значительно снижает индуцированное ACh расслабление (R _max и AUC, P <0,05) и чувствительность ( P <0,05) в маточных артериях небеременных мышей (Фигуры 3A – D; Таблица 1). Чувствительность и максимальный ответ на ACh не различались у мышей Rln ^{— / —} и Rln ^{+ / +} у мышей L-NAME (Фигуры 3A, B, D; Таблица 1). Блокада продукции простаноидов вызывала дальнейшее торможение релаксации.В присутствии Indo чувствительность к ACh была ниже (вдвое, P = 0,02) у мышей Rln ^{— / —} (таблица 1). Расслабление, остающееся в присутствии L-NAME + Indo, приписывается EDH.

Общая AUC для релаксации была значительно меньше в артериях у мышей Rln ^{— / —} (рис. 3С). Анализ AUC показал, что вклад NO, простаноидов, расширяющих сосуды, и EDH в эндотелий-зависимую релаксацию не различается у мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} .Изменение максимальной релаксации, вызванной L-NAME и Indo, и максимальной релаксации, вызванной EDH, существенно не различались между группами (рис. 3D).

Относительный вклад каналов IK _Ca и SK _Ca в EDH-опосредованную релаксацию был исследован в присутствии L-NAME + Indo только с TRAM-34 или комбинации TRAM-34 + апамин (Рисунки 3E, F ). Ингибирование активности IK _Ca с помощью TRAM-34 не изменяет чувствительность к ACh, но значительно снижает максимальное EDH-опосредованное расслабление в артериях как от Rln , ^{+ / +} ( P = 0.006) и Rln ^{— / —} ( P = 0,002) мышей, однако степень восстановления, производимого TRAM-34, не различалась между генотипами (Фигуры 3E – H; Таблица 1). Последующая блокада активности канала SK _Ca апамином дополнительно снижает EDH-опосредованную релаксацию (pEC ₅₀ , R _max и AUC) (Фигуры 3E – H; Таблица 1). Максимальное расслабление было значительно снижено как в Rln ^{+ / +} ( P = 0,01), так и в Rln ^{— / —} ( P = 0.04) мышей (рис. 3F). Эффект ингибирования SK _Ca на максимальное EDH-опосредованное расслабление было больше в маточных артериях у мышей Rln ^{+ / +} по сравнению с Rln ^{— / —} (фиг. 3H). Релаксация EDH практически отменялась в присутствии ингибирования каналов IK _Ca и SK _Ca в маточных артериях от мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} .

AUC показал, что общая релаксация EDH не различалась у мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} (фигура 3G).Основной вклад каналов IK _Ca не изменился, но вклад каналов SK _Ca был значительно ( P <0,05) снижен в артериях мышей Rln ^{— / —} (Рисунки 3G, H).

Влияние беременности на эндотелий-зависимую релаксацию

Во время беременности не было значительной разницы в чувствительности маточной артерии, AUC или максимальной релаксации к ACh между беременными Rln ^{— / —} и Rln ^{+ / +} мышами (Рисунки 4A – C; Таблица 1).Анализ AUC показал, что вклад NO, простаноидов, расширяющих сосуды, и EDH в общую эндотелий-зависимую релаксацию не отличался между генотипами. Общий вклад ЭДГ в эндотелий-зависимую релаксацию маточной артерии был значительно увеличен во время беременности как у Rln ^{+ / +} ( P = 0,0008), так и у Rln ^{— / —} ( P = 0,002) мышей (рисунок 4C по сравнению с рисунком 3C; таблица 1).

Рисунок 4 .Кривые зависимости от концентрации эндотелий-зависимого агониста ацетилхолина (ACh) в основных маточных артериях поздней беременности (A) Rln ^{+ / +} и (B) Rln ^{— / —} мышей после предварительной обработки артерий без (кружок; контроль) или с ингибитором NOS (треугольник) L-NAME или (ромб) L-NAME и ингибитором COX Indo (L-NAME + Indo). (C) Вклад оксида азота (NO), сосудорасширяющих простаноидов (PG) и гиперполяризации эндотелия (EDH) в индуцированное ACh расслабление у поздней беременности Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} мышей) и (D) изменение максимальной релаксации (R _max ) на ACh после инкубации с L-NAME и L-NAME + Indo, при этом оставшаяся релаксация приписывается EDH.Кривые концентрация-ответ на ACh в основных маточных артериях поздней беременности (E) Rln ^{+ / +} и (F) Rln ^{— / —} мышей после предварительной обработки артерий ( квадрат) L-NAME + Indo, (круг) L-NAME + Indo + TRAM-34, (треугольник) L-NAME + Indo + TRAM-34 + apamin. (G) Вклад EDH, промежуточной проводимости (IK _Ca ) и низкой проводимости (SK _Ca ) Ca ²⁺ -активированных калиевых каналов в ACh-индуцированном расслаблении в основных маточных артериях небеременных Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} мышей при анализе как AUC и (H) изменение максимальной релаксации (R _max ) на ACh после инкубации с TRAM-34 и TRAM- 34 + апамин ( n = 7–9 на группу).* P <0,0001 двусторонний дисперсионный анализ по сравнению с контролем; ^# P <0,05 двусторонний дисперсионный анализ L-NAME по сравнению с L-NAME + Indo; ^λ P <0,0001 двусторонний дисперсионный анализ по отношению к L-NAME + Indo; ^α P <0,05 двусторонний дисперсионный анализ L-NAME + Indo + TRAM-34 по сравнению с L-NAME + Indo + TRAM-34 + апамин; ^∧ P <0,05 на основании однофакторного дисперсионного анализа генотипа.

Предварительная инкубация с L-NAME значительно снижала ACh-индуцированную релаксацию (pEC ₅₀ , R _max и AUC, P <0.05) в маточных артериях беременных мышей. Эффект L-NAME на расслабление не отличался между артериями мышей Rln ^{— / —} и Rln ^{+ / +} (Фигуры 4A – D; Таблица 1). Последующее воздействие Indo не оказало дальнейшего значительного влияния на чувствительность к ACh, но максимальное расслабление было дополнительно снижено в артериях от Rln ^{+ / +} ( P = 0,018), но не Rln ^{— / —} мышей ( Рисунок 4D).

Во время беременности чувствительность к ACh-вызванной EDH-опосредованной релаксации не различалась у мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} (Фигуры 4E, F; Таблица 1).Основной вклад каналов IK _Ca в EDH-опосредованную релаксацию был значительно ( P <0,05) увеличен, однако роль каналов SK _Ca была значительно ( P <0,05) снижена в Rln ^{— / —} мышей (Рисунки 4E – H; Таблица 1).

Нарушение BK-опосредованной эндотелий-зависимой релаксации у небеременных мышей с дефицитом релаксина

В то время как ACh вызывал максимальное эндотелий-зависимое расслабление, BK вызывал субмаксимальное расслабление даже при самой высокой концентрации, используемой у небеременных мышей (Фигуры 5A, C; Таблица 1).Несмотря на сильную BK-опосредованную релаксацию в маточных артериях небеременных мышей Rln ^{+ / +} (Рисунок 5A; Таблица 1), BK не смог вызвать значительного расслабления в маточных артериях небеременных Rln ^{— / —} мышей (Рисунок 5C; Таблица 1). В отличие от ACh, релаксация, вызванная BK, полностью опосредована NO (Рисунок 5A; Таблица 1).

Рисунок 5 . Кривые концентрация-ответ на эндотелий-зависимый агонист брадикинин (ВК) в основных маточных артериях от Rln ^{+ / +} (A) небеременных и (B) беременных мышей и от Rln ^{— / —} (C) небеременных и (D) беременных мышей после предварительной обработки артерий без (кружок; контроль) или с ингибитором NOS (треугольник) L-NAME или (ромб) L-NAME и ингибитор ЦОГ Indo (L-NAME + Indo).Кривые концентрация-ответ на эндотелий-независимый агонист нитропруссида натрия (SNP) в основных маточных артериях от (E) небеременных и (F) беременных Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} мышей ( n = 7–9 на группу).

Во время беременности максимальное расслабление, вызванное BK, не отличалось в маточных артериях от небеременных мышей Rln ^{+ / +} (Рисунок 5B; Таблица 1). Однако BK-опосредованная релаксация была значительно увеличена в артериях у беременных мышей Rln ^{— / —} (фиг. 5D), так что максимальное BK-опосредованное расслабление не отличалось от релаксации в артериях из Rln ^{+ / +} мышей (Фигуры 5B, D; Таблица 1).Большая часть BK-опосредованного расслабления приписывается NO, однако небольшой компонент, связанный с вазодилатирующим простаноидом, появился во время беременности в маточных артериях от Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} мышей (Рисунки 5B , D; таблица 1).

Эндотелий-независимая релаксация в маточной артерии мышей с дефицитом релаксина не нарушена

Не было значительных различий в чувствительности гладких мышц к SNP в маточных артериях у мышей Rln ^{— / —} и Rln ^{+ / +} при отсутствии беременности (Рисунок 5E; Таблица 1) и во время беременности (Рисунок 5F ; Таблица 1).При адаптации к беременности чувствительность гладких мышц к SNP не изменилась в маточных артериях у мышей Rln ^{+ / +} (фигура 5F; таблица 1). Однако чувствительность к SNP была значительно ( P = 0,035) увеличена у мышей Rln ^{— / —} (рисунок 5F; таблица 1). Максимальное расслабление к SNP было значительно увеличено с беременностью для маточных артерий как от Rln ^{+ / +} ( P = 0,0003), так и Rln ^{— / —} ( P = 0.0012) мышей (Фигуры 5E, F; Таблица 1).

Чувствительность и максимальный ответ на илопрост не различались в маточных артериях мышей Rln ^{+ / +} или Rln ^{— / —} и не зависели от беременности (Таблица 1).

Дефицит релаксина слабо влияет на экспрессию генов, связанных с гипертонией, на поздних сроках беременности

Для скрининга потенциальных механизмов, регулирующих повышенный миогенный тонус и аберрантную релаксацию маточной артерии у поздних беременных мышей Rln ^{— / —} , мы проанализировали 84 представляющих интерес гена с использованием массива qPCR.Удивительно, но дефицит релаксина значительно изменил экспрессию только 8 генов (из 84 проанализированных). Несмотря на его влияние на миогенный тонус, дефицит релаксина не изменяет гены, участвующие в синтезе NO; эндотелиальный NOS (eNOS; Nos3 , фигура 6A; таблица 2), белок, взаимодействующий с NOS ( Nosip ) или транспортный белок NOS (, нострин ; таблица 2). Экспрессия рецептора простагландина I ₂ ( Ptgir ) продемонстрировала тенденцию к снижению экспрессии у мышей Rln ^{— / —} , но не достигла значимости ( P = 0.06; Рисунок 6B; Таблица 2). Также не наблюдалось значительного влияния дефицита релаксина на экспрессию эндотелин-превращающего фермента 1 ( Ece1, P = 0,08; Рисунок 6C; Таблица 2), эндотелина-1 (ET-1, Edn1 ), эндотелина-2. ( End2 ) и рецепторы эндотелина (ET _A , Ednra и ET _B , Ednrb ; таблица 2).

Рисунок 6 . Количественный ПЦР-анализ (A) эндотелиальных NOS ( Nos3 ), (B) рецептор простагландина I ₂ рецептор ( Ptgir ), (C) фермент, превращающий эндотелин 1 ( Ece1 ), (D) никотиновый холинорецептор типа β1 ( Chrnb1 ), (E) , кодирующий циклический нуклеотидно-управляемый канал α4 ( Cnga4 ), (F) инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор-2 ( Itpr1 ), (G) инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор-2 ( Itpr2 ) и (H) натриевые беспотенциально закрытые каналы типа 1α ( Scnn1a ) в маточной артерии в конце -беременные (•) Rln ^{+ / +} и (•) Rln ^{— / —} мышей ( n = 4–6 на группу).* P <0,05 Непарные t -тесты Стьюдента на основе генотипа.

Таблица 2 . Экспрессия генов в маточных артериях мышей на поздних сроках беременности.

Анализ qPCR также выявил новые гены, на которые влияет дефицит релаксина, в том числе никотиновый холинергический рецептор типа β1 ( Chrnb1 ), кодирующий циклический нуклеотидно-управляемый канал α4 ( Cnga4 ), инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор-2 ( Itpr1 ) и инозитол-1,4,5-трифосфатный рецептор-2 ( Itpr2 ), все они были значительно активированы в 2 раза или более ( P <0.05, рисунки 6D – H; Таблица 2).

Влияние дефицита релаксина на вес плода и плаценты

Распределение веса плода жизнеспособных плодов мышей Rln ^{— / —} было сдвинуто влево (указывает на более низкий вес) с 39% плодов от Rln ^{— / —} мышей с массой ниже 10-го. центиль (<732,4 мг) нормального распределения мышей Rln ^{+ / +} (фигура 7A). Жизнеспособное количество детенышей в помете не изменялось в зависимости от генотипа ( Rln ^{+ / +} = 7.9 ± 1,6; Rln ^{— / —} = 8,8 ± 1,6, рисунок 7B). Сырые средние веса пометов от беременных мышей Rln ^{— / —} были значительно снижены по сравнению с мышами Rln ^{+ / +} , весящими примерно на 10% меньше (Рисунок 7C; Таблица 3; P = 0,001). После корректировки на самок и размер помета оценочные средние предельные значения плодов от беременных мышей Rln ^{— / —} все еще были значительно снижены по сравнению с Rln ^{+ / +} мышей (фигура 7D; таблица 3; P < 0.001). Интересно, что вес плаценты на 17-й день беременности не зависел от генотипа даже после поправки на самок и размер помета (Рисунки 7E, F; Таблица 3).

Рисунок 7. (A) Распределение веса плодов с 17-го дня беременности Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} самок мышей как% от популяции плода исследования. Вертикальная пунктирная линия представляет 10-й центиль для распределения веса плода при 732,4 мг. (B) Количество жизнеспособных щенков в помете из Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} пометов. (C) Необработанная средняя масса плода (мг), (D) расчетное предельное среднее значение массы плода (мг), (E) необработанная средняя масса плаценты (мг) и (F) расчетное маргинальное среднее веса плаценты (мг) из Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} пометов. * P <0,05 Непарные t -тесты Стьюдента для необработанных данных, основанные на генотипе или общей линейной модели для оцененных маргинальных средних.

Таблица 3 .Вес плода и плаценты из пометов соответствующего возраста Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} .

Обсуждение

Это исследование показало, что релаксин является регулятором функции маточной артерии у беременных и не беременных. Важно отметить, что релаксин необходим для нормальной адаптации маточной артерии к беременности, особенно для снижения миогенного тонуса маточной артерии. Чувствительность маточной артерии к агонистам эндотелия была значительно снижена у небеременных мышей Rln ^{— / —} , при этом различия исчезли во время беременности.Основной вклад каналов K _Ca в EDH-опосредованную релаксацию был нарушен у мышей с дефицитом релаксина, и эта особенность сохранялась от отсутствия беременности до беременности. Нарушение регуляции миогенного тонуса маточной артерии во время беременности, вероятно, будет нарушать маточно-плацентарную перфузию и вносить вклад в ограничение роста плода у мышей Rln ^{— / —} .

В отсутствие беременности развитие и регуляция миогенного тонуса маточной артерии были сходными у мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} .Сходные результаты были также получены для мелких почечных артерий у небеременных мышей Rln ^{— / —} (Novak et al., 2006). В маточных артериях небеременных животных обоих генотипов NO играет важную роль в регуляции миогенного тонуса. По-видимому, роль сосудорасширяющих простаноидов незначительна, поскольку ингибирование ЦОГ не оказывает значительного влияния на развитие миогенного тонуса. Общий вклад NO и простаноидов вазодилататора в регуляцию миогенного тонуса оказался сходным в артериях обоих генотипов.

Подавление развития миогенного тонуса в маточной артерии во время беременности было зарегистрировано у нескольких видов (Veerareddy et al., 2002; Xiao et al., 2010; Hu et al., 2011). При адаптации к беременности мы также обнаружили, что развитие миогенного тонуса было значительно снижено в маточных артериях у наших поздних беременных мышей Rln ^{+ / +} . Хотя NO играет важную роль в регуляции миогенного тонуса, роль простаноидов, предположительно простациклина, была значительно повышена в маточных артериях беременных мышей Rln ^{+ / +} .Поразительным открытием настоящего исследования является то, что нормальное подавление миогенного тонуса во время беременности не наблюдалось у мышей Rln ^{— / —} . Степень развития миогенного тонуса в маточных артериях у беременных мышей Rln ^{— / —} была неотличима от таковой у небеременных мышей. Интересно, что это произошло, несмотря на значительное повышение роли NO в регуляции миогенного тонуса в маточных артериях беременных мышей Rln ^{— / —} .Напротив, поддержание высокого уровня миогенного тонуса маточной артерии объясняется отсутствием активации простаноидного компонента во время беременности на фоне дефицита релаксина. Эти данные подтверждаются тенденцией к снижению экспрессии мРНК рецептора простациклина. Однако ферменты, участвующие в каскаде простагландинов, ЦОГ-1 и ЦОГ-2, не были затронуты. Кроме того, ранее мы продемонстрировали на беременных мышах Rln ^{— / —} , что имеется дефицит продукции простаноидов вазодилататора гладкомышечного происхождения в брыжеечных артериях (Marshall et al., 2016), которые можно было восстановить с помощью 5-дневной непрерывной инфузии релаксина (Marshall et al., 2017a). Таким образом, сниженная продукция простаноидов-вазодилататоров и / или экспрессия их рецепторов в маточной артерии беременных мышей Rln ^{— / —} лежит в основе поддержания высокого уровня миогенного тонуса.

Лечение релаксином небеременных крыс снижает развитие миогенного тонуса в почечных и брыжеечных артериях (Novak et al., 2002) до уровней тонуса, аналогичных тем, которые наблюдаются в этих артериях во время беременности (Gandley et al., 2001). Такое подавление тонуса в артериях небеременных крыс объясняется повышенной биодоступностью NO за счет усиления передачи сигналов эндотелиального и эндотелиального рецепторов ET _B и повышенной активности eNOS (Gandley et al., 2001; Novak et al., 2002). Однако в нашей модели дефицита релаксина дефицита роли NO в регуляции миогенного тонуса во время беременности не наблюдалось. Фактически, роль NO была повышена в маточных артериях беременных мышей Rln ^{— / —} .Мы не обнаружили различий в экспрессии генов, участвующих в синтезе NO, или генов, связанных с сигнальным путем рецептора ET _B . Повышение активности eNOS и / или биодоступности NO, вероятно, лежит в основе усиленной NO-зависимой регуляции миогенного тонуса у беременных мышей Rln ^{— / —} и может отражать компенсаторный механизм для противодействия отказу вазодилататорного простаноидного пути.

Наши результаты показали ключевую роль эндогенного релаксина в обеспечении адаптивного снижения миогенного тонуса основной маточной артерии во время беременности.Это снижение миогенного тонуса будет способствовать увеличению перфузии маточно-плацентарного отдела для поддержания здоровой беременности. В самом деле, это подтверждается аналогичными данными для малых почечных артерий, когда беременные крысы в ​​середине беременности, получавшие нейтрализующие релаксин антитела (MCA1), больше не демонстрировали нормального снижения миогенного тонуса, связанного с беременностью (Novak et al., 2001). Кроме того, у беременных крыс, получавших MCA1, не наблюдалось гестационного увеличения сердечного выброса, общей артериальной податливости и снижения системного сосудистого сопротивления, которые наблюдаются во время беременности у здоровых крыс (Debrah et al., 2006). В совокупности текущее исследование и предыдущие результаты других групп подчеркивают важность релаксина как интегральной молекулы, участвующей в адаптации сердечно-сосудистой системы матери к беременности.

Маточные артерии небеременных мышей Rln ^{— / —} проявляли эндотелиальную вазодилататорную дисфункцию при стимуляции ACh или BK. ACh высвобождает набор сосудорасширяющих средств, включая NO, EDH и простаноидное вазодилататорное средство, вероятно, простациклин. Чувствительность к ACh была значительно снижена у мышей Rln ^{— / —} , хотя максимальная релаксация не различалась между генотипами.Сходным образом, в исследовании самцов мышей Rln ^{— / —} брыжеечные артерии имели пониженную чувствительность к ACh-опосредованной релаксации (Leo et al., 2014a). Нарушение у мужчин объясняется активацией простаноидного вазоконстрикторного пути, однако у нас нет доказательств того, что нарушение у Rln ^{— / —} женщин вызвано этим. Наше исследование также коррелирует с исследованиями лечения релаксином (Leo et al., 2014b, 2017; Ng et al., 2016). После блокады синтеза NO не было различий в чувствительности к ACh между генотипами, однако после ингибирования продукции простаноидов чувствительность к ACh и, следовательно, EDH-опосредованная релаксация ухудшалась.Дальнейшее исследование роли каналов K _Ca , участвующих в EDH-опосредованной релаксации, показало, что вклад каналов SK _Ca был уменьшен в маточных артериях небеременных мышей Rln ^{— / —} . Нарушение экспрессии и / или активности канала SK _Ca в артериях было зарегистрировано при различных сердечно-сосудистых заболеваниях (Félétou, 2016).

В маточных артериях общее эндотелий-зависимое расслабление, вызванное BK, было лишь частью того, что вызвано ACh.В то время как ACh вызывал высвобождение различных сосудорасширяющих средств из эндотелия маточных артерий мышей, как было опубликовано ранее (Cooke and Davidge, 2003), у небеременных мышей BK вызывал релаксацию, которая полностью опосредована NO. Интересно, что BK-опосредованная релаксация практически отсутствовала в артериях небеременных мышей Rln ^{— / —} . Отсутствие ответа на BK, вероятно, также усугублялось нарушением чувствительности гладких мышц маточной артерии к NO у небеременных мышей Rln ^{— / —} .У самцов крыс лечение релаксином (острая внутривенная инъекция или 72-часовая непрерывная инфузия) избирательно увеличивало BK-опосредованное расслабление в брыжеечной артерии за счет усиления продукции простациклина (Leo et al., 2014b, 2016b), тогда как 48-часовая инфузия релаксина усиливала BK -опосредованная релаксация через путь NO (Leo et al., 2016b). Предполагается, что релаксин сигнализирует тщательно продуманным гетеродимерам, состоящим из рецептора релаксина и рецепторов BK (RXFP1-B ₂ R), чтобы влиять на дилатацию (Leo et al., 2016a).Из-за тканевых ограничений маточной артерии небеременных мышей мы не смогли дополнительно исследовать, повлиял ли дефицит релаксина на эти гетеродимеры или гены, связанные с ACh-опосредованной релаксацией.

Различия в чувствительности к ACh и ответной реакции на BK, наблюдаемые между маточными артериями мышей Rln ^{+ / +} и Rln ^{— / —} , исчезли с беременностью. Вазодилататорная функция эндотелия активируется во время беременности с повышенной активностью путей NO, простациклина и EDH под влиянием стероидных гормонов, таких как эстроген (Weiner et al., 1994; Vagnoni et al., 1998; Чжан и др., 2001; Egan et al., 2004; Бут и др., 2008; Гокина и др., 2010). Несмотря на то, что чувствительность ACh к EDH-опосредованной релаксации не различалась во время беременности между генотипами, оставалась основная дисрегуляция вкладов каналов IK _Ca и SK _Ca в артериях мышей с дефицитом релаксина. Роль каналов IK _Ca была повышена, в то время как роль каналов SK _Ca была снижена в маточных артериях мышей Rln ^{— / —} .Ранее было продемонстрировано, что релаксин стимулирует активность миометриальных кальций-активируемых калиевых каналов (Meera et al., 1995) и усиливает активность каналов IK _Ca в брыжеечных артериях крыс и паренхиматозных артериолах головного мозга (Leo et al., 2016a). Однако потенциальные эффекты релаксина на эти активируемые кальцием калиевые каналы во время беременности в маточной артерии остаются неизученными. Обусловлено ли несоответствие вкладов каналов IK _Ca и SK _Ca между Rln ^{— / —} и Rln ^{+ / +} различиями в экспрессии каналов или механизмах передачи сигналов (Гокина и др., 2010; Félétou, 2016) необходимо будет изучить в будущих исследованиях.

Чтобы максимизировать экспериментальный результат для ограниченной доступной ткани, подход к анализу массивов кПЦР оценивал, как дефицит релаксина влияет на экспрессию 84 различных генов в основной маточной артерии поздних беременных мышей (Moradipoor et al., 2016). Это позволило провести широкий скрининг генов, связанных с сердечно-сосудистой системой, чего нельзя было достичь с помощью других количественных методов. Тем не менее, мы наблюдали тенденции в экспрессии генов, которые не достигли значимости, и для этих анализов была бы полезна дополнительная ткань, если бы она была доступна.Из 8 генов, значительно модулируемых дефицитом релаксина, большинство были новыми и неожиданными. Дефицит релаксина не оказывает значительного влияния на гены, участвующие в синтезе NO или PGI ₂ , но усиливает экспрессию мРНК ACh рецептора Chrnb1 (Albuquerque et al., 2009). Поскольку маточные артерии мышей Rln ^{— / —} больше не демонстрировали пониженной чувствительности к ACh на поздних сроках беременности в отсутствие ингибиторов, это может быть связано с увеличением экспрессии рецепторов ACh.Из новых генов, на которые влияет дефицит релаксина Cnga3 , субъединица канала, управляемого циклическими нуклеотидами, участвует в передаче сигнала и может находиться под влиянием ионов кальция (Dai et al., 2014), что делает эту находку интересной. Фактор гипоксии α ( Hif1 α), субъединица фактора транскрипции, действующего на гипоксию (Benita et al., 2009), подавлялся в маточной артерии у поздних беременных мышей Rln ^{— / —} . Остается выяснить, трансформируются ли и в какой степени эти изменения в экспрессии генов в измененный фенотип основной маточной артерии.

Таким образом, эндогенный релаксин играет обязательную роль в нормальном, связанном с беременностью подавлении миогенного тонуса в маточной артерии. Во время беременности эндогенный релаксин критически активизирует модуляцию миогенного тонуса, опосредованную простаноидами, для поддержки маточно-плацентарной перфузии и роста плода.

Авторские взносы

LP и MT разработали исследовательский проект. SM, SS, MJ, KO и MT проводили исследования. Компания SM произвела разведение мышей, проверила течку, установила беременность, наблюдала за всеми мышами и завершила сбор всех тканей.Рукопись написали С.М., М.Т. и СС. SM, SS, MJ и MT проанализировали данные и выполнили статистический анализ. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

Автор (ы) раскрыл получение следующей финансовой поддержки для исследования, авторства и / или публикации этой статьи: эта работа была поддержана грантом проекта Австралийского национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям (LP1064845) и Университета Мельбурна. Грант раннего научного сотрудника SS.SM и MJ получили австралийские награды для аспирантов.

Заявление о конфликте интересов

Авторы сообщают, что LP была оплачиваемым консультантом Novartis Pharma AG с 2012 по 2015 годы.

Другие авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы благодарят г-жу Таню Лонг и г-на Даррена Чиполлу (Университет Мельбурна) за помощь в поддержании колонии мышей, а также доктора Марка Дилворта (Университет Манчестера) и его исследовательскую группу за их помощь в представлении данных о весе плода в виде нормального распределения. кривые.Авторы также благодарят доктора Миранду Дэвис-Так (Центр Ричи, Гудзоновский институт медицинских исследований, Университет Монаша) за ее неоценимую помощь в статистическом анализе веса плода и плаценты.

Список литературы

Альбукерке, Э. X., Перейра, Э. Ф., Алкондон, М., и Роджерс, С. В. (2009). Никотиновые ацетилхолиновые рецепторы млекопитающих: от структуры к функции. Physiol. Rev. 89, 73–120. DOI: 10.1152 / Physrev.00015.2008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бенита, Ю., Кикучи, Х., Смит, А. Д., Чжан, М. К., Чунг, Д. К., и Ксавьер, Р. Дж. (2009). Подход интегративной геномики позволяет идентифицировать гены-мишени фактора-1, индуцируемого гипоксией (HIF-1), которые формируют основной ответ на гипоксию. Nucleic Acids Res. 37, 4587–4602. DOI: 10.1093 / nar / gkp425

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бут, Э. А., Флинт, Р. Р., Лукас, К. Л., Книттель, А. К., и Луччези, Б. Р. (2008). Эстроген защищает сердце от ишемии-реперфузии через PGI2, производный от COX-2. J. Cardiovasc. Pharmacol. 52, 228–235. DOI: 10.1097 / FJC.0b013e3181824d59

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Конрад, К. П., и Дэвисон, Дж. М. (2014). Почечное кровообращение при нормальной беременности и преэклампсии: есть ли место релаксину? Am. J. Physiol. Почечный 306, F1121 – F1135. DOI: 10.1152 / ajprenal.00042.2014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кук, К.-Л., и Дэвидж, С.Т. (2003). Вызванные беременностью изменения сосудистой функции брыжеечных и маточных артерий мышей. Biol. Репрод. 68, 1072–1077. DOI: 10.1095 / биолрепрод.102.009886

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коркоран, Дж. Дж., Николсон, К., Суини, М., Чарнок, Дж. К., Робсон, С. С., Вествуд, М., и другие. (2014). Человеческие маточные и плацентарные артерии проявляют тканеспецифические острые реакции на 17-бета-эстрадиол и агонисты рецепторов эстрогена. Мол. Гм. Репрод. 20, 433–441. DOI: 10,1093 / моль / ч / gat095

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дай, Г., Шерпа, Т., и Варнум, М. Д. (2014). Альтернативный сплайсинг регулирует чувствительность конусных циклических нуклеотид-управляемых (CNG) каналов к регуляции фосфоинозитидами. J. Biol. Chem. 289, 13680–13690. DOI: 10.1074 / jbc.M114.562272

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дебра, Д. О., Новак, Дж., Мэтьюз, Дж.Э., Рамирес Р. Дж., Шрофф С. Г. и Конрад К. П. (2006). Релаксин необходим для системного расширения сосудов и повышения общей эластичности артерий во время ранней беременности у крыс в сознании. Эндокринология 147, 5126–5131. DOI: 10.1210 / en.2006-0567

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дилворт, М. Р., Кусински, Л. К., Бейкер, Б. К., Реншалл, Л. Дж., Гринвуд, С. Л., Сибли, К. П. и др. (2011). Определение ограничения роста плода у мышей: стандартизованный и клинически значимый подход. Плацента 32, 914–916. DOI: 10.1016 / j.placenta.2011.08.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Иган, К. М., Лоусон, Дж. А., Фрис, С., Коллер, Б., Рейдер, Д. Дж., Смит, Э. М. и др. (2004). Простациклин, производный от ЦОГ-2, обеспечивает атерозащиту у самок мышей. Наука 306, 1954–1957. DOI: 10.1126 / science.1103333

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Феррейра В. М., Гомеш Т. С., Рейс Л.A., Ferreira, A. T., Razvickas, C. V., Schor, N., et al. (2009). Рецептор-индуцированная дилатация в системной и внутрипочечной адаптации крыс к беременности. PLoS ONE 4: e4845. DOI: 10.1371 / journal.pone.0004845

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гэндли Р. Э., Конрад К. П. и Маклафлин М. К. (2001). Эндотелин и оксид азота опосредуют снижение миогенной реактивности мелких почечных артерий беременных крыс. Am. J. Physiol. Regul.Интегр. Комп. Physiol. 280, R1 – R7. DOI: 10.1152 / ajpregu.2001.280.1.R1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гокина Н. И., Кузина О. Ю., Вэнс А. М. (2010). Усиленная передача сигналов EDHF в маточно-плацентарной сосудистой сети крыс на поздних сроках беременности. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, h2642 – h2652. DOI: 10.1152 / ajpheart.00227.2010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гуи, Дж. Х., Ричардсон, М.L., Jelinic, M., Girling, J.E., Wlodek, M.E., Tare, M., et al. (2013). Повышенная жесткость маточной артерии у старых беременных мышей с мутантным релаксином устраняется обработкой экзогенным релаксином. Biol. Репрод. 89, 1–11. DOI: 10.1095 / биолрепрод.113.108118

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ху, Х.К., Сяо, Д., Чжу, Р., Хуанг, X., Янг, С., Уилсон, С., и др. (2011). Беременность активирует активность канала K ⁽⁺⁾ , активированного Ca ⁽²⁺⁾ с высокой проводимостью, и снижает миогенный тонус в маточных артериях. Гипертония 58, 1132–1139. DOI: 10.1161 / HYPERTENSIONAHA.111.179952

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jelinic, M., Leo, C.-H., Uiterweer, E. D. P., Sandow, S. L., Gooi, J. H., Wlodek, M. E., et al. (2014). Локализация рецепторов релаксина в артериях и венах, а также регионально-специфическое повышение податливости и опосредованной брадикинином релаксации после лечения серелаксином in vivo . FASEB J. 28, 275–287. DOI: 10.1096 / fj.13-233429

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ланг, У., Бейкер, Р. С., Брамс, Г., Зигмунт, М., Кунзель, В., и Кларк, К. Э. (2003). Маточный кровоток — определяющий фактор роста плода. Eur. J. Obstet. Гинеколь. Репрод. Биол. 22, S55 – S61. DOI: 10.1016 / S0301-2115 (03) 00173-8

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лео, К. Х., Елинич, М., Гуи, Дж. Х., Тэр, М., и Парри, Л. Дж. (2014a). Вазоактивная роль эндогенного релаксина в брыжеечных артериях самцов мышей. PLoS ONE 9: e107382. DOI: 10.1371 / journal.pone.0107382

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Leo, C.H., Jelinic, M., Ng, H.H., Marshall, S.A., Novak, J., Tare, M., et al. (2017). Сосудистое действие релаксина: оксид азота и не только. Br. J. Pharmacol. 174, 1002–1014. DOI: 10.1111 / bph.13614

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лео, К. Х., Елинич, М., Нг, Х. Х., Тэр, М., и Парри, Л.J. (2016a). Серелаксин: новое лекарство от сосудистых заболеваний. Trends Pharmacol. Sci. 37, 498–507. DOI: 10.1016 / j.tips.2016.04.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лео, К. Х., Елинич, М., Нг, Х. Х., Тэр, М., и Парри, Л. Дж. (2016b). Зависящая от времени активация путей простациклина и оксида азота при непрерывном внутривенном введении. инфузия серелаксина (рекомбинантный человеческий релаксин h3). Br. J. Pharmacol. 173, 1005–1017. DOI: 10.1111 / бут. / Час. 13404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лео, К. Х., Елинич, М., Паркингтон, Х. К., Тэр, М., и Парри, Л. Дж. (2014b). Острая внутривенная инъекция серелаксина (рекомбинантного человеческого релаксина-2) вызывает быструю и стойкую опосредованную брадикинином вазорелаксацию. J. Am. Сердце доц. 3, 1–15. DOI: 10.1161 / JAHA.113.000493

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мандала, М., Осол, Г. (2012).Физиологическое ремоделирование маточного кровообращения у матери во время беременности. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 110, 12–18. DOI: 10.1111 / j.1742-7843.2011.00793.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маршалл, С. А., Лео, К. Х., Гирлинг, Дж. Э., Тэр, М., Борода, С., Ханнан, Н. Дж. И др. (2017a). Лечение релаксином снижает вызванное ангиотензином II сужение сосудов во время беременности и защищает от эндотелиальной дисфункции. Biol. Репрод. 96, 895–906. DOI: 10.1093 / biolre / iox023

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маршалл, С. А., Лео, К. Х., Сенадира, С. Н., Гирлинг, Дж. Э., Тэр, М., и Парри, Л. Дж. (2016). Дефицит релаксина ослабляет индуцированную беременностью адаптацию брыжеечной артерии к ангиотензину II у мышей. Am. J. Physiol. Regul. Интегр. Комп. Physiol. 310, R847 – R857. DOI: 10.1152 / ajpregu.00506.2015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маршалл, С.A., O’Sullivan, K., Ng, H.H., Bathgate, R.A.D., Parry, L.J., Akhter Hossain, M., et al. (2017b). B7-33 воспроизводит вазопротекторные функции человеческого релаксина-2 (серелаксина). Eur. J. Pharmacol. 807, 190–197. DOI: 10.1016 / j.ejphar.2017.05.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мира, П., Анвер, К., Монга, М., Оберти, К., Стефани, Э., Торо, Л. и др. (1995). Релаксин стимулирует активность кальций-активируемых калиевых каналов миометрия через протеинкиназу А. Am. J. Physiol. 269 (2, часть 1), C312 – C317. DOI: 10.1152 / ajpcell.1995.269.2.C312

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мейер, М. К., Брайден, Дж. Э. и Маклафлин, М. К. (1993). Характеристики гладкой мускулатуры сосудов в кровообращении материнского сопротивления во время беременности у крыс. Am. J. Obstet. Гинеколь. 169, 1510–1516. DOI: 10.1016 / 0002-9378 (93) -K

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Moradipoor, S., Исмаил, П., Этемад, А., Ван Сулейман, В. А., и Ахмадло, С. (2016). Профилирование экспрессии генов, связанных с биологией эндотелиальных клеток, у пациентов с диабетом 2 типа и пациентов с предиабетом. Biomed Res. Int. 2016: 1845638. DOI: 10.1155 / 2016/1845638

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нг, Х. Х., Лео, К. Х. и Парри, Л. Дж. (2016). Серелаксин (рекомбинантный человеческий релаксин-2) предотвращает эндотелиальную дисфункцию, вызванную высоким уровнем глюкозы, за счет улучшения продукции простациклина в аорте мыши. Pharmacol. Res. 107, 220–228. DOI: 10.1016 / j.phrs.2016.03.011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ni, Y., Meyer, M. и Osol, G. (1997). Беременность увеличивает опосредованную оксидом азота вазодилатацию в маточных артериях крыс. Am. J. Obstet. Гинеколь. 176, 856–864. DOI: 10.1016 / S0002-9378 (97) 70611-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Novak, J., Danielson, L.A., Kerchner, L.J., Sherwood, O.Д., Рамирес, Р. Дж., Моалли, П. А. и др. (2001). Релаксин необходим для расширения почечных сосудов во время беременности у крыс в сознании. J. Clin. Инвестировать. 107, 1469–1475. DOI: 10.1172 / JCI11975

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Новак, Дж., Парри, Л. Дж., Мэтьюз, Дж. Э., Керчнер, Л. Дж., Индонива, К., Хэнли-Янез, К., и др. (2006). Доказательства локальной экспрессии и функции рецептора лиганда релаксина в артериях. FASEB J. 20, 2352–2352.DOI: 10.1096 / fj.06-6263com

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Новак Дж., Рамирес Р. Дж. Дж., Гэндли Р. Э., Шервуд О. Д. и Конрад К. П. (2002). Миогенная реактивность снижена в мелких почечных артериях, выделенных от крыс, получавших релаксин. Am. J. Physiol. Regul. Интегр. Комп. Physiol. 283, R349 – R355. DOI: 10.1152 / ajpregu.00635.2001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шервуд, О. Д., Црнекович, В.Э., Гордон У. Л. и Резерфорд Дж. Э. (1980). Радиоиммуноанализ релаксина на протяжении всей беременности и во время родов у крыс. Эндокринология 107, 691–698. DOI: 10.1210 / эндо-107-3-691

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смит, М. К., Мердок, А. П., Дэниэлсон, Л. А., Конрад, К. П., и Дэвисон, Дж. М. (2006). Релаксин играет важную роль в установлении почечной реакции во время беременности. Fertil. Стерил. 86, 253–255. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2005.11.070

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стюарт, Д. Р., Сельникер, А. К., Тейлор, К. А., Краган, Дж. Р., Оверстрит, Дж. У. и Ласли, Б. Л. (1990). Релаксин в периимплантационном периоде. J. Clin. Эндокринол. Метаб. 70, 1771–1773. DOI: 10.1210 / jcem-70-6-1771

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тэр, М., Эммет, С. Дж., Коулман, Х. А., Скордилис, К., Эйлз, Д. У., Морли, Р., и другие. (2011). Недостаточность витамина D связана с нарушением функции эндотелия и гладких мышц сосудов и гипертонией у молодых крыс. J. Physiol. 589 (Pt 19), 4777–4786. DOI: 10.1113 / jphysiol.2011.214726

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ваньони, К. Э., Шоу, К. Э., Фернеттон, Т. М., Меглин, Б. М., Берд, И. М., и Магнесс, Р. Р. (1998). Производство эндотелиальных вазодилататоров маточными и системными артериями. III. Влияние яичников и эстрогенов на NO-синтазу. Am. J. Physiol. 275 (5 Pt 2), h2845 – h2856. DOI: 10.1152 / ajpheart.1998.275.5.h2845

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Veerareddy, S., Cooke, C.-L. М., Бейкер П. Н. и Дэвидж С. Т. (2002). Сосудистая адаптация к беременности у мышей: влияние на миогенный тонус. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283, h3226 – h3233. DOI: 10.1152 / ajpheart.00593.2002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Vodstrcil, L.A., Tare, M., Novak, J., Dragomir, N., Ramirez, R.J., Wlodek, M.E., et al. (2012). Релаксин обеспечивает эластичность маточных артерий во время беременности и увеличивает маточный кровоток. FASEB J. 26, 4035–4044. DOI: 10.1096 / fj.12-210567

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Weiner, C.P., Lizasoain, I., Baylis, S.A., Knowles, R.G., Charles, I.G., и Moncada, S. (1994). Индукция кальций-зависимых синтаз оксида азота половыми гормонами. Proc.Natl. Акад. Sci. США 91, 5212–5216. DOI: 10.1073 / pnas.91.11.5212

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Withers, S. B., Taggart, M. J., Baker, P., and Austin, C. (2009). Ответы изолированных маточных артерий крыс под давлением на изменения давления: эффекты предварительного сужения, эндотелия и беременности. Плацента 30, 529–535. DOI: 10.1016 / j.placenta.2009.03.011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сяо, Д., Хуанг, X., Ян, С., Лонго, Л. Д., и Чжан, Л. (2010). Беременность подавляет полимеризацию актина и зависимый от давления миогенный тонус в маточных артериях овцы. Гипертония 56, 1009–1015. DOI: 10.1161 / HYPERTENSIONAHA.110.159137

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжан Ю., Стюарт К. Г. и Дэвидж С. Т. (2001). Эндогенный эстроген опосредует сосудистую реактивность и растяжимость брыжеечных артерий беременных крыс. Am.J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 280, H956 – H961. DOI: 10.1152 / ajpheart.2001.280.3.H956

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhao, L., Roche, P.J., Gunnersen, J.M., Hammond, V.E., Tregear, G.W., и Wintour, E.M. (1999). Мыши без функционального гена релаксина не могут давать молоко своим детенышам. Эндокринология 140, 445–453. DOI: 10.1210 / endo.140.1.6404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Роль эстрогена и прогестерона в регуляции перистальтики матки: результаты перфузии небеременной матки свиней | Репродукция человека

Абстракция

Предпосылки: Адекватная сократимость и перистальтика матки участвуют в транспортировке спермы и гамет и в успешной имплантации эмбриона.Эстроген и прогестерон обычно колеблются во время менструального цикла. Было высказано предположение, что оба гормона определенным образом влияют на перистальтику матки. МЕТОДЫ: Использовалась модель экстракорпоральной перфузии матки свиньи, которая поддерживает матку в функциональном состоянии и подходит для изучения физиологических вопросов. Эффекты эстрогена и прогестерона на индуцированную окситоцином перистальтику матки оценивали с помощью внутриматочного микрокатетера с двойным чипом. РЕЗУЛЬТАТЫ: Перфузия эстрогена была связана с увеличением внутриматочного давления (ВМД) дозозависимым образом.Наблюдалась значительная разница между увеличением IUP, измеренным в перешейке матки и в теле матки, что приводило к градиенту шейно-фундального давления. Перфузия эстрогена приводила к значительно более высокой частоте перистальтических волн, начинающихся в перешейке матки и направленных к телу матки. Прогестерон в целом был способен противодействовать эстрогену. ВЫВОДЫ. Это исследование демонстрирует, что эстроген и прогестерон по-разному влияют на регуляцию перистальтики матки.Настоящее наблюдение показывает, что эстроген стимулирует перистальтику матки и способен создавать перистальтику в цервико-фундальном направлении, тогда как прогестерон подавляет направленную перистальтику матки.

Адекватная сократимость матки участвует в транспортировке спермы и гамет и в успешной имплантации эмбриона, тогда как недостаточная сократимость матки может привести к внематочной беременности, выкидышам, ретроградному кровотечению и эндометриозу (Leyendecker et al ., 2004; Bulletti and de Ziegler, 2005; Kissler et al ., 2005). У фертильных женщин направленную одностороннюю транспортировку неподвижного сперматоподобного материала через половые пути к стороне, несущей доминантный фолликул, можно оценить с помощью гистеросальпингоцинтиграфии (HSSG) (Kissler et al ., 1995, 2004a, b; Kunz et al. ., 1996). Обычно волны сокращения матки показывают самую высокую частоту и амплитуду во время периовуляторной фазы, тогда как в другой фазе наблюдаются волны сокращения с более низкой частотой и амплитудой.В частности, во время менструации перистальтика, по-видимому, направлена ​​к шейке матки (Lyons et al ., 1991; Fukuda and Fukuda, 1994). У женщин с интактной периовуляторной транспортной функцией маточно-канального канала по оценке HSSG частота беременностей, достигнутая самопроизвольно или путем внутриматочной инсеминации, была значительно выше по сравнению с женщинами с отрицательной оценкой транспорта (Kissler et al ., 2004b).

Первоначальная модель экстракорпоральной перфузии изолированной матки была впервые описана Bulletti et al .(1986). Предыдущие исследования подтвердили применимость этой модели перфузии изолированной матки для различных целей (Bulletti et al ., 1987, 1988a, b; Richter et al ., 2000, 2003, 2004, 2005). Первые результаты электромеханической активности и внутрипросветного давления во время экстракорпоральной перфузии стероидами яичников в группе из десяти изолированных маток человека также были описаны Bulletti et al . (1993). 17β-эстрадиол увеличивал частоту и продолжительность сократительной способности матки, тогда как прогестерон снижал и то, и другое.Согласно ранее описанным экспериментам in vitro , существует возможная клиническая связь между сократимостью матки и стероидными гормонами (Bulletti et al ., 2001, 2002). Кроме того, эта модель перфузии подходит для изучения других физиологических вопросов (Dittrich et al ., 2003; Maltaris et al ., 2005a, b). Непрерывный мониторинг внутриматочного давления (ВМД) с использованием нескольких датчиков в разных местах внутри матки может быть подходящим методом оценки направленных перистальтических волн матки.

Целью этого исследования было оценить динамические изменения индуцированной окситоцином перистальтики матки и градиентов давления и показать направленные перистальтические волны матки в ответ на только эстроген и прогестерон и в сочетании с большой группой изолированных небеременных свиней с экстракорпоральной перфузией uteri, используя описанную систему перфузии. Первое намерение состояло в том, чтобы показать, что эстрогены вызывают перистальтику шейно-фундального отдела на используемой животной модели ex vivo , а также подтвердить и усилить результаты, представленные Bulletti et al .(1993). Второе намерение состояло в том, чтобы проверить модель перфузии матки свиней, используемую для сократительной способности матки, в отношении различных физиологических гормонов и медиаторов, чтобы впоследствии она могла использоваться для дальнейших экспериментов, например. для изучения влияния различных простагландинов на сократительную способность матки.

Свиньи ( Sus scrofa domestica ) широко используются в исследованиях.Матка свиньи представляет собой длинную двустворчатую матку с одним телом и единственной шейкой матки (Bartol, 1999). Стенка матки имеет архитектуру, аналогичную архитектуре человека и других домашних животных, с тремя классическими гистологическими элементами стенки матки, включая эндометрий; миометрий, состоящий из четко ориентированных гладкомышечных клеток и периметрия. Эндометрий содержит многие сотни желез в поперечном сечении стенки матки, а миометрий четко дифференцирован на внутренний круговой и внешний продольный слои (Bartol, 1999; Spencer et al ., 2005). Фаллопиевы трубы взрослой самки такого же диаметра, как и у человека. Однако они намного длиннее, и тело матки также длиннее по сравнению с маткой человека. У свиноматки эстральный цикл составляет 20–21 день. Всего с местной бойни было получено 180 свиных маток. Матки были выбраны на основе их размера и общего состояния, а также состояния культи маточной артерии. Средний вес матки свиньи составлял 124 г (диапазон 85,5–165 г).8 г). Все они получены от здоровых животных в возрасте 5–18 месяцев. Свиньи матки очень легко отделяются от остального тела в течение примерно 2 минут после смерти животного электрическим током (1,5 А, 400 В, 4 с). Выделенные матки свиней были предоставлены местной бойней, что позволило избежать затрат и обязанностей животноводческого отделения или проведения хирургических операций на животных. Кроме того, использование модели матки свиньи позволяет избежать тестирования in vivo .

После установки катетера в маточные сосуды с помощью игл 16–24 G (Abbocath-T; Abbott Ireland, Sligo, Ирландия), в зависимости от размера матки, орган помещали в перфузионную камеру с контролируемой температурой (Karl Lettenbauer, Erlangen, Ирландия, США). Германия), заполненный перфузионной средой (рисунок 1).Затем матку с обеих сторон соединяли с двумя резервуарами, содержащими перфузионный буфер (бикарбонатный глюкозный буфер Кребса-Рингера, Sigma, Deisenhofen, Германия). Перфузионная среда была насыщена кислородом карбогеном (смесь 95% кислорода и 5% углекислого газа), а затем введена в маточные артериальные катетеры с помощью двух роликовых насосов. Скорость потока перфузионной среды постоянно контролировалась и поддерживалась на уровне 15 мл / мин и 100 мм рт. Ст. К перфузионному буферу добавляли 17-β-эстрадиол (Sigma) в концентрациях 1, 10, 25 и 50 пг / мл, и 15 маток свиней перфузировали каждой концентрацией.Прогестерон (Sigma) добавляли к перфузионному буферу в концентрациях 1, 10, 25 и 50 пг / мл, и 15 маток свиней перфузировали каждой концентрацией. Схематический вид перфузионной системы показан на рисунке 2.

Рис. 1.

Матка свиньи помещена в перфузионную камеру с внутриматочным катетером с микрочипом и подключена к регистратору данных.

Рис. 1.

Матка свиньи помещена в перфузионную камеру с внутриматочным катетером с микрочипом и подключена к регистратору данных.

Рисунок 2.

Схематическое изображение перфузионной системы.

Рисунок 2.

Схематическое изображение перфузионной системы.

Пробы перфузата отбирали с интервалом в 1 час для измерения pH, P o ₂ , P co ₂ , HCO ₃ , лактата и насыщения кислородом. Образцы перфузата анализировали с помощью портативного клинического анализатора i-STAT (Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL, USA).

IUP регистрировали с помощью внутриматочного микрокатетера с двойным чипом (Urobar 8 DS-F; Raumedic, Muenchberg, Germany) с расстоянием 8 см между двумя датчиками давления. Один датчик был помещен в перешеек матки (нижнее тело), ​​а другой датчик был помещен в верхнее тело матки в матке свиньи. Двухчиповый микрокатетер был подключен к регистратору данных (MPR1, Raumedic) для непрерывного мониторинга IUP с передачей данных на персональный компьютер.Когда увеличение ВМД началось сначала в нижней части матки — это было обнаружено первым внутриматочным датчиком, который был помещен в перешеек матки, а затем стало обнаруживаться в верхней части матки, где был размещен второй датчик, — это сокращение считалось цервико-фундальной перистальтикой. Когда в IUP наблюдалось противоположное движение, это сокращение считалось цервикальной перистальтикой.

Окситоцин (Синтоцинон; Novartis Germany Ltd., Нюрнберг, Германия) использовался для индукции сокращений матки в увеличивающихся дозах 0,1, 0,3 и 1 МЕ каждые 15 мин до тех пор, пока не наблюдались регулярные сокращения матки. Окситоцин вводили болюсно через катетеры маточной артерии. Введение окситоцина начинали через 2 часа после первоначальной перфузии, содержащей вышеуказанные концентрации стероидов. Сокращения матки обычно возникали сразу после введения окситоцина. Пределы задержки после введения окситоцина во всех экспериментах не различались.Когда регулярное сокращение матки и перистальтика не происходили после описанной процедуры введения окситоцина, эту процедуру немедленно повторяли, тогда как увеличение используемых доз окситоцина не производилось (Kunz et al ., 1998a). Сокращения и перистальтику матки регистрировали в течение всего времени перфузии (приблизительно 7-8 часов).

Парный тест Стьюдента t использовали для статистической оценки значимых различий между увеличением IUP в перешейке матки и теле матки.Разницу в давлении между различными концентрациями каждого тестируемого стероида оценивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA). Кроме того, оценивалось, начинались ли сокращения матки в перешейке матки или в теле матки , с использованием критерия независимости хи-квадрат. Все расчеты были выполнены с использованием статистической программы для социальных наук (SPSS, версия 10.1 для Windows; SPSS, Чикаго, Иллинойс, США). P значения <0,05 считались статистически значимыми.

Эксперименты проводились только тогда, когда можно было поддерживать постоянную скорость потока перфузионной среды 15 мл / мин через каждую артерию при идеальном давлении 100 мм рт. Ст. На протяжении всего эксперимента. Параметры жизнеспособности оставались физиологическими в течение первых 8 часов перфузии (данные не показаны; подробнее см. Dittrich et al ., 2003). Типичный профиль давления матки свиньи, перфузированной 17β-эстрадиолом, показан на рисунке 3.Результаты перфузионных экспериментов приведены в Таблице I и на Рисунках 4–567.

Повышение внутриматочного давления (ВМД) в перешейке матки и теле матки во время перфузии 17β-эстрадиолом, прогестероном и 17β-эстрадиолом плюс прогестерон

Повышение внутриматочного давления (ВМД) в перешейке матки и теле матки во время перфузии 17β-эстрадиолом, прогестероном и 17β-эстрадиолом плюс прогестерон

Рисунок 3.

Типичный профиль давления перфузированной матки свиньи (перфузионный буфер содержит 10 пг / мл 17β-эстрадиола). После введения окситоцина возникли четко видимые регулярные перистальтические волны, направленные от шейки матки к телу матки, о чем свидетельствует повышение внутриматочного давления (ВМД) сначала в перешейке матки (верхняя кривая), а затем — увеличение ВМД в теле матки (нижняя часть). кривая) (изменение ВМД в мм / рт.

Рис. 3.

Типичный профиль давления перфузированной матки свиньи (перфузионный буфер содержит 10 пг / мл 17β-эстрадиола).После введения окситоцина возникли четко видимые регулярные перистальтические волны, направленные от шейки матки к телу матки, о чем свидетельствует повышение внутриматочного давления (ВМД) сначала в перешейке матки (верхняя кривая), а затем — увеличение ВМД в теле матки (нижняя часть). кривая) (изменение ВМД в мм / рт.

Рисунок 4.

Повышение внутриматочного давления (IUP) во время перфузии с различными концентрациями 17β-эстрадиола (серые столбцы, IUP, измеренное в теле матки; черные столбцы, IUP, измеренное в перешейке матки; n = 15 маток каждой исследуемой концентрации).

Рис. 4.

Повышение внутриматочного давления (ВМД) во время перфузии с различными концентрациями 17β-эстрадиола (серые столбцы, ВМД, измеренное в теле матки; черные столбцы, ВМД, измеренное в перешейке матки; n = 15 маток каждой проверенной концентрации).

Рисунок 5.

Повышение внутриматочного давления (ВМД) во время перфузии с различными концентрациями прогестерона (серые столбцы, ВМД, измеренное в теле матки; черные столбцы, ВМД, измеренное в перешейке матки; n = 15 маток) каждой проверенной концентрации).

Рис. 5.

Повышение внутриматочного давления (ВМД) во время перфузии с различными концентрациями прогестерона (серые столбцы, ВМД, измеренное в теле матки; черные столбцы, ВМД, измеренное в перешейке матки; n = 15 uteri в каждой проверенной концентрации).

Рисунок 6.

Повышение внутриматочного давления (ВМД) во время перфузии с различными концентрациями 17β-эстрадиола плюс прогестерон (серые столбцы, ВМД, измеренное в теле матки; черные столбцы, ВМД, измеренное в перешейке матки; н. = 15 маток каждой проверенной концентрации). n = 15 маток каждой исследуемой концентрации).

Рис. 7.

Число перистальтических ( n = число × 10) волн, начинающихся в теле матки (серые полосы) и перешейке матки (черные полосы).Каждая группа содержит 60 перфузированных маток. Сокращения матки, начинающиеся в перешейке матки или в теле матки, тестировались с использованием критерия независимости хи-квадрат.

Рис. 7.

Число перистальтических ( n = число × 10) волн, начинающихся в теле матки (серые полосы) и перешейке матки (черные полосы). Каждая группа содержит 60 перфузируемых маток. Сокращения матки, начинающиеся в перешейке матки или в теле матки, тестировались с использованием критерия независимости хи-квадрат.

приводила к дозозависимому увеличению IUP в перешейке ( P <0,001) и теле матки ( P <0,001; рис. 4). Повышение давления в перешейке матки было значительно выше, чем в теле матки при всех испытанных концентрациях. Кроме того, перфузия эстрогена приводила к значительному усилению перистальтики, начиная с перешейка матки и двигаясь в направлении тела матки ( P <0.001).

Перфузия прогестерона обычно была связана с меньшим увеличением ВМД (рис. 5). Никаких различий между увеличением IUP в перешейке матки и в теле матки при тестируемых концентрациях не наблюдалось. Никаких концентрационно-зависимых изменений IUP не наблюдалось. Кроме того, перфузия прогестерона привела к значительному усилению перистальтики, начиная с тела матки и двигаясь в направлении перешейка матки ( P <0.005).

Во время перфузии эстрогеном и прогестероном наблюдались результаты, аналогичные результатам, наблюдаемым при перфузии только прогестерона (рис. 6). Перфузия эстрогена и прогестерона приводила к дозозависимому снижению IUP в перешейке ( P <0,001) и теле матки ( P <0,001). Повышение давления в перешейке матки было значительно выше, чем в теле матки при 50 пг / мл тестируемых стероидов.Никаких различий в увеличении IUP в перешейке матки по сравнению с телом матки при других испытанных концентрациях не наблюдалось. Перистальтики, направленной к перешейку или телу матки, обнаружено не было ( P = 0,27).

Окситоцин является одним из самых сильнодействующих утеротоников и оказывает широкий спектр центральных и периферических физиологических эффектов (McNeilly et al ., 1983; Russell and Ленг, 1998; Thornton et al ., 2001; Caba et al ., 2003; Woodcock et al ., 2004). Несколько исследований показали, что уровни окситоцина повышаются во время сексуальной стимуляции и возбуждения, с пиком во время оргазма у женщин и мужчин (Carmichael et al ., 1987; Murphy et al ., 1990; Carter, 1992; Gimpl and Fahrenholz, 2001; Argiolas and Melis, 2003; Salonia и др. ., 2005). У грызунов экспрессия мРНК окситоцина эндометрия и рецептора окситоцина наиболее высока во время эструса и активируется эстрадиолом (Zingg et al ., 1995). Рихтер и др. . (2003) сообщили, что экспрессия рецептора окситоцина активируется эстрогенами не только в матке беременного человека, но и в матке небеременного человека (Richter et al ., 2003, 2004). Было обнаружено, что стимуляция высокими дозами 17β-эстрадиола увеличивает плотность рецепторов окситоцина миометрия, причем максимальные уровни обнаруживаются на дне матки (Richter et al ., 2003). В противном случае длительная стимуляция только окситоцином приводит к подавлению мРНК в небеременных клетках миометрия человека (Richter et al ., 2004), а затем к увеличению активности миометрия только впервые с последующим относительным покоем матки в течение дальнейшего времени перфузии (Richter et al ., 2005). Поэтому было логично предположить, что эстрогены могут поддерживать сократимость матки и что они действуют синергетически с окситоцином в регуляции перистальтики матки и в механизме транспорта к телу матки и фаллопиевым трубам. Fanchin и др. . (2000) сообщили о значительном снижении частоты сокращений матки в группе женщин с высоким уровнем прогестерона (> 100 нг / мл) в день переноса эмбриона по сравнению с днем ​​введения ХГЧ.Поэтому считается, что прогестерон подавляет сократительную способность матки. Впоследствии визуализация перистальтики матки с помощью ультразвука и сверхбыстрой магнитно-резонансной томографии показала разные перистальтические паттерны в разных фазах цикла (Birnholz, 1984; Abramowicz and Archer, 1990; Kunz et al ., 1996; Wildt et al ., 1998). ; Kido et al ., 2005). Результаты ранее опубликованных исследований (Richter et al ., 2003, 2004) предполагают, что действие эстрогенов, по-видимому, является геномным через активацию рецептора окситоцина, тогда как действие прогестерона, по-видимому, не является геномным из-за ингибирование действия окситоцина на его рецептор (Burger et al ., 1999; Данлэп и Стормшак, 2004).

В этом исследовании перфузия 17β-эстрадиола была способна генерировать градиент цервико-фундального давления и увеличивающееся количество перистальтических волн, начинающихся в перешейке матки, тогда как прогестерон не имел никакого эффекта. Когда матка была перфузирована обоими стероидами, прогестерон смог противодействовать эффекту эстрадиола. Это исследование демонстрирует, что эстроген и прогестерон по-разному влияют на регуляцию перистальтики матки, и наши результаты соответствуют результатам, впервые описанным Bulletti et al .(1993) в группе из 10 маток человека с экстракорпоральной перфузией и Richter et al . (2005) в экстракорпорально изученных матках человека, а также в матках, описанных Fanchin et al . (2000) во время стимуляции яичников для оплодотворения in vitro у 59 женщин. Кроме того, мы смогли продемонстрировать наличие перистальтических волн матки с цервико-фундальным направлением во время перфузии 17β-эстрадиола (рис. 7).

Непрерывный мониторинг IUP с использованием нескольких датчиков в разных местах полости матки может быть полезен для оценки направленной перистальтики матки и градиентов давления, которые могут вызывать механизмы направленного транспорта.Поэтому микрокатетер с двойным чипом и двумя датчиками давления того типа, который обычно используется для уродинамического исследования мочевого пузыря и уретры, может быть подходящим для исследования перистальтики матки; этот тип прибора использовался в экспериментах, представленных здесь. Из наших более ранних экспериментов на модели матки свиньи мы знаем, что частота и тонус базального давления особенно подвержены влиянию и манипулированию методом введения окситоцина. Напротив, рост IUP не усиливается многократным введением одного окситоцина или более высоких доз окситоцина и достигает плато при введении 2 МЕ окситоцина (Kunz et al ., 1998а, б; Dittrich et al ., 2003). Таким образом, мы делаем вывод, что повышение ВМД является более независимым параметром по сравнению с частотой или тоном базального давления в используемой модели in vitro . Матка свиньи может быть более практичной, чем человеческая матка для in vitro исследования механизмов транспорта матки, вызываемых перистальтическими сокращениями и волнами, и их регуляции, поскольку матка свиньи более похожа на мышечную трубку. Полость матки свиньи также более удлиненная, чем матка человека.Перистальтические волны легко визуализировать, а изменения ВМС в разных местах можно легко зарегистрировать одновременно с помощью внутриматочного многокристального микрокатетера. Отсроченные изменения давления могут быть лучше обнаружены в матке свиньи. Несмотря на общее ограничение результатов на животных моделях, которые нелегко передать людям, эта перфузионная модель может представлять собой полезный и практичный метод изучения эффектов различных веществ и гормонов на сократительную способность матки и механизмы маточного транспорта.

Таким образом, это исследование демонстрирует, что эстроген стимулирует перистальтику матки и способен генерировать цервико-фундальное направление перистальтики, тогда как прогестерон обычно подавляет направленную перистальтику матки. Используемая модель экстракорпоральной перфузии изолированной небеременной матки свиньи может служить адекватной моделью для изучения перистальтической активности матки in vitro, , что позволяет использовать более инвазивные подходы, обычно не разрешенные для людей. Данные, полученные на человеке, также можно получить на описанной модели перфузии небеременной матки свиньи.Преимущество используемой модели на животных заключается в том, что можно протестировать большое количество маток молодых и здоровых животных в течение их репродуктивной жизни. Использование матки молодых млекопитающих позволяет обнаружить определенные различия в пиках сокращения между дистальным и проксимальным отделами матки (рис. 3).

Работа поддержана фондом ELAN при университете Эрланген-Нюрнберг.

Перистальтика эндометрия матки: трансвагинальное ультразвуковое исследование

Fertil Steril

1990

54

451

454

Нейрофизиология полового цикла

J Endocrinol Invest

2003

26

Доп. 3

20

22

Матка: нечеловеческая

Энциклопедия воспроизводства

1999

об.4

Сан-Диего, Калифорния

Academic Press

950

960

Ультразвуковая визуализация движений эндометрия

Fertil Steril

1984

41

157

158

Сократимость матки и имплантация эмбриона

Curr Opin Obstet Gynecol

2005

17

265

276

Экстракорпоральная перфузия матки человека

Am J Obstet Gynecol

1986

154

683

688

48-часовая консервация изолированной матки человека: реакция эндометрия на половые стероиды

Fertil Steril

1987

47

122

129

Экстракция эстрогенов перфузированной маткой человека. Влияние проницаемости мембран и связывания белков сыворотки на дифференциальный приток в эндометрий и миометрий

Am J Obstet Gynecol

1988a

159

509

515

Ранняя беременность человека in vitro с использованием искусственной перфузии матки

Fertil Steril

1988b

49

991

996

Электромеханическая активность экстракорпоральной перфузии матки человека при помощи стероидов яичников

Hum Reprod

1993

8

1558

1563

Эндометриоз: отсутствие рецидивов у пациентов после аблации эндометрия

Hum Reprod

2001

16

2676

2679

Характеристики сократимости матки во время менструации у женщин с легким и умеренным эндометриозом

Fertil Steril

2002

77

1156

1161

Негеномные эффекты прогестерона на сигнальную функцию рецепторов, связанных с G-белком

FEBS Lett

1999

464

25

29

Сосание и поглаживание гениталий индуцируют экспрессию Fos в гипоталамических окситоцинергических нейронах детенышей кроликов

Brain Res Dev Brain Res

2003

143

119

128

Повышение уровня окситоцина в плазме при сексуальной реакции человека

J Clin Endocrinol Metab

1987

64

27

31

Окситоцин и сексуальное поведение

Neurosci Biobehav Rev

1992

16

131

144

Экстракорпоральная перфузия матки свиней как экспериментальная модель: действие окситоцитов

Horm Metab Res

2003

35

517

522

Негеномное ингибирование связывания окситоцина прогестероном в матке овцы

Biol Reprod

2004

70

65

69

Влияние гормонов на сократительную способность матки при стимуляции яичников

Hum Reprod

2000

15

Доп. 1

90

100

Движение полости эндометрия и цервикальная слизь

Hum Reprod

1994

9

1013

1016

Система рецепторов окситоцина: структура, функция и регуляция

Physiol Rev

2001

81

629

683

Оральные контрацептивы и перистальтика матки: оценка с помощью МРТ

J Magn Reson Imaging

2005

22

265

270

Гистеросальпингоцинтиграфическое исследование маточной трубы: селективный односторонний транспортный механизм

Contracept Fertil Steril

1995

23

OC-286

Сократимость матки и направленный транспорт сперматозоидов, оцененные с помощью гистеросальпингоцинтиграфии (HSSG) и измерения внутриматочного давления (IUP)

Acta Obstet Gynecol Scand

2004a

83

369

374

Прогностическая ценность нарушения транспортной функции матки, оцененная с помощью отрицательной гистеросальпингоцинтиграфии (HSSG)

Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol

2004b

113

204

208

Снижение частоты наступления беременности при эндометриозе из-за нарушения маточно-канального транспорта по данным гистеросальпингоцинтиграфии

BJOG

2005

112

1391

1396

Динамика быстрого транспорта спермы через женские половые пути: данные вагинальной сонографии перистальтики матки и гистеросальпингоцинтиграфии

Hum Reprod

1996

11

627

632

Перистальтика матки во время фолликулярной фазы менструального цикла: эффекты эстрогена, антиэстрогена и окситоцина

Hum Reprod Update

1998a

4

647

654

Сонографические доказательства участия маточно-яичниковой противоточной системы в овариальном контроле направленного транспорта маточной спермы

Hum Reprod Update

1998b

4

667

672

Перистальтическая активность матки и развитие эндометриоза

Ann N Y Acad Sci

2004

1034

338

355

Характеристика сокращений субэндометрия миометрия на протяжении менструального цикла у нормальных фертильных женщин

Fertil Steril

1991

55

771

774

Экстракорпоральная перфузия матки свиньи как экспериментальная модель: действие токолитических препаратов

Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol

2005a

29

Повышенное артериальное давление в матке и сократимость перфузируемой матки свиней после лечения сывороткой от женщин с преэклампсией и эндотелином-1

Clin Sci (Lond)

2005b

109

209

215

Высвобождение окситоцина и пролактина в ответ на кормление грудью

Br Med J (Clin Res Ed)

1983

286

257

259

Налоксон подавляет высвобождение окситоцина при оргазме у мужчины

J Clin Endocrinol Metab

1990

71

1056

1058

Экстракорпоральная перфузия матки человека как экспериментальная модель в гинекологии и репродуктивной медицине

Hum Reprod

2000

15

1235

1240

Иммуногистохимическая реактивность рецептора окситоцина миометрия в небеременной матке человека с экстракорпоральной перфузией

Arch Gynecol Obstet

2003

269

16

24

Экспрессия гена рецептора окситоцина стимулируемого эстрогеном миометрия человека в небеременной матке с экстракорпоральной перфузией

Mol Hum Reprod

2004

10

339

346

Сократительная реактивность миометрия человека в изолированной небеременной матке

Hum Reprod

2005

Секс, роды и материнство без окситоцина?

J Эндокринол

1998

157

343

359

Изменения окситоцина плазмы, связанные с менструальным циклом, имеют отношение к нормальной сексуальной функции у здоровых женщин

Horm Behav

2005

47

164

169

Сравнительная биология развития матки млекопитающих

Curr Top Dev Biol

2005

68

85

122

Антагонисты окситоцина: клинические и научные соображения

Exp Physiol

2001

86

297

302

Транспорт спермы в женских половых путях человека и его модуляция окситоцином по данным гистеросальпингоцинтиграфии, гистеротонографии, электрогистерографии и допплеровской сонографии

Hum Reprod Update

1998

4

655

666

Влияние антагониста рецептора окситоцина и ингибитора ро-киназы на [Ca ⁺⁺ ] I чувствительность миометрия человека

Am J Obstet Gynecol

2004

190

222

228

Экспрессия гена окситоцина и рецептора окситоцина в матке

Recent Prog Horm Res

1995

50

255

273

© Автор 2006. Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

Sonoguide // Ранняя беременность

Matt Rutz, MD, Creagh Boulger, MD, FACEP

I. Введение и показания

Жалобы, связанные с беременностью, являются 4-м ведущим диагнозом выписки у женщин детородного возраста. ¹ Многие из этих женщин жалуются на боль и кровотечение. Часто наличие беременности и ее местонахождение еще не подтверждено при первичном обращении. Дифференциал для этих пациентов широк и включает, помимо прочего, жизнеспособную беременность, выкидыш, молярную беременность, гибель плода и внематочную. Медицинский осмотр и сбор анамнеза часто не помогают при постановке диагноза. В результате этой диагностической дилеммы прикроватное ультразвуковое исследование стало полезным диагностическим инструментом на ранних сроках беременности.УЗИ у постели больного следует использовать в сочетании с количественным анализом уровня B-hCG в сыворотке крови, анамнезом и физическим обследованием для определения внутриутробной беременности.

• Роль этого исследования — определение внутриутробной беременности
• Специфичность 92–100% для подтверждения внутриутробной беременности (IUP) при обнаружении гестационного мешка, желточного мешка или полюса плода. ²
• Ультразвук на ранних сроках беременности следует проводить, когда у пациентки есть тест на беременность для подтверждения места беременности.
• УЗИ на ранних сроках беременности следует проводить, когда у пациентки с известной беременностью наблюдается усиление боли и / или кровотечения для оценки жизнеспособности.

II. Анатомия

Матка

• Грушевидный толстостенный мышечный орган, расположенный кзади от мочевого пузыря и кпереди от сигмовидной кишки.
• Позиции включают:

• Антевертированное — наиболее распространенное положение. Дно матки обращено к передней брюшной стенке.
• Ретровертированное — Дно матки обращено к позвоночнику. Может усложнить трансабдоминальную визуализацию.

Фаллопиевы трубы и яичники

• Фаллопиевы трубы отходят латерально от тела матки к широкой связке. ³
• Яичники прикреплены к матке связками яичника, а к боковой стенке — поддерживающими связками яичника.

III. Техника сканирования, нормальные результаты и распространенные варианты

Сонографическая техника — трансабдоминальный

Сонографическая техника — трансвагинальная

• Пациент должен лежать на спине в положении для литотомии.
• Используйте внутриполостный или трансвагинальный зонд 5–9 МГц с нераздражающей смазкой на водной основе и крышкой зонда.
• Введите или попросите пациента ввести датчик во влагалище индикатором датчика вверх. Это сагиттальная / продольная плоскость. (Иллюстрации 7 и 8)
  • Проведите вентилятором справа налево, чтобы увидеть всю матку.
  • Иллюстрация 7. Изображение сагиттального или продольного трансвагинального доступа с соответствующей анатомией.Индикатор зонда направлен к потолку. Источник: WikiCommons (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Vaginal_Ultrasound.png)
  • Иллюстрация 8. Изображение трансвагинального сагиттального / продольного вида. Обратите внимание на гиперэхогенную (яркую) полосу эндометрия.

• Затем поверните датчик на 90 градусов с индикатором датчика вправо от пациента, чтобы увидеть поперечную / коронарную плоскость.
  • Пролистайте зонд спереди и сзади, чтобы увидеть всю матку (видео 5).
  • Видео 5. Поперечное / коронковое сканирование матки с помощью трансвагинального ультразвукового исследования. Очень гиперэхогенный (светлый) эндометрий в центре

• Угловой зонд в придатки с обеих сторон и насквозь.
  • Фаллопиевы трубы можно отследить до яичников, которые будут выглядеть как маленькие кисты в гипоэхогенном основании фолликулов.
  • Оценка яичников на предмет патологии и сосудистой системы выходит за рамки ультразвукового исследования в месте оказания медицинской помощи

Нормальные результаты — внутриутробная беременность (IUP)

• Неоспоримым доказательством IUP является гестационный мешок, содержащий желточный мешок (YS) в двух плоскостях внутри эндометрия, который обычно возникает в гестационном возрасте около 5-6 недель. ^3,6 (видео 6 и 7)
  • Это определение вызывает разногласия; однако любое более раннее определение (например, двойной децидуальный признак, пустой плодный мешок) недостаточно точное, чтобы гарантировать IUP. ⁷
  • Видео 6. Сагиттальная развертка, показывающая желточный мешок внутри гестационного мешка, а также внутриутробную беременность
  • Видео 7. Поперечный / коронарный трансвагинальный вид желточного мешка в матке

• До развития YS плодный мешок (GS) становится видимым на 4-5 неделях.
  • Будьте осторожны, чтобы не полагаться на GS как на IUP, 10-20% внематочных беременностей имеют псевдогестационные мешки. ⁸ (видео 8)
  • Видео 8. Сагиттальный трансвагинальный вид гестационного мешка внутри матки. Это не считается IUP, так как это может быть псевдогестационный мешок.

• Полюс плода развивается 6-7 недель, и частота сердечных сокращений видна в том же временном интервале (Иллюстрация 9, Видео 9)
• Для определения максимальной ЧСС плода поместите пик в M-режиме на мерцающее сердце плода и измерьте повторяющийся рисунок.(Иллюстрация 9)
  • Не используйте допплерографию пульсовой волны, так как он фокусирует слишком много энергии (тепла) на плоде и противоречит принципу ALARA (разумно достижимого минимума).
  • Видео 9. Трансабдоминальный плод с ЧСС
  • Иллюстрация 9. Отслеживание тонов сердца плода в M-режиме
• Двойная беременность становится все более распространенной в лечении бесплодия.
  • Монохориальная беременность — Один хорионический мешок (видео 10)
  • Дихорионическая беременность — два хорионических мешка, разделенных толстой стенкой (видео 11)
• Датирование может быть достигнуто путем определения длины крестца коронки, когда полюс плода становится видимым, и затем бипариетального диаметра, когда череп плода становится очевидным в конце первого триместра. ¹ (Рис.10, 11)
• Видео 10. Трансабдоминальный поперечный вид монохориальных троек
• Видео 11. Трансабдоминальный поперечный вид дихориальных близнецов. Обратите внимание на большую перегородку между двумя хорионическими мешочками.
• Иллюстрация 10. Трансабдоминальный поперечный вид 10-недельного плода с измерением длины крестца коронки.
• Иллюстрация 11. Трансабдоминальный поперечный вид 15-недельного плода с измерением бипариетального диаметра от ведущего наружного черепа (самое ближнее поле) до внутреннего черепа (дальнее поле) на уровне желудочков.

• внематочный
  • Имплантаты для беременных вне эндометрия. ⁹
    • 95% встречаются в маточных трубах (видео 12)
    • Видео 12. Живая придатковая внематочная беременность
    • Шейка матки (Иллюстрация 12)
    • Иллюстрация 12. Трансвагинальное УЗИ, показывающее перитрофобластический кровоток на цветном допплеровском изображении, предполагающее имплантацию гестационного мешка в шейку матки.
    • Брюшина
    • Интерстициальная часть маточной трубы — предположительно гестационным мешком с окружающим миометрием <5 мм (Иллюстрация 13)
    • Иллюстрация 13. Трансвагинальное УЗИ в поперечной плоскости, показывающее интерстициальную беременность.
    • Яичников
      • Часто отложенная диагностика ^10,11
      • Прикроватное ультразвуковое исследование может сократить время до постановки диагноза ^2,12
      • Может развиваться желточный мешок, эмбрион, тоны сердца плода
      • Псевдогестационный мешок — Пустой мешок в матке, часто имеющий форму капли слезы.Результат реакции эндометрия на секретируемые гормоны, но там не будет развиваться желточный мешок или полюс плода. ^13-15

• Выкидыш / самопроизвольный аборт
  • Несостоявшаяся беременность до 20 недель
  • 10% всех признанных беременностей ^16,17
  • Рекомендации при неудачной беременности ¹⁸
    • Гестационный мешок и желточный мешок x 11 дней без ЧСС
    • Гестационный мешок> 25 мм без полюса плода (иллюстрация 14)
    • Полюс плода> 7 мм без сердцебиения (видео 13)
    • Иллюстрация 14 .Большой пустой плодный мешок
    • Видео 13. Внутриутробная гибель плода на 9 неделе
    • Выводы, указывающие на неудачную беременность
      • Нерегулярный плодный мешок (иллюстрация 15, видео 14)
      • Рисунок 15 . Вовлекающий плодный мешок
      • Видео 14. Нерегулярный плодный мешок
      • Несогласованные измерения гестационного возраста
    • Возможные диагнозы
      • Угроза выкидыша — пациент с болью и / или кровотечением, у которого закрытая зрительная трубка и ВМС на УЗИ
      • Неизбежный / неполный выкидыш — открытый зев с нежизнеспособным плодом или продуктами зачатия в матке (Иллюстрация 16)
      • Рисунок 16 .Неизбежный самопроизвольный аборт
      • Пропущенный / завершившийся выкидыш — как правило, открытый выкидыш без продуктов зачатия в матке (Иллюстрация 17)
      • Рисунок 17 . Завершенный самопроизвольный аборт
    • Если диагноз не диагностирован и продукты зачатия остаются нежизнеспособными, может развиться септический аборт, что бывает редко.
  • Субхорионическое кровоизлияние
    • Частая причина кровотечений в первом и втором триместре ¹⁹
    • Безэхогенный / гипоэхогенный серп вокруг гестационного мешка (иллюстрация 18)
    • Иллюстрация 18 .Субхорионическое кровоизлияние
      Повышенный риск выкидыша ^20,21
  • Гетеротопная беременность
    • Внутриматочная и внематочная беременность, существующие одновременно (видео 15)
    • Видео 15. Гетеротопическая беременность
    • Редко — 1/30 000 самопроизвольных беременностей, но гораздо более высокий риск в 1/100 беременностей с искусственным оплодотворением ^22,23
    • Повышенный риск задержки диагноза эктопии и, следовательно, повышенный риск осложнений
  • Молярная беременность (также известная как гестационная трофобластическая болезнь)
    • 1 / 1000-2000 беременностей ²⁴
    • Обостренные симптомы беременности (гиперемезис, усиление боли в груди, повышенная утомляемость)
    • Избыточный уровень B-ХГЧ в сыворотке
    • Partial Mole — довольно нормальный вид на начальном этапе ВМС, трудно диагностировать
    • Полная Родинка — внешний вид «грозди винограда» (Иллюстрация 19)
    • Иллюстрация 19. Молярная беременность
    • Высокая частота рецидивов при последующей беременности ²⁵
    • Повышенный риск хориокарциномы

• Для трансабдоминального сканирования иметь полный мочевой пузырь
• При трансвагинальной беременности иметь пустой мочевой пузырь
• Обеспечить 5 мм миометрия вокруг гестационного мешка, чтобы не пропустить интерстициальную эктопию
• Центральные каплевидные гестационные мешки относятся к псевдогестационному мешку
• Требуется наличие желточного мешка или полюса плода для подтверждения IUP
• У пациенток с вспомогательной репродуктивной системой необходимо учитывать гетеротопическую беременность
• Уровень B-ХГЧ в сыворотке недостоверен.Эктопия может существовать на всех уровнях, а при многоплодной беременности уровень B-ХГЧ может быть необычно высоким или низким для гестационного возраста.
• Тоны сердца плода следует получать только в М-режиме, если нет серьезных опасений по поводу гибели плода. Избегайте цветного и пульсового допплера у жизнеспособного плода, особенно в первом триместре.
• Визуализация и УЗИ по немедицинским причинам не рекомендуется, поскольку существует теоретический риск для плода, который может возрасти при повышенном воздействии.

1. Ниска Р., Бхуия Ф., Сюй Дж. Обследование амбулаторной медицинской помощи в национальной больнице: сводка отделения неотложной помощи за 2007 год. Статистический отчет национального здравоохранения. 2010: 1-31. https://www.cdc.gov/nchs/data/nhsr/nhsr026.pdf
2. Макрей А., Эдмондс М., Мюррей Х. Диагностическая точность и клиническая полезность целевого УЗИ отделения неотложной помощи при оценке тазовой боли и кровотечения в первом триместре: систематический обзор. CJEM . 2009; 11 (4): 355-64.
3. Ма Дж., Матир Дж., Блайвас М.Экстренное ультразвуковое исследование, 2-е издание. Макгроу Хилл; 2008.
4. Таббут М., Харпер Д., Грамер Д. и др. Высокочастотный линейный датчик улучшает обнаружение внутриутробной беременности при ультразвуковом исследовании в первом триместре. Am J Emerg Med . 2016; 34 (2): 288-91.
5. Мур С., Тодд В.М., О’Брайен Э. и др. Наличие свободной жидкости в мешочке Морисона при прикроватном ультразвуковом исследовании указывает на необходимость оперативного вмешательства при подозрении на внематочную беременность. Acad Emerg Med . 2007; 14 (8): 755-8.
6. Благородный В.Э., Нельсон Б., Сутинко АН.Руководство по ультразвуковой диагностике неотложной и интенсивной терапии. 2007.
7. Ричардсон А., Галлос И., Добсон С. и др. Точность УЗИ в первом триместре в диагностике трубной внематочной беременности при отсутствии очевидного внематочного эмбриона: систематический обзор и метаанализ. Ультразвуковой акушерский гинеколь . 2016; 47 (1): 28-37.
8. Yeh HC, Goodman JD, Carr L, et al. Внутридецидуальный признак: критерий УЗИ ранней внутриутробной беременности. Радиология . 1986; 161: 463-7.
9. Кирк Э.УЗИ в диагностике внематочной беременности. Clin Obstet Gynecol . 2012; 55 (2): 395-401.
10. Gracia CR, Barnhart KT. Диагностика внематочной беременности: анализ решения, сравнивающий шесть стратегий. Акушерский гинекол . 2001; 97 (3): 464-70.
11. Mateer JR, Valley VT, Aiman ​​EJ и др. Анализ результатов протокола, включающего прикроватную эндовагинальную сонографию у пациентов с риском внематочной беременности. Энн Эмерг Мед . 1996; 27 (3): 283-9.
12. Adhikari S, Blaivas M, Lyon M.Диагностика и ведение внематочной беременности с использованием прикроватной трансвагинальной ультрасонографии в отделении неотложной помощи: 2-летний опыт. Am J Emerg Med. 2007; 25 (6): 591-6.
13. Bhatt S, Ghazale H, Dogra VS. Сонографическая оценка внематочной беременности. Радиол Клин Норт Ам . 2007; 45 (3): 549-60.
14. Lin EP, Bhatt S, Dogra VS. Диагностические ключи к внематочной беременности. РадиоГрафика . 2008; 28 (6): 1661-71.
15. Гурель С., Сарикая Б., Гурель К. и др. Роль сонографии в диагностике внематочной беременности. J Clin Ультразвук . 2007; 35 (9): 509-17.
16. Wilcox AJ, Weinberg CR, O’Connor JF, et al. Частота преждевременного прерывания беременности. N Engl J Med. 1988; 319 (4): 189-94.
17. Ван X, Чен С., Ван Л. и др. Зачатие, потеря беременности на ранних сроках и время наступления клинической беременности: популяционное проспективное исследование. Fertil Steril . 2003; 79 (3): 577-84.
18. Doubilet PM, Benson CB, Bourne T. и др. Диагностические критерии нежизнеспособной беременности в начале первого триместра. N Engl J Med . 2013; 369 (15): 1443-51.
19. Pearlstone M, Baxi L. Субхорионическая гематома: обзор. Акушерское гинекологическое обследование . 1993; 48 (2): 65-8.
20. Туули М., Норман С., Одибо А. и др. Субхорионическая гематома (SCH) и неблагоприятные перинатальные исходы: систематический обзор и метаанализ. Am J Obstet Gynecol . 2011; 204 (1 ПРИЛОЖЕНИЕ): S149.
21. Abu-Yousef MM, Bleicher JJ, Williamson RA, et al. Субхорионическое кровоизлияние: сонографический диагноз и клиническое значение. AJR Ам Дж. Рентгенол . 1987; 149 (4): 737-40.
22. Левин Д. Внематочная беременность. Радиология . 2007; 245 (2): 385-97.
23. Репродукция человека. Репродукция Человека . 2008; 23 (9): 1963.
24. Savage PM, Sita-Lumsden A, Dickson S, et al. Взаимосвязь возраста матери с частотой молярной беременности, рисками химиотерапии и последующим исходом беременности. J Obstet Gynaecol (Лахор). 2013; 33 (4): 406-11.
25. Берковиц Р.С., Гольдштейн Д.П.Клиническая практика: Молярная беременность. N Engl J Med . 2009; 360 (16): 1639-45.

Полоса месяца | Американская академия педиатрии

Обзор случаев электронного мониторинга плода

Электронный мониторинг плода (EFM) — популярная технология, используемая для определения благополучия плода. Несмотря на широкое распространение, терминология, используемая для описания рисунков, видимых на мониторе, до недавнего времени не была единообразной. В 1997 году на семинаре по планированию исследований Национального института здоровья детей и развития человека (NICHD) были опубликованы рекомендации по интерпретации следов плода.Эта публикация стала кульминацией двухлетней работы группы экспертов в области мониторинга состояния плода и была одобрена Американским колледжем акушеров и гинекологов (ACOG) и Ассоциацией женского здоровья, акушерских и неонатальных медсестер (AWHONN). ). Терминологические определения и допущения, содержащиеся в публикации NICHD, составляют основу для интерпретации данных об отслеживании плода в этой серии и кратко изложены здесь. Нормальные значения газов в артериальной пуповине и признаки ацидоза указаны в таблице 1.

Значения газов в артериальной пуповине

Допущения из семинара NICHD

• Определения разработаны для визуальной интерпретации

• Определения применимы к трассировкам, генерируемым внутренними или внешними устройствами мониторинга

• Периодические модели различаются по форме волны, резкие или постепенные (например, поздние замедления имеют постепенное начало, а переменные замедления — резкие).

• Долгосрочная и краткосрочная изменчивость оцениваются визуально как единица

• Гестационный возраст плода учитывается при оценке паттернов

• Компоненты частоты сердечных сокращений плода (ЧСС) не возникают по отдельности и обычно развиваются с течением времени

Определения

Базовая частота сердечных сокращений плода

• Приблизительное среднее значение ЧСС, округленное с шагом 5 ударов / мин в 10-минутном сегменте отслеживания, исключая периодические или эпизодические изменения, периоды заметной вариабельности и сегменты исходного уровня, которые отличаются более чем на 25 ударов / мин

• В 10-минутном сегменте минимальная базовая продолжительность должна составлять не менее 2 минут, в противном случае базовый уровень для этого сегмента является неопределенным

• Брадикардия — базовый уровень <110 уд / мин; тахикардия…