Первая помощь в случае остановки сердца или дыхания – статьи о здоровье

Экстренная сердечно-легочная реанимация нужна при различных внезапных состояниях, в частности, это первая помощь при остановке кровообращения. Причиной остановки могут стать различные обстоятельства, как сердечные заболевания, так и несчастные случаи. Остановка кровообращения приводит к нарушению снабжения кислородом всех систем органов, а, как известно, все клетки организма без поступления кислорода просто погибают. По этой причине помощь должна быть оказана своевременно, правильно и быстро. С каждой секундой промедления шансы на спасение пострадавшего уменьшаются. Потому, если вы оказались свидетелем ситуации, при которой у человека останавливается сердце и прекращается дыхание, следует знать, как себя вести и что делать, ведь в ваших руках – жизнь человека!

Вот несколько важных советов, разработанных на основе последних рекомендаций:

• Рекомендации Американской Ассоциации сердечных заболеваний по СЛР и неотложной помощи при сердечно-сосудистых заболеваниях от 2010 года
• Руководство по реанимации изданное Европейским Реанимационным советом в 2010 году
• Международный согласительный отчет ILCOR по СЛР 2010 г., принятый 29 странами

1. На диагностику остановки сердца (кровообращения) и дыхания отводится не более 10 секунд! Несколько простых фактов, указующих на то, что пора переходить к активным реанимационным действиям:

• Полное отсутствие сознания у пострадавшего
• Человек не дышит или дышит неправильно
• Отсутствует пульса

После того, как точно установлен факт остановки кровообращения, пострадавшего укладывают на ровной поверхности (желательно твердой) в положение на спину. Ноги нужно слегка приподнять и уложить на возвышение (это улучшит приток крови к сердцу из нижних вен). Тело можно прикрыть одеялом, чтобы не допустить охлаждения.

2. Дальнейшая тактика поведения:

• Первым делом нужно немедленно вызвать Скорую помощь
• После чего незамедлительно начать сердечно-легочную реанимацию (СЛР) пострадавшего

3. Непрямой массаж сердца, инструкции:

• Одна рука кладется ладонью на нижнюю треть грудины, так чтобы основной упор приходился на пясть. Другая рука кладется сверху
• Глубина надавливания (компрессий) должна составлять 5 см для взрослых людей, для детей 4-5см или 1/3 от диаметра грудной клетки
• Частота компрессий – 100 нажатий в минуту
• Соотношение компрессий и вдохов – 30 нажатий на 2 вдоха

4. Искусственное дыхание:

• Объем – 500-600 мл воздуха (6-7мл/кг) 6-10 вдохов в минуту
• Прерывание компрессий снижают шансы пострадавшего на выживание. Постарайтесь делать вдох как можно быстрее, чтобы сократить паузы между компрессиями
• При этом следует избегать избыточной вентиляции легких

В идеале, спасателей должно быть двое и они должны сменять друг друга каждые 2 минуты! Как только проявится пульс и можно будет услышать дыхание пострадавшего, следует прекратить массаж и искусственную вентиляцию легких. До приезда скорой помощи вы сделали все, что смогли. Необходимо помнить, что при остановке кровообращения ухудшение может наступить очень внезапно и резко. В этот период может наступать клиническая смерть, которая продлится всего 4-6 минут. Это то время, которое есть у вас для оказания первой помощи и спасения жизни человека.

Особенности сердечно-легочной реанимации у детей

Авторы: В.И. Снисарь, д.м.н., профессор; Я.А. Сыроватко; Днепропетровская государственная медицинская академия

Тот, кто спас одну жизнь, спас целый мир.
Mishnah Sanhedrin

Особенностям сердечно-легочной реанимации у детей разных возрастов был посвящен семинар «Неотложные состояния в педиатрии», организованный Американо-австрийским фондом в г. Зальцбурге, на котором были утверждены алгоритмы основных мероприятий по поддержанию жизни у детей (Австрия, 2001).
Последовательность реанимационных мероприятий у детей в общих чертах сходна с таковой у взрослых. В отличие от взрослых, при проведении мероприятий по поддержанию жизни у детей (пункты A, B и C) особое внимание уделяют пунктам А и В. Основы жизнеобеспечения (ABC) разработаны с целью поддержания кровообращения и вентиляции легких у больного, имеющего остановку сердца или дыхания. Первая ступень включает: восстановление проходимости дыхательных путей (Airway), восстановление дыхания и вентиляция легких (Breathing), поддержание кровообращения и остановка кровотечения (Circulation). 
Реанимация взрослых основана на факте первичности сердечной недостаточности, у ребенка остановка сердца – финал процесса постепенного угасания физиологических функций организма, инициированного, как правило, дыхательной недостаточностью. Первичная остановка сердца у детей наблюдается очень редко, желудочковая фибрилляция и тахикардия являются ее причиной менее чем в 15% случаев. Многие дети имеют относительно длинную фазу «предостановки», что и определяет необходимость ранней диагностики данной фазы.
Вариабельность результатов реанимационных мероприятий у детей – следствие как исходной причины, которая привела к клинической смерти ребенка, так и отсутствие единого стандарта по поддержанию его жизни. В 1997 году International Liaison Committee on Resuscitation (ILCOR) опубликовал серию консультативных заявлений, включающих протоколы реанимационных мероприятий у детей, которые послужили основой для создания национальных протоколов, а также определили основные направления научных исследований в данной области. (Примечание: для практической реализации технологии реанимации в педиатрии на основании анатомических, физиологических и эпидимиологических исследований детьми принято считать пациентов в возрасте до восьми лет. При этом исходя из практических целей выделяют младенцев – детей в возрасте до одного года и непосредственно детей – от года до 8 лет. У лиц более старшего возраста методика реанимации идентична методике для взрослых.)
Методика педиатрической реанимации состоит из двух этапов, которые представлены ниже в виде схем-алгоритмов (рис. 1 и 2). 
Освобождение дыхательных путей (ДП) у пациентов с потерей сознания направлено на уменьшение обструкции, частой причиной которой является западение языка. Если тонус мышц нижней челюсти достаточный, то запрокидывание головы вызовет движение нижней челюсти вперед и откроет ДП. При отсутствии достаточного тонуса запрокидывание головы нужно сочетать с выдвижением вперед нижней челюсти (рис. 3). У детей грудного возраста существуют особенности выполнения этой манипуляции: не следует чрезмерно запрокидывать голову ребенка (рис. 4), сжимать мягкие ткани подбородка, так как это может дать в результате обструкцию ДП. 
После освобождения ДП нужно еще раз проверить, насколько эффективно дышит пациент: мы присматриваемся, прислушиваемся, наблюдаем за движениями его грудной клетки и живота. Часто освобождение ДП и поддержание их свободной проходимости достаточны для того, чтобы пациент в последующем дышал эффективно. 
Особенность проведения искусственной вентиляции легких у детей раннего возраста определяется тем, что маленький диаметр ДП ребенка обеспечивает большое сопротивление потоку вдыхаемого воздуха. Для минимизации развивающегося высокого давления и предупреждения развития перерастяжения желудка вдохи должны производиться медленно. Частота дыхательных циклов определяется возрастом и отмечена в таблице. Адекватный объем каждого вдоха – объем, обеспечивающий адекватные движения грудной клетки.
У детей до 1 года реанимирующий, оказывающий помощь, своим ртом плотно и герметично захватывает нос и рот ребенка (рис. 5), у старших детей – предварительно двумя пальцами зажимает нос пациента и своим ртом накрывает его рот (рис. 6).
Как мы уже отмечали, в детской практике остановка сердца обычно происходит вторично по отношению к обструкции ДП, которую чаще всего вызывают инородное тело, инфекция или аллергический процесс, что приводят к отеку ДП. Очень важна дифференциальная диагностика обструкции ДП, вызванной инородным телом, и инфекции. На фоне инфекции действия по удалению инородного тела опасны, так как могут привести к ненужной задержке в транспортировке и лечении пациента. При обструкции ДП инородным телом у пациентов без цианоза, с адекватной вентиляцией следует стимулировать кашель и нецелесообразно использовать искусственное дыхание. 
Методика устранения обструкции ДП, вызванной инородным телом, зависит от возраста ребенка. Очищать пальцем верхние ДП вслепую у детей не рекомендуется, поскольку в этот момент можно протолкнуть инородное тело глубже. В том случае, если инородное тело видно, его можно удалить, используя зажим Келли или пинцет Меджила. Надавливание на живот не следует применять у детей до 1 года, так как существует потенциальная угроза повреждения органов брюшной полости, особенно печени. 
Ребенку в этом возрасте можно оказать помощь, удерживая его на руке в позиции «всадника» с головой, опущенной ниже туловища (рис. 7). Голову ребенка поддерживают рукой вокруг нижней челюсти и грудной клетки. По спине между лопатками быстро наносят 4 удара проксимальной частью ладони, затем ребенка укладывают на спину так, чтобы голова его была ниже туловища в течение всей манипуляции. Выполняют 4 надавливания на грудную клетку. Если ребенок слишком крупный, чтобы поместить его на предплечье, ребенка помещают на бедре так, чтобы голова была ниже туловища. После очистки ДП и восстановления их свободной проходимости, если отсутствует спонтанное дыхание, начинают искусственное. У детей старшего возраста или взрослых при обструкции ДП инородным телом рекомендуют использовать прием Хеймлиха – серию субдиафрагмальных надавливаний (рис. 8).
Неотложная крикотиреотомия – один из вариантов поддержания проходимости ДП у больных, которым не удается интубировать трахею.
Как только ДП освобождены и выполнено два пробных дыхательных движения, необходимо установить, была у ребенка только остановка дыхания или одновременно и остановка сердца. Выясняют, отсутствует ли пульс на крупных артериях. У детей до 1 года пульс оценивают на плечевой артерии (рис. 9), короткая и широкая шея младенца делает затруднительным быстрый поиск сонной артерии. У детей старшего возраста, как и у взрослых, пульс оценивают на сонной артерии (рис. 10). Когда у ребенка определяется пульс, но нет эффективной вентиляции, проводят только искусственное дыхание. Отсутствие пульса является показанием к проведению искусственного кровообращения с помощью закрытого массажа сердца, который никогда не выполняют без искусственной вентиляции.

СТАТТІ ЗА ТЕМОЮ

Серцево-судинні (ССЗ) та судинно-мозкові захворювання є однією з основних причин інвалідності та смертності серед населення в усьому світі. Особливо ця проблема актуальна в Україні, де у структурі загальної смертності 66,3% припадають на смерть від серцево-судинних (СС), у тому числі цереброваскулярних захворювань. З-поміж останніх окремо виділяють інсульти, які щорічно розвиваються у 16 млн жителів планети, 6 млн з яких помирають, переважна більшість потребують сторонньої допомоги і лише 10% повертаються до повноцінного життя….

Поширеність артеріальної гіпертензії (АГ) у світі та Україні зокрема поступово зростає. На сьогодні близько 40% населення нашої країни мають підвищений артеріальний тиск (АТ). Зважаючи на його роль як фактора ризику розвитку серцево-судинних захворювань (ССЗ) і передчасної смерті, актуальність адекватного лікування АГ із досягненням та утриманням цільового АТ не викликає сумнівів. Наявність у пацієнтів з АГ метаболічних порушень і супутньої патології ще більше ускладнює ситуацію. Досить часто АГ пов’язана з цукровим діабетом (ЦД), причому цей зв’язок є зворотним – ​наявність ЦД вдвічі підвищує частоту виявлення АГ, а в осіб з АГ зростає ризик розвитку ЦД….

Актуальною проблемою сучасної кардіології є різноманітні порушення серцевого ритму, які можуть виникати як у молодому, так і в похилому віці. Досвідом щодо доцільності застосування антиаритмічної терапії та її призначення при різних порушеннях серцевого ритму поділилися провідні вітчизняні вчені-аритмологи в межах української фахової школи «Діагностика та лікування серцево-судинних захворювань» (22‑23 жовтня 2020 року)….

Постінсультна реабілітація – це комплекс заходів, спрямованих на продовження інтенсивної невідкладної терапії, щоб зробити все можливе, аби зменшити шкоду, нанесену головному мозку хворого. Основна мета таких інтервенцій полягає в тому, щоб почати діяти одразу ж після екстреного лікування, щоб пацієнти могли максимально швидко адаптуватися та відновити соціальне функціонування….

Первая помощь в случае утопления

Утопление является третьей по значимости причиной смерти от непреднамеренных травм в мире – на него приходится 7% всех случаев смерти, связанных с травмами. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, в мире ежегодно происходит 388 000 случаев смерти от утопления. Наибольшему риску утопления подвергаются дети, мужчины и люди с беспрепятственным доступом к воде.

Утопление определяется как процесс, в результате первичного нарушения дыхания из-за полного или частичного погружения в любую жидкую среду. Это определение подразумевает наличие границы между жидкостью и воздухом у входа в дыхательные пути пострадавшего, которая препятствует его нормальному дыханию. Пострадавший может остаться жив или умереть, но независимо от исхода он или она считаются пострадавшими от утопления.

Причем, погружением называется ситуация, когда лицо пострадавшего находится под водой или покрыто водой. Асфиксия и остановка сердца происходят в течении небольшого времени после погружения. При частичном погружении голова остаётся выше уровня воды, в большинстве случаев благодаря поддержке спасательного жилета. В большинстве подобных ситуаций дыхательные пути пострадавшего остаются открытыми, хотя аспирация возможна при заплёскивании воды в лицо или в результате утраты сознания с погружением лица в воду, наступает гипотермия.

Важную роль для первых попыток спасения и реанимации играют присутствующие на месте происшествия люди. Оказание помощи и последовательность базовой СЛР при утоплении отражает критическую важность быстрого устранения гипоксии. Есть сообщения о благоприятном неврологическом исходе нескольких пострадавших после пребывания в воде более 25 минут, однако эти редкие случаи почти все зафиксированы у детей, тонувших в ледяной воде, когда гипотермия предшествовала гипоксии, или тонувших внутри автомобилей.

При оказании помощи утопающему всегда необходимо помнить о персональной безопасности. Когда это возможно, нужно стараться спасти утопающего без самостоятельного вхождения в воду, что может быть связано с риском для собственной жизни и поэтому должно выполняться профессиональными спасателями или людьми с хорошей плавательной подготовкой. Если утопающий близко к суше, то ему может помочь голосовая подсказка, протянутое средство спасения (палка, одежда, верёвка или спасательный круг), а также подход на лодке или другом плавательном средстве. Если избежать самостоятельного вхождения в воду невозможно, то необходим спасательный жилет или круг. Безопаснее входить вводу вдвоем, чем одному.

Устранение угрожающих факторов возможно при быстром извлечении утопающего из воды. Отметим, что частота травм шейного отдела позвоночника у утопающих очень невелика и особые предосторожности нужны, только когда есть сведения о нырянии в мелкую воду или вероятность травмирования возможна после скатывания с водных горок, катания на водных лыжах, кайтсерфинге или гидроцикле. Если пострадавший не дышит (или дышит неправильно), то его нужно как можно скорее извлечь из воды, пытаясь при этом ограничить подвижность шеи вручную. Во время извлечения из воды стараться поддерживать его в горизонтальном положении.

После извлечения из воды определяют наличие сознания у пострадавшего, затем восстанавливают проходимость дыхательных путей путем  запрокидывания головы с подъемом подбородка,  выдвижения нижней челюсти и в течение не более 10 секунд определяют признаки жизни: наличие нормального дыхания с помощью слуха, зрения и осязания и, при наличии навыка, наличие кровообращения, путем проверки пульса на магистральных артериях (параллельно с проверкой наличия дыхания).

При отсутствии сознания и нормального дыхания приступают к проведению базовой СЛР до появления признаков жизни в объеме давления руками на грудину пострадавшего и  искусственного дыхания «Рот ко рту» или «Рот к носу». Возможно  искусственное дыхание с использованием специальных устройств (лицевого экрана, лицевой маски).

Последовательность алгоритма базовой СЛР при утоплении имеет отличия и отражает критическую важность быстрого устранения гипоксии. В данном случае раннее начало искусственного дыхания повышает выживаемость.

Как можно скорее нужно сделать пять искусственных вдохов. Для этого следует  открыть дыхательные пути пострадавшего,  зажать его нос двумя пальцами и  выполнить выдох в дыхательные пути пострадавшего в течение 1 с. Ориентиром достаточного объема вдуваемого воздуха является начало подъема грудной клетки, определяемое участником оказания первой помощи визуально. После этого, продолжая поддерживать проходимость дыхательных путей, необходимо дать пострадавшему совершить пассивный выдох, после чего повторить вдох искусственного дыхания. По возможности вентиляцию дополняют использованием кислорода.

Профессиональные спасатели могут предпринять попытку вентиляции в воде, пользуясь поддержкой плавучего спасательного средства. Если спасатель находит утонувшего в глубокой открытой воде, он может начать вентиляцию – если обучен этому – еще до извлечения на сушу или на спасательное плавсредство.

После проведения пяти искусственных вдохов  приступают к надавливаниям на грудину пострадавшего и в дальнейшем  сочетают 30 надавливаний с 2 искусственными вдохами. При совершении надавливаний основание ладони помещается на середину грудиной клетки пострадавшего, кисти рук берутся в замок, руки выпрямляются в локтевых суставах. Надавливания на грудину осуществляются на твердой ровной поверхности на глубину 5-6 см с частотой 100-120 в минуту перпендикулярно плоскости грудины. У пострадавших от утопления безвентиляционная реанимация, при которой приоритетом являются давления руками на грудину, скорее всего будет не эффективной и ее следует избегать!

В некоторых ситуациях при проведении реанимационных мероприятий изо рта пострадавшего поступает массивное количество пены, образующейся при смешивании движущегося воздуха с водой. Не пытайтесь удалять пену, так как она будет поступать и дальше. Продолжайте искусственное дыхание/вентиляцию до прибытия бригады скорой медицинской помощи.

Также, во время реанимации при утоплении типично проглатывание/вдыхание воды, возможно и проглатывание желудочного содержимого. Нет необходимости удалять попавшую воду из дыхательных путей, если это полностью не препятствует вентиляции. В таком случае, пострадавшего следует повернуть на бок и удалить имеющиеся массы доступными способами. При подозрении на травму шейного отдела позвоночника все перемещения пострадавшего осуществляются при поддерживании его головы, шеи и туловища на одной линии, что требует участия нескольких спасателей.

Реанимационные мероприятия необходимо продолжать до прибытия бригады скорой медицинской помощи или других служб, участвующих в ликвидации последствий несчастного случая, и распоряжения их сотрудников о прекращении этих действий, либо до появления явных признаков жизнедеятельности у пострадавшего (появления самостоятельного дыхания, возникновения кашля, произвольных движений).

В случае длительного проведения реанимационных мероприятий и возникновения физической усталости у участника оказания первой помощи, необходимо привлечь помощника к осуществлению этих мероприятий. Все современные рекомендации по проведению сердечно-легочной реанимации предусматривают смену ее участников примерно каждые 2 минуты, или спустя 5-6 циклов надавливаний на грудину и искусственных вдохов.

Эффект КСО: настроения в социальных сетях и влияние на бренды

Когда компании вкладывают свое время, талант и финансовую поддержку в сообщества, они также укрепляют свои бренды. Вот почему Фонд Торговой палаты США (USCCF) в партнерстве с IBM провел революционный анализ социальных настроений в отношении практики корпоративного гражданства. Это первое в своем роде исследование — Эффект КСО: настроения в социальных сетях и влияние на бренды — было инициировано грантом IBM Impact Grant и убедительно продемонстрировало, что участие в корпоративной социальной ответственности (КСО) оказывает влияние на репутация организации — удивительным образом.

Частный сектор — неотъемлемая часть любого сообщества. Помимо предоставления рабочих мест, предприятия по всей стране привлекают к работе заинтересованные стороны. Хотя сообществам, безусловно, лучше, когда компании вовлечены, мы считаем, что компании получают вторичную выгоду, когда они участвуют в сообществе — положительное влияние на их бренд.

Основные моменты отчета Включают:

• Исследования показывают, что для компаний есть реальная ценность стратегически формировать и обсуждать свои усилия в области корпоративной социальной ответственности в Интернете. побудить их написать об инициативах компании в области корпоративной социальной ответственности
• Продвижение работы компании в области корпоративной социальной ответственности превращает людей, которые думают о компании «нейтрально», в «положительно»
• Со временем компании, которые активизировали продвижение КСО, работают в Интернете, улучшили свое восприятие пользователями социальных сетей
• Компании могут оценить ожидаемый объем болтовни в социальных сетях на основе их чистого дохода с помощью алгоритма IBM, называемого CSR Social Media Benchmark

Исследование и анализ стали возможными благодаря гранту воздействия от IBM, который предоставил как консалтинг, так и техническая поддержка. Двухлетнее совместное исследование измеряло общественное мнение с помощью IBM Social Media Analytics.

Загрузите отчет, чтобы узнать больше.

ЮНИСЕФ — Корпоративная социальная ответственность

Бизнес, дети и устойчивое развитие

Дети составляют почти треть населения мира и взаимодействуют с бизнесом как потребители, члены семей служащих и рабочие. Они представляют собой уникальную группу заинтересованных сторон в местных сообществах, а также в обществе в целом: у детей есть особые уязвимости и потребности, и в некоторых случаях деловая деятельность, не оказывающая негативного воздействия на взрослых, может быть очень вредной для прав и благополучия детей. .

Устранение этих воздействий предлагает огромный потенциал для улучшения прав детей и защиты их от вреда за счет того, как бизнес обращается со своими сотрудниками, управляет своими предприятиями, разрабатывает и продает свои продукты, предоставляет свои услуги и оказывает влияние на экономические и социальное развитие.

Несмотря на рост и усиление внимания к корпоративной ответственности и стратегиям устойчивости, особенно после принятия Руководящих принципов предпринимательской деятельности в аспекте прав человека Организации Объединенных Наций, дети редко рассматриваются бизнесом как отдельные заинтересованные стороны и правообладатели.Однако для достижения целей в области устойчивого развития бизнес должен стать пригодным для детей.

Как ЮНИСЕФ поддерживает лучший бизнес для детей

Рамочная программа ЮНИСЕФ «Лучший бизнес для детей» основана на существующей работе с бизнесом, отраслевыми платформами и правительствами для обеспечения уважения прав детей во всех бизнес-операциях и цепочках поставок.

ЮНИСЕФ занимается вопросами воздействия на детей по четырем основным подтемам. Они охватывают ключевые аспекты бизнес-операций — глобальные цепочки поставок и рабочие места, маркетинг и рекламу, мощь финансов и влияние цифровых технологий. Все они пронизывают мощную роль, которую бизнес может сыграть как защитник прав детей. В рамках этих направлений работы и различных отраслей (добывающий сектор, ИКТ, путешествия и туризм, спорт и т. Д.), Уделяя особое внимание связям с областями программных результатов, ЮНИСЕФ генерирует опыт и данные о воздействии деловой активности на детей и предоставляет множество ресурсов, руководств и инструментов для компаний, правительств и других заинтересованных сторон бизнеса о том, как разрабатывать и внедрять политику и методы, учитывающие права детей.

По мере того, как предприятия переходят к подходу, который также уделяет внимание общественной ценности как части их основных бизнес-моделей, ЮНИСЕФ ищет новые возможности для партнерства с частным сектором и выявления областей, представляющих общий интерес, и инновационных беспроигрышных ситуаций для детей и бизнес.

Обработка разреженной матрицы — Концепция матрицы сжатых разреженных строк (CSR) | от Saishruthi Swaminathan

Существует два общих типа матриц — плотная и разреженная

Разреженная матрица имеет наибольшее количество элементов как нули, в отличие от плотного, у которого большинство элементов ненулевые. В случае с большой матрицей, как правило, большинство элементов — нули. Следовательно, имеет смысл использовать только ненулевые значения для выполнения операций, поскольку ноль, умноженное на что-либо, всегда будет давать ноль.

Scipy предлагает множество функций с разреженными матрицами, которые хранят только ненулевые элементы. Таким образом можно минимизировать объем памяти, необходимый для хранения данных. Процесс машинного обучения часто требует, чтобы фрейм данных находился в памяти. Он разбивает фрейм данных для размещения в ОЗУ. При сжатии данные легко помещаются в ОЗУ. Выполнение операций с использованием только ненулевых значений разреженной матрицы может значительно увеличить скорость выполнения алгоритма.

Алгоритм сжатых разреженных строк (CSR) — это один из типов, предоставляемых Scipy. Вот как это работает.

Короткое предложение

Это не короткое предложение

Дождя нет. Это?

ШАГ 1 — Индексирование

Присвоение номеров словам. Если слова повторяются, присвойте одинаковые номера. На этом этапе мы знаем, сколько слов присутствует во всем документе.

Индексирование начинается с 0. Первое слово является «коротким», и ему присваивается индекс «0», также каждое уникальное слово будет проиндексировано.Слово «Short» встречается дважды, из-за чего ему присваивается одно и то же значение индекса «0» каждый раз, когда оно встречается в документе.

ШАГ 2 — Векторное представление документа

Для каждой строки в документе создается векторное представление. Подсчитайте количество уникальных индексов. В этом случае у нас есть 8 индексов в диапазоне от 0 до 7, поэтому каждый документ (строка) представлен с использованием 8 значений, каждое из которых представляет количество раз, когда встречается определенное слово, соответствующее индексу.

(указатель, слово) — (0, короткое), (1, предложение), (2, это), (3, есть), (4, не), (5, а), (6, оно), (7, дождь)

01234567

[11000000]

[11111100]

[00021021]

Здесь значение 1 в первой позиции первого вектора указывает, что слово с индексом «0», которое является «коротким», встречается 1 время в документе.Значение 2 в 4-й позиции 3-го вектора указывает, что слово с индексом «3», которое является «есть», встречается в этом документе два раза.

ШАГ 3 — Создание разреженного вектора для каждого документа

Ниже представлено разреженное матричное представление каждого документа. Он удаляет все нулевые значения и сохраняет только ненулевые значения.

Документ 1: <0 1, 1 1>

Первый документ имеет значения только в первых двух позициях, поэтому представлены только они. (0 1) указывает, что 0-я позиция имеет значение 1, а (1 1) указывает, что 1-я позиция имеет значение 1.В (0 1) из <0 1, 1 1>, 0 соответствует индексу, тогда как 1 соответствует количеству раз, когда конкретный индекс встречается в документе (значении)

Документ 2: <0 1, 1 1, 2 1, 3 1, 4 1, 5 1>

Документ 3: <3 2, 4 1, 6 2, 7 1>

Для представления матрицы CSR требуется три массива — индекс, значение и указатель.

Индекс

Ind — [0, 1, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 3, 4, 6, 7]

Индекс, полученный для каждого документа на шаге выше, объединяется в один.Размер индекса — это количество ненулевых символов в документе.

Значение

val — [1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 2, 1, 2, 1]

Массив значений содержит значение, соответствующее каждому индексу, полученному из каждого документа. Размер индекса — это количество ненулевых символов в документе.

Указатель

Итак, мы объединили индекс и значение для всех строк, присутствующих в документе. Указатель помогает идентифицировать начало и конец каждого документа (строки) в полном текстовом документе в индексе и массиве значений.

ptr — [0, 2, 8, 12]

0 указывает начало документа 1 (строка 1) и заканчивается через две позиции после начала. С третьей позиции начинается document2 (line2) и заканчивается на 8-й позиции. С 9-й позиции начинается документ 3 (строка 3) и заканчивается на 12-й позиции. Это применимо как к массивам индексов, так и к массивам значений. Указатель помогает понять массивы индексов и значений. Имея массив индексов и указателей, можно указать начало и конец каждого документа.

Передача этих массивов даст матрицу CSR, и вот как работает функция csr_matrix в scipy.

Код

из scipy.sparse import *

из scipy import *

ind = [0, 1, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 3, 4, 6, 7]

val = [1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 2, 1, 2, 1]

ptr = [0, 2, 8, 12]

csr_matrix ((val, ind, ptr ))

Вывод: <разреженная матрица 3x8 типа ' int64 ‘>

с 12 сохраненными элементами в формате сжатой разреженной строки>

Вот как создается матрица CSR при работе с текстовыми документами.

…… Продолжение следует

На основе моих занятий по интеллектуальному анализу данных.

Праймер для сертификата Web PKI x509 — Mozilla

X.509 (в этом документе обозначается как x509) — это стандарт ITU для описания сертификатов. В этой статье представлен обзор того, что это такое и как они работают.

Для web-pki определены три версии стандарта x509. В этом документе мы будем ссылаться на текущий стандарт, используемый для web pki: x509 v3, который подробно описан в RFC 5280.Как правило, сертификаты x509 связывают подпись со сроком действия, открытым ключом, субъектом, эмитентом и набором расширений. Расширения определяют дополнительные свойства сертификата, такие как дополнительные атрибуты сертификата или ограничения на использование сертификата. Для того, чтобы сертификат был действительным, должны быть выполнены следующие три требования:

1. Существует путь проверки от сертификата сайта к доверенному сертификату пользовательского агента (т. Е. Если вы следуете пути эмитента, вы закончите самозаверяющий сертификат, который считается доверенным браузером).
2. Атрибуты сертификатов в пути проверки имеют допустимые параметры для этой проверки (например, срок действия всех сертификатов действителен на время выполнения проверки)
3. Проверки отзыва считаются допустимыми для данной проверки.

Одна проблема, которая широко не известна, заключается в том, что граф доверия x509 — это не лес (группа деревьев, где каждый корень является доверенным корнем), а циклический граф, где один и тот же ключ / эмитент может быть корнем или промежуточным звеном. для другого корня в хранилище ключей браузеров (когда корни создают промежуточные звенья друг для друга, это называется перекрестной подписью).

Хотя RFC 5280 определяет 16 расширений для webpki, в этом документе мы будем описывать шесть расширений, которые мы считали важными для понимания. Сертификаты могут иметь другие расширения, не описанные в RFC 5280, но это выходит за рамки этого документа. Расширения могут быть помечены как критические или некритические, соответствующие библиотеки проверки сертификатов должны прекратить обработку проверки при обнаружении критического расширения, которое они не понимают (и должны продолжать обработку, если расширение помечено как некритическое). Mozila :: pkix имеет это поведение.

Альтернативное имя субъекта

Это расширение определяет, какие другие имена (например, DNS-имена) допустимы для этого сертификата. Это позволяет использовать сертификат для нескольких FQDN, например, у вас может быть сертификат, действительный как для a.example.com, так и для b.example.com

Основные ограничения

Это позволяет утверждать сертификаты как выдача сертификатов (обязательно для сертификатов ЦС). Его также можно использовать для выражения максимальной глубины доверительного пути от центра сертификации.

Использование ключа

Это расширение используется для ограничения цели ключа в сертификате. Можно утверждать более одного ключевого использования. Примеры использования ключей: digitalSignature , keyEncipherment , dataEncipherment , keyCertSign и cRLSign . Для сертификатов CA необходимо установить keyCertSign bit .

Расширенное использование ключа

Это еще одно битовое поле для ограничения использования ключа сертификата.В основном это касается того, для какого типа приложения был выдан сертификат. Примеры расширенного использования ключей: serverAuth , clientAuth и OCSPSigning . Для сертификатов конечных объектов для PKI это расширение должно существовать с установленным битом serverAuth .

Ограничения имен

Это расширение является эксклюзивным для CA и указывает ограничения на пространство имен для его дочерних элементов. Это одно из самых мощных расширений для предприятий, помогающее ограничить риск, связанный с потерей закрытого ключа центра сертификации.

Доступ к информации о полномочиях

Это расширение в основном используется для описания местоположения OCSP для проверки отзыва. Это обязательно для сертификатов, которые связаны с корнем в программе Mozilla CA.

Это шаги для создания сертификата для www.example.com. Замените это значение фактическим именем сервера в следующих шагах.
1. Сгенерируйте ключ, используя следующую команду:

• openssl genpkey -алгоритм RSA -out key.pem -pkeyopt rsa_keygen_bits: 2048
• 2048 считается безопасным на ближайшие 4 года.

2. Создайте CSR с помощью этой команды:

• openssl req -new -key key.pem -days 1096 -extensions v3_ca -batch -out example.csr -utf8 -subj '/CN=www.example.com'
• Это создает новый запрос на подпись сертификата (CSR), который будет действителен в течение 3 лет.

3. Запишите файл расширений, создав новый файл с именем openssl. ss.cnf со следующим содержанием:

• basicConstraints = CA: FALSE
• subjectAltName = DNS: www.example.com
• extendedKeyUsage = serverAuth

4. Самоподписать csr (с использованием SHA256) и добавить расширения, описанные в файле

• «openssl x509 -req -sha256 -days 3650 -in example.csr -signkey key.pem -set_serial $ ANY_INTEGER -extfile openssl.ss.cnf -out example.pem»

Теперь вы можете использовать пример.pem в качестве вашего certfile

Когда вы посещаете безопасный веб-сайт, Firefox проверяет сертификат веб-сайта, проверяя, что подписанный сертификат действителен, и проверяет, что сертификат, подписавший родительский сертификат, действителен, и так далее до корневого сертификата который известен как действительный. Эта цепочка сертификатов называется иерархией сертификатов.

Если ваши сертификаты будут использоваться только для подтверждения одного домена (например, * .yourcompany. com), но вы хотите, чтобы другие пользователи за пределами вашей организации могли просматривать ваш веб-сайт с помощью https без необходимости вручную импортировать корневой сертификат, то вы можете получите сертификат SSL от одного из центров сертификации, у которых уже есть корневой сертификат, включенный в основные браузеры.

Firefox использует набор корневых сертификатов X.509v3 по умолчанию для различных центров сертификации (ЦС). У корневых сертификатов, включенных по умолчанию, установлены «биты доверия», чтобы указать, могут ли корневые сертификаты ЦС использоваться для проверки сертификатов для серверов SSL, пользователей электронной почты S / MIME и / или объектов кода с цифровой подписью без необходимости запрашивать у пользователей дальнейшее разрешение или информация.

Центры сертификации

подают заявку на включение своих корневых сертификатов по умолчанию в продукты Mozilla, следуя политике сертификации ЦС Mozilla и подав заявку на включение в соответствии с ЦС: How_to_apply. Пользователи могут изменить настройки корневого сертификата по умолчанию с помощью диспетчера сертификатов.

Некоторые организации используют набор центров сертификации, включенных в продукты Mozilla. Если вы хотите это сделать, вам следует прочитать соответствующую часть часто задаваемых вопросов Mozilla CA, прежде чем делать это.

Если вы собираетесь иметь собственный центр сертификации, мы рекомендуем создать 3 сертификата: долгосрочный корневой сертификат, среднесрочный промежуточный сертификат и краткосрочный сертификат конечного объекта. Этот тип иерархии позволяет распространять клиентам относительно простой долгосрочный корневой каталог и некоторую гибкость на промежуточном сертификате, чтобы вы могли изменять параметры на основе передовых методов и исследований безопасности.

Обновите * .example.com и * .example.net ниже, чтобы они соответствовали вашим доменам.

Предположения:

• Вы являетесь владельцем доменов * .example.com и * . example.net.
• Ваш компьютер не подключен к Интернету.

Шаги по созданию корневого сертификата ЦС:

1. Сгенерировать ключ
   • «openssl genpkey -алгоритм RSA -out rootkey.pem -pkeyopt rsa_keygen_bits: 4096»
   • 4096 считается безопасным на следующие 15 лет.
2. Создать csr
   • «openssl req -new -key rootkey.pem -days 5480 -extensions v3_ca -batch -out root.csr -utf8 -subj ‘/ C = US / O = Orgname / OU = SomeInternalName’
   • Сделайте новый запрос на подпись сертификата (CSR), который будет действителен в течение 15 лет.
3. Запись файла расширений (openssl.root.cnf)
   • basicConstraints = критический, CA: TRUE
   • keyUsage = keyCertSign, cRLSign
   • subjectKeyIdentifier = хэш
   • nameConstraints = разрешено; DNS: пример.com, разрешено; DNS: example.net
4. Самоподписать csr (с использованием SHA256) и добавить расширения, описанные в файле
   • «openssl x509 -req -sha256 -days 3650 -in root. csr -signkey rootkey.pem -set_serial $ ANY_SMALL_INTEGER -extfile openssl.root.cnf -out root.pem»

Теперь у вас есть файл CA pem со связанным ключом.

Следующие шаги создают промежуточный сертификат, действительный в течение 8 лет.

1. Сгенерировать ключ
   • «openssl genpkey -алгоритм RSA -out r = intkey.pem -pkeyopt rsa_keygen_bits: 3072 «
   • 3072-битный ключ считается безопасным в течение следующих 8 лет.
2. Создать csr
   • «openssl req -new -key intkey.pem -days 2922 -extensions v3_ca -batch -out int.csr — utf8 -subj ‘/ C = US / O = Orgname / OU = SomeInternalName2’
   • Сделайте новый запрос на подпись сертификата (CSR), который будет действителен в течение 8 лет.
3. Запись файла расширений (openssl.int.cnf)
   • basicConstraints = критический, CA: TRUE
   • AuthorityKeyIdentifier = keyid, эмитент
   • subjectKeyIdentifier = хэш
   • keyUsage = keyCertSign, cRLSign
   • extendedKeyUsage = serverAuth
   • AuthorityInfoAccess = OCSP; URI: http: // ocsp. example.com:8888/
4. Подпишите промежуточный csr с помощью корневого ключа и промежуточных расширений
   • «openssl x509 -req -sha256 -days 2922 -in int.csr -CAkey rootkey.pem -CA root.pem -set_serial $ SOME_LARGE_INTEGER -out int.pem -extfile openssl.int.cnf»

Обновите www.example.com ниже, чтобы он соответствовал вашему домену.

1. Сгенерировать ключ
   • «openssl genpkey -алгоритм RSA -out eekey.pem -pkeyopt rsa_keygen_bits: 2048»
   • 2048 считается безопасным на ближайшие 4 года.
2. Создать csr
   • «openssl req -new -key key.pem -days 1096 -extensions v3_ca -batch -out example.csr — utf8 -subj ‘/CN=www.example.com’
   • Сделайте новый запрос на подпись сертификата (CSR), который будет действителен в течение 3 лет.
3. Записать файл расширений (создать новый файл с именем openssl.ss.cnf со следующим содержимым)
   • basicConstraints = CA: FALSE
   • subjectAltName = DNS: www. example.com
   • extendedKeyUsage = serverAuth
   • AuthorityInfoAccess = OCSP; URI: http: // ocsp.example.com:80/
4. Intermediate подписывает csr (с помощью SHA256) и добавляет расширения, описанные в файле
   • «openssl x509 -req -sha256 -days 1096 -in example.csr -CAkey intkey.pem -CA int.pem -set_serial $ SOME_LARGE_INTEGER -out www.example.com.pem -extfile openssl.int.cnf»

Есть несколько организаций, которые предоставляют рекомендации относительно параметров безопасности для размеров ключа / хэша с учетом текущей вычислительной мощности.Для даты окончания корневого сертификата, созданного в соответствии с инструкциями на этой странице (2017 год). Это рекомендации по размерам бит (с http://www.keylength.com/):

	Асимметричный	ECC (ключ)	хэш
Линестра (2004)	1902	172	172
Ecrypt 2012	2432	224	224
NIST 2012	2048	224	224
ANSSI 2010	4096	200	256
RFC 3766	2358	200	—
BSI	1976	256	256

Другими словами, SHA1 теперь не рекомендуется для новых целей. Мы должны использовать как минимум 3072 размера ключа и как минимум 256 кривую ECC. Таким образом, здесь рекомендуется использовать корневой ключ 4096 при использовании RSA и p384 для корневого ключа. (p384 также выбран для совместимости, поскольку большинство реализаций SSL / TLS поддерживают эту часть набора B).

Вот несколько распространенных ошибок, которые могут возникнуть при работе с сертификатами в Firefox.

Код ошибки	Что это значит	Что я могу сделать
SEC_ERROR_BAD_DER	Сертификат неправильно закодирован в соответствии с ASN.1 (DER) кодировка	Повторно сгенерировать неправильно закодированный сертификат
SEC_ERROR_CA_CERT_INVALID	Сертификат конечного объекта используется для выдачи другого сертификата	Убедитесь, что любой сертификат, предназначенный для выдачи сертификатов, имеет расширение базовых ограничений cA: TRUE
SEC_ERROR_BAD_SIGNATURE	Подпись на сертификате неверно отформатирована или сертификат был подделан	Перевыпустить сертификат с неверной подписью
SEC_ERROR_CERT_BAD_ACCESS_LOCATION	URI OCSP в расширении AuthorityInformationAccess сформирован неправильно	Повторно сгенерировать сертификат с правильно сформированным URI OCSP
SEC_ERROR_CERT_NOT_IN_NAME_SPACE	Сертификат имеет общее имя или альтернативное имя субъекта, которое не находится в пространстве имен выдающего сертификат	Повторно выпустите сертификат с именами, которые находятся в пространстве имен всех сертификатов в цепочке
SEC_ERROR_CERT_SIGNATURE_ALGORITHM_DISABLED	Сертификат подписан по устаревшему алгоритму	Перепишите сертификат по современному алгоритму
SEC_ERROR_EXPIRED_CERTIFICATE	Сертификат слишком старый для использования	Повторно сгенерировать сертификат
SEC_ERROR_EXTENSION_VALUE_INVALID	Сертификат имеет расширение с пустым значением	Повторно сгенерируйте сертификат без расширения или повторно сгенерируйте его с непустым значением
SEC_ERROR_INADEQUATE_CERT_TYPE	Сертификат имеет расширенное расширение использования ключа, которое не подтверждает требуемое использование, или сертификат конечного объекта утверждает использование id-kp-OCSPSigning, когда этого не должно быть	Повторно сгенерируйте сертификат с соответствующими значениями использования расширенного ключа
SEC_ERROR_INADEQUATE_KEY_USAGE	Сертификат имеет расширение использования ключа, которое не утверждает обязательное использование	Повторно сгенерируйте сертификат с соответствующими значениями использования ключей
SEC_ERROR_INVALID_ALGORITHM	Сертификат подписан с неизвестным алгоритмом	Повторно подпишите сертификат с помощью стандартного алгоритма подписи сертификата
SEC_ERROR_INVALID_TIME	Поле времени в сертификате имеет недопустимое значение	Повторно сгенерировать сертификат с действительными кодировками для полей времени
MOZILLA_PKIX_ERROR_KEY_PINNING_FAILURE
SEC_ERROR_PATH_LEN_CONSTRAINT_INVALID
SEC_ERROR_UNKNOWN_CRITICAL_EXTENSION	Сертификат содержит расширение, помеченное как критическое, которое не обрабатывается mozilla :: pkix	Повторно сгенерировать сертификат без расширения или с ним, не помеченным как критический
SEC_ERROR_UNKNOWN_ISSUER	Для проверки сертификата необходим отсутствующий промежуточный или корневой сертификат	Импортируйте корневой сертификат в Firefox или попросите сервер отправить промежуточный
SEC_ERROR_INVALID_KEY
SEC_ERROR_UNSUPPORTED_KEYALG
SEC_ERROR_EXPIRED_ISSUER_CERTIFICATE	Сертификат эмитента слишком старый	Перевыпустить сертификат эмитента
MOZILLA_PKIX_ERROR_CA_CERT_USED_AS_END_ENTITY	Сертификат с расширением базовых ограничений с помощью cA: TRUE используется в качестве сертификата конечного объекта	Повторно сгенерировать сертификат конечного объекта без расширения базовых ограничений
MOZILLA_PKIX_ERROR_INADEQUATE_KEY_SIZE	Сертификат имеет слишком маленький ключ для защиты	Повторно сгенерируйте больший ключ и выпустите сертификат, используя этот ключ

Клиническое исследование инфекции: алгоритм диагностики — Регистр клинических исследований

Спонсоры	Ведущий спонсор: KU Leuven Соавтор: KCE Universitaire Ziekenhuizen Leuven Гентский университет Universiteit Antwerpen Льежский университет VUB Католический университет Лувена
Источник	KU Leuven
Краткое описание	Влияние клинических рекомендаций и теста на СРБ в месте оказания помощи у детей: проект ARON Дизайн исследования: многоцентровое, кластерно-рандомизированное, прагматическое исследование в параллельных группах Участники и условия: дети в возрасте от 6 месяцев до 12 лет с острым Обращение к эпизоду заболевания в неурочное отделение общей практики или внебольничное педиатрическое отделение Вмешательство (я) Алгоритм диагностики: 1. Древо клинических решений: внутреннее ощущение врача, что-то не так, одышка, температура ≥40ºC 2. ДА любому: СРБ в месте оказания помощи ≥5 мг / л: дополнительное тестирование или направление в центр вторичной помощи
Подробное описание	Исследователи стремятся усилить оценку остро больных детей в системе первичной медико-санитарной помощи путем внедрения диагностического алгоритма, который может уменьшить количество назначений антибиотиков. В свете предшествующих доказательств и его результатов, исследование ARON будет проверять влияние диагностического алгоритма, включая стандартизированную клиническую оценку, тест POC CRP и рекомендации по обеспечению безопасности.Таким образом, исследователи предлагают оценить клиническую и экономическую эффективность диагностического алгоритма, который включает дерево решений, POC CRP и рекомендации по обеспечению безопасности остро больных детей в возрасте от 6 месяцев до 12 лет, обращающихся за амбулаторной помощью, при назначении АБ, направление / госпитализация, дополнительное тестирование, смертность и удовлетворенность пациентов. В частности, исследовательский вопрос заключается в том, может ли этот диагностический алгоритм безопасно снизить количество назначений антибиотиков у остро больных детей, обращающихся за амбулаторной помощью.Решение о том, проводить или не проводить тест POC CRP, будет зависеть от стандартизированной клинической оценки, то есть утвержденного дерева клинических решений, а впоследствии для детей из группы низкого риска от намерения прописать АБ. Исследователи предоставят четкое, основанное на фактах руководство о том, как интерпретировать результат теста CRP, как указано ниже. В ходе оценки процесса будет изучено, как врачи используют тестирование CRP в своей практике и как родители проходят эти консультации. Исследователи предлагают исследование, в котором дети (от 6 месяцев до 12 лет) будут рандомизированы для (а) диагностического алгоритма с тестированием на СРБ и конкретными рекомендациями о том, когда назначать АБ или (б) обычную помощь.Тестирование CRP будет проводиться с помощью теста на палец (результат в течение 4 минут). Затем уровень CRP будет сообщен врачу, который сообщит результат ребенку / родителям. Исследователи стремятся набрать 6111 ребенка и будут собирать данные, зарегистрированные участвующим врачом, из медицинской карты ребенка и непосредственно детей / родителей. Исследователи опишут, как вмешательство сработало на практике и как врачи / родители испытали эти консультации. Руководство будет частью диагностического алгоритма, который включает в себя клиническое тестирование POC CRP и советы по обеспечению безопасности, чтобы проинформировать родителей о том, чего ожидать и на что обратить внимание.Индивидуальные интервью будут проводиться с клиницистами и родителями, участвующими в исследовании, в течение 30 дней после первой контактной консультации, чтобы изучить социальные процессы, влияющие на внедрение вмешательства в практику, и методы изменения поведения. Эти индивидуальные телефонные интервью будут проводиться с выбранными родителями, чтобы выяснить, были ли должным образом обсуждены их опасения, оправдались ли их ожидания и как они прошли консультацию и / или тестирование POC CRP. Рекомендации по обеспечению безопасности будут подкреплены информационным буклетом для родителей, основанным на предыдущих исследованиях (интерактивный буклет «Когда мне следует беспокоиться» (руководство по кашлю, простуде, боли в ухе и боли в горле), «Mijn kind heeft koorts» буклет (Eefje de Bont, www.thuisarts.nl) и буклет «Уход за кашляющими детьми» (информация о том, как ухаживать за кашляющим ребенком и когда обращаться к врачу). Результаты этого исследования могут изменить практику врачей амбулаторной помощи и могут представлять большой интерес для родителей и поставщиков услуг по уходу за детьми.Исследователи опубликуют результаты этого исследования в академических журналах, представят на национальных конференциях и обсудят результаты с группами, отвечающими за национальное руководство по оценке остро больных детей (Domus Medica, SSMG).
Общий статус	Рекрутинг
Дата начала	6 января 2021 г.
Дата завершения	1 июня 2023 г.
Дата завершения первичного	1 декабря 2022 г.
Фаза	Нет данных
Тип исследования	Интервенционный
Первичный результат	Измерение Временной интервал Частота назначения антибиотиков при первичной консультации (немедленная или отсроченная) Этот результат будет зарегистрирован сразу на первичной консультации (сразу после вмешательства)
Вторичный результат	Измерение Временной интервал Клиническое выздоровление в период наблюдения Этот результат будет проверяться в дневнике (через приложение для родителей) с первого дня после вмешательства до дня полного клинического выздоровления (максимум 30 дней после вмешательства) Дополнительные исследования при первичной консультации и / или во время последующего наблюдения Этот комбинированный результат будет зарегистрирован сразу после вмешательства и / или проверен из истории болезни пациента с первого дня до 30-го дня после вмешательства Повторная консультация во время наблюдения Этот результат будет проверяться из истории болезни пациента с первого дня до 30-го дня после вмешательства Частота назначения антибиотиков в период наблюдения Этот результат будет проверен на основании истории болезни пациента с первого дня до 30 дня после вмешательства.
Запись	6111
Состояние
Вмешательство	Тип вмешательства: Другой Название вмешательства: диагностический алгоритм Описание: Руководство будет частью диагностического алгоритма, который включает в себя клиническое тестирование С-реактивного белка в месте оказания медицинской помощи и советы по обеспечению безопасности, чтобы информировать родителей о том, чего ожидать и на что обратить внимание.Выбор клинических признаков будет оценен и записан врачом в истории болезни пациента и в e-CRF, включая дерево клинических решений (внутреннее ощущение врача, температура тела, одышка). Рекомендации по обеспечению безопасности будут подкреплены информационным буклетом для родителей, основанным на предыдущих исследованиях (интерактивный буклет «Когда мне следует беспокоиться» (руководство по кашлю, простуде, боли в ухе и боли в горле), «Mijn kind heeft koorts» буклет (Eefje de Bont, www. thuisarts.nl) и буклет «Уход за кашляющими детьми» (информация о том, как ухаживать за кашляющим ребенком и когда обращаться к врачу). Этикетка группы вооружений: Вмешательство: алгоритм диагностики
Право на участие	Критерии: Критерии включения в практику: — Возможность набирать детей с острыми заболеваниями (в идеале последовательно) — Согласиться с условиями соглашения о клиническом исследовании. Критерии исключения для практикующих врачей: — В настоящее время используется устройство POC CRP как часть повседневного ухода. — Никакие методы не будут исключены по другим причинам, кроме указанных выше. Возраст, демография, географический регион не будут использоваться для исключения подходящих практик.Это даст нам реальную репрезентативную группу врачей амбулаторной помощи. Критерии включения детей — Дети в возрасте от 6 месяцев до 12 лет при условии получения информированного согласия — поступающие с эпизодом острого заболевания, который начался максимум за 10 дней до основной консультации Критерии исключения для детей — Дети, ранее включенные в это исследование — дети с известным хроническим заболеванием (например, астма, иммунодефицит) — клинически нестабильность, требующая немедленного лечения — иммунодепрессанты, принимаемые в предыдущие 30 дней — травма как основная проблема — антибиотики, принимаемые в предыдущие 7 дней — нежелание или неспособность предоставить информацию согласие Пол: Все Минимальный возраст: 6 месяцев Максимальный возраст: 12 лет Здоровые добровольцы: Нет
Общий официальный	Фамилия Роль Принадлежность Ян И Вербакель, доктор медицинских наук Главный исследователь KU Leuven
Общий контакт	Фамилия: Тин Де Бурггрейв, доктор философии Телефон: +3216 37 76 72 Электронное письмо: [электронная почта защищена]
Расположение	Помещение: Статус: Контакты: врачей общей практики, связанных с KU Leuven Тине де Бурггрейв
Расположение Страны	Бельгия
Дата проверки	Январь 2021 г.
Ответственное лицо	Тип: Главный следователь Принадлежность исследователя: KU Leuven ФИО следователя: Ян Вербакель Должность исследователя: Профессор доктор
Ключевые слова
Имеет расширенный доступ	Нет
Состояние Просмотр
Кол-во вооружений	2
Группа вооружений	Этикетка: Вмешательство: алгоритм диагностики Тип: Активный компаратор Описание: диагностический алгоритм, включающий стандартизированную клиническую оценку, тест на С-реактивный белок в месте оказания медицинской помощи и советы по страховке Этикетка: Обычный уход Тип: Без вмешательства Описание: В контрольной группе пациенты будут получать «обычную помощь», оставленную на усмотрение лечащего врача. Помимо общего тренинга для всех участвующих врачей, которые они посетили до набора и рандомизации, врачи контрольной группы не получат дополнительных инструментов. Ожидается, что они (но не принуждены) следовать бельгийским рекомендациям (как описано в «Национальных рекомендациях BAPCOC и консенсусе RIZIV на встрече« Рациональное использование антибиотиков у детей »).
Акроним	ARON
Данные пациента	Нет
Информация о дизайне исследования	Размещение: Рандомизированный Модель вмешательства: Параллельное присвоение Описание модели вмешательства: многоцентровое кластерно-рандомизированное прагматическое исследование в параллельных группах Основная цель: Другой Маскировка: Нет (открытая этикетка) Описание маскировки: Благодаря процедурам исследования дети, их родители и врачи не будут замаскированы для случайного распределения практик.

Надежное шифрование SSL / TLS: часто задаваемые вопросы — HTTP-сервер Apache версии 2.4

Мудрец не дает правильных ответов, он задает правильные вопросы.

— Клод Леви-Стросс

См. Также

Почему я получаю ошибки прав доступа, связанные с SSLMutex при запуске Apache?

Ошибки, такие как « mod_ssl: Ребенок не может открыть Файл блокировки SSLMutex / opt / apache / logs / ssl_mutex.18332 (следует системная ошибка) [...] Система: Permission denied (errno: 13) » обычно вызвано чрезмерно ограничительными разрешениями для родительских каталогов . Убедитесь, что все родительские каталоги (здесь / opt , / opt / apache и / opt / apache / logs ) имеют x-бит установить, как минимум, UID, под которым работают дочерние элементы Apache (см. директива User ).

Почему mod_ssl останавливается с ошибкой «Не удалось создать временный 512-битный закрытый ключ RSA» при запуске Апач?

Криптографическому программному обеспечению нужен источник непредсказуемых данных чтобы работать правильно.Многие операционные системы с открытым исходным кодом предоставляют «устройство случайности», которое служит этой цели (обычно называемое / dev / random ). В других системах приложения должны заполнить генератор псевдослучайных чисел OpenSSL (PRNG) вручную с помощью соответствующие данные перед генерацией ключей или выполнением открытого ключа шифрование. Начиная с версии 0.9.5, функции OpenSSL, требующие случайность сообщает об ошибке, если ГПСЧ не был засеян не менее 128 бит случайности.

Чтобы предотвратить эту ошибку, mod_ssl должен предоставить достаточно энтропии для ГПСЧ, чтобы он мог работать правильно.Это может выполняется через SSLRandomSeed директива.

Можно ли предоставить HTTP и HTTPS с того же сервера?

Да. HTTP и HTTPS используют разные порты сервера (HTTP связывается с порт 80, HTTPS на порт 443), поэтому нет прямого конфликта между их. Вы можете запустить два отдельных экземпляра сервера, привязанных к эти порты или используйте элегантный виртуальный хостинг Apache для создать два виртуальных сервера, обслуживаемых одним экземпляром Apache — один отвечает по HTTP на запросы через порт 80, а другой отвечать по HTTPS на запросы через порт 443.

Какой порт использует HTTPS?

Вы можете запустить HTTPS на любом порту, но в стандартах указан порт 443, который это то место, где по умолчанию будет искать любой HTTPS-совместимый браузер. Вы можете заставить ваш браузер ищет другой порт, указав его в URL-адресе. За Например, если ваш сервер настроен для обслуживания страниц через HTTPS через порт 8080, вы можете получить к ним доступ по адресу https://example. com:8080/

Как использовать HTTPS вручную в целях тестирования?

В то время как вы обычно просто используете

$ telnet localhost 80
GET / HTTP / 1.0

для простого тестирования Apache через HTTP, это не так просто для HTTPS из-за протокола SSL между TCP и HTTP. С помощь команды OpenSSL s_client , однако вы можете сделайте аналогичную проверку через HTTPS:

$ openssl s_client -connect localhost: 443 -state -debug
GET / HTTP / 1.0

Перед фактическим ответом HTTP вы получите подробный информация о подтверждении SSL. Для более общей команды линейный клиент, который напрямую понимает как HTTP, так и HTTPS, может выполнять операции GET и POST, может использовать прокси, поддерживает байт диапазоны и т. д.Вы должны взглянуть на изящный Инструмент cURL. Используя это, вы можете убедитесь, что Apache правильно отвечает на запросы через HTTP и HTTPS следующим образом:

$ curl http: // localhost /
$ curl https: // localhost /

Почему зависает соединение при подключении на мой сервер Apache с поддержкой SSL?

Это может произойти, когда вы пытаетесь подключиться к HTTPS-серверу (или виртуальному сервер) через HTTP (например, используя http://example. com/ вместо https: // пример.com ). Это также может произойти при попытке подключиться через HTTPS к HTTP-серверу (например, используя https://example.com/ на сервере, который не поддерживает HTTPS, или который поддерживает его на нестандартном порту). Убедитесь, что вы подключение к (виртуальному) серверу, поддерживающему SSL.

Почему я получаю сообщение « Соединение отказано », при попытке доступа к моему недавно установленному серверу Apache + mod_ssl через HTTPS?

Эта ошибка может быть вызвана неправильной конфигурацией.Убедитесь, что директивы Listen соответствуют вашей <виртуальный хост> директивы. Если ничего не помогает, начните заново, используя значение по умолчанию. конфигурация предоставляется mod_ssl .

Почему

SSL_XXX переменные недоступны для моих сценариев CGI и SSI?

Убедитесь, что у вас есть « SSLOptions + StdEnvVars » включен для контекста ваших запросов CGI / SSI.

Как переключаться между HTTP и HTTPS в относительной гиперссылки?

Обычно для переключения между HTTP и HTTPS необходимо использовать полные гиперссылки (потому что вам нужно изменить URL схема)./(.*)_NOSSL$ «» http: //% {SERVER_NAME} / $ 1 «[R, L]

Этот набор правил перезаписи позволяет использовать гиперссылки в форме , чтобы переключиться на HTTPS в относительной ссылке. (Замените SSL на NOSSL, чтобы переключиться на HTTP.)

Что такое закрытые ключи, CSR и сертификаты RSA?

Файл закрытого ключа RSA — это цифровой файл, который можно использовать для расшифровки сообщения, отправленные вам. У него есть общедоступный компонент, который вы распространяете (через ваш файл сертификата), который позволяет людям шифровать эти сообщения для ты.

Запрос на подпись сертификата (CSR) — это цифровой файл, содержащий ваш открытый ключ и ваше имя. Вы отправляете CSR в сертифицирующий орган (CA), который конвертирует его в настоящий Сертификат, подписав его.

Сертификат содержит ваш Открытый ключ RSA, ваше имя, имя ЦС и цифровая подпись CA. Браузеры, которым известен ЦС, могут проверить подпись на этом Сертификат, тем самым получая ваш открытый ключ RSA. Это позволяет им отправлять сообщения, которые можете расшифровать только вы.

Общие сведения см. В главе «Введение». описание протокола SSL.

Есть ли разница при запуске между Apache без поддержки SSL и Apache с поддержкой SSL?

Да. В общем, запуск Apache с mod_ssl встроенный — это как запуск Apache без этого. Однако, если у вас есть кодовая фраза на вашем приватном SSL key, появится диалоговое окно запуска, в котором вас попросят ввести передать фразу.

Необходимость вручную ввести парольную фразу при запуске сервера может быть проблематичным — например, при запуске сервера с скрипты загрузки системы. В этом случае вы можете следовать инструкциям ниже, чтобы удалить кодовую фразу из ваш закрытый ключ. Помните, что это обеспечивает дополнительную безопасность. риски — действуйте осторожно!

Как создать самоподписанный SSL Сертификат для тестирования?

1. Убедитесь, что OpenSSL установлен и в вашем PATH .
2. Выполните следующую команду, чтобы создать server.key и server.crt файлы:
   $ openssl req -new -x509 -nodes -out server.crt -keyout server.key
   Их можно использовать следующим образом в вашем httpd.conf файл:

    SSLCertificateFile "/path/to/this/server.crt"
   SSLCertificateKeyFile "/path/to/this/server.key" 

3. Важно, чтобы вы знали, что это server.key имеет ли не кодовую фразу. Чтобы добавить к ключу кодовую фразу, вы должны запустить следующее , введите и проверьте кодовую фразу, как требуется.

   $ openssl rsa -des3 -in server.key -out server.key.new
$ mv server.key.new server.key
   

   Сделайте резервную копию файла server.key и парольной фразы. вы вошли в безопасное место.

Как создать настоящий сертификат SSL?

Вот пошаговое описание:

1. Убедитесь, что OpenSSL установлен и в вашем PATH .
2. Создайте закрытый ключ RSA для вашего сервера Apache (будет зашифрован Triple-DES и отформатирован в формате PEM):

   $ openssl genrsa -des3 -out server.key 2048

   Сделайте резервную копию этого файла server.key и пароль, который вы ввели в безопасном месте. Вы можете увидеть детали этого закрытого ключа RSA с помощью команды:

   $ openssl rsa -noout -text -in server.key

   При необходимости вы также можете создать расшифрованную версию PEM (не рекомендуется) этого закрытого ключа RSA с:

   $ openssl rsa -in server. ключ -out server.key.unsecure

3. Создать запрос на подпись сертификата (CSR) с частным сервером RSA ключ (вывод будет в формате PEM):

   $ openssl req -new -key server.key -out server.csr

   Убедитесь, что вы ввели полное доменное имя («Полное доменное имя») сервер, когда OpenSSL запрашивает у вас «CommonName», т.е. когда вы создать CSR для веб-сайта, к которому позже можно будет получить доступ через https: // www.foo.dom / , введите здесь «www.foo.dom». Вы можете увидеть детали этого CSR, используя

   $ openssl req -noout -text -in server.csr

4. Теперь вы должны отправить этот запрос на подпись сертификата (CSR) по адресу удостоверяющий центр (CA), который должен быть подписан. Как только CSR был подписан, у вас будет настоящий Сертификат, которым могут воспользоваться Apache. Вы можете получить CSR, подписанный коммерческим центром сертификации, или создайте свой собственный центр сертификации, чтобы подписать его.
   Коммерческие центры сертификации обычно просят вас опубликовать CSR в веб-форме, оплатить подпись, а затем отправить подписанный Сертификат, который можно хранить в файле server.crt.
   Подробнее о том, как создать собственный центр сертификации и использовать его для подписи CSR, см. ниже.
   После подписания вашего CSR вы можете увидеть подробную информацию о Сертификат выглядит следующим образом:

   $ openssl x509 -noout -text -in server.crt
   

5. Теперь у вас должно быть два файла: server.ключ и server.crt . Их можно использовать в вашем httpd.conf файл:

    SSLCertificateFile "/path/to/this/server.crt"
   SSLCertificateKeyFile "/path/to/this/server.key" 

   Файл server.csr больше не нужен.

Как создать и использовать собственный центр сертификации (CA)?

Короткий ответ — использовать CA. sh или CA.pl скрипт, предоставленный OpenSSL.Если у вас нет веской причины не делать этого, вы должны использовать их для предпочтения. Если вы не можете, вы можете создать самоподписанный сертификат:

1. Создайте закрытый ключ RSA для вашего сервера (будет зашифрован Triple-DES и отформатирован в формате PEM):

   $ openssl genrsa -des3 -out server.key 2048

   Сделайте резервную копию этого файла server.key и пароль, который вы ввели в безопасном месте. Вы можете увидеть детали этого закрытого ключа RSA, используя команда:

   $ openssl rsa -noout -text -in server.ключ

   При необходимости можно также создать расшифрованную версию PEM (не рекомендуется) этого закрытого ключа RSA с:

   $ openssl rsa -in server.key -out server.key.unsecure

2. Создать самоподписанный сертификат (структура X509) с только что созданным ключом RSA (вывод будет в формате PEM):

   $ openssl req -new -x509 -nodes -sha1 -days 365 -key server. key -out сервер.crt -extensions usr_cert

   Это подписывает CSR сервера и приводит к созданию файла server.crt .
   Вы можете просмотреть детали этого сертификата, используя:

   $ openssl x509 -noout -text -in server.crt

Как я могу изменить парольную фразу в моем файле закрытого ключа?

Вам просто нужно прочитать его со старой парольной фразой и написать снова, указав новую парольную фразу. Вы можете сделать это с помощью следующих команды:

$ openssl rsa -des3 -in server.key -out server.key.new
$ mv server.key.new server.key

При первом запросе парольной фразы PEM вы должны введите старый пароль. После этого вас снова попросят введите парольную фразу — на этот раз используйте новую парольную фразу. если ты попросят подтвердить пароль, вам нужно будет ввести новый пароль второй раз.

Как я могу избавиться от диалога с парольной фразой при запуске Apache?

Причина, по которой это диалоговое окно появляется при запуске и при каждом перезапуске это закрытый ключ RSA внутри вашего сервера.ключевой файл хранится в зашифрованный формат по соображениям безопасности. Пароль нужен для расшифровки этот файл, чтобы его можно было прочитать и проанализировать. Удаление парольной фразы удаляет слой безопасности с вашего сервера — действуйте осторожно!

1. Удалите шифрование с закрытого ключа RSA (пока сохранение резервной копии исходного файла):

   $ cp server.key server.key.org
$ openssl rsa -in server.key.org -out server.ключ

2. Убедитесь, что файл server.key доступен для чтения только root:

   $ chmod 400 server.key

Теперь server.key содержит незашифрованную копию ключа. Если вы укажете свой сервер на этот файл, он не будет запрашивать пароль. ОДНАКО, если кто-то получит этот ключ, он сможет выдавать себя за вас в сети. ПОЖАЛУЙСТА, убедитесь, что разрешения на это файл таковы, что только root или пользователь веб-сервера могут его прочитать (желательно, чтобы ваш веб-сервер запускался как root, но запускался как другой пользователь, и ключ доступен для чтения только root).

В качестве альтернативного подхода вы можете использовать « SSLPassPhraseDialog exec: / путь / к / программе » средство. Имейте в виду, что это ни более, ни менее безопасно, конечно.

Как проверить, соответствует ли закрытый ключ сертификату?

Закрытый ключ содержит серию цифр. Два из этих чисел образуют «открытый ключ», остальные являются частью «закрытого ключа». Публика key «биты включаются при создании CSR и впоследствии формируют часть связанного Сертификата.

Чтобы проверить, что открытый ключ в вашем Сертификате соответствует общедоступному часть вашего закрытого ключа, вам просто нужно сравнить эти числа. Для просмотра Сертификата и ключа выполните команды:

$ openssl x509 -noout -text -in server.crt
$ openssl rsa -noout -text -in server.key

Части `модуля ‘и` публичной экспоненты’ в ключе и Сертификат должен совпадать. В качестве публичной экспоненты обычно 65537 и трудно визуально проверить, что длинные числа модуля одинаковы, можно использовать следующий подход:

$ openssl x509 -noout -modulus -in server.crt | openssl md5
$ openssl rsa -noout -modulus -in server.key | openssl md5

Это оставляет вам два более коротких числа для сравнения. Это, теоретически возможно, что эти числа могут быть такими же, без числа модуля одинаковы, но шансы на это в подавляющем большинстве отдаленный.

Если вы хотите проверить, для какого ключа или сертификата CSR принадлежит, вы можете выполнить тот же расчет для CSR, что и следует:

$ openssl req -noout -modulus -in server. csr | openssl md5

Как преобразовать сертификат из формата PEM в формат DER?

Формат сертификата по умолчанию для OpenSSL — PEM, что просто DER в кодировке Base64 со строками заголовка и нижнего колонтитула. Для некоторых приложений (например, Microsoft Internet Explorer) вам нужен сертификат в виде простого DER формат. Вы можете преобразовать файл PEM cert.pem в соответствующий файл DER cert.der , используя следующую команду: $ openssl x509 -в сертификате.pem -out cert.der -outform DER

Почему браузеры жалуются, что не могут проверить мой сертификат сервера?

Одна из причин, по которой это может произойти, заключается в том, что сертификат вашего сервера подписан промежуточным ЦС. Различные центры сертификации, такие как Verisign или Thawte, уже запущены подписывать сертификаты не корневым сертификатом, а промежуточным сертификаты.

Промежуточные сертификаты ЦС лежат между сертификатом корневого ЦС (который установлен в браузерах) и сертификат сервера (который вы установили на сервере).Чтобы браузер мог просматривать и проверять цепочка доверия от сертификата сервера до корневого сертификата необходимо предоставить промежуточные сертификаты. Центры сертификации должны иметь возможность предоставить вам такие промежуточные пакеты сертификатов, которые могут быть установлен на сервере.

Вам необходимо включить эти промежуточные сертификаты с SSLCertificateChainFile директива.

Почему я получаю много случайных SSL-протоколов ошибки при большой нагрузке на сервер?

Причин тому может быть несколько, но основная есть проблемы с кешем сеанса SSL, указанным SSLSessionCache директива.Сеанс DBM кеш является наиболее вероятным источником проблемы, поэтому использование кеша сеанса SHM (или кеша нет вообще) может помочь.

Почему у моего веб-сервера теперь более высокая нагрузка что он обслуживает зашифрованный трафик SSL?

SSL использует надежное криптографическое шифрование, что требует большого количества числовой хруст. Когда вы запрашиваете веб-страницу через HTTPS, все (даже изображения) перед передачей зашифровывается. Так увеличился HTTPS трафик приводит к увеличению нагрузки.

Почему HTTPS-подключения к моему серверу иногда для установления соединения требуется до 30 секунд?

Обычно это вызвано устройством / dev / random для SSLRandomSeed , который блокирует read (2) до тех пор, пока энтропия не станет доступной для обслуживания запрос. Более подробная информация доступна в справочнике инструкция для SSLRandomSeed директива.

Какие SSL-шифры поддерживает mod_ssl?

Обычно любые SSL-шифры, поддерживаемые используемой версией OpenSSL, также поддерживаются mod_ssl . Какие шифры Доступность может зависеть от того, как вы построили OpenSSL. Обычно при как минимум поддерживаются следующие шифры:

1. RC4 с SHA1
2. AES с SHA1
3. Triple-DES с SHA1

Чтобы определить фактический список доступных шифров, вы должны запустить следующие:

Почему я получаю ошибку « нет общего шифра », когда пытаетесь использовать анонимные шифры Диффи-Хеллмана (ADH)?

По умолчанию OpenSSL не разрешает шифров ADH в целях безопасности. причины.Убедитесь, что вы знаете о возможных побочных эффектах. если вы решите включить эти шифры.

Для использования анонимных шифров Диффи-Хеллмана (ADH) вы должны построить OpenSSL с « -DSSL_ALLOW_ADH », а затем добавить « ADH » в ваш SSLCipherSuite .

Почему я получаю сообщение «нет общих шифров» ошибка при подключении к моему недавно установленному серверу?

Либо вы ошиблись с вашим SSLCipherSuite директива (сравните ее с предварительно настроенным примером в дополнительный / httpd-ssl. conf ) или вы выбрали DSA / DH алгоритмы вместо RSA, когда вы сгенерировали свой закрытый ключ и проигнорировал или проигнорировал предупреждения. Если вы выбрали DSA / DH, тогда ваш сервер не может взаимодействовать с использованием SSL на основе RSA шифров (по крайней мере, пока вы не настроите дополнительный RSA-based пара сертификат / ключ). Современные браузеры, такие как NS или IE, могут только общаться через SSL с использованием шифров RSA. В результате Ошибка «нет общих шифров». Чтобы исправить это, восстановите свой сервер пара сертификат / ключ с использованием алгоритма RSA.

Почему я не могу использовать SSL с виртуальными хостами на основе имен / не на основе IP?

Причина очень техническая и в некотором роде проблема «курицы и яйца». Уровень протокола SSL остается ниже уровня протокола HTTP и инкапсулирует HTTP. Когда установлено SSL-соединение (HTTPS) Apache / mod_ssl должен согласовывать параметры протокола SSL с клиент. Для этого mod_ssl должен проконсультироваться с конфигурацией виртуального сервер (например, он должен искать набор шифров, сервер сертификат и др.). Но чтобы перейти на правильный виртуальный сервер Apache должен знать поле заголовка HTTP Host . Для этого Заголовок HTTP-запроса должен быть прочитан. Это невозможно сделать до SSL. рукопожатие завершено, но информация нужна для того, чтобы завершите фазу подтверждения SSL. См. Следующий вопрос о том, как обойти эту проблему.

Обратите внимание, что если у вас есть сертификат SSL с подстановочными знаками или сертификат с несколькими именами хостов с использованием subjectAltName полей, вы можете использовать SSL на виртуальных хостах на основе имен без дополнительных обходные пути.

Можно ли использовать на основе имени Виртуальный хостинг для идентификации различных виртуальных хостов SSL?

Виртуальный хостинг на основе имен — очень популярный метод идентификации разные виртуальные хосты. Это позволяет использовать один и тот же IP-адрес и один и тот же номер порта для многих разных сайтов. Когда люди переходят к SSL, кажется естественным предположить, что тот же метод можно использовать для множество разных виртуальных хостов SSL на одном сервере.

Возможно, но только при использовании 2.2.12 или новее веб-сервер, построен с использованием OpenSSL 0.9.8j или новее. Это потому, что для этого требуется особенность, что только самые последние версии SSL добавлена ​​спецификация, называемая указанием имени сервера (SNI).

Обратите внимание, что если у вас есть сертификат SSL с подстановочными знаками или сертификат с несколькими именами хостов с использованием subjectAltName полей, вы можете использовать SSL на виртуальных хостах на основе имен без дополнительных обходные пути.

Причина в том, что протокол SSL — это отдельный уровень, который инкапсулирует протокол HTTP.Таким образом, сеанс SSL — это отдельный транзакция, которая происходит до начала сеанса HTTP. Сервер получает запрос SSL на IP-адрес X и порт Y (обычно 443). Поскольку запрос SSL не содержал Host: В поле, сервер не мог решить, какой виртуальный хост SSL использовать. Обычно он просто использовал первый найденный, который соответствовал указаны порт и IP-адрес.

Если вы используете версию веб-сервера и OpenSSL, хотя поддерживает SNI, и браузер клиента также поддерживает SNI, тогда имя хоста включается в исходный запрос SSL, а веб-сервер может выбрать правильный виртуальный хост SSL.

Конечно, вы можете использовать виртуальный хостинг на основе имен для идентификации многих виртуальные хосты без SSL (например, все на порту 80), а затем иметь один виртуальный хост SSL (на порту 443). Но если ты сделаешь это, вы должны убедиться, что указали номер порта без SSL в NameVirtualHost директива, например

 NameVirtualHost 192.168.1.1:80 

Другие обходные решения включают:

Использование отдельных IP-адресов для разных хостов SSL. Использование разных номеров портов для разных хостов SSL.

Как заставить работать сжатие SSL?

Хотя согласование сжатия SSL было определено в спецификации SSLv2 и TLS, до мая 2004 г. в RFC 3749 потребовалось определение DEFLATE как договорный стандартный метод сжатия.

OpenSSL 0.9.8 начал поддерживать это по умолчанию при компиляции с zlib опция. Если и клиент, и сервер поддерживают сжатие, он будет использован. Однако большинство клиентов по-прежнему пытаются сначала подключиться к SSLv2 Здравствуйте.Поскольку SSLv2 не включал массив предпочтительных алгоритмов сжатия в его рукопожатии сжатие не может быть согласовано с этими клиентами. Если клиент отключает поддержку SSLv2, либо SSLv3, либо TLS Hello могут быть отправлены в зависимости от того, какая библиотека SSL используется, а сжатие может быть настроенным. Вы можете проверить, используют ли клиенты сжатие SSL, регистрация переменной % {SSL_COMPRESS_METHOD} x .

Когда я использую базовую аутентификацию через HTTPS значок замка в браузерах Netscape остается разблокированным при появлении диалогового окна.

Означает ли это, что имя пользователя и пароль отправляются в незашифрованном виде?

Нет, имя пользователя / пароль передаются в зашифрованном виде. Значок в Браузеры Netscape фактически не синхронизируются с уровнем SSL / TLS. Он переключается в заблокированное состояние только тогда, когда первая часть фактического данные веб-страницы передаются, что может запутать людей. Базовый Средство аутентификации является частью уровня HTTP, который находится выше уровень SSL / TLS в HTTPS. Прежде чем любая передача данных HTTP займет место в HTTPS, уровень SSL / TLS уже завершил свое рукопожатие фазы и перешли на шифрованную связь.Так что не будь смущает этот значок.

Почему возникают ошибки ввода-вывода при подключении через HTTPS к серверу Apache + mod_ssl со старыми версиями Microsoft Internet Проводник (MSIE)?

Первая причина заключается в том, что реализация SSL в некоторых версиях MSIE имеет некоторые тонкие ошибки, связанные с функцией сохранения активности HTTP и закрытием SSL уведомлять предупреждения о закрытии сокетного соединения. Дополнительно взаимодействие Между функциями SSL и HTTP / 1.1 в некоторых версиях MSIE возникают проблемы.Вы можете обойти эти проблемы, заставив Apache не использовать HTTP / 1.1, поддерживать активные соединения или отправлять сообщения с уведомлением о закрытии SSL клиентам MSIE. Это можно сделать с помощью следующей директивы в вашем SSL-совместимом раздел виртуального хоста:

 SetEnvIf User-Agent "MSIE [2-5]" \
         nokeepalive ssl-unclean-shutdown \
         downgrade-1.0 force-response-1.0 

Кроме того, в некоторых версиях MSIE есть проблемы с определенными шифрами. К сожалению, невозможно реализовать специфичный для MSIE обходной путь для этого, потому что шифры нужны уже Фаза подтверждения SSL.Итак, специфичный для MSIE SetEnvIf не решит эти проблемы проблемы. Вместо этого вам придется сделать более решительный корректировки глобальных параметров. Прежде чем вы решите сделать убедитесь, что у ваших клиентов действительно есть проблемы. Если нет, не внесите эти изменения — они повлияют на всех ваших клиентов, MSIE или иным образом.

Как включить TLS-SRP?

TLS-SRP (безопасный обмен ключами удаленного пароля для TLS, указанный в RFC 5054) может дополнять или заменять сертификаты при аутентификации SSL-соединения.Чтобы использовать TLS-SRP, установите SSLSRPVerifierFile директива для укажите на файл верификатора OpenSSL SRP. Чтобы создать файл верификатора, используйте openssl инструмент:

openssl srp -srpvfile passwd.srpv -add имя пользователя

После создания этого файла укажите его в конфигурации сервера SSL:

SSLSRPVerifierFile /path/to/passwd.srpv

Чтобы заставить клиентов использовать наборы шифров TLS-SRP без сертификата, используйте следующая директива:

SSLCipherSuite "! DSS:! ARSA: SRP"

Почему у меня возникают сбои при установлении связи с клиентами на базе Java при использовании сертификата с более чем 1024 битами?

Начиная с версии 2. 4.7, mod_ssl будет использовать параметры DH, которые включают простые числа с длиной более 1024 бит. Java 7 и более ранние версии ограничивают Однако поддержка простых размеров DH не превышает 1024 бит.

Если ваш Java-клиент прерывает работу с такими исключениями, как java.lang.RuntimeException: не удалось создать пару ключей DH и java.security.InvalidAlgorithmParameterException: основной размер должен быть кратно 64 и может находиться в диапазоне от 512 до 1024 (включительно) , и журналы httpd внутренняя ошибка предупреждения tlsv1 (номер предупреждения SSL 80) (на LogLevel информация или выше), вы можете изменить список шифров mod_ssl с помощью SSLCipherSuite (возможно, вместе с SSLHonorCipherOrder ), или вы можете использовать настраиваемые параметры DH с 1024-битным простым числом, которое всегда будет иметь приоритет над любым из встроенных параметров DH.

Для создания пользовательских параметров DH используйте openssl dhparam 1024 команда. В качестве альтернативы вы можете использовать следующий стандартный 1024-битный DH параметры из RFC 2409, раздел 6.2:

 ----- НАЧАЛО ПАРАМЕТРОВ DH -----
MIGHAoGBAP ////////// yQ / aoiFowjTExmKLgNwc0SkCTgiKZ8x0Agu + pjsTmyJR
Sgh5jjQE3e + VGbPNOkMbMCsKbfJfFDdP4TVtbVHCReSFtXZiXn7G9ExC6aY37WsL
/ 1y29Aa37e44a / taiZ + lrp8kEXxLH + ZJKGZR7OZTgf ////////// AgEC
----- КОНЕЦ ПАРАМЕТРОВ DH ----- 

Добавьте специальные параметры, включая «НАЧАЛО ПАРАМЕТРОВ DH» и Строки «END DH PARAMETERS» до конца первого файла сертификата вы настроили с помощью SSLCertificateFile директива.

Какие информационные ресурсы доступны в случае проблем с mod_ssl?

Доступны следующие информационные ресурсы. В случае возникновения проблем вам следует сначала поискать здесь.

Ответы на часто задаваемые вопросы в руководстве пользователя. Список (этот)

http://httpd.apache.org/docs/2.4/ssl/ssl_faq.html
Сначала проверьте F.A.Q. (этот текст). Если ваша проблема обычная один, на него, возможно, отвечали несколько раз раньше, и он был включен в этом док.

Какие контакты поддержки доступны в случае проблем с mod_ssl?

Ниже перечислены все возможности поддержки mod_ssl в порядке предпочтение. Пожалуйста, ознакомьтесь с этими возможностями в этом порядке — не выбирайте только тот, который вам нравится.

1. Отправьте отчет о проблеме в список рассылки поддержки пользователей Apache httpd
   [email protected]
   Это второй способ отправки отчета о проблеме.Опять же, вы должны сначала подпишитесь на список, а затем вы сможете легко обсудить свою проблему со всем сообществом пользователей Apache httpd.
2. Запись отчета о проблеме в базу данных ошибок
   http://httpd.apache.org/bug_report.html
   Это последний способ отправки отчета о проблеме. Вы должны только сделайте это, если вы уже разместили сообщения в списках рассылки и не добились успеха. Пожалуйста, внимательно следуйте инструкциям на странице выше .

Какую информацию я должен предоставить при написании отчета об ошибке?

Вы всегда должны предоставлять как минимум следующую информацию:

Информация о версии Apache httpd и OpenSSL

Версия Apache может быть определена запустив httpd -v . Версия OpenSSL может быть определяется запуском openssl версии . В качестве альтернативы, если у вас установлен Lynx, вы можете запустить команду lynx -mime_header http: // localhost / | grep Server для сбора этой информации в один шаг.

Подробная информация о том, как вы собрали и установили Apache httpd и OpenSSL

Для этого вы можете предоставить файл журнала сеанса терминала, который показывает шаги настройки и установки. Если это невозможно, вы должен хотя бы предоставить используемую вами командную строку configure .

В случае дампов ядра, пожалуйста, включите Backtrace

Если ваш Apache httpd сбрасывает свое ядро, прикрепите стек-фрейм « обратная трассировка » (см. ниже для получения информации о том, как это получить).Эта информация обязательна чтобы найти причину своего дампа ядра.

Подробное описание вашей проблемы

Не смейтесь, мы серьезно! Многие отчеты о проблемах не включите описание реальной проблемы. Без этого кому-то очень трудно помочь тебе. Итак, это ваше собственное интерес (вы хотите, чтобы проблема была решена, не так ли?) включить как поподробнее, пожалуйста. Конечно, вы все равно должны включить все необходимое выше тоже.

У меня был дамп ядра, поможете?

В общем, нет, по крайней мере, если вы не предоставите более подробную информацию о коде место, куда Apache сбросил ядро. Что обычно всегда требуется в Чтобы помочь вам, это обратный след (см. следующий вопрос). Без этого информация в большинстве случаев невозможно найти проблему и помочь вам в исправить это.

Как получить обратную трассировку, чтобы помочь найти причина моего дампа ядра?

Ниже приведены шаги, которые вам нужно будет выполнить, чтобы получить обратную трассировку:

1. Убедитесь, что у вас есть отладочные символы, по крайней мере в Apache.На платформах, где вы используете GCC / GDB, вам нужно будет собрать Apache + mod_ssl с « OPTIM = "- g -ggdb3" «, чтобы получить это. На для других платформ требуется как минимум « OPTIM =" - g "«.
2. Запустите сервер и попробуйте воспроизвести дамп ядра. Для этого вы можете хотите использовать директиву типа « CoreDumpDirectory / tmp » для убедитесь, что файл дампа ядра можно записать. Это должно привести в файле / tmp / core или / tmp / httpd.core файл. если ты не получите ни одного из них, попробуйте запустить свой сервер под некорневым UID. Многие современные ядра не позволяют процессу выгружать ядро ​​после того, как он выполнил setuid () (если он не выполняет exec () ) для по соображениям безопасности (может быть, в объем памяти). При необходимости вы можете запустить / path / to / httpd -X вручную, чтобы заставить Apache не разветвляться.
3. Проанализировать дамп ядра.Для этого запустите gdb / path / to / httpd /tmp/httpd.core или аналогичная команда. В GDB все вы тогда нужно ввести bt , и вуаля, вы получите обратная трассировка. Для других отладчиков обратитесь к руководству по местному отладчику.

Репертуар иммунных рецепторов при остром миелоидном лейкозе у детей и взрослых | Genome Medicine

In silico проверка точности TRUST для сборки TCR и BCR CDR3 из данных RNA-seq

Общий подход в нашем исследовании неоднократно подтверждался в нашей предыдущей работе [22, 24,25,26].В этом исследовании мы применили тот же подход для изучения потенциальной функциональной роли Т / В-клеток в ОМЛ с использованием большого количества общедоступных образцов последовательности РНК. Здесь мы также выполнили in silico проверку точности нашего метода сборки TCR и BCR из данных RNA-seq с использованием общедоступных наборов данных scRNA-seq на иммунных клетках. Мы собрали один набор данных SMART-seq CD45-положительных лейкоцитов от пациентов с меланомой до лечения [27]. Хотя эти клетки были получены из инфильтрирующих иммунных клеток, они покрывали большинство типов клеток (макрофаги, моноциты, дендритные клетки, нейтрофилы, Т / В-лимфоциты, естественные клетки-киллеры и т. Д.) состоящий из иммунного микроокружения AML. Мы обнаружили, что доли T- и B-клеток, оцененные по результатам отдельных ячеек и TRUST-вызовам из «объемных» выборок, имеют значительную положительную корреляцию (дополнительный файл 2: рисунок S1a). Затем мы сравнили ассоциации количества TCR / BCR CDR3 между данными отдельной ячейки и вызовами TRUST из «массовых» выборок. Опять же, они также значительно положительно коррелированы (дополнительный файл 2: рисунок S1b), что указывает на то, что CDR3, обнаруженные с помощью TRUST из массивных данных RNA-seq, обеспечивают хорошее приближение к реальному количеству T / B-клеток в каждом образце.Для того чтобы оценить разнообразие клонотипов Т / В-клеток по данным отдельных клеток, мы рассчитали энтропию Шеннона, используя частоты аминокислотных последовательностей CDR3 β-цепи TCR и тяжелой цепи BCR. В смоделированных «объемных» данных мы применили CPK [22] для оценки клонотипического разнообразия Т / В-клеток. Соответственно, мы наблюдали значительную положительную корреляцию между энтропией TCR / BCR и CPK (дополнительный файл 2: рисунок S1c). Основываясь на этих результатах и ​​нашей предыдущей работе, мы пришли к выводу, что наш подход обладает достаточной мощностью для восстановления CDR3 TCR и BCR для оценки фракции и разнообразия как Т-, так и В-клеток из данных объемных последовательностей РНК, что позволило нам идентифицировать изменения Т- и В-клетки между AML и неопухолевыми образцами.

Обзор последовательностей CDR3 цепей TCR α, β, γ и δ в AML и неопухолевых образцах

TRUST идентифицировал в общей сложности 225000 последовательностей CDR3 TCR из AML (55000) и неопухолевых образцов (170 000). Несмотря на более глубокое секвенирование ОМЛ, чем неопухолевые образцы (дополнительный файл 2: рисунок S2a), мы наблюдали значительно меньше вызовов TCR CDR3 при AML (дополнительный файл 2: рисунок S2b), возможно, из-за высокого содержания злокачественных клеток в AML. Чтобы сравнить богатство TCR между образцами AML и неопухолевыми образцами, мы нормализовали количество CDR3 по глубине секвенирования и проценту бластов минус один (патологически оцененная чистота опухоли) в каждом образце.Как показано на фиг. 1a, нормализованное количество TCR CDR3 все еще значительно ниже в образцах AML. CDR3 цепи γδ составляют 5,8% от общего числа вызовов в AML и 6,6% в группе без опухолей (дополнительный файл 2: рисунок S2c), что согласуется с предыдущей оценкой, согласно которой Т-клетки γδ составляют менее 10% от общего числа Т-клеток. в ПБ человека [35]. Кроме того, мы наблюдали положительную корреляцию между CDR3 α и β и между CDR3 γ и δ из каждого образца как в AML, так и в неопухолевых группах (Дополнительный файл 2: Рисунок S2d, e), хотя мы не смогли соединить αβ или γδ CDR3 с данными RNA-seq.В целом, распределение длин CDR3 полных α, β, γ и δ цепей TCR и паттерны сохранения их последовательностей аналогичны между AML и неопухолевыми группами (дополнительный файл 2: рисунок S2f, g).

Рис. 1

Анализ разнообразия Т-клеток в AML и неопухолевых образцах. a Нормализованное количество TCR CDR3 в AML и неопухолевых группах. Количество CDR3 нормализовали по количеству считываний полного секвенирования и проценту бластов минус один (патологически оцененная чистота опухоли) в каждом образце. b TCR CDR3 на тысячу (килограмм) считываний TCR (CPK, как показатель разнообразия клонотипов) в группах AML и неопухолевых. c Гистограмма, показывающая соотношение связанного с вирусом β-CDR3 в AML и неопухолевых группах. Связанное с вирусом соотношение β-CDR3 определялось количеством связанных с вирусом (цитомегаловирусом, вирусом Эпштейна-Барра и гриппа) β-CDR3, деленным на общее количество уникальных полных β-CDR3 в каждой группе. d Сравнение β-CPK между образцами со слияниями генов CBFB-MYh21 и без них.Значения p в a , b и d были рассчитаны с использованием двустороннего критерия суммы рангов Вилкоксона. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, н.у. указывает на незначительное значение

Разнообразие клонотипов репертуара TCR в AML и неопухолевых образцах

Разнообразие клонотипов Т-клеток — важная особенность репертуара TCR, которая, как ранее сообщалось, имеет потенциальное клиническое значение [36, 37].Мы исследовали различия в разнообразии клонотипов Т-клеток между ОМЛ и неопухолевыми группами. Используя CPK для аппроксимации клонального разнообразия TCR [22], мы наблюдали значительно меньшее разнообразие как в детских, так и в взрослых образцах AML по сравнению с неопухолевыми образцами (рис. 1b). Этот результат предполагает, что Т-клетки более клональны в микроокружении ОМЛ. Не наблюдалось значительных различий в разнообразии TCR между образцами PB и BM в педиатрическом AML (дополнительный файл 2: рисунок S3a) или между педиатрическими и взрослыми неопухолевыми образцами (рис.1б). Интересно, что мы обнаружили, что образцы AML у младенцев имеют значительно более высокий уровень TCR CPK, чем у детей или взрослых AML (рис. 1b). Этот результат предполагает, что Т-клетки в меньшей степени увеличиваются при ОМЛ у младенцев, что может быть связано с ограниченным воздействием бактериальных и вирусных антигенов в младенчестве. Соответственно, мы также наблюдали более низкую фракцию β-CDR3, специфичных для общих вирусных эпитопов цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барра или гриппа [38], у детей с AML, чем у детей или взрослых AML (рис. 1c).

Неоантигены, возникающие в результате соматических мутаций, могут индуцировать опосредованную Т-клетками элиминацию раковых клеток [39].Прямым следствием активации антиген-специфических Т-клеток является клональная экспансия, которая может быть аппроксимирована обратной величиной CPK. Поэтому мы стремились изучить, была ли конкретная миссенс-мутация или слияние генов, которые были связаны с выживаемостью пациентов, были связаны с активацией αβ Т-клеток в образцах AML. Из-за отсутствия подробной информации о мутациях в образцах педиатрического AML мы могли проверить статус мутации только для пяти генов с высокой клинической значимостью (FLT3, NPM1, KIT, CEBPA и WT1) и для трех онкогенных слияний генов (RUNX1-RUNX1T1). , CBFB-MYh21 и PML-RARA).Мы обнаружили, что детские образцы AML со слияниями CBFB-MYh21 имеют значительно более низкое значение TCRβ CPK (рис. 1d), что позволяет предположить, что это слияние потенциально иммуногенное. Такая же тенденция наблюдалась в отношении ОМЛ младенцев и взрослых, хотя разница не столь значительна из-за ограниченного размера выборки.

Анализ γδ Т-клеток в AML и неопухолевых образцах

γδ Т-клетки составляют небольшой процент от общего количества Т-клеток в человеческом PB, и их роль в противоопухолевых иммунных ответах недостаточно изучена.Хотя доли γδ CDR3 одинаковы в образцах AML и неопухолевых образцах (рис. 2a) и между образцами PB и BM в педиатрическом AML (дополнительный файл 2: рисунок S3b), существуют интригующие возрастные различия. В группе без опухолей доля CDR3 γδ выше у детей по сравнению со взрослыми (рис. 2а), что согласуется с предыдущим отчетом о том, что частота и разнообразие γδ Т-клеток с возрастом снижаются [40]. Напротив, обратное наблюдалось в AML, где доля γδ CDR3 увеличивается с возрастом (рис.2а). Недавнее исследование показало, что Т-клетки Vγ9Vδ2 способны распознавать и уничтожать бласты AML посредством TCR-зависимого способа [41]. Вместе с нашими наблюдениями это предполагает, что, поскольку Т-клетки γδ могут взаимодействовать с бластами AML и уничтожать их, лейкозные клетки могут изменять развитие или распределение γδ Т-клеток в AML.

Рис. 2

Анализ γδ Т-клеток в AML и неопухолевых образцах. — фракция γδ Т-клеток в группах ОМЛ и неопухолевых группах. Фракцию γδ Т-клеток оценивали как суммарное количество γ или δ-CDR3, деленное на количество общих CDR3 TCR в каждом образце.Значения p были рассчитаны с использованием двустороннего критерия суммы рангов Вилкоксона. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, н.у. указывает на незначительное. b Тепловая карта матрицы сходства аминокислотных последовательностей δ-CDR3. Локальное выравнивание и BLOSUM62 использовали для расчета сходства между каждой парой полных аминокислотных последовательностей δ-CDR3. Синий цвет указывает на большое сходство. c Анализ мотива последовательности δ-CDR3 в кластере 1. d Кривые Каплана-Мейера, показывающие образцы AML с δ-CDR3, принадлежащими Cluster1, имеют лучшую общую выживаемость ( n = 19, желтая линия, p значение было оценено с использованием логарифмического критерия) потенциальное влияние γδ Т-клеток на AML, мы сгруппировали все полные δ-CDR3 на основе их попарного сходства последовательностей. Это выявило два основных кластера последовательностей δ-CDR3 (фиг. 2b), причем Cluster1 содержал 26 последовательностей от 19 пациентов.Все δ-CDR3 в Cluster1 были аннотированы как связанные с TRDV2 и TRDJ3. Анализ последовательности мотивов δ-CDR3 кластера 1 показал, что первые 4 и последние 8 аминокислот являются консервативными (фиг. 2c), а также глицин (G) в середине. Интересно, что у этих людей общая выживаемость значительно выше (рис. 2d) по сравнению с другими пациентами. Эти результаты предполагают, что δ-CDR3, содержащие специфический паттерн в Cluster1, могут служить потенциальным маркером прогноза или потенциальной терапевтической мишенью для пациентов с AML.

Обзор последовательностей BCR IgL, IgK и IgH CDR3 в AML и неопухолевых образцах

Затем мы исследовали изменения репертуаров BCR в микроокружении AML. TRUST получил в общей сложности 1,210,000 BCR (IgL, IgK и IgH) CDR3 из образцов AML (974,000) и неопухолевых (236,000) (дополнительный файл 2: рисунок S4a). Подобно меньшему количеству вызовов TCR CDR3 при AML, количество вызовов BCR CDR3 также значительно ниже в образцах AML по сравнению с образцами, не связанными с опухолями (рис.3a, дополнительный файл 2: рисунок S4b). Кроме того, количество CDR3 легкой цепи Ig (IgL и IgK) и тяжелой цепи Ig (IgH) в каждом образце, несмотря на то, что они не спарены, значительно положительно коррелирует как в группах AML, так и в группах без опухолей (дополнительный файл 2: рисунок S4c). . Нет существенной разницы в соотношении IgL и IgK CDR3 между AML и неопухолевыми образцами (дополнительный файл 2: рисунок S4d) или между образцами PB и BM в педиатрическом AML (дополнительный файл 2: рисунок S5a). Однако соотношение IgL к IgK значительно ниже у взрослых, чем в педиатрических образцах как в группах AML, так и в группах без опухолей (дополнительный файл 2: рисунок S4d), что указывает на возрастную разницу в использовании IgL по сравнению с IgK.Распределение длин полных CDR3 IgL и IgK и паттерны сохранения их последовательностей аналогичны между AML и неопухолевыми группами (дополнительный файл 2: рисунок S4e, f). Напротив, полные CDR3 IgH значительно длиннее в AML, чем в неопухолевых образцах (дополнительный файл 2: рисунок S4e, IgH), а также в PB, чем в образцах BM в педиатрическом AML (дополнительный файл 2: рисунок S5b). Ранее мы сообщали, что последовательности IgH CDR3 из увеличенных клонов В-клеток, инфильтрирующих опухоль, были значительно длиннее, чем нерасширенные клоны в солидных опухолях [24].Таким образом, более длинные CDR3 IgH, которые мы наблюдали при AML, могут быть следствием более высокого уровня клональной экспансии В-клеток в микроокружении AML.

Рис. 3

Аномальная активация В-клеток в образцах ОМЛ. a Нормализованное количество BCR CDR3 в AML и неопухолевых группах. Количество CDR3 нормализовали по количеству считываний полного секвенирования и проценту бластов минус один (патологически оцененная чистота опухоли) в каждом образце. b BCR CPK в группах AML и без опухолей. c Уровень IgH SHM в ОМЛ и неопухолевых группах. Значения p в a , b и c были рассчитаны с использованием двустороннего критерия суммы рангов Вилкоксона. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, н.у. указывает на незначительное. d Распределение 9 изотипов Ig в группах AML и неопухолевых группах. e Кривые регрессии 8 фракций изотипа Ig в зависимости от возраста в образцах AML. IgE был исключен из-за чрезвычайно низкой фракции в большинстве образцов. f Визуализация переключения классов изотипа Ig в группах AML и неопухолевых группах. Размер кружка представляет собой долю изотипов Ig, которая представляет собой количество кластеров IgH, несущих данный изотип Ig, деленное на общее количество кластеров IgH в каждой группе. Линии, соединяющие два круга, указывают на сосуществование двух изотипов в одном кластере, при этом ширина линии пропорциональна количеству таких кластеров, деленному на общее количество кластеров IgH в каждой группе

Паттерны активации и клональной экспансии В-клеток в образцах AML

Мы дополнительно исследовали потенциальное влияние В-клеток на ОМЛ.Подобно более низкому разнообразию TCR, разнообразие BCR CDR3 с точки зрения CPK также ниже в образцах AML, чем в неопухолевых образцах (рис. 3b). В отличие от Т-клеток, В-клетки при связывании с чужеродным антигеном подвергаются SHM и CSR с образованием высокоаффинных антител против антигена. Следовательно, SHM и CSR являются важными признаками активации и клональной экспансии В-клеток. Чтобы исследовать скорость SHM, мы подсчитали случаи, когда две последовательности CDR3 IgH отличаются только одним нуклеотидом, и разделили это количество на общее количество собранных оснований CDR3 в каждом образце.Используя этот показатель, мы наблюдали значительно более высокую частоту SHM в образцах AML у взрослых по сравнению с образцами AML у детей или образцами, не связанными с опухолями (рис. 3c). В соответствии с этим результатом, AICDA [42], ген, ответственный за SHM, также имеет значительно более высокую экспрессию в образцах AML у взрослых по сравнению с образцами AML у детей (дополнительный файл 2: Рисунок S6). Чтобы исследовать CSR, мы исследовали приблизительно 346 000 последовательностей IgH, которые были успешно сопоставлены с конкретными изотипами Ig. Мы наблюдали значительные различия в распределении изотипов среди групп с ОМЛ и неопухолевых групп (рис.3д). В частности, в неопухолевых образцах IgM и IgD, которые являются первыми двумя константными сегментами тяжелой цепи в локусе иммуноглобулина и обычно экспрессируются на наивных зрелых В-клетках [43], составляют большую часть общих последовательностей IgH (рис. 3д). В образцах ОМЛ младенцев также содержится более высокое содержание В-клеток IgM и IgD, но по мере старения пациентов с ОМЛ доля IgG и IgA увеличивается (рис. 3e). IgG1 и IgA1 становятся доминирующими изотипами Ig в образцах AML у детей и взрослых (рис. 3d, e). При нормализации экспрессии генов домашнего хозяйства мы обнаружили, что уровень IgM и IgD снизился лишь незначительно, предполагая, что увеличение фракции IgG и IgA в основном связано с увеличением B-клеток с изотипами IgA и IgG (дополнительный файл 2: Рисунок S7).Кроме того, образцы AML показывают больше событий CSR, чем неопухолевые образцы (рис. 3f). Взятые вместе, увеличение длины CDR3 IgH, снижение разнообразия CDR3 IgH, увеличение SHM и увеличение CSR при AML, особенно с изотипами IgG и IgA при AML у взрослых, все указывает на более высокие уровни активации B-клеток и клональной экспансии в микроокружении AML.

Связь между высокой фракцией IgA и худшей клинической выживаемостью у пациентов с ОМЛ

Аномальная активация В-клеток IgA и IgG в микросреде ОМЛ побудила нас изучить их связь с клиническими особенностями.IgA можно разделить на подклассы IgA1 и IgA2, а изотип IgG можно дополнительно разделить на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Хотя разные подклассы обладают высоким сходством последовательностей, они все же имеют разные структуры тяжелых цепей и разные эффекторные функции [44]. Хотя разные подклассы IgA или подклассы IgG сильно коррелированы при ОМЛ младенцев, корреляция подклассов ниже у детей с ОМЛ и даже ниже у взрослых (рис. 4a). Кроме того, существуют значительные различия в общей выживаемости пациентов при ОМЛ у детей и взрослых (рис.4б). Таким образом, мы исследовали влияние различных подклассов IgA и IgG на выживаемость детей и взрослых по отдельности. Никакой существенной связи между изотипом или подклассами IgG и общей выживаемостью пациентов не наблюдалось. Однако мы обнаружили, что у детей с ОМЛ с более высокой фракцией IgA1 (рис. 4c) и взрослых пациентов с AML с более высокой фракцией IgA2 (рис. 4d) общая выживаемость значительно хуже (дополнительный файл 2: рис. S8). Сообщалось, что более высокое соотношение IgA связано с худшим клиническим исходом при меланоме [45].Следовательно, наше наблюдение ассоциации IgA с худшим клиническим исходом предполагает, что IgA B-клетки могут быть связаны с подавляющим иммунным микроокружением при AML.

Рис. 4

Ухудшение клинического исхода для образцов ОМЛ с высокой долей IgA1 или IgA2. a Тепловые карты, показывающие корреляции различных фракций изотипа Ig в AML и неопухолевых группах. Частичная ранговая корреляция Спирмена использовалась для проверки связи между различными изотипами Ig. Коэффициент корреляции с учетом возраста был показан на тепловых картах для AML и неопухолевых групп. b Кривые Каплана – Мейера, показывающие разницу в выживаемости среди младенцев, детей и взрослых с AML. Младенцы и дети показали лучшую общую выживаемость по сравнению со взрослыми без существенной разницы между двумя группами. Статистическая значимость сравнения различных групп оценивалась с помощью лог-рангового критерия. c , d Кривые Каплана – Мейера, показывающие образцы ОМЛ у детей с высокой фракцией IgA1 ( c ) и образцы ОМЛ взрослых с высокой фракцией IgA2 ( d ), имеют худшую общую выживаемость.Образцы были разделены на группы с высоким соотношением IgA1 (или IgA2) и низким соотношением IgA1 (или IgA2) по средней доле этого отношения в ОМЛ у детей / взрослых. Отношения IgA1 (или IgA2) рассчитывали, используя количество CDR3 IgA1 (или IgA2), разделенное на общее количество CDR3 IgH с уникальной аннотацией класса Ig в каждом образце. Статистическая значимость сравнения различных групп оценивалась с использованием многомерной регрессии Кокса с поправкой на пол и возраст пациента на момент постановки диагноза

Фракция IgA2 и иммуносупрессивное микроокружение в AML у взрослых

Недавние исследования на мышах показали, что индуцированные TGFβ плазматические клетки, продуцирующие IgA, могут действовать как мощные иммунодепрессоры посредством секреция PD-L1 [46, 47].В соответствии с этими сообщениями, в образцах AML взрослых мы наблюдали значительную положительную корреляцию между экспрессией TGFB1 и фракцией IgA2 (рис. 5a). В образцах AML с более высоким уровнем IgA2, помимо более низкого уровня IgG (дополнительный файл 2: рисунок S9), который, как известно, способствует опосредованному Т-клетками противоопухолевому иммунитету [48], события CSR B-клеток IgM почти ограничены IgA1 и IgA2 (рис. 5б). Более того, анализ GSEA [49] показал, что гены, положительно коррелированные с IgA2 при ОМЛ у взрослых, значительно обогащаются негативной регуляцией продукции интерферона I типа (рис.5c, d, дополнительный файл 2: Рисунок S10), который является важным регулятором врожденных и адаптивных иммунных ответов [50]. Чтобы оценить, является ли PD-L1 нижестоящим эффектором продукции TGFβ и IgA, мы дополнительно исследовали, имеют ли опухоли с высоким AML IgA2 также более высокую экспрессию PD-L1, но не обнаружили значительной разницы (дополнительный файл 2: рисунок S11). Напротив, в опухолях с высоким содержанием IgA2 AML экспрессия маркера регуляторных Т-клеток (Treg) FOXP3 значительно выше (рис. 5e). Это говорит о том, что рекрутирование Treg может быть альтернативным механизмом индуцированной TGFβ / IgA иммуносупрессии, которая способствует худшей общей выживаемости при ОМЛ у взрослых.

Рис. 5

Высокая фракция IgA2, связанная с иммуносупрессивным микроокружением при ОМЛ у взрослых. — график разброса , показывающий положительную корреляцию между фракцией IgA2 и экспрессией TGFB1 при ОМЛ взрослых. Статистическая значимость оценивалась с помощью корреляционного теста Спирмена. b Визуализация переключения классов изотипа Ig во взрослых группах AML. Образцы ОМЛ взрослых были разделены на группы с низким уровнем IgA2 (0–5%, n = 64), средним (5–10%, n = 64) и высоким (> 10%, n = 23) группами. .Размер кружка представляет собой долю изотипов Ig, которая была рассчитана путем деления количества кластеров IgH, несущих данный изотип Ig, на общее количество кластеров IgH в каждой группе. Линии, соединяющие два круга, указывают сосуществование двух изотипов в одном кластере, при этом ширина линии пропорциональна количеству таких кластеров, деленному на общее количество кластеров IgH в каждой группе. Размер сети представляет собой общую активацию B-клеток, которая определяется количеством кластеров IgH CDR3, деленным на количество IgH CDR3 в каждой группе.Круговые диаграммы в кругах с черными точками показывают долю переключения класса IgM в разных группах. c , d Обогащенные GO термины с фракцией IgA2 при ОМЛ взрослых.