Микрофилярии это: Дирофиляриоз у собак и кошек

Содержание

Дирофиляриоз у собак и кошек

Описание возбудителя дирофиляриоза

Дирофиляриоз — паразитарное заболевание, вызываемое гельминтами рода Dirofilaria (лат. «diro, filum» — «злая нить»). Восприимчивы к данному заболеванию собаки, кошки, а также дикие плотоядные (хорьки, еноты и т.д.). Известны случаи заражения человека.

Cуществуют два наиболее распространенных вида дирофилярий – Dirofillaria repens и Dirofilaria immitis. У Dirofillaria repens взрослые гельминты паразитируют под кожей, у Dirofilaria immitis взрослые особи локализуются в сердце (рис.1).

Рис. 1. Патогенез Dirofillaria repens и Dirofilaria immitis

Заражение дирофиляриозом происходит при укусе животных комарами, инфицированными микрофиляриями (начальная личиночная стадия развития) от больных животных. В течение 10-28 дней после заражения из микрофилярий развиваются личинки, которые в зависимости от вида возбудителя мигрируют под кожу или в сердце, где затем развиваются взрослые особи. Половозрелые гельминты размножаются, выделяя в кровеносное русло микрофилярии (рис. 2).

Рис. 2. Жизненный цикл D. immitis

Заражение дирофиляриозом происходит, как правило, в теплый период года в пик размножения комаров. Высок риск заражения во влажных местностях, возле водоемов. Вместе с тем, во влажных теплых помещениях, оптимальных для размножения некоторых видов комаров, заражение возможно в течение всего года.

Симптомы дирофиляриоза

На начальных этапах поражения обеими видами дирофилярий клинические признаки могут отсутствовать. Симптомы заболевания могут отсутствовать даже в течение нескольких лет, что зависит от многих факторов: количества взрослых особей гельминтов в организме животного, длительности заражения, общего состояния и индивидуальной восприимчивости организма.

При заражении D. repens:

  • Общая слабость, появление на коже вздутий, узелков, наполненных гноем и личинками дирофилярий.

При заражении D. immitis:

  • Кашель, который усиливается в процессе или после физических нагрузок.
  • Сердечная и дыхательная недостаточность, общая слабость организма.
  • Нарушение функций внутренних органов – сердца, почек, печени и т. д.
  • Отек легких, асцит, парезы конечностей, неврологические нарушения и т. д.

 Диагностика дирофиляриоза

Диагностика наличия микрофилярий:

    • Исследование мазка крови на наличие микрофилярий (рис. 3). Данный метод не позволяет различить два вида дирофиляриоза – D. repens и D. immitis.
    • Исследование крови на наличие ДНК микрофилярий методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Позволяет дифференцировать два вида дирофиляриоза D. repens и D. immitis.
Рис. 3 Микрофилярии под микроскопом

Диагностика наличия взрослых особей:

  • Для диагностики D.repens – визуальное обследование кожных покровов на наличие узелков, вздутий, которые могут мигрировать под кожей.
  • Для диагностики D. immitis — УЗИ сердца, которое позволяет выявить наличие овальных или веретеноподобных образований. Данная диагностика малоэффективна при наличии малого количества взрослых дирофилярий в сердце.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохроматографический анализ (ИХА) исследование наличия соматических антигенов в крови. Позволяет определить наличие взрослых гельминтов в организме. Особенно актуален данный анализ для определения наличия взрослых особей D. immitis, так как диагностика другими методами малоэффективна (см. выше).

Отбор пробы для анализа

Для микроскопии, ИФА и ИХА анализов отбирают венозную кровь в чистую сухую пробирку без коагулянта. Желательно отбирать кровь самотеком во избежание гемолиза. При отборе крови шприцом, ее не переносят в пробирку, а доставляют в лабораторию прямо в шприце. Желательно доставлять отобранную кровь в лабораторию незамедлительно после отбора. При невозможности соблюдения этого условия, хранить кровь в холодильнике не более 2 суток.

Лечение дирофиляриоза

  • Медикаментозное – использование лекарственных средств против микрофилярий и взрослых гельминтов. Только по назначению врача!
  • Хирургическое – операционное удаление взрослых гельминтов из кожных покровов и сердца (рис. 4).
  • Профилактика – применение профилактических лекарственных средств. Только по назначению врача!
Рис. 4. Взрослые особи дирофилярий в сердце

Вакцинация против дирофиляриоза

Вакцинация против дирофиляриоза не разработана. Для профилактики заболевания рекомендуется по окончании сезона размножения комаров проверять животных на наличие микрофилярий, а также антигенов взрослых особей гельминтов с помощью ИФА и ИХА. Рекомендуются также проводить медикаментозную профилактику по назначению врача (см. выше).

Влияние дирофиляриоза на человека

Человек является тупиковым хозяином дирофилярий, так как в его организме гельминты не достигают половой зрелости. Известны случаи заражения человека обеими видами дирофилярий — D.immitis и D.repens. В Украине случаи заражения D.immitis на данный момент не зарегистрированы.  Случаи поражения человека

D.repens встречаются на сегодняшний день в Украине с частотой ориентировочно 400 случае в год.

Дирофиляриоз — Клиника доктора Веденеева

В настоящее время участились случаи амикрофиляримеческой формы течения болезни, т.е. животное болеет, но а в нативной крови личинок не обнаруживаются. Это происходит от бесконтрольного применения различных профилактических средств.

Дирофиляриоз – кровепаразитарное заболевание, вызываемое гельминтами рода Dirofilaria, широко распространенное в нашем регионе. Длина взрослых особей достигает 40см, диаметр до 1,3мм. Обычный хозяин для  дирофилярий — домашние собаки и другие представители семейства  собачьих. Промежуточный хозяин (переносчик) — комары (роды Aedes, Culex, Anopheles). Общее количество гельминтов, заражающих собаку,  варьирует от 1 до 250 особей. Помимо собак заражению могут быть подвержены и другие виды: волки, лисы, койоты, домашние и дикие кошки, хорьки, ондатры, морские львы,  носухи, а также  люди.

Дирофиляриоз широко распространен во многих странах мира и практически на всей территории Российской Федерации, особенно в южных регионах. Так на территории Волгоградской, Ростовской, Саратовской, Астраханской областей и Краснодарского края широко, повсеместно регистрируются случаи заболевания дирофиляриозом не только среди животных, но и среди людей.

У собак регистрируют две разновидности дирофилярий:

— D.immitis — имаго этого вида паразитируют в легочных  артериях и правых отделах сердца,вызывая сердечно-легочную форму заболевания; — D.repens — взрослые особи этого вида паразитируют в подкожной клетчатке и мышцах, вызывая кожную форму болезни.

Взрослые самки дирофилярий ежедневно выделяют большое количество личинок микроскопического размера. Это личинки — микрофилярии. Током крови микрофилярии разносятся по всей кровеносной системе собаки. Комар насосавшись крови от заражённого животного, заглатывает вместе с кровью личинок. Во время укуса комаром здорового животного, происходит заражение.  Юные особи D.repens остаются паразитировать в пределах подкожной клетчатки. Особи D.immitis мигрируют в системный кровоток, и, током крови, заносятся в легочные артерии. Как правило, через 7-9 месяцев после начала инвазии в крови циркулируют микрофилярии. Продолжительность жизни гельминтов в организме собаки может достигать 7 лет от момента заражения.  Юные и взрослые D.immitis локализуются  преимущественно  в легочных артериях, иногда мигрируя в главные легочные артерии, при тяжёлой инвазии — в правые отделы сердца и крупные вены. Приводя к тяжелым последствиям для организма животного.

Своевременная диагностика может сильно повысить шансы на выздоровление.

В настоящее время участились случаи амикрофиляримеческой формы течения болезни, т.е. животное болеет, но а в нативной крови личинок не обнаруживаются. Это происходит от бесконтрольного применения различных профилактических средств. 

Перед тем как начать применять препарат для профилактики дирофиляриоза, животным в обязательном порядке должны, проведены тесты крови. Это продиктовано тем, что профилактирующие препараты содержат вещества, убивающие микрофилярий в периферической крови. Это впоследствии может дать при традиционном исследовании, ложноотрицательные результаты. А как следствие – не своевременную постановку диагноза и снижение шансов на выздоровление.

В нашей клинике проводятся все необходимые современные возможности диагностики данного заболевания. Так, мы предлагаем не только обнаружение микрофилярий в периферическом русле путем микроскопии крови, но и иммухроматографическое выявление антигенов. Что заметно повышает эффективность постановки диагноза. Так же мы настоятельно рекомендуем исследование крови ваших питомцев методом иммунохроматографии регулярно, особенно перед профилактическими обработками, которые следует осуществлять с начала периода лета комаров.

Эффективность микроскопического исследования периферической крови составляет около 75%, но следует учитывать, что у 30% собак микрофилярии в периферической крови отсутствуют, из-за ряда факторов. Эффективность же иммунохроматографического исследования достигает почти 98% (Dir. Immitis).

Дирофиляриоз – сердечные глисты у собак: симптомы и лечение

Симптомы

Симптомы могут варьироваться в зависимости от количества паразитов. У собак с небольшим количеством червей симптомы могут быть неярко выраженными, в то время как высокое количество глистов может привести к кашлю, утомлению при физических нагрузках и даже сердечной недостаточности.

Диагноз

Ветеринары могут диагностировать наличие сердечного червя несколькими способами. Первый — это анализ крови собаки и поиск микрофилярий (микрофилярии вырабатываются взрослыми паразитами и циркулируют в кровотоке животного). Есть также другие способы диагностики. Рентгенография грудной клетки также может помочь определить степень повреждения сердца и легких.

Лечение

Это заболевание трудно поддается лечению, в основном потому, что в результате уничтожения паразитов мертвые черви могут попасть в кровоток.

При лечении сердечного червя, сначала назначается медикаментозный препарат, который действует на взрослых паразитов. Физическая активность собаки должна быть ограничена, также во избежание осложнений требуется дополнительная терапия.

На следующей стадии назначается другое лекарство, которое направлено на личинок (микрофилярий), циркулирующих в кровотоке. Это также может привести к осложнениям, так как отмирающие микрофилярии могут вызвать у животного анафилактическую (аллергическую) реакцию.

В зависимости от симптомов, которые проявляет собака, может потребоваться ряд дополнительных методов лечения, иногда необходимо хирургическое удаление паразитов, если они блокируют кровоток из сердца.

Профилактика

Сердечный червь — невероятно серьезное заболевание, его лечение может быть дорогостоящим и трудным, поэтому очень важно предотвратить заражение.

Существуют два способа профилактики у собак (применение обоих обеспечивает наилучшую защиту): первым является регулярное использование репеллента от насекомых, а вторым — регулярное использование профилактического препарата от сердечного червя, который действует на паразита в личиночной стадии, прежде чем он сможет стать взрослой особью.

Поговорите с ветеринаром о необходимых шагах для защиты вашего питомца.

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Республики Карелия «Детская Республиканская больница»

Эпидемиология

Дирофилярии развиваются с двойной сменой хозяев. Половозрелые оплодотворенные самки отрождают в кровь дефинитивного хозяина микрофилярии, которые, не изменяясь морфологически, циркулируют в кровеносной системе до 2,5 лет или до того момента, когда попадут к кровососущему насекомому. Личинки  концентрируются в головном отделе и нижней губе насекомого, при последующем кровососании они активно внедряются в кожу млекопитающего и продолжают развиваться до половозрелой стадии. Человек является случайным, тупиковым хозяином червей Dirofilaria, поскольку самки не достигают в его организме половой зрелости. Как полагают, большинство личинок при попадании в организм человека гибнет. В подобных условиях человек не является источником инвазии, так как микрофилярии не отрождаются в кровь, но полностью исключить возможность микрофиляриемии нельзя: в медицинской литературе описан единственный пока случай обнаружения микрофилярии в теле человека[6].

Обычно человек заражается при проведении сельскохозяйственных работ, во время отдыха на природе  дача, рыбалка, охота, туризм и в других местах, где есть значительные популяции комаров и заражённые животные. Частота нападения комаров на человека зависит от степени их активности и численности, а также связи комаров с жилищем человека. Если населённые пункты находятся в пределах дальности полета комаров от мест их выплода, то вероятность нападения природной популяции комаров на человека и домашних собак резко возрастает, что увеличивает возможность передачи инвазии человеку и вовлечение его в эпидемический процесс[5].

Комар является основным, но не единственным распространителем заболевания: описаны единичные случаи инвазии после укусов клещей, слепней, вшей и блох.

Дирофиляриоз характеризуется очаговым распространением. Очаги инвазии с местной передачей в зоне умеренного климата выявлены вплоть до 55-57°с.ш., хотя ещё пару десятилетий назад северной границей заболевания считалась широта 53-54°с.ш.

В России встречается подкожный дирофиляриоз, главным образом у жителей эндемичных территорий юга страны.

 Симптомы Дирофиляриоза:

Вероятность инвазии не зависит от возраста человека, а зависит по большей части от возможности контакта с заражёнными комарами, в пике активности которых и происходит наибольшее число заражений.
Период клинической инкубации зависит от реактивности организма и скорости роста паразита и составляет от одного месяца до нескольких лет. В подавляющем большинстве случаев обнаруживается единственная особь неполовозрелая самка, поэтому микрофилярии у людей не описаны, но не исключены полностью.
Примерно спустя 6 месяцев после заражения паразит достигает максимальных размеров и располагается внутри воспалённого узла. Как правило, гельминт располагается в соединительно-тканной капсуле. В абсолютном большинстве случаев паразиты находятся под кожей или слизистыми, хотя встречаются сообщения о поражении лёгких и плевры. Червь может погибнуть и постепенно разрушаться.
Обычно спустя несколько дней после укуса заражённым комаром на месте укуса возникает небольшое уплотнение размером с просяное зерно, иногда сопровождающееся зудом. Вскоре зуд и уплотнение могут исчезнуть, однако в дальнейшем уплотнение появляется снова и увеличивается, достигая диаметра 0,5-4,0 см. Кожа над уплотнением обычно незначительно гиперемирована, иногда отмечается умеренная отечность. Развивающийся вторичный воспалительный процесс приводит к появлению зуда от умеренного до очень сильного, болям и при покое и при пальпации.
Характерным симптомом дирофиляриоза является миграция возбудителя перемещение уплотнения или самого гельминта под кожей, которое отмечается у 10-40 % инвазированных. Расстояние, на которое перемещается дирофилярия, составляет несколько десятков сантиметров, скорость перемещения до 30 см за 1-2 суток. Описано перемещение паразита с кожи правого подреберья через левую надключичную область и левую часть нижней челюсти до конъюнктивы левого глазного яблока. При миграции паразита в подкожной клетчатке после каждого его перемещения на новом месте появляется новое уплотнение, а на старом месте его пребывания никаких следов не остаётся. Усиление миграции происходит при воздействии на кожу токами УВЧ при физиотерапии, а также после прогревания компрессами или согревающими мазями.
Специфическим признаком дирофиляриоза являются ощущения шевеления и ползания живого «червя» внутри уплотнения, опухоли или подкожного узла. У многих больных инвазия имеет рецидивирующее течение с фазами затихания и обострения процесса. При несвоевременном удалении гельминта может происходить развитие абсцесса в месте его локализации.
В ряде случаев больные извлекают гельминта при расчёсах кожи, или в результате спонтанного вскрытия гнойника гельминт выходит наружу самостоятельно.
Интересен тот факт, что преобладает правосторонняя локализация гельминта.
Другими симптомами заболевания могут быть головная боль, тошнота, слабость, повышенная температура, сильные боли в месте локализации гельминтов с иррадиацией по ходу нервных стволов. Эозинофилияпериферической крови в отличие от многих других гельминтозовне характерна для дирофиляриоза.
После извлечения гельминта у человека обычно клинические признаки исчезают.
Поражения органов зрения.
Около 50 % всех зарегистрированных случаев приходится на дирофиляриоз с локализацией возбудителя под кожей век, в слизистой оболочке и под конъюнктивой, реже в глазном яблоке. Выявляются взрослые особи самки, реже самцы. При глазном дирофиляриозе поражаются веки, конъюнктива, передняя камера, склера, глазница. При поражении кожи бровей и век развивается отёк по типу Квинке, связанный с паразитированием самки/самца дирофилярии в подкожной клетчатке. Веки резко отечны, пастозны, малоподвижны, закрывают глаз, иногда отмечается зуд разной интенсивности и слезотечение от умеренного до очень сильного, боль в покое и при пальпации. У некоторых пациентов возникает ощущение инородного тела в глазу, шевеления в области уплотнения и выпячивания глаза. Под кожей образуются плотные узелки, гранулема или опухоль.
При поражении конъюнктивы и конъюнктивального мешка развивается конъюнктивит, который в результате движения гельминта сопровождается сильными жгучими болями, слезотечением и зудом. Конъюнктива отечна, гиперемирована в течение нескольких суток, через неё видно извитое тело гельминта. Все явления бесследно исчезают после того, как он мигрирует в глазницу или удаляется хирургически.

Лечение Дирофиляриоза:

Поскольку обычно в теле человека паразитирует только один червь, в большинстве случаев неполовозрелый, который не отрождает микрофилярии, то применение микрофилярицидных препаратов не показано.
Оптимальный метод лечения полное хирургическое удаление гельминта.
Никаких специальных диет, либо ограничений подвижности не требуется.
Лекарственные средства: антигельминтные препараты.

Новый подход к борьбе со слоновой болезнью | Научные открытия и технические новинки из Германии | DW

Об этом заболевании европейцы и североамериканцы знают лишь понаслышке, однако в Африке, в тропических регионах Азии и Южной Америки, а также в Океании ею страдают — по разным оценкам — от 120 до 150 миллионов человек. Речь идет об элефантиазе, слоновости, слоновой болезни, именуемой также лимфатическим филяриатозом. Это инфекционное заболевание вызывается паразитирующими нитчатыми червями-филяриями, которые проникают в лимфатические узлы, что приводит к хроническому воспалению и закупорке лимфатических сосудов. Следствием этого процесса становится отечность и припухлость окружающих тканей. В результате пораженные органы — как правило, конечности, мошонка или молочные железы — могут распухать до чудовищных размеров и страшно деформироваться, уродуя больного и нередко превращая его в изгоя.

Обычно возбудителями болезни являются филярии Wuchereria bancrofti и Brugia malayi. Жизненный цикл паразита протекает со сменой хозяев: окончательным является позвоночное животное (прежде всего, человек), а промежуточным — какое-либо кровососущее насекомое отряда двукрылых (комары, москиты и т.д.). Эти же насекомые выполняют и функцию переносчика инфекции. Попав в организм человека, микрофилярии, то есть личинки паразита, мигрируют, а достигнув окончательного места обитания, превращаются во взрослых филярий, после чего могут жить в лимфатических узлах и сосудах долгие годы, достигая порой 10 сантиметров в длину.

До сих пор лечение слоновости осуществлялось почти исключительно с помощью препарата диэтилкарбамазина. Он довольно эффективен против микрофилярий, однако его действие на взрослых паразитов выражено слабо. Кроме того, диэтилкарбамазин нередко вызывает побочные реакции — озноб, головную боль, тошноту и рвоту.

Дань глобализации

Но на прошедшей в Дюссельдорфе ежегодной сессии Немецкого общества паразитологии был представлен совершенно новый подход к терапии этого заболевания. Отрадно, что, хотя проблема борьбы со слоновой болезнью в Германии стоит, скажем так, не очень остро, немецкие ученые ею, тем не менее, озаботились, причем, похоже, не только из альтруизма и стремления внести посильный вклад в борьбу с эпидемиями в так называемом «третьем мире», но и осознавая угрозы, связанные с глобализацией. И добились успеха.

Новый подход состоит в том, чтобы подавлять не филярию как таковую, а бактерию рода Wolbachia, обитающую внутри этого червя. Профессор Ахим Хёрауф (Achim Hörauf), директор Института медицинской микробиологии, иммунологии и паразитологии при Боннской университетской клинике, поясняет: «Без этой бактерии червь не может расти, не может размножаться, да и живет не так долго. Если обычно продолжительность жизни этого паразита в организме хозяина составляет от 5 до 10 лет, то в отсутствии этой эндосимбиотической бактерии, то есть после приема пациентом антибиотика, червь погибает уже через год».

Ранняя гибель паразита препятствует распространению болезни. Кроме того, по словам ученого, борьба с бактерией проще и безопаснее для больного, нежели борьба с червем: «Преимущество такой терапии в том, что она вызывает гораздо меньше побочных реакций. Ведь в эволюционном отношении червь — более близкий родственник человека, чем бактерия. Поэтому когда мы медикаментами блокируем определенные ферменты в организме филярии, то нередко при этом оказывается затронут и какой-то фермент, участвующий в обмене веществ человека, что, естественно, вызывает побочные реакции. При подавлении бактерий посредством антибиотика этот эффект возникает гораздо реже и выражен значительно слабее».

Цель — неделя

В ходе экспериментов профессору Хёрауфу уже удалось найти антибиотик, эффективно подавляющий вольбахию, а значит, и филярии: это доксициклин. Он вызывает бесплодие у самки червя и тем самым препятствует размножению паразита. Однако этим боннские исследователи не ограничились: их партнеры-фармацевты в рамках проекта, финансируемого фондом Билла и Мелинды Гейтсов, проверяют все 3500 антибиотиков, имеющихся сегодня в арсенале медиков, на эффективность в борьбе с вольбахией. Выявленные при этом наиболее перспективные препараты поступают для дальнейших исследований в боннскую лабораторию. Сначала они испытываются на животных, говорит профессор Хёрауф, а»самые успешные кандидаты» могут потом испытываться на людях — естественно, после соблюдения всех формальностей. Но в данном случае, по словам ученого, эта процедура много времени не занимает: ведь все это медикаменты, уже прошедшие регистрацию и допущенные к применению в клинической практике, никаких новых тестов на токсичность тут не требуется.

Первые клинические испытания новой терапии, в ходе которых пациенты принимали только доксициклин, потребовали 6-недельного курса. Сегодня, сочетая доксициклин с другими препаратами, боннским ученым уже удалось сократить продолжительность курса до 2-3 недель. Но этого недостаточно, — считает профессор Хёрауф: «Для тех регионов в бедных странах, где система здравоохранения бывает доступна, может, раз в году в форме выездных бригад, идеальной была бы терапия, занимающая никак не более недели».

Автор: Владимир Фрадкин
Редактор: Ефим Шуман

Дирофиляриоз (сердечные черви)

Дирофиляриоз (сердечные черви)

Подробности
Просмотров: 14239

Дирофиляриоз, сердечные черви
(Heartworm)

Дирофиляриоз — опасное инвазионное заболевание, которое характеризуется сердечными, печеночными и легочными осложнениями. Заболевание широко распространено, встречается во многих странах мира, особенно в странах с тропическим и субтропическим климатом. Болеют собаки, кошки, дикие плотоядные животные и человек.

Выделяют две основные формы данного заболевания — легочной (сердечный) дирофиляриоз, вызываемый dirofilaria immitis и подкожный дирофиляриоз, вызываемый Dirofilaria repens.

 

Возбудитель.

Возбудители дирофиляриоза относятся к классу круглых червей Nematoda, отряду Spirurida, подотряду Filariata, семейству Filariidae, роду Dirofilaria. В литературе описано 6 видов нематод, но наибольшее распространение в мире и патогенное значение имеют D. immitis и D. repens.

Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens — длинные нематоды серо-белого цвета, покрытые тонко исчерченной кутикулой. Гельминты раздельнополые.

Dirofilaria immitis паразитирует в правом желудочке сердца, в правом предсердии и, иногда, в полой вене и легочных артериях.
Длина тела самцов D. immitis составляет 120-130 мм при максимальной ширине 1,124-1,286 мм.
Самка D. immitis крупнее самца — ее длина колеблется от 250 до 300 мм, а ширина — от 0,750 до 1,154 мм.
Личинка микрофилярии не имеет чехлика. Длина ее равна 0,262-0,349 мм, а ширина — 0,048-0,007 мм.

Dirofilaria repens паразитирует в подкожной клетчатке. Визуально может напоминать аллергический отек, фиброму (доброкачественное новообразование кожных или подкожных фибробластов), кисту или атерому (доброкачественное мягкое образование под кожей).
Самка D. Repens имеет суженное к концам тело. Кутикула белая с четкой продольной и нежной поперечной исчерченностью. Длина тела 140-150 мм, а ширина 0,47-0,55 мм.
Самец D. Repens меньше самки. Его длина составляет 58 мм, а максимальная ширина 0,41 мм.
Микрофилярии без чехлика, передний конец тупой, задний заостренный. Длина микрофилярий 0,30-0,36 мм, а ширина 0,006-0,008 мм.

Цикл развития.

Возбудители дирофиляриоза — биогельминты. Промежуточными хозяевами являются комары рода Anopheles, Aedes, Cules. По данным некоторых источников микрофилярии могут развиваться в организме блох.

Оплодотворенные самки сердечного паразита откладывают в кровь хозяина микрофилярии стадии L1. Личинки данной стадии циркулируют в кровеносной системе до того момента, пока при укусе комара вместе с кровью попадут к нему в кишечник. В кишечнике насекомого (комара) они линяют и достигают второй стадии развития L2. Из кишечника комара личинки мигрируют в мальпигиевые сосуды, в которых развиваются до третьей стадии L3. После этого личинки проникают в ротовой аппарат комара, разрывают губы и пальпы. Таким образом во время кровососания попадают в организм дефинитивного (основного) хозяина.

В дерме личинки развиваются до следующей стадии L4 в течении трех дней после инвазии. Затем они развиваются в тканях и через кровеносную систему животного мигрируют в сердце и легочную артерию. Через 60-90 дней после первоначальной инвазии личинки начинают проникать в мелкие ветви легочной артерии, линяют и переходят в конечную стадию, превращаясь в неполовозрелых взрослых особей — L5. На данном этапе неполовозрелые сердечные паразиты начинают интенсивно расти, проникая в крупные кровеносные сосуды, а некоторые мигрируют в легочную артерию.

Примерно через 6-8 месяцев после инвазии взрослые и теперь уже половозрелые самки (стадии L6) начинают откладывать микрофилярий — личинок первой стадии L1.
Микрофилярии циркулируют в сердечно-сосудистой системе зараженного животного, откуда могут проникнуть в организм комара в процессе его питания. Таким образом комар становится переносчиком инфекции.

Эпизоотология.

Заболевание очень распространено, особенно в странах с тропическим и субтропическим климатом. Основной источник распространения инвазии — больные плотоядные животные. Массовое их заражение наблюдается в период лёта комаров (весна и первая половина лета). Дирофиляриоз так же получает всё бОльшее распространение в Украине.

Достигая стадии развития L6 (в организме дефинитивного хозяина), самки откладывают микрофилярий, максимальное количество которых достигает в периферических кровеносных сосудах, как правило, утром и вечером. Это объясняется тем, что в этот период самки комаров проявляют наибольшую активность.

Как правило, болеют собаки старше двух лет, реже до одного года.
Dirofilaria repens нередко паразитирует в подкожной клетчатке плотоядных и человека.

Клинические признаки.

При дирофиляриозе, вызванном Dirofilaria immitis характерно:

  1. снижение массы тела;
  2. быстрая утомляемость;
  3. бледность слизистых оболочек;
  4. тахикардия;
  5. одышка;
  6. цианоз слизистых оболочек;
  7. кашель;
  8. гепатомегалия;
  9. асцит.

К сожалению, развитие данных клинических признаков говорит нам о далеко зашедшей стадии заболевания.
Dirofilaria immitis паразитирует в правом желудочке сердца и легочной артерии. С увеличением нагрузки со стороны сердечных червей, развивается гипертрофия правого желудочка. Со временем она приводит к правосторонней сердечной недостаточности и, в конечном итоге, к гибели животного. Кроме того, сердечные паразиты являются причиной значительного риска развития тромбоэмболии. После того как паразит погибает он может заблокировать мелкие ветви легочной артерии, что приводит к инфаркту окружающих тканей.

Дирофиляриоз, вызванный Dirofilaria repens, чаще всего протекает бессимптомно. При локализации паразитов в подкожной клетчатке характерно наличие длительно незаживающих язв, гнойных ран, появление зуда. При вскрытии подкожных гнойников обнаруживаются живые половозрелые гельминты.

Диагностика.

Диагноз ставят на основании клинических признаков и эпизоотологических данных.
Решающим в постановке диагноза является выявление микрофилярий в крови животного. Для этого утром или вечером берут периферическую кровь и исследуют под микроскопом.
Так же существуют специальные иммунодиагностические тест-системы.

Диагностику животных на предмет заболевания дирофиляриоз можно провести в ветеринарной клинике Котофей, сдать анализы на дирофиляриоз можно в нашей лаборатории.

Дополнительная диагностика.

Дополнительные исследования необходимы для получения полной картины состояния животного.
Для этого необходимо выполнить:

  1. клинический анализ крови;
  2. биохимический анализ крови;
  3. рентген грудной клетки;
  4. сделать исследование ЭхоКГ.

 

Лечение.

Лечение дирофиляриоза — это непростая задача для ветеринарных врачей. Подход и методика лечения к каждому животному разрабатывается сугубо индивидуально.

Лечение должно включать в себя:

Этиотропная терапия:

  • макрофилярицидная терапия — направленная на уничтожение взрослых особей в организме животного;
  • микрофилярицидная терапия — направленная на уничтожение личинок в организме животного.

Патогенетическая терапия:

  • тромболитическая терапия — вид фармакологической терапии направленный на восстановление кровотока за счет лизиса (разрушения) тромба внутри сосудистого русла;
  • антикоагулянтная терапия — ограничение начавшегося тромбоза, профилактика нового тромбоза и тромбоэмболических осложнений.

Так же не стоит забывать о:

  • коррекции нарушений работы сердца;
  • профилактике и лечении осложнений.

В наиболее тяжелых случаях проводят хирургическое удаление гельминтов (например, через яремную вену).

Профилактика.

Для защиты животных от кровососущих насекомых следует использовать инсектицидные препараты. К таким препаратам относятся, например, Hartz, Advantix.
К репеллентным (отпугивающим) препаратам от комаров относят ошейники Kiltix и Scalibor.
Для профилактики дирофиляриоза также можно использовать капли на холку Advocat, Stronghold и таблетки Мильбемакс.
Эти и другие противопаразитарные препараты всегда в наличии имеются в ветаптеке ветеринарной клиники Котофей.

Обучающее видео

Далее предлагаем Вашему вниманию видеоролики о дирофиляриозе. Данные ролики подготовлены нашими коллегами из других клиник, компаний-производиителей ветеринарных препаратов, научно-исследовательских организаций, и были найдены нами в интернете.Приятного просмотра 🙂

 

 

Желаем здоровья Вам и Вашим животным!

Над статьёй работали врачи ветеринарной клиники Котофей, при этом были использованы общедоступные материалы.
Все права на статью защищены.
Перепечатка разрешается только со ссылкой на этот сайт и эту статью.

Диагностика онхоцеркоза — сдать анализ в СЗЦДМ

Онхоцеркоз ― это гельминтная инвазия, которую еще именуют «речной слепотой». ‎Нематоды поражают лимфоузлы, кожу и глаза. Это приводит к образованию зудящей сыпи, фиброзных узлов, язв, к развитию лимфедемы. Наиболее серьезные повреждения происходят в инфицированном глазе. Что приводит к хроническому конъюнктивиту, воспалению роговицы, глаукоме, катаракте, воспалению сосудов глаза. Очень высок риск развития слепоты.

Определение заболевания

Онхоцеркоз вызывают паразитирующие в организме человека гельминты. Болезнь передается при укусах инфицированных мошек. Они обитают у рек с быстрым течением вблизи плодородных земель. Поэтому чаще всего страдают люди занимающиеся сельским хозяйством. В странах с неблагоприятной эпидемиологической обстановкой насчитывают более 20 млн человек, страдающих этим заболеванием. Около 2% из них понесли значительную потерю зрение или ослепли.

ВОЗ относит онхоцеркоз в группу забытых болезней. Однако, она по-прежнему встречается в мире. В первую очередь в странах Африки, Латинской Америки, Йемене. Иногда отмечаются единичные случаи в других странах.


В 2013 году Колумбия получила от ВОЗ удостоверение в ликвидации онхоцеркоза. В 2014 году такой страной стал Эквадор, 2015 году Мексика, а в 2016 году Гватемала. Для ликвидации заболевания проводят лечение групп и сообществ препаратом ивермектином. Медикаментозное лечение проводят не только у людей, но и у животных. Как правило, крупномасштабные кампании проводятся дважды в год, а дополнительные по мере обнаружения больных на местах. Для полного избавления от паразита на территории страны порой требуется не один десяток лет.

Причины

Онхоцеркоз вызывают паразитические гельминты, нематоды Onchocerca volvulus. Инфекцию разносят инфицированные мошки рода Similium. Жизненный цикл онхоцерки состоит из нескольких стадий:

  • При укусе мошка заражает человека.

  • Червь проникает в подкожную клетчатку и вырастает до половозрелой формы.

  • Самки отрождают микрофиллярии. Они локализуются под кожей, в лимфатических узлах. Иногда выявляются в крови и моче, могут попасть в глаза. Если на этой стадии здоровое насекомое кусает человека, то оно инфицируется и передает следующему попавшие в нее микрофиллярии.

Онхоцерки ― это нитевидные круглые черви, длиной в половозрелом возрасте от 19 до 50 мм. Размер личинок колеблется от 0,05 до 0,35 мм. Самки больше самцов. Продолжительность жизни личинки до 2,5 лет, взрослые особи могут жить до 15 лет. За год жизни самки производят до 1 млн микрофиллярий.

Паразитируя в коже, гильмиты вызывают дерматиты, депигментацию, онхоцеркомы, язвы. При инвазировании лимфатических узлов развивается лимфостаз и лимфаденопатия. Проникновении личинок в глаза приводит к поражению сосудов, сетчатки, глазного нерва.

Симптомы

Формирование болезни длительное, первые признаки проявляются в среднем спустя 12 месяцев после заражения. Включают следующие симптомы:

  • Лихорадка с повышением температуры тела до +40 С.

  • Общее недомогание, слабость.

  • Филяриозная чесотка, сопровождаемая сухостью, шелушением, зудом, гиперпигментацией кожи.

  • Папулезная сыпь, которая формируется в пустулы и язвы, не заживающие длительное время.

  • Эозинофилия крови ― повышение числа эозинофилов, клеток крови, защищающих организм от паразитов. 

Значительные и многократные инвазии приводят к серьезным поражениям кожи и подкожной клетчатки. Теряется эластичность, изменяется структура, кожа словно покрывается апельсиновой коркой. Это состояние иногда называют «слоновой» или «крокодиловой кожей». Развивается депигментации кожи, эти участки условно называют «кожей леопарда». 

Наиболее часто изменения происходят в ногах, подмышечных и паховой зонах. В результате патологических изменений атрофируется эпидермис, потовые железы, волосяные луковицы. У некоторых больных образуются огромные свисающие складки кожи, возникают паховые и бедренные грыжи.

При поражении лимфоузлов они могут увеличится до таких размеров, что приведет лимфостаза мошонки и нижних конечностей (слоновости).

Еще одна ярко выраженная клиническая картина ― образование онхоцерком. Это подкожные узлы, доходящие в диаметре до 10 см. Они плотны, болезненны при пальпации. Чаще возникают на голове, верхней части спины, в области таза. Если онхоцеркома разовьется возле сустава, это приведет к артриту. 

Миграция онхоцерки в глазную среду

Наиболее опасен онхоцеркоз при миграции личинок в среду глаза. Попавшие на роговицу микрофилярии вызывают конъюнктивит. Среди симптомов: 

  • светобоязнь, 

  • слезотечение, 

  • отечность. 

Из-за гибели паразитов образуются очаги кератита (воспаление роговицы). Это выражается следующей симптоматикой: «мушки в глазах», покраснение, воспаления, уменьшение прозрачности и блеска роговицы.

Дальнейшее поражение приводит к точечным кератитам, иридоциклиту, кистам роговицы, повреждению зрительного нерва. Часто можно наблюдать депигментация радужной оболочки. С течением времени развивается хориоретинит, катаракта, глаукома и слепота.

Диагностика

Клинические проявления онхоцеркоза

Заподозрить наличие заболевание можно по специфическому дерматиту, воспалению лимфоузлов, глазным поражениям и онхоцеркам. Важно установить место заражения, узнать посещал ли больной за последний год страны с неблагоприятной эпидем. обстановкой.

Лабораторная и инструментальная диагностика онхоцеркоза

Подтвердить диагноз можно несколькими способами:

  • Микроисследование срезов кожи;

  • ПЦР образцов кожи;

  • определение уровня антител методом ИФА, РСК.

Анализ на антитела должен применяться в сочетании с другими методами диагностики, поскольку сам по себе он имеет ограниченную информативность. В первую очередь не может дифференцировать одних гельминтов от других. Во вторых, не позволяет отличить инфекцию, существовавшую ранее, от действующей в настоящее время.

Для обнаружения подкожных узелков используют аппарат УЗИ. Важно изучить состояние глазных тканей. Для этого проводится биомикроскопия. Обнаружить паразита можно при осмотре щелевой лампой. Если в результате обследования были выявлены микрофилярии, следить за состоянием пациента и эффективностью лечение также должен врач-офтальмолог. 

Лабораторная и инструментальная диагностика позволяют дифференцировать онхоцеркоз от аналогичных заболеваний со схожей симптоматикой. Следует исключить грибковые поражения кожи, инфицирование глазным нематодом Loa loa, сифилис и иные болезни.

Лечение

Терапия онхоцеркоза проводится врачом-паразитологом, под наблюдением офтальмолога, дерматолога, иммунолога. Схема лечения назначается индивидуально, проводится в рамках стационара. Это обусловлено тем, что массовая гибель паразитов может привести к тяжелым аллергическим и интоксикационным реакциям организма.

Для подавления аллергии назначают антигистамины, кортикостероиды, проводят очистку крови методом плазмафереза. Онхоцеркозные узлы удаляют хирургическим путем. Физическое удаление паразитов также значительно снижает уровень микрофиляриемии.

Профилактика заболевания 

Защититься индивидуально в местах обитания мошки можно путем ношения защитных костюмов и использования репеллентов.

На уровне местной или государственной власти должны быть организованы программы по уничтожению насекомых-разносчиков. Для этого на территории распыляют с вертолетов и самолетов инсектициды, уничтожающие личинок мошки Similium. В эндемичных регионах необходимо проведение профилактики заболевания ивермектином. Подобные программы при поддержке ВОЗ развернуты во многих странах Африки.

перейти к анализам

Микрофилярии — обзор | ScienceDirect Topics

Лечение активной филяриальной инфекции

Доказательством активной филяриальной инфекции является обнаружение mf в крови, положительный тест на циркулирующий филяриальный антиген или выявление взрослых червей в лимфатической системе при ультразвуковом исследовании. Препаратом выбора является диэтилкарбамазин (ДЭК), принимаемый перорально, который очень эффективен в уничтожении мф и, в некоторой степени, взрослых глистов. Доза ДЭК, рекомендованная ВОЗ для лечения филяриатоза, составляет 6 мг / кг ежедневно в течение 12 дней (Noroes et al ., 1997). Недавние испытания лекарств показали, что однократная доза 6 мг / кг так же эффективна, как и 12-дневный курс, как против микрофилярий, так и против взрослых глистов (Freedman et al ., 2002). Ультрасонография показала, что эта разовая доза DEC убивает около 50% взрослых глистов. Если они нечувствительны к этой разовой дозе, повторные введения препарата не убивают паразита. Лечение DEC, по-видимому, не отменяет лимфатическое повреждение у взрослых после того, как оно установлено (Addiss and Dreyer, 2000).

Эффективная доза препарата составляет 6 мг / кг в разовой дозе, которую можно повторять один раз в 6 или 12 месяцев, если признаки активной инфекции сохраняются (Ismail et al ., 2001). Побочные эффекты, отмеченные при применении DEC, в основном наблюдаются у субъектов с микрофиляремией из-за их быстрого разрушения. Эти симптомы характеризуются лихорадкой, головной болью, миалгией, болью в горле или кашлем, который длится от 24 до 48 часов, эти симптомы обычно легкие, проходят самостоятельно и требуют только симптоматического лечения.Побочные эффекты, напрямую связанные с приемом препарата, возникают очень редко.

Показано, что хорошо известный глистогонный препарат альбендазол уничтожает взрослых филяриатных червей при приеме в дозах 400 мг перорально два раза в день в течение 2 недель (Suma et al ., 2002). Эта доза приводит к серьезному воспалению мошонки, предположительно из-за гибели взрослого глиста. Оптимальная доза этого препарата для лечения активной филяриозной инфекции еще не определена. Ивермектин, хотя и является хорошим микрофилярицидным препаратом, не имеет доказанного действия на взрослых паразитов.

Лекарства, действующие на эндосимбионтов Wolbachia , могут играть роль в лечении активной филяриальной инфекции, когда паразит не чувствителен к DEC. Было показано, что прием доксициклина по 100 мг перорально два раза в день в течение 6 недель уничтожает взрослых червей, воздействуя на Wolbachia (Taylor et al ., 2005).

CDC — DPDx — лимфатический филяриат

Возбудители

Возбудители лимфатического филяриоза (ЛФ) включают филяриозных нематод, переносимых комарами Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, B.timori По оценкам, 90% случаев LF вызваны W. bancrofti (Bancroftian filariasis) .

Brugia Malayi Жизненный цикл

Во время кровопускания инфицированный комар (обычно Mansonia spp. И Aedes spp.) Вводит филяриальных личинок третьей стадии на кожу человека-хозяина, где они проникают в рану от укуса. Они развиваются во взрослых, которые обычно находятся в лимфатических сосудах.Взрослые черви внешне напоминают черви Wuchereria bancrofti , но имеют меньшие размеры. Самки червей имеют длину от 43 до 55 мм, ширину от 130 до 170 мкм, а самцы — от 13 до 23 мм в длину и от 70 до 80 мкм в ширину. Взрослые особи производят микрофилярии размером от 177 до 230 мкм в длину и от 5 до 7 мкм в ширину, которые покрыты оболочкой и имеют ночную периодичность (в некоторых регионах B. malayi может быть субпериодическим, и обратите внимание, что микрофилярии обычно не образуются в B. pahangi инфекций).Микрофилярии мигрируют в лимфу и попадают в кровоток, достигая периферической крови. Комар заглатывает микрофилярии во время еды кровью. После проглатывания микрофилярии теряют оболочку и проходят через стенку преджелудка и сердечную часть средней кишки, чтобы достичь грудных мышц. Там микрофилярии развиваются в личинок первой стадии, а затем в личинок третьей стадии. Личинки третьей стадии мигрируют через гемоцель к хоботку комара и могут заразить другого человека, когда комар питается кровью.

Wuchereria bancrofti Жизненный цикл

Во время кровопролития инфицированный комар вводит филяриальных личинок третьей стадии на кожу человека-хозяина, где они проникают в рану от укуса. Они развиваются у взрослых, которые обычно находятся в лимфатических сосудах. Самки червей имеют длину от 80 до 100 мм и диаметр от 0,24 до 0,30 мм, а самцы имеют размеры примерно 40 на 1 мм. Взрослые особи производят микрофилярии размером от 244 до 296 мкм на 7.5-10 мкм, покрытые оболочкой и имеющие ночную периодичность, за исключением микрофилярий южной части Тихого океана, у которых нет выраженной периодичности. Микрофилярии мигрируют в лимфатические и кровеносные каналы, активно перемещаясь по лимфе и крови. Комар заглатывает микрофилярии во время еды кровью. После проглатывания микрофилярии теряют оболочку, и некоторые из них проходят через стенку преджелудка и сердечную часть средней кишки комара и достигают грудных мышц.Там микрофилярии развиваются в личинок первой стадии, а затем в инфекционных личинок третьей стадии. Инфекционные личинки третьей стадии мигрируют через гемоцель к просбоцису комара и могут заразить другого человека, когда комар питается кровью.

Хосты и векторы

Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, и B. timori считаются паразитами человека, поскольку животные-резервуары имеют незначительное эпидемиологическое значение или отсутствуют; виды кошачьих и некоторые приматы являются основными резервуарными хозяевами зоонозов B.паханги.

Типичный вектор для Brugia spp. filariasis — это виды комаров, относящиеся к родам Mansonia и Aedes . W. bancrofti передается многими разными родами / видами комаров в зависимости от географического распространения. Среди них Aedes spp., Anopheles spp., Culex spp., Mansonia spp. И Coquillettida juxtamansonia.

Географическое распространение

Вт.Bancrofti когда-то был широко распространен в тропических регионах мира, но меры контроля сократили его географический диапазон. В настоящее время он эндемичен по всей Африке к югу от Сахары (за исключением южной части континента), на Мадагаскаре, в нескольких островных государствах и территориях в западной части Тихого океана, а также в некоторых частях Карибского бассейна. Bancroftian filariasis также спорадически встречается в Южной Америке, Индии и Юго-Восточной Азии.

Brugia видов связанные с LF, более географически ограничены и встречаются только в Юго-Восточной Азии.Как и W. bancrofti , меры контроля значительно сократили встречаемость и эндемический ареал. Brugia timori ограничен Малыми Зондскими островами Индонезии.

Клинические характеристики

В то время как тяжелые проявления не развиваются при большинстве инфекций, ЛФ является потенциально очень обезображивающим и инвалидизирующим заболеванием. Наиболее заметным клиническим признаком является развитие тяжелой лимфедемы конечностей («слоновость») и иногда гениталий (гидроцеле) из-за дисфункции лимфатических сосудов.Пораженные конечности сильно опухают; кожа может стать толстой и покрытой ямками, а вторичные инфекции часты из-за лимфатической дисфункции. Гидроцеле мошонки также наблюдается у некоторых инфицированных мужчин. Лимфангит, лимфаденопатия и эозинофилия могут сопровождать инфекцию на ранних стадиях.

Хронический синдром, называемый «тропическая легочная эозинофилия», был связан с инфекциями W. bancrofti и B. malayi , включая эозинофильный легочный инфильтрат, периферическую гиперэозинофилию, свистящее дыхание, боль в груди, спленомегалию и кровянистую мокроту.Чаще всего это фиксируется в Южной и Юго-Восточной Азии.

биологических механизмов, ответственных за его производство и контроль по JSTOR

Абстрактный

Представлено объяснение, которое охватывает большинство экспериментальных данных о механизмах, с помощью которых поддерживается периодичность микрофилярий: в ночное время (с Wuchereria bancrofti и подобными филяриями) микрофилярии равномерно распределяются по крови и, таким образом, становятся доступными. для проглатывания и передачи комарами.В дневное время они накапливаются в мелких сосудах легких, поэтому их немного в периферической крови; эта фаза, вероятно, приспособлена для того, чтобы микрофилярии могли пользоваться благоприятными физиологическими условиями в легких. Накопление происходит за счет активного рефлекса самих микрофилярий; и это, вероятно, зависит от боковой миграции через прекапиллярную сеть артериол. Фактором в легких, который задерживает прохождение микрофилярий так, что они накапливаются там (а не в капиллярах других органов), является сильное повышение давления кислорода, которое можно назвать «кислородным барьером».24-часовой цикл микрофилярий ориентирован на 24-часовой цикл хозяина; и некоторые ритмические изменения в организме хозяина служат сигналом для микрофилярий. Каждая микрофилярия имеет собственный слабый эндогенный циркадный ритм, но ритмы отдельных микрофилярий преобладают над ритмами хозяина, так что все разные люди делают примерно одно и то же одновременно, и делают это правильно. время (т.е. право на передачу). Различные виды микрофилярий по-разному реагируют на одни и те же раздражители, и их ритмы зависят от различных механизмов.Можно выделить три основные группы периодических микрофилярий. (a) W. bancrofti, Brugia malayi и т. д. Они зависят от абсолютного размера венозно-артериальной (VA) разницы в напряжении кислорода («кислородный барьер»), которая ночью ниже (например, 40 мм рт. ст.), чем на днем (например, 55 мм рт. ст.), поэтому микрофилярии проходят через легкие ночью, но накапливаются там днем. Если ночью пациент вынужден дышать кислородом, уровень кислорода в артериальной крови повышается; или если его заставляют выполнять энергичные мышечные упражнения, давление венозного кислорода падает; в обоих случаях разница V A становится больше, и микрофилярии накапливаются в легких.(b) Лоа человека, Edesonfilaria malayensis обезьян в Таиланде и Monnigofilaria setariosa мангустов из Восточной Африки. В этой группе чувствительность микрофилярий к кислородному барьеру значительно повышается или понижается при 24-часовых изменениях температуры тела хозяина. Соответственно, цикл микрофилярий этой группы косвенно зависит от температурного цикла хозяина. (c) Dirofilaria immitis, D. repens собак, D. aethiops (кориноды) обезьян и т. д. Эти микрофилярии, вероятно, чувствительны только к нижнему диапазону кислородного напряжения, e.грамм. От 30 до 60 мм рт. В целом их цикл зависит от изменений кислородного барьера день-ночь, как в случае W. bancrofti, но при особых обстоятельствах (как объясняется в тексте) введение кислорода может вызвать высвобождение микрофилярий из легких вместо их накопления. Механизм, контролирующий тихоокеанский тип W. bancrofti, пока не может быть идентифицирован, поскольку экспериментальных данных недостаточно. Поведение микрофилярий адаптировано для содействия передаче путем размещения максимального количества микрофилярий в периферической крови в те моменты, когда существует вероятность укуса членистоногого переносчика.Наиболее изощренная аранжировка для достижения этого — 24-часовой ритм — классическая «периодичность». Менее сложное расположение иллюстрируется различными филяриями грызунов, например. Litomosoides carinii и Dipetalonema witei, при которых паразиты передаются клещами, которые сосут кровь в гнезде или норе, а микрофилярии стимулируются роиться в периферической крови за счет снижения температуры тела, когда животное спокойно сидит в своем гнезде. . Еще менее сложные филярии, например, филярии.грамм. Acanthocheilonema perstans и Dipetalonema gracile не имеют каких-либо приспособлений для регулирования поступления микрофилярий в периферическую кровь в соответствии с привычками питания переносчиков. Кроме того, некоторые микрофилярии, например у D. immitis и D. repens адаптированы к своим векторам как в годовом, так и в 24-часовом диапазоне, и они наиболее многочисленны в крови в течение июля и августа (когда комары наиболее многочисленны в зонах умеренного климата). У некоторых хозяев (например, собак) 24-часовой ритм менее выражен, чем у других хозяев (например,грамм. человек и обезьяна) и циклы их микрофилярий также менее выражены.

Информация об издателе

Королевское общество — это самоуправляемое товарищество многих самых выдающихся ученых мира, представляющих все области науки, техники и медицины, и старейшая научная академия, которая постоянно существует. Основная цель Общества, отраженная в его учредительных документах 1660-х годов, заключается в признании, продвижении и поддержке передового опыта в науке, а также в поощрении развития и использования науки на благо человечества.Общество сыграло роль в некоторых из самых фундаментальных, значительных и изменяющих жизнь открытий в истории науки, и ученые Королевского общества продолжают вносить выдающийся вклад в науку во многих областях исследований.

Часть 2: Сердечный червь положительный, что теперь? — Госпиталь для животных Tchefuncte

С возвращением в Мэдисонвилл! На прошлой неделе мы начали серию из трех частей о сердечном черве. Сегодня я собираюсь обсудить методы тестирования.Американское общество сердечных червей и Американская ветеринарная медицинская ассоциация рекомендуют ежегодно проверять всех собак на наличие сердечных червей. Это гарантирует раннее обнаружение зараженных собак и правильные рекомендации по профилактике. Сегодня на рынке представлены многие виды профилактических средств от сердечного червя. Некоторые из них более безопасны, чем другие, у собак с положительным сердечным червем. Наши рекомендации необходимо ежегодно пересматривать для обеспечения безопасности ваших четвероногих друзей. Есть два основных метода тестирования сердечного червя. У каждого есть свои плюсы и минусы.Стадия жизненного цикла определяет, какой метод используется для тестирования, но чаще всего они используются вместе.

Самый простой метод тестирования — взять образец крови и рассмотреть его под микроскопом. Там вы можете увидеть микрофилярии в крови. Это можно увидеть, если взрослая самка находится в сердце, производя потомство. А теперь обратите внимание, как я все время говорю «может». Это связано с тем, что микрофилярии не всегда присутствуют у собак, инфицированных сердечным червем. Причины этого могут заключаться в низком содержании гельминтов, заражении мужскими сердечными червями или иммуноопосредованном разрушении микрофилярий в организме.Их присутствие подтверждает наличие сердечных червей, но отсутствие не свидетельствует о том, что животное отрицательно на сердечных червях. Скрининг на микрофилярии часто используется в сочетании с другими методами.
Чаще всего проводится тест на антиген сердечного червя. Этот тест входит в состав вашего ежегодного медицинского осмотра в больнице для животных Tchefuncte и обычно проводится в клинике. Тест на антиген обнаруживает вещество, вырабатываемое сердечными червями. Это самый быстрый и удобный способ проверить на сердечных червей, но идеального теста нет.Возможны ложные срабатывания и ложноотрицания. Именно поэтому положительные тесты всегда подтверждаются другим методом тестирования. Обычно положительный результат теста на антиген подтверждается наличием микрофилярий в крови. Если результаты этих двух не совпадают, образец обычно отправляется в лабораторию для подтверждения.

Всегда рекомендуется подтверждать положительный результат другим методом. Эта практика гарантирует, что с собаками обращаются должным образом.Следующий шаг в процессе зависит от результатов теста. Если тест на сердечного червя у вашей собаки положительный, вы можете спросить: «Что теперь?»

После подтверждения положительного результата теста на сердечного червя важно оценить общее состояние здоровья собаки (или кошки). Мы делаем это, выполняя базовый анализ крови и делая рентген грудной клетки. Чаще всего мы видим здоровых собак без симптомов, поэтому анализ крови и рентгеновские снимки ничем не примечательны. Несмотря на то, что это большинство случаев, важно подчеркнуть, что эти тесты выполняют важную функцию в предотвращении осложнений лечения.Анализ крови помогает определить, безопасно ли использование системных лекарств в процессе лечения, а рентгенограммы помогают обнаружить любую дисфункцию сердечно-сосудистой системы (или сердца и легких).

После получения результатов ваш ветеринар порекомендует план лечения. Вы не поверите, но у каждого пациента есть план лечения, адаптированный к его потребностям и потребностям их владельца. Как ветеринары, мы обычно следуем общему протоколу и адаптируем изменения, которые могут потребоваться. Лечение сердечных червей — это длительный процесс, который включает в себя множество аспектов, включая тестирование, профилактику сердечных червей (да, вы должны использовать профилактические средства во время лечения), антибиотики, обезболивающие, стероиды, госпитализацию в определенный момент и ограничение физических упражнений.Да все верно! Для лечения сердечного червя требуется отдых из ящика и ограничение физических упражнений. Если владелец не может или не хочет упаковать свою собаку в клетку, могут возникнуть серьезные, часто опасные для жизни, осложнения. Это один из основных факторов, которые мы оцениваем при принятии решения о том, как обращаться / лечить собаку с положительным сердечным червем. В последней части этой серии мы обсудим варианты лечения и профилактические меры. Следите за новостями в блоге, чтобы узнать больше.

Границы | Dirofilaria immitis Microfilariae и личинки третьей стадии вызывают нетоз собак, приводящий к различным типам внеклеточных ловушек нейтрофилов

Введение

Сердечно-легочный дирофиляриоз или болезнь сердечных червей — это трансмиссивное зоонозное заболевание, вызываемое паразитарной нематодой Dirofilaria immitis , поражающее главным образом собак в регионах с умеренно теплым климатом, особенно на юге Соединенных Штатов, в Центральной и Южной Америке, Восточной Азии и в регионах Средиземноморья. Европа (1).Паразиты передаются в виде личинок третьей стадии (L3) инфицированными самками комаров кулицид из родов Culex, Aedes и Anopheles во время приема пищи с кровью. Взрослые нематоды D. immitis обитают в легочных артериях и в правом сердце окончательных хозяев, где зрелые живородящие самки выпускают в кровоток незащищенных личинок первой стадии (микрофилярий). Первоначальные воспалительные реакции возникают в стенках легочной сосудистой сети и имеют решающее значение для патогенеза и дальнейшего развития заболевания (2).Эта хроническая и прогрессирующая инфекция может привести к летальному исходу для окончательных хозяев, а клинические сердечно-легочные заболевания были зарегистрированы у нескольких плотоядных животных, включая домашних и диких собак [например, лисиц, волков (3)] и кошачьих. Инфекции кошек все чаще регистрируются из районов, эндемичных по дирофиляриозу собак, но, как правило, паразитарное бремя невелико, а инфекции протекают бессимптомно. В некоторых случаях кошки могут иметь тяжелое заболевание или даже внезапную смерть даже в присутствии небольшого количества взрослых червей (4–8).В настоящее время сердечно-легочный дирофиляриоз рассматривается как развивающееся заболевание в Европе, скорее всего, из-за изменения климата, способствующего расширению промежуточных хозяев, неадекватного содержания домашних животных, вмешательства человека в окружающую среду и существования диких резервуаров (9–11).

На данный момент имеется мало данных о реакциях врожденного иммунитета против D. immitis . Тот факт, что полиморфноядерные нейтрофилы (PMN) критически вовлечены в уничтожение и клиренс микрофилярий посредством антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности in vitro и от собак с оккультизмом D.immitis (12, 13), указывает на важную роль этого типа клеток врожденного иммунитета. PMN продемонстрировали повышенную активность окислительного взрыва и дегрануляции в ответ на опсонизированные микрофилярии (14) и прилипли к микрофиляриям D. immitis в отсутствие иммунной сыворотки и в присутствии ивермектина (15, 16). Кроме того, инфильтрация PMN наблюдалась в различных органах и тканях, включая почки и стенки артерий у инфицированных D. immitis псовых (17, 18). Соответственно, было продемонстрировано, что несколько паразитарных хемотаксических факторов привлекают PMN (19).Интересно, что эндосимбиотические бактерии рода Wolbachia , проживающие в пределах взрослых особей D. immitis (20), активируют PMN собак, что приводит к усилению продукции IL-8 (21). Что касается других филяриозных паразитов, было показано, что PMN способствует уничтожению микрофилярий Onchocerca volvulus (без оболочки) и L3 in vitro (22, 23) и играет важную роль в раннем контроле Litomosoides sigmodontis L3 на стадиях кожа, приводящая к усилению окислительного взрыва и дегрануляции (24).

Эффекторный механизм НЕТоза осуществляется PMN и другими иммунными клетками и приводит к высвобождению клетками гранулярных белков и хроматина после активации, образуя липкие внеклеточные волокна, способные связывать и убивать грамположительные и отрицательные бактерии, грибы, вирусы и т. простейшие / многоклеточные паразиты (25–28). До сих пор способность образовывать внеклеточные ловушки приписывалась PMN (25), тучным клеткам (29), макрофагам (30), эозинофилам (31) и моноцитам (32–34).НЕТоз в большинстве случаев опосредуется НАДФН-оксидазой (NOX) -зависимой продукцией АФК (35, 36), а эффективная экструзия нейтрофилов внеклеточной ловушки (NET) в большинстве случаев является зависимым от гибели клеток процессом. Однако о нелетальном высвобождении NET также сообщили Yousefi et al. (31, 37), которые продемонстрировали, что эозинофилы и определенные субпопуляции PMN высвобождают NET митохондриального происхождения, не погибая. Кроме того, недавние исследования подтвердили, что PMN все еще жизнеспособны и сохраняют свою способность поглощать бактерии посредством фагоцитоза даже после выполнения НЕТоза (38).

До сих пор большинство исследований НЕТоза, запускаемого паразитами, было сосредоточено на простейших паразитах (38–45). Напротив, существует мало данных об образовании NET, инициируемом многоклеточными животными (46-50). В случае филярий сообщения о НЕТозе поступают исключительно от Brugia malayi и L. sigmodontis , в которых микрофилярии / L3 недавно были продемонстрированы как мощные триггеры NET, приводящие к захвату паразитов, но не убивающие in vitro (24 , 50). Стоит отметить, что взрослый D.immitis черви выживают в среднем 5 лет в пределах окончательного хозяина, высвобождая микрофилярии в кровоток (51). Однако иммунные механизмы, которые управляют толерантностью хозяина и модуляцией врожденных иммунных ответов хозяина, управляемых циркулирующими в крови микрофиляриями, еще полностью не изучены. Кроме того, отсутствуют данные о способности стадий D. immitis в качестве индукторов NET в организме собаки-хозяина.

В этом исследовании мы показываем, что микрофилярии и L3 из D.immitis Миссури, США, в значительной степени индуцируют образование NET и запускают различные формы NET в зависимости от стадии, способствуя дополнительным и новым реакциям врожденного иммунитета PMN собак против этого паразита.

Материалы и методы

Паразиты

Для всех описанных здесь экспериментов использовался штамм D. immitis Missouri, США. Этот штамм произошел от собаки, содержавшейся в загоне для животных в штате Миссури в 2000 году. Начиная с 2005 года, штамм поддерживался и подвергался пассированию на гончих собаках в Университете Джорджии (Афины, Джорджия, США) (52).С 2012 года штамм поддерживался в лабораториях Bayer Animal Health, Монхайм, Германия. Здесь все процедуры с животными были одобрены местным комитетом по уходу и использованию животных и государственными органами (LANUV # 200 / A176 и # 200 / A154). Для этого исследования у четырех собак (Beagle, Marshall BioResources, двух самцов и двух самок) брали образцы микрофиляремической крови путем пункции головной вены. Микрофилярии очищали из образцов крови в соответствии с протоколом, предоставленным Центром ресурсов по реагентам для исследования филяриоза NIH / NIAID (FR3; Колледж ветеринарной медицины, Университет Джорджии, Афины, Джорджия, США) (http: // www.filariasiscenter.org/protocols/Protocols/purification-of-microfilariae-by-filtration). L3 получали путем скармливания микрофиляремической собачьей крови Aedes aegypti (черноглазый штамм Liverpool). Через пятнадцать дней после кормления L3 выделяли из инфицированных A. aegypti в соответствии с протоколом Evans et al. (52).

Изоляция PMN собак

Всего забор крови для выделения PMN был проведен у шести взрослых собак (Beagle, Marshall BioResources) путем пункции яремной вены.В каждую экспериментальную установку были включены по крайней мере три разных донора крови. Гепаринизированную кровь разбавляли равным количеством PBS, содержащего 0,02% EDTA, наносили слой на разделяющий раствор Biocoll ® (Biochrom AG) и центрифугировали (800 × g , 45 мин). Осадок осторожно ресуспендировали и встряхивали в 25 мл дистиллированной воды в течение 20 с для лизиса эритроцитов. Затем осмолярность регулировали, добавляя 5 мл 10-кратного солевого раствора Хенкса (HBSS, Biochrom AG). После этого PMN промывали дважды (400 × г , 10 мин), ресуспендировали в среде RPMI, подсчитывали в камере гемоцитометра Neubauer и инкубировали при 37 ° C и 5% CO 2 в течение не менее 30 минут перед экспериментальным использованием. .

Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ)

PMN собак ( n = 3,5 × 10 5 ) культивировали совместно с витальным D. immitis L3 (10 личинок / образец) или микрофиляриями (20 личинок / образец) на поли-L-лизине (Sigma-Aldrich). предварительно покрытые покровные стекла (60 мин, 37 ° C). После инкубации образцы фиксировали в 2,5% глутаровом альдегиде [60 мин, комнатная температура (RT), Merck], затем фиксировали в 1% тетроксиде осмия (Merck), промывали в дистиллированной воде, дегидратировали, критическую точку сушили CO 2. , стерилизованный золотом.После этого образцы исследовали с помощью растрового электронного микроскопа Philips XL30 в Институте анатомии и клеточной биологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене, Германия.

NET Визуализация с помощью иммунофлуоресцентного анализа

PMN собак ( n = 3; 2 × 10 5 /300 мкл) высевали на 15 мм обработанные поли-l-лизином покровные стекла, помещенные в 12-луночные планшеты в среде RPMI 1640 (без фенолового красного, с добавками с 1% пенициллина / стрептомицина, Sigma-Aldrich) и сокультивировали с D.immitis microfilariae (50 личинок на лунку; 37 ° C, 5% CO 2 , 60 мин). После инкубационного периода образцы фиксировали в 4% параформальдегиде (Merck) и хранили при 4 ° C до дальнейшего использования. Структуры собачьей NET визуализировали путем окрашивания внеклеточной ДНК с помощью Sytox Orange ® (1: 1000, 15 мин, Invitrogen) в соответствии с Martinelli et al. (53). Для обнаружения гистонов, миелопероксидазы (MPO) и эластазы нейтрофилов (NE) в структурах NET были использованы следующие антитела: антигистон (h2, h3A / h3B, h4, h5) (клон h21-4, 1: 1000; Merck Millipore), анти-MPO (orb11073, 1: 1000, Byorbit) и анти-NE (AB68672, 1: 1000, Abcam).Вкратце, образцы трижды промывали PBS, блокировали 2% бычьим сывороточным альбумином (Sigma-Aldrich; 30 мин, RT) и инкубировали в растворах антител (60 мин, RT). После этого образцы трижды промывали PBS и инкубировали в растворах вторичных антител (Alexa Fluor 488 козьих антимышиных IgG или Alexa Fluor 488 козьих против кроличьих IgG, обе Life Technologies, 60 мин, 1: 1000, RT). Наконец, образцы трижды промывали PBS и помещали в буфер против выцветания (ProLong Gold Antifade Mountant ® ; Thermo Fisher Scientific).Визуализация была достигнута с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа Olympus IX81, оснащенного цифровой камерой (Olympus).

Количественная оценка высвобождения внеклеточной ДНК

Используя 96-луночные планшеты с плоским дном (Nunc), собачий PMN ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) совместно культивировали с микрофиляриями D. immitis (100 и 300 личинок на образец) или L3 ( 10 и 20 личинок на образец) в среде RPMI 1640 (1% пенициллин / стрептомицин, без фенолового красного) в конечном объеме 200 мкл.Параллельно PMN были предварительно обработаны ингибитором NADPH дифенилениодонием (DPI, 10 мкМ 30 мин; Sigma-Aldrich) перед воздействием микрофилярий. Чтобы устранить образование NET, использовали обработку ДНКазой I (90 Ед / образец, Roche Diagnostics). Для уничтожения, вызванного нагреванием (HI), микрофилярии или L3 инкубировали в течение 60 мин при 60 ° C. После сокультивирования в каждую лунку добавляли 3 мкМ красителя нуклеиновой кислоты Sytox Orange ® (Life Technologies, конечная концентрация) и измерения проводили каждые 30 минут в течение до 8 часов.Интенсивность флуоресценции, полученной из Sytox Orange, оценивали с помощью спектрофлуориметрического анализа при длине волны возбуждения 547 нм и длине волны испускания 570 нм с использованием автоматического монохромного ридера для планшетов (Varioskan Flash ® ; Thermo Scientific). В качестве отрицательного контроля использовали PMN в простой среде. Стимуляция PMN зимозаном (1 мг / мл; Invitrogen) служила положительным контролем.

Анализ прикрепления и захвата

PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) высевали на покровные стекла, предварительно покрытые поли-l-лизином, и подвергали воздействию D.immitis microfilariae (50 личинок / образец) или L3 (10 личинок / образец) в конечном объеме 200 мкл в течение 60 и 180 минут (37 ° C, 5% CO 2 ). В параллельных условиях PMN подвергали воздействию убитых нагреванием (HI) микрофилярий или предварительно обрабатывали 10 мкМ DPI (Sigma-Aldrich) в течение 30 минут перед воздействием микрофилярий. Обработка PMN 90U ДНКазой I (Fisher Scientific) в момент контакта с паразитами использовалась для растворения NET. После инкубации все образцы фиксировали (4% параформальдегида), и личинок, захваченных PMN, оценивали под микроскопом с использованием инвертированного фазово-контрастного микроскопа DMIRB ® (Leica).Личинки считались захваченными, когда к личинкам прикреплялись сети PMN и / или, полученные из PMN. Данные были выражены как процент пойманных личинок по отношению к общему количеству личинок.

Оценка различных типов сетей

Для количественной оценки различных типов NET, PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) высевали на покровные стекла, предварительно покрытые поли-l-лизином, и подвергали воздействию микрофилярий D. immitis ( 50 личинок / образец) и L3 (10 личинок / образец) в течение 60 и 180 минут (37 ° C, 5% CO 2 ).После этого образцы фиксировали (4% параформальдегид) для дальнейшего анализа. Структуры NET визуализировали путем окрашивания внеклеточной ДНК с помощью Sytox Orange ® (1: 1000, 15 мин; Invitrogen) и реагировали с антиглобальным гистоновым антителом (моноклональное антитело клона h21-4, 1: 1000; Merck Millipore) как описано ранее. После этого четыре случайно выбранных изображения из каждого экспериментального условия были проанализированы под микроскопом на основе типичных морфологических характеристик согласно Muñoz-Caro et al.(48) и Lange et al. (49): (i) «диффузные» NET ( diff NET), которые состоят из комплекса внеклеточных деконденсированных хроматиновых сеток, украшенных антимикробными белками глобулярной и компактной формы, определяемых размером 15–20 мкм в диаметре. , (ii) «распределенные» NET ( spr NET), состоящие из гладких и удлиненных сетчатых структур деконденсированного хроматина и антимикробных белков и состоящие исключительно из тонких волокон диаметром 15–17 мкм, и (iii) « агрегированные »NET ( agg NET), определяемые как кластеры NET-подобных структур с морфологией« клубок пряжи »и размером более 20 мкм в диаметре.Внутри каждой выборки подсчитывались все структуры с описанными характеристиками.

Анализ убийства личинок из NET

PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 ) высевали в 12-луночные планшеты для культивирования и подвергали воздействию микрофилярий D. immitis (50 личинок / образец) или L3 (10 личинок / образец) для 24, 36, 48 и 72 ч (37 ° C, 5% CO 2 ). Выживаемость личинок определяли микроскопически на основании наличия или отсутствия подвижности личинок и отслеживали с помощью видеозаписи .В качестве контрольных образцов использовали такое же количество необлученных личинок.

Статистический анализ

Учитывая, что данные были нормально распределены, условия совместного культивирования / стимуляции сравнивали с помощью одно- или двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с повторными измерениями. Различия считали достоверными на уровне p ≤ 0,05 и анализировали с помощью программы GraphPad Prism ® . Для анализа временной зависимости был проведен двухфакторный дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями с последующим тестом множественных сравнений Тьюки.Категорией повторных измерений было время, и значение α, чтобы считать p значимым между экспериментальными условиями, составляло 0,05. Данные были нанесены на график как среднее (стандартное отклонение).

Результаты

D. immitis Микрофилярии и L3 вызывают НЕТоз собак зависимым от времени образом

Анализ с помощью сканирующей электронной микроскопии показал, что воздействие на PMN собак микрофилярий D. immitis приводит к быстрому и сильному образованию NET, поскольку тонкие и нитчатые, но также прочные структуры, полученные из ДНК, контактируют и захватывают эти незащищенные микрофилярии (Рисунок 1).

Рисунок 1 . Dirofilaria immitis -индуцированное образование внеклеточной ловушки нейтрофилов (NET) проанализировано с помощью анализа с помощью сканирующей электронной микроскопии . Совместное культивирование полиморфноядерных нейтрофилов собак с микрофиляриями (MF) D. immitis . (A) Тонко расставленные сети, улавливающие микрофилярии. (B) Сетка из агрегированных NET ( agg NET), улавливающих микрофилярии.

Чтобы подтвердить классические компоненты NETs в структурах, запускаемых паразитами, был проведен анализ на основе флуоресценции.Таким образом, окрашивание Sytox Orange ® (рисунки 2A, D, G, J) подтвердило ДНК-природу внеклеточных NET-подобных структур, формируемых собачьим PMN при воздействии паразитов D. immitis . Кроме того, исследования совместной локализации выявили одновременное присутствие MPO, NE и гистонов (h2, h3A / h3B, h4 и h5) (рисунки 2B, E, H, K) в структурах NET, индуцированных ДНК-положительными паразитами (рисунки 2C, F, I, L). Примечательно, что быстрая индукция NETs наблюдалась через на обеих стадиях, микрофиляриях и L3, поскольку соответствующие реакции были видны уже через 10 минут после сокультивирования (изображение S1 (A и B) в дополнительном материале).

Рисунок 2 . Иммунофлюоресцентный анализ образования внеклеточной ловушки нейтрофилов (NET), вызванного микрофиляриями Dirofilaria immitis . Эксперименты по совместной локализации внеклеточной ДНК и гистонов, миелопероксидазы (MPO) и эластазы нейтрофилов (NE) в D . immitis микрофилярий индуцированные структуры NET с использованием ДНК-маркера Sytox Orange и антигистоновых h2, h3A / h3B, h4, h5, анти-MPO и анти-NE антител. (A, D, G, J) Внеклеточная ДНК, окрашенная Sytox Orange (красный). (B) Антигистон (зеленый). (E, H) Anti-NE (зеленый). (K) Anti-MPO (зеленый). (C, F, I, L) Слияние.

Количественный анализ подтвердил, что и микрофилярии, и L3 значительно индуцируют образование NET в PMN собак ( p ≤ 0,01, рисунки 3A – C). Как и ожидалось, эти реакции были значительно и почти полностью устранены обработкой ДНКазой I ( p ≤ 0,001, рис. 3A). Для выяснения роли NOX в НЕТозе, инициированном D. immitis , были проведены эксперименты по функциональному ингибированию с использованием DPI в качестве блокатора NOX.Здесь лечение DPI не привело к значительному снижению индуцированного микрофиляриями образования NET (рис. 3A), что позволяет предположить, что это был NOX-независимый процесс. Более того, образование NET, индуцированное микрофиляриями и L3, оказалось независимым от жизнеспособности паразита, поскольку убитые нагреванием микрофилярии (MF-HI) и L3 (L3-HI) индуцировали сопоставимые уровни NET по сравнению с необработанными стадиями паразита (Рисунки 3B). , В). Кроме того, образование NET, вызванное микрофиляриями и L3, оказалось дозозависимым, поскольку увеличенное количество паразитарных стадий не привело к значительному изменению уровня индукции NET (Фигуры 3B, C).Кинетический анализ НЕТоза, индуцированного микрофиляриями D. immitis и L3, показал зависимую от времени картину, поскольку было обнаружено, что образование НЭО все более усиливается (рис. 4A) в случае 100 микрофилярий ( p ≤ 0,05; 4 ч) и 300 микрофилярий ( p ≤ 0,05; 3 ч), а также 10 ( p ≤ 0,05; 3 ч) и 20 L3 ( p ≤ 0,05; 3 ч) (Рисунок 4B). Опять же, в этих анализах не было обнаружено зависимости от дозы.

Рисунок 3 . Dirofilaria immitis -индуцированная дозой и жизнеспособностью и образование внеклеточной нейтрофильной ловушки (NET), не зависящее от дифенилениодония (DPI). (A) D. immitis микрофилярии (MF; 100) совместно культивировали с полиморфноядерными нейтрофилами собак (PMN) в течение 180 мин. Для ингибирования НАДФН-оксидазы использовали предварительную обработку DPI. Чтобы устранить образование NET, в сокультуру добавляли ДНКазу I. (B) PMN собак культивировали совместно с жизнеспособными или инактивированными нагреванием микрофиляриями (MF-HI). (C) Жизненно важные и инактивированные нагреванием D. immitis L3 подвергались воздействию PMN собак. Интенсивность флуоресценции, полученной из Sytox Orange, анализировали с помощью спектрофлуориметрического анализа при длине волны возбуждения 547 нм и длине волны испускания 570 нм с использованием автоматического считывающего устройства для монохромных планшетов.В качестве отрицательного контроля использовали PMN в простой среде. PMN, стимулированные зимозаном, служили положительным контролем.

Рисунок 4 . Зависимость от времени Dirofilaria immitis -индуцированных внеклеточных ловушек нейтрофилов. Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) совместно культивировали с микрофиляриями (A) или L3 (B) в течение 8 часов. Положительные сигналы Sytox Orange анализировали каждый час спектрофлуориметрическим анализом с использованием автоматического считывающего устройства для монохромных планшетов. (A) a: значимое различие между PMN и 100 микрофиляриями; b: значительная разница между PMN и 300 микрофиляриями. (B) a: значительная разница между PMN и 10 L3; б: достоверная разница PMN и 20 L3. Сокращение: нс, не имеет значения.

Во всех экспериментах стимуляция зимозаном оказалась надежным положительным контролем (обработка зимозаном по сравнению с PMN в простой среде: p ≤ 0,0001). Только микрофилярии и стадии L3, а также только PMN показали почти полное отсутствие или низкие реакции в этих экспериментальных условиях, соответственно.

D. immitis Микрофилярии и L3 индуцируют различные типы сетей

В целом, NET могут отображаться в различных морфологических формах, то есть как диффузные NET ( diff, NET), агрегированные NET ( agg, NET) и спредовые NET ( spr, NET). Таким образом, мы здесь проанализировали микроскопически, если микрофилярии и стадии L3 D. immitis индуцировали различные типы NET (в качестве иллюстративных иллюстраций см. Изображения S2 и S3 в дополнительных материалах).В принципе, все типы NET наблюдались в сокультурах PMN / микрофилярий (рис. 5). Количественная оценка различных типов NET выявила, что diff, NET и spr NET были индуцированы обеими паразитическими стадиями, в то время как agg NET были в основном вызваны более крупными личиночными стадиями (L3) (Рисунок 5). Эта стадия-зависимая разница была очень значимой ( агг., NET / микрофилярий против агг., NET / L3: p ≤ 0,01). Более того, микрофилярные стадии чаще индуцировали NET spr , чем diff NET ( p ≤ 0.01) или агг NET ( p ≤ 0,001). Для образования spr NET и diff NET эти реакции оказались зависимыми от времени и значительно увеличивались с увеличением продолжительности совместного культивирования ( p ≤ 0,05) (Рисунок 5). Напротив, в случае L3 все формы NET были индуцированы на сопоставимых уровнях, но также показали зависящий от времени паттерн для всех трех типов NET ( diff NET: p ≤ 0,05; spr NET и ag NET: p ≤ 0.01) (Рисунок 5).

Рисунок 5 . Количественная оценка различных типов внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET), индуцированных стадиями Dirofilaria immitis . Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) ( n = 3, 2 × 10 5 ) мы подвергали действию микрофилярий (MF; 50 личинок) и L3 (10 личинок) на покровных стеклах, предварительно покрытых поли-L-лизином, для 1 и 3 час После фиксации проводили иммунофлуоресцентный анализ с использованием Sytox Orange в качестве ДНК-маркера вместе с антигистоновыми антителами.Типы NET ( diff, NET, spr, NET и agg, NET) были идентифицированы микроскопически и подсчитаны.

D. immitis Этапы захвачены через сети зависящим от времени способом

Поскольку микрофилярий D. immitis, и L3 были доказаны как индукторы NET в количественных экспериментах, мы здесь проанализировали, какая часть этих личиночных стадий физически контактировала с PMN и захватывалась структурами NET. Здесь для обеих стадий наблюдалось увеличение улова паразитов во времени.Таким образом, значительное увеличение улова паразитов наблюдалось в сокультурах PMN / микрофилярий при воздействии 60 и 180 минут ( p ≤ 0,01, рис. 6A), что приводило к улову личинок на 28 и 52% соответственно. Аналогичные реакции наблюдались для стадий L3, поскольку 62 и 95% были обнаружены захваченными через 60 и 180 минут инкубации ( p ≤ 0,05, фигура 6B). При сравнении двух личиночных стадий, L3, как правило, контактировал и улавливался в большей степени, чем микрофилярии [28% (микрофилярии) vs.62% (L3) через 60 минут и 52% (микрофилярии) против 95% (L3) через 180 минут, оба p ≤ 0,05, рис. 6B]. Довольно сильный захват L3 также проиллюстрирован на Рисунке 6C1 (60 мин) и Рисунке 6C2 (180 мин). Мы также наблюдали образование сетчатых структур типа «кламмера», прилипающих, в основном, к передней части личинок (рис. 6C2, белая стрелка), и здесь мы предоставляем в качестве дополнительных данных видео с ярким полем и флюоресцентной микроскопией на стадиях L3. захвачены ДНК-положительными структурами agg NET (видео S1 в дополнительном материале).Эти наблюдения также могут быть связаны с индукцией различных типов НЭО на микрофилярных стадиях и стадиях L3. В то время как микрофилярии только индуцировали распространение и диффузию NET, L3 дополнительно запускал формирование наиболее устойчивого типа NET, то есть agNET. В частности, последний тип NET, который состоит из жестких кластеров NET-подобных структур диаметром> 20 мкм, может функционировать лучше, чем другие типы NET в случае паразитического захвата крупных стадий паразита.

Рисунок 6 . Dirofilaria immitis- индуцировал захват паразитов. Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) подвергались действию жизненно важных микрофилярий D. immitis (A) или L3 (B, C) в течение 60 и 180 минут. (D) В параллельных условиях такое же количество PMN инкубировали либо с термоинактивированными (HI) микрофиляриями (HI MF), либо предварительно обрабатывали дифенилениодонием (DPI) перед воздействием жизненно важных микрофилярий. Кроме того, ДНКаза I была добавлена ​​в момент воздействия жизненно важных микрофилярий.Личинки считались захваченными, когда внеклеточные ловушки нейтрофилов (NET) PMN и / или PMN находились в контакте с личинками. Данные выражены в процентах пойманных личинок по отношению к общему количеству личинок на состояние. Образование сетчатых структур типа «кламмера», прилипающих в основном к передней части личинок, показано белой стрелкой: изображение [ (C) , 2].

Как и ожидалось, обработка ДНКазой I значительно снизила захват микрофилярий ( p ≤ 0.001, рис. 6D) и минимизированное прикрепление PMN, доказывая, что NET способствовали этим реакциям. В отличие от образования NET, захват личинок зависел от подвижности паразита, поскольку мертвые (термически обработанные) стадии были захвачены в меньшей степени, чем жизненно важные (52 против 38%, соответственно; p ≤ 0,05, рисунок 6D). Как также сообщалось для индукции NET, лечение DPI не влияло на захват паразитов и приводило к незначительным различиям по сравнению с необработанным контролем ( p = 0,104).

Чтобы выяснить, были ли микрофилярии D. immitis или L3 убитыми NET, выживаемость паразита контролировали в течение 72 часов с помощью микроскопических наблюдений за подвижностью личинок. В целом, ни D. immitis , ни L3 не подвергались неблагоприятному воздействию NET в течение этого периода времени, поскольку не наблюдалось различий в перемещениях паразитов по сравнению с необлученными стадиями (см. L3, подвергшийся воздействию PMN через 72 часа в видео S3. в дополнительных материалах). Тем не менее, поскольку наблюдался сильный захват микрофилярий NET (см. Также видео S2 в дополнительном материале), можно предположить, что в сценарии in vivo либо инфекционность D.immitis от комаров могут быть затронуты из-за ослабленной миграционной способности этих стадий, или опосредованная иммунными клетками атака личинок внутри окончательного хозяина может быть облегчена через эту «презентацию».

Обсуждение

В отличие от подавляющего большинства паразитических нематод, стадии D. immitis паразитируют в правых отделах сердца и кровеносных сосудах и, таким образом, постоянно подвергаются неблагоприятной окружающей среде, в основном состоящей из клеток врожденной и адаптивной иммунной системы (например,g., PMN, моноциты, Т-клетки и NK-клетки), факторы комплемента, антитела и цитокины / хемокины или другие растворимые факторы. Однако исследования ранних реакций врожденного иммунитета собак против этого паразита практически не проводились. Поэтому мы проанализировали индуцированный паразитами НЕТоз как ранний эффекторный механизм PMN. Помимо микрофилярий, мы также включили D. immitis L3, поскольку эта стадия передается собаке как инфекционная. В целом, здесь мы предоставляем первые свидетельства D.immitis -запускаемое высвобождение NET как часть ранних врожденных иммунных ответов собачьих PMN, направленных против микрофилярий и стадий L3.

NET в основном образованы деконденсированным хроматином вместе с ядерными гистонами (h2, h3A / h3B, h4 и h5) и ферментативными гранулярными компонентами, такими как нейтрофильная эластаза (NE), MPO, лактоферрин, катепсин, пентраксин, LL37 и желатиназа, среди которых другие (25, 54, 55). Таким образом, типичные характеристики NET были здесь подтверждены для NET, индуцированных D. immitis , экспериментами по совместной локализации на микрофиляриях и высвобождении внеклеточной ДНК, инициированного L3, украшенной гистонами, NE и MPO.В соответствии с исследованиями на других паразитах многоклеточных животных, НЕТоз, вызываемый L3 и микрофилярией, оказался зависимым от времени (47-50, 56). В соответствии с данными по B. malayi, Haemonchus contortus, Strongyloides stercoralis и другим метастронгилоидным видам (47–50), NET растворяли посредством обработки ДНКазой I, тем самым подтверждая ДНК-природу этих структур. Более того, мы здесь наблюдали, что термоинактивированные микрофилярии и L3 запускают NET на уровне, сопоставимом с жизненно важными, что указывает на то, что жизнеспособность или целостность паразитов не является решающим фактором для индукции NET.В отличие от B. malayi microfilariae (50), D. immitis микрофилярии и L3-индуцированный НЕТоз оказались независимыми от NOX, поскольку лечение DPI не смогло значительно ингибировать образование NET.

В целом, стоит отметить, что микрофилярии филяриальной крови, по-видимому, индуцируют НЭО независимо от их статуса обволакивания. Микрофилярная оболочка обычно рассматривается как инструмент паразитарного происхождения для улучшения уклонения от иммунитета и, как было описано, содержит специфические для оболочки антигены (57, 58).Тот факт, что микрофилярии крови как в оболочке [ B. malayi (50)], так и вне оболочки ( D. immitis , данное исследование) значительно индуцируют образование NET, поднимает вопрос о поверхностных триггерных молекулах этих стадий. Однако до сих пор не было выявлено никаких паразитарных индуцирующих NET факторов от филяриозных паразитов. Принимая во внимание тот факт, что микрофилярии присутствуют в кровеносных сосудах и вызывают образование NET, также представляет интерес, что D. immitis -индуцированные NET могут также оказывать неблагоприятное воздействие на окружающий эндотелий.В этом контексте недавно сообщалось об индуцированной NET эндотелиальной дисфункции и гибели эндотелиальных клеток (59–61). На сегодняшний день остается неясным, может ли образование NET, вызванное микрофиляриями, также способствовать патогенезу, связанному с D. immitis , в отношении сосудистого повреждения, прогрессирующего артериита и коагулопатий, которые до сих пор в основном относились к взрослым стадиям хронического заболевания. собачий сердечный червь.

В отличие от предыдущих отчетов по NET о бактериях и отдельных паразитах (25, 39), но в соответствии с данными по B.malayi, S. stercoralis или H. contortus (47, 48, 50), , запускаемые D. immitis NET, не способствовали уничтожению стадий паразита. Таким образом, даже после продолжительной инкубации в течение 72 часов не наблюдалось летальных эффектов, опосредованных NET, что скорее указывает на иммобилизационный эффект на личиночных стадиях как ключевой механизм НЕТоза, индуцированного D. immitis . До сих пор большинство исследований СЕТИ, запускаемых паразитами многоклеточных животных, подчеркивают силу и эффективность захвата подвижных патогенов большого размера по сравнению с бактериями, вирусами, грибами или простейшими.Соответствующие признаки были описаны для S. stercoralis, H. contortus, Angiostrongylus vasorum, Aelurostrongylus abstrusus, Troglostrongylus brevior и B. malayi in vitro , а также in vivo (47-50), что указывает на способность PMN распознают подвижные патогены и патогены большого размера и явно используют образование NET в качестве специфического эффекторного механизма против таких патогенов, как недавно сообщалось (62).

NET-опосредованная иммобилизация стадий микрофилярии D. immitis действительно может повлиять на исход этой инфекции, поскольку наличие микрофилярий — помимо взрослых стадий — напрямую связано с патогенезом заболевания.Таким образом, инфекции сердечного червя у собак часто сопровождаются патологическими изменениями, вызванными комплексами антиген-антитело (например, гломерулонефрит), которые зависят от продолжительной циркуляции микрофилярий в кровотоке (17). Интересно, что циркулирующие микрофилярии запускают врожденные иммунные реакции, например, за счет CXCR2 / IL-17-зависимого рекрутирования PMN (63). В целом иммунопатология филяриозных заболеваний у людей и домашних животных сложна, и клинические проявления зависят от типа иммунного ответа хозяина, установленного против филяриатных нематод (64).Дирофиляриоз человека включает легочные гранулематозные реакции, особенно у пациентов с иммунодефицитом (9).

Интересно, что многие виды филярий содержат облигатные бактериальные эндосимбионты ( Wolbachia ), которые, как недавно было показано, вызывают НЕТоз (65). До сих пор остается неясным, может ли НЕТоз, вызванный микрофиляриями, мешать лечению антифиляриями. Эффективное лечение инфекций, вызванных D. immitis у домашних собак, в настоящее время основано на макроциклических лактонах для удаления циркулирующих микрофилярий из системы крови в дополнение к лечению взрослыми цидами (66).Однако, поскольку доказательства устойчивости к этому классу препаратов уже были зарегистрированы в США (67, 68), эффективная профилактика дирофиляриоза собак может оказаться под угрозой в будущем. В этом контексте сообщалось о сильном присоединении PMN к микрофиляриям B. malayi в присутствии низкой концентрации ивермектина и усиленного уничтожения микрофилярий PMN или мононуклеарных клеток периферической крови при лечении ивермектином (69–71). Интересно, что рецепторные сайты для макроциклических лактонов расположены исключительно вблизи экскреторно-секреторного (ES) аппарата, который является основным местом высвобождения микрофилярного белка (72).Белки ES хорошо известны своими иммуномодулирующими свойствами (73), позволяющими паразитам уклоняться от иммунной системы хозяина. Учитывая, что введение макроциклического лактона, по-видимому, препятствует высвобождению белка ES из микрофилярий (71), и поскольку прикрепленные NET могут также подавлять высвобождение ES из-за механических проблем, оба механизма могут способствовать улучшенному системному иммунному ответу хозяина (71). Кроме того, мы здесь постулируем, что высвобождение NET может также способствовать гибели личинок с помощью других иммунокомпетентных клеток, рекрутируемых на сайт образования NET.Предыдущие данные показывают, что, помимо PMN, другие клетки врожденного иммунитета, такие как макрофаги и моноциты, участвуют во врожденных иммунных ответах против нематодных паразитов. Хорошо известно, что филяриатные паразиты вызывают эозинофилию, и анализ крови на эозинофилы обычно используется в качестве инструмента скрининга (74). Исследования in vitro продемонстрировали способность макрофагов, активированных IFN-γ, убивать микрофилярий B. malayi (75). Кроме того, человеческий PMN также способствует летальному исходу для B.malayi microfilariae в присутствии аутологичной сыворотки in vitro и выдавливают NET в ответ на эти заключенные в оболочку микрофилярии, тем самым запутывая эти стадии (50).

Поразительной особенностью этого исследования был тот факт, что при контакте с D. immitis наблюдались различные типы собачьих NET, т. Е. diff, NET, spr NET и ag ловушка. Соответственно, подобное явление наблюдалось и для H.contortus — и NET, индуцированные легочными червями (48, 49), демонстрирующие тесную иммобилизацию L3 этими структурами NET. Однако, что касается L3-индуцированных agg NETs, ​​можно также предположить, что они функционируют в предотвращении собственно эксэатментации L3 на стадии L4 внутри окончательного хозяина и тем самым препятствуют продолжающемуся развитию D. immitis .

Описанные здесь типы NET , опосредованные D. immitis , могут быть связаны с недавно описанной способностью PMN млекопитающих воспринимать патогены малого и большого размера и выборочно высвобождать NET в ответ на крупные патогены. Branzk et al.(62). Учитывая, что особенно стадии L3, но также и микрофилярии D. immitis , представляют собой патогены большого размера, представляется очевидным, что ПЯН скорее реагируют НЕТозом, чем фагоцитозом, который будет неэффективен против крупных многоклеточных патогенов.

В целом, здесь мы представляем новую информацию о раннем врожденном иммунном ответе хозяина, вызванном зоонозным паразитом D. immitis . Мы впервые демонстрируем, что и микрофилярии, и L3 являются мощными индукторами различных типов собачьих НЭО.В целом, собачьи NET не убивают паразитарные стадии, но могут способствовать их уничтожению другими лейкоцитами, циркулирующими в системе крови, как постулируется в другом месте. До сих пор остается неясным, может ли чрезмерное образование NET также иметь неблагоприятные эффекты для окончательного хозяина, такие как повреждение сосудов или коагулопатии. Следовательно, здесь мы призываем к дополнительным исследованиям не только in vivo свидетельств НЕТоза, вызванного D. immitis , но и его внутрисосудистых последствий в отношении патогенеза и исхода заболевания.

Заявление об этике

Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями местного комитета по уходу и использованию животных и государственными органами (LANUV # 200 / A176 и # 200 / A154).

Авторские взносы

CH, AT, DK, TMC и IC разработали проект и эксперименты. DK и AP изолировали, очистили и предоставили паразитов, а также кровь для этого исследования. TMC, IC, EZ и UG провели большую часть экспериментов. Рукопись подготовили TMC, AT, CH и IC.Все авторы рецензировали рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы DK и AP работают в компании Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия. Авторы заявляют, что это исследование в основном финансировалось Институтом паразитологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене, Германия, и частично поддерживалось Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия. Авторы DK и AP (сотрудники Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия) участвовали в разработке проекта и экспериментов, выделяя, очищая и предоставляя паразитов и кровь для текущего исследования и рецензируемой рукописи.Все остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Анику Зейпп, Институт анатомии и клеточной биологии, JLU Giessen, Германия, за ее техническую поддержку в анализах с помощью сканирующей электронной микроскопии. Мы также благодарим всех сотрудников Bayer Animal Health GmbH, Германия, которые принимали участие в поддержании жизненного цикла и сбора личинок D. immitis . Кроме того, мы хотели бы поблагодарить всех сотрудников Центра ресурсов исследовательских реагентов NIH / NIAID (FR3; Колледж ветеринарной медицины, Университет Джорджии, Афины, Джорджия, США) за их поддержку и обсуждения, особенно по вопросам оптимизации протокола. поддержания жизненного цикла Dirofilaria immitis в лаборатории.

Финансирование

Настоящая работа финансировалась Институтом паразитологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене и частично поддержана компанией Bayer Animal Health Care, Леверкузен, Германия.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00968/full#supplementary-material.

Видео S1 . D. immitis L3, заключенный в структуры NETs.Видео выполнено с использованием анализа флуоресцентной микроскопии вместе с ДНК-маркером Sytox Orange для окрашивания NETs-ДНК, контактирующей с D. immitis L3.

Видео S2 . D. immitis микрофилярий, заключенных в сети. С помощью микроскопии в светлом поле наблюдают, что микрофилярий D. immitis заключены в сети.

Видео S3 . D. immitis L3 не убиваются сетями после 72 часов воздействия собачьего PMN. Используя светлопольную микроскопию, D.immitis L3 остается подвижным, захваченным в ag NET после 72 часов совместного культивирования с собачьим PMN.

Изображение S1. (A, B) НЕТоз, индуцированный D. immitis , после 10 мин инкубации с PMN собак. Объедините изображения на светлопольной и флуоресцентной микроскопии, полученные с помощью окрашивания ДНК Sytox Orange и антигистоновых антител.

Изображение S2 . D. immitis микрофилярии индуцируют агг сети и разн сети.Как показано стрелками, образование различных типов NET демонстрируется, как видно на объединенном изображении, с использованием анализа с использованием яркого поля и флуоресцентной микроскопии с окрашиванием ДНК Sytox Orange и антигистоновыми антителами.

Изображение S3 . D. immitis микрофилярии индуцируют spr NET. Как указано стрелками, образование различных типов NET демонстрируется, как видно на объединенном изображении, с использованием анализа с использованием яркого поля и флуоресцентной микроскопии с окрашиванием ДНК Sytox Orange и антигистоновыми антителами.

Список литературы

2. Фурланелло Т., Калдин А., Веццони А., Венко Л., Китагава Х. Патогенези. В: Genchi C, Venco L, Vezzoni A, редакторы. La filariosi cardiopolmonare del cane e del gatto . Кремона: SCIVAC (1998). п. 31–46.

Google Scholar

3. Гаврилович П., Блитва-Робертсон Г., Озвеги Дж., Кишкароли Ф., Бечкей З. Отчет о клиническом случае дирофиляриоза у серых волков в Сербии. Acta Parasitol (2014) 60 (1): 175–8. DOI: 10.1515 / ap-2015-0025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4.Генчи К., Герреро Дж., Ди Сакко Б., Формаджини Л. В: Солл М.Д., редактор. Распространенность инфекции Dirofilaria immitis у итальянских кошек. Труды симпозиума Heartworm ’92 . Батавия, Иллинойс (1992). п. 97–102.

Google Scholar

5. McCall JW, Calvert CA, Rawlings CA. Инфекция сердечного червя у кошек: опасное для жизни заболевание. Vet Med (1994) 89: 639–47.

Google Scholar

6. Аткинс К.Э., Де Франческо Т.С., Коутс Дж. Р., Сидли Дж. А., Кин Б. В..Инфекция сердечного червя у кошек: 50 случаев. JAVMA (2000) 217: 355–8.

Google Scholar

9. Симон Ф., Силес-Лукас М., Морчон Р., Гонсалес-Мигель Дж., Мелладо И., Карретон Е. и др. Дирофиляриоз человека и животных: возникновение зоонозной мозаики. Clin Microbiol Rev (2012) 25 (3): 507–44. DOI: 10.1128 / CMR.00012-12

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Канкрини Дж., Маги М., Габриэлли С., Ариспичи М., Толари Ф., Делл’Омодарме М. и др.Естественные переносчики дирофиляриоза в сельских и городских районах Тосканы, центральная Италия. J Med Entomol (2006) 43 (3): 574–9. DOI: 10.1093 / jmedent / 43.3.574

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Генчи К., Крамер Л. Х., Риваси Ф. Дирофиляриальные инфекции в Европе. J Vector Borne Dis (2011) 11 (10): 1307–17. DOI: 10.1089 / vbz.2010.0247

CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Эльсадр В.М., Айкава М., Грин Б.М.Иммунные механизмы in vitro, связанные с удалением микрофилярий Dirofilaria immitis . J Immunol (1983) 130: 428–34.

PubMed Аннотация | Google Scholar

13. Жепчик CM, епископ CJ. Иммунологические и ультраструктурные аспекты клеточно-опосредованного уничтожения Dirofilaria immitis microfliariae. Parasite Immunol (1984) 6: 443–57. DOI: 10.1111 / j.1365-3024.1984.tb00815.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

14.Rzepczyk CM, Bishop CJ, Cheung K, Atwell R, Ferrante A. Стимуляция респираторного взрыва нейтрофилов и реакции йодирования опсонизированными микрофиляриями Dirofilaria immitis . Aust J Exp Biol Med Sci (1986) 64: 43–51. DOI: 10.1038 / icb.1986.5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Уильямс Дж. Ф., Галиб Х. ​​В., Маккензи С. Д., Элькхалифа М. Ю., Аюя Дж. М., Крон М. А.. Прикрепление клеток к микрофиляриям Onchocerca volvulus : сравнительное исследование. Ciba Found Symp (1987) 127: 146–63.

PubMed Аннотация | Google Scholar

16. Ватта А.Ф., Дзимиански М., Стори Б.Е., Камю М.С., Мурхед А.Р., Каплан Р.М. и др. Ивермектин-зависимое прикрепление нейтрофилов и мононуклеарных клеток периферической крови к Dirofilaria immitis microfilariae in vitro . Vet Parasitol (2014) 206 (1–2): 38–42. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2014.02.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17.Grauer GF, Culham CA, Dubielzig RR, Longhofer SL, Grieve RB. Экспериментальный Dirofilaria immitis -ассоциированный гломерулонефрит, частично индуцированный образованием иммунных комплексов in situ в стенке капилляров клубочков. . J. Parasitol. (1989) 75 (4): 585–93. DOI: 10.2307 / 3282910

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Форрестер С.Д., Лис Дж. Э.. Почечное проявление полисистемной болезни. В: Osborne CA, Finco DR, редакторы. Нефрология и урология собак и кошек .Балтимор, Мэриленд: Уильямс и Уилкинс (1995). п. 491–504.

Google Scholar

19. Horii Y, Fujita K, Owhashi M. Очистка и характеристика хемотаксического фактора нейтрофилов из Dirofilaria immitis . J Parasitol (1986) 72 (2): 315–20. DOI: 10.2307 / 3281611

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Банди С., Деревья А.Дж., Браттиг, северо-запад. Wolbachia у филяриальных нематод: эволюционные аспекты и значение для патогенеза и лечения филяриатных заболеваний. Vet Parasitol (2001) 98: 215–38. DOI: 10.1016 / S0304-4017 (01) 00432-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Bazzocchi C, Genchi C, Paltrinieri S, Lecchi C, Mortarino M, Bandi C. Иммунологическая роль эндосимбионтов Dirofilaria immitis : поверхностный белок Wolbachia активирует собачьи нейтрофилы с образованием IL-8. Vet Parasitol (2003) 117 (1–2): 73–83. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2003.07.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22.Грин Б.М., Тейлор Х.Р., Айкава М. Клеточное уничтожение микрофилярий Onchocerca volvulus : эозинофилы и нейтрофил-опосредованное иммунное сывороточное разрушение. J Immunol (1981) 127: 1611–8.

Google Scholar

23. Brattig NW, Buttner DW, Hoerauf A. Накопление нейтрофилов вокруг червей Onchocerca и хемотаксис нейтрофилов зависят от эндобактерий Wolbachia . Микробы заражают (2001) 3: 439–46. DOI: 10.1016 / S1286-4579 (01) 01399-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Пионье Н., Бротин Э., Караджян Г., Хемон П., Гайдин-Ном Ф., Валларино-Лермитте Н. и др. Мыши с нейтропенией дают представление о роли нейтрофилов, проникающих в кожу, в защитной реакции хозяина против филяриозных инфекционных личинок. PLoS Negl Trop Dis (2016) 10: e0004605. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0004605

CrossRef Полный текст | Google Scholar

25.Бринкманн В., Райхард Ю., Гусманн С., Фаулер Б., Улеманн Ю., Вайс Д.С. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов убивают бактерии. Science (2004) 303: 1532–5. DOI: 10.1126 / science.1092385

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Урбан С.Ф., Эрмерт Д., Шмид М., Абу-Абед Ю., Гусманн С., Накен В. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов содержат кальпротектин, цитозольный белковый комплекс, участвующий в защите хозяина от Candida albicans . PLoS Pathog (2009) 5:10.DOI: 10.1371 / journal.ppat.1000639

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Narasaraju T, Yang E, Samy RP, Ng HH, Poh WP, Liew AA, et al. Избыточные нейтрофилы и внеклеточные ловушки нейтрофилов способствуют острому повреждению легких при гриппозном пневмоните. Am J Pathol (2011) 179 (1): 199–210. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2011.03.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Эрмосилла К., Муньос Каро Т., Сильва Л.М.Р., Руис А., Тауберт А.Интригующий врожденный иммунный ответ хозяина: новая антипаразитарная защита с помощью внеклеточных ловушек нейтрофилов. Паразитология (2014) 141 (11): 1489–98. DOI: 10.1017 / S0031182014000316

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. von Köckritz-Blickwede M, Goldmann O, Thulin P, Heinemann K, Norrby-Teglund A, Rohde M, et al. Независимая от фагоцитоза антимикробная активность тучных клеток за счет образования внеклеточных ловушек. Кровь (2008) 111: 3070–80.DOI: 10.1182 / кровь-2007-07-104018

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Чоу О.А., фон Кокриц-Бликведе М., Брайт А.Т., Хенслер М.Э., Цинкернагель А.С., Коген А.Л. и др. Статины усиливают образование внеклеточных ловушек фагоцитов. Клеточный микроб-хозяин (2010) 8: 445–54. DOI: 10.1016 / j.chom.2010.10.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Юсефи С., Голд Дж. А., Андина Н., Ли Дж. Дж., Келли А. М., Козловски Е. и др.Подобное катапульте высвобождение митохондриальной ДНК эозинофилами способствует антибактериальной защите. Nat Med (2008) 14: 949–53. DOI: 10,1038 / нм 1855

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32. Муньос-Каро Т., Сильва Л.М., Риттер С., Тауберт А., Эрмосилла С. Besnoitia besnoiti тахизоиты вызывают образование внеклеточной ловушки моноцитов. Parasitol Res (2014) 113 (11): 4189–97. DOI: 10.1007 / s00436-014-4094-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33.Райхель М., Муньос-Каро Т., Санчес-Контрерас Г., Рубио-Гарсия А., Магдовски Г., Гертнер У. и др. ПМЯ нерпы (phoca vitulina) и моноциты высвобождают внеклеточные ловушки для захвата апикомплексного паразита Toxoplasma gondii . Dev Comp Immunol (2015) 50: 106–15. DOI: 10.1016 / j.dci.2015.02.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Грейнджер В., Фейл Д., Марани В., Ноэль Б., Галле И., Сели Н. и др. Моноциты крови человека способны образовывать внеклеточные ловушки. J Leukoc Biol (2017) 102 (3): 775–81. DOI: 10.1189 / jlb.3MA0916-411R

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Douda DN, Khan MA, Grasemann H, Palaniyar N. Канал SK3 и митохондриальные АФК опосредуют НАДФН-оксидазно-независимый НЕТоз, индуцированный притоком кальция. Proc Natl Acad Sci U S A (2015) 112: 2817–22. DOI: 10.1073 / pnas.1414055112

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Remijsen Q, Kuijpers TW, Wirawan E, Lippens S, Vandenabeele P, Vanden Berghe T.Умереть по причине: НЕТоз, механизмы, лежащие в основе способа гибели антимикробных клеток. Cell Death Differ (2011) 18: 581–8. DOI: 10.1038 / cdd.2011.1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. Юсефи С., Михалахе С., Козловски Е., Шмид И., Саймон Х.У. Жизнеспособные нейтрофилы высвобождают митохондриальную ДНК с образованием внеклеточных ловушек нейтрофилов. Cell Death Differ (2009) 16 (11): 1438–44. DOI: 10.1038 / cdd.2009.96

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38.Йипп Б.Г., Петри Б., Салина Д., Дженн К.Н., Скотт Б.Н., Збытнуик Л.Д. и др. Индуцированный инфекцией НЕТоз — это динамический процесс, включающий многозадачность нейтрофилов in vivo . Nat Med (2012) 18 (9): 1386–93. DOI: 10,1038 / нм 2847

CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Guimarães-Costa AB, Nascimento MT, Froment GS, Soares RP, Morgado FN, Conceicao-Silva F, et al. Leishmania amazonensis промастиготы индуцируют и уничтожаются внеклеточными ловушками нейтрофилов. Proc Natl Acad Sci U S A (2009) 106: 6748–53. DOI: 10.1073 / pnas.06106

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Берендт Дж. Х., Руис А., Занер Х., Тауберт А., Эрмосилла С. Образование внеклеточной ловушки нейтрофилов как реакции врожденного иммунитета против апикомплексного паразита Eimeria bovis . Vet Immunol Immunopathol (2010) 133: 1–8. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2009.06.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41.Аби Абдалла Д.С., Лин Ц., Болл С.Дж., Кинг М.Р., Дюамель Г.Э., Denkers EY. Toxoplasma gondii запускает высвобождение внеклеточных ловушек нейтрофилов человека и мыши. Infect Immun (2012) 80: 768–77. DOI: 10.1128 / IAI.05730-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Сильва Л.М.Р., Муньос-Каро Т., Рюдигер Дж., Вила-Висоса М.Д.М., Кортес Н., Эрмосилла Т. и др. Апикомплексный паразит Eimeria arloingi индуцирует внеклеточные ловушки нейтрофилов коз. Parasitol Res (2014) 113 (8): 2797–807. DOI: 10.1007 / s00436-014-3939-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Перес Д., Муньос М.К., Молина Дж. М., Муньос-Каро Т., Сильва Л. М., Тауберт А. и др. Eimeria ninakohlyakimovae индуцирует НАДФН-оксидазозависимое образование внеклеточной ловушки моноцитов и усиливает транскрипцию генов IL-12 и TNF-α, IL-6 и CCL2. Vet Parasitol (2016) 227: 143–50. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2016.07.028

CrossRef Полный текст | Google Scholar

44.Wei Z, Hermosilla C, Taubert A, He X, Wang X, Gong P и др. Высвобождение внеклеточных ловушек нейтрофилов собак, вызванное паразитом apicomplexan Neospora caninum in vitro . Front Immunol (2016) 7: 436. DOI: 10.3389 / fimmu.2016.00436

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

45. Вильлагра-Бланко Р., Сильва Л.М.Р., Муньос-Каро Т., Янг З., Ли Дж., Гертнер У. и др. Полиморфноядерные нейтрофилы крупного рогатого скота бросают нейтрофильные внеклеточные ловушки против абортивного паразита Neospora caninum . Front Immunol (2017) 8: 606. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.00606

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Bonne-Année S, Kerepesi LA, Hess JA, Wesolowski J, Paumet F, Lok JB, et al. Внеклеточные ловушки связаны с опосредованной нейтрофилами и макрофагами человека и мыши уничтожением личинок Strongyloides stercoralis . Микробы заражают (2014) 16 (6): 502–11. DOI: 10.1016 / j.micinf.2014.02.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48.Муньос-Каро Т., Рубио RMC, Сильва LMR, Магдовски Г., Гертнер У., Макнилли Т.Н. и др. Образование внеклеточных ловушек, происходящих из лейкоцитов, в значительной степени способствует захвату личинок Haemonchus contortus . Векторы паразитов (2015) 8: 607. DOI: 10.1186 / s13071-015-1219-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Ланге М.К., Пенагос-Табарес Ф., Муньос-Каро Т., Гертнер У., Мейер Х., Шапер Р. и др. Внеклеточные ловушки гемоцитов, происходящие от гастропод, захватывают метастронгилоидные личиночные стадии Angiostrongylus vasorum, Aelurostrongylus abstrusus и Troglostrongylus brevior . Векторы паразитов (2017) 10:50. DOI: 10.1186 / s13071-016-1961-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Маккой С.Дж., Ривз Б.Дж., Жигер С., Коутс Р., Рада Б., Вольстенхолм А.Дж. Человеческие лейкоциты убивают микрофилярий Brugia malayi независимо от высвобождения внеклеточной ловушки на основе ДНК. PLoS Negl Trop Dis (2017) 11 (1): e0005279. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0005279

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51.Morchón R, López-Belmonte J, Bazzocchi C, Grandi G, Kramer L, Simón F. Собаки с патентом Dirofilaria immitis имеют более высокую экспрессию циркулирующих мРНК IL-4, IL-10 и iNOS, чем собаки с скрытой инфекцией. Vet Immunol Immunopathol (2007) 15: 184–8. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2006.10.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Эванс С.С., Мурхед А.Р., Стори Б.Е., Блэгберн Б.Л., Вольстенхолм А.Дж., Каплан Р.М. Оценка анализа ингибирования миграции личинок для выявления устойчивости к макроциклическим лактонам у Dirofilaria immitis . Vet Parasitol (2017) 246: 76–81. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2017.09.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Мартинелли С., Урошевич М., Дарьядел А., Оберхольцер П.А., Бауманн С., Фей М.Ф. и др. Индукция генов, опосредующих формирование интерферон-зависимой внеклеточной ловушки во время дифференцировки нейтрофилов. J Biol Chem (2004) 279: 44123–32. DOI: 10.1074 / jbc.M405883200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54.Wartha F, Beiter K, Albiger B, Fernebro J, Zychlinsky A, Normark S и др. Капсулы и D-аланилированные липотейхоевые кислоты защищают Streptococcus pneumoniae от внеклеточных ловушек нейтрофилов. Cell Microbiol (2007) 9: 1162–71. DOI: 10.1111 / j.1462-5822.2006.00857.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55. Папаяннопулос В., Метцлер К.Д., Хакким А., Зихлински А. Нейтрофильная ладаза и миелопероксидаза регулируют образование внеклеточных ловушек нейтрофилов. J Cell Biol (2010) 191 (3): 677–91. DOI: 10.1083 / jcb.201006052

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

56. Чуа С., Джонс М.К., Берк М.Л., Оуэн Х.С., Энтони Б.Дж., Макманус Д.П. и др. Пространственная и временная транскриптомика образования гранулемы печени, индуцированного Schistosoma japonicum , выявляет новые роли нейтрофилов. J Leukoc Biol (2013) 94: 353–65. DOI: 10.1189 / jlb.1212653

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

57.Conraths FJ, Hirzmann J, Hebom G, Zahner H. Экспрессия белка микрофилярной оболочки 2 (shp2) филяриальных паразитов Litomosoides sigmodontis и Brugia malayi . Exp Parasitol (1997) 85: 241–8. DOI: 10.1006 / expr.1996.4138

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

58. Хирцманн Дж., Хинц М., Каспер Т., Шреста Р., Тауберт А., Конратс Ф. Дж. И др. Клонирование и анализ экспрессии двух муциноподобных генов, кодирующих поверхностные белки микрофилярной оболочки паразитических нематод Brugia и Litomosoides . J Biol Chem (2002) 277: 47603-12. DOI: 10.1074 / jbc.M205770200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

59. Гупта А.К., Джоши М.Б., Филиппова М., Эрн П., Хаслер П., Хан С. и др. Активированные эндотелиальные клетки индуцируют внеклеточные ловушки нейтрофилов и чувствительны к гибели клеток, опосредованной НЕТозом. FEBS Lett (2010) 584 (14): 3193–7. DOI: 10.1016 / j.febslet.2010.06.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

60.Саффарзаде М., Юнеманн С., Кайссер М.А., Лохнит Г., Баррето Г., Галуска С.П. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов напрямую вызывают гибель эпителиальных и эндотелиальных клеток: преобладающая роль гистонов. PLoS One (2002) 7 (2): e32366. DOI: 10.1371 / journal.pone.0032366

CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Кармона-Ривера С., Чжао В., Ялаварти С., Каплан М.Дж. Внеклеточные ловушки нейтрофилов вызывают дисфункцию эндотелия при системной красной волчанке за счет активации матриксной металлопротеиназы-2. Ann Rheum Dis (2014) 74 (7): 1417–24. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2013-204837

CrossRef Полный текст | Google Scholar

62. Бранцк Н., Любожемска А., Хардисон С.Е., Ван К., Гутьеррес М.Г., Браун Г.Д. и др. Нейтрофилы определяют размер микробов и выборочно высвобождают внеклеточные ловушки нейтрофилов в ответ на крупные патогены. Nat Immunol (2014) 15 (11): 1017–25. DOI: 10.1038 / ni.2987

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

63.O’Connell AE, Redding KM, Hess JA, Lok JB, Nolan TJ, Abraham D. Растворимый экстракт нематоды Strongyloides stercoralis индуцирует CXCR2-зависимый / IL-17-независимый хемотаксис нейтрофилов. Микробы заражают (2011) 13: 536–44. DOI: 10.1016 / j.micinf.2011.01.016

CrossRef Полный текст | Google Scholar

64. Симон Ф., Крамер Л. Х., Роман А., Блазини В., Морчон Р., Маркос-Аткутеги С. и др. Иммунопатология инфекции Dirofilaria immitis . Vet Res Commun (2007) 31 (2): 161–71.DOI: 10.1007 / s11259-006-3387-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

65. Tamarozzi F, Turner JD, Pionnier N, Midgley A, Guimaraes AF, Johnston KL, et al. Эндосимбионты Wolbachia индуцируют образование внеклеточной ловушки нейтрофилов при онхоцеркозе человека. Sci Rep (2016) 6: 35559. DOI: 10.1038 / srep35559

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

68. Bourguinat C, Lee ACY, Lizundia R, Blagburn BL, Liotta JL, Kraus MS, et al.Макроциклическая устойчивость к лактону у Dirofilaria immitis : неэффективность профилактических средств против сердечных червей и исследование генетических маркеров устойчивости. Vet Parasitol (2015) 210: 167–78. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2015.04.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

69. Рао У.Р., Чандрашекар Р., Субрахманьям Д. Влияние ивермектина на сывороточно-зависимые клеточные взаимодействия с микрофиляриями Dipetalonema viteae . Trop Med Parasitol (1987) 38 (2): 123–7.

PubMed Аннотация | Google Scholar

70. Zahner H, Schmidtchen D, Mutasa JA. Ивермектин-индуцированная гибель микрофилярий in vitro нейтрофилами, опосредованная NO. Exp Parasitol (1997) 86: 110–7. DOI: 10.1006 / expr.1997.4160

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

72. Морено Ю., Набхан Дж. Ф., Соломон Дж., Маккензи К. Д., Гири Т. Г.. Ивермектин нарушает функцию выделительно-секреторного аппарата микрофилярий Brugia malayi . Proc Natl Acad Sci U S A (2010) 107 (46): 20120–5. DOI: 10.1073 / pnas.1011983107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

73. Olgilvie BM, Wilson RJM. Уклонение паразитов от иммунного ответа. Br Med Bull (1976) 32 (2): 177–81. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.bmb.a071352

CrossRef Полный текст | Google Scholar

74. Муссо Д. Актуальность анализа крови на эозинофилов при банкрофтиловом филяриатозе как скрининговом инструменте лечения. Pathog Glob Health (2013) 107 (2): 96–102. DOI: 10.1179 / 2047773213Y.0000000083

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

75. Тейлор М.Дж., Кросс Х.Ф., Мохаммед А.А., Деревья А.Дж., Бьянко А.Е. Чувствительность микрофилярий Brugia malayi и Onchocerca lienalis к оксиду азота и перекиси водорода в бесклеточной культуре и от IFN-γ-активированных макрофагов. Паразитология (1996) 112: 315–22. DOI: 10.1017 / S0031182000065835

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Проблема филяриатоза

Филяриатоз — основная причина проблем со здоровьем во всем мире.Филяриозное заболевание, передаваемое мухами или комарами, может поражать кожные, глазные или лимфатические ткани. Диагноз устанавливают, наблюдая микрофилярии в периферической крови и срезах кожи; их характерные морфологические особенности не только помогают в постановке диагноза, но и дают представление о патогенезе заболевания.

Кому-то термин «филяриатоз» может показаться далеким, но для других в области медицины он слишком близок к дому. Филяриоз относится к группе забытых тропических болезней, вызываемых нематодами надсемейства Filarioidea, передаваемых через членистоногих-переносчиков.Эти заболевания классифицируются как лимфатический или кожный / глазной филяриоз в зависимости от того, какие ткани являются основным местом обитания взрослых червей (1). По оценкам, во всем мире инфицировано более 120 миллионов человек, 40 миллионов из которых обезображены или недееспособны. Социальное, психологическое и экономическое бремя филяриатоза, которое ежегодно приводит к потере 2,8 миллиона лет жизни с поправкой на инвалидность (2), очевидно. Всемирная организация здравоохранения взяла на себя обязательство ликвидировать лимфатический филяриатоз как проблему общественного здравоохранения к 2020 году, а речную слепоту, кожную / глазную форму заболевания, к 2025 году — путем i) массового применения лекарств в эндемичных регионах и ii) борьбы с переносчиками болезни, чтобы остановить трансмиссия (3,4).Однако даже в регионах, в которых филяриатоз был ликвидирован, может наблюдаться его повторное появление из-за поездок в этот район и из него (5).

Как и где. нематод, вызывающих кожный и глазной филяриоз, включают Onchocerca volvulus , Loa loa , Mansonella perstans , Mansonella ozzardi и Mansonella streptocerca .Передача лимфатического филяриоза происходит через комаров Culex (в городских и пригородных районах), Anopheles (в сельской местности) и Aedes ( островов Тихого океана). Черные мухи являются переносчиками M. ozzardi и O. volvulus , а оленьи мухи — L. loa . Клещи передают M. ozzardi , M. perstans и M. streptocerca (1,2,6).

Для постановки точного диагноза ключевое значение имеет географическое распространение этих паразитов.

  • W. bancrofti имеет широкое распространение, в основном в тропиках и субтропиках, включая Азию, острова Тихого океана, Африку, Южную Америку и Карибский бассейн.
  • B. malayi сосредоточен в Юго-Восточной Азии, включая Индию, Китай, Филиппины, Малайзию, Индонезию, Корею и Вьетнам.
  • B. timori ограничен некоторыми островами восточной Индонезии, включая Тимор (2).
  • O. volvulus является эндемиком Западной и Центральной Африки, а также некоторых частей Восточной Африки и Йемена.
  • L. loa встречается только в тропических регионах западно-центральной Африки; проявлять осторожность при диагностике лоаоза за пределами Африки. Дирофилярия вызывает глазные инфекции, клинически похожие на лоаз в Европе и Азии (7,8).
  • M. perstans характерен для Африки к югу от Сахары, Центральной и Южной Америки и некоторых островов Карибского бассейна.
  • M. ozzardi распространен от Центральной до Южной Америки и Карибского бассейна.
  • M. streptocerca произрастает в тропических районах Западной и Центральной Африки (9).

Круг жизни
Филяриальным нематодам для завершения своего жизненного цикла нужны два хозяина: комары или мухи в качестве промежуточных хозяев для развития и созревания, а затем люди в качестве окончательных хозяев для воспроизводства (10,11). У человека взрослые черви локализуются в лимфатических сосудах ( W. bancrofti, B. malayi , B. timori ), подкожных тканях или глазах ( L.loa , O. volvulus , M. streptocerca , M. ozzardi ) и полости тела (M. perstans). Взрослые черви могут годами выжить в организме человека-хозяина. При половом размножении самки червей выпускают миллионы личинок (микрофилярий) в кожу или кровь. Эти подвижные микрофилярии остаются в легочных сосудах в течение дня и мигрируют в периферическую кровь ночью, достигая максимальной концентрации периферической крови — и, следовательно, идеального времени для сбора образцов — около полуночи у паразитов с ночной периодичностью ( Вт.bancrofti и Brugia spp.).

Как это работает? Переносчик улавливает микрофилярии, циркулирующие в крови или кожных тканях во время кормления. Стадии развития, которые происходят в переносчике и занимают 10–14 дней, — это L1 (неактивный), L2 (преинфекционный) и L3 (инфекционный). Наконец, вектор кусает человека-хозяина и высвобождает личинок L3, которые мигрируют к своему соответствующему сайту локализации.

Исследования продемонстрировали присутствие бактерий Wolbachia в качестве эндосимбионтов у некоторых филяриальных нематод.Эта ассоциация участвует в патогенезе заболевания, иммунном ответе хозяина, а также в жизнеспособности и развитии взрослых червей. Однако, когда нематода умирает, эти бактерии высвобождаются и могут инициировать иммунологическую реакцию (12), поэтому может быть эффективным сопровождать антифилярное лечение антибиотиками, нацеленными на Wolbachia .

Клинические проявления
Спектр заболевания различается у пациентов, живущих в эндемичных регионах, и у тех, кто путешествовал или недавно мигрировал в эти регионы.Как правило, филяриозное заболевание протекает тяжело и остро у недавно совершивших поездку или недавно подвергшихся воздействию людей, в то время как у людей, родившихся в эндемичных районах, заболевание протекает более хронически и изнурительно.

Лимфатический филяриоз
При лимфатическом филяриозе наиболее частым проявлением является бессимптомная или субклиническая микрофиляремия. В эндемичных районах это начинается в раннем детстве (13). У пациентов могут наблюдаться лимфангиэктазия или расширенные лимфатические узлы (включая лимфатические узлы мошонки), микроскопическая гематурия и протеинурия (1).

При остром филяриальном лимфангите у пациентов наблюдается высокая температура, ретроградное лимфатическое воспаление, увеличение лимфатических узлов и преходящий отек. Поражение половых лимфатических узлов при филяриатозе W. bancrofti приводит к фуникулиту, эпидидимиту и боли в мошонке. Острый дерматолимфангиоаденит характеризуется лихорадкой, ознобом, миалгией, красными болезненными отечными воспалительными бляшками и пузырьками или язвами. Продолжающееся лимфатическое воспаление и последующая обструкция приводит к слоновости: мускулистому отеку, утолщению подкожной клетчатки и гиперкератозу.Могут отмечаться гидроцеле, лимфедема мошонки и хилурия, а обструктивная лимфедема может поражать другие органы. У недавно облученных людей наблюдается кратковременный лимфаденит, за которым следует ретроградный лимфангит (1,5,14).

Тропическая эозинофилия легких — это скрытый филяриатоз, характеризующийся выраженной эозинофилией, приступообразным кашлем и хрипом (в основном ночью), субфебрильной лихорадкой и потерей веса. Микрофилярии обычно не обнаруживаются в периферической крови, но могут редко обнаруживаться при биопсии легких.Быстрый начальный ответ на диэтилкарбамазин является отличительной чертой этого заболевания (15).

Онхоцеркоз
Кожные проявления включают сильный зуд, генерализованные папулезные высыпания, экзематозный дерматит, лихенификацию и гипо- или гиперпигментацию («кожа леопарда»). В давних случаях может наблюдаться дряблая кожа с атрофией. Онхоцеркомы — твердые, не болезненные, подвижные подкожные узелки, состоящие из взрослых червей, — располагаются над костными выступами. Глазные симптомы могут включать конъюнктивит, кератит, помутнение роговицы, увеит и атрофию зрительного нерва.Пациенты также часто испытывают висящий пах с увеличенными паховыми и бедренными лимфатическими узлами, покрытыми атрофированной дряблой кожей (14,16,17).

Стрептоцеркоз
Клинические признаки этого заболевания напоминают онхоцеркоз. К ним относятся зуд, кожная сыпь и лимфаденопатия, но отсутствуют подкожные узелки (16).

Лоааз
Лоаз обычно протекает бессимптомно. Могут наблюдаться эпизодические отеки Калабара (преходящие, локализованные подкожные ангионевротические отеки) над конечностями, а также наличие микрофилярий в субконъюнктиве.Они временны и проходят после полного выздоровления (1,16). Атипичные проявления включают артралгию или артрит, сердечную недостаточность из-за эндомиокардиального фиброза, респираторные симптомы из-за плеврального выпота или легочного фиброза и, в редких случаях, желудочно-кишечные и почечные симптомы. Энцефалопатия, спонтанная или чаще после начала приема ивермектина, может возникать у пациентов с высокой паразитарной нагрузкой (> 30 000 микрофилярий / мл). У некоторых пациентов наблюдается частичная или полная потеря зрения.

Мансонеллез
Большинство пациентов, инфицированных M.perstans протекают бессимптомно, но у некоторых могут наблюдаться преходящие подкожные опухоли, сыпь, зуд, излияния или системные симптомы. У лиц с инфекцией M. streptocerca наблюдается папулезный дерматит и зуд, чаще всего на верхних частях тела (18).

Постановка диагноза
Диагноз филяриатоза может быть поставлен путем прямой визуализации взрослых червей при биопсии; наблюдая микрофилярии в периферической крови, мазках аспирата и срезах кожи; а также серологическим и молекулярным тестированием.

Гистопатология
Обычно поражаются лимфатические узлы, грудь, придаток яичка и ноги. При субклинической лимфангиэктазии интактные взрослые черви свободно лежат в расширенных лимфатических сосудах, выстланных утолщенным эндотелием. Черви имеют ширину 30–75 мкм и тонкую кутикулу с мелкими поперечными бороздками (19). Воспалительная реакция незначительна. Фиброз чередуется с атрофией или гипертрофией гладкой мускулатуры. Неспецифическая реактивная лимфоидная гиперплазия возникает в лимфатическом узле, ближайшем к расширенным лимфатическим сосудам, укрывающим паразита (20).

Воспалительная реакция хозяина возникает в ответ на смерть взрослого червя и усиливается по мере вырождения филярийного червя. Мертвый червь находится внутри фибринового материала, прикрепленного к стенке сосуда. Воспаление, богатое эозинофилами, изначально легкое, со временем становится цветущим, стирая просвет. Выродившиеся черви и фрагментированные кутикулы образуют свои собственные воспалительные центры, состоящие из лимфоцитов, плазматических клеток, гистиоцитов и эозинофилов; могут присутствовать гранулематозные реакции (20,21) и центральные нейтрофильные микроабсцессы.Наконец, мертвый паразит кальцифицируется, окруженный фиброзным заживлением. В окружающей зоне образуется грануляционная ткань, а облитерированные сосуды могут подвергаться реканализации (20). Дифференциальный диагноз включает:

  • лимфаденит, связанный с болезнью кошачьих царапин, который показывает аналогичный центральный некроз, окруженный микропоглощениями и гранулемами
  • другой гранулематозный лимфаденит
  • лимфома Ходжкина (19)

Подкожно-кожные узелки взрослых червей обнаруживают окружена фиброзной капсулой (22).Биопсия кожи показывает наличие микрофилярий во всех слоях дермы, а также хроническое воспаление, включающее различное количество лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов с небольшим количеством эозинофилов. После начала лечения вокруг дегенерирующих микрофилярий наблюдается большое количество эозинофилов. В некоторых случаях могут присутствовать гранулемы. У всех пациентов наблюдается рубцевание кожи с потерей эластических волокон и фибриноидным некрозом коллагена. Роговица при точечном кератите обнаруживает отек и инфильтрацию лимфоцитов и эозинофилов.Воспаление является обширным при тяжелой паразитемии, а сопутствующая неоваскуляризация и фиброзное рубцевание приводят к склерозирующему кератиту (22,23).

В лимфатических узлах больных онхоцеркозом наблюдается утолщение и фиброз капсулы, облитерация субкапсулярных синусов, расширенных в ранней фазе, и замещающий фиброз лимфоидной ткани. Характерный периваскулярный симметричный фиброз с отложением фибриноидного материала, вероятно, обусловлен отложением иммунных комплексов. В мозговом веществе содержится много эозинофилов, плазматических клеток и гистиоцитов.Микрофилярии можно обнаружить в фиброзной капсуле, интерстициальной ткани и, реже, в мозговом веществе (24).

Биопсия кожи из поражений кожного лоаза выявляет взрослых червей со случайно расположенными кутикулярными узелками. Дирофилярия — важный дифференциал; Эти виды имеют более высокие и многочисленные мышечные клетки и продольные кутикулярные гребни при биопсии кожи (7). Лоазный лимфаденит имеет уникальные особенности: атрофированные лимфоидные фолликулы и синусоидальное расширение, содержащее гистиоциты и эозинофилы.Другие особенности включают капсульный и трабекулярный фиброз, а также расширение капсулы и мозговых лимфатических сосудов (25).

Стрептоцеркальный лимфаденит выявляет истощение лимфоидной ткани из-за факторов ингибирования, выделяемых микрофиляриями (24).

Результаты цитологического исследования
Паразиты могут быть идентифицированы в цитологических образцах, таких как аспираты тонкой иглы, цитологический анализ выпота и гинекологические мазки. Было опубликовано несколько клинических случаев по цитологической диагностике филяриозных заболеваний из разных источников.Аспират или жидкость могут казаться молочными, мутными или геморрагическими. Микрофилярии обнаруживаются на фоне воспалительных клеток, богатых эозинофилами (см. Рисунок 1). Иногда гигантские клетки и гранулемы эпителиоидных клеток являются частью воспалительной реакции. Изредка цитология выявляет взрослых червей или их фрагменты (26, 27).

Ошибочные диагнозы могут стать проблемой; посторонние вещества, такие как хлопковые волокна, растительные вещества или воздушно-капельное заражение грибковыми конидиями, могут быть ошибочно приняты за микрофилярии (28).Точный диагноз основан на распознавании характерного морфологического рисунка микрофилярий.

Рис. 1. Аспирация тонкой иглой из опухоли груди, показывающая наличие многочисленных спиральных микрофилярий (окраска MGG).

Мазок периферической крови
Взрослые черви, находящиеся в лимфатических сосудах, обычно недоступны; Традиционный метод диагностики лимфатического филяриоза заключается в обнаружении микрофилярий в периферической крови, особенно в толстых мазках (см. рисунок 2).Циркулирующие микрофилярии можно обнаружить в мазках периферической крови и иногда в аспирате костного мозга (29). Связанная эозинофилия — частая гематологическая находка при филяриатозе; в частности, поразительно большое количество случаев наблюдается при тропической легочной эозинофилии, осложнении лимфатического филяриатоза.

Рисунок 2. Микрофилярии в толстом мазке периферической крови (окраска по Лейшману).

Отсутствие микрофилярий в периферической крови не исключает диагноз филяриатоз.Даже у пациентов с явным заболеванием микрофилярия может отсутствовать; Взрослые черви могут оставаться половозрелыми, превысить репродуктивный возраст или умереть (20). Время взятия пробы должно соответствовать ожидаемой пиковой концентрации; Образцы крови следует собирать в полночь для филяриальных форм с ночной периодичностью и в полдень для суточной периодичности. Микрофилярии выживают в венозной крови с ЭДТА в течение 48 часов при комнатной температуре. Часто окруженные пустым пространством, они обнаруживаются по краям и хвосту мазка, поэтому очень важно проверить весь мазок при 4-кратном увеличении, иначе микрофилярии могут быть пропущены.Подготовка к влажному креплению может выявить подвижные микрофилярии.

Когда микрофилярии не могут быть обнаружены в мазках, показаны методы концентрации. Метод фильтрации наиболее чувствителен, но может привести к заражению. Рекомендуемый подход — метод лизированной капиллярной крови, который может выявить движущиеся микрофилярии через частично закрытый конденсатор радужной оболочки или темнопольную микроскопию. Пятно Филда A или 1% метиленовый синий может облегчить идентификацию видов. Если лизированная капиллярная кровь не может быть применена, препарат лейкоцитарной пленки также концентрирует микрофилярии (30).

Идентификация видов проводится на окрашенных мазках путем морфологической оценки оболочки (присутствующей или отсутствующей), характера распределения ядер и размера микрофилярий. Идентификация оболочки — важная особенность, но интерпретация должна производиться в контексте размера. W. bancrofti , B. malayi и L. loa являются филяриями в оболочке; Mansonella spp. обнажены. Однако некоторые особенности могут затруднить идентификацию оболочки:

  • Микрофилярии в оболочке могут потерять оболочку, если будет задержка в обработке образца.
  • Ножны втягиваются.
  • Цвет оболочки зависит от pH и типа пятна.
  • Оболочка не может быть идентифицирована на препаратах для снятия кожных покровов.

По размеру микрофилярии можно сравнить с эритроцитами. W. bancrofti и Brugia spp. равны или больше эритроцитов, тогда как Mansonella spp. вдвое меньше.

Ядерная структура — самый важный диагностический параметр (см. Таблицу 1).

Таблица 1. Различия между видами, вызывающими филяриозные заболевания.

Ножи кожи
Диагностика микрофилярий O. volvulus и M. streptocerca в срезах кожи — специализированная бескровная биопсия — является стандартной. Снимки кожи собираются с нескольких сайтов. Кожную ткань погружают в изотонический физиологический раствор, накрывают покровным стеклом и через 15-20 минут исследуют предметное стекло на предмет подвижных микрофилярий.При инфекциях низкой плотности требуется длительная инкубация.

Серологическое и молекулярное тестирование
Серологическое тестирование и обнаружение антигена или антител — удобные методы диагностики по сравнению с демонстрацией микрофилярий в мазках. Эти методы испытаний не зависят от периодичности и, следовательно, не требуют отбора проб в ночное время. Чувствительность высокая, что означает, что эти тесты могут идентифицировать пациентов с микрофиляриями низкой плотности, а также пациентов с амикрофиляремией.

  • W. Bancrofti филяриатоз можно диагностировать путем обнаружения циркулирующего филяриатного антигена с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) и быстрого иммунохроматографического карточного теста. Это чрезвычайно чувствительные и специфические методы. Тесты на филяриальный антиген могут давать положительные результаты в течение как минимум трех лет после массового лечения в эндемичных регионах и, таким образом, не подходят для определения эффективности программ борьбы. Тест-полоски на филяриатоз более чувствительны при низких уровнях антигена и имеют более длительный срок хранения (5,31,32).
  • Brugia может быть обнаружен с помощью экспресс-теста на антитела IgG4 с высокой чувствительностью и специфичностью. Для диагностики онхоцеркоза доступны быстрые анализы на основе антител. Основным недостатком серологического тестирования является перекрестная реактивность с W. bancrofti и другими простейшими паразитами, что делает его недостаточным для независимой постановки диагноза (32,33).
  • Анализы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) доступны для диагностики W. bancrofti , Brugian spp., L. loa и O. volvulus (13,33).
  • Наконец, может присутствовать гипергаммаглобулинемия и высокие уровни сывороточного IgE при всех филяриозных заболеваниях.

По сути, сочетание характерных географических данных или истории путешествий, клинических проявлений, эозинофилии в крови, демонстрации микрофилярий и / или серологического тестирования позволяет поставить правильный диагноз филяриатных нематод. Для диагностики недостаточно одной функции — и это особая проблема в регионах с ограниченными ресурсами, где диагностам может не хватать ресурсов для мультимодального подхода, а пациенты могут не иметь возможности обратиться в клинику один раз, не говоря уже о неоднократном посещении клиники для диагностики и лечения.Причины, лежащие в основе регионов с эндемическим филяриозом, многочисленны и сложны, но для тех из нас, кому поручено выявлять и лечить болезнь, эта комбинация методов может позволить нам изменить наш подход в соответствии с нашими ресурсами и потребностями наших пациентов.

Бывший профессор и руководитель отделения патологии Государственного медицинского колледжа и больницы, Чандигарх. В настоящее время он работает старшим патологоанатомом-консультантом в Oncquest Laboratories, Paras Hospitals, Панчкула, Харьяна, Индия.

Патологоанатом-консультант в Oncquest Laboratories, Paras Hospitals, Панчкула, Харьяна, Индия.

Loa Loa — Инфекционные болезни и противомикробные препараты

Жизненный цикл

Филяриатная нематода, Loa loa, передается через укус инфицированной олени (Chrysops spp.). Инфекционные личинки, осевшие во время укуса, в течение нескольких месяцев развиваются во взрослых червей, которые обитают в подкожных тканях человека-хозяина. Беременные взрослые самки гельминтов продуцируют передающиеся через кровь микрофилярии, которые могут быть захвачены переносчиком во время кровопролития, завершая цикл передачи.Хотя Loa loa микрофилярий обычно обнаруживаются в крови только в полдень (суточная периодичность), последние данные свидетельствуют о том, что в некоторых условиях существуют ночные периодические штаммы (2). В отличие от других филяриальных паразитов, поражающих людей, червей Loa loa не содержат внутриклеточного эндосимбионта, Wolbachia (4, 27)

Loa loa Инфекция, или лоаоз, эндемична в Центральной и Западной Африке, где, по оценкам, инфицировано до 13 миллионов человек (31, 38).В то время как люди, совершающие длительные поездки (> 3 месяцев) в эндемичные районы, явно подвержены риску развития лоаоза, заражение лиц, совершающих краткосрочные поездки, встречается редко (25).

Были продемонстрированы явные различия между клиническими проявлениями лоаоза у эндемичных популяций и у путешественников в эндемичные районы, и считается, что они отражают иммунный ответ хозяина на паразита (16, 23). Инфицированные люди из эндемичных по лоазу районов обычно протекают бессимптомно, несмотря на чрезвычайно высокий уровень циркулирующих микрофилярий (микрофиляремия).Напротив, у посетителей эндемичных районов, которые заболевают лоаозом, как правило, преобладают «аллергические» симптомы, включая крапивницу, зуд и характерные периодические подкожные вздутия (калабарские опухоли), но при отсутствии или небольшом количестве обнаруживаемых микрофилярий в крови (16, 29). ). Осложнения лоаоза, хотя и редки, чаще встречаются у неэндемичных пациентов. Напротив, подкожная миграция взрослого паразита (глазного червя) происходит у 70% инфицированных людей в зависимости от серии и чаще встречается у жителей эндемичных районов, чем у путешественников (15, 16).

Для окончательного диагноза лоаоза требуется демонстрация характерных микрофилярий в оболочке или ДНК Loa loa (11) в образце периферической крови или идентификация взрослого паразита в субконъюнктиве или подкожной клетчатке. Кровь обычно берется с 10 до 14 часов. для учета суточной периодичности паразита в большинстве регионов. Количественное определение передающихся через кровь микрофилярий необходимо до лечения микрофилярицидными препаратами, поскольку пациенты с высокой микрофиляриальной нагрузкой подвержены риску серьезных (потенциально смертельных) реакций после лечения.В отсутствие паразитологического подтверждения диагноз обычно зависит от совместимого клинического анамнеза при наличии эозинофилии и повышенных уровней антифилярных антител. Выраженная эозинофилия и повышенные уровни поликлонального IgE типичны для лоаза, хотя при отсутствии этих результатов могут возникать рецидивы (24). Уровень антифилярных антител IgG и IgG4 также повышен, но они не различают активную и перенесенную инфекцию. Следовательно, уровни антифиляриальных антител наиболее полезны для диагностики инфекции у нелеченных лиц из неэндемичных районов и для исключения инфекции Loa loa у лиц с амикрофиляремией.Другие лабораторные отклонения, включая гематурию и протеинурию, могут возникать при инфекции Loa loa, но обычно разрешаются с помощью терапии.

Поскольку паразитов лоа-лоа невозможно поддерживать in vitro, а заражение лоа-лоа происходит только у приматов, данные о лекарственной чувствительности ограничены исследованиями in vivo влияния диэтилкарбамазина (ДЭК) на лоаоз у обезьян и людей. Быстрое выведение микрофилярий из крови после введения DEC было продемонстрировано как у людей, так и у приматов (9), что свидетельствует о прямом влиянии DEC на циркулирующие микрофилярии.Это подтверждается обнаружением микрофилярий, окруженных фагоцитами, при биопсии печени, проведенной через 12 часов после, но не до лечения DEC пациента с лоаозом (37). О макрофилярицидной активности DEC можно судить по тому факту, что большинство пациентов излечиваются от лоаоза после терапии DEC. Прямое уничтожение взрослых червей с помощью DEC дополнительно подтверждается обнаружением мертвых червей в подкожных червеобразных опухолях, которые часто возникают после введения DEC пациентам с лоаозом (32), и в подкожных тканях экспериментально инфицированных мандриллов, обработанных DEC (9). .

Хотя окончательных доказательств резистентности паразитов к DEC нет, у меньшинства пациентов сохраняются симптомы, несмотря на многократные курсы терапии (23). Кроме того, в исследовании обработки DEC 3 экспериментально инфицированных мандрил, ни одно из животных не было полностью избавлено от взрослых червей при вскрытии (9). В настоящее время остается неясным, отражают ли эти результаты устойчивость паразитов к препарату или неадекватный иммунный ответ хозяина.

Лекарство выбора

Препаратом выбора для лечения лоаоза является диэтилкарбамазин (ДЭК) в дозе 8-10 мг / кг в день, вводимый перорально в три приема, хотя исследования по определению доз при инфекции Loa loa не проводились (1).Механизм действия DEC на нитчатых паразитов неясен, но, по-видимому, он включает иммунный ответ хозяина (26). Хотя препарат хорошо переносится людьми с низким или неопределяемым уровнем циркулирующих микрофилярий (микрофиляремия), тяжелые побочные реакции, включая почечную недостаточность и фатальную энцефалопатию, наблюдались в условиях высоких уровней микрофиляремии, несмотря на медленное повышение дозы и сопутствующее введение. стероидов (5). DEC эффективен как против микрофилярий, так и против взрослых червей Loa loa и является лечебным для большинства пациентов с лоа-лоа, хотя может потребоваться несколько курсов терапии, и клинические рецидивы могут возникать до 8 лет после очевидно успешного лечения (24). .

Особые ситуации

Коинфекция другими филяриатными паразитами: поскольку географическое распространение лоаза частично совпадает с географическим распространением некоторых других филяриозных инфекций человека, включая онхоцеркоз, лимфатический филяриатоз и инфекцию Mansonella perstans, диагностическая оценка пациента с предполагаемым лоазом должна включать исключение коинфекции с второй нитчатый паразит. Это особенно верно в случае онхоцеркоза, когда лечение ДЭК может привести к тяжелой системной реакции (реакция Маццотти) и обострению основного заболевания кожи и глаз (33).У большинства пациентов лечение сопутствующего лоаза и онхоцеркоза может быть безопасно выполнено путем удаления ивермектина с глазных и кожных микрофилярий перед лечением DEC (разногласия относительно использования ивермектина при лоазе см. В разделе VIII). В качестве альтернативы, доксициклин, который обладает как микрофилярицидной, так и макрофилярицидной активностью при онхоцеркозе и лимфатическом филяриатозе из-за его воздействия на внутриклеточные бактерии Wolbachia , можно безопасно использовать у пациентов с коинфекцией Loa loa (35).

Хосты с подавленным иммунитетом: Влияние иммуносупрессии на клинические проявления лоаоза напрямую не изучалось. Однако, поскольку многие симптомы и признаки инфекции считаются результатом иммунного ответа хозяина против паразита, можно ожидать, что иммуносупрессия улучшит, а не усугубит клинические проявления инфекции. Потенциальное влияние иммуносупрессии на восприимчивость к инфекции и ответ на лечение до настоящего времени не изучалось.

Альтернативная терапия

Недостатки DEC-терапии лоаоза включают побочные реакции, которые могут быть серьезными у пациентов с высоким уровнем микрофиляремии, необходимость многократных 3-недельных курсов у большинства пациентов и очевидную неэффективность у небольшого процента пациентов. Следовательно, активно искались альтернативные методы лечения.

Ивермектин, препарат выбора для лечения онхоцеркоза, представляет собой полусинтетический макролид, который эффективен против микрофилярий (но не взрослых червей) Loa loa.Было показано, что однократная доза 200 мг / кг снижает уровень микрофилярий на 70-90% на срок до 1 года (14). Об исчезновении признаков и симптомов амикрофиларемического лоаза на срок до 1 года после лечения ивермектином также сообщалось в двух небольших исследованиях (12, 17). Несмотря на эти многообещающие предварительные результаты, сообщения о неврологических осложнениях, включая фатальную энцефалопатию, после лечения онхоцеркозом ивермектином у пациентов с высоким уровнем микрофиляремии Loa loa (3, 6) вызывают вопросы о безопасности ивермектина в этих условиях.Хотя в рандомизированном контролируемом исследовании терапия низкими дозами ивермектина оказалась менее эффективной, чем терапия стандартной дозой, разницы было недостаточно для надежного снижения риска лечения ивермектином у пациентов с высокими уровнями микрофиляремии (18).

Ввиду этих проблем безопасности и недостаточной эффективности ивермектина против взрослых глистов, ивермектин не может быть рекомендован в качестве терапии первой линии у пациентов с высоким уровнем микрофиляремии (> 30 000 mf / мл) или пациентов с очень низким уровнем микрофиляремии (0 -2000 мф / мл крови).Вопрос о том, следует ли назначать терапию ивермектином для снижения количества микрофилярий у пациентов с 2000–30 000 mf / мл до окончательного излечения с помощью DEC, остается спорным, поскольку не было исследований, сравнивающих частоту и интенсивность побочных эффектов после DEC и пациентов с ивермектином в стационаре с лоазом.

Бензимидазолы, в том числе мебендазол и альбендазол, являются глистогонными средствами широкого спектра действия, которые связываются преимущественно с b-тубулином паразита, что приводит к разрушению микротрубочек и, в конечном итоге, к гибели паразита.Хотя несколько исследований продемонстрировали эффективность мебендазола в высоких дозах против взрослых червей Loa loa, его низкая и непостоянная абсорбция и частота побочных эффектов при использовании в высоких дозах ограничивают его полезность при лечении лоаоза (36).

Родственный бензимидазол, альбендазол, обладает более широким спектром активности и повышенной биодоступностью при пероральном приеме по сравнению с мебендазолом. В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании альбендазол в дозе 200 мг перорально 2 раза в день в течение 21 дня привел к постепенному снижению уровней микрофилярий у пациентов с лоазом до 20% от уровней до лечения через 6 месяцев.Медленное снижение микрофиляремии согласуется с первичным воздействием на взрослых паразитов, как это предполагалось при других филяриозных инфекциях. Несмотря на чрезвычайно высокие уровни микрофилярий у некоторых пациентов (> 50 000 / мл крови), не было никаких клинических побочных эффектов и не наблюдались гепатотоксичность, почечная токсичность или гематологические аномалии, связанные с приемом препарата. Польза альбендазола для уменьшения количества циркулирующих микрофилярий (и, предположительно, побочных эффектов терапии) перед окончательным лечением DEC не изучалась.В некоторых исследованиях было показано, что более короткие курсы альбендазола (1-3 дня) значительно снижают количество микрофилярий, хотя эффект является переменным и временным (19, 34). Альбендазол также успешно применялся при лечении 3 пациентов с симптоматическим лоазом, резистентным к многократным курсам ДЭК (21), и его следует рассматривать при лечении пациентов, резистентных к ДЭК или нетерпимых к нему.

Лечение лоаза диэтилкарбамазином (ДЭК) часто связано с преходящим обострением симптомов, включая крапивницу и отеки Калабара.Эти относительно легкие побочные эффекты лечения могут реагировать на антигистаминные препараты или короткий курс кортикостероидов. Однако у пациентов с высоким уровнем циркулирующих микрофилярий (микрофиляремией) быстрое высвобождение антигенов паразитов из умирающих микрофилярий после введения ДЭК может спровоцировать тяжелые осложнения, включая почечную недостаточность, шок, кому и смертельный энцефалит (5). Кортикостероиды и антигистаминные препараты не доказали свою эффективность в предотвращении этих осложнений.Хотя было показано, что аферез эффективен в снижении уровня микрофиляремии и предотвращении серьезных побочных эффектов лечения ДЭК, эта процедура является дорогостоящей и не широко доступной (28). Снижение уровня микрофилярий в крови с помощью альбендазола — потенциальный альтернативный подход (см. Выше).

Хирургическое удаление взрослых червей из субконъюнктивы обычно не показано, поскольку миграция взрослых паразитов через глаз является преходящей и, хотя и неудобной, не приводит к необратимому повреждению глаза.Кроме того, процедура вряд ли будет излечивающей, так как маловероятно заражение одним взрослым паразитом. Большинство взрослых паразитов в подкожных тканях не вызывают симптомов до тех пор, пока пациент не лечится DEC, когда могут появиться зудящие подкожные червеобразные папулы, содержащие умирающих взрослых червей. Поскольку опухоль проходит в течение нескольких часов или дней без последствий, хирургическое удаление требуется редко.

Микрофиляриальный клиренс происходит в течение нескольких дней после начала лечения ДЭК (37).Это может сопровождаться временным обострением симптомов, включая опухоль Калабара, крапивницу, червеобразные подкожные папулы, артралгии и миалгии, а также лабораторные аномалии, включая эозинофилию, гематурию и протеинурию. Обычно они проходят к концу трехнедельного курса терапии. Из-за возможности повреждения органа-мишени в условиях выраженной эозинофилии, разрешение эозинофилии должно быть задокументировано, и следует рассмотреть возможность повторного лечения бессимптомных пациентов со стойкой эозинофилией.Несмотря на то, что после лечения ДЭК в отсутствие повторного воздействия сообщалось о рецидиве микрофиляремии после успешного выведения, уровни, как правило, низкие, и мониторинг уровней микрофиляреии в крови после документирования амикрофиляремии после терапии ДЭК (при отсутствии повторного воздействия) может появиться. ненужный.

Ни лабораторные параметры до, ни после лечения, включая количество эозинофилов, поликлональные IgE или уровни антифиляриальных антител, не позволяют прогнозировать клинический рецидив.Кроме того, рецидив, подтвержденный рецидивом опухолей Калабара или подкожных паразитов, может произойти при отсутствии лабораторных отклонений в течение как минимум 8 лет после очевидно успешной терапии (24). Таким образом, пациенты должны находиться под клиническим наблюдением для выявления рецидива в течение длительного периода времени (взрослые паразиты могут жить до 17 лет (10).

Общий

Меры индивидуальной защиты, в том числе избегание мест, где много укусов мух, использование защитной одежды и репеллентов от насекомых, могут помочь снизить воздействие инфекционных мух.

Профилактика противопаразитарными средствами

В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании DEC в дозе 300 мг еженедельно обеспечивал эффективную химиопрофилактику для долгосрочных путешественников в эндемичные для Loa районы (30). Хотя предлагалось ежемесячное введение 100 мг ДЭК в течение трех дней подряд, контролируемые исследования этой схемы не проводились (8).

В настоящее время нет вакцин для профилактики или лечения лоаоза.

Основное противоречие в лечении лоаоза заключается в том, следует ли и как лечить пациентов с высоким уровнем циркулирующих микрофилярий, у которых могут возникнуть серьезные и опасные для жизни осложнения терапии.В районах Африки, где лоаз является эндемическим заболеванием, лечение лоаоза, как правило, предназначено для тех, у кого есть симптомы и низкий уровень микрофиляремии. Из-за его безопасности и эффективности в отношении микрофилярного клиренса при онхоцеркозе, однократная доза ивермектина использовалась для снижения микрофилярной нагрузки при лоазе до лечения DEC. Однако данные из Камеруна и других эндемичных регионов Африки указывают на то, что тяжелые неврологические осложнения, вторичные по поводу лечения ивермектином, могут возникать у пациентов с высоким уровнем микрофиляремии Loa loa (13).Хотя в одном исследовании альбендазол был эффективен в снижении микрофиляремии Loa loa без заметных побочных эффектов, полезность этого режима ограничена продолжительностью используемого курса (3 недели) и задержкой между введением препарата и микрофиляриальным клиренсом (3-6 месяцев). (22).

1. Лекарства от паразитарных инфекций (3 -е издание ). Med Lett Drugs Ther. 1998; 40 (1017): 1-12. [PubMed]

2. Бакаджика Д.К., Ниго М.М., Лоцима Дж.П., Масикини Г.А., Фишер К., Ллойд М.М., Вейл Г.Дж., Фишер П.У.Филяриатная антигенемия и ночная микрофиляремия крови Loa loa в районе, где отсутствует банкрофтианский филяриатоз, в Демократической Республике Конго. Am J Trop Med Hyg 2014; 91: 1142-8 [PubMed]

3. Буссинеск М., Гардон Дж., Гардон-Вендель Н., Камньо Дж., Нгуму П., Чиппо Дж. Три вероятных случая энцефалопатии Loa loa после лечения онхоцеркозом ивермектином. Am J Trop Med Hyg 1998; 58: 461-9. [PubMed]

4. Büttner DW, Wanji S, Bazzocchi C, Bain O, Fischer P.Обязательные симбиотические эндобактерии Wolbachia отсутствуют у Loa loa. Филария Дж. 2003 2:10 [PubMed]

5. Карме Б., Булесте Дж., Бутес Х., Puruehnce MF. Пять случаев энцефалита при лечении лоаоза диэтилкарбамазином. Am J Trop Med Hyg 1991; 44: 684-90. [PubMed]

6. Chippaux JP, Boussinesq M, Gardon J, Gardon-Wendel N, Ernould JC. Риск серьезных побочных реакций при массовом лечении ивермектином в эндемичных по лоаазу районах. Паразитол сегодня 1996; 12: 448-50.[PubMed]

7. Chippaux JP, Ernould JC, Gardon J, Gardon-Wendel N, Chandre F, Barberi N. Лечение лоаза ивермектином. Транс Соцтроп Мед Хиг 1992; 86: 289. [PubMed]

8. Герцог BOL. Исследования по химиопрофилактике лоаоза. II. Наблюдения за диэтилкарбамазин цитратом (баноцидом) в качестве профилактического средства у человека. Ann Trop med Parasitol 1962; 57: 82-96. [PubMed]

9. Герцог Б.О. Влияние диэтилкарбамазина на взрослых лоа обезьян. Ann Trop med Parasitol 1990; 84: 387-92.[PubMed]

10. Эвеланд Л.К., Ермаков В., Кенни М. Инфекция Loa loa без микрофиляриемии. Trans R Soc Trop Med Hyg 1975; 69: 354-5. [PubMed]

11. Финк Д.Л., Камньо Дж., Натман ТБ. Быстрые молекулярные анализы для специфического обнаружения и количественного определения микрофиляремии Loa loa. PloS Negl Trop Dis 2011; 5: e1299 [PubMed]

12. Гантуа Н., Рапп К., Готре П., Фико С., Савини Х., Ларреше С., Саиди Р., Кревон Л., Саймон Ф. Завозный лоаз во Франции: ретроспективный анализ 47 случаев.Travel Med Infect Dis 2013; 11: 366-73 [PubMed]

13. Гардон Дж., Гардон-Вендель Н., Деманга-Нганге, Камньо Дж., Чиппо Дж. П., Буссинеск М. Серьезные реакции после массового лечения онхоцеркоза ивермектином в районе, эндемичном для инфекции Loa loa . Ланцет 1997; 350: 18-22. [PubMed]

14. Gardon J, Kamgno J, Folefack G, Gardon-Wendel N, Bouchite B, Boussinesq M. Заметное снижение микрофилеемии Loa loa через шесть и двенадцать месяцев после однократного приема ивермектина.Trans R Soc Trop Med Hyg 1997; 91: 593-4. [PubMed]

15. Gobbi F, Postiglione C, Angheben A, Marocco S, Monteiro G, Buonfrate D, Mascarello M, Gobbo M, Boussinesq M, Bisoffi Z. Импортный лоаз в Италии: анализ 100 случаев. Travel Med Infect Dis 2014; 12: 713-7. [PubMed]

16. Херрик Дж. А., Метену С., Макия М. А., Тайлар-Вильямс, Калифорния, Закон М. А., Клион А. Д., Нутман ТБ. Связанные с эозинофилом процессы лежат в основе различий в клинической картине лоаоза между временными жителями и коренными жителями эндемичных для лоа территорий.Clin Infect Dis 2015; 60: 55-63 [PubMed]

17. Hovette P, Debonne JM, Touze JE, Gaxotte P, Imbert P, Fourcade L, Laroche R. Эффективность лечения ивермектином Loa loa пациентов с филяриозом без микрофиляремии. Энн Троп Мед Паразитол 1994; 88: 93-4. [PubMed]

18. Kamgno J, Pion SD, Tejiokem MC, Twum-Danso NA, Thylefors B, Boussinesq M. Рандомизированное контролируемое двойное слепое испытание с ивермектином на микрофиларемии Loa loa: эффективность низкой дозы (приблизительно 25 мкг / кг) по сравнению с текущей стандартной дозой (150 мкг / кг).Trans R Soc Trop Med Hyg. 2007; 101: 777-85 [PubMed]

19. Таби Т.Э., Бефиди-Менге Р., Нутман ТБ, Хортон Дж., Фолефак А., Пенсия Э, Фуалем Р., Фогако Дж., Гванмезия П., Куакьи И., Леке Р. Лоаз человека в камерунской деревне: двойной слепой, плацебо-контролируемое перекрестное клиническое исследование трехдневного режима приема альбендазола. Am J Trop Med Hyg 2004; 71: 211-5. [PubMed]

20. Камньо Дж., Буссинеск М. Эффект однократной дозы (600 мг) альбендазола на микрофиларемию Loa loa. Паразит 2002; 9: 59-63.[PubMed]

21. Клион А.Д., Хортон Дж., Нутман ТБ. Терапия альбендазолом лоаза, резистентного к лечению диэтилкарбамазином. Clin Infect Dis 1999; 29: 680-2. [PubMed]

22. Клион А.Д., Масугбоджи А., Хортон Дж., Экуэ С., Ланмассо Т., Ауиссу Н.Л., Натман ТБ. Альбендазол при лоазе человека: результаты двойного слепого плацебо-контролируемого исследования. Журнал Infect Dis 1993; 168: 202-6. [PubMed]

23. Клион А.Д., Масугбоджи М., Саделер Б.С., Оттесен Е.А., Нутман ТБ. Лоаз в эндемичных и неэндемичных популяциях: иммунологически опосредованные различия в клинических проявлениях.Журнал Infect Dis 1991; 163: 1318-25. [PubMed]

24. Клион А.Д., Оттесен Э.А., Нутман ТБ. Эффективность диэтилкарбамазина в лечении лоаоза, приобретенного иностранными посетителями в эндемичных регионах: долгосрочное наблюдение. Журнал инфекционных болезней 1994; 169: 604-10. [PubMed]

25. Липнер М., Ло М.А., Барнетт Э., Кистоун Дж.С., фон Зонненбург Ф., Лутан Л., Превоц Д.Р., Клион А.Д., Натман ТБ; Сеть видеонаблюдения GeoSentinel. Филяриатоз у путешественников, представляющих сеть наблюдения GeoSentinel.PloS Negl Trop Dis 2007; 26; 1: e88 [PubMed]

26. Майзелс Р.М., Денхэм Д.А. Диэтилкарбамазин (ДЭК): иммунофармакологические взаимодействия антифиляриального препарата. Паразитол 1992; 105: S49-60. [PubMed]

27. МакГарри, Пфарр К., Эгертон Дж., Хорауф А., Акуэ Дж. П., Эньонг П., Ванджи С., Клегер С. Л., Бьянко А. Е., Бичинг, штат Нью-Джерси, Тейлор М.Дж. Доказательства против симбиоза Wolbachia в Loa loa. Филария Дж. 2003; 2: 9. [PubMed]

28. Muylle L, Taelman H, Moldenhauver R, Van Brabant R, Peetermans M.Польза афереза ​​для извлечения микрофилярий при лечении лоаоза. Br Med J 1983; 287: 519-20. [PubMed]

29. Нутман Т. Б., Миллер К. Д., Маллиган М., Оттесен Е. А.. Loa loa Инфекция у временно проживающих в эндемичных регионах: распознавание гиперреактивного синдрома с характерными клиническими проявлениями. Журнал Infect Dis 1986; 154: 10-8. [PubMed]

30. Натман Т.Б., Миллер К.Д., Маллиган М., Рейнхардт Г.Н., Карри Б.Дж., Стил С., Оттесен Э.А. Профилактика лоаоза человека диэтилкарбамазином.N Engl J Med 1988; 319: 750-56. [PubMed]

31. Саса М. Филяриатоз человека: глобальный обзор эпидемиологии и борьбы. Балтимор: издательство University Park Press; 1976.

32. Шнайдер Дж. Лечение филяриоза Filaria loa 1-диэтилкарбамил-4-метилпиперазином. Bull Soc Pathol Exotique 1950; 43: 270-5.

33. Тейлор Х.Р., Мерфи Р.П., Ньюленд Х.С., Уайт А.Т., Д’Анна С.А., Кейван-Лариджани Э., Азиз М.А., Купп Э.В., Грин Б.М. Лечение онхоцеркоза. Глазные эффекты ивермектина и диэтилкарбамазина.Arch Ophthalmol 1986; 104: 863-70. [PubMed]

34. Цаге-Донгмо Л., Камгно Дж., Пион С.Д., Моё-Сомо Р., Буссинеск М. Эффекты 3-дневного режима альбендазола (800 мг в день) на микрофиларемию лоа лоа. Анн Троп Мед Хиг 98: 707-15. [PubMed]

35. Тернер Дж. Д., Тендонгфор Н., Эсум М., Джонстон К. Л., Лэнгли Р. С., Форд Л., Фарагер Б., Шпехт С., Манд С., Хёрауф А., Эньонг П., Ванджи С., Тейлор М. Дж.. Макрофилярицидная активность после лечения Onchocerca volvulus только доксициклином в зоне совместной эндемичности Loa loa: рандомизированное контролируемое исследование.PloS Negl Trop Dis 2010; 4: e660. [PubMed]

36. Van Hoegaerden M, Flocard F, Salle A, Chabaud B. Использование мебендазола в лечении филяриозов, вызванных Loa loa и Mansonella perstans . Энн Троп Мед Паразитол 1987; 81: 275-82. [PubMed]

37. Woodruff AW. Уничтожение микрофилярий Loa loa в печени при лоаозе, обработанном баноцидом (Hetrazan).

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован.