серебром, толуидиновым синим, акридиновым оранжевым, Макмалленом, Гента, Дитерле и иммуногистохимическим окрашиванием, были использованы для обнаружения H pylori . Хотя иммуногистохимическое окрашивание является наиболее чувствительным и специфическим красителем, окрашивания HE обычно достаточно для диагностики H.pylori в повседневной клинической практике. Дополнительное окрашивание обычно рекомендуется для образцов биопсии, которые выявляют умеренный или тяжелый хронический гастрит, но не H. pylori , идентифицированные при окрашивании HE. Кроме того, иммуногистохимическое окрашивание должно быть первым выбором, если решено использовать вспомогательное окрашивание для обнаружения H. pylori [24,25]. Если иммуногистохимические окрашивания недоступны, окрашивание по Гимзе является предпочтительным методом в клинической практике, поскольку оно простое, высокочувствительное и менее затратное [26].

Пептидная флуоресцентная нуклеиновая кислота in situ Гибридизация (PNA-FISH), которую можно использовать на гистологических препаратах, является высокочувствительным (чувствительность 97%) и специфическим (специфичность 100%) методом диагностики H. pylori. инфекция. PNA-FISH может идентифицировать кокковидную форму H. pylori , которую обычно невозможно обнаружить при рутинном гистологическом исследовании, поскольку этот метод позволяет избежать индивидуальной предвзятости от морфологической идентификации. Кроме того, PNA-FISH — это быстрый, точный и экономичный метод обнаружения H.pylori устойчивость к кларитромицину в образцах биопсии желудка [27–29]. FISH также может сыграть потенциальную роль в обнаружении H. pylori в пробах окружающей среды, и дальнейшие исследования передачи и резервуаров H. pylori в окружающей среде могут быть проведены с использованием FISH [30,31]. Несмотря на преимущества обнаружения H. pylori и устойчивости к кларитромицину одновременно, недостатки PNA-FISH, такие как трудоемкая подготовка, требующая флуоресцентного микроскопа и специальных знаний для чтения слайдов, могут ограничивать широкое использование этого метода. .

БЫСТРЫЕ ИСПЫТАНИЯ МОЧЕИ

Для повседневной клинической практики экспресс-тест на уреазу (RUT) является наиболее полезным инвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori , поскольку он недорогой, быстрый, простой в выполнении, высокоспецифичный и широко доступный . Основываясь на активности фермента уреазы H. pylori , присутствие H. pylori в образце биопсии превращает реагент теста мочевины в аммиак, что приводит к увеличению pH и изменению цвета на мониторе pH.В настоящее время доступны несколько коммерческих тестов на уреазу, включая тесты на геле (CLOtest, HpFast), бумажные тесты (PyloriTek, ProntoDry) и тесты на жидкой основе (UFT300, EndoscHp), а различные коммерческие тестовые тестеры имеют разное время реакции для получения результатов. CLOtest обычно занимает 24 часа, чтобы получить точный результат, тогда как PyloriTek занимает 1 час, а UFT 300 — 5 минут, чтобы обеспечить более быстрые результаты. Считывание тестов на уреазу раньше рекомендованного времени может привести к ложноотрицательным результатам [32]. Помимо дизайна коммерческих наборов, плотность бактерий, присутствующих в образце биопсии, также влияет на время реакции и диагностическую точность RUT, в то время как для получения положительного результата RUT обычно требуется минимум 10000 организмов.Другие факторы, влияющие на диагностическую точность тестов на уреазу, включают антагонисты рецепторов H ₂ , ИПП, соединения висмута, антибиотики, ахлоргидрию и наличие крови, все из которых увеличивают вероятность ложноотрицательных результатов. Кроме того, контаминация биоптатов формалином также снижает чувствительность RUT [21,33-35].

Обычно коммерческие экспресс-тесты на уреазу имеют специфичность выше 95% -100% и чувствительность выше 85% -95%. Увеличение количества биопсий антрального отдела желудка может повысить чувствительность RUT, и образцы двойной биопсии из тела желудка и антрального отдела предпочтительнее, чем образцы биопсии только антрального отдела желудка, поскольку дополнительная биопсия тела увеличивает диагностическую точность и позволяет избежать систематической ошибки выборки из-за неравномерного распределения H.pylori в желудке. Более того, объединение образцов антрального отдела и тела перед RUT, а не отдельных образцов, также увеличило чувствительность RUT и ускорило время реакции [32,36-39]. Перед RUT рекомендуется избегать приема лекарств, влияющих на активность уреазы, а плотность бактерий — для уменьшения ложноотрицательных результатов, например, 2 недели для ИПП и 4 недели для антибиотиков. Кровотечение значительно снижает чувствительность и специфичность RUT и делает RUT более ненадежным тестом, чем другие тесты в этом клиническом состоянии [40].В исследовании, посвященном оценке влияния различного количества и места биопсии на результаты RUT у пациентов с кровотечением из язвенной болезни, было показано, что четыре биопсии из антрального отдела или одна биопсия из тела увеличивают чувствительность RUT по сравнению с только одной биопсией из антрального отдела. В этом исследовании чувствительность одной биопсии антрального отдела составила 64%, тогда как чувствительность четырех биопсий антрального отдела и одной биопсии тела составила 74% и 73% соответственно [41]. Если для пациента с желудочно-кишечным кровотечением по-прежнему выбирается RUT, для повышения точности диагностики предлагалось выполнить биопсию как антрального отдела, так и тела.

Культура

Культивирование H. pylori из образца биопсии желудка — высокоспецифичный, но менее чувствительный метод. В целом, культивирование имеет почти 100% специфичность, но чувствительность культуры значительно варьируется, от 85% до 95%. Из-за деликатной и требовательной природы H. pylori для культивирования in vitro требуется определенная транспортная среда, среда для выращивания и среда для инкубации. Образцы биопсии можно хранить в транспортной среде, такой как Portagerm pylori или транспортная среда Стюарта, до 24 часов при 4 ° C.Для культивирования можно использовать несколько типов агара, поскольку H. pylori выделены. Обычно используемые среды включают агар Pylori, агар Скирроу, кровяной агар Columbia, агар Brucella, инфузию сердца мозга или соевый агар с триптиказой, дополненный кровью овцы или лошади. Чашки с агаром обычно инкубируют в микроаэробной среде (80-90% N ₂ , 5-10% CO ₂ , 5-10% O ₂ ) при температуре от 35 до 37 ° C в течение не менее 5-7 дней, потому что H. pylori считается микроаэрофилом.Однако недавнее исследование показало, что росту H. pylori способствует уровень кислорода в атмосфере с присутствием 10% CO ₂ , в результате чего появилась новая концепция, согласно которой H. pylori может быть капногильным аэробом [42]. Диагностика H. pylori из культуральной среды основана на морфологических характеристиках, а также положительных реакциях на уреазу, каталазу и оксидазу, что означает, что микробиологические лаборатории должны быть оборудованы и обучены для выделения этой бактерии.

Такие условия, как низкое качество образцов, отложенная транспортировка, воздействие аэробной среды или неопытного микробиолога, оказывают неблагоприятное влияние на производительность посева и снижают диагностическую точность [43].Недавнее исследование, проведенное в 26 больницах для анализа влияния времени транспортировки, а также температуры на скорость культивирования, показало, что положительная скорость культивирования снизилась до 26,3% в 48-часовой транспортной группе по сравнению с 32,8% в 24-часовой транспортной группе ( P <0,001 ). Это исследование также показало, что средняя температура повысилась с 4,7 ° C до 29,1 ° C во время транспортировки, что привело к снижению уровня положительных культур с 36,7% до 24,1% [44]. Недавнее развитие транспортной среды - это новая транспортная среда, транспортная среда GESA.Транспортная среда GESA представляет собой полутвердую среду, в которой образцы биопсии желудка могут храниться при 4 ° C в течение до 10 дней и обеспечивать поддающуюся количественной оценке степень восстановления H. pylori (90,7%) [45]. Для культивирования H. pylori в биопсии желудка был также разработан новый двухфазный тест, который сочетал селективный обогащающий бульон и биохимический тест с использованием агара с мочевиной в одном сосуде. В этом небольшом исследовании двухфазный тест был проведен на 55 образцах биопсии и показал 100% положительный прогностический клапан после 48 часов инкубации.Более того, этот метод имел более низкую частоту ложноположительных результатов и требовал более низкой бактериальной нагрузки, примерно 10 ⁵ КОЕ / мл, по сравнению с CLOtest. В то же время этот тест можно было использовать в аэробных условиях и позволять культивирование, а также тестирование чувствительности к антибиотикам [46].

Факторы-хозяева, такие как высокая активность гастрита, низкая бактериальная нагрузка, кровотечение, употребление алкоголя и употребление H ₂ — антагонистов рецепторов, ИПП, антибиотиков, оказывают отрицательное влияние на положительный результат посева.Эти препараты, за исключением антибиотиков, которых следует избегать по крайней мере за 4 недели, также рекомендуется избегать за 2 недели до посева. Чтобы избежать систематической ошибки при выборке из-за неоднородного распределения H. pylori в желудке, было рекомендовано как минимум 2 образца биопсии из антрального отдела и 2 образца биопсии из тела [47,48].

Хотя посев — трудоемкий, дорогой и трудоемкий тест для диагностики H. pylori , тест на чувствительность к антибиотикам H. pylori , полученный с помощью посева, является особым преимуществом в клинической практике.В соответствии с рекомендациями консенсусного отчета Маастрихт IV, культура H. pylori и определение чувствительности к антибиотикам следует проводить, если первичная резистентность к кларитромицину превышает 20% в данном географическом районе или после неэффективности лечения препаратами второй линии [21]. Кроме того, культивирование также позволяет изолировать H. pylori для дальнейшего анализа фенотипических и генотипических характеристик, чтобы лучше понять патогены и, следовательно, предложить оценку терапии.С ростом распространенности устойчивости к антибиотикам культивирование по-прежнему остается надежным методом лечения неэффективности лечения H. pylori , а также изучения устойчивости к антибиотикам в популяционных исследованиях до того, как другие молекулярные тесты станут более доступными.

Полимеразная цепная реакция

С момента применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения инфекции H. pylori , ПЦР широко использовалась для диагностики H. pylori из образцов биопсии желудка, слюны, стула, желудочного сока. сок и разные экземпляры.ПЦР обеспечивает превосходную чувствительность и специфичность, превышающую 95%, по сравнению с другими традиционными тестами и дает более точные результаты обнаружения H. pylori у пациентов с кровотечением. Несколько генов-мишеней, включая UreA , glmM , UreC , 16S рРНК , 23S рРНК , HSP60 и VacA , были использованы для обнаружения H. различные консервативные гены-мишени могут повысить специфичность, что, в свою очередь, позволяет избежать ложноположительных результатов, особенно для образцов, отличных от образцов биопсии желудка.Другие преимущества ПЦР, в том числе меньшее количество бактерий, требуемых в образце, более быстрые результаты и отсутствие необходимости в специальных материалах для обработки или транспортировке, позволяют врачам принимать более быстрое и точное решение о лечении пациента. Кроме того, ПЦР также позволяет одновременно обнаруживать специфические мутации, приводящие к устойчивости к антибиотикам, такие как устойчивость к макролидам и фторхинолонам, и факторы вирулентности, такие как CagA и VacA [49-51].

По сравнению с методом разведения в агаре (Etest), который обычно считается золотым стандартом теста на чувствительность к антибиотикам, ПЦР в реальном времени (RT-PCR) имеет несколько преимуществ.Во-первых, использование фиксированной формальдегидом залитой парафином ткани желудка в ПЦР-тесте более удобно, быстро и чувствительно, чем использование свежего биоптата в Etest, более того, в этих условиях RT-PCR также показала не худшие результаты тестирования чувствительности к антибиотикам, чем Etest. Кроме того, ПЦР более надежна для выявления гетерорезистентного статуса, который часто приводит к ложноотрицательному результату в Etest, следовательно, ПЦР может предоставить более точную информацию для клиницистов перед началом лечения антибиотиками [52].В недавнем исследовании, в котором использовалась ОТ-ПЦР в фиксированных формалином и залитых парафином образцах для выявления инфекции H. pylori и ассоциированного статуса устойчивости к кларитромицину, изучалась эффективность четырехкомпонентной терапии на основе генотипической резистентности в качестве лечения первой линии для 385 пациентов с функциональная диспепсия. В этом исследовании у 136 пациентов (35,3%) была диагностирована инфекция H. pylori , а чувствительность ОТ-ПЦР и гистологического исследования составила 95,6% и 69,9% соответственно.Четырехкратная терапия цитратом калия висмута, рабепразолом, амоксициллином и кларитромицином использовалась для генотипически чувствительных пациентов, в отличие от генотипически резистентных пациентов лечили цитратом висмута калия, рабепразолом, амоксициллином и фуразолидоном. Авторы обнаружили, что уровень эрадикации составил 100% для пациентов с чувствительным к кларитромицину H. pylori и 94% для пациентов с устойчивым к кларитромицину H. pylori соответственно для анализа по протоколу [53].Во-вторых, ОТ-ПЦР также является удобным методом эпидемиологического исследования региональной степени устойчивости к антибиотикам в качестве руководства для эмпирического лечения первой линии. Кроме того, ОТ-ПЦР может обнаруживать точечные мутации, которые вызывают устойчивость к антибиотикам, а также обнаруживать изменение точечной мутации или появление новой мутации, что дает дополнительную информацию для эпидемиологических и молекулярных исследований взаимосвязи генотип-фенотип. Из-за возможного изменения мутаций, которые вызывают устойчивость к антибиотикам со временем, определение более 5 точечных мутаций при использовании методов на основе ПЦР важно для достижения хорошей точности при обнаружении устойчивости к антибиотикам [54-56].

Были описаны генетические мутации, вызывающие устойчивость к кларитромицину (23S рРНК), хинолонам ( gyrA ген), тетрациклину (16S рРНК), рифабутину ( rpoB ген) и амоксициллину ( pbp-1a в предыдущем гене). исследования и несколько коммерческих наборов, таких как набор MutaREAL H. pylori , анализ ПЦР в реальном времени ClariRes и система обнаружения АПФ Seeplex ClaR- H. pylori [57]. Однако точный механизм устойчивости к метронидазолу менее ясен, и гены восприимчивости, такие как rdxA и frxA, участвовали в предыдущих исследованиях с спорными результатами.Недавнее исследование с использованием секвенирования нового поколения Illumina для поиска мутаций-кандидатов на устойчивость к метронидазолу. Это исследование подтвердило, что мутации в гене rdxA играют основную роль в устойчивости к метронидазолу у H. pylori , а мутации в гене frxA могут усиливать устойчивость к метронидазолу только при наличии мутаций rdxA. Кроме того, новое открытие мутаций в гене rpsU может сыграть роль в устойчивости к метронидазолу для объяснения устойчивых к метронидазолу штаммов без мутаций в генах rdxA и frxA [58].Анализ GenoType HelicoDR — это молекулярный тест, сочетающий ПЦР и гибридизацию, позволяющий провести молекулярную дефекацию H. pylori , а также устойчивость к кларитромицину и фторхинолонам в течение 6 часов. В предыдущих исследованиях анализ GenoType HelicoDR с использованием штаммов бактерий или образцов биопсии желудка был высокоточным для устойчивости к кларитромицину с чувствительностью 94–100% и специфичностью 86–99% соответственно; Анализ GenoType HelicoDR также точен для устойчивости к фторхинолонам с чувствительностью 83% -87% и 95% -98.Специфичность 5% соответственно по сравнению с методом на основе культуры [59,60]. Однако недавнее исследование по оценке клинической применимости GenoType HelicoDR в Корее показало, что чувствительность и специфичность в отношении устойчивости к кларитромицину составляли только 55,0% и 80,0% соответственно. GenoType HelicoDR также не был точным для устойчивости к фторхинолонам, показывая чувствительность и специфичность 74,4% и 70,0% соответственно. Клиническая применимость GenoType HelicoDR для определения устойчивости к антибиотикам может иметь некоторые ограничения, которые требуют дальнейшего изучения [61].ОТ-ПЦР обычно используется для количественного определения ДНК H. pylori в образцах биопсии, но выполнение ОТ-ПЦР может быть проблемой для клинических лабораторий из-за дорогостоящих термоциклеров. Мультиплексная ПЦР на основе двойного примирования олигонуклеотидов (DPO) была разработана для обнаружения инфекции H. pylori и устойчивости к кларитромицину, и этот тест можно проводить в любом стандартном термоциклере, который стоит меньше, чем RT-PCR. Благодаря особой конструкции праймера DPO для амплификации рДНК H. pylori 23S и обнаружения наиболее распространенных мутаций, A2142G и A2143G, придающих устойчивость к кларитромицину, DPO-PCR оказалась быстрой и точной для H.pylori диагностика и определение чувствительности к кларитромицину с помощью биоптатов желудка [62,63]. Кроме того, недавнее исследование с использованием образцов тканей, обработанных RUT для оценки диагностической точности DPO-PCR, показало, что DPO-PCR имеет более высокую чувствительность, чем RUT и гистология, а DPO-PCR может обнаружить инфекцию H. pylori в RUT- отрицательные образцы, что означает, что этот тест может уменьшить ложноотрицательный результат и уменьшить необходимость повторного эндоскопического обследования.Степень согласованности DPO-PCR между образцами биопсии желудка и образцами, обработанными RUT, составила 94,4% [64].

Обнаружение факторов вирулентности с помощью ПЦР помогает оценить генетические вариации факторов вирулентности H. pylori и дает больше информации для понимания клинических различий между пациентами, инфицированными разными штаммами H. pylori . Несколько исследований показали, что наличие факторов вирулентности, таких как ген CagA и VacA , связано с более тяжелым воспалением желудка и более высокой распространенностью язвенной болезни и рака желудка [65–67].Ген А промотора язвы двенадцатиперстной кишки (DupA) также предполагалось связать с образованием язв, индуцированным H. pylori , но в предыдущих исследованиях сообщалось о противоречивых результатах, которые предположительно были вызваны несовпадением праймеров. Недавно разработанная ОТ-ПЦР со специальным праймером, разработанным на основе выравнивания всех 221 последовательностей гена DupA, была введена недавно для повышения скорости обнаружения гена DupA. Этот метод повысил уровень обнаружения до 64,2%, независимо от того, имели ли обычно используемые ПЦР уровень обнаружения между 29.От 9% до 37,8%. Авторы указали, что дизайн ПЦР оказал большое влияние на обнаружение фактора вирулентности, и обнаружение специфического аллеля DupA не то же самое, что обнаружение фактического гена DupA [68].

ПЦР также помогает обнаружить H. pylori в пробах окружающей среды для эпидемиологических исследований. Высокая распространенность H. pylori , обнаруженная в образцах питьевой воды с помощью ПЦР, предоставила дополнительную информацию о передаче H. pylori через питьевую воду [69].Более высокий уровень обнаружения заражения H. pylori в немытых овощах свидетельствует о том, что точное мытье овощей снижает загрязнение H. pylori [70]. ПЦР также использовалась для определения генотипирования H. pylori в овощах, и высокая степень сходства в образце генотипирования H. pylori среди образцов овощей и образцов человека позволила предположить, что овощи могут быть источниками бактерий [71].

За исключением более быстрых и высокоточных результатов ПЦР для обнаружения H.pylori и штаммы, устойчивые к антибиотикам, опасения по поводу стоимости, доступного местного оборудования и опыта в области молекулярных методов неизбежно влияют на возможность проведения ПЦР в местных лабораториях.

НЕИНВАЗИВНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

Было сделано несколько попыток избежать использования эндоскопических методов диагностики по нескольким причинам. Прежде всего, эндоскопия — это инвазивная процедура, которая вызывает дискомфорт и не подходит для пациентов с тяжелыми сопутствующими заболеваниями или противопоказаниями. Кроме того, стоимость эндоскопии и дополнительные расходы на эндоскопию, такие как одноразовые щипцы и анестезия, могут быть высокими.И последнее, но не менее важное: систематическая ошибка выборки почти неизбежно встречается в методах, основанных на биопсии, из-за неравномерного распределения H. pylori в желудке.

Дыхательный тест на мочевину

Дыхательный тест на мочевину (UBT) используется уже почти 30 лет и до сих пор остается самым популярным и точным неинвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori . За счет уреазной активности H. pylori , ¹³ C- или ¹⁴ C-меченная мочевина, проглоченная пациентом, гидролизуется до меченого CO ₂ в желудке, затем меченый CO ₂ абсорбируется в желудке. кровь и выдыхаемый при дыхании, в котором можно измерить помеченный CO ₂ .Хотя несколько факторов, включая пациента, бактерии и сам тест, влияют на результаты UBT, UBT — это высокоточный и воспроизводимый тест с чувствительностью и специфичностью около 95% при стандартных процедурах. Недавно опубликованный метаанализ для оценки диагностической точности UBT у взрослых пациентов с диспепсическими симптомами показал, что совокупная чувствительность составила 96% (95% ДИ: 0,95-0,97), а совокупная специфичность составила 93% (95% ДИ: 0,91-0,94). [72]. UBT также полезен для эпидемиологических исследований и для оценки эффективности эрадикационной терапии [21,73].Пациенту следует прекратить прием ИПП за 2 недели и антибиотик за 4 недели до обследования, чтобы избежать ложноотрицательных результатов [74]. Кровотечение также влияет на диагностическую точность UBT, и отсроченное UBT после восстановления после кровотечения обязательно для уменьшения ложноотрицательного результата [75]. Иногда, хотя и редко, присутствие в желудке других патогенов, продуцирующих уреазу, также вызывает ложноположительные результаты.

UBT — подходящий метод со многими преимуществами, такими как простой, неинвазивный и безопасный, для обнаружения H.pylori у педиатрических пациентов, хотя точность UBT у педиатрических пациентов не так хороша, как у взрослых пациентов, особенно для детей младше 6 лет, с чувствительностью и специфичностью от 75% до 100% [76].

¹³ C-UBT предпочтительнее ¹⁴ C-UBT, чтобы избежать воздействия радиации, хотя ¹⁴ C-UBT безопасен для детей и беременных женщин, потому что излучение от ¹⁴ C-UBT ниже чем радиация, полученная из окружающей среды.Однако из-за отсутствия дорогостоящего оборудования и возможности платить высокую стоимость в размере ¹³ C-UBT, ¹⁴ C-UBT более популярны в развивающихся странах. Диагностическая точность между ¹³ C-UBT и ¹⁴ C-UBT не отличается, и оба теста можно считать золотым стандартом среди различных неинвазивных тестов для диагностики инфекции H. pylori [77]. Существует два протокола, некапсулированный и инкапсулированный, которые используются для перорального введения ¹⁴ С-мочевины пациентам для H.pylori диагноз. Первоначально инкапсулированный ¹⁴ C-UBT был разработан, чтобы избежать проблемы гидролиза ¹⁴ C-мочевины под действием продуцирующей уреазу флоры полости рта, и этот метод устранил проблему ложноположительных результатов в пробах из раннего дыхания [78] . Тем не менее, быстрый транзит капсулы, содержащей ¹⁴ C-мочевину, из желудочного тракта или ее неполное рассасывание в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха приводит к инкапсулированию ¹⁴ C-UBT, возможно, не лучшим вариантом, чем протокол без капсул [79 ].В недавнем исследовании использовалась методика динамического сцинтискана для мониторинга судьбы капсулы в желудке и сравнивалась чувствительность между протоколами без инкапсулирования и инкапсулирования у 100 пациентов с диспепсией. Это исследование показало, что неинкапсулированный протокол имел более высокую чувствительность, чем инкапсулированный протокол, а чувствительность инкапсулированного и неинкапсулированного ¹⁴ C-UBT составляла 90,5% и 98,6% через 10 минут и 91,8% и 97,2% через 15 минут соответственно. Неполное разрешение или отсутствие разрешения капсулы ¹⁴ C-мочевины в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха, отмеченное динамическими изображениями сцинтискана, послужило объяснением более низкой чувствительности инкапсулированного ¹⁴ C-UBT по сравнению с неинкапсулированным ¹⁴ C-UBT [80].

Точное значение отсечения для значения дельта по сравнению с исходным уровнем (DOB) для различения между H. pylori -положительными и H. pylori -отрицательными результатами является другой спорной проблемой. Отсечной клапан для UBT был первоначально определен как 5,0, что было наиболее широко рекомендовано, тогда как более низкие значения, 3,0 или 3,5, также были предложены для повышения его точности без ущерба для чувствительности и специфичности этого теста. «Серая зона», в которой результаты UBT неубедительны, упоминалась в предыдущих исследованиях, и пограничное значение DOB, например, очень близкое к выбранной точке отсечения, следует интерпретировать с осторожностью [81].Недавно был представлен новый метод UBT с использованием интегрированной системы выходной спектроскопии с оптическим резонатором, обеспечивающей оптимальную диагностическую точку отсечки. Этот предварительный тест определил диагностическую точку отсечения как совокупный процент восстановленной дозы ¹³ C (c-PDR) = 1,47% через 60 минут и продемонстрировал 100% чувствительность и 100% специфичность с точностью 100% по сравнению с инвазивной эндоскопией. тесты. Однако в этом исследовании используется небольшое количество образцов, и для подтверждения этих результатов необходимы дальнейшие более масштабные исследования [82].

STOOL ANTIGEN TEST

Тест на антиген кала (SAT) — другой неинвазивный метод с хорошей чувствительностью и специфичностью, 94% и 97% соответственно в глобальном метаанализе, при диагностике инфекции H. pylori [83]. Этот метод определяет присутствие H. pylori антигена в образцах стула. Существует два типа SAT, используемых для обнаружения H. pylori, методы, основанные на иммуноферментном анализе (EIA) и иммунохроматографическом анализе (ICA), с использованием либо поликлональных антител, либо моноклональных антител.В настоящее время доступно множество SAT для диагностики инфекции H. pylori , и различная диагностическая точность показана в разных исследованиях с разными SAT и разным дизайном исследований. В целом тесты на основе моноклональных антител более точны, чем тесты на основе поликлональных антител [83], а тесты на основе EIA обеспечивают более надежные результаты, чем тесты на основе ICA [84,85]. В недавнем исследовании EIA на антиген Tesmate pylori (TPAg) с использованием моноклональных антител для проверки нативной каталазы H. pylori было выявлено 92.4% чувствительность и 100% специфичность у взрослых по сравнению с ОТ-ПЦР, а точность этого теста составила 94,9% [86]. Тест Premier Platinum HpSA Plus, другой моноклональный тест на основе EIA, также показал надежные диагностические результаты с чувствительностью 92,2%, специфичностью 94,4% и точностью 93,4% для диагностики инфекции H. pylori по сравнению с другими 4 тестами SAT, включая 1 моноклональный На основе EIA (тест на антиген H. pylori ), на основе 2 моноклональных ICA (тест ImmunoCard STAT! HpSA и H.pylori фекального антигена) и 1 теста на основе поликлонального ICA (одноэтапный тест на антиген H. pylori ), точность которых была ниже 90% [84]. Однако тесты на основе ICA просты в выполнении и не требуют специального оборудования, что делает его подходящим для тестирования в офисе и в развивающихся странах. Новый тест SAT на основе моноклональных ICA, Atlas H. pylori Antigen Test, также был недавно представлен и обеспечивает лучшие результаты, чем предыдущие SAT на основе моноклональных ICA, с 91.Чувствительность 7%, специфичность 100% и точность 96,6% [87].

Помимо UBT, SAT на основе моноклонального EIA также является надежным тестом, рекомендованным руководящими принципами для оценки эффективности эрадикационной терапии H. pylori , и время для тестирования после окончания лечения должно составлять не менее 4 недель [21 , 88]. В предыдущем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность моноклонального SAT для подтверждения эрадикации после терапии составляли 93% и 96% соответственно [83]. В недавних исследованиях было подтверждено, что SAT на основе моноклональных EIA является полезным и точным инструментом для определения результатов H.pylori с чувствительностью 91,6–100% и специфичностью 93,6–98,4% [89, 90]. Кроме того, моноклональные тесты SAT на основе ICA, RAPID Hp StAR и ImmunoCard STAT! HpSA также дает многообещающие результаты с чувствительностью 90,0–100% и специфичностью 93,6–94,9%.

В дополнение к оценке эрадикационной терапии, моноклональный САТ является удобным, неинвазивным и полезным тестом для диагностики инфекции H. pylori у педиатрических пациентов [91]. Исследование с применением SAT у детей в возрасте от 6 до 30 месяцев показало надежные результаты SAT для диагностики H.pylori у детей раннего возраста [92]. Недавний метаанализ, включающий 45 исследований и 5931 пациента, для оценки эффективности SATS у детей показал, что совокупная чувствительность и специфичность составили 92,1% и 94,1% соответственно. В анализе подгрупп чувствительность и специфичность моноклонального SAT, поликлонального SAT и одноэтапного быстрого моноклонального SAT составила 96,2% и 94,7%, 88,0% и 93,0% и 88,1% и 94,2% соответственно. Моноклональная SAT — надежный тест для диагностики инфекции H. pylori у детей [93].Более того, SAT — полезный инструмент для программ эпидемиологического исследования и скрининга [94,95]. По стоимости и оснащению SAT больше подходит для массовых опросов, чем UBT. По сравнению с серологическими тестами, которые обычно используются для скрининга, SAT дает более надежные результаты в диагностике инфекции H. pylori . Однако предыдущее исследование показало, что SAT был менее точным, чем серологический тест у пациентов с тяжелым атрофическим гастритом, и влияние этого результата требует дальнейшей оценки для оценки роли SAT в скрининге H.pylori -ассоциированные заболевания, такие как рак желудка [96]. В то время как другое исследование с использованием нового SAT на основе поликлонального EIA (EZ-STEP H. pylori ) обнаружило наличие атрофического гастрита и / или кишечной метаплазии, которые существенно не повлияли на результаты SAT [97].

На точность SAT влияет несколько факторов, таких как антибиотик, ИПП, N-ацетилцистеин, дефекация и кровотечение из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Сохранность образца, такая как температура и время транспортировки перед испытанием, а также отсечной клапан также влияют на диагностическую точность SAT [98-100].

ИСПЫТАНИЯ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛ

Для диагностики H. pylori широко доступны многочисленные серологические тесты, основанные на обнаружении антител IgG к H. pylori, и тест EIA является наиболее распространенным и точным методом среди них. Серологические тесты также часто используются при скрининге для эпидемиологических исследований из-за их недорогой, быстрой и приемлемости для пациентов. Кроме того, серологический тест полезен для оценки инфекции H. pylori у детей.Недавнее исследование с использованием E-Plate, коммерческого набора сывороточных антител, для сравнения эффективности серологического теста с SAT у 73 детей показало, что чувствительность, специфичность и отношение правдоподобия для серологического теста составили 91,2%, 97,4% и 35,6%. , соответственно. Эти результаты были получены при использовании запорного клапана, рекомендованного для взрослых, у детей [101]. Поскольку точность серологических тестов зависит от антигена, используемого в коммерческом наборе, и степени распространенности конкретных штаммов H. pylori , используемых в качестве источника антигена.Надлежащие антигены, используя либо местные штаммы в качестве источника антигена, либо объединяющие антигены из штаммов разных групп, а также надежное пороговое значение серологического теста должны быть проверены на местном уровне перед исследованием популяции [102,103]. Некоторые иммуногенные белки, такие как CagA, VacA, UreA, Omp и GroEL, были использованы в качестве кандидатов для обнаружения инфекции. Белок H. pylori FliD, важный элемент в сборке функциональных жгутиков, также признан новым маркером для серологической диагностики H.pylori с чувствительностью и специфичностью 99% и 97% соответственно [104]. Недавно для серологической диагностики инфекции H. pylori был введен новый метод иммуноанализа «РекомЛайн H. pylori » с использованием шести высокоиммуногенных факторов вирулентности (CagA, VacA, GroEL, gGT, HcpC и UreA). В отличие от EIA и иммуноблоттинга, RecomLine позволяет идентифицировать специфический ответ антител против различных антигенов H. pylori и увеличивает дискриминирующую способность.По сравнению с гистологией, рекомЛайн показала чувствительность и специфичность 97,6% и 96,2% соответственно. РекомЛайн также является полезным инструментом для идентификации специфических факторов вирулентности H. pylori [105,106].

Другое преимущество серологического теста заключается в том, что на точность серологических тестов не влияют язвенное кровотечение, атрофия желудка, а также использование ИПП или антибиотиков, которые вызывают ложноотрицательные результаты в других инвазивных или неинвазивных тестах. Однако серологический тест не является надежным тестом для оценки эрадикационной терапии, поскольку уровни антител могут сохраняться в крови в течение длительных периодов времени даже после успешной эрадикации [21].Поскольку серологические тесты не различают активную инфекцию и прошлое воздействие H. pylori , перед эрадикационной терапией требуется дополнительное подтверждение другими тестами.

Как и SAT, серологические тесты на основе EIA имеют лучшую точность, чем тесты на основе ICA. Недавнее исследование, сравнивающее 29 коммерческих серологических тестов (17 на основе EIA и 12 на основе ICA), показало, что точность 9 из 17 тестов на основе EIA была выше 90%, тогда как только один из 12 тестов на основе ICA имел точность> 90 %.Гетерогенные характеристики также наблюдались между различными серологическими тестами, выявление чувствительности варьировалось от 57,8% до 100%, а специфичность варьировалась от 58,7% до 96,8% в тестах на основе EIA; Чувствительность варьировала от 55,6% до 97,8%, а специфичность — от 60,3% до 96,8% в тестах на основе ICA. Серологические тесты следует выбирать правильно в соответствии с их конкретными рабочими параметрами для достижения различных целей, таких как скрининг, первоначальный диагноз или подтверждение другого теста [107].

Серологический тест также играет важную роль в изучении факторов патогенеза и вирулентности, поскольку некоторые антигенные белки могут быть обнаружены иммунологическими методами и имеют дополнительную диагностическую ценность.Было предпринято несколько попыток найти потенциальные биомаркеры для идентификации пациента, инфицированного штаммом H. pylori высокого риска, с помощью серологических тестов. Уровни пепсиногена (PG) I, PG II и соотношения PG I / II в сочетании с антителом H. pylori широко используются для прогнозирования атрофического гастрита и риска рака желудка [108,109]. Соотношение PG I / II также может быть полезно для наблюдения за раком желудка у пациентов после эрадикационной терапии [110]. Однако получены противоречивые результаты по клиническому применению этих серологических препаратов.Недавнее исследование, оценивающее точность GastroPanel, который измеряет гастрин-17, антитела H. pylori , PG I и PG II, для выявления атрофического гастрита, показало только 50% чувствительность и 80% специфичность, что было хуже, чем в предыдущих исследованиях [111 ]. Пепсиногеновый тест также оказался недостаточно точным для диагностики рака желудка с чувствительностью 71,0% и специфичностью 69,2% [112]. Некоторые факторы вирулентности также были оценены для прогнозирования заболеваний, ассоциированных с H. pylori .Присутствие сывороточных антител CagA, VacA и GroEL у пациентов с инфекцией H. pylori связано с предраковыми поражениями желудка, а также с раком желудка, и эти сывороточные маркеры могут служить потенциальными предикторами для пациентов, инфицированных штаммами высокого риска, которые могут быть связано с развитием рака желудка [106,113]. Хотя связь между факторами вирулентности и клиническими проявлениями была обнаружена в ходе предыдущих эпидемиологических исследований, серологические тесты все еще недостаточно надежны для диагностики рака желудка.В недавнем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность антител CagA, используемых для диагностики рака желудка, составила 71% и 40% соответственно, а диагностическое отношение шансов составило 2,11 [114].

Обнаружение H. pylori IgG в моче также оценивалось у детей в предыдущих исследованиях, однако были представлены различные результаты [115,116]. Кроме того, диагностическая точность теста на основе ИФА для выявления IgG в слюне H. pylori также была недостаточной в качестве надежного теста [117,118].Определение антител в моче или слюне менее точное, чем другие тесты, и его не рекомендуется использовать при ведении пациентов [119].

ДИАГНОСТИКА

Использование ПЦР для обнаружения H. pylori в кале является надежным и быстрым методом, особенно привлекательным для детей в качестве неинвазивного теста. ПЦР стула также дает преимущества в идентификации конкретных генотипов и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам [120,121].Полость рта считается внегастральным резервуаром H. pylori , хотя значение H. pylori в полости рта как источника повторного инфицирования или пути передачи все еще неясно. Слюна и зубной налет были образцами, обычно используемыми для обнаружения H. pylori в полости рта, а ПЦР была наиболее распространенным и надежным тестом, используемым в недавних исследованиях. RUT и посев также были выполнены для выявления орального H. pylori в ранних исследованиях.Распространенность обнаружения H. pylori в полости рта сильно варьировала, от 0% до 100%, и обычно обнаруживалась более низкая распространенность в слюне по сравнению с зубным налетом [122]. Широкие различия в распространенности H. pylori в полости рта могут быть связаны с разными методологиями, разными популяциями и разными праймерами, использованными в исследованиях. Недавние исследования были сосредоточены на модификации праймера для повышения диагностической точности или оценке нового метода преодоления ограничений ПЦР.Недавно была разработана новая система ПЦР с использованием наборов праймеров, специфичных для H. pylori на основе высококонсервативных последовательностей полных геномов 48 штаммов H. pylori , для повышения диагностической точности ПЦР в полости рта [123] . Петлевая изотермическая амплификация (LAMP), новый метод высокоспецифичной и чувствительной амплификации ДНК, сравнивалась с ПЦР по скорости обнаружения H. pylori в образцах зубного налета в небольшом исследовании, в котором приняли участие 45 участников.Это исследование показало, что LAMP имеет более высокий уровень обнаружения, чем ПЦР, и уровень обнаружения H. pylori в образцах зубного налета с помощью LAMP и ПЦР составляет 66,67% и 44% соответственно [124].

ДИАГНОСТИКА

Основной наконечник: В настоящее время доступны несколько тестов для диагностики Helicobacter pylori (H. pylori ).pylori ) инфекция. В этом обзоре мы сосредоточимся на полезности и ограничениях современных диагностических методов, а также на последних разработках этих тестов, которые способствуют повышению диагностической точности. Кроме того, мы также подчеркиваем обнаружение H. pylori в образцах из полости рта и у пациентов с различными клиническими обстоятельствами, включая кровотечение, постгастрэктомию и постэрадикационную терапию.

ВВЕДЕНИЕ

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является грамотрицательным микроаэробным патогеном человека, а инфекция H. pylori тесно связана со многими гастродуоденальными заболеваниями, включая хронический активный гастрит, язвенную болезнь, атрофический гастрит, лимфому лимфоидной ткани слизистой оболочки (MALT) и некардиальный рак желудка. . Инфекция H. pylori поражает более половины взрослого населения во всем мире, но распространенность инфекции H. pylori широко варьируется в зависимости от географического региона, возраста, расы и социально-экономического статуса.Обычно распространенность инфекции H. pylori увеличивается с возрастом в большинстве стран, однако в последние десятилетия при анализе временных тенденций в нескольких крупных популяциях наблюдалось снижение распространенности инфекции H. pylori [1]. Более 80% язвенной болезни вызывается инфекцией H. pylori , а предполагаемый риск развития язвенной болезни в течение жизни у пациентов, инфицированных H. pylori , составляет примерно 15% [2]. Рак желудка является третьей по значимости причиной смерти от рака во всем мире, а случаев H.pylori является причиной 74,7% всех случаев некардиального рака желудка [3,4]. Рак желудка и язвенная болезнь вместе вызывают более миллиона смертей в год в мире, и инфекция H. pylori всегда является важной проблемой для здоровья [5]. Для выявления инфекции H. pylori разработаны различные диагностические методы, и диагностические тесты с высокой чувствительностью и специфичностью, превышающей 90%, необходимы для точной диагностики инфекции H. pylori в клинической практике.Хотя сейчас доступно множество диагностических тестов, каждый метод имеет свои преимущества, недостатки и ограничения. Выбор того или иного метода может зависеть от наличия и доступности диагностических тестов, уровня лабораторий, клинического состояния пациентов и отношения вероятности положительных и отрицательных тестов при различных клинических обстоятельствах. Диагностические тесты обычно делятся на инвазивные (эндоскопические) и неинвазивные методы. Инвазивные диагностические тесты включают эндоскопическое изображение, гистологию, экспресс-тест на уреазу, культивирование и молекулярные методы.Неинвазивные диагностические тесты включали дыхательный тест на мочевину, тест на антиген стула, серологические и молекулярные исследования. В данной статье мы кратко рассмотрим текущие варианты и разработки диагностических тестов и связанных с ними приложений в клинической практике, а также выбор диагностических тестов для различных клинических состояний (таблица).

Таблица 1

Варианты диагностики инфекции Helicobacter pylori при различных клинических обстоятельствах и особые применения диагностических тестов

.pylori

Большинство признаков слизистой оболочки желудка, таких как покраснение, отек слизистой оболочки или узелковое изменение, при обычной эндоскопии недостаточно специфичны для диагностики инфекции H. pylori и не имеют большого значения для точного диагноза [8].Хотя тщательное наблюдение за картиной слизистой оболочки желудка с помощью стандартной эндоскопии может повысить точность диагностики, но это может занять много времени и не дать лучших результатов, чем другие инвазивные тесты [9]. В дополнение к традиционной эндоскопии, хромоэндоскопия с феноловым красным также была оценена для диагностики инфекции H. pylori на основе специфической уреазной активности H. pylori . Однако этот метод не является надежным тестом из-за его низкой чувствительности (73% -81%) и низкой специфичности (76% -81%) [10,11].Эндоскопия с увеличением обеспечивает прямое наблюдение микроструктуры поверхности слизистой оболочки желудка, а эндоскопические изображения слизистой оболочки с высоким разрешением тесно связаны с гистопатологическими изменениями, включая инфекцию H. pylori . Чувствительность и специфичность для прогнозирования телесного гастрита с положительным результатом на H. pylori с помощью увеличительной эндоскопии с окрашиванием индигокармином составили 97,6% и 100% соответственно. Однако чувствительность и специфичность снизились до 88.4% и 75,0% соответственно у H. pylori -положительного антрального гастрита [12]. Конфокальная лазерная эндомикроскопия (CLE) — это еще один увеличительный эндоскопический метод, который обеспечивает подповерхностный анализ и in vivo, гистологическое исследование слизистой оболочки желудка во время эндоскопии. Три характеристики, включая белые пятна, нейтрофилы и микроабсцессы, основанные на данных CLE, были использованы для диагностики H. pylori , а точность, чувствительность и специфичность составили 92,8%, 89,2% и 95,7% соответственно [13].Увеличивающая узкополосная визуализация и I-сканирование также использовались для обнаружения инфекции H. pylori , но были представлены различные результаты [14–16]. Различные классификации характеристик изображений от увеличительной эндоскопии обеспечивают различную диагностическую точность, а точность эндоскопического теста также зависит от оператора, что означает, что его использование требует процесса обучения со стороны опытного супервизора и наличия оборудования от местного отделения эндоскопии [17-20]. Более того, тщательное обследование с использованием увеличения с использованием метода улучшения изображения или без него также требует много времени и может причинить больший дискомфорт пациенту, чем другие тесты на основе биопсии.Эти факторы обычно ограничивают клиническое использование увеличительной эндоскопии для выявления инфекции H. pylori в повседневной практике.

Гистология

Гистология обычно считается золотым стандартом при прямом обнаружении инфекции H. pylori , а также первым методом, используемым для обнаружения H. pylori . Однако на диагностическую точность гистологии влияет несколько факторов, таких как место, размер и количество биопсий, методы окрашивания, ингибитор протонной помпы (ИПП), антибиотики и опыт исследующего патолога.Использование ИПП может привести к противоречивым результатам гистологического исследования, поэтому рекомендуется отменить ИПП за 2 недели до проведения гистологического исследования [21]. Дополнительные образцы биопсии, собранные в соответствующем месте для анализа, могут уменьшить количество ошибок выборки и ложноотрицательных результатов в гистологическом тесте, а также в других тестах, основанных на биопсии. В клинической практике обычно рекомендуются биопсии как антрального отдела, так и тела, и получение как минимум двух биоптатов из антрального отдела и тела является наиболее разумной стратегией, гарантирующей максимальный диагностический результат [22,23].Как упоминалось выше, биопсия тела важна для диагностики H. pylori . на фоне атрофического гастрита [7].

Окрашивание является важной частью гистологического исследования, и несколько красок, таких как обычное окрашивание HE, окраска по Гимзе, Вартина-Старри, Hp серебром, толуидиновым синим, акридиновым оранжевым, Макмалленом, Гента, Дитерле и иммуногистохимическим окрашиванием, были использованы для обнаружения H pylori . Хотя иммуногистохимическое окрашивание является наиболее чувствительным и специфическим красителем, окрашивания HE обычно достаточно для диагностики H.pylori в повседневной клинической практике. Дополнительное окрашивание обычно рекомендуется для образцов биопсии, которые выявляют умеренный или тяжелый хронический гастрит, но не H. pylori , идентифицированные при окрашивании HE. Кроме того, иммуногистохимическое окрашивание должно быть первым выбором, если решено использовать вспомогательное окрашивание для обнаружения H. pylori [24,25]. Если иммуногистохимические окрашивания недоступны, окрашивание по Гимзе является предпочтительным методом в клинической практике, поскольку оно простое, высокочувствительное и менее затратное [26].

Пептидная флуоресцентная нуклеиновая кислота in situ Гибридизация (PNA-FISH), которую можно использовать на гистологических препаратах, является высокочувствительным (чувствительность 97%) и специфическим (специфичность 100%) методом диагностики H. pylori. инфекция. PNA-FISH может идентифицировать кокковидную форму H. pylori , которую обычно невозможно обнаружить при рутинном гистологическом исследовании, поскольку этот метод позволяет избежать индивидуальной предвзятости от морфологической идентификации. Кроме того, PNA-FISH — это быстрый, точный и экономичный метод обнаружения H.pylori устойчивость к кларитромицину в образцах биопсии желудка [27–29]. FISH также может сыграть потенциальную роль в обнаружении H. pylori в пробах окружающей среды, и дальнейшие исследования передачи и резервуаров H. pylori в окружающей среде могут быть проведены с использованием FISH [30,31]. Несмотря на преимущества обнаружения H. pylori и устойчивости к кларитромицину одновременно, недостатки PNA-FISH, такие как трудоемкая подготовка, требующая флуоресцентного микроскопа и специальных знаний для чтения слайдов, могут ограничивать широкое использование этого метода. .

БЫСТРЫЕ ИСПЫТАНИЯ МОЧЕИ

Для повседневной клинической практики экспресс-тест на уреазу (RUT) является наиболее полезным инвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori , поскольку он недорогой, быстрый, простой в выполнении, высокоспецифичный и широко доступный . Основываясь на активности фермента уреазы H. pylori , присутствие H. pylori в образце биопсии превращает реагент теста мочевины в аммиак, что приводит к увеличению pH и изменению цвета на мониторе pH.В настоящее время доступны несколько коммерческих тестов на уреазу, включая тесты на геле (CLOtest, HpFast), бумажные тесты (PyloriTek, ProntoDry) и тесты на жидкой основе (UFT300, EndoscHp), а различные коммерческие тестовые тестеры имеют разное время реакции для получения результатов. CLOtest обычно занимает 24 часа, чтобы получить точный результат, тогда как PyloriTek занимает 1 час, а UFT 300 — 5 минут, чтобы обеспечить более быстрые результаты. Считывание тестов на уреазу раньше рекомендованного времени может привести к ложноотрицательным результатам [32]. Помимо дизайна коммерческих наборов, плотность бактерий, присутствующих в образце биопсии, также влияет на время реакции и диагностическую точность RUT, в то время как для получения положительного результата RUT обычно требуется минимум 10000 организмов.Другие факторы, влияющие на диагностическую точность тестов на уреазу, включают антагонисты рецепторов H ₂ , ИПП, соединения висмута, антибиотики, ахлоргидрию и наличие крови, все из которых увеличивают вероятность ложноотрицательных результатов. Кроме того, контаминация биоптатов формалином также снижает чувствительность RUT [21,33-35].

Обычно коммерческие экспресс-тесты на уреазу имеют специфичность выше 95% -100% и чувствительность выше 85% -95%. Увеличение количества биопсий антрального отдела желудка может повысить чувствительность RUT, и образцы двойной биопсии из тела желудка и антрального отдела предпочтительнее, чем образцы биопсии только антрального отдела желудка, поскольку дополнительная биопсия тела увеличивает диагностическую точность и позволяет избежать систематической ошибки выборки из-за неравномерного распределения H.pylori в желудке. Более того, объединение образцов антрального отдела и тела перед RUT, а не отдельных образцов, также увеличило чувствительность RUT и ускорило время реакции [32,36-39]. Перед RUT рекомендуется избегать приема лекарств, влияющих на активность уреазы, а плотность бактерий — для уменьшения ложноотрицательных результатов, например, 2 недели для ИПП и 4 недели для антибиотиков. Кровотечение значительно снижает чувствительность и специфичность RUT и делает RUT более ненадежным тестом, чем другие тесты в этом клиническом состоянии [40].В исследовании, посвященном оценке влияния различного количества и места биопсии на результаты RUT у пациентов с кровотечением из язвенной болезни, было показано, что четыре биопсии из антрального отдела или одна биопсия из тела увеличивают чувствительность RUT по сравнению с только одной биопсией из антрального отдела. В этом исследовании чувствительность одной биопсии антрального отдела составила 64%, тогда как чувствительность четырех биопсий антрального отдела и одной биопсии тела составила 74% и 73% соответственно [41]. Если для пациента с желудочно-кишечным кровотечением по-прежнему выбирается RUT, для повышения точности диагностики предлагалось выполнить биопсию как антрального отдела, так и тела.

Культура

Культивирование H. pylori из образца биопсии желудка — высокоспецифичный, но менее чувствительный метод. В целом, культивирование имеет почти 100% специфичность, но чувствительность культуры значительно варьируется, от 85% до 95%. Из-за деликатной и требовательной природы H. pylori для культивирования in vitro требуется определенная транспортная среда, среда для выращивания и среда для инкубации. Образцы биопсии можно хранить в транспортной среде, такой как Portagerm pylori или транспортная среда Стюарта, до 24 часов при 4 ° C.Для культивирования можно использовать несколько типов агара, поскольку H. pylori выделены. Обычно используемые среды включают агар Pylori, агар Скирроу, кровяной агар Columbia, агар Brucella, инфузию сердца мозга или соевый агар с триптиказой, дополненный кровью овцы или лошади. Чашки с агаром обычно инкубируют в микроаэробной среде (80-90% N ₂ , 5-10% CO ₂ , 5-10% O ₂ ) при температуре от 35 до 37 ° C в течение не менее 5-7 дней, потому что H. pylori считается микроаэрофилом.Однако недавнее исследование показало, что росту H. pylori способствует уровень кислорода в атмосфере с присутствием 10% CO ₂ , в результате чего появилась новая концепция, согласно которой H. pylori может быть капногильным аэробом [42]. Диагностика H. pylori из культуральной среды основана на морфологических характеристиках, а также положительных реакциях на уреазу, каталазу и оксидазу, что означает, что микробиологические лаборатории должны быть оборудованы и обучены для выделения этой бактерии.

Такие условия, как низкое качество образцов, отложенная транспортировка, воздействие аэробной среды или неопытного микробиолога, оказывают неблагоприятное влияние на производительность посева и снижают диагностическую точность [43].Недавнее исследование, проведенное в 26 больницах для анализа влияния времени транспортировки, а также температуры на скорость культивирования, показало, что положительная скорость культивирования снизилась до 26,3% в 48-часовой транспортной группе по сравнению с 32,8% в 24-часовой транспортной группе ( P <0,001 ). Это исследование также показало, что средняя температура повысилась с 4,7 ° C до 29,1 ° C во время транспортировки, что привело к снижению уровня положительных культур с 36,7% до 24,1% [44]. Недавнее развитие транспортной среды - это новая транспортная среда, транспортная среда GESA.Транспортная среда GESA представляет собой полутвердую среду, в которой образцы биопсии желудка могут храниться при 4 ° C в течение до 10 дней и обеспечивать поддающуюся количественной оценке степень восстановления H. pylori (90,7%) [45]. Для культивирования H. pylori в биопсии желудка был также разработан новый двухфазный тест, который сочетал селективный обогащающий бульон и биохимический тест с использованием агара с мочевиной в одном сосуде. В этом небольшом исследовании двухфазный тест был проведен на 55 образцах биопсии и показал 100% положительный прогностический клапан после 48 часов инкубации.Более того, этот метод имел более низкую частоту ложноположительных результатов и требовал более низкой бактериальной нагрузки, примерно 10 ⁵ КОЕ / мл, по сравнению с CLOtest. В то же время этот тест можно было использовать в аэробных условиях и позволять культивирование, а также тестирование чувствительности к антибиотикам [46].

Факторы-хозяева, такие как высокая активность гастрита, низкая бактериальная нагрузка, кровотечение, употребление алкоголя и употребление H ₂ — антагонистов рецепторов, ИПП, антибиотиков, оказывают отрицательное влияние на положительный результат посева.Эти препараты, за исключением антибиотиков, которых следует избегать по крайней мере за 4 недели, также рекомендуется избегать за 2 недели до посева. Чтобы избежать систематической ошибки при выборке из-за неоднородного распределения H. pylori в желудке, было рекомендовано как минимум 2 образца биопсии из антрального отдела и 2 образца биопсии из тела [47,48].

Хотя посев — трудоемкий, дорогой и трудоемкий тест для диагностики H. pylori , тест на чувствительность к антибиотикам H. pylori , полученный с помощью посева, является особым преимуществом в клинической практике.В соответствии с рекомендациями консенсусного отчета Маастрихт IV, культура H. pylori и определение чувствительности к антибиотикам следует проводить, если первичная резистентность к кларитромицину превышает 20% в данном географическом районе или после неэффективности лечения препаратами второй линии [21]. Кроме того, культивирование также позволяет изолировать H. pylori для дальнейшего анализа фенотипических и генотипических характеристик, чтобы лучше понять патогены и, следовательно, предложить оценку терапии.С ростом распространенности устойчивости к антибиотикам культивирование по-прежнему остается надежным методом лечения неэффективности лечения H. pylori , а также изучения устойчивости к антибиотикам в популяционных исследованиях до того, как другие молекулярные тесты станут более доступными.

Полимеразная цепная реакция

С момента применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения инфекции H. pylori , ПЦР широко использовалась для диагностики H. pylori из образцов биопсии желудка, слюны, стула, желудочного сока. сок и разные экземпляры.ПЦР обеспечивает превосходную чувствительность и специфичность, превышающую 95%, по сравнению с другими традиционными тестами и дает более точные результаты обнаружения H. pylori у пациентов с кровотечением. Несколько генов-мишеней, включая UreA , glmM , UreC , 16S рРНК , 23S рРНК , HSP60 и VacA , были использованы для обнаружения H. различные консервативные гены-мишени могут повысить специфичность, что, в свою очередь, позволяет избежать ложноположительных результатов, особенно для образцов, отличных от образцов биопсии желудка.Другие преимущества ПЦР, в том числе меньшее количество бактерий, требуемых в образце, более быстрые результаты и отсутствие необходимости в специальных материалах для обработки или транспортировке, позволяют врачам принимать более быстрое и точное решение о лечении пациента. Кроме того, ПЦР также позволяет одновременно обнаруживать специфические мутации, приводящие к устойчивости к антибиотикам, такие как устойчивость к макролидам и фторхинолонам, и факторы вирулентности, такие как CagA и VacA [49-51].

По сравнению с методом разведения в агаре (Etest), который обычно считается золотым стандартом теста на чувствительность к антибиотикам, ПЦР в реальном времени (RT-PCR) имеет несколько преимуществ.Во-первых, использование фиксированной формальдегидом залитой парафином ткани желудка в ПЦР-тесте более удобно, быстро и чувствительно, чем использование свежего биоптата в Etest, более того, в этих условиях RT-PCR также показала не худшие результаты тестирования чувствительности к антибиотикам, чем Etest. Кроме того, ПЦР более надежна для выявления гетерорезистентного статуса, который часто приводит к ложноотрицательному результату в Etest, следовательно, ПЦР может предоставить более точную информацию для клиницистов перед началом лечения антибиотиками [52].В недавнем исследовании, в котором использовалась ОТ-ПЦР в фиксированных формалином и залитых парафином образцах для выявления инфекции H. pylori и ассоциированного статуса устойчивости к кларитромицину, изучалась эффективность четырехкомпонентной терапии на основе генотипической резистентности в качестве лечения первой линии для 385 пациентов с функциональная диспепсия. В этом исследовании у 136 пациентов (35,3%) была диагностирована инфекция H. pylori , а чувствительность ОТ-ПЦР и гистологического исследования составила 95,6% и 69,9% соответственно.Четырехкратная терапия цитратом калия висмута, рабепразолом, амоксициллином и кларитромицином использовалась для генотипически чувствительных пациентов, в отличие от генотипически резистентных пациентов лечили цитратом висмута калия, рабепразолом, амоксициллином и фуразолидоном. Авторы обнаружили, что уровень эрадикации составил 100% для пациентов с чувствительным к кларитромицину H. pylori и 94% для пациентов с устойчивым к кларитромицину H. pylori соответственно для анализа по протоколу [53].Во-вторых, ОТ-ПЦР также является удобным методом эпидемиологического исследования региональной степени устойчивости к антибиотикам в качестве руководства для эмпирического лечения первой линии. Кроме того, ОТ-ПЦР может обнаруживать точечные мутации, которые вызывают устойчивость к антибиотикам, а также обнаруживать изменение точечной мутации или появление новой мутации, что дает дополнительную информацию для эпидемиологических и молекулярных исследований взаимосвязи генотип-фенотип. Из-за возможного изменения мутаций, которые вызывают устойчивость к антибиотикам со временем, определение более 5 точечных мутаций при использовании методов на основе ПЦР важно для достижения хорошей точности при обнаружении устойчивости к антибиотикам [54-56].

Были описаны генетические мутации, вызывающие устойчивость к кларитромицину (23S рРНК), хинолонам ( gyrA ген), тетрациклину (16S рРНК), рифабутину ( rpoB ген) и амоксициллину ( pbp-1a в предыдущем гене). исследования и несколько коммерческих наборов, таких как набор MutaREAL H. pylori , анализ ПЦР в реальном времени ClariRes и система обнаружения АПФ Seeplex ClaR- H. pylori [57]. Однако точный механизм устойчивости к метронидазолу менее ясен, и гены восприимчивости, такие как rdxA и frxA, участвовали в предыдущих исследованиях с спорными результатами.Недавнее исследование с использованием секвенирования нового поколения Illumina для поиска мутаций-кандидатов на устойчивость к метронидазолу. Это исследование подтвердило, что мутации в гене rdxA играют основную роль в устойчивости к метронидазолу у H. pylori , а мутации в гене frxA могут усиливать устойчивость к метронидазолу только при наличии мутаций rdxA. Кроме того, новое открытие мутаций в гене rpsU может сыграть роль в устойчивости к метронидазолу для объяснения устойчивых к метронидазолу штаммов без мутаций в генах rdxA и frxA [58].Анализ GenoType HelicoDR — это молекулярный тест, сочетающий ПЦР и гибридизацию, позволяющий провести молекулярную дефекацию H. pylori , а также устойчивость к кларитромицину и фторхинолонам в течение 6 часов. В предыдущих исследованиях анализ GenoType HelicoDR с использованием штаммов бактерий или образцов биопсии желудка был высокоточным для устойчивости к кларитромицину с чувствительностью 94–100% и специфичностью 86–99% соответственно; Анализ GenoType HelicoDR также точен для устойчивости к фторхинолонам с чувствительностью 83% -87% и 95% -98.Специфичность 5% соответственно по сравнению с методом на основе культуры [59,60]. Однако недавнее исследование по оценке клинической применимости GenoType HelicoDR в Корее показало, что чувствительность и специфичность в отношении устойчивости к кларитромицину составляли только 55,0% и 80,0% соответственно. GenoType HelicoDR также не был точным для устойчивости к фторхинолонам, показывая чувствительность и специфичность 74,4% и 70,0% соответственно. Клиническая применимость GenoType HelicoDR для определения устойчивости к антибиотикам может иметь некоторые ограничения, которые требуют дальнейшего изучения [61].ОТ-ПЦР обычно используется для количественного определения ДНК H. pylori в образцах биопсии, но выполнение ОТ-ПЦР может быть проблемой для клинических лабораторий из-за дорогостоящих термоциклеров. Мультиплексная ПЦР на основе двойного примирования олигонуклеотидов (DPO) была разработана для обнаружения инфекции H. pylori и устойчивости к кларитромицину, и этот тест можно проводить в любом стандартном термоциклере, который стоит меньше, чем RT-PCR. Благодаря особой конструкции праймера DPO для амплификации рДНК H. pylori 23S и обнаружения наиболее распространенных мутаций, A2142G и A2143G, придающих устойчивость к кларитромицину, DPO-PCR оказалась быстрой и точной для H.pylori диагностика и определение чувствительности к кларитромицину с помощью биоптатов желудка [62,63]. Кроме того, недавнее исследование с использованием образцов тканей, обработанных RUT для оценки диагностической точности DPO-PCR, показало, что DPO-PCR имеет более высокую чувствительность, чем RUT и гистология, а DPO-PCR может обнаружить инфекцию H. pylori в RUT- отрицательные образцы, что означает, что этот тест может уменьшить ложноотрицательный результат и уменьшить необходимость повторного эндоскопического обследования.Степень согласованности DPO-PCR между образцами биопсии желудка и образцами, обработанными RUT, составила 94,4% [64].

Обнаружение факторов вирулентности с помощью ПЦР помогает оценить генетические вариации факторов вирулентности H. pylori и дает больше информации для понимания клинических различий между пациентами, инфицированными разными штаммами H. pylori . Несколько исследований показали, что наличие факторов вирулентности, таких как ген CagA и VacA , связано с более тяжелым воспалением желудка и более высокой распространенностью язвенной болезни и рака желудка [65–67].Ген А промотора язвы двенадцатиперстной кишки (DupA) также предполагалось связать с образованием язв, индуцированным H. pylori , но в предыдущих исследованиях сообщалось о противоречивых результатах, которые предположительно были вызваны несовпадением праймеров. Недавно разработанная ОТ-ПЦР со специальным праймером, разработанным на основе выравнивания всех 221 последовательностей гена DupA, была введена недавно для повышения скорости обнаружения гена DupA. Этот метод повысил уровень обнаружения до 64,2%, независимо от того, имели ли обычно используемые ПЦР уровень обнаружения между 29.От 9% до 37,8%. Авторы указали, что дизайн ПЦР оказал большое влияние на обнаружение фактора вирулентности, и обнаружение специфического аллеля DupA не то же самое, что обнаружение фактического гена DupA [68].

ПЦР также помогает обнаружить H. pylori в пробах окружающей среды для эпидемиологических исследований. Высокая распространенность H. pylori , обнаруженная в образцах питьевой воды с помощью ПЦР, предоставила дополнительную информацию о передаче H. pylori через питьевую воду [69].Более высокий уровень обнаружения заражения H. pylori в немытых овощах свидетельствует о том, что точное мытье овощей снижает загрязнение H. pylori [70]. ПЦР также использовалась для определения генотипирования H. pylori в овощах, и высокая степень сходства в образце генотипирования H. pylori среди образцов овощей и образцов человека позволила предположить, что овощи могут быть источниками бактерий [71].

За исключением более быстрых и высокоточных результатов ПЦР для обнаружения H.pylori и штаммы, устойчивые к антибиотикам, опасения по поводу стоимости, доступного местного оборудования и опыта в области молекулярных методов неизбежно влияют на возможность проведения ПЦР в местных лабораториях.

НЕИНВАЗИВНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

Было сделано несколько попыток избежать использования эндоскопических методов диагностики по нескольким причинам. Прежде всего, эндоскопия — это инвазивная процедура, которая вызывает дискомфорт и не подходит для пациентов с тяжелыми сопутствующими заболеваниями или противопоказаниями. Кроме того, стоимость эндоскопии и дополнительные расходы на эндоскопию, такие как одноразовые щипцы и анестезия, могут быть высокими.И последнее, но не менее важное: систематическая ошибка выборки почти неизбежно встречается в методах, основанных на биопсии, из-за неравномерного распределения H. pylori в желудке.

Дыхательный тест на мочевину

Дыхательный тест на мочевину (UBT) используется уже почти 30 лет и до сих пор остается самым популярным и точным неинвазивным тестом для диагностики инфекции H. pylori . За счет уреазной активности H. pylori , ¹³ C- или ¹⁴ C-меченная мочевина, проглоченная пациентом, гидролизуется до меченого CO ₂ в желудке, затем меченый CO ₂ абсорбируется в желудке. кровь и выдыхаемый при дыхании, в котором можно измерить помеченный CO ₂ .Хотя несколько факторов, включая пациента, бактерии и сам тест, влияют на результаты UBT, UBT — это высокоточный и воспроизводимый тест с чувствительностью и специфичностью около 95% при стандартных процедурах. Недавно опубликованный метаанализ для оценки диагностической точности UBT у взрослых пациентов с диспепсическими симптомами показал, что совокупная чувствительность составила 96% (95% ДИ: 0,95-0,97), а совокупная специфичность составила 93% (95% ДИ: 0,91-0,94). [72]. UBT также полезен для эпидемиологических исследований и для оценки эффективности эрадикационной терапии [21,73].Пациенту следует прекратить прием ИПП за 2 недели и антибиотик за 4 недели до обследования, чтобы избежать ложноотрицательных результатов [74]. Кровотечение также влияет на диагностическую точность UBT, и отсроченное UBT после восстановления после кровотечения обязательно для уменьшения ложноотрицательного результата [75]. Иногда, хотя и редко, присутствие в желудке других патогенов, продуцирующих уреазу, также вызывает ложноположительные результаты.

UBT — подходящий метод со многими преимуществами, такими как простой, неинвазивный и безопасный, для обнаружения H.pylori у педиатрических пациентов, хотя точность UBT у педиатрических пациентов не так хороша, как у взрослых пациентов, особенно для детей младше 6 лет, с чувствительностью и специфичностью от 75% до 100% [76].

¹³ C-UBT предпочтительнее ¹⁴ C-UBT, чтобы избежать воздействия радиации, хотя ¹⁴ C-UBT безопасен для детей и беременных женщин, потому что излучение от ¹⁴ C-UBT ниже чем радиация, полученная из окружающей среды.Однако из-за отсутствия дорогостоящего оборудования и возможности платить высокую стоимость в размере ¹³ C-UBT, ¹⁴ C-UBT более популярны в развивающихся странах. Диагностическая точность между ¹³ C-UBT и ¹⁴ C-UBT не отличается, и оба теста можно считать золотым стандартом среди различных неинвазивных тестов для диагностики инфекции H. pylori [77]. Существует два протокола, некапсулированный и инкапсулированный, которые используются для перорального введения ¹⁴ С-мочевины пациентам для H.pylori диагноз. Первоначально инкапсулированный ¹⁴ C-UBT был разработан, чтобы избежать проблемы гидролиза ¹⁴ C-мочевины под действием продуцирующей уреазу флоры полости рта, и этот метод устранил проблему ложноположительных результатов в пробах из раннего дыхания [78] . Тем не менее, быстрый транзит капсулы, содержащей ¹⁴ C-мочевину, из желудочного тракта или ее неполное рассасывание в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха приводит к инкапсулированию ¹⁴ C-UBT, возможно, не лучшим вариантом, чем протокол без капсул [79 ].В недавнем исследовании использовалась методика динамического сцинтискана для мониторинга судьбы капсулы в желудке и сравнивалась чувствительность между протоколами без инкапсулирования и инкапсулирования у 100 пациентов с диспепсией. Это исследование показало, что неинкапсулированный протокол имел более высокую чувствительность, чем инкапсулированный протокол, а чувствительность инкапсулированного и неинкапсулированного ¹⁴ C-UBT составляла 90,5% и 98,6% через 10 минут и 91,8% и 97,2% через 15 минут соответственно. Неполное разрешение или отсутствие разрешения капсулы ¹⁴ C-мочевины в желудке во время фазы сбора выдыхаемого воздуха, отмеченное динамическими изображениями сцинтискана, послужило объяснением более низкой чувствительности инкапсулированного ¹⁴ C-UBT по сравнению с неинкапсулированным ¹⁴ C-UBT [80].

Точное значение отсечения для значения дельта по сравнению с исходным уровнем (DOB) для различения между H. pylori -положительными и H. pylori -отрицательными результатами является другой спорной проблемой. Отсечной клапан для UBT был первоначально определен как 5,0, что было наиболее широко рекомендовано, тогда как более низкие значения, 3,0 или 3,5, также были предложены для повышения его точности без ущерба для чувствительности и специфичности этого теста. «Серая зона», в которой результаты UBT неубедительны, упоминалась в предыдущих исследованиях, и пограничное значение DOB, например, очень близкое к выбранной точке отсечения, следует интерпретировать с осторожностью [81].Недавно был представлен новый метод UBT с использованием интегрированной системы выходной спектроскопии с оптическим резонатором, обеспечивающей оптимальную диагностическую точку отсечки. Этот предварительный тест определил диагностическую точку отсечения как совокупный процент восстановленной дозы ¹³ C (c-PDR) = 1,47% через 60 минут и продемонстрировал 100% чувствительность и 100% специфичность с точностью 100% по сравнению с инвазивной эндоскопией. тесты. Однако в этом исследовании используется небольшое количество образцов, и для подтверждения этих результатов необходимы дальнейшие более масштабные исследования [82].

STOOL ANTIGEN TEST

Тест на антиген кала (SAT) — другой неинвазивный метод с хорошей чувствительностью и специфичностью, 94% и 97% соответственно в глобальном метаанализе, при диагностике инфекции H. pylori [83]. Этот метод определяет присутствие H. pylori антигена в образцах стула. Существует два типа SAT, используемых для обнаружения H. pylori, методы, основанные на иммуноферментном анализе (EIA) и иммунохроматографическом анализе (ICA), с использованием либо поликлональных антител, либо моноклональных антител.В настоящее время доступно множество SAT для диагностики инфекции H. pylori , и различная диагностическая точность показана в разных исследованиях с разными SAT и разным дизайном исследований. В целом тесты на основе моноклональных антител более точны, чем тесты на основе поликлональных антител [83], а тесты на основе EIA обеспечивают более надежные результаты, чем тесты на основе ICA [84,85]. В недавнем исследовании EIA на антиген Tesmate pylori (TPAg) с использованием моноклональных антител для проверки нативной каталазы H. pylori было выявлено 92.4% чувствительность и 100% специфичность у взрослых по сравнению с ОТ-ПЦР, а точность этого теста составила 94,9% [86]. Тест Premier Platinum HpSA Plus, другой моноклональный тест на основе EIA, также показал надежные диагностические результаты с чувствительностью 92,2%, специфичностью 94,4% и точностью 93,4% для диагностики инфекции H. pylori по сравнению с другими 4 тестами SAT, включая 1 моноклональный На основе EIA (тест на антиген H. pylori ), на основе 2 моноклональных ICA (тест ImmunoCard STAT! HpSA и H.pylori фекального антигена) и 1 теста на основе поликлонального ICA (одноэтапный тест на антиген H. pylori ), точность которых была ниже 90% [84]. Однако тесты на основе ICA просты в выполнении и не требуют специального оборудования, что делает его подходящим для тестирования в офисе и в развивающихся странах. Новый тест SAT на основе моноклональных ICA, Atlas H. pylori Antigen Test, также был недавно представлен и обеспечивает лучшие результаты, чем предыдущие SAT на основе моноклональных ICA, с 91.Чувствительность 7%, специфичность 100% и точность 96,6% [87].

Помимо UBT, SAT на основе моноклонального EIA также является надежным тестом, рекомендованным руководящими принципами для оценки эффективности эрадикационной терапии H. pylori , и время для тестирования после окончания лечения должно составлять не менее 4 недель [21 , 88]. В предыдущем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность моноклонального SAT для подтверждения эрадикации после терапии составляли 93% и 96% соответственно [83]. В недавних исследованиях было подтверждено, что SAT на основе моноклональных EIA является полезным и точным инструментом для определения результатов H.pylori с чувствительностью 91,6–100% и специфичностью 93,6–98,4% [89, 90]. Кроме того, моноклональные тесты SAT на основе ICA, RAPID Hp StAR и ImmunoCard STAT! HpSA также дает многообещающие результаты с чувствительностью 90,0–100% и специфичностью 93,6–94,9%.

В дополнение к оценке эрадикационной терапии, моноклональный САТ является удобным, неинвазивным и полезным тестом для диагностики инфекции H. pylori у педиатрических пациентов [91]. Исследование с применением SAT у детей в возрасте от 6 до 30 месяцев показало надежные результаты SAT для диагностики H.pylori у детей раннего возраста [92]. Недавний метаанализ, включающий 45 исследований и 5931 пациента, для оценки эффективности SATS у детей показал, что совокупная чувствительность и специфичность составили 92,1% и 94,1% соответственно. В анализе подгрупп чувствительность и специфичность моноклонального SAT, поликлонального SAT и одноэтапного быстрого моноклонального SAT составила 96,2% и 94,7%, 88,0% и 93,0% и 88,1% и 94,2% соответственно. Моноклональная SAT — надежный тест для диагностики инфекции H. pylori у детей [93].Более того, SAT — полезный инструмент для программ эпидемиологического исследования и скрининга [94,95]. По стоимости и оснащению SAT больше подходит для массовых опросов, чем UBT. По сравнению с серологическими тестами, которые обычно используются для скрининга, SAT дает более надежные результаты в диагностике инфекции H. pylori . Однако предыдущее исследование показало, что SAT был менее точным, чем серологический тест у пациентов с тяжелым атрофическим гастритом, и влияние этого результата требует дальнейшей оценки для оценки роли SAT в скрининге H.pylori -ассоциированные заболевания, такие как рак желудка [96]. В то время как другое исследование с использованием нового SAT на основе поликлонального EIA (EZ-STEP H. pylori ) обнаружило наличие атрофического гастрита и / или кишечной метаплазии, которые существенно не повлияли на результаты SAT [97].

На точность SAT влияет несколько факторов, таких как антибиотик, ИПП, N-ацетилцистеин, дефекация и кровотечение из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Сохранность образца, такая как температура и время транспортировки перед испытанием, а также отсечной клапан также влияют на диагностическую точность SAT [98-100].

ИСПЫТАНИЯ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛ

Для диагностики H. pylori широко доступны многочисленные серологические тесты, основанные на обнаружении антител IgG к H. pylori, и тест EIA является наиболее распространенным и точным методом среди них. Серологические тесты также часто используются при скрининге для эпидемиологических исследований из-за их недорогой, быстрой и приемлемости для пациентов. Кроме того, серологический тест полезен для оценки инфекции H. pylori у детей.Недавнее исследование с использованием E-Plate, коммерческого набора сывороточных антител, для сравнения эффективности серологического теста с SAT у 73 детей показало, что чувствительность, специфичность и отношение правдоподобия для серологического теста составили 91,2%, 97,4% и 35,6%. , соответственно. Эти результаты были получены при использовании запорного клапана, рекомендованного для взрослых, у детей [101]. Поскольку точность серологических тестов зависит от антигена, используемого в коммерческом наборе, и степени распространенности конкретных штаммов H. pylori , используемых в качестве источника антигена.Надлежащие антигены, используя либо местные штаммы в качестве источника антигена, либо объединяющие антигены из штаммов разных групп, а также надежное пороговое значение серологического теста должны быть проверены на местном уровне перед исследованием популяции [102,103]. Некоторые иммуногенные белки, такие как CagA, VacA, UreA, Omp и GroEL, были использованы в качестве кандидатов для обнаружения инфекции. Белок H. pylori FliD, важный элемент в сборке функциональных жгутиков, также признан новым маркером для серологической диагностики H.pylori с чувствительностью и специфичностью 99% и 97% соответственно [104]. Недавно для серологической диагностики инфекции H. pylori был введен новый метод иммуноанализа «РекомЛайн H. pylori » с использованием шести высокоиммуногенных факторов вирулентности (CagA, VacA, GroEL, gGT, HcpC и UreA). В отличие от EIA и иммуноблоттинга, RecomLine позволяет идентифицировать специфический ответ антител против различных антигенов H. pylori и увеличивает дискриминирующую способность.По сравнению с гистологией, рекомЛайн показала чувствительность и специфичность 97,6% и 96,2% соответственно. РекомЛайн также является полезным инструментом для идентификации специфических факторов вирулентности H. pylori [105,106].

Другое преимущество серологического теста заключается в том, что на точность серологических тестов не влияют язвенное кровотечение, атрофия желудка, а также использование ИПП или антибиотиков, которые вызывают ложноотрицательные результаты в других инвазивных или неинвазивных тестах. Однако серологический тест не является надежным тестом для оценки эрадикационной терапии, поскольку уровни антител могут сохраняться в крови в течение длительных периодов времени даже после успешной эрадикации [21].Поскольку серологические тесты не различают активную инфекцию и прошлое воздействие H. pylori , перед эрадикационной терапией требуется дополнительное подтверждение другими тестами.

Как и SAT, серологические тесты на основе EIA имеют лучшую точность, чем тесты на основе ICA. Недавнее исследование, сравнивающее 29 коммерческих серологических тестов (17 на основе EIA и 12 на основе ICA), показало, что точность 9 из 17 тестов на основе EIA была выше 90%, тогда как только один из 12 тестов на основе ICA имел точность> 90 %.Гетерогенные характеристики также наблюдались между различными серологическими тестами, выявление чувствительности варьировалось от 57,8% до 100%, а специфичность варьировалась от 58,7% до 96,8% в тестах на основе EIA; Чувствительность варьировала от 55,6% до 97,8%, а специфичность — от 60,3% до 96,8% в тестах на основе ICA. Серологические тесты следует выбирать правильно в соответствии с их конкретными рабочими параметрами для достижения различных целей, таких как скрининг, первоначальный диагноз или подтверждение другого теста [107].

Серологический тест также играет важную роль в изучении факторов патогенеза и вирулентности, поскольку некоторые антигенные белки могут быть обнаружены иммунологическими методами и имеют дополнительную диагностическую ценность.Было предпринято несколько попыток найти потенциальные биомаркеры для идентификации пациента, инфицированного штаммом H. pylori высокого риска, с помощью серологических тестов. Уровни пепсиногена (PG) I, PG II и соотношения PG I / II в сочетании с антителом H. pylori широко используются для прогнозирования атрофического гастрита и риска рака желудка [108,109]. Соотношение PG I / II также может быть полезно для наблюдения за раком желудка у пациентов после эрадикационной терапии [110]. Однако получены противоречивые результаты по клиническому применению этих серологических препаратов.Недавнее исследование, оценивающее точность GastroPanel, который измеряет гастрин-17, антитела H. pylori , PG I и PG II, для выявления атрофического гастрита, показало только 50% чувствительность и 80% специфичность, что было хуже, чем в предыдущих исследованиях [111 ]. Пепсиногеновый тест также оказался недостаточно точным для диагностики рака желудка с чувствительностью 71,0% и специфичностью 69,2% [112]. Некоторые факторы вирулентности также были оценены для прогнозирования заболеваний, ассоциированных с H. pylori .Присутствие сывороточных антител CagA, VacA и GroEL у пациентов с инфекцией H. pylori связано с предраковыми поражениями желудка, а также с раком желудка, и эти сывороточные маркеры могут служить потенциальными предикторами для пациентов, инфицированных штаммами высокого риска, которые могут быть связано с развитием рака желудка [106,113]. Хотя связь между факторами вирулентности и клиническими проявлениями была обнаружена в ходе предыдущих эпидемиологических исследований, серологические тесты все еще недостаточно надежны для диагностики рака желудка.В недавнем метаанализе совокупная чувствительность и специфичность антител CagA, используемых для диагностики рака желудка, составила 71% и 40% соответственно, а диагностическое отношение шансов составило 2,11 [114].

Обнаружение H. pylori IgG в моче также оценивалось у детей в предыдущих исследованиях, однако были представлены различные результаты [115,116]. Кроме того, диагностическая точность теста на основе ИФА для выявления IgG в слюне H. pylori также была недостаточной в качестве надежного теста [117,118].Определение антител в моче или слюне менее точное, чем другие тесты, и его не рекомендуется использовать при ведении пациентов [119].

ДИАГНОСТИКА

Использование ПЦР для обнаружения H. pylori в кале является надежным и быстрым методом, особенно привлекательным для детей в качестве неинвазивного теста. ПЦР стула также дает преимущества в идентификации конкретных генотипов и устойчивости микроорганизмов к антибиотикам [120,121].Полость рта считается внегастральным резервуаром H. pylori , хотя значение H. pylori в полости рта как источника повторного инфицирования или пути передачи все еще неясно. Слюна и зубной налет были образцами, обычно используемыми для обнаружения H. pylori в полости рта, а ПЦР была наиболее распространенным и надежным тестом, используемым в недавних исследованиях. RUT и посев также были выполнены для выявления орального H. pylori в ранних исследованиях.Распространенность обнаружения H. pylori в полости рта сильно варьировала, от 0% до 100%, и обычно обнаруживалась более низкая распространенность в слюне по сравнению с зубным налетом [122]. Широкие различия в распространенности H. pylori в полости рта могут быть связаны с разными методологиями, разными популяциями и разными праймерами, использованными в исследованиях. Недавние исследования были сосредоточены на модификации праймера для повышения диагностической точности или оценке нового метода преодоления ограничений ПЦР.Недавно была разработана новая система ПЦР с использованием наборов праймеров, специфичных для H. pylori на основе высококонсервативных последовательностей полных геномов 48 штаммов H. pylori , для повышения диагностической точности ПЦР в полости рта [123] . Петлевая изотермическая амплификация (LAMP), новый метод высокоспецифичной и чувствительной амплификации ДНК, сравнивалась с ПЦР по скорости обнаружения H. pylori в образцах зубного налета в небольшом исследовании, в котором приняли участие 45 участников.Это исследование показало, что LAMP имеет более высокий уровень обнаружения, чем ПЦР, и уровень обнаружения H. pylori в образцах зубного налета с помощью LAMP и ПЦР составляет 66,67% и 44% соответственно [124].

ДИАГНОСТИКА