Как проводится гистология: Гистология: показания, как проводится, этапы

Содержание

Гистологические исследование матки и эндометрия — биопсия с гистологическим исследованием

Гистологический анализ широко применяется для диагностики онкологических заболеваний. Он дает высокоточную информацию о типе клеток взятого материала. Такой метод обследования основывается на изучении тканей, полученных в результате различных процедур: биопсии, среза, пункции, мазка.

Что диагностируют с помощью гистологического анализа

Гистологический анализ призван помочь в диагностике:

  • злокачественных, доброкачественных опухолей – это основное его назначение;
  • причин женского бесплодия;
  • заболеваний ЖКТ воспалительного характера;
  • оценки характера патологического процесса – воспалительного, дегенеративного, предракового;
  • аутоиммунных, инфекционных заболеваний;
  • заболеваний спинного, головного мозга.

Кроме того, такой метод обследования актуален в рамках пренатальной диагностики.

Он позволяет своевременно уточнить состояние здоровья плода и подтвердить/опровергнуть предположение о наличии внутриутробной патологии.

Значение анализа в гинекологии

Гистологическое исследование биопсийного материала имеет особое значение в гинекологии. Оно не только позволяет изучить ткани шейки и тела матки, но и дает возможность получить точную информацию о состоянии будущего малыша.

Этот диагностический метод в обязательном порядке применяется после выкидыша или прерывания замершей беременности. Это позволяет выявить причины патологии и принять меры для профилактики в будущем.

Кроме того, гистологию проводят женщинам, страдающим от увеличения периода менструации, обильных выделений, болях в пояснице и внизу живота. При подозрениях на заболевания воспалительного характера, опухоли, кондиломы, дисплазии и ряд других заболеваний такой анализ также является неотъемлемой частью диагностических мероприятий. Гистологию яичниковой ткани проводят для определения типа опухолей.

Как выполняется анализ

В связи с тем широким перечнем заболеваний, в диагностике которых может помочь гистологическое исследование, забор тканей проводится разными способами.

Биопсия с гистологическим исследованием – основной способ получения материала. Она может осуществляться в результате хирургического вмешательства и носит название инцизионной биопсии. Эксцизионная представляет собой изучение опухоли или части тканей, полностью удаленных хирургически.

Забор вне оперативного вмешательства выполняется с помощью щипчиков, иглы или небольшой трубочки, кюреты, инструментов для забора мазка – врач выбирает способ в зависимости от того, какие именно ткани подлежат изучению.

Далее материал направляется в лабораторию и исследуется с помощью электронного микроскопа. Предварительно его обрабатывают специальным веществом и проводят уплотнение парафином, нарезают тонкими срезами и окрашивают. Специалист получает возможность увидеть структуру причинного участка, определить характер патологических изменений. Срок готовности результатов составляет около 7-10 дней.

Если требуется получить данные быстрее, применяют ускоренную методику – материал быстро замораживают, нарезают и изучают под микроскопом. В этом случае результатов придется ждать не более часа.

Где сдать анализ на гистологию?

Сдать гистологический анализ в Москве вы можете в клинике «Семейный доктор». Забор материала выполняют квалифицированные специалисты с соблюдением всех условий и норм. У нас вы можете сдать анализ в комфортных условиях и получить результаты в регламентированные сроки.

Мы работаем в выходные и праздничные дни. Запись по телефону контакт-центра +7 (495) 775 75 66 и в регистратуре клиники.

Стоимость

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики, ведущий специалист клиники

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики, ведущий специалист клиники

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

врач акушер-гинеколог, врач ультразвуковой диагностики

Гистологические исследования — показания, анализы, результаты

directions

Гистологическое исследование представляет собой анализ биоматериала на тканевом уровне. Этот метод исследования является инвазивным, и его проводят только в случаях уже развившегося заболевания. При диагностике врач может определить точный метод лечения и выбрать необходимую тактику. Профилактическое направление очень важно для выявления ранних форм патологии. Своевременное обнаружение болезни позволит избежать ещё более разрушающих последствий для организма, поэтому лучше всего проходить все обследования вовремя. Сдать необходимые анализы Вы сможете в нашем медицинском центре.


Врачи-специалисты

Старшая медицинская сестра

Медицинская сестра

Медицинская сестра эндоскопического кабинета

Врач-терапевт

Результат в течение 25 минут, с момента сдачи биоматериала

Наши клиники в Санкт-Петербурге

Получить подробную информацию и записаться на прием Вы можете по телефону +7 (812) 640-55-25

Методы гистологических исследований:

  • Биопсия – это изучение тканей и органов, которые были удалены во время хирургического вмешательства. При нём исследуются маленькие кусочки тканей и органов. С помощью этого способа можно выявить предопухолевую патологию.

Ни в коем случае не стоит забывать, что безобидные родинки могут оказаться злокачественной опухолью, а бородавки – раком. Только результаты гистологического исследования смогут ответить, какое это новообразование.

Показания к проведению исследования:

  • подтверждение либо установка диагноза;
  • контроль над заболеванием;
  • установление стадии опухоли.

С помощью гистологического исследования можно выявить возникновение полипа. Данное аномальное разрастание тканей образуется там, где есть слизистая оболочка – в носу, желудке, толстой и тонкой кишке, теле матки.

Полип желудка – редкое заболевание, которое невозможно определить без биопсии по симптомам. Существуют некоторые клинические симптомы, которые появляются не часто: кровотечения, рвота, боль в животе. В большинстве случаев образования находят во время обследования по поводу других заболеваний. Причиной появления полипов могут послужить нарушения в слизистой оболочке или воспалительные процессы.

Так же в бессимптомном виде протекает полип шейки матки. Очень редко рост полипов в этой области становится толчком к возникновению кровотечений, нерегулярных менструаций, сильной боли, обильных выделений белого цвета.

Биопсия эндометрия проводится для диагностики состояния слизистой оболочки. При помощи этой процедуры могут выявить утолщение и разрастание слизистой матки, а так же карциномы. Исследование эндометрия происходит как обычным методом, так и пайпелем – небольшой пластмассовой трубкой, диаметр которой составляет в среднем 3 мм. Некоторые врачи репродуктологи назначают пайпель-биопсию как специальное обследование, чтобы исключить невынашивание плода.

Гистологические исследования могут быть частью мониторинга беременности. Хорионы – это клетки, содержащие в себе тот же генетический материал, что и плод. Биопсия хорионов может выявить такие заболевания как: синдром Эдвардса, Патау, Дауна и многие другие генные болезни, сопровождающиеся умственной отсталостью или уродствами. Проводят её на сроке до 12 недель. Исследование клеток плаценты назначается во втором триместре. Амниоцентез проводят значительно позже при сроке 16-24 недели. Диагностические способности данного вида анализа намного выше, чем двух предыдущих, но вместе с этим, чем больше срок, тем опаснее будет прерывание беременности. Пункция пуповины плода направлена на выявление хромосомных и генных болезней. Она проводится при сроке 22-25 недель.

Подготовка к проведению биопсии может носить особый характер в зависимости от вида гистологических исследований. Обязательно назначается общий анализ крови и на ВИЧ, СПИД, гепатит и др., а женщинам следует дополнительно пройти гинекологическое обследование и сдать мазок (при биопсии матки). Можно отметить следующие несколько общих правил, которые необходимо соблюдать:

  1. заблаговременно предупредите врача о приёме каких-либо лекарственных средств, а так же скажите, на какие препараты у Вас имеется аллергия;
  2. не принимайте спиртные напитки за несколько дней до проведения гистологического исследования.

831,1312,1274,832,871,1348

Делал ФГДС желудка, очень неприятная продцедура сама по себе. Попал к Мордвинцевой Анне Ахатовне и решил больше ФГДС делать у других специалистов не буду. Очень квалифицированный специалист, все раскладывает по полочкам, ставит правильный диагноз, а самое ГЛАВНОЕ саму продцедуру Анна делает очень профессионально и безболезнено, все неприятные ощущения сходят на нет, очень внимательна к пациентам. Хочу выразить огромную благодарность Анне и советую записываться именно к ней!

Локотош Сергей Владимирович 06.01.2021 22:19
medi-center.ru

Хочу выразить благодарность Вашей клинике и доктору Герасименок Григорию Александровичу. Первый раз записался в Вашу клинику и не пожалел о своём выборе. Доктор был мне назначен Герасименок Г.А -выслушал, осмотрел внимательно, быстро установил диагноз,назначил правильное лечение. А сотрудники клиники по телефону интересовались состоянием здоровья (впервые встречаю такое отношение к пациентам). Большое спасибо сотрудникам клиники и особенно доктору Герасименок Григорию Александровичу.

Жданова Анна Михайловна 25.11.2020 14:32
medi-center.ru

Хочу выразить огромную благодарность врачу терапевту Дерешовскому Александру Сергеевичу. На 28 неделе беременности не обошла стороной и нас эта зараза под названием COVID-19. В день вызова врача пришёл Александр Сергеевич, посмотрел, послушал, взял мазки на ковид, назначил грамотное лечение. И самое главное всегда со мной был на связи, и утром , и днём, и вечером. Зараза отступила. Спасибо Вам, Александр Сергеевич, за Ваш труд в столь не простое для всех время. Здоровья Вам и Вашим близким!????

Добры день всем, хочу выразить благодарность врачу-неврологу Братановой Ирине Валерьевне. На прием пришел с параличом лицевого нерва, левая сторона лица была практически парализована. Как оказалось, иглорефлексотерапия вполне успешно лечит такие болезни, спустя пару сеансов были заметны изменения в лучшую сторону, а на 8-9-м все пришло в норму, считаю это не только своей заслугой, но и врача :). Цены на ИРТ по району кстати довольно умеренные, а клиника на ул.Поликарпова 6 произвела хорошее впечатление.

Хочу выразить большую благодарность клинике на аллее Поликарпова 6к2, всегда вежливые, доброжелательные девушки на ресепшн. Помогли удобно состыковать время приёма врачей. А также отдельно поблагодарить замечательнейшего доктора Гиндрюк Василия Васильевича за профессионализм, заботу и внимание! Наблюдаться у него одно удовольствие!!!

Наблюдаюсь у многих врачей по разным направлениям в отделении А. Поликарпова, все очень нравится, но всем беременным и не только-хочу посоветовать прекрасного врача-гинеколог Гиндрюк Василий Васильевич. Настоящий профессионал, все четко и по делу, всегда выслушает, подскажет, укажет, успокоит(если что)! После родов планирую наблюдаться, как у гинеколога, только у него! Спасибо ему большое!

Гистология: что это за анализ?

Взятие биологического материала и его тщательный гистологический анализ очень значимы во многих отраслях медицины. С целью выявления патологии может назначаться, например, гистология родинки, шейки матки, органов пищеварительного тракта, эндокринной системы и так далее. На наши вопросы о гистологии ответил врач — онколог-маммолог «Клиники Эксперт» Воронеж Сергей Викторович Ежов.

— Сергей Викторович, расскажите, что это за анализ — гистология? В чём его суть?

 — Гистологический анализ — это высокоточный метод исследования, позволяющий определить патологическое отклонение в строении ткани. Данный метод используется во многих областях медицины, но его основная суть заключается в том, что с помощью этого метода можно диагностировать наличие злокачественных образований, определить их структуру, а также стадию патологического процесса.

— Что может являться биоматериалом для гистологического исследования?

— Биоматериалом может служить та или иная подозрительная ткань (кожа, слизистая оболочка, мышца, кость), взятая при помощи биопсии, либо препарат, полученный в результате хирургического вмешательства.

— Когда назначается гистология?

— Как я уже говорил, гистологическое исследование может применяться во многих направлениях медицины, но особенная его ценность заключается в определении природы и характера изменений в ткани при малейшем подозрении на онкологический процесс. Также это исследование проводят перед назначением противоопухолевой терапии для разработки плана лечения и во время лечения с целью контроля его эффективности.

— Что показывает гистология?

— Гистологический анализ даёт возможность обнаружить воспалительные процессы в ткани, установить природу того или иного новообразования (т. е. доброкачественное оно или злокачественное), определить уровень злокачественности, а также выявить локализацию первичного опухолевого очага. Надо понимать, что расшифровкой результатов гистологического исследования должен заниматься только специалист. Я бы не рекомендовал пациентам делать это самостоятельно.

Биопсия

— Как сдать анализ на гистологию? Нужна ли специальная подготовка?

— Перед тем, как провести гистологическое исследование, необходимо выполнить биопсию и отправить полученный при этом материал (биоптат) на анализ. Как таковой подготовки биопсия не требует, существует лишь ряд ограничений и рекомендаций, которых нужно придерживаться пациенту накануне и во время забора биоптата. Важно поставить врача в известность обо всех принимаемых препаратах. Накануне исследования необходимо отказаться от лекарственных средств, влияющих на свёртываемость крови (по согласованию с доктором, назначившим их), а также сообщить врачу, который будет выполнять биопсию, о наличии аллергии. Нежелательно проведение данной манипуляции у женщин в дни менструации. Противопоказано употребление алкоголя.

— Как проводится гистология?

— Полученный при биопсии материал помещается в формалин и направляется на гистологическое исследование в патоморфологический центр. Там материал заливается парафином (чаще всего). После остывания, отвердевания делаются тонкие срезы, на которые наносятся различные реактивы для детального изучения ткани под микроскопом врачом-патоморфологом.

— Сколько делается гистологический анализ?

— Если результат очевидный и не вызывает сомнений, выдача заключения производится в среднем через 7-10 дней. При возникающих сомнениях, подозрениях в точности поставленного диагноза препарат могут изучать дольше.

— Бывают ли ошибки в результатах гистологии?

— К сожалению, особенно в небольших населённых пунктах, могут возникать проблемы с качеством проведения гистологического анализа. Это связано с разными причинами (отсутствие врачей, оборудования, расходных материалов). Но в случае появления сомнений в правильности гистологического заключения обычно назначается пересмотр готовых препаратов в другом патоморфологическом центре.

Хотите больше узнать о других видах анализов? Читайте статьи в нашей рубрике
Записаться на приём к онкологу можно здесь
ВНИМАНИЕ: услуга доступна не во всех городах

Беседовала Марина Воловик

Редакция рекомендует:

Предрак: бояться или не обращать внимания?
У страха глаза велики. Так ли опасна миома?
Рак груди — не приговор!

Для справки:

Ежов Сергей Викторович

В 2007 году окончил лечебный факультет Курского государственного медицинского университета.

2007 — 2009 гг. — клиническая ординатура по специальности «Онкология» в Медицинском радиологическом научном центре РАМН г. Обнинск (сегодня — МРНЦ им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России).

В настоящее время — врач — онколог-маммолог в «Клинике Эксперт» Воронеж.

Приём ведёт по адресу: ул. Пушкинская, 11.

Анализ на гистологию — консультации и диагностика заболеваний, качественное лечение в Израильских клиниках

Получить консультацию

Анализ на гистологию — сверхточный метод досконального изучения тканей на предмет наличия опасных и доброкачественных новообразований, патологий, особенностей строения и развития клеток. Данное исследование отличается повышенной точностью результатов и максимальной информативностью, поэтому на основе анализов ставят наиболее верные диагнозы и разрабатываются схемы высокоэффективного лечения.

 

Расшифровка анализа на гистологию

 

Каким образом проводится анализ на гистологию?

 

Современный анализ на гистологию включает несколько этапов:

  1. Взятие у пациента образца. Образцы для анализа на гистологию бывают различные (всё зависит от органа, нуждающегося в исследовании). Это могут быть мазочки, отпечатки, плёнки, сверхтонкие срезы.
  2. Полученный фрагмент ткани фиксируют в специальном химсоставе.
  3. Образец окрашивают гематоксилином или эозином, чтобы улучшить контрастность структуры ткани.
  4. Исследование образчиков под электронным или другим сверхмощным микроскопом для выявления наличия скопления болезнетворных клеток и опасных образований.

 

Что показывает анализ гистологии?

 

Гистологические исследования довольно дорогостоящие, но анализ гистологии на 100 % оправдывает себя в таких случаях:

  • Когда необходимо подтвердить или опровергнуть наличие раковых образований.
  • Когда нужно выявить причины неудачных беременностей или бесплодия у женщин.
  • Для полного изучения состояния органов женской половой системы.
  • Когда в органах прогрессирует воспалительных процесс, но причину сложно установить.
  • После полостных операций.

 

Как долго готовятся анализы на гистологию?

 

Результат гистологических исследований и анализов на гистологию может быть известен уже через 5–10 дней, однако это усредненные сроки, и каждый медцентр предлагает индивидуальное время предоставления результатов анализа гистологии. Если клиника не обладает собственной лабораторией, тогда сроки увеличиваются на 2–4 дня (время на отправку и доставку образцов).

Также у пациентов есть возможность провести экспресс-анализ гистологии в течение нескольких часов. Это делается в случае, когда во время полостной операции у хирурга появляются обоснованные подозрения на наличие онкологических клеток в тканях.

 

Анализ на гистологию: расшифровка

 

В заключении (расшифровке анализа гистологии) указываются все результаты проведённого анализа на гистологию, однако правильно расшифровать медтермины способны только специалисты. Обратившись к врачу, пациент может получить полную информацию о состоянии здоровья, а в случае обнаружения опасных заболеваний — квалифицированную помощь.

 

Сколько стоит расшифровка анализа гистологии?

 

Конечно, цена расшифровки гистологического анализа зависит от клиники, в который вы его проводите. Если вы хотите получить качественное второе мнение онколога, то необходимо забрать блоки с гистологическим материалом и принести либо отправить в другую клинику. Если повторное заключение и расшифровка анализа на гистологию проводят без гистологического материала — значит это не «второе мнение» и не «ревизия гистологии», а подтверждение диагноза одного врача, другим врачом.

Когда речь заходит о такой важной сфере медицины как онкология, расшифровка анализа на гистологию может значительно улучшить ход лечения, а иногда даже спасти жизнь пациенту.

Наша компания BK Medical Logistic предлагает полную ревизию и расшифровку анализа гистологии после специального исследования в израильской клинике, специализированной именно на онкологии и онкологических заболеваниях, с высокотехнологичными лабораториями и компетентными врачами, известными во всем мире.

Цена расшифровки анализа на гистологию может варьироваться, но в среднем это 550-650 долларов США.

 

Как проводиться повторный анализ на гистологию?

 

На данный момент, только наша компания может доставить гистологический материал из Украины или России в Израиль на медицинскую экспертизу. Мы используем специальные холодильники и упаковки для того, чтобы результаты анализа на гистологию добрались до клиники в Израиле в целости и сохранности.

После того, как блоки доставлены в Израиль, анализы на гистологию проходят повторную проверку и изучение в лаборатории, после чего, врачом готовится специальное заключение с результатами и расшифровкой гистологии.

 

Как обратиться по поводу повторного анализа на гистологию?

 

Даже если вы просто хотите задать интересующие вас вопросы и получить информацию о ревизии анализов на гистологию, вы можете обратиться к нам по телефону, указанному вверху сайта. ЗВОНКИ И КОНСУЛЬТАЦИЯ ПО ЭТОМУ НОМЕРУ — БЕСПЛАТНЫ!

 

Для жителей каких стран мы можем организовать повторный анализ гистологии?

 

Компания BK Medical Logistic предоставляет свои услуги в сфере медицинской логистики, ревизии и расшифровке анализа на гистологию в Украине, России, Беларуси и Казахстане.

Гистологическое исследование биопсийного материала и материала, полученного при хирургических вмешательствах (эндоскопического материала; тканей женской половой системы; кожи, мягких тканей; кроветворной и лимфоидной ткани; костно-хрящевой ткани)

Проводятся исследования любого материала, отчуждённого у пациентов с различными патологическими процессами: бронхобиопсии, гастробиопсии, колонобиопсии, биопсии ЛОР-органов и другие биопсии различных органов и тканей, взятые инвазивными и эндоскопическими методами.

Также исследуется операционный материал, органы и ткани, удалённые при различных операциях по поводу онкологических заболеваний, специфических и неспецифических, воспалительных и не воспалительных процессах. При этом даётся гистологический диагноз с оценкой уровня дифференцировки или степени злокачественности опухоли, степени распространённости патологического процесса или клинической стадии, состояние краёв резекции, фоновых изменений.

При диагностических биопсиях даётся микроскопическое описание и нозологическое заключение. В ясных и банальных случаях микроскопическое описание не даётся или ограничивается минимально, заключение ограничивается гистологическим диагнозом.

Гистологический диагноз может быть описательным в тех случаях, когда морфологические изменения не специфичны и не свидетельствуют в пользу какого-либо заболевания или когда недостаточно представляется клиницистами клиническая картина конкретного пациента.

Гистологическое заключение даётся в соответствии с последними гистологическими классификациями ВОЗ и медицинской номенклатурой принятой у нас в стране.

Для качественного исследования необходимо правильно оформлять направление на гистологическое исследование:

  • заполнять все указанные в направлении пункты с точным указанием места локализации взятого материала, его связь с окружающими тканями, обязательно указывать основные клинические проявления и давность процесса;
  • иссечение кусочков из органов для диагностической биопсии следует проводить исключительно острым инструментом, избегать сжатия пинцетом или зажимом с целью предупреждения разминания и деформации тканей. Не рекомендуется получение биопсийного материла электроинструментами, так как происходит деформация гистологических тканей и диагноз возможно поставить только в предположительной форме;
  • объект, взятый для гистологического исследования, помещают в заранее приготовленную ёмкость с фиксирующей жидкостью 10% формалин; 10% формалин наливают в чистую посуду, так, чтобы формалина было не менее чем в 10 раз больше объёма фиксируемого объекта, после чего посуду закрывают герметической крышкой или пробкой. Нельзя применять формалин более высокой концентрации или формалин с вышедшим сроком годности — с белым осадком, нельзя помещать мелкий диагностический материал в посуду из тёмного малопрозрачного стекла с узким горлышком;
  • в случаях, когда диагностический материал содержит примесь большого количества крови (соскобы со слизистых оболочек женских половых органов), следует, до помещения в фиксирующую жидкость, освободиться от крови, путём промывки соскобов в ванночке с теплым физиологическим раствором, поместив их в марлевый мешочек, либо промыть тёплой водой под краном, а затем, промокнув излишки промывной жидкости, поместить в фиксатор. При этом соскоб не должен содержать кровь, которая пагубно влияет на обработку материала, уменьшает количество представительного диагностического материала и снижает полноценность гистологического исследования;
  • посуда с диагностическим или операционным материалом обязательно маркируется: пишется фамилия, инициалы и возраст пациента, присваивается номер. Маркировка не должна проводиться на крышке, закрывающей посуду;
  • фрагменты ткани или органа, полученные при биопсии с диагностической целью, запрещается делить на части и посылать в разные патологоанатомические лаборатории;
  • материал для патогистологического исследования должен быть достаточно представительным, а кусочки, после специальной обработки и окраски, сохранять информацию для диагноза или диагностического описания;
  • материал в виде слизи, экссудата или крови, а также очень мелкий материал (менее 1 мм) не считается полноценным объектом гистологического исследования.

Гистология – гистологическое исследование и заключение, цена│Alpha-medical

Гистология – одна из дисциплин медицины, которая занимается изучением строения ткани. Это направление помогает диагностировать различные патологии, а также определить характер процесса, стадию болезни, способы лечения, которые помогут максимально эффективно разобраться с проблемой.

Чаще всего гистологические исследования используют, чтобы определить есть ли у человека онкологическое заболевание. Также гистологию используют в проктологии и гастроэнтерологии. Благодаря исследованиям можно узнать, какой вид и стадия патологического процесса, и какое именно лечение стоит подобрать, чтобы достичь максимального эффекта.

Наша клиника «Альфа-медикал» также занимается гистологическим исследованием кусочков тканей. Их берут в процессе биопсии или других процедур, которые включают отделения кусочков кожи.

Для чего проводится такое исследование

Сегодня гистология является одним самых распространенных видов исследований, так как она позволяет выявить десятки заболеваний различного характера: инфекционного, аллергического, аутоиммунного. К тому же, можно определить, насколько опасно какое-то новообразование, какая стадия рака, и затем вовремя назначить лечение, которое будет максимально эффективным.

В каких случаях необходимо проводить гистологию клеток

Есть много симптомов, наличие которых говорит о том, что стоит провести такое исследование. Среди них можно выделить:

  • изменение участков слизистой оболочки;
  • предраковое состояние, которое выражается через язвенный колит, пищевод Барретта, другие сложные и серьезные заболевания;
  • появление новообразований, которые могут быть злокачественными;
  • необходимость идентифицировать метастазы и их очаг;
  • определение, насколько организм поражен и какая стадия заболевания;
  • проверка эффективности лечения, которое проходит пациент.

Что надо знать о гистологическом исследовании

Чтобы процедура показала верный результат, необходимо правильно ее провести. Для этого пациент должен соблюдать определенные правила, список которых зависит от того, какой именно тип эндоскопии был назначен. Например, перед колоноскопией нужно сутки очищать кишечник с помощью специальной питьевой диеты. А гастроскопию проводят исключительно натощак.

Наши врачи всегда сообщают пациентов по особенности процедуры. Поэтому им остается только соблюдать правила. А клиника, в свою очередь, гарантирует им быстрый и верный результат.

Гистологическое исследование биопсийного материала

С октября 2008 года на базе ГАУЗ Республиканского клинического диспансера начала работать единственная в республике Татарстан специализированная гистологическая лаборатория, предназначенная для исследования биопсийного материала кожи.

Гистологическое исследование кожи является ценным специализированным диагностическим методом, который широко используется в дерматологической практике и практически не имеет противопоказаний. В медицине в большинстве стран мира пожизненная гистологическая диагностика заболеваний кожи (как, впрочем, и других органов и систем) является рутинным методом исследования, без которого клиническая диагностика считается неполной и недостаточной для эффективного лечения. Для исследования у больного иссекается небольшой фрагмент пораженного участка кожи; взятие биопсийного материала проводится одноразовыми хирургическими инструментами с использованием местного обезболивания. Данная манипуляция технически проста, безболезненна и не оставляет никаких следов на коже больного.

Основной задачей гистологического исследования кожи является установление диагноза с определением стадии заболевания и его активности. Учитывая тот факт, что воспалительные заболевания кожи в большинстве случаев не имеют специфической клинической картины, четко установить и обосновать какой-либо один диагноз не всегда представляется возможным, а гистолог общепатологического профиля чаще всего не может оказать квалифицированной консультативной помощи клиницисту-дерматологу. В этом случае специалист в области клинической патоморфологии кожи определяет круг возможных заболеваний, исключает ряд заболеваний и помогает клиницисту в выборе дальнейшей тактики ведения больного. Другая, не менее важная задача, заключается о оценке течения патологического процесса под действием проводимого лечения.

Гистологическая диагностика заболеваний кожи – достаточно сложный и высокотехнологичный процесс, который обеспечен хорошим техническим оснащением клиники и высокой квалификацией врача – специалиста. Интерпретация результатов исследования осуществляется с учетом анамнеза, клинических проявлений болезни, стадии, длительности ее течения, анатомической локализации поражения, пола, физиологического состояния и возраста больного, сопутствующих заболеваний, результатов лабораторных, а иногда и специальных исследований. В процессе приготовления микропрепаратов применяются различные мотодики окраски, что повышает эффективность исследования, в ходе исследования применяется макро- микрофотосъемка, результаты каждого исследования и фотоснимки заносятся в электронную базу банных и могут впоследствии использоваться для консультативной помощи.

  • г. Казань, ул. Б.Красная, 11, тел. (843) 238-84-68
  • г. Казань, ул. Короленко, 54, тел. (843) 520-90-36

Гистология, окрашивание — StatPearls — Книжная полка NCBI

Введение

Медицинская гистология — это микроскопическое исследование тканей и органов путем разделения, окрашивания и изучения этих срезов под микроскопом. Гистология, которую часто называют микроскопической анатомией и гистохимией, позволяет визуализировать структуру ткани и характерные изменения, которым она могла подвергнуться. Из-за этого он используется в медицинской диагностике, научных исследованиях, вскрытии и судебно-медицинской экспертизе.После того, как образец ткани подвергся фиксации, обработке, заделке, разделению и окрашиванию, он может быть подвергнут анализу с помощью микроскопии, а результаты интерпретируются патологом. Выбор гистологического окрашивания для данного образца зависит от исследуемого вопроса. Расширенная интерпретация слайда гистологии в сочетании с историей болезни пациента может оказать неоценимое влияние на курс лечения и прогноз.

Проблемы, вызывающие озабоченность

Базовые знания о подготовке тканей, включая окрашивание, важно знать при интерпретации отчетов о патологии при биопсии в стационаре или амбулатории.Не всегда интерпретирующий патолог тщательно проанализировал образец ткани, включив соответствующее гистологическое окрашивание, и этот недостаток может затруднить постановку точного диагноза.

Структура

Четыре основных типа тканей человека можно окрашивать и рассматривать с использованием различных гистологических методов. Эпителий, соединительная ткань, мышечная ткань и нервная ткань имеют общие черты, но после окрашивания выглядят очень отчетливо структурно. Каждое пятно предназначено для выделения важной особенности или компонента в типе ткани.Например, одно из наиболее распространенных красителей, гематоксилин, представляет собой основной краситель, окрашивающий белки в синий цвет, а эозин окрашивает белки в розовый цвет. Эти два красителя обычно используются вместе для определения внутриклеточных органелл и белков. Из-за разнообразия существующих белков было создано несколько красителей, чтобы выделить конкретный белок, который в этом обзоре будет обсуждаться в следующих разделах. Преимущество использования специального красителя заключается в том, что он может очень хорошо выделить конкретный белок.Однако из-за своей специфики другие конструкции не будут видны. По этой причине из одного образца часто создается несколько слайдов, чтобы можно было выполнить несколько окрашиваний для сбора всей необходимой информации.

Функция

Почти все окрашивания тканей выполняются на тканях, удаленных с тела. Однако в редких случаях на ткани, оставшиеся в теле, могут воздействовать очень специализированные пятна, называемые жизненными пятнами. Эти пятна используются для идентификации определенных типов ткани и идентификации аномальной ткани, поэтому последующая биопсия может быть более точной при получении аномальной ткани.

Подготовка ткани

Перед тем, как может произойти специфическое окрашивание, образцы ткани должны пройти следующие этапы подготовки: фиксация, обработка, заделка, срезы, а иногда и поиск антигена. В современных гистологических лабораториях большинство этих шагов автоматизировано.

Fixation: Fixation использует химические вещества, чтобы сохранить структуру ткани в ее естественной форме и защитить ее от разрушения необратимо сшивающими белками. Несмотря на то, что доступно несколько специализированных фиксаторов, на этом этапе часто используется формалин с нейтральным буфером.Этап фиксации жизненно важен для остальной части процедуры гистологического окрашивания, потому что, сохраняя химический состав ткани, образец затвердевает и облегчает фазу сечения. Парафин-формалин — еще один эффективный фиксатор. Его преимущество в том, что это предпочтительный фиксатор для иммуноокрашивания; однако это требует подготовки во время фиксации. Боин — это фиксатор, используемый для исследования тканей эмбриона и мозга, поскольку он лучше сохраняет хрупкие ядра и гликоген.Его недостатком является то, что он плохо сохраняет ткани почек, а также искажает структуру митохондрий. [1]

Дегидратация: Добавление этанола завершает дегидратацию образца. Он удалял воду из образца и дополнительно укреплял ткань для возможной световой микроскопии. После нанесения этанола и по завершении обезвоживания тканей для удаления этанола используется ксилол. [1]

Заливка: Заливка — это процесс помещения образца в парафиновый воск или пластиковую смолу для улучшения процесса выделения ячеистых структур.Этот шаг следует выполнять с осторожностью, если целью является проведение иммуноокрашивания, поскольку парафиновый воск будет препятствовать проникновению антител и приведет к ложному результату. [1]

Секционирование: Секционирование включает установку образца на микротом и разрезание его на секции. Предпочтительная толщина составляет 4-5 микрометров, чтобы его можно было окрасить и положить на предметное стекло микроскопа для исследования. [1]

Поиск антигена: Этот шаг предназначен для поиска антигенов, которые могли быть покрыты на этапах фиксации и встраивания.Если перекрестное сшивание белков скрывает сайты антигена, иммуногистохимический ответ может быть не таким устойчивым. Извлечение антигена достигается с помощью нагревания и протеолитических методов для разрушения перекрестных связей и выявления эпитопов и антигенов, которые были ранее покрыты. [1] Хотя этот этап сопряжен с риском денатурации как фиксатора, так и самих антигенов, успешный метод извлечения антигена может привести к гораздо более эффективной интенсивности иммуноокрашивания.

Гистохимия и цитохимия

Гематоксилин и эозин

Как следует из названия, это два окрашивания, выполненные на последующих этапах.Гематоксилин — это основной краситель, окрашивающий кислотные структуры. В результате получается пурпурный / синий оттенок, а структуры, на которые нацелен этот краситель, называются базофильными. Базофильные структуры включают ДНК в ядрах клеток, РНК в рибосомах и грубую эндоплазматическую сеть [1].

Эозин — это контрастное окрашивание после гематоксилина и кислотный краситель, воздействующий на основные структуры. В результате получается розово-красный оттенок, а структуры, привлекающие эозин, называются эозинофильными. [1] Цитоплазма представляет собой пример эозинофильной структуры.

Пятно по грамму

Окрашивание по Граму — это метод последовательного окрашивания, изобретенный для дифференциации видов бактерий. Его основная полезность заключается в определении возбудителя бактериальной инфекции путем окрашивания клеточной стенки. [2] Хотя не все бактерии имеют клеточную стенку и, следовательно, не могут быть окрашены этим методом, это все же очень полезное и часто используемое окрашивание. Бактериальный образец может быть подвергнут термической фиксации и окрашиванию по граммам с помощью следующих четырех этапов: первичное окрашивание кристаллическим фиолетовым, вторичное окрашивание граммами йода, обесцвечивание спиртом или ацетоном и контрастное окрашивание сафранином.Грамположительные бактерии — это те, которые содержат толстый слой пептидогликана, из-за чего они сохраняют фиолетовую окраску и выглядят пурпурными. С другой стороны, грамотрицательные бактерии имеют тонкий слой пептидогликана и больше липидов в клеточной стенке, поэтому на этапе обесцвечивания больше смывается фиолетовый, и образец выглядит розовым [2].

Пятно Гимзы

Краситель Гимза широко используется в гематологии из-за его превосходной способности окрашивать костный мозг, плазматические клетки и тучные клетки.Он также очень популярен для выявления паразитов в крови. [3] Окрашивание по Гимзе также может помочь визуализировать хромосомные аномалии с помощью «полосатости по Гимзе» или наблюдения за чередованием более темных и более светлых участков нуклеотидов на хромосомах во время митоза [3].

Реакция Шиффа с периодической кислотой

Периодическая кислотная окраска реакции Шиффа, часто называемая окраской PAS, позволяет исследовать структуры, содержащие большое количество молекул углеводов, такие как щеточная кайма кишечника, клетки почечных канальцев, слизь и ретикулярные волокна соединительной ткани.[4] Гликоген, гликопротеин, гликолипиды и муцины окрашиваются в красный или пурпурный цвет, когда окрашивание полностью. Периодная кислота, сильно окисленный йод, окисляет гидроксильные группы соседних молекул сахара с образованием альдегидов. После этого шага реагент Шиффа присоединяется к альдегиду и образует красно-пурпурный цвет для визуализации. [5] [6]

Трихром Массона

Трихромное пятно Массона — это пятно, которое может давать многоцветный результат на ткани. Несмотря на то, что он имеет красные контрастные пятна, он популярен благодаря своей способности окрашивать волокна коллагена в синий цвет.Трихром Массона может идентифицировать сердечный фиброз, легочный фиброз, хроническое заболевание почек и мышечную дистрофию. [7]

Красный Конго

Конго красный — водорастворимый синий краситель, который дает красный раствор при pH 3,0-5,0. Его многочисленные ароматические кольца могут складываться вместе за счет гидрофобных взаимодействий и накапливаться в тканях. В частности, красный конго может окрашивать амилоидные волокна в красный и оранжевый цвет, что делает его полезным исследованием при амилоидозе. При просмотре в поляризованном свете под микроскопом ткани с высоким содержанием амилоида, окрашенные конго-красным, будут проявлять яркое «яблочно-зеленое» двойное лучепреломление.PMID: [8]

Прусский синий

Пятно берлинской синей полезно для определения запасов железа в организме. [7] [9] Пятно действует, сначала окрашивая ткань соляной кислотой, а затем наблюдая, как ионы трехвалентного железа реагируют с образованием нерастворимого ярко-синего пигмента. Это полезно для диагностики состояний накопления железа, таких как гемохроматоз или гемосидероз, путем окрашивания ткани печени и наблюдения за накоплением железа возле перипортальных гепатоцитов или вдоль синусоидальной выстилки.[10] [11] Переизбыток запасов железа в костном мозге может сигнализировать о неэффективном эритропоэзе, как при анемии при хроническом заболевании. С другой стороны, отсутствие реакции на окрашивание берлинской синей может указывать на низкий уровень железа, как при железодефицитной анемии.

Муцикармин

Муцикармин окрашивает муцин — секрет, вырабатываемый клетками эпителия и соединительной ткани. [12] Алюминий и кармин вместе образуют положительно заряженный хелатный комплекс. Новый положительный заряд связывает муцин, окрашивает его в красный цвет и позволяет визуализировать.Это полезно для выявления потенциальных карцином и воспалительных состояний, при которых наблюдается чрезмерное производство муцина. [12] В хирургии окрашивание муцикармина также может определять местоположение первичной опухоли путем окрашивания секретирующего слизь эпителия в месте, не содержащем клеток, продуцирующих муцин [13]. Муцикармин также окрашивает желатиновую капсулу грибов Cryptococcus . [12]

Судан Черный

Суданский черный краситель окрашивает липидсодержащие структуры, такие как триглицериды и липопротеины, в темно-черный или коричневый цвет.[7] [6] В тканевом препарате Sudan Black и Oil Red O пропущена стадия спиртовой дегидратации, чтобы избежать вымывания липидов, подлежащих окрашиванию. Его можно использовать для диагностики атеросклероза путем окрашивания атеросклеротических бляшек и аутосомно-доминантной лейкодистрофии путем окрашивания макрофагов в белом веществе после посмертной биопсии мозга. [7]

Красное масло O

Подобно красителю Sudan Black, Oil Red O — наиболее распространенный краситель, используемый для гидрофобных жиров или липидов, веществ, которые традиционно трудно поддаются окрашиванию.Oil Red O очень полезен для визуализации атеросклеротических бляшек и накопления липидов в печени и мышцах. [7] [6] [14]

Серебряное пятно

Серебро-красители — это более крупная категория красителей, используемых для гистопатологического исследования накопленных заболеваний в неврологии. Есть несколько методов окрашивания серебром, в том числе Бильшовского, Галляса, Бодиана и Кэмпбелла-Свитцера. Выбранный метод окрашивания зависит от рассматриваемого неврологического поражения, поскольку каждый метод имеет разную чувствительность и специфичность.Как правило, эти методы прикрепляют ионы серебра или солевые комплексы к ткани-мишени. Затем они должны быть восстановлены на месте, а последующие частицы серебра накапливаются и могут быть проанализированы. [15] В последнее время стало применяться фторирование, при котором флуорогенный полупроводник высвобождает небольшие 6-нм наночастицы в отложениях серебра и дает цвета. Диапазон диаметров образующихся частиц серебра соответствует разным цветам. Например, диапазон от 10 до 20 нм дает желтый цвет, тогда как диаметр, превышающий 100 нм, дает черный цвет.[16]

Окрашивание серебром хорошо известно как средство обнаружения бета-белка амилоида (Aß) при болезни Альцгеймера и тельцов Пика при болезни Пикса. При окрашивании амилоидные бляшки темнеют. Они могут варьироваться от желтого до черного, в зависимости от размера или количества амилоидных бляшек [15].

Nissl Stain

Краситель Ниссля, также называемый фиолетовым красителем Крезил, использует базовый анилиновый краситель для изучения нейрональной структуры головного и спинного мозга. Нейропил окрашивает синевато-пурпурный и зернистый цвет.Вещество Ниссля содержит большое количество рибосомной РНК, которая привлекает краситель, приобретает темно-синий цвет и делает цитоплазму пятнистой. Преимущество использования красителя Ниссля для оценки нейрональной патологии заключается в том, что он будет узнаваемо окрашивать цитоплазму нейронов без окрашивания перикарионов других клеточных структур, таких как астроциты. [17]

Пятно Папаниколау

Окраска по Папаниколау, в просторечии называемая мазком Папаниколау, представляет собой метод цитологического окрашивания, наиболее известный для выявления рака шейки матки у пациенток.Окрашиваемые клетки собирают из гинекологических мазков, образцов мокроты, щеток, материалов для тонкой иглы для аспирации и промываний. Многоцветное окрашивание включает пять красителей: гематоксилин для ядра, оранжевый G для кератина, эозин для поверхностных структур, светло-зеленый SF для цитоплазмы и Bismarck Brown. [18] В условиях скрининга рака шейки матки мазок Папаниколау полученные окраски эпителиальных клеток из переходной зоны шейки матки подвергаются анализу на предраковые и раковые процессы.Часто готовят второй слайд для иммуноокрашивания биомаркером p16INK4a для выявления дисплазии. [19]

Свет для микроскопии

Световой микроскоп, также называемый оптическим микроскопом, можно использовать для просмотра живых или мертвых образцов. Увеличение в 1500 раз меньше, чем у электронных микроскопов. Метод освещения — это свет в микроскоп, а не пучок электронов. [20] Световой микроскоп используется для большинства пятен, описанных в этой статье, таких как пятна Грама, H&E и Giemsa.

Электронная микроскопия

Электронный микроскоп полезен для просмотра внутриклеточных компонентов, невидимых с помощью световой микроскопии, что помогает прояснить биологию аномальных тканей и клеток. Электронная микроскопия обычно увеличивает в 100–300 раз больше, чем максимальное увеличение световой микроскопии. [20] Обычно секции должны быть ультратонкими, чтобы обеспечить адекватное проникновение электронов. Наиболее полезными для электронной микроскопии являются гистологические пятна с солями тяжелых металлов, поскольку они создают фазовый контраст, необходимый для визуализации структур.[21] Просвечивающие электронные микроскопы лучше подходят для исследования внутриклеточных структур, в то время как сканирующие электронные микроскопы обычно используются для исследования поверхностных структур.

Патофизиология

Использование специальных красителей для тканей не только помогает различать структурные изменения тканей, но также предупреждает врача об изменениях в функции тканей, имеющих большое значение для постановки диагноза, таких как аномальное отложение железа или аномальное отложение белка [амилоидоз , парапротеинемия и др., аномальное накопление гликогена или других углеводов и аномальное накопление жира. С помощью высокоспециализированного окрашивания можно обнаружить множество других изменений клеточной физиологии.

Клиническая значимость

Гистологическое окрашивание и исследование имеют очень высокое клиническое значение в медицинской диагностике и лечении почти во всех областях медицины. Гистологическое исследование — золотой стандарт диагностики многих патологических заболеваний, при которых окрашивание является важным компонентом.Гистохимический анализ образца ткани позволяет патологоанатому не только поставить диагноз, но и определить тяжесть заболевания и сделать прогноз.

Гистология, окрашивание — StatPearls — Книжная полка NCBI

Введение

Медицинская гистология — это микроскопическое исследование тканей и органов путем разделения, окрашивания и изучения этих срезов под микроскопом. Гистология, которую часто называют микроскопической анатомией и гистохимией, позволяет визуализировать структуру ткани и характерные изменения, которым она могла подвергнуться.Из-за этого он используется в медицинской диагностике, научных исследованиях, вскрытии и судебно-медицинской экспертизе. После того, как образец ткани подвергся фиксации, обработке, заделке, разделению и окрашиванию, он может быть подвергнут анализу с помощью микроскопии, а результаты интерпретируются патологом. Выбор гистологического окрашивания для данного образца зависит от исследуемого вопроса. Расширенная интерпретация слайда гистологии в сочетании с историей болезни пациента может оказать неоценимое влияние на курс лечения и прогноз.

Проблемы, вызывающие озабоченность

Базовые знания о подготовке тканей, включая окрашивание, важно знать при интерпретации отчетов о патологии при биопсии в стационаре или амбулатории. Не всегда интерпретирующий патолог тщательно проанализировал образец ткани, включив соответствующее гистологическое окрашивание, и этот недостаток может затруднить постановку точного диагноза.

Структура

Четыре основных типа тканей человека можно окрашивать и рассматривать с использованием различных гистологических методов.Эпителий, соединительная ткань, мышечная ткань и нервная ткань имеют общие черты, но после окрашивания выглядят очень отчетливо структурно. Каждое пятно предназначено для выделения важной особенности или компонента в типе ткани. Например, одно из наиболее распространенных красителей, гематоксилин, представляет собой основной краситель, окрашивающий белки в синий цвет, а эозин окрашивает белки в розовый цвет. Эти два красителя обычно используются вместе для определения внутриклеточных органелл и белков. Из-за разнообразия существующих белков было создано несколько красителей, чтобы выделить конкретный белок, который в этом обзоре будет обсуждаться в следующих разделах.Преимущество использования специального красителя заключается в том, что он может очень хорошо выделить конкретный белок. Однако из-за своей специфики другие конструкции не будут видны. По этой причине из одного образца часто создается несколько слайдов, чтобы можно было выполнить несколько окрашиваний для сбора всей необходимой информации.

Функция

Почти все окрашивания тканей выполняются на тканях, удаленных с тела. Однако в редких случаях на ткани, оставшиеся в теле, могут воздействовать очень специализированные пятна, называемые жизненными пятнами.Эти пятна используются для идентификации определенных типов ткани и идентификации аномальной ткани, поэтому последующая биопсия может быть более точной при получении аномальной ткани.

Подготовка ткани

Перед тем, как может произойти специфическое окрашивание, образцы ткани должны пройти следующие этапы подготовки: фиксация, обработка, заделка, срезы, а иногда и поиск антигена. В современных гистологических лабораториях большинство этих шагов автоматизировано.

Fixation: Fixation использует химические вещества, чтобы сохранить структуру ткани в ее естественной форме и защитить ее от разрушения необратимо сшивающими белками.Несмотря на то, что доступно несколько специализированных фиксаторов, на этом этапе часто используется формалин с нейтральным буфером. Этап фиксации жизненно важен для остальной части процедуры гистологического окрашивания, потому что, сохраняя химический состав ткани, образец затвердевает и облегчает фазу сечения. Парафин-формалин — еще один эффективный фиксатор. Его преимущество в том, что это предпочтительный фиксатор для иммуноокрашивания; однако это требует подготовки во время фиксации. Боин — это фиксатор, используемый для исследования тканей эмбриона и мозга, поскольку он лучше сохраняет хрупкие ядра и гликоген.Его недостатком является то, что он плохо сохраняет ткани почек, а также искажает структуру митохондрий. [1]

Дегидратация: Добавление этанола завершает дегидратацию образца. Он удалял воду из образца и дополнительно укреплял ткань для возможной световой микроскопии. После нанесения этанола и по завершении обезвоживания тканей для удаления этанола используется ксилол. [1]

Заливка: Заливка — это процесс помещения образца в парафиновый воск или пластиковую смолу для улучшения процесса выделения ячеистых структур.Этот шаг следует выполнять с осторожностью, если целью является проведение иммуноокрашивания, поскольку парафиновый воск будет препятствовать проникновению антител и приведет к ложному результату. [1]

Секционирование: Секционирование включает установку образца на микротом и разрезание его на секции. Предпочтительная толщина составляет 4-5 микрометров, чтобы его можно было окрасить и положить на предметное стекло микроскопа для исследования. [1]

Поиск антигена: Этот шаг предназначен для поиска антигенов, которые могли быть покрыты на этапах фиксации и встраивания.Если перекрестное сшивание белков скрывает сайты антигена, иммуногистохимический ответ может быть не таким устойчивым. Извлечение антигена достигается с помощью нагревания и протеолитических методов для разрушения перекрестных связей и выявления эпитопов и антигенов, которые были ранее покрыты. [1] Хотя этот этап сопряжен с риском денатурации как фиксатора, так и самих антигенов, успешный метод извлечения антигена может привести к гораздо более эффективной интенсивности иммуноокрашивания.

Гистохимия и цитохимия

Гематоксилин и эозин

Как следует из названия, это два окрашивания, выполненные на последующих этапах.Гематоксилин — это основной краситель, окрашивающий кислотные структуры. В результате получается пурпурный / синий оттенок, а структуры, на которые нацелен этот краситель, называются базофильными. Базофильные структуры включают ДНК в ядрах клеток, РНК в рибосомах и грубую эндоплазматическую сеть [1].

Эозин — это контрастное окрашивание после гематоксилина и кислотный краситель, воздействующий на основные структуры. В результате получается розово-красный оттенок, а структуры, привлекающие эозин, называются эозинофильными. [1] Цитоплазма представляет собой пример эозинофильной структуры.

Пятно по грамму

Окрашивание по Граму — это метод последовательного окрашивания, изобретенный для дифференциации видов бактерий. Его основная полезность заключается в определении возбудителя бактериальной инфекции путем окрашивания клеточной стенки. [2] Хотя не все бактерии имеют клеточную стенку и, следовательно, не могут быть окрашены этим методом, это все же очень полезное и часто используемое окрашивание. Бактериальный образец может быть подвергнут термической фиксации и окрашиванию по граммам с помощью следующих четырех этапов: первичное окрашивание кристаллическим фиолетовым, вторичное окрашивание граммами йода, обесцвечивание спиртом или ацетоном и контрастное окрашивание сафранином.Грамположительные бактерии — это те, которые содержат толстый слой пептидогликана, из-за чего они сохраняют фиолетовую окраску и выглядят пурпурными. С другой стороны, грамотрицательные бактерии имеют тонкий слой пептидогликана и больше липидов в клеточной стенке, поэтому на этапе обесцвечивания больше смывается фиолетовый, и образец выглядит розовым [2].

Пятно Гимзы

Краситель Гимза широко используется в гематологии из-за его превосходной способности окрашивать костный мозг, плазматические клетки и тучные клетки.Он также очень популярен для выявления паразитов в крови. [3] Окрашивание по Гимзе также может помочь визуализировать хромосомные аномалии с помощью «полосатости по Гимзе» или наблюдения за чередованием более темных и более светлых участков нуклеотидов на хромосомах во время митоза [3].

Реакция Шиффа с периодической кислотой

Периодическая кислотная окраска реакции Шиффа, часто называемая окраской PAS, позволяет исследовать структуры, содержащие большое количество молекул углеводов, такие как щеточная кайма кишечника, клетки почечных канальцев, слизь и ретикулярные волокна соединительной ткани.[4] Гликоген, гликопротеин, гликолипиды и муцины окрашиваются в красный или пурпурный цвет, когда окрашивание полностью. Периодная кислота, сильно окисленный йод, окисляет гидроксильные группы соседних молекул сахара с образованием альдегидов. После этого шага реагент Шиффа присоединяется к альдегиду и образует красно-пурпурный цвет для визуализации. [5] [6]

Трихром Массона

Трихромное пятно Массона — это пятно, которое может давать многоцветный результат на ткани. Несмотря на то, что он имеет красные контрастные пятна, он популярен благодаря своей способности окрашивать волокна коллагена в синий цвет.Трихром Массона может идентифицировать сердечный фиброз, легочный фиброз, хроническое заболевание почек и мышечную дистрофию. [7]

Красный Конго

Конго красный — водорастворимый синий краситель, который дает красный раствор при pH 3,0-5,0. Его многочисленные ароматические кольца могут складываться вместе за счет гидрофобных взаимодействий и накапливаться в тканях. В частности, красный конго может окрашивать амилоидные волокна в красный и оранжевый цвет, что делает его полезным исследованием при амилоидозе. При просмотре в поляризованном свете под микроскопом ткани с высоким содержанием амилоида, окрашенные конго-красным, будут проявлять яркое «яблочно-зеленое» двойное лучепреломление.PMID: [8]

Прусский синий

Пятно берлинской синей полезно для определения запасов железа в организме. [7] [9] Пятно действует, сначала окрашивая ткань соляной кислотой, а затем наблюдая, как ионы трехвалентного железа реагируют с образованием нерастворимого ярко-синего пигмента. Это полезно для диагностики состояний накопления железа, таких как гемохроматоз или гемосидероз, путем окрашивания ткани печени и наблюдения за накоплением железа возле перипортальных гепатоцитов или вдоль синусоидальной выстилки.[10] [11] Переизбыток запасов железа в костном мозге может сигнализировать о неэффективном эритропоэзе, как при анемии при хроническом заболевании. С другой стороны, отсутствие реакции на окрашивание берлинской синей может указывать на низкий уровень железа, как при железодефицитной анемии.

Муцикармин

Муцикармин окрашивает муцин — секрет, вырабатываемый клетками эпителия и соединительной ткани. [12] Алюминий и кармин вместе образуют положительно заряженный хелатный комплекс. Новый положительный заряд связывает муцин, окрашивает его в красный цвет и позволяет визуализировать.Это полезно для выявления потенциальных карцином и воспалительных состояний, при которых наблюдается чрезмерное производство муцина. [12] В хирургии окрашивание муцикармина также может определять местоположение первичной опухоли путем окрашивания секретирующего слизь эпителия в месте, не содержащем клеток, продуцирующих муцин [13]. Муцикармин также окрашивает желатиновую капсулу грибов Cryptococcus . [12]

Судан Черный

Суданский черный краситель окрашивает липидсодержащие структуры, такие как триглицериды и липопротеины, в темно-черный или коричневый цвет.[7] [6] В тканевом препарате Sudan Black и Oil Red O пропущена стадия спиртовой дегидратации, чтобы избежать вымывания липидов, подлежащих окрашиванию. Его можно использовать для диагностики атеросклероза путем окрашивания атеросклеротических бляшек и аутосомно-доминантной лейкодистрофии путем окрашивания макрофагов в белом веществе после посмертной биопсии мозга. [7]

Красное масло O

Подобно красителю Sudan Black, Oil Red O — наиболее распространенный краситель, используемый для гидрофобных жиров или липидов, веществ, которые традиционно трудно поддаются окрашиванию.Oil Red O очень полезен для визуализации атеросклеротических бляшек и накопления липидов в печени и мышцах. [7] [6] [14]

Серебряное пятно

Серебро-красители — это более крупная категория красителей, используемых для гистопатологического исследования накопленных заболеваний в неврологии. Есть несколько методов окрашивания серебром, в том числе Бильшовского, Галляса, Бодиана и Кэмпбелла-Свитцера. Выбранный метод окрашивания зависит от рассматриваемого неврологического поражения, поскольку каждый метод имеет разную чувствительность и специфичность.Как правило, эти методы прикрепляют ионы серебра или солевые комплексы к ткани-мишени. Затем они должны быть восстановлены на месте, а последующие частицы серебра накапливаются и могут быть проанализированы. [15] В последнее время стало применяться фторирование, при котором флуорогенный полупроводник высвобождает небольшие 6-нм наночастицы в отложениях серебра и дает цвета. Диапазон диаметров образующихся частиц серебра соответствует разным цветам. Например, диапазон от 10 до 20 нм дает желтый цвет, тогда как диаметр, превышающий 100 нм, дает черный цвет.[16]

Окрашивание серебром хорошо известно как средство обнаружения бета-белка амилоида (Aß) при болезни Альцгеймера и тельцов Пика при болезни Пикса. При окрашивании амилоидные бляшки темнеют. Они могут варьироваться от желтого до черного, в зависимости от размера или количества амилоидных бляшек [15].

Nissl Stain

Краситель Ниссля, также называемый фиолетовым красителем Крезил, использует базовый анилиновый краситель для изучения нейрональной структуры головного и спинного мозга. Нейропил окрашивает синевато-пурпурный и зернистый цвет.Вещество Ниссля содержит большое количество рибосомной РНК, которая привлекает краситель, приобретает темно-синий цвет и делает цитоплазму пятнистой. Преимущество использования красителя Ниссля для оценки нейрональной патологии заключается в том, что он будет узнаваемо окрашивать цитоплазму нейронов без окрашивания перикарионов других клеточных структур, таких как астроциты. [17]

Пятно Папаниколау

Окраска по Папаниколау, в просторечии называемая мазком Папаниколау, представляет собой метод цитологического окрашивания, наиболее известный для выявления рака шейки матки у пациенток.Окрашиваемые клетки собирают из гинекологических мазков, образцов мокроты, щеток, материалов для тонкой иглы для аспирации и промываний. Многоцветное окрашивание включает пять красителей: гематоксилин для ядра, оранжевый G для кератина, эозин для поверхностных структур, светло-зеленый SF для цитоплазмы и Bismarck Brown. [18] В условиях скрининга рака шейки матки мазок Папаниколау полученные окраски эпителиальных клеток из переходной зоны шейки матки подвергаются анализу на предраковые и раковые процессы.Часто готовят второй слайд для иммуноокрашивания биомаркером p16INK4a для выявления дисплазии. [19]

Свет для микроскопии

Световой микроскоп, также называемый оптическим микроскопом, можно использовать для просмотра живых или мертвых образцов. Увеличение в 1500 раз меньше, чем у электронных микроскопов. Метод освещения — это свет в микроскоп, а не пучок электронов. [20] Световой микроскоп используется для большинства пятен, описанных в этой статье, таких как пятна Грама, H&E и Giemsa.

Электронная микроскопия

Электронный микроскоп полезен для просмотра внутриклеточных компонентов, невидимых с помощью световой микроскопии, что помогает прояснить биологию аномальных тканей и клеток. Электронная микроскопия обычно увеличивает в 100–300 раз больше, чем максимальное увеличение световой микроскопии. [20] Обычно секции должны быть ультратонкими, чтобы обеспечить адекватное проникновение электронов. Наиболее полезными для электронной микроскопии являются гистологические пятна с солями тяжелых металлов, поскольку они создают фазовый контраст, необходимый для визуализации структур.[21] Просвечивающие электронные микроскопы лучше подходят для исследования внутриклеточных структур, в то время как сканирующие электронные микроскопы обычно используются для исследования поверхностных структур.

Патофизиология

Использование специальных красителей для тканей не только помогает различать структурные изменения тканей, но также предупреждает врача об изменениях в функции тканей, имеющих большое значение для постановки диагноза, таких как аномальное отложение железа или аномальное отложение белка [амилоидоз , парапротеинемия и др., аномальное накопление гликогена или других углеводов и аномальное накопление жира. С помощью высокоспециализированного окрашивания можно обнаружить множество других изменений клеточной физиологии.

Клиническая значимость

Гистологическое окрашивание и исследование имеют очень высокое клиническое значение в медицинской диагностике и лечении почти во всех областях медицины. Гистологическое исследование — золотой стандарт диагностики многих патологических заболеваний, при которых окрашивание является важным компонентом.Гистохимический анализ образца ткани позволяет патологоанатому не только поставить диагноз, но и определить тяжесть заболевания и сделать прогноз.

Гистология, окрашивание — StatPearls — Книжная полка NCBI

Введение

Медицинская гистология — это микроскопическое исследование тканей и органов путем разделения, окрашивания и изучения этих срезов под микроскопом. Гистология, которую часто называют микроскопической анатомией и гистохимией, позволяет визуализировать структуру ткани и характерные изменения, которым она могла подвергнуться.Из-за этого он используется в медицинской диагностике, научных исследованиях, вскрытии и судебно-медицинской экспертизе. После того, как образец ткани подвергся фиксации, обработке, заделке, разделению и окрашиванию, он может быть подвергнут анализу с помощью микроскопии, а результаты интерпретируются патологом. Выбор гистологического окрашивания для данного образца зависит от исследуемого вопроса. Расширенная интерпретация слайда гистологии в сочетании с историей болезни пациента может оказать неоценимое влияние на курс лечения и прогноз.

Проблемы, вызывающие озабоченность

Базовые знания о подготовке тканей, включая окрашивание, важно знать при интерпретации отчетов о патологии при биопсии в стационаре или амбулатории. Не всегда интерпретирующий патолог тщательно проанализировал образец ткани, включив соответствующее гистологическое окрашивание, и этот недостаток может затруднить постановку точного диагноза.

Структура

Четыре основных типа тканей человека можно окрашивать и рассматривать с использованием различных гистологических методов.Эпителий, соединительная ткань, мышечная ткань и нервная ткань имеют общие черты, но после окрашивания выглядят очень отчетливо структурно. Каждое пятно предназначено для выделения важной особенности или компонента в типе ткани. Например, одно из наиболее распространенных красителей, гематоксилин, представляет собой основной краситель, окрашивающий белки в синий цвет, а эозин окрашивает белки в розовый цвет. Эти два красителя обычно используются вместе для определения внутриклеточных органелл и белков. Из-за разнообразия существующих белков было создано несколько красителей, чтобы выделить конкретный белок, который в этом обзоре будет обсуждаться в следующих разделах.Преимущество использования специального красителя заключается в том, что он может очень хорошо выделить конкретный белок. Однако из-за своей специфики другие конструкции не будут видны. По этой причине из одного образца часто создается несколько слайдов, чтобы можно было выполнить несколько окрашиваний для сбора всей необходимой информации.

Функция

Почти все окрашивания тканей выполняются на тканях, удаленных с тела. Однако в редких случаях на ткани, оставшиеся в теле, могут воздействовать очень специализированные пятна, называемые жизненными пятнами.Эти пятна используются для идентификации определенных типов ткани и идентификации аномальной ткани, поэтому последующая биопсия может быть более точной при получении аномальной ткани.

Подготовка ткани

Перед тем, как может произойти специфическое окрашивание, образцы ткани должны пройти следующие этапы подготовки: фиксация, обработка, заделка, срезы, а иногда и поиск антигена. В современных гистологических лабораториях большинство этих шагов автоматизировано.

Fixation: Fixation использует химические вещества, чтобы сохранить структуру ткани в ее естественной форме и защитить ее от разрушения необратимо сшивающими белками.Несмотря на то, что доступно несколько специализированных фиксаторов, на этом этапе часто используется формалин с нейтральным буфером. Этап фиксации жизненно важен для остальной части процедуры гистологического окрашивания, потому что, сохраняя химический состав ткани, образец затвердевает и облегчает фазу сечения. Парафин-формалин — еще один эффективный фиксатор. Его преимущество в том, что это предпочтительный фиксатор для иммуноокрашивания; однако это требует подготовки во время фиксации. Боин — это фиксатор, используемый для исследования тканей эмбриона и мозга, поскольку он лучше сохраняет хрупкие ядра и гликоген.Его недостатком является то, что он плохо сохраняет ткани почек, а также искажает структуру митохондрий. [1]

Дегидратация: Добавление этанола завершает дегидратацию образца. Он удалял воду из образца и дополнительно укреплял ткань для возможной световой микроскопии. После нанесения этанола и по завершении обезвоживания тканей для удаления этанола используется ксилол. [1]

Заливка: Заливка — это процесс помещения образца в парафиновый воск или пластиковую смолу для улучшения процесса выделения ячеистых структур.Этот шаг следует выполнять с осторожностью, если целью является проведение иммуноокрашивания, поскольку парафиновый воск будет препятствовать проникновению антител и приведет к ложному результату. [1]

Секционирование: Секционирование включает установку образца на микротом и разрезание его на секции. Предпочтительная толщина составляет 4-5 микрометров, чтобы его можно было окрасить и положить на предметное стекло микроскопа для исследования. [1]

Поиск антигена: Этот шаг предназначен для поиска антигенов, которые могли быть покрыты на этапах фиксации и встраивания.Если перекрестное сшивание белков скрывает сайты антигена, иммуногистохимический ответ может быть не таким устойчивым. Извлечение антигена достигается с помощью нагревания и протеолитических методов для разрушения перекрестных связей и выявления эпитопов и антигенов, которые были ранее покрыты. [1] Хотя этот этап сопряжен с риском денатурации как фиксатора, так и самих антигенов, успешный метод извлечения антигена может привести к гораздо более эффективной интенсивности иммуноокрашивания.

Гистохимия и цитохимия

Гематоксилин и эозин

Как следует из названия, это два окрашивания, выполненные на последующих этапах.Гематоксилин — это основной краситель, окрашивающий кислотные структуры. В результате получается пурпурный / синий оттенок, а структуры, на которые нацелен этот краситель, называются базофильными. Базофильные структуры включают ДНК в ядрах клеток, РНК в рибосомах и грубую эндоплазматическую сеть [1].

Эозин — это контрастное окрашивание после гематоксилина и кислотный краситель, воздействующий на основные структуры. В результате получается розово-красный оттенок, а структуры, привлекающие эозин, называются эозинофильными. [1] Цитоплазма представляет собой пример эозинофильной структуры.

Пятно по грамму

Окрашивание по Граму — это метод последовательного окрашивания, изобретенный для дифференциации видов бактерий. Его основная полезность заключается в определении возбудителя бактериальной инфекции путем окрашивания клеточной стенки. [2] Хотя не все бактерии имеют клеточную стенку и, следовательно, не могут быть окрашены этим методом, это все же очень полезное и часто используемое окрашивание. Бактериальный образец может быть подвергнут термической фиксации и окрашиванию по граммам с помощью следующих четырех этапов: первичное окрашивание кристаллическим фиолетовым, вторичное окрашивание граммами йода, обесцвечивание спиртом или ацетоном и контрастное окрашивание сафранином.Грамположительные бактерии — это те, которые содержат толстый слой пептидогликана, из-за чего они сохраняют фиолетовую окраску и выглядят пурпурными. С другой стороны, грамотрицательные бактерии имеют тонкий слой пептидогликана и больше липидов в клеточной стенке, поэтому на этапе обесцвечивания больше смывается фиолетовый, и образец выглядит розовым [2].

Пятно Гимзы

Краситель Гимза широко используется в гематологии из-за его превосходной способности окрашивать костный мозг, плазматические клетки и тучные клетки.Он также очень популярен для выявления паразитов в крови. [3] Окрашивание по Гимзе также может помочь визуализировать хромосомные аномалии с помощью «полосатости по Гимзе» или наблюдения за чередованием более темных и более светлых участков нуклеотидов на хромосомах во время митоза [3].

Реакция Шиффа с периодической кислотой

Периодическая кислотная окраска реакции Шиффа, часто называемая окраской PAS, позволяет исследовать структуры, содержащие большое количество молекул углеводов, такие как щеточная кайма кишечника, клетки почечных канальцев, слизь и ретикулярные волокна соединительной ткани.[4] Гликоген, гликопротеин, гликолипиды и муцины окрашиваются в красный или пурпурный цвет, когда окрашивание полностью. Периодная кислота, сильно окисленный йод, окисляет гидроксильные группы соседних молекул сахара с образованием альдегидов. После этого шага реагент Шиффа присоединяется к альдегиду и образует красно-пурпурный цвет для визуализации. [5] [6]

Трихром Массона

Трихромное пятно Массона — это пятно, которое может давать многоцветный результат на ткани. Несмотря на то, что он имеет красные контрастные пятна, он популярен благодаря своей способности окрашивать волокна коллагена в синий цвет.Трихром Массона может идентифицировать сердечный фиброз, легочный фиброз, хроническое заболевание почек и мышечную дистрофию. [7]

Красный Конго

Конго красный — водорастворимый синий краситель, который дает красный раствор при pH 3,0-5,0. Его многочисленные ароматические кольца могут складываться вместе за счет гидрофобных взаимодействий и накапливаться в тканях. В частности, красный конго может окрашивать амилоидные волокна в красный и оранжевый цвет, что делает его полезным исследованием при амилоидозе. При просмотре в поляризованном свете под микроскопом ткани с высоким содержанием амилоида, окрашенные конго-красным, будут проявлять яркое «яблочно-зеленое» двойное лучепреломление.PMID: [8]

Прусский синий

Пятно берлинской синей полезно для определения запасов железа в организме. [7] [9] Пятно действует, сначала окрашивая ткань соляной кислотой, а затем наблюдая, как ионы трехвалентного железа реагируют с образованием нерастворимого ярко-синего пигмента. Это полезно для диагностики состояний накопления железа, таких как гемохроматоз или гемосидероз, путем окрашивания ткани печени и наблюдения за накоплением железа возле перипортальных гепатоцитов или вдоль синусоидальной выстилки.[10] [11] Переизбыток запасов железа в костном мозге может сигнализировать о неэффективном эритропоэзе, как при анемии при хроническом заболевании. С другой стороны, отсутствие реакции на окрашивание берлинской синей может указывать на низкий уровень железа, как при железодефицитной анемии.

Муцикармин

Муцикармин окрашивает муцин — секрет, вырабатываемый клетками эпителия и соединительной ткани. [12] Алюминий и кармин вместе образуют положительно заряженный хелатный комплекс. Новый положительный заряд связывает муцин, окрашивает его в красный цвет и позволяет визуализировать.Это полезно для выявления потенциальных карцином и воспалительных состояний, при которых наблюдается чрезмерное производство муцина. [12] В хирургии окрашивание муцикармина также может определять местоположение первичной опухоли путем окрашивания секретирующего слизь эпителия в месте, не содержащем клеток, продуцирующих муцин [13]. Муцикармин также окрашивает желатиновую капсулу грибов Cryptococcus . [12]

Судан Черный

Суданский черный краситель окрашивает липидсодержащие структуры, такие как триглицериды и липопротеины, в темно-черный или коричневый цвет.[7] [6] В тканевом препарате Sudan Black и Oil Red O пропущена стадия спиртовой дегидратации, чтобы избежать вымывания липидов, подлежащих окрашиванию. Его можно использовать для диагностики атеросклероза путем окрашивания атеросклеротических бляшек и аутосомно-доминантной лейкодистрофии путем окрашивания макрофагов в белом веществе после посмертной биопсии мозга. [7]

Красное масло O

Подобно красителю Sudan Black, Oil Red O — наиболее распространенный краситель, используемый для гидрофобных жиров или липидов, веществ, которые традиционно трудно поддаются окрашиванию.Oil Red O очень полезен для визуализации атеросклеротических бляшек и накопления липидов в печени и мышцах. [7] [6] [14]

Серебряное пятно

Серебро-красители — это более крупная категория красителей, используемых для гистопатологического исследования накопленных заболеваний в неврологии. Есть несколько методов окрашивания серебром, в том числе Бильшовского, Галляса, Бодиана и Кэмпбелла-Свитцера. Выбранный метод окрашивания зависит от рассматриваемого неврологического поражения, поскольку каждый метод имеет разную чувствительность и специфичность.Как правило, эти методы прикрепляют ионы серебра или солевые комплексы к ткани-мишени. Затем они должны быть восстановлены на месте, а последующие частицы серебра накапливаются и могут быть проанализированы. [15] В последнее время стало применяться фторирование, при котором флуорогенный полупроводник высвобождает небольшие 6-нм наночастицы в отложениях серебра и дает цвета. Диапазон диаметров образующихся частиц серебра соответствует разным цветам. Например, диапазон от 10 до 20 нм дает желтый цвет, тогда как диаметр, превышающий 100 нм, дает черный цвет.[16]

Окрашивание серебром хорошо известно как средство обнаружения бета-белка амилоида (Aß) при болезни Альцгеймера и тельцов Пика при болезни Пикса. При окрашивании амилоидные бляшки темнеют. Они могут варьироваться от желтого до черного, в зависимости от размера или количества амилоидных бляшек [15].

Nissl Stain

Краситель Ниссля, также называемый фиолетовым красителем Крезил, использует базовый анилиновый краситель для изучения нейрональной структуры головного и спинного мозга. Нейропил окрашивает синевато-пурпурный и зернистый цвет.Вещество Ниссля содержит большое количество рибосомной РНК, которая привлекает краситель, приобретает темно-синий цвет и делает цитоплазму пятнистой. Преимущество использования красителя Ниссля для оценки нейрональной патологии заключается в том, что он будет узнаваемо окрашивать цитоплазму нейронов без окрашивания перикарионов других клеточных структур, таких как астроциты. [17]

Пятно Папаниколау

Окраска по Папаниколау, в просторечии называемая мазком Папаниколау, представляет собой метод цитологического окрашивания, наиболее известный для выявления рака шейки матки у пациенток.Окрашиваемые клетки собирают из гинекологических мазков, образцов мокроты, щеток, материалов для тонкой иглы для аспирации и промываний. Многоцветное окрашивание включает пять красителей: гематоксилин для ядра, оранжевый G для кератина, эозин для поверхностных структур, светло-зеленый SF для цитоплазмы и Bismarck Brown. [18] В условиях скрининга рака шейки матки мазок Папаниколау полученные окраски эпителиальных клеток из переходной зоны шейки матки подвергаются анализу на предраковые и раковые процессы.Часто готовят второй слайд для иммуноокрашивания биомаркером p16INK4a для выявления дисплазии. [19]

Свет для микроскопии

Световой микроскоп, также называемый оптическим микроскопом, можно использовать для просмотра живых или мертвых образцов. Увеличение в 1500 раз меньше, чем у электронных микроскопов. Метод освещения — это свет в микроскоп, а не пучок электронов. [20] Световой микроскоп используется для большинства пятен, описанных в этой статье, таких как пятна Грама, H&E и Giemsa.

Электронная микроскопия

Электронный микроскоп полезен для просмотра внутриклеточных компонентов, невидимых с помощью световой микроскопии, что помогает прояснить биологию аномальных тканей и клеток. Электронная микроскопия обычно увеличивает в 100–300 раз больше, чем максимальное увеличение световой микроскопии. [20] Обычно секции должны быть ультратонкими, чтобы обеспечить адекватное проникновение электронов. Наиболее полезными для электронной микроскопии являются гистологические пятна с солями тяжелых металлов, поскольку они создают фазовый контраст, необходимый для визуализации структур.[21] Просвечивающие электронные микроскопы лучше подходят для исследования внутриклеточных структур, в то время как сканирующие электронные микроскопы обычно используются для исследования поверхностных структур.

Патофизиология

Использование специальных красителей для тканей не только помогает различать структурные изменения тканей, но также предупреждает врача об изменениях в функции тканей, имеющих большое значение для постановки диагноза, таких как аномальное отложение железа или аномальное отложение белка [амилоидоз , парапротеинемия и др., аномальное накопление гликогена или других углеводов и аномальное накопление жира. С помощью высокоспециализированного окрашивания можно обнаружить множество других изменений клеточной физиологии.

Клиническая значимость

Гистологическое окрашивание и исследование имеют очень высокое клиническое значение в медицинской диагностике и лечении почти во всех областях медицины. Гистологическое исследование — золотой стандарт диагностики многих патологических заболеваний, при которых окрашивание является важным компонентом.Гистохимический анализ образца ткани позволяет патологоанатому не только поставить диагноз, но и определить тяжесть заболевания и сделать прогноз.

Гистология, окрашивание — StatPearls — Книжная полка NCBI

Введение

Медицинская гистология — это микроскопическое исследование тканей и органов путем разделения, окрашивания и изучения этих срезов под микроскопом. Гистология, которую часто называют микроскопической анатомией и гистохимией, позволяет визуализировать структуру ткани и характерные изменения, которым она могла подвергнуться.Из-за этого он используется в медицинской диагностике, научных исследованиях, вскрытии и судебно-медицинской экспертизе. После того, как образец ткани подвергся фиксации, обработке, заделке, разделению и окрашиванию, он может быть подвергнут анализу с помощью микроскопии, а результаты интерпретируются патологом. Выбор гистологического окрашивания для данного образца зависит от исследуемого вопроса. Расширенная интерпретация слайда гистологии в сочетании с историей болезни пациента может оказать неоценимое влияние на курс лечения и прогноз.

Проблемы, вызывающие озабоченность

Базовые знания о подготовке тканей, включая окрашивание, важно знать при интерпретации отчетов о патологии при биопсии в стационаре или амбулатории. Не всегда интерпретирующий патолог тщательно проанализировал образец ткани, включив соответствующее гистологическое окрашивание, и этот недостаток может затруднить постановку точного диагноза.

Структура

Четыре основных типа тканей человека можно окрашивать и рассматривать с использованием различных гистологических методов.Эпителий, соединительная ткань, мышечная ткань и нервная ткань имеют общие черты, но после окрашивания выглядят очень отчетливо структурно. Каждое пятно предназначено для выделения важной особенности или компонента в типе ткани. Например, одно из наиболее распространенных красителей, гематоксилин, представляет собой основной краситель, окрашивающий белки в синий цвет, а эозин окрашивает белки в розовый цвет. Эти два красителя обычно используются вместе для определения внутриклеточных органелл и белков. Из-за разнообразия существующих белков было создано несколько красителей, чтобы выделить конкретный белок, который в этом обзоре будет обсуждаться в следующих разделах.Преимущество использования специального красителя заключается в том, что он может очень хорошо выделить конкретный белок. Однако из-за своей специфики другие конструкции не будут видны. По этой причине из одного образца часто создается несколько слайдов, чтобы можно было выполнить несколько окрашиваний для сбора всей необходимой информации.

Функция

Почти все окрашивания тканей выполняются на тканях, удаленных с тела. Однако в редких случаях на ткани, оставшиеся в теле, могут воздействовать очень специализированные пятна, называемые жизненными пятнами.Эти пятна используются для идентификации определенных типов ткани и идентификации аномальной ткани, поэтому последующая биопсия может быть более точной при получении аномальной ткани.

Подготовка ткани

Перед тем, как может произойти специфическое окрашивание, образцы ткани должны пройти следующие этапы подготовки: фиксация, обработка, заделка, срезы, а иногда и поиск антигена. В современных гистологических лабораториях большинство этих шагов автоматизировано.

Fixation: Fixation использует химические вещества, чтобы сохранить структуру ткани в ее естественной форме и защитить ее от разрушения необратимо сшивающими белками.Несмотря на то, что доступно несколько специализированных фиксаторов, на этом этапе часто используется формалин с нейтральным буфером. Этап фиксации жизненно важен для остальной части процедуры гистологического окрашивания, потому что, сохраняя химический состав ткани, образец затвердевает и облегчает фазу сечения. Парафин-формалин — еще один эффективный фиксатор. Его преимущество в том, что это предпочтительный фиксатор для иммуноокрашивания; однако это требует подготовки во время фиксации. Боин — это фиксатор, используемый для исследования тканей эмбриона и мозга, поскольку он лучше сохраняет хрупкие ядра и гликоген.Его недостатком является то, что он плохо сохраняет ткани почек, а также искажает структуру митохондрий. [1]

Дегидратация: Добавление этанола завершает дегидратацию образца. Он удалял воду из образца и дополнительно укреплял ткань для возможной световой микроскопии. После нанесения этанола и по завершении обезвоживания тканей для удаления этанола используется ксилол. [1]

Заливка: Заливка — это процесс помещения образца в парафиновый воск или пластиковую смолу для улучшения процесса выделения ячеистых структур.Этот шаг следует выполнять с осторожностью, если целью является проведение иммуноокрашивания, поскольку парафиновый воск будет препятствовать проникновению антител и приведет к ложному результату. [1]

Секционирование: Секционирование включает установку образца на микротом и разрезание его на секции. Предпочтительная толщина составляет 4-5 микрометров, чтобы его можно было окрасить и положить на предметное стекло микроскопа для исследования. [1]

Поиск антигена: Этот шаг предназначен для поиска антигенов, которые могли быть покрыты на этапах фиксации и встраивания.Если перекрестное сшивание белков скрывает сайты антигена, иммуногистохимический ответ может быть не таким устойчивым. Извлечение антигена достигается с помощью нагревания и протеолитических методов для разрушения перекрестных связей и выявления эпитопов и антигенов, которые были ранее покрыты. [1] Хотя этот этап сопряжен с риском денатурации как фиксатора, так и самих антигенов, успешный метод извлечения антигена может привести к гораздо более эффективной интенсивности иммуноокрашивания.

Гистохимия и цитохимия

Гематоксилин и эозин

Как следует из названия, это два окрашивания, выполненные на последующих этапах.Гематоксилин — это основной краситель, окрашивающий кислотные структуры. В результате получается пурпурный / синий оттенок, а структуры, на которые нацелен этот краситель, называются базофильными. Базофильные структуры включают ДНК в ядрах клеток, РНК в рибосомах и грубую эндоплазматическую сеть [1].

Эозин — это контрастное окрашивание после гематоксилина и кислотный краситель, воздействующий на основные структуры. В результате получается розово-красный оттенок, а структуры, привлекающие эозин, называются эозинофильными. [1] Цитоплазма представляет собой пример эозинофильной структуры.

Пятно по грамму

Окрашивание по Граму — это метод последовательного окрашивания, изобретенный для дифференциации видов бактерий. Его основная полезность заключается в определении возбудителя бактериальной инфекции путем окрашивания клеточной стенки. [2] Хотя не все бактерии имеют клеточную стенку и, следовательно, не могут быть окрашены этим методом, это все же очень полезное и часто используемое окрашивание. Бактериальный образец может быть подвергнут термической фиксации и окрашиванию по граммам с помощью следующих четырех этапов: первичное окрашивание кристаллическим фиолетовым, вторичное окрашивание граммами йода, обесцвечивание спиртом или ацетоном и контрастное окрашивание сафранином.Грамположительные бактерии — это те, которые содержат толстый слой пептидогликана, из-за чего они сохраняют фиолетовую окраску и выглядят пурпурными. С другой стороны, грамотрицательные бактерии имеют тонкий слой пептидогликана и больше липидов в клеточной стенке, поэтому на этапе обесцвечивания больше смывается фиолетовый, и образец выглядит розовым [2].

Пятно Гимзы

Краситель Гимза широко используется в гематологии из-за его превосходной способности окрашивать костный мозг, плазматические клетки и тучные клетки.Он также очень популярен для выявления паразитов в крови. [3] Окрашивание по Гимзе также может помочь визуализировать хромосомные аномалии с помощью «полосатости по Гимзе» или наблюдения за чередованием более темных и более светлых участков нуклеотидов на хромосомах во время митоза [3].

Реакция Шиффа с периодической кислотой

Периодическая кислотная окраска реакции Шиффа, часто называемая окраской PAS, позволяет исследовать структуры, содержащие большое количество молекул углеводов, такие как щеточная кайма кишечника, клетки почечных канальцев, слизь и ретикулярные волокна соединительной ткани.[4] Гликоген, гликопротеин, гликолипиды и муцины окрашиваются в красный или пурпурный цвет, когда окрашивание полностью. Периодная кислота, сильно окисленный йод, окисляет гидроксильные группы соседних молекул сахара с образованием альдегидов. После этого шага реагент Шиффа присоединяется к альдегиду и образует красно-пурпурный цвет для визуализации. [5] [6]

Трихром Массона

Трихромное пятно Массона — это пятно, которое может давать многоцветный результат на ткани. Несмотря на то, что он имеет красные контрастные пятна, он популярен благодаря своей способности окрашивать волокна коллагена в синий цвет.Трихром Массона может идентифицировать сердечный фиброз, легочный фиброз, хроническое заболевание почек и мышечную дистрофию. [7]

Красный Конго

Конго красный — водорастворимый синий краситель, который дает красный раствор при pH 3,0-5,0. Его многочисленные ароматические кольца могут складываться вместе за счет гидрофобных взаимодействий и накапливаться в тканях. В частности, красный конго может окрашивать амилоидные волокна в красный и оранжевый цвет, что делает его полезным исследованием при амилоидозе. При просмотре в поляризованном свете под микроскопом ткани с высоким содержанием амилоида, окрашенные конго-красным, будут проявлять яркое «яблочно-зеленое» двойное лучепреломление.PMID: [8]

Прусский синий

Пятно берлинской синей полезно для определения запасов железа в организме. [7] [9] Пятно действует, сначала окрашивая ткань соляной кислотой, а затем наблюдая, как ионы трехвалентного железа реагируют с образованием нерастворимого ярко-синего пигмента. Это полезно для диагностики состояний накопления железа, таких как гемохроматоз или гемосидероз, путем окрашивания ткани печени и наблюдения за накоплением железа возле перипортальных гепатоцитов или вдоль синусоидальной выстилки.[10] [11] Переизбыток запасов железа в костном мозге может сигнализировать о неэффективном эритропоэзе, как при анемии при хроническом заболевании. С другой стороны, отсутствие реакции на окрашивание берлинской синей может указывать на низкий уровень железа, как при железодефицитной анемии.

Муцикармин

Муцикармин окрашивает муцин — секрет, вырабатываемый клетками эпителия и соединительной ткани. [12] Алюминий и кармин вместе образуют положительно заряженный хелатный комплекс. Новый положительный заряд связывает муцин, окрашивает его в красный цвет и позволяет визуализировать.Это полезно для выявления потенциальных карцином и воспалительных состояний, при которых наблюдается чрезмерное производство муцина. [12] В хирургии окрашивание муцикармина также может определять местоположение первичной опухоли путем окрашивания секретирующего слизь эпителия в месте, не содержащем клеток, продуцирующих муцин [13]. Муцикармин также окрашивает желатиновую капсулу грибов Cryptococcus . [12]

Судан Черный

Суданский черный краситель окрашивает липидсодержащие структуры, такие как триглицериды и липопротеины, в темно-черный или коричневый цвет.[7] [6] В тканевом препарате Sudan Black и Oil Red O пропущена стадия спиртовой дегидратации, чтобы избежать вымывания липидов, подлежащих окрашиванию. Его можно использовать для диагностики атеросклероза путем окрашивания атеросклеротических бляшек и аутосомно-доминантной лейкодистрофии путем окрашивания макрофагов в белом веществе после посмертной биопсии мозга. [7]

Красное масло O

Подобно красителю Sudan Black, Oil Red O — наиболее распространенный краситель, используемый для гидрофобных жиров или липидов, веществ, которые традиционно трудно поддаются окрашиванию.Oil Red O очень полезен для визуализации атеросклеротических бляшек и накопления липидов в печени и мышцах. [7] [6] [14]

Серебряное пятно

Серебро-красители — это более крупная категория красителей, используемых для гистопатологического исследования накопленных заболеваний в неврологии. Есть несколько методов окрашивания серебром, в том числе Бильшовского, Галляса, Бодиана и Кэмпбелла-Свитцера. Выбранный метод окрашивания зависит от рассматриваемого неврологического поражения, поскольку каждый метод имеет разную чувствительность и специфичность.Как правило, эти методы прикрепляют ионы серебра или солевые комплексы к ткани-мишени. Затем они должны быть восстановлены на месте, а последующие частицы серебра накапливаются и могут быть проанализированы. [15] В последнее время стало применяться фторирование, при котором флуорогенный полупроводник высвобождает небольшие 6-нм наночастицы в отложениях серебра и дает цвета. Диапазон диаметров образующихся частиц серебра соответствует разным цветам. Например, диапазон от 10 до 20 нм дает желтый цвет, тогда как диаметр, превышающий 100 нм, дает черный цвет.[16]

Окрашивание серебром хорошо известно как средство обнаружения бета-белка амилоида (Aß) при болезни Альцгеймера и тельцов Пика при болезни Пикса. При окрашивании амилоидные бляшки темнеют. Они могут варьироваться от желтого до черного, в зависимости от размера или количества амилоидных бляшек [15].

Nissl Stain

Краситель Ниссля, также называемый фиолетовым красителем Крезил, использует базовый анилиновый краситель для изучения нейрональной структуры головного и спинного мозга. Нейропил окрашивает синевато-пурпурный и зернистый цвет.Вещество Ниссля содержит большое количество рибосомной РНК, которая привлекает краситель, приобретает темно-синий цвет и делает цитоплазму пятнистой. Преимущество использования красителя Ниссля для оценки нейрональной патологии заключается в том, что он будет узнаваемо окрашивать цитоплазму нейронов без окрашивания перикарионов других клеточных структур, таких как астроциты. [17]

Пятно Папаниколау

Окраска по Папаниколау, в просторечии называемая мазком Папаниколау, представляет собой метод цитологического окрашивания, наиболее известный для выявления рака шейки матки у пациенток.Окрашиваемые клетки собирают из гинекологических мазков, образцов мокроты, щеток, материалов для тонкой иглы для аспирации и промываний. Многоцветное окрашивание включает пять красителей: гематоксилин для ядра, оранжевый G для кератина, эозин для поверхностных структур, светло-зеленый SF для цитоплазмы и Bismarck Brown. [18] В условиях скрининга рака шейки матки мазок Папаниколау полученные окраски эпителиальных клеток из переходной зоны шейки матки подвергаются анализу на предраковые и раковые процессы.Часто готовят второй слайд для иммуноокрашивания биомаркером p16INK4a для выявления дисплазии. [19]

Свет для микроскопии

Световой микроскоп, также называемый оптическим микроскопом, можно использовать для просмотра живых или мертвых образцов. Увеличение в 1500 раз меньше, чем у электронных микроскопов. Метод освещения — это свет в микроскоп, а не пучок электронов. [20] Световой микроскоп используется для большинства пятен, описанных в этой статье, таких как пятна Грама, H&E и Giemsa.

Электронная микроскопия

Электронный микроскоп полезен для просмотра внутриклеточных компонентов, невидимых с помощью световой микроскопии, что помогает прояснить биологию аномальных тканей и клеток. Электронная микроскопия обычно увеличивает в 100–300 раз больше, чем максимальное увеличение световой микроскопии. [20] Обычно секции должны быть ультратонкими, чтобы обеспечить адекватное проникновение электронов. Наиболее полезными для электронной микроскопии являются гистологические пятна с солями тяжелых металлов, поскольку они создают фазовый контраст, необходимый для визуализации структур.[21] Просвечивающие электронные микроскопы лучше подходят для исследования внутриклеточных структур, в то время как сканирующие электронные микроскопы обычно используются для исследования поверхностных структур.

Патофизиология

Использование специальных красителей для тканей не только помогает различать структурные изменения тканей, но также предупреждает врача об изменениях в функции тканей, имеющих большое значение для постановки диагноза, таких как аномальное отложение железа или аномальное отложение белка [амилоидоз , парапротеинемия и др., аномальное накопление гликогена или других углеводов и аномальное накопление жира. С помощью высокоспециализированного окрашивания можно обнаружить множество других изменений клеточной физиологии.

Клиническая значимость

Гистологическое окрашивание и исследование имеют очень высокое клиническое значение в медицинской диагностике и лечении почти во всех областях медицины. Гистологическое исследование — золотой стандарт диагностики многих патологических заболеваний, при которых окрашивание является важным компонентом.Гистохимический анализ образца ткани позволяет патологоанатому не только поставить диагноз, но и определить тяжесть заболевания и сделать прогноз.

Гистопатология

Что такое гистопатология?

Гистопатология — это диагностика и изучение заболеваний тканей, включающая исследование тканей и / или клеток под микроскопом. Гистопатологи несут ответственность за диагностику тканей и помогают клиницистам управлять уходом за пациентом.

Почему важна гистопатология?

Гистопатологи — это врачи, которые тесно сотрудничают с другими клиническими специалистами. Они могут поставить диагноз, исследуя небольшой кусочек ткани кожи, печени, почек или другого органа. Это называется биопсией.

Они внимательно изучают ткань под микроскопом в поисках изменений в клетках, которые могут объяснить причину болезни пациента. Ежегодно в Великобритании исследуется около 20 миллионов гистопатологических слайдов.

Диагноз рака

Гистопатологи предоставляют услуги диагностики рака; они обрабатывают клетки и ткани, удаленные из подозрительных « бугорков и шишек », идентифицируют природу аномалии и, в случае злокачественности, предоставляют врачу информацию о типе рака, его степени и, для некоторых видов рака, о его реакции на определенные методы лечения .

С помощью сложных методов визуализации теперь можно получить биопсию ткани из ранее недоступных участков, таких как поджелудочная железа или забрюшинное пространство (за

брюшина, оболочка, выстилающая брюшную полость).Затем ткань обрабатывают, обычно в течение ночи, прежде чем исследовать под микроскопом. В определенных ограниченных обстоятельствах с использованием специальных методов образец можно исследовать немедленно. В связи с быстро меняющимися тенденциями развития молекулярной патологии патологи лидируют с новыми методами, такими как флуоресцентная гибридизация in-situ.

(FISH) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для картирования генетического материала в тканях или опухолях, которые необходимы для лечения многих видов рака.

Роль гистопатолога

Многие гистопатологи специализируются на определенных органах, таких как печень или кожа, рассекая («разрезая» или «обрезая») ткани для ежедневного наблюдения под микроскопом. Для больших образцов, таких как образцы кишечника или груди после операции, они препарируются, чтобы выбрать наиболее подходящие области для исследования под микроскопом. Гистопатологи пишут отчеты об образцах, обращаются к литературе (результаты прошлых и текущих исследований), а многие также занимаются преподаванием и исследованием.

Они также будут посещать междисциплинарные встречи, чтобы их выводы можно было обсудить с другими клиницистами. Затем процедуры детально планируются и адаптируются к каждому пациенту.

Гистопатологи также работают напрямую с пациентами, например, они могут выполнять такие процедуры, как тонкая игла аспирации в клиниках головы и шеи или груди. На них все чаще ложатся ключевые обязанности по скринингу рака, в настоящее время на рак груди, кишечника и шейки матки, и в ближайшем будущем ожидается появление других программ.

Гистопатологи также исследуют клетки в мазках, аспиратах или биологических жидкостях (цитопатология), например, в мазках мочи или шейки матки. Другие узкие специальности включают судебную патологию, невропатологию и педиатрическую патологию.

  • За своим столом я делаю несколько дел под микроскопом, диктуя отчеты по ходу дела. Я обычно подстригаюсь утром. Моими интересами являются патология печени / поджелудочной железы и головы и шеи, поэтому я могу смотреть на печень, удаленную при трансплантации, частичную резекцию печени или резекцию поджелудочной железы по поводу опухоли.

шагов к обработке тканей для гистопатологии: Leica Biosystems

1. Получение свежего образца

Образцы свежих тканей будут поступать из различных источников. Следует отметить, что они очень легко могут быть повреждены при удалении от пациента или подопытного животного. Важно, чтобы с ними обращались осторожно и как можно скорее после вскрытия правильно зафиксировали. В идеале фиксация должна производиться на месте удаления, например, в операционной, или, если это невозможно, сразу после транспортировки в лабораторию.

2. Крепление

Образец помещают в жидкое фиксирующее средство (фиксатор), такое как раствор формальдегида (формалин). Он будет медленно проникать в ткань, вызывая химические и физические изменения, которые укрепляют и сохраняют ткань и защищают ее от последующих этапов обработки. 2 Существует ограниченное количество реагентов, которые можно использовать для фиксации, поскольку они должны обладать особыми свойствами, которые делают их пригодными для этой цели.Например, компоненты ткани должны сохранять некоторую химическую активность, чтобы впоследствии можно было применить определенные методы окрашивания. 3 Формалин, обычно в виде раствора с фосфатным буфером, является наиболее популярным фиксатором для сохранения тканей, которые будут обрабатываться для изготовления парафиновых срезов. В идеале образцы должны оставаться в фиксаторе достаточно долго, чтобы фиксатор проник во все части ткани, а затем в течение дополнительного периода, чтобы позволить химическим реакциям фиксации достичь равновесия (время фиксации).Обычно это означает, что образец должен фиксироваться в течение от 6 до 24 часов. Большинство лабораторий используют ступень для фиксации в качестве первой станции в своем процессоре.

После фиксации может потребоваться дальнейшее рассечение образцов для выбора подходящих участков для исследования. Образцы, которые должны быть обработаны, будут помещены в кассеты с соответствующей маркировкой (небольшие перфорированные корзины), чтобы отделить их от других образцов. Продолжительность графика обработки, используемого для обработки образцов, будет зависеть от типа и размеров самых больших и самых маленьких образцов, конкретного используемого процессора, выбранных растворителей, температуры растворителя и других факторов.Следующий пример основан на шестичасовом графике, подходящем для использования на быстром процессоре ткани Leica Peloris ™.

3. Обезвоживание

Поскольку расплавленный парафин является гидрофобным (не смешивается с водой), большую часть воды из образца необходимо удалить, прежде чем он может быть пропитан воском. Этот процесс обычно выполняется путем погружения образцов в серию растворов этанола (спирта) с возрастающей концентрацией до получения чистого безводного спирта.Этанол смешивается с водой во всех пропорциях, поэтому вода в образце постепенно заменяется спиртом. Серия увеличивающихся концентраций используется, чтобы избежать чрезмерного искажения ткани.

Типичная последовательность дегидратации образцов толщиной не более 4 мм:

  1. 70% этанол 15 минут
  2. 90% этанол 15 минут
  3. 100% этанол 15 минут
  4. 100% этанол 15 минут
  5. 100% этанол 30 мин.
  6. 100% этанол 45 мин.

На этом этапе все, кроме крошечного остатка прочно связанной (молекулярной) воды, должны были быть удалены из образца.

4. Клиринг

К сожалению, хотя ткань теперь практически не содержит воды, мы все еще не можем пропитать ее воском, потому что воск и этанол в значительной степени не смешиваются. Следовательно, мы должны использовать промежуточный растворитель, который полностью смешивается как с этанолом, так и с парафином. Этот растворитель вытеснит этанол в ткани, а затем он, в свою очередь, будет вытеснен расплавленным парафином. Этот этап процесса называется «очисткой», а используемый реагент — «очищающим агентом».Термин «клиринг» был выбран потому, что многие (но не все) очищающие агенты придают оптическую прозрачность или прозрачность ткани из-за их относительно высокого показателя преломления. Другая важная роль очищающего агента заключается в удалении значительного количества жира из ткани, который в противном случае представляет собой барьер для инфильтрации воска.

Популярным очищающим агентом является ксилол, и для полного вытеснения этанола требуется несколько изменений.

Типичная последовательность очистки образцов толщиной не более 4 мм:

  1. ксилол 20 мин
  2. ксилол 20 мин
  3. ксилол 45 мин

5.Восковая инфильтрация

Теперь ткань можно пропитать подходящим гистологическим воском. Хотя многие различные реагенты были оценены и использовались для этой цели в течение многих лет, гистологические воски на основе парафина являются наиболее популярными. Типичный воск является жидким при 60 ° C и может проникать в ткань при этой температуре, а затем ему дают остыть до 20 ° C, где он затвердевает до консистенции, позволяющей равномерно разрезать срезы. Эти воски представляют собой смеси очищенного парафинового воска и различных добавок, которые могут включать смолы, такие как стирол или полиэтилен.Следует принимать во внимание, что эти восковые составы обладают очень особыми физическими свойствами, которые позволяют тканям, пропитанным воском, быть разрезанными по толщине до, по крайней мере, 2 мкм, с образованием лент, когда разрезы разрезаются на микротоме, и сохранять достаточную эластичность. полностью расплющить во время флотации на теплой водяной бане.

Типичная последовательность инфильтрации для образцов толщиной не более 4 мм:

  1. воск 30 мин
  2. воск 30 мин
  3. воск 45 мин

6.Встраивание или блокировка

Теперь, когда образец полностью пропитан воском, из него нужно сформировать «блок», который можно закрепить в микротоме для разрезания сечения. Этот этап выполняется с использованием «центра заливки», где форма заполняется расплавленным воском и в нее помещается образец. Образец очень тщательно ориентируют в форме, потому что его размещение будет определять «плоскость сечения», что является важным фактором как в диагностической, так и в исследовательской гистологии.Кассета помещается на форму сверху, доливается воском, и все это помещается на холодную тарелку для застывания. Когда это будет завершено, блок с прикрепленной к нему кассетой можно вынуть из формы, и он будет готов к микротомии. Следует отметить, что при правильной обработке тканей восковые блоки, содержащие образцы тканей, очень стабильны и представляют собой важный источник архивного материала.

Подготовка гистологических проб | Фиксация, обработка, разрезание, окрашивание

Препарат для гистологии

Гистология — это исследование микроскопических тканей и их структур.Гистология — важная часть биологии, медицины и других наук. Подготовка гистологических образцов для наблюдения под микроскопом — это деликатный процесс с использованием специальных методов, которые необходимы для получения точных и качественных результатов. Подготовка включает: фиксация, обработка, разрезание и окрашивание.

Первым шагом в подготовке гистологических образцов является фиксация или фиксация ткани. На этом этапе образцы ткани «фиксируются» таким образом, чтобы сохранить максимально естественное состояние, чтобы предотвратить разрушение.Существует много типов фиксаторов, хотя многие сотрудники лабораторий используют 10% нейтральный забуференный формалин. Для фиксации образца ткани требуется от 24 до 48 часов, если используется надлежащее соотношение формалина к образцу 10: 1. Для получения оптимальных результатов образец следует зафиксировать как можно скорее после отбора.

Во время обработки ткань обезвоживается спиртом для удаления воды или фиксации с образца. Затем гистологические образцы очищают от спирта и позволяют парафиновому воску проникнуть в образец.Наконец, образец заливается большим блоком парафина. Когда блок затвердевает, он создает опору для образца на следующем этапе разрезания.

Секционирование — это когда образец разрезается на части, которые затем помещаются на предметное стекло. Восковой блок предварительно охлаждают в течение 10 минут. С помощью микротома из блока вырезают тонкие ломтики, обычно толщиной около 5 мкм. После того, как ломтики нарезаны, их переносят на водяную баню с теплой водой, пока они не будут помещены на заряженное предметное стекло. Затем предметные стекла сушат, позволяя лишнему парафину растаять от образца.

Последний этап подготовки гистологического образца — окрашивание. Пятна контрастируют с участками ткани, что облегчает просмотр структур образца. После окрашивания предметного стекла на образец добавляется покровное стекло, чтобы защитить его.

Вам нужна лаборатория, которая поможет вам подготовить гистологические образцы? Позвольте нам помочь вам! Отправьте запрос на тестирование в контрактную лабораторию или по телефону 1-855-377-6821 или просмотрите запросы на гистологические тесты.

Запросы на гистологический анализ
  • Пищевая лаборатория, необходимая для определения видового состава мяса с помощью гистологии не подвергнутых деформации тканей говядины в бургерах из говядины.Например. Сердце, легкое и т. Д.
  • Гистологическая лаборатория, необходимая для гистологических (H и E) исследований в следующей области 1. Церебрум Самцы крысы, контрольные × 200 и × 400 2. Искагемия для сонных сосудов в течение 25 минут × 200 и × 400, затем перфузия в течение одного часа 3. Ишемия в течение 3- 5 минут, затем перфузия в течение одного часа × 200 × 400
  • Университетскому исследователю нужна лаборатория клинической патологии для цитологии и гистологии различных образцов рака, включая рак шейки матки, рак груди, рак поджелудочной железы, рак мочевого пузыря и рак желчных протоков.
  • Лаборатория ветеринарной медицины, необходимая для гистологии сухожилий лошадей после лечения и ELISA для определения факторов роста с коммерчески доступными тестами.
  • CAP или CLIA сертифицированная гистологическая лаборатория, необходимая для обработки и анализа парафиновых блоков образцов кожи человека, которые мы хотели бы вырезать для слайдов, а затем проанализировать на H&E и трихром Гомори.
  • Исследователь из Европейского университета нуждается в гистологической лаборатории для иммуногистохимии CD52 на предметном стекле (залитый парафином, фиксация формалином.
  • ДОЛГОСРОЧНЫЙ: Лаборатория доклинической клинической иммунологии / гистологии, необходимая для гистологической обработки не-GLP из забуференных фиксированных формалином тканей (человека и животного, размер 6 мм в диаметре, примерно 40 мкм толщиной) на предметные стекла, окрашенные H&E (на 3 различных уровнях) и около 10 неокрашенных препаратов FFPE для дальнейшей иммуногистохимии,
  • Исследователь из французского университета нуждается в гистологической лаборатории иммуногистохимии на 1 слайде (ТМА) для исследования антител (уже приобретенных или нет, например, ALDH, SOX).

Leave a Comment

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *