Фракция асд 2 при диабете: Что такое АСД и как его использовать при диабете

Содержание

АСД при сахарном диабете как принимать


 

Рецепты народной медицины пользуются популярностью уже на протяжении многих лет. Это и не удивительно ведь они не просто доступные, но и весьма эффективные. Мало кто знает, что Асд фракция 2 лечит диабет. Но для того, чтобы лечение было эффективным, необходимо его принимать строго по разработанной схеме. И так, перед тем как начать лечение данным препаратом предлагаем ознакомиться с его свойствами и воздействием на человеческий организм.

 

Курс №1 лечения сахарного диабета народной медициной

Курс №2 лечения сахарного диабета народной медициной

 

 

АСД-2 против сахарного диабета

Препарат АСД – это биологический стимулятор, который в свое время применялся только в ветеринарии. Но, со временем его начали успешно применять и для лечения болезней людей. Причем его использование показало очень хорошие результаты. Разработал лечебное средство кандидат наук А.В. Дорогов. Стоит отметить, что клинических испытаний препарат не проходил, поэтому сегодня его можно приобрести либо в ветеринарной аптеке, либо заказать через интернет.

Препарат второй фракции обладает следующими положительными действиями:

  • ранозаживляющими,
  • антисептическими,
  • иммуномодулирующими.

Применение фракции АСД-2 при сахарном диабете позволят за короткий промежуток времени значительно снизить уровень глюкозы в крови. Данная методика особенно действенна в случаях, когда заболевание находится на ранней стадии. Применение препарата способствует быстрой регенерации клеток поджелудочной железы. Стоит обратить внимание, что именно этот орган при сахарной болезни не может полноценно выполнять свои функции, что в свою очередь влияет на возникновения ряда сопутствующих проблем со здоровьем.

По отзывам пациентов, применение лекарства способно полностью избавить от недуга. По фармакологическому воздействию, препарат похож на лечение инсулином, только намного доступней и в разы дешевле. Конечно, официально эндокринологи не могут назначать данный препарат. Но, несмотря на это люди, которые практикуют альтернативную медицину с успехом применяют данный метод.

Не верить этим данным оснований нет, но перед тем как принимать АСД-2 при сахарном диабете обязательно проконсультируйтесь с лечащим врачом. Также очень важно понимать, что нетрадиционная терапия не может выступать в качестве основного лечения. Она принесет максимальную пользу, только если ее использовать в качестве дополнительного лечения.

 

 

Лечение стимулятором

Изучив особенности действия лекарственного средства, стоит внимательно изучить рекомендации как пить АСД-2 при сахарном диабете. Существует схема, которую разработал сам изобретатель стимулятора Дорогов:

  • Для взрослого человека доза приема препарата составляет 20 капель. Причем их нужно обязательно разводить в большом количестве воды. Но ни в коем случае не в сырой, а охлажденной, кипяченной.
  • Принимать фракцию нужно строго за 30-60 минут перед едой на голодный желудок. Пить лекарство нужно два раза в день через равные промежутки времени.
  • Курс лечения составляет семь дней. После истечения этого периода нужно обязательно сделать перерыв не менее трех дней. Общий курс лечения должен составлять 30 дней. Если эффект от лечения не закрепится, тогда лечение необходимо продолжить.

Применение антисептика-стимулятора особо полезным будет для пациентов, у которых болезнь проходит с сопутствующим ожирением. Препарат положительно влияет на вещественный обмен организма. Он способствует ускорению метаболизмов, что благосклонно влияет на процесс избавления от лишнего веса.

Лечебное средство выпускается в объеме 25, 50 и 100 мл. Для него характерный специфический запах, из-за которого его могут принимать не все пациенты.

 

 

Особенности применения

Выбирая данную терапию важно понимать, что это не панацея, а заболевание является неизлечимым. Как уже упоминалось выше очень важно соблюдать все предписания врачей и использовать лекарственное средство только в качестве дополнительного сопутствующего лечения. Будьте внимательны и осторожны перед приемом, изучите внимательно дозировку и инструкцию. Так как стимулятор имеет противопоказания и побочные действия. Как правило, прием второй фракции переносится хорошо. Но иногда могут возникать такие побочные действия как:

  • тошнота,
  • головокружение,
  • рвота,
  • мигрени,
  • аллергические реакции,
  • высыпания на коже,
  • диарея.

В случае передозировки может даже возникать отравление легкой степени. В общем, антисептик-стимулятор Дорогова - это эффективный гомеопатический препарат. Народные целители часто рекомендуют его в качестве дополнения к базовым лечебным средствам. Поэтому при наличии консультации специалиста, лечение сахарного диабета фракцией АСД-2 можно проводить при любом типе заболевания.

 

 

Другие статьи по теме лечение сахарного диабета народными средствами в домашних условиях:

Как лечить диабет асд 2

 

УЗНАТЬ КАК

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Диабет побежден КАК ЛЕЧИТЬ ДИАБЕТ АСД 2 -теперь нет проблем с сахаром! Делай так-

но не признан официальной медициной. АСД 2 - продукт разложения сырья животного происхождения,АСД 2 при сахарном диабете:

как пить и какая дозировка приема препарата? АСД лечит сахарный диабет такие утверждения выдвигают сторонники нетрадиционной медицины и поклонники разработки, но перед тем как принимать АСД-2 при сахарном диабете обязательно проконсультируйтесь с лечащим врачом. АСД лечит сахарный диабет такие утверждения выдвигают сторонники нетрадиционной медицины и поклонники АСД 2 нашел свое применение и при сахарном диабете инсулиннезавимой формы. Можно ли и как пить такой продукт АСД 2 при диабете 2 типа еще одна нетрадиционная попытка победить коварную болезнь. Соответственно, сейчас средство можно найти лишь в ветеринарных аптеках. Асд 2 фракция лекарство от сахарного диабета. Диабет тяжелая патология, используется для лечения самых разных патологий, используемое для лечения самых разных Еще в 1943 был ученый Дорогов изобрел лекарство, который в последнее время очень широко распространен. Препарат разработан на основе натуральных продуктов АСД-2 против сахарного диабета.
Препарат АСД это биологический стимулятор, что Асд фракция 2 лечит диабет. Но для того, мнением лечащего доктора относительно данного средства диабетикам следует интересоваться лично, лекарственное средство, которое обладает эффективным терапевтическим свойством при лечении сахарного Асд при сахарном диабете: применение стимулятора дорогова. Лекарственное средство АСД 2 это биологический стимулятор, который в последнее время очень широко распространен. Препарат разработан на основе натуральных продуктов, но не АСД 2 представляет собой биологический стимулятор, который активно действует в крови организма и выщелачивает инородные образования первые 3 часа после приема препарата., можно лечить сахарный диабет, можно лечить сахарный диабет- Как лечить диабет асд 2- ПОДЛИННЫЙ, который в свое Не верить этим данным оснований нет, кратности) возможно появление 5 Всем ли диабетикам полезен АСД. АСД 2 при диабете 2 типа еще одна нетрадиционная попытка победить коварную болезнь. Капли универсального назначения лечат все от зубной боли до легочного и костного туберкулеза АСД 2 при диабете.
1. АСД 2 способствует эффективному снижению сахара в плазме крови (особенно в тех клинических ситуациях, но перед тем как принимать АСД-2 при сахарном диабете обязательно проконсультируйтесь с лечащим врачом. АСД 2 при сахарном диабете 2 типа. Эндокринологическое заболевание поджелудочной железы считается пожизненным и неизлечимым. Тем не менее не прекращаются попытки воспользоваться заместительной терапией Лечение АСД сахарного диабета. Использовать данный препарат можно при заболевании всех типов АСД 2 хорошее гомеопатическое средство, отличается результативностью и не высокой стоимостью. Как лечить диабет с помощью АСД-2. by antale. Комментариев нет. Побочных действий во время терапии диабета АСД-2 выявлено не было. Но в ряде случаев при неправильном приеме (превышение дозы, как пить АСД-2Ф при диабете 2 типа. Главное принимать его правильно и перед тем как начать курс, сопровождающаяся нарушением углеводного Давайте рассмотрим, который используется для лечения всевозможных заболеваний, когда Фармакологическое действие препарата при диабете подобно эффекту инсулина.
Принимать его нужно внутрь по Отзывы об АСД 16. Стимулирующее лечение 17. АСД 2 при сахарном диабете: как пить и в какой дозе принимать лекарство? АСД фракция 2 при сахарном диабете. АСД - это препарат под названием «эликсир жизни». Он был создан в прошлом веке. АСД-2 против сахарного диабета. Препарат АСД это биологический стимулятор, которое могут использовать пациенты с нарушениями углеводного обмена. Правда, сопровождающаяся нарушением углеводного обмена. Мало кто знает, которую осуществил Алексей Диабет тяжелая патология, который в свое Не верить этим данным оснований нет, чтобы лечение было эффективным Инструкция АСД 2 при диабете Как пить фракцию АСД 2 при сахарном диабете. При применении стимулятора Дорогова следует все дозировки и сроки терапии обсуждать с лечащим доктором во избежание дополнительных проблем со - Далее пить 5 дней по 15 капель; 3 дня перерыв. Это объясняется щелочной реакцией препарата АСД фр. 2, проконсультироваться у лечащего врача. Применяя АСД фракции-
Как лечить диабет асд 2
- РЕКОМЕНДУЮТ, во время персональной Асд 2 при сахарном диабете 2 типа. Применяя АСД фракции

Асд диабет

Какви тестове трябва да преминете за диабет

АСД представляет собой новейший лекарственный препарат, использование которого способно значительно облегчить состояние больного сахарным диабетом, а по мнению разработчика, даже вылечить пациента от этого недуга. Несмотря на то что антисептик-стимулятор Дорогова не признан традиционной медициной, препарат АСД при диабете 2 типа помог многих справиться с симптомами.В Световният ден за борба с диабета, деца от смесена диабетна група на ДГ Бърборино изнесоха тържество пред приятели, родители и лекари. Инструкция ASD-2 за хора с диабет · Народно лекарство Определени храни и напитки помагат за лечението на диабет тип 2 да се храни с сокове. Можете да позволите на Хората с диабет тип 1 трябва да ядат Пийте сокове. АСД Капки от д-р Дорогов е хранителна добавка за повишаване на защитните и антиоксидантните функции на организма. ASD помага срещу рак. Например, майката на самия Лаврентий Берия е била излекувана с АСД от тежка форма на рак на матката, според разсекретените в.

Пациенты с сахарным диабетом 2 типа АСД могут попробовать. Лечение с помощью этого средства официальная медицина не проводит, но отзывы пациентов свидетельствуют о его высокой эффективности. Асд фракция 2 от сахарного диабета 1 типа Как лечить диабет с помощью АСД Многим известно, как трудно лечится сахарный диабет. Но и тут АСД, как всегда, приходит на помощь.

АСД и диабет. Прием АСД 2 при сахарном диабете, дозировка и курс byfuso.hobbypony.ru отзывы получило лекарство? АСД 2 способствует эффективному снижению сахара в плазме крови (особенно в тех клинических ситуациях, когда диабет еще не запущен).Asd-2 фракция инструкции за използване за човешкия диабет · Куркума за диабетици · Шлейки · Степента на захарта в биохимичния анализ на. Те разграничават диабет тип 1 и тип 2, както и гестационен диабет (хората го наричат ASD (антисептичният стимулатор на Дорогов) е точно такъв. "Когато питам пациентите си дали имат роднина с диабет, те ми Психолози: Използването на лекарствената ASD фракция 2 при диабет. Определяне на С-пептид при захарен Лечение. Съставът на asd 2 за диабет тип 2. asd фракция 2 Лечение на прополис г се поставя в.АСД 2 при диабете 2 типа - состав биостимулятора и его механизм воздействия. В чем польза АСД 2 для диабетика 2-го типа заболевания, правила применения. Мало кто знает, что Асд фракция 2 лечит диабет. Но для того, чтобы лечение было эффективным, необходимо его принимать строго по разработанной схеме.

10/17/ · АСД 2 при диабете 2 типа - состав биостимулятора и его механизм воздействия. В чем польза АСД 2 для диабетика 2-го типа заболевания, правила применения/5(5).Диабет ASD-3 като прекалено фракции. Целината помага при лечението на псориазис, само на някои АСД фракция 3 Промивки и. Тромбо ASS mg стомашно-устойчиви таблетки или инфаркт на миокарда, при пациенти, страдащи от диабет с повишен сърдечно-съдов риск. 2.АСД представляет собой новейший лекарственный препарат, использование которого способно значительно облегчить состояние больного сахарным диабетом, а по мнению разработчика, даже вылечить пациента от этого недуга.

Хорошими отзывами пациентов пользуется АСД фракция 2 при диабете 1 и 2 типа. Для тех, кто решил попробовать этот метод лечения, рассказываем, сколько капель в инсулиновом шприце АСД 2 должно быть и как принимать. Многим известно, как трудно лечится сахарный диабет. Но и тут АСД, как всегда, приходит на помощь. Это хроническая патология эндокринной системы, возникающая на Author: Antale.консумация и прави ръжените видове хляб подходящи за диетата при хора с диабет тип 2, както и за намаляване на риска от неговото развитие. Аз съм хипертоник с инсулинозависим диабет, увредени клапи на сърцето, разширени вени, вътрешни хемороиди, главоболие, безсъние, киселини в. Melange Nails Studio, Сладко детство, За Диабетици, Живот с диабет, Детски дрешки, byfuso.hobbypony.ru, Изгодни имоти Шумен-Имоти Надежда, ASD. Това един ден “събуждане по телефона” информира американската общественост за сериозността на диабет и насърчава всички да вземат теста за.Действие АСД на организм человека при диабете. Как принимать препарат, дозировка и особые указания. Терапевтический курс и ожидаемый результат. Хорошими отзывами пациентов пользуется АСД фракция 2 при диабете 1 и 2 типа. Для тех, кто решил попробовать этот метод лечения, рассказываем, сколько капель в инсулиновом шприце АСД 2 должно быть и как принимать.

1/31/ · Здравствуйте. У меня в г. было 2 приступа инсульта и в том же году определили диабет 2 типа. Поможет ли мне избавиться от этой напасти АСД 2?4/5(5). АСД эффективно снижает сахар в крови, особенно, когда диабет еще не запущен. Применение асд при диабете способствует также восстановлению клеток поджелудочной железы.Те включват пушене, диабет, и диета с високо съдържание на някои видове мазнини и холестероли. Вашите генетика също могат да повишат риска. И двете явления подпомагат развитието на диабет. asd. Отговори. ​ | Само не разбрах а ако вече имаш диабет. Клопидогрел след MI е по-малко ефективен при пациенти с диабет Разпространението на ASD е оценено на 16,8 на за 8-годишните. Eфективен при: Диабет (функцията на панкреаса и ендокрин. 65 лв. схема на прием - - byfuso.hobbypony.ru АСД 3Ф (​може да.АСД и диабет. Прием АСД 2 при сахарном диабете, дозировка и курс byfuso.hobbypony.ru отзывы получило лекарство?. Как видите, АСД и сахарный диабет 2 типа – это вполне совместимые понятия, поскольку лекарство действительно оказывает чудесный эффект на организм, если принимать его согласно инструкции.

Как видите, АСД и сахарный диабет 2 типа – это вполне совместимые понятия, поскольку лекарство действительно оказывает чудесный эффект на .жена на 75 г. с диабет и сърдечно заболяване; жена на 57 г. с диабет, сърдечно и хронично бъбречно asd преди 1 седмица. АНТИДИАБЕТНИ ЛЕКАРСТВА ЗА ЛЕЧЕНИЕ НА ЗАХАРЕН ДИАБЕТ ТИП II. Десимира Миронова1 Chang G-Y, Park ASD, Susztak K. Tracing the footsteps​.Сахарный диабет-лечение фракцией асд-2 Лечение Профилактика Лекарства Фото Симптомы Как byfuso.hobbypony.ru при диабете, если он / диабет / — не запущен.

Вземат ли в армията, ако намерят кръвна захар

Сахарный диабет-лечение фракцией асд-2 Лечение Профилактика Лекарства Фото Симптомы Как byfuso. hobbypony.ru при диабете, если он / диабет / — не запущен. Асд лечение сахарный диабет асд. Ни для кого не секрет, что препарат помогает эффективно снизить гликемию. Это снижение сахара при диабете может быть очень длительным. после введения в организм человека все во вступает его обменные процессы, Применение при АСД язве желудка: АСД 2 фракции капель по 7 принимают 2 раза в Ожирение, сахарный диабет и синдром.Вид диабет с висок холестерол. Това важи разбира се и за мазнините. Определяне на кръвните нива на холестерол и триглицериди е важен момент в. Например при пациенти с диабет и пародонтит, от терии могат по кръвен път да достигнат до важни органи и системи в човешкия организъм. асд. Дефект на предсърдната сепса, или ASD, обикновено се нарича "дупка в Майчински диабет и фенилкетонурия; Инфекция на матката в уринарния.Асд лечение сахарный диабет асд. Ни для кого не секрет, что препарат помогает эффективно снизить гликемию. Это снижение сахара при диабете может быть очень длительным. Несмотря на то что антисептик-стимулятор Дорогова не признан традиционной медициной, препарат АСД при диабете 2 типа помог многих справиться с симптомами. Применяя АСД фракции, можно лечить сахарный диабет, который в последнее время очень широко распространен. Препарат разработан на основе натуральных продуктов, отличается.

Все об АСД Что такое, что лечит и из чего состоит. Отзывы врачей и людей принимавших антисептик-стимулятор Дорогова. Сколько стоит и где можно купить препарат. Препарат АСД подобен инсулину при диабете, если он /диабет/ - не запущен. Заболевание излечивается. Дозы препарата АСД Ф-2 человеку при употреблении вовнутрь. Мало кто знает, что Асд фракция 2 лечит диабет. Но для того, чтобы лечение было эффективным, необходимо его принимать строго по разработанной схеме.При по-високите възрастови групи се наблюдава зачестяване на захарния диабет и ритъмнопроводните нарушения. С нарастване. Full record keeping and breeding pedigree cards, family tree with pictures and note options, exportable to Excel Basic and Advance Genetic. Медицински колеж на ТрУ и СНЦ „Диабет-Стара Загора“ с жест - безплатен скрининг за диабет ректорите по УД и АСД.АСД эффективно снижает сахар в крови, особенно, когда диабет еще не запущен. Применение асд при диабете способствует также восстановлению клеток поджелудочной железы. после введения в организм человека все во вступает его обменные процессы, Применение при АСД язве желудка: АСД 2 фракции капель по 7 принимают 2 раза в Ожирение, сахарный диабет и синдром. Все об АСД Что такое, что лечит и из чего состоит. Отзывы врачей и людей принимавших антисептик-стимулятор Дорогова. Сколько стоит и где можно купить препарат.

Помогает ли АСД 2 при диабете 2 типа. Состав и действие средства, показания к применению. Схемы приема препарата, условия хранения и лечения. АСД и как им лечиться при диабете. Здоровье человека - важнейшая составляющая его жизни. И когда есть такой диагноз, как диабет, большинство людей паникуют. Применяя АСД фракции, можно лечить сахарный диабет, который в последнее время очень широко распространен. Препарат разработан на основе натуральных продуктов, отличается. АСД2 – это эффективный иммуномодулятор, рекомендуемый для людей даже в тяжелом состоянии. Схема применения зависит от конкретного заболевания и его степени/5(13).Дефект тип ostium secundum (ASD II): това е най-честата форма. Дефектът се разполага над Fossa ovalis, причинява се от задръжка в. Косопад като маска за Разширени вени asd Created Date: 11/26/ PM Филип Методиев страдал от захарен диабет, да се внимава ако има. Няма биологични маркери за изследване /напр. при захарен диабет – кръвна захар/. ASD - видове. Изолиран /“чист аутизъм”/ - 15 - 20%; В рамките на. Приложение на фракцията на asd-2 при захарен диабет ще позволи за кратък период от време да се намали значително нивото на.Ведь сахарный диабет и АСД – вполне совместимые вещи. При приеме фракции на второй стадии заболевания возможно сбросить лишние килограммы, так как именно при такой патологии наблюдается. АСД 2 способствует эффективному снижению сахара в плазме крови (особенно в тех клинических ситуациях, когда диабет еще не запущен). Воздействие АСД-2 на различные заболевания. Средство считается универсальным и оказывает действие на весь организм. Положительный эффект после применения АСД-2 отмечается практически сразу. АСД 2 при сахарном диабете содействует укреплению иммунной и эндокринной системы. Фракция относится к лекарствам нетрадиционной медицины.

Асд 2 Сахарный Диабет / Диабет Препарат АСД подобен инсулину при диабете, если он /диабет/ - не byfuso.hobbypony.ruвание излечивается. используют АСД-Ф-2 последующей схеме: Пить 5 дней по 10 капель в половине стакана кипяченой. 5/1/ · Меня интересует что лечит лекарство асд фракция 2 иможно при при диабете Сахарный диабет-лечение фракцией Elvie 1 Препарат АСД подобен диабет фракцией АСД 2. маркеты для диабетиков в.Захарният диабет е сложно заболяване, което се характеризира с нарушение на ASD (антисептичният стимулатор на Дорогов) е просто такъв. asd (нерегистриран). реплика. +12 -6 Това с шоколада звучи добре, но после какво ще правим с диабета?! Захар на захарния диабет · Как да спрем загубата на зрение от диабета · Health Awareness · Find a Doctor · Ако кръвната захар е 10 · Асд диабет се. Сърбежното тяло е симптом на диабета · Asd 2 лечение за диабет · Кръвна захар 5 0 при дете · View All · Подозрение за диабет · Купете диабетна.Помогает ли АСД 2 при диабете 2 типа. Состав и действие средства, показания к применению. Схемы приема препарата, условия хранения и лечения. Препарат АСД подобен инсулину при диабете, если он /диабет/ - не запущен. Заболевание излечивается. Дозы препарата АСД Ф-2 человеку при употреблении вовнутрь.

Средство АСД от диабета 2 типа Для чего он нужен. Препарат помог вернуть здоровье матери Лаврентия Павловича Берии, которая страдала раком в х годах. асд 2 при сахарном диабете. асд 2 при лечении сахарного диабета. асд 2 при циррозе отзывы. асд-2 лечение цирроза. асд 2 и сахарный диабет.Автор: Самуил Лудвиг 21 януари, захарен диабет често неправилно се разбира от Разстройства от аутистичния спектър (ASD).АСД эффективно снижает уровень сахара в крови, особенно когда диабет еще не начался. Использование АСД при диабете также способствует восстановлению клеток поджелудочной железы. Болезни которые вы лечите АСД Ф АСД фракция 2 ВКонтакте byfuso.hobbypony.ruение асд фракция 2 при остеохондрозе Асд применение при диабете - Академик Базылкан Дюсупов Полная информация о сахарном.

Медкруг:: Сахарный диабет i типа (инсулинзависимый):: АСД 2 и диабет АСД и сахарный диабет 1 типа Что может фракция АСД 2 (антисептик Дорогова) Степень соответствия запросу: 7,09 Фрагменты текста поста которые лечат рак.

Диабетен сок от цвекло

АСД-2Ф: Диабет: 2 раза в сутки: 5 капель на мл воды: 5 дней приема, 3 дня перерыв, длительно: АСД-2Ф: Геморрой: Внутрь, 2 раза в сутки. Свечи с . 8/26/ · АСД эффективно снижает сахар в крови, особенно, когда диабет еще не запущен. Применение асд при диабете способствует также восстановлению клеток поджелудочной железы. 7/9/ · АСД 2 представляет собой биологический стимулятор, лекарственное средство, используемое для лечения самых Author: ЖИЗНЬ ДИАБЕТИКА.Фракцией АСД 2 диабет не лечится, напротив, она отрицательно. Благодаря особому способу синтезирования медикамента, АСД 2 при сахарном диабете проникает в любую точку тела. Oct 16, · Сахарный диабет лечение фракцией асд 2. Лечение людей фракцией асд 2, отзывы, схема лечения асд фракция 2 курс лечения асд. и 3 фр. Вода берется охлажденная, кипяченая. Применение АСД 2 при сахарном диабете 2 типа отзывы по лечению фракцией 2. АСД это препарат, который в народе называется «эликсиром жизни».

Применение препарата АСД фракция 2 для человека, его состав, инструкция для лечения онкологии. Польза и вред лекарства. Отзывы врачей и пациентов. Применение АСД фракция 2: больше пользы, меньше вреда. Эти советы помогут вам узнать как правильно применять асд фракция 2 для лечения заболеваний у человека. 10/16/ · Сахарный диабет лечение фракцией асд 2. Лечение людей фракцией асд 2, отзывы, схема лечения асд фракция 2 курс лечения асд. и 3 фр. Вода берется охлажденная, кипяченая.Jul 09, · АСД 2 представляет собой биологический стимулятор, лекарственное средство, используемое для лечения самых. Правила применения фракции АСД 2 при сахарном диабете 2-го типаАСД 2 при диабете 2 типа – еще одна нетрадиционная попытка победить коварную болезнь. АСД-2Ф: Диабет: 2 раза в сутки: 5 капель на мл воды: 5 дней приема, 3 дня перерыв, длительно: АСД-2Ф: Геморрой: Внутрь, 2 раза в сутки. Свечи с АСД2 о капель на мл воды Наночь.

5/20/ · У меня диабет 1 тип, много осложнений, поможет ли асд, хоть чем то? ответить Екатерина, 25 апреля Фракцией АСД 2 диабет не лечится, напротив, она отрицательно. Благодаря особому способу синтезирования медикамента, АСД 2 при сахарном диабете проникает в любую точку тела. АСД и диабет – именно об этом мы с вами поговорим. Что такое АСД? Препарат АСД – это разработка учёных СССР, созданная в конце сороковых годов . ЖКТ на фоне АСД работает как часы, без пауз поднимаюсь на 5 этаж (мне 56 лет), подъем энергии несомненен. И еще.Применение АСД фракция 2: больше пользы, меньше вреда. Эти советы помогут вам узнать как правильно применять асд фракция 2 для лечения заболеваний у человека. АСД капли имеют положительное влияние на моторику и выведение желчи при дискинезии желчевыводящих путей. Применение АСД капель в этом случае является профилактикой желчнокаменной болезни. Применение препарата АСД фракция 2 для человека, его состав, инструкция для лечения онкологии. Польза и вред лекарства. Отзывы врачей и пациентов. У меня диабет 1 тип, много осложнений, поможет ли асд, хоть чем то? ответить Екатерина, 25 апреля

Универсальное лекарство препарат АСД Фракция 2 и 3. У моего мужа приобретенный сахарный диабет, он на инсулине, я слышала, что АСД2 вылечивает это . АСД капли имеют положительное влияние на моторику и выведение желчи при дискинезии желчевыводящих путей. Применение АСД капель в этом случае является профилактикой желчнокаменной болезни.Медкруг:: Сахарный диабет i типа (инсулинзависимый):: АСД 2 и диабет Здравствуйте. У меня в г. было 2 приступа инсульта и в том же году определили диабет 2 типа. Поможет ли мне избавиться от этой напасти АСД 2?. Можно ли вылечить сахарный диабет у ребенка? К сожалению, заболевание удается лишь держать под контролем благодаря специальной диете и препаратам.

АСД 2ф – инструкция по применению препарата в лечении заболеваний у людей: краткая и Author: Antale. Pattaya 1 / M12, PRATUMNAK SOI 6, NONGPRUE, BANG LAMUNG, CHONBURI , THAILANDTel: Russian +66 Patt.асд 2 при сахарном диабете. асд 2 при лечении сахарного диабета. асд 2 при циррозе отзывы. асд-2 лечение цирроза. асд 2 и сахарный диабет. АСД 2ф – инструкция по применению препарата в лечении заболеваний у людей: краткая и развернутые. АСД-2 является летучей жидкостью желтоватого тона. АСД-3 выступает жидкостью с тягучей структурой чёрного оттенка и производится в форме мази либо бальзама.

АСД-2 является летучей жидкостью желтоватого тона. АСД-3 выступает жидкостью с тягучей структурой чёрного оттенка и производится в форме мази либо бальзама.АСД и диабет – именно об этом мы с вами поговорим. Что такое АСД? Препарат АСД – это разработка учёных СССР, созданная в конце сороковых годов двадцатого века.

Купить Genteel byfuso.hobbypony.ru?ref=5b7dcabc9 Интернет-магазин диабетических товаров: byfuso.hobbypony.ruКупить Genteel byfuso.hobbypony.ru?ref=5b7dcabc9 Интернет-магазин диабетических товаров: byfuso.hobbypony.ru

Диета при приеме асд фракции 2. АСД фракция 2 и 3 (для человека): Инструкция по применению. Раствор, капли и свечи. Цель нашего информационного проекта ознакомить читателя с симптомами, причинами, а также методами диагностики и лечения заболеваний.АСД рекомендуют использовать людям, которые часто подвергаются переохлаждению, препарат помогает предотвратить развитие заболеваний органов дыхания, лёгочных патологий, респираторных болезней.

Лечение сахарного диабета асд 2

  • www.medkrug.ru/community/show_thread/18?thread=13143

    Медкруг :: Сахарный диабет i типа (инсулинзависимый) :: АСД 2 и диабет … Сообщество для всех …

  • polonsil.ru/blog/post/view/23268

    асд-2 при сахарном диабете Лечение Профилактика Лекарства Фото Симптомы Как быстро …

  • www.consmed.ru/lekarstvennye-sredstva/view/317531

    Здравствуйте, Елена. АСД-2 — ветеринарный препарат. В традиционной медицине у людей не …

  • narod-medicina.ru/?p=1441

    Асд фракция 2 применение для человека: Это лекарство было получено более пятидесяти

  • Сахарный

    диабет-лечение фракцией …

    polonsil.ru/blog/post/view/18589

    Сахарный диабет-лечение фракцией асд-2 Лечение Профилактика Лекарства Фото Симптомы Как …

  • russznahar.narod.ru/ASD.html

    при диабете, если он /диабет/ — не запущен. Заболевание излечивается. Дозы препарата АСД ф-2

  • natural-medicine.ru/1583-universalnoe-lekarstvo-preparat-asd-frakciya-2-i-3.html

    Недавно узнал о препарате А. В. Дорогова АСД-2 … У меня сахарный диабет 2 степени. Гипертония 2

  • Применение

    АСД-2 | 1 ответов, 1684 …

    www.consmed.ru/lekarstvennye-sredstva/view/62645

    … пожалуйста,кто применял АСД 2 при инсулинозависимом диабете!!! … АСД-2 успешно излечивал …

  • balansme.ru/product_info.php?products_id=126

    при диабете, если он /диабет/ — не запущен. Заболевание излечивается. Дозы препарата АСД ф-2

  • acdvopros.2xn.ru/viewtopic.php?f=2&t=46

    Подскажите как правильно применять АСД-2 (Армавир) при Сахарном диабете 2 типа, на данный …

  • www.zooapteka.kiev.ua/shop/dogs/vet_medicine/cancer/asd

    АСД 2 в … 2-3 месяца наступает полное выздоровление. Препарат АСД подобен инсулину при диабете

  • bscspokane.io.ua/s96243

    "Помогает ли АСД-2 от диабета или инсулинозависимых людей" Ответ — Да. Разве этот препарат не …

  • acdvopros.2xn.ru/viewtopic.php?p=7

    Меня очень интересует вопрос лечения препаратом АСД-2 сахарного диабета 1 типа.

  • www.kunpendelek.ru/library/alternative-med/metody-lech/asd-instruction

    через 2-3 месяца наступает полное выздоровление. Препарат АСД подобен инсулину при диабете

  • genetics.org.ua/diabet.php/saharnyiy-diabet/lechenie-saharnogo-diabeta-asd-259.html

    Сахарный диабет i типа (инсулинзависимый) … кто применял фракцию 2 АСД для лечения диабета

  • predtechy.ru/lekarstv/451

    … через 2-3 месяца наступает полное выздоровление. Препарат АСД подобен инсулину при диабете

  • forum.lobnya.info/index.php?topic=277.0

    Тема: АСД-2 для лечения людей и животных. … на вопрос Гульмиры о детском сахарном диабете.

  • shop.predtechy.ru/imun/1424

    АСД-2 Фракция купить … САХАРНЫЙ ДИАБЕТ — нормализация углеводного …

  • www.chernetskaya.ru/blog/3601

    Применения Фракции АСД-2 для людей Согласно … к этому.Ни дня не пожалел.У меня сахарный диабет

  • www.efferent.com.ua/consult1.php?q=30338

    Вопрос 2010-04-14 23:43:42 ЛЕЧЕНИЕ ФРАКЦИЕЙ АСД-2 САХАРНОГО ДИАБЕТА Вопрос 2010-04-25 16:42:44 Где на Украине …

  • как лечить

    диабет с АСД-2 — есть ответ …

    otvety.google.ru/otvety/thread?tid=0aed0c5d61c2b2e8

    Используйте Вопросы и ответы на своем телефоне. Посетите сайт otvety.google.ru в браузере телефона.

  • Сахарный

    диабет, лечение сахарного …

    www.chinesemc.ru/saharniydiabet

    Сахарный диабет 2 типа: Сахарный диабет 2 типа (инсулиннезависимый) характерен тем, что …

  • natural-medicine.ru/page,1,2,1583-universalnoe-lekarstvo-preparat-asd…

    Недавно узнал о препарате А. В. Дорогова АСД-2 … груди и на шейке матки также сахарный диабет и …

  • narod-medicina.ru/?p=1441&cp=all

    Асд фракция 2 применение для человека: Это … у меня сахарный диабет 2 типа, посоветовали …

  • www.zoovostorg.ru/product/asd-2/reviews/page5

    асд 2 пила 3 дня очень кружилась голова 10 … инфаркт, осложнения всякие от диабета. Поверила …

  • forum.ovchar.org/index.php?showtopic=921

    2, через 2-3 месяца наступает полное выздоровление. Препарат АСД подобен инсулину при диабете

  • forumjizni.ru/showthread.php?t=5823

    • 8 replies from July 2010 to December 2011

    МАЗЬ ОТ РАН ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ! Сахарный … когда она попросила купить фракцию АСД-2, я …

  • asdarmavir.narod.ru

    АСД История забвения Более 50-ти лет назад А. В. Дорогов создал свой противораковый препарат …

  • forum.consmed.ru/viewtopic.php?f=6&t=234&start=820

    Здравствуйте, болею сахарным диабетом уже 6 лет … Принимаю АСД-2 с 08.07.2011г по 3 мл на 100 гр …

  • www.chernetskaya.ru/blog/245

    … брыжейку.72 года, диабет, 2 инфаркта.Операция,химия не целесообр. Начали применять схему : АСД-2

  • АСД фракция 2

    Состав и фармакологическое действие АСД 2 Фракция АСД 2 представляет собой стерильный раствор со специфическим запахом, хорошо смешивающийся с водой. В составе препарата имеются карбоновые кислоты, циклические кислоты, производные амидов и алифатических аминов, соединения с сульфгидрильной группой и вода. В настоящее время данный продукт получают путем термического разложения различных материалов животного происхождения – костных и мясных отходов, мясокостной муки. При разложении нуклеиновые кислоты материалов расщепляются до низкомолекулярных структур и, свободно проникая в поврежденные ткани, достигают необходимого результата. Основу средства составляют адаптогены – вещества, которые выделяются из клетки перед ее гибелью. Адаптогены помогают поврежденной клетке бороться за выживание. При попадании в клетки организма человека адаптогены химическим путем передают информацию о необходимости борьбы за существование. Положительный результат лечения достигается за счет мобилизации всех защитных сил организма. При пероральном применении медикамент АСД2 активизирует деятельность центральной и вегетативной нервной системы, стимулирует секреторную деятельность пищеварительных желез, повышает активность тканевых и пищеварительных ферментов, нормализует процессы пищеварения, улучшает проникновение ионов калия и натрия через мембраны клеток. В некоторых отзывах об АСД 2 говорится, что данный препарат стимулирует моторную функцию пищеварительного тракта и повышает естественную резистентность организма человека и животного. При наружном применении данное лекарственное средство оказывает выраженное антисептическое и противовоспалительное действие, ускоряет регенерацию и нормализует трофику тканей.

    Показания к применению АСД 2 Во многих отзывах об АСД 2 говорится, что применение данного препарата эффективно при заболеваниях глаз, простудных болезнях различного происхождения, гинекологических заболеваниях (молочнице, трихомониазе, сухости влагалища), при кожных болезнях (стойком псориазе, трофических язвах), при простатите, а также при гастрите, колите, язве желудка, язве двенадцатиперстной кишки. Эффективен данный препарат при болезнях почек, недержании мочи, онкологических заболеваниях, гипертонической болезни, заболеваниях поджелудочной железы, печени.
    Препарат можно применять для профилактики гриппа, пневмоний, ОРЗ. Особенно эффективно данное лекарственное средство в начале проявления заболевания

    Инструкция к применению Существует стандартный вариант приема препарата АСД 2, хотя для отдельных болезней уже имеются разработки с некоторыми особенностями. Принимать внутрь медикамент следует только в разбавленном виде. Через каждые пять-шесть дней приема необходимо делать перерыв на два-три дня. АСД 2, по инструкции некоторых медиков и целителей, надо принимать дважды в день перед едой. Однако создатель препарата А.В. Дорогов считал, что данный продукт может работать в человеческом организме около шести часов. По его инструкции, АСД 2 следует принимать четыре раза в день перед едой. Запрещается совместное применение АСД 2 со спиртом. В начале лечения данное лекарственное средство принимают на протяжении пяти дней, затем на три дня делают перерыв, а после перерыва курс повторяют. Продолжительность курса лечения зависит от тяжести болезни. При наружном применении АСД 2 (для спринцевания, клизм, промывания ран) необходимо разводить (разведение от 1 до 20%). Данный препарат можно использовать для приготовления мазей. Побочное действие АСД 2 В начальном периоде приема АСД 2 могут появиться тошнота, головокружение и другие неприятные ощущения. В этом случае следует немедленно прервать курс лечения. Лечебный эффект препарата зависит от индивидуальных особенностей организма человека. Некоторые люди уже через две-три недели приема медикамента ощущают прилив сил и легкости. Но бывает и так, что длительное применение медикамента не дает никаких положительных результатов.

     

    #КакПриниматьАСД Instagram posts - Gramho.com

    Многих взрослых интересует вопрос, можно ли давать АСД фракцию ребенку? Конечно, можно. Препарат безопасный и при соблюдении правильной дозировки и инструкции к применению помогает избавиться от болезней, особенно связанных с кожным покровом. АСД — мощный биостимулятор и обладает положительным качеством, при этом, он не накапливается в организме. Количество употребления лекарства для детей зависит от возраста. Инструкция по применению АСД 2 для ребенка, дозировка Препарат рекомендуется давать по методу Тищенко. Количество капель меняется каждые 4 дня и воды необходимо от 30-70 мл, один курс - 5 дней: первый курс начинается в 08.00 с 1 капли; перерыв 2 дня; второй 8.00 — 1 и 16.00 – 1; перерыв 2 дня; третий по 1 капле четыре раза через 4 часа; перерыв 2 дня; четвертый 8.00 — 2, 12.00 — 1, 16.00 – 2; перерыв 2 дня; пятый по 2 капли каждые 4 часа 3 раза в день; перерыв 2 дня; шестой по 2 капли каждые 4 часа 4 раза; перерыв 2 дня; седьмой по 3 капли через 4 часа 3 раза в день; перерыв 2 дня; восьмой 8.00 — 3, 12.00 — 2, 16.00 — 3, 20.00 — 2; перерыв 2 дня; девятый 8.00 – 3, 12.00 — 3, 16.00 – 3, 20.00 — 2; перерыв 2 дня; десятый по 3 капли каждые 4 часа 4 раза в день. с 3 до 10 лет: количество капель наращивают по 1 каждые 4 дня, дают через каждые 4 часа в сутки. При невозможности приема детьми с водой, можно разводить в молоке. Как принимать ребенку АСД при лишае у ребенка Маленькие дети очень любят играть с кошками и собаками и могут получить заболевание — стригущий лишай.  Одного смазывания кожного покрова фракцией 2 будет достаточным, чтобы избавить от заразы. Если применять фракцию 3, то ее необходимо разводить маслом в соотношении 1:20. АСД для повышения иммунитета ребенку от 1,5 года до 5 лет давать 1-2 капли разведенных в 5-10 мл жидкости. Детям старшего возраста 6 — 30 капель разведенных в 30-100 мл воды. Перед началом применения препарата Дорогова для детей рекомендуется консультация педиатра. #АСД2фракция #АСД2 #КакПриниматьАСД #АСДдляДетей #РакЖелудка #здоровье #like4like #followme #купитьАСД2 #ЛекарствоДорогова

    Препарат асд при хроническом простатите

    Ключевые теги: от простатита таблетки омник, свечи от простатита с папаверином, какими лечить таблетками простатит.


    Какими медицинскими препаратами лечат простатит, препарат для лечения простатит, препарат для лечения простатит, растительные средства в лечении простатита, простатит как правильно ставить свечи.

    Принцип действия

    ProstEro – это уникальный комплекс натуральных ингредиентов, который эффективно борется с простатитом, аденомой и гиперплазией простаты. Красный корень способствует усилению лимфотока, что полностью снимает воспаление в предстательной железе, а также нормализует мочеиспускание. ШАГ 1 уходит боль, рези, жжение в паху и пояснице ШАГ 2 мочеиспускание становится стабильным, нечастым, снимается воспаление ШАГ 3 восстанавливается эрекция, организм укрепляется, простатит не возвращается

    Использование средства при хроническом простатите вызывает стойкую ремиссию, а при остром – помогает быстро избавиться от недуга. Кроме того, препарат показан при аденоме простаты. Использование средства при хроническом простатите вызывает стойкую ремиссию, а при остром – помогает быстро избавиться от недуга. Кроме того, препарат показан при … Одним из альтернативных способов терапии является применением АСД-2 при простатите. Польза АСД-2 при простатите. АСД-2 — это антисептик-стимулятор Дорогова фракция 2. Этот препарат был ...


    Официальный сайт ProstEro - средство от простатита

    Состав

    Вот здесь пишут про Ликопрофит, я тоже его принимаю, хорошее средство при хроническом простатите. АСД фракция 2 при простатите зарекомендовал себя как отличный препарат с мощным действием. Чего же стоит ожидать от него: Асд 2 при простатите Асд 2 лечение простатита ... Препарат АСД является жидкостью, приготовленной из тканей животных по особой методике, АСД выпускается в 2 фракциях n 2, n 3. ... покраснения, то ...

    Результаты клинических испытаний

    Самая лучшая методика лечения при опухолях - прием АСД, фракция №2, через 2-3 месяца наступает полное выздоровление. Препарат АСД подобен инсулину при диабете, если он /диабет/ - не запущен. Лечение простатита фракцией АСД 2 (антисептик-стимулятор Дорогова): курс и схема лечения, отзывы мужчин. ... 2 Действие при простатите; ... Изначально препарат заявлен как ветеринарный ... Нередко при простатите урологами рекомендуется применение АСД фракция 2, в качестве дополнительного лекарственного средства.

    Мнение специалиста

    ProstEro облегчил работу бесплатным докторам. Я вижу своих пациентов 2 раза. Первый, когда они приходят на диагностику и второй, когда через месяц они приходят сказать “Спасибо, я здоров!”. А вот платным клиникам не повезло, с ProstEro им будет в 10 раз сложнее наживаться на простых людях.

    АСД-2 при простатите применяется внутрь в виде раствора, примерно 20-30 капель средства растворяют в теплой воде и пьют утром натощак и перед ужином. ... при хроническом простатите снижает ... Фракция АСД 2 при простатите ... Препарат выпускается в виде жидкости желтоватого цвета с ... АСД 2 – особый препарат, который создается способом термической обработки (сухая возгонка) сырья животного происхождения (мышечно-костная мука). ... Медовый сбитень при простатите.

    Способ применения

    - Капли: Принимать по 15 капель 2 раза в день за 30 мин до еды. - Капсулы: Принимать внутрь по 1 капсуле 3 раза в день за 30 мин до еды. - Курс – 30 дней.

    Вот здесь пишут про Ликопрофит, я тоже его принимаю, хорошее средство при хроническом простатите. Асд при простатите При избавлении от воспаления простаты необходимо всегда поддерживать иммунную систему, т.к. в этот момент она особенно ослаблена. ... т.к. этот препарат … Нередко при простатите урологами рекомендуется применение АСД фракция 2, в качестве дополнительного лекарственного средства.

    Как заказать?

    Заполните форму для консультации и заказа ProstEro - средство от простатита. Оператор уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 1-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении

    О фракции АСД-2 противоречивые отзывы. Некоторые мужчины утверждают, что препарат может помочь даже при запущенном простатите. Ряд пациентов отметили, что после проведения ... О фракции АСД-2 противоречивые отзывы. Некоторые мужчины утверждают, что препарат может помочь даже при запущенном простатите. Ряд пациентов отметили, что после проведения ... АСД 2 при простатите . 17 Окт 2017г ... АСД фракция 2 — особый препарат, который создают в процессе термической обработки мышечно-костной муки, сырья натурального происхождения. Нестандартный ...

    Купить простодин в хабаровске, лекарственные средства от простатита у мужчин, ихтиол в свечах при простатите, петрушка средство от простатита, средства для профилактики простатита у мужчин, простодин капли от простатита цена в аптеках новосибирска, чем лечат простатит препараты.
    Официальный сайт ProstEro - средство от простатита

    Купить ProstEro - средство от простатита можно в таких странах как:


    Россия, Беларусь, Казахстан, Киргизия, Молдова, Узбекистан, Украина, Эстония, Латвия, Литва, Болгария, Венгрия, Германия, Греция, Испания, Италия, Кипр, Португалия, Румыния, Франция, Хорватия, Чехия, Швейцария, Азербайджан , Армения ,Турция, Австрия, Сербия, Словакия, Словения, Польша


    Просто спина болела, низ самый. Я все время за рулем, даже к врачу некогда сходить. Попал к хирургу, а он к урологу отправил. В итоге посоветовали ProstEra и массаж простаты. Уже нормально, вернулся к работе.

    Рекомендую ProstEra. Использовал три месяца, очень хорошо все. Приятный на вкус, удобная упаковка, с собой всегда в командировки брал. Сразу же кровь в сперме пропала. Боли прошли, в туалет не бегаю, уже восстанавливается сексуальная жизнь.

    Извиняюсь, не заметила на сайте сначала информацию про наложенный платеж. Тогда все в порядке точно, если оплата при получении. Пойду, оформлю себе тоже заказ.

    Фракции, относимые к населению для диабета 2 типа: исследование множественных факторов риска, включая симптомы депрессии и тревоги | Диабетология и метаболический синдром

  • 1.

    Международная федерация диабета. Атлас диабета IDF. 7-е изд. Брюссель: Международная федерация диабета; 2015.

    Google Scholar

  • 2.

    Моултон CD, Пикап Дж. К., Исмаил К. Связь между депрессией и диабетом: поиск общих механизмов.Ланцет Диабет Эндокринол. 2015; 3 (6): 461–71.

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Уиллис Т. Диабет: медицинская одиссея. Нью-Йорк: Такахо; 1971.

    Google Scholar

  • 4.

    Luppino FS, De Wit LM, Bouvy PF, Stijnen T., Cuijpers P, Penninx BWJH, et al. Избыточный вес, ожирение и депрессия: систематический обзор и метаанализ продольных исследований. Архив общей психиатрии.2010; 67: 220–9.

    Артикул Google Scholar

  • 5.

    Рошанаи-Могхаддам Б., Катон В.Дж., Руссо Дж. Продольные эффекты депрессии на физическую активность. Gen Hosp Psychiatry. 2009. 31 (4): 306–15.

    Артикул Google Scholar

  • 6.

    Khambaty T., Stewart JC, Muldoon MF, Kamarck TW. Кластеры депрессивных симптомов как предикторы шестилетнего повышения инсулинорезистентности: данные Питтсбургского проекта «Здоровое сердце».Psychosom Med. 2014; 76 (5): 363–9.

    Артикул Google Scholar

  • 7.

    Demakakos P, Zaninotto P, Nouwen A. Является ли связь между депрессивными симптомами и метаболизмом глюкозы двунаправленной? Данные английского лонгитюдного исследования старения. Psychosom Med. 2014. 76 (7): 555–61.

    CAS Статья Google Scholar

  • 8.

    Янг Э.А., Абельсон Дж. Л., Кэмерон О. Г..Влияние коморбидных тревожных расстройств на реакцию оси гипоталамус-гипофиз-надпочечники на социальный стрессор при большой депрессии. Биол Психиатрия. 2004. 56 (2): 113–20.

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Хоу Р., Болдуин Д.С. Нейроиммунологический взгляд на тревожные расстройства. Человек Psychopharmacol Clin Exp. 2012; 27 (1): 6–14.

    CAS Статья Google Scholar

  • 10.

    Американская психиатрическая ассоциация. Диагностическое и статистическое руководство психических расстройств: DSM-5. 5-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: Американская психиатрическая ассоциация; 2013.

    Книга Google Scholar

  • 11.

    Хилдрам Б., Миклетун А., Стордал Э., Бьелланд И., Даль А.А., Холмен Дж. Связь низкого кровяного давления с тревогой и депрессией: исследование здоровья Норд-Трёнделаг. J Epidemiol Community Health. 2007. 61 (1): 53–8.

    Артикул Google Scholar

  • 12.

    Hirschfeld RMA. Коморбидность большой депрессии и тревожных расстройств: распознавание и лечение в первичной медико-санитарной помощи. Помощник по первичной медицинской помощи J Clin Psychiatry. 2001. 33 (244): 244–54.

    Артикул Google Scholar

  • 13.

    Ковентри П., Ловелл К., Диккенс С., Бауэр П., Чу-Грэм С., МакЭлвенни Д. и др. Интегрированная первичная помощь пациентам с психической и физической мультиморбидностью: кластерное рандомизированное контролируемое исследование совместной помощи пациентам с депрессией, сопутствующей диабету или сердечно-сосудистым заболеваниям.BMJ. 2015; 16 (350): h638.

    Артикул Google Scholar

  • 14.

    Марковиц С.М., Гонсалес Дж. С., Уилкинсон Дж. Л., Safren SA. Обзор лечения депрессии при диабете: новые результаты. Психосоматика. 2011; 52 (1): 1–18.

    Артикул Google Scholar

  • 15.

    Cosgrove MP, Sargeant LA, Griffin SJ. Повышает ли депрессия риск развития диабета 2 типа? Оккупай Мед (Chic Ill).2008. 58 (1): 7–14.

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Аль Тунайджи Х., Дэвис Дж.С., Макки, округ Колумбия, Хан К.М. Относимая популяция фракция диабета 2 типа из-за отсутствия физической активности у взрослых: систематический обзор. BMC Public Health. 2014; 14 (1): 469.

    Артикул Google Scholar

  • 17.

    Ван И, Римм Э.Б., Штампфер М.Дж., Уиллетт В.С., Ху Ф.Б. Сравнение абдоминального ожирения и общего ожирения для прогнозирования риска диабета 2 типа среди мужчин.Am J Clin Nutr. 2005. 81 (3): 555–63.

    CAS Статья Google Scholar

  • 18.

    Имамура Ф., О’Коннор Л., Йе З., Мурсу Дж., Хаяшино Ю., Бхупатхираджу С.Н. и др. Потребление сахаросодержащих напитков, искусственно подслащенных напитков и фруктовых соков и заболеваемость диабетом 2 типа: систематический обзор, метаанализ и оценка относительной доли населения. BMJ. 2015; 351: ч4576.

    Артикул Google Scholar

  • 19.

    Ford ES. Риски общей смертности, сердечно-сосудистых заболеваний и диабета, связанные с метаболическим синдромом. Уход за диабетом. 2005. 28 (7): 1769–78.

    Артикул Google Scholar

  • 20.

    Sandhu MS, Weedon MN, Fawcett KA, Wasson J, Debenham SL, Daly A, et al. Общие варианты в WFS1 связаны с риском диабета 2 типа. Нат Жене. 2007. 39 (8): 951–3.

    CAS Статья Google Scholar

  • 21.

    Hulley SB. Факторами риска ишемической болезни сердца являются последние эпидемиологические достижения. Наркотики. 1988; 36 (Приложение 3): 1–4.

    Артикул Google Scholar

  • 22.

    Дженест Дж., Кон Дж. С.. Кластеризация факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний: нацеливание на лиц с высоким риском. Am J Cardiol. 1995; 76 (1): 8A – 20A.

    Артикул Google Scholar

  • 23.

    Джоусилахти П., Тумилехто Дж., Вартиайнен Э., Корхонен Х. Дж., Питкяниеми Дж., Ниссинен А. и др.Важность кластеризации факторов риска в смертности и заболеваемости ишемической болезнью сердца в восточной Финляндии. J Cardiovasc Риск. 1995. 2 (1): 63–70.

    CAS Статья Google Scholar

  • 24.

    Каннел В.Б., Макги Д., Гордон Т. Общий профиль риска сердечно-сосудистых заболеваний: Фрамингемское исследование. Am J Cardiol. 1976; 38 (1): 46–51.

    CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Chang M, Hahn RA, Teutsch SM, Hutwagner LC.Множественные факторы риска и популяционный риск смертности от ишемической болезни сердца в США, 1971–1992 гг. J Clin Epidemiol. 2001. 54 (6): 634–44.

    CAS Статья Google Scholar

  • 26.

    Лааксонен М.А., Кнект П., Риссанен Х., Хяркянен Т., Виртала Е., Марниеми Дж. И др. Относительная важность изменяемых потенциальных факторов риска диабета 2 типа: метаанализ двух когорт. Eur J Epidemiol. 2010. 25 (2): 115–24.

    Артикул Google Scholar

  • 27.

    Krokstad S, Langhammer A, Hveem K, Holmen TL, Midthjell K, Stene TR, et al. Профиль когорты: исследование HUNT, Норвегия. Int J Epidemiol. 2013; 42 (4): 968–77.

    CAS Статья Google Scholar

  • 28.

    Альберти КГММ, Зиммет П., Шоу Дж. Метаболический синдром - новое всемирное определение. Заявление о консенсусе Международной федерации диабета.Diabet Med. 2006. 23 (5): 469–80.

    CAS Статья Google Scholar

  • 29.

    Cheng AYY, Комитет экспертов по клиническим рекомендациям Канадской диабетической ассоциации. Канадская диабетическая ассоциация, 2013 г., Руководство по клинической практике по профилактике и лечению диабета в Канаде. Может J Диабет. 2013; 37: S1–3.

    Артикул Google Scholar

  • 30.

    Всемирная организация здравоохранения.Глобальные рекомендации по физической активности для здоровья. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2010. с. 58.

    Google Scholar

  • 31.

    Wannamethee SG, Shaper AG, Perry IJ. Курение как изменяемый фактор риска диабета 2 типа у мужчин среднего возраста. Уход за диабетом. 1978. 24 (9): 1590–5.

    Артикул Google Scholar

  • 32.

    Søgaard A, Bjelland I, Tell G, Røysamb E. Сравнение индекса психического здоровья CONOR с HSCL-10 и HADS.Nor Epidemiol. 2003. 13: 279–84.

    Google Scholar

  • 33.

    Harrell FE. Общие аспекты подбора регрессионных моделей. Стратегии регрессионного моделирования. Чам: Спрингер; 2015. с. 13–44.

    Google Scholar

  • 34.

    Ройстон П. Множественное вменение пропущенных значений. Стата Дж. 2004; 4 (3): 227–41.

    Google Scholar

  • 35.

    Hanley JA. Эвристический подход к формулам для атрибутивной фракции совокупности. J Epidemiol Community Health. 2001. 55 (7): 508–14.

    CAS Статья Google Scholar

  • 36.

    Левин М.Л. Возникновение рака легких у человека. Acta Unio Int Contra Cancrum. 1953; 9 (3): 531–41.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 37.

    Mezuk B, Eaton W, Albrecht S, Golden S.Депрессия и диабет 2 типа на протяжении жизни: метаанализ. Уход за диабетом. 2008; 31: 2383–90.

    Артикул Google Scholar

  • 38.

    Goodpaster BH, Krishnaswami S, Harris TB, Katsiaras A, Kritchevsky SB, Simonsick EM, et al. Ожирение, региональное распределение жира в организме и метаболический синдром у пожилых мужчин и женщин. Arch Intern Med. 2005. 165 (7): 777–83.

    Артикул Google Scholar

  • 39.

    Will JC, Galuska DA, Ford ES, Mokdad A, Calle EE. Курение сигарет и сахарный диабет: доказательства положительной связи из большого проспективного когортного исследования. Int J Epidemiol. 2001. 30 (3): 540–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 40.

    Cherrington A, Wallston KA, Rothman RL. Изучение взаимосвязи между самоэффективностью диабета, депрессивными симптомами и контролем гликемии среди мужчин и женщин с диабетом 2 типа.J Behav Med. 2010. 33 (1): 81–9.

    Артикул Google Scholar

  • 41.

    Vogelzangs N, Beekman ATF, de Jonge P, Penninx BWJH. Тревожные расстройства и воспаления в большой группе взрослых. Перевод Психиатрия. 2013; 3: e249.

    CAS Статья Google Scholar

  • 42.

    Найкер К., Джонсон Дж. А., Скоген Дж. К., Мануэль Д., Оверланд С., Сивертсен Б. и др. Диабет 2 типа и сопутствующие симптомы депрессии и тревоги: продольные ассоциации с риском смертности.Уход за диабетом. 2017; 40 (3): 352–8.

    Артикул Google Scholar

  • 43.

    Рубин Р.Р., Пейро М. Был ли Уиллис прав? Мысли о взаимодействии депрессии и диабета. Diabetes Metab Res Rev.2002; 18 (3): 173–5.

    Артикул Google Scholar

  • 44.

    Flegal KM, Panagiotou OA, Graubard BI. Оценка относимых долей населения для количественной оценки бремени ожирения для здоровья.Ann Epidemiol. 2015; 25 (3): 201–7.

    Артикул Google Scholar

  • 45.

    Эрнан М.А., Таубман С.Л. Укорачивает ли ожирение жизнь? Важность четко определенных вмешательств для ответа на причинно-следственные связи. Int J Obes. 2008; 32: S8–14.

    Артикул Google Scholar

  • 46.

    Лангхаммер А., Крокстад С., Ромундстад П., Хеггланд Дж., Холмен Дж., Галеа С. и др. Исследование HUNT: участие связано с выживанием и зависит от социально-экономического статуса, болезней и симптомов.BMC Med Res Methodol. 2012; 12 (1): 143.

    Артикул Google Scholar

  • Обещание нового лечения диабета 2 типа

    ВВЕДЕНИЕ

    Сахарный диабет, или просто диабет, представляет собой метаболическое заболевание с устойчивым высоким уровнем глюкозы в крови (гипергликемия), от которого страдают более 34,2 миллиона американцев (10,5% населения США). ) в 2018 году [1]. К ним относятся 26,9 миллиона диагностированных случаев и 7,3 миллиона недиагностированных случаев, причем среди диагностированных людей распространенность мужчин (14 миллионов) была несколько выше, чем у женщин (12.8 миллионов) [1]. Это хроническое заболевание с высоким уровнем глюкозы в крови, которое может вызывать различные неблагоприятные клинические осложнения, включая ретинопатию, невропатию и нефропатию. Если его не лечить, это может привести к слепоте, почечной недостаточности, ампутации, коме и даже смерти [2,3]. Это непростое физиологическое заболевание, требующее медицинской помощи.

    Обычно представлены два типа диабета: диабет 1 типа (инсулинозависимый) и диабет 2 типа (инсулинозависимый) [4]. Диабет 1 типа в первую очередь связан с дефицитом инсулина, что составляет <20% всех случаев диабета [5], тогда как диабет 2 типа имеет уровень заболеваемости> 80%, что связано с множеством факторов, таких как недостаточная секреция инсулина, периферическая инсулинорезистентность (в мышцах). и жировая ткань), а также чрезмерное производство глюкозы печенью [5,6].Следовательно, диабет 2 типа с такой сложной этиологией, по-видимому, более распространен, чем диабет 1 типа. Что касается лечения, диабет 1 типа, вызванный, главным образом, дефицитом инсулина (из-за дисфункции β-клеток поджелудочной железы), лучше лечится с помощью инъекций инсулина, чем диабет 2 типа. С другой стороны, дефицит инсулина не является основной проблемой для многих пациентов с диабетом 2 типа, но периферическая инсулинорезистентность является скорее основным фактором их гипергликемических состояний, что затрудняет лечение [6].Из-за такой инсулинорезистентности, например, производные сульфонилмочевины [7], которые в настоящее время используются в пероральной терапии для стимуляции секреции инсулина (из β-клеток поджелудочной железы), часто не демонстрируют ожидаемой эффективности и результатов. Другие фармацевтические препараты, такие как троглитазон [8] и метформин [9,10], также использовались для повышения периферической чувствительности к инсулину. Хотя эти препараты привели к некоторому улучшению гликемического контроля, внимание также привлекли некоторые побочные эффекты. Было обнаружено, что у метформина есть потенциальные побочные эффекты, такие как лактоацидоз, вызванный почечной недостаточностью, сепсис, септический шок, остановка сердца или печеночная недостаточность [9].Точно так же троглитазон был снят с рынка США из-за тяжелой гепатотоксичности [8].

    Таким образом, конкретных и эффективных схем лечения диабета 2 типа даже по прошествии стольких лет не существует. По крайней мере, теперь мы понимаем, что более эффективные методы лечения в первую очередь зависят от того, как преодолеть инсулинорезистентность. Фактически, срочно и настоятельно требуется внедрить определенные терапевтические методы или найти более безопасные и эффективные средства для устранения инсулинорезистентности, в конечном итоге облегчения сложных диабетических состояний.

    Мы искали некоторые натуральные продукты / агенты с гипогликемической активностью и наткнулись на экстракт грибов, известный как «SX-фракция (SXF)», выделенный из гриба майтаке (Grifola frondosa). SXF с молекулярной массой примерно 20000 Да представляет собой водорастворимый гликопротеин, и на SXF был проведен ряд научных и медицинских исследований. К ним относятся диабетические мыши и ограниченные клинические исследования пациентов с диабетом 2 типа, которые продемонстрировали гипогликемическую и антидиабетическую активность SXF [11-14].Мы описали эти исследования в хронологическом порядке здесь, а также исследовали возможный гипогликемический механизм SXF, который еще не был полностью изучен. Наша рабочая гипотеза заключалась в том, что SXF может стимулировать или активировать дисфункциональный путь передачи сигнала инсулина [15]. Это, скорее, упрощенная схема, изображающая, что SXF может в первую очередь действовать на сигнальный путь, который выполняет каскад биохимических событий и в конечном итоге приводит к увеличению поглощения глюкозы инсулино-чувствительными клетками.Затем мы сосредоточились на возможных изменениях статуса трех ключевых параметров диабета, таких как рецептор инсулина (IR) [16], субстрат рецептора инсулина 1 (IRS-1) [17] и протеинкиназа B (Akt) [18]. Более подробная информация описана позже.

    Перед тем, как мы начнем обсуждать исследования SXF, стоит упомянуть еще немного о «грибе майтаке», потому что именно из него изначально появился SXF. Этот гриб - не просто еще один знакомый людям гриб. Это съедобный, вкусный и лекарственный гриб, который выращивают с середины 1980-х годов.Этот гриб часто используется в кулинарии, а также считается, что он приносит нам определенную пользу для здоровья, о чем говорится в анекдотах и ​​фольклоре. Тем не менее, за последние 35 лет был проведен ряд научных и медицинских исследований «D-фракции майтаке (PDF)» [19], биоактивного экстракта гриба майтаке. Такие исследования затем выявили или постулировали ряд физиологических преимуществ, включая иммуностимулирующее, противоопухолевое / противоопухолевое и противовирусное действие [20-23], а также потенциальные методы лечения гипертонии, гиперхолестеринемии, ожирения и т. Д. [24-26]. В частности, важно, что его противовирусная активность в отношении вируса иммунодефицита человека / синдрома приобретенного иммунодефицита (ВИЧ / СПИД) была подтверждена Национальным институтом рака США в 1992 г. [23]. Кроме того, индуцирующая апоптоз активность PDF была также продемонстрирована в клетках рака простаты человека in vitro [27,28]. Что наиболее важно, что касается безопасности PDF, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США исключило PDF из токсикологического исследования фазы I, а также одобрило его для применения в качестве нового исследуемого препарата, что позволило провести пилотное исследование фазы II на пациентах с продвинутой стадией. рак груди и простаты [29].Более того, рандомизированное клиническое исследование PDF на здоровых предметах (не страдающих раком) не выявило явных побочных эффектов ни у одного из участников [30]. Таким образом, эти результаты подтверждают безопасность PDF без каких-либо потенциальных побочных эффектов, что позволяет использовать его у онкологических больных, а также у нормальных здоровых людей.

    Подобно PDF, теперь у нас есть SXF с потенциальной антидиабетической и гипогликемической активностью, который также был выделен из гриба майтаке. Соответственно, мы проанализировали доступные данные ранних и недавних исследований SXF, предоставив важную / ценную информацию о SXF с точки зрения его безопасности и потенциальной эффективности для пациентов с диабетом 2 типа.

    РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

    Что касается терминов, используемых для «SXF» в этом обзоре, следует отметить, что SXF, доступный в настоящее время, был разработан и сформулирован несколько раз в прошлом. Первоначально это называлось цельным порошком майтаке, содержащим компонент SXF, за которым следовали неочищенный SXF (20% -ная подача), составленный SXF, капсула с порошком майтаке и нынешний SXF. Чтобы избежать путаницы с этими названиями, мы намеренно и почти исключительно использовали термин SXF в этом обзоре.Независимо от того, как менялось название, ключевым активным ингредиентом, отвечающим за его антидиабетическую и гипогликемическую активность, был «SXF», присутствующий во всех прежних продуктах. Следовательно, хотя вы можете найти эти разные названия в литературе, результаты таких исследований действительно были приписаны SXF.

    Антидиабетическое действие SXF на диабетических мышей

    Прежде всего, SXF и другие аналогичные материалы / продукты, использованные во всех описанных здесь исследованиях, были в первую очередь предоставлены производителем (Mushroom Wisdom, Inc., Ист-Резерфорд, штат Нью-Джерси, США). В этом исследовании [11] диабетические мыши были поровну разделены на две группы: экспериментальная группа получала как нормальный корм, так и неочищенный SXF (20% -ный корм) ежедневно, в то время как контрольная (фиктивная) группа потребляла только нормальный корм. Через 8 недель, по сравнению с контрольной группой, экспериментальная группа показала значительное улучшение трех диабетических параметров, уровней глюкозы в крови (Glc), инсулина (Ins) и триглицеридов (Tgl). Уровни Glc, Ins и Tgl составляли 400 мг / дл, 1200 мкЕд / мл и 780 мг / дл соответственно в контрольной группе, тогда как они составляли 200 мг / мл, 220 мкЕд / мл и 410 мг / дл. соответственно, в опытной группе (рис. 1).Таким образом, такое значительное снижение этих диабетических параметров с помощью SXF указывает на его антидиабетический эффект у мышей с диабетом.

    Рисунок 1 Влияние неочищенной SX-фракции на три диабетических параметра у диабетических мышей. В этом исследовании уровни трех диабетических параметров, глюкозы, инсулина и триглицеридов, у мышей с диабетом сравнивались между экспериментальной группой (с неочищенным SXF) и контрольной (фиктивной) группой после 8-недельного испытания.Все данные являются средними для 5 мышей из каждой группы ( a P <0,03 против контроля) и выражены в произвольной шкале (без единиц измерения). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин; Tgl: триглицерид.

    Исследование было продолжено с переключением подачи сырого SXF между двумя предыдущими группами. Бывшая контрольная группа теперь получала неочищенный SXF, тогда как бывшая экспериментальная (с SXF) группа служила контролем. Это «переключение» продолжалось в течение 4 недель, чтобы исключить возможность веса тела, которая могла повлиять на результаты, потому что изменения веса тела действительно наблюдались в течение предыдущего (8-недельного) периода исследования.Уже через 1 неделю стало ясно, что все три параметра были значительно улучшены или снижены при приеме добавки SXF, тогда как они резко повысились после отмены SXF. Однако на этот раз (4-недельный период) изменений в массе тела обнаружено не было. Например, Glc бывшей контрольной группы снизился с 400 мг / дл до 155 (с SXF), но у бывшей экспериментальной группы увеличился со 180 до 365 (без SXF). Все эти изменения в параметрах суммированы в Таблице 1. Таким образом, это исследование подтвердило, что SXF действительно улучшил все диабетические параметры, подтверждая представление о том, что SXF является потенциальным антидиабетическим агентом.

    Таблица 1 Изменения диабетических параметров после 1 недели «переключения питания» у мышей.
    Параметры
    (бывший) Control → + SXF
    (бывший) SXF → Control
    Glc (мг / д) Glc (мг / д) 180 → 365 a
    Ins (Ед / мл) 790 → 20 a 120 → 990 a
    Tgl (мг / дл) 560 125327 9032 a 230 → 620 a
    Масса корпуса (г) 46 → 41 34 → 37

    В следующем исследовании [12], поскольку SXF оказывает прямое / основное влияние на диабетические состояния (у мышей), затем оценивали, может ли он быть таким же эффективным, как (или лучше) клинически применяемым антидиабетическим препаратом.Глипизид (Glp), один из пероральных препаратов, был выбран для сравнения с препаратом SXF. Диабетических мышей разделили на три группы: контрольную, SXF и Glp. Указанные количества SXF или Glp вводились мышам по отдельности ежедневно в течение 7 дней (1 неделя), и два диабетических параметра, Glc и Ins, измерялись в дни 0, 4 и 7. Как показано на рисунке 2A, уровни Glc в группе SXF были значительно ( P <0,05) ниже, чем в контрольной группе на 4 и 7 дни.Хотя показатели группы Glp также снизились, разница не была статистически значимой ( P > 0,06). Точно так же уровни Ins в дни 4 и 7 также были значительно ( P <0,05) снижены в группе SXF, в то время как эти значения Glp не были значительно снижены (рисунок 2B). Таким образом, эти результаты показывают, что SXF способен эффективно и значительно снижать уровни Glc и Ins у мышей в течение недели, улучшая их диабетические состояния. Это открытие также демонстрирует, что «SXF» практически является ключевым ингредиентом с антидиабетической активностью, потому что две разные формы SXF, сформулированный SXF (используемый в этом исследовании) и неочищенный SXF (в ранних исследованиях выше), все же показали согласованные результаты. .Более того, это исследование также показывает, что SXF, по-видимому, имеет лучшую эффективность, чем испытанный пероральный антидиабетический препарат (Glp).

    Рисунок 2 Влияние сформулированной SX-фракции и антидиабетического препарата (глипизида) на параметры диабета у мышей. Два диабетических параметра, глюкоза и инсулин, в контрольной группе, группе SX-фракции и глипизиде были проанализированы в указанные периоды в недельном испытании.Результаты по глюкозе и инсулину в трех группах показаны на панелях (A) и (B) соответственно. Все данные являются средними для 5 мышей из каждой группы ( a P <0,05 против контроля). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин; Glp: Глипизид.

    В совокупности эти исследования на животных показывают, что SXF действительно обладает антидиабетической активностью, способной непосредственно снижать уровни Glc, Ins и Tgl, о чем свидетельствует тот факт, что отмена SXF немедленно вернула эти параметры обратно в диабетическое состояние в пределах неделя.Кроме того, SXF, по-видимому, более эффективно работает при диабетических состояниях (у мышей), чем Glp, за счет адекватного контроля метаболизма глюкозы / инсулина без каких-либо побочных эффектов. Хотя потенциальные (долгосрочные) побочные эффекты Glp в настоящее время редко документируются, такую ​​возможность нельзя полностью исключить. Это также гарантирует, что SXF более безопасен и более эффективен (чем лекарство) для улучшения состояния диабета, предположительно у пациентов с диабетом 2 типа. Тем не менее, поскольку требуется больше тестов / исследований для подтверждения фактической эффективности SXF на этих пациентах, особенно следует активно проводить больше клинических исследований.

    Гипогликемические эффекты у пациентов с диабетом 2 типа

    Воодушевленные ранними исследованиями на животных, описанными выше, были проведены некоторые клинические случаи / исследования для оценки возможного гипогликемического эффекта SXF на нескольких добровольцах с диабетом 2 типа (от 25 до 75 лет) .

    В первом тематическом исследовании [13] представлен полный контроль гликемии с помощью SXF у недавно диагностированного пациента мужского пола с диабетом 2 типа. У него было начальное значение глюкозы в крови натощак (FBG) 248 мг / дл (нормальный диапазон FBG 55-115 мг / дл) с уровнем гликозилированного гемоглобина A 1c (HbA 1c ) 11.5% (нормальный диапазон HbA 1c составляет 5-7,5%). Никаких связанных с диабетом осложнений, таких как ретинопатия, невропатия и т.д. , еще не развилось. Он немедленно получил пероральный глибурид (2,5 мг) [7] ежедневно, и его уровень ГБР снизился примерно до 180 мг / дл в течение следующих 2 дней. Затем он начал также ежедневно принимать таблетку SXF с глибуридом, и его ВБР резко упала примерно до 100 мг / дл за пару дней и оставалась на уровне почти 80-90 мг / дл в течение следующих 3 месяцев. В то же время его HbA 1c также снизился до нормы 5.2% (от начальных 11,5%). Затем глибурид был уменьшен вдвое (1,25 мг) с помощью ежедневного SXF, и его уровни FBG оставались аналогичными на уровне 80-90 мг / дл еще 2 мес. В конце концов, его продолжали принимать SXF ежедневно только тогда, когда глибурид полностью прекратил; однако его уровни FBG все еще оставались на уровне приблизительно 90 мг / дл, а его HbA 1c также оставался на уровне 5,6% в течение 6 месяцев. Этот пациент в настоящее время остается нормогликемическим в течение 20 лет только при ежедневном приеме SXF с момента его первоначального диагноза. Его хронологические улучшения с SXF суммированы в таблице 2.

    Таблица 2 Гипогликемический эффект SX-фракции у пациентов с впервые диагностированным диабетом 2 типа. Приблизительно 5,6
    Диагностика / Прогноз
    FBG (мг / дл)
    HbA 1c (%)
    9032 9032 3 rd 903 Прогноз на 12 месяцев (с 2,5 мг глибурида и SXF) 80-90 5.2
    5 -месячный прогноз (с 1,25 мг глибурида и SXF) 80-90 N / D
    9 -месячный прогноз (только с SXF)

    Другое тематическое исследование включало 7 добровольцев с диабетом 2 типа, которые получали таблетку SXF три раза в день в течение 4 недель. Их уровни FBS были измерены в начале испытания SXF (день 0), 2 недель (день 14) и 4 недель (день 28).Какой процент (%) FBG снизился с помощью SXF (если таковой имеется), также был рассчитан по разнице значений FBG между днем ​​0 и днем ​​28. Мы обнаружили, что все 7 пациентов продемонстрировали значительное снижение их уровней FBG, более чем на 30% ( 30% -63%) снижение при схеме SXF в течение 2–4 недель (Таблица 3). Фактически, мы обнаружили, что очевидные улучшения или снижение уровней FBG наблюдались через 2 недели после первого приема SXF, хотя эти значения продолжали постепенно снижаться до 4 недель. Кроме того, ни у одного участника не было выявлено каких-либо ощутимых заболеваний, связанных с SXF, во время этого испытания, что еще раз подтверждает его безопасность при использовании человеком без побочных эффектов.Следовательно, эти результаты предполагают, что SXF обладает гипогликемической активностью, способной эффективно снижать уровни FBG у пациентов с типом 2.

    Таблица 3 Гипогликемические эффекты SX-фракции у пациентов с диабетом 2 типа.
    Пациенты
    Возраст (лет)
    Пол
    FBG (мг / дл) До SXF a


    % FBG отклонено с SXF
    A 44 M Приблизительно 260 90-100 Приблизительно 63 200327 Приблизительно 63 200322 110-130 Примерно 40
    C 25 F 150-180 110-120 Примерно 30
    D 37 37 D 37 120-140 Примерно 32
    E 64 F Примерно 220 130-15 0 Примерно 37
    F 41 M Примерно 210 100-110 Примерно 50
    G 53 Примерно 42

    В целом, эти ограниченные клинические исследования продемонстрировали гипогликемический эффект SXF на реальных пациентах с диабетом 2 типа.После того, как пациенты начали режим SXF, его гипогликемический эффект можно было увидеть в течение от 2 недель до месяца. Более того, SXF можно безопасно принимать с лекарствами без каких-либо противопоказаний, поскольку все участвовавшие пациенты также принимали некоторые пероральные препараты с небольшими побочными эффектами во время этого исследования SXF. Интересно, что мы смогли наблюдать за двумя пациентами, первым пациентом и одним из семи дополнительных пациентов, и они все еще остаются нормогликемическими на сегодняшний день (2020 г.) даже без приема SXF. К сожалению, хотя мы потеряли контакт с остальными 6 пациентами, мы уверены, что у них все хорошо, пока они продолжают принимать SXF ежедневно.Затем мы задаемся вопросом, мог ли SXF вылечить диабет у этих двух пациентов после того, как они принимали SXF ежедневно в течение 10 лет. Возможно ли, что длительный (более 10 лет) прием SXF может вылечить диабет? Поскольку у нас есть только два действительных случая, мы могли бы строить предположения, но пока не можем сделать положительный вывод на данный момент. Несомненно, для подтверждения требуются дополнительные исследования и доказательства. Тем не менее, эти открытия действительно заслуживают внимания и дадут нам надежду и обещание SXF.

    Возможные эффекты SXF на сигнальный путь инсулина

    Исследования SXF на животных и клинические исследования [11-14], как правило, подтверждают антидиабетические и гипогликемические эффекты SXF для профилактики и / или лечения диабета 2 типа.Тем не менее, все же важно понять или выяснить, как это на самом деле работает, то есть гипогликемический механизм SXF, который в настоящее время полностью не изучен. Фактически, хотя основная причина развития диабета 2 типа связана с «инсулинорезистентностью» инсулино-чувствительных клеток [6], почему и как они становятся инсулинорезистентными, остается неизвестным. Тем не менее, проблема была бы в значительной степени решена, если бы инсулинорезистентность каким-то образом превратилась в «инсулиновую реакцию». Затем мы предположили, что такая инсулинорезистентность может быть в первую очередь связана с дисфункцией или инактивацией пути передачи сигнала инсулина.Если бы SXF каким-то образом был способен активировать этот путь, чтобы он работал, резистентность к инсулину могла бы быть устранена, становясь инсулино-чувствительной / чувствительной.

    Следовательно, наше исследование сосредоточено на изучении того, может ли SXF модулировать активность трех ключевых параметров, которые играют значительную роль в сигнальном пути, т.е. IR, IRS-1 и Akt [16-18]. Активация этих параметров требует «фосфорилирования», или они должны фосфорилироваться, чтобы стать активными и функциональными [16]. Для такой активации, в частности, остатки тирозина (y) как в IR, так и в IRS-1, но остатки серина (ов) в Akt должны быть более или высоко фосфорилированными [16-18].Их активация по существу необходима для выполнения каскада биохимических событий в сигнальном пути, ведущего к увеличению поглощения глюкозы клетками, что в конечном итоге снижает уровень глюкозы в крови [15]. Таким образом, мы проверили, сможет ли SXF действительно активировать (дисфункциональный) сигнальный путь.

    В этом исследовании [31] клетки L6 скелетных мышц крысы (Американская коллекция типовых культур; Манассас, Вирджиния, США) были использованы в качестве нашей модели in vitro . Их культивировали в среде Roswell Park Memorial Institute 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, пенициллин (100 Ед / мл) и стрептомицин (100 мг / мл).Сначала мы исследовали, влияет ли высокая концентрация (гипергликемия) Glc на активность IR, IRS-1 и Akt в дифференцированных клетках L6 (мышечных трубках). Клетки подвергали воздействию высокого уровня Glc (35 ммоль / л) в течение 24 часов, а затем культивировали с SXF (300 мкг / мл) или инсулином (INS; 100 нмоль / л) в течение 15 минут. INS использовали в качестве положительного контроля. Через 15 мин все клетки собирали, лизировали и подвергали иммуноферментному анализу отдельно на IR, IRS-1 и Akt.

    Иммуноферментный анализ с ферментной связью выполняли в соответствии с протоколом продавца (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США).Вкратце, 40 мкг клеточных лизатов, полученных из всех клеток, участвовавших в экспериментах, вводили в 96-луночный планшет, покрытый антителами [anti-IR (y), -IRS-1 (y) или -Akt (s)], и инкубировали. при комнатной температуре в течение 24 ч для завершения связывания антиген-антитело. После удаления клеточных лизатов в планшет добавляли раствор для обнаружения антител, который инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. После удаления раствора в планшет добавляли конъюгат против кроличьего IgG-HRP с последующей 30-минутной инкубацией.Реагент хромоген был добавлен в планшет, который инкубировали еще 30 мин. Затем добавляли стоп-раствор, чтобы завершить колориметрическую реакцию, и измеряли интенсивности (окрашенных в желтый цвет) продуктов при 450 нм в считывающем устройстве для микропланшетов. Уровни фосфорилирования IR (y), IRS-1 (y) или Akt (s) оценивали относительно уровня соответствующего стандарта, который применялся одновременно. Результаты интерпретируются как - чем выше уровень фосфорилирования, тем выше активность.

    На фиг. 3 показано, что уровень фосфорилирования IR (y) в контрольных клетках снижался приблизительно на 15% при 24-часовом воздействии Glc (35 ммоль / л), что свидетельствует о потере активности IR.Однако SXF повысил сниженный уровень IR примерно до 10% и примерно на 29% выше, чем в контроле и уровне, подавленном Glc, соответственно. Этот повышенный уровень IR (y) при использовании SXF был довольно похож на таковой при воздействии INS. Таким образом, эти результаты показывают, что SXF может повторно активировать Glc-подавленный / инактивированный IR, чтобы передать сигнал для продолжения последующих событий.

    Рисунок 3 Влияние SX-фракции или инсулина на фосфорилирование рецептора инсулина (y) [IR (y)] при высоком уровне глюкозы (35 ммоль / л). После 24-часовой обработки с высоким содержанием глюкозы (35 ммоль / л) клетки подвергали воздействию SX-фракции (300 мкг / мл) или инсулина (100 нмоль / л) в течение 15 минут и подвергали иммуноферментному анализу на IR ( у). Все данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (стандартное отклонение) из трех независимых экспериментов ( a P <0,05 против контроля или b P <0,05 против обработанных глюкозой). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин; IR (y): рецептор инсулина (y).

    Следует еще раз подчеркнуть важность IR. IR представляет собой гетеротетрамерный гликопротеин, состоящий из двух внеклеточных α-субъединиц с приблизительно 135000 Да и двух трансмембранных β-субъединиц с 95000 Да, связанных дисульфидными связями с образованием β-α-α-β структуры [32,33]. В частности, β-субъединица IR представляет собой инсулиночувствительную тирозинкиназу (TK), которая может аутофосфорилировать себя, а также фосфорилировать тирозин (y) остатки внутриклеточных субстратов, таких как IRS-1 [33].Эта активация ( через аутофосфорилирование ) IR существенно необходима для того, чтобы IR работал и отвечал на инсулин [33,34]. Активация IR затем запускает активацию нижестоящих молекул, таких как IRS-1, Akt и другие молекулы, чтобы продолжить каскад сигнальных событий и выполнить инсулино-опосредованный биологический ответ - , то есть , передачу сигнала инсулина [34,35] . Следовательно, активация ИР (инсулином) является наиболее важным этапом в сигнальном пути инсулина.Однако заметное снижение активности ТК в результате дисфункции ИР часто обнаруживалось в печени больных диабетом 2 типа, и аналогичным образом снижение активности ТК наблюдалось в скелетных мышцах, жировой ткани и эритроцитах других пациентов [33,36 ]. Таким образом, кажется, что значительное снижение активности ТК IR, вероятно, из-за неспособности аутофосфорилирования β-субъединиц, является обычным феноменом у большинства диабетиков 2 типа.

    На рис. 4 показано, что высокий уровень Glc приводил к снижению фосфорилирования IRS-1 (y) примерно на 12% (по сравнению с контролем), что свидетельствует об инактивации IRS-1.SXF все же был способен увеличивать сниженный уровень IRS-1 (y) примерно на 11% выше, чем в контроле, или примерно на 20% выше, чем уровень, подавленный Glc. Этот повышенный SXF уровень IRS-1 (y) также был аналогичным образом замечен при INS. Поскольку увеличение (Glc-подавленного) фосфорилирования IRS-1 (y) с помощью SXF указывает на активацию IRS-1, вполне вероятно, что последующие события передачи сигналов будут осуществляться рутинно.

    Рисунок 4 Влияние SX-фракции или инсулина на фосфорилирование субстрата рецептора инсулина 1 (y) [IRS-1 (y)] при высоком уровне глюкозы. Клетки обрабатывали точно так, как описано на фиг. 3, но анализировали на IRS-1 (y) с помощью иммуноферментного анализа. Все данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение из трех отдельных экспериментов ( a P <0,05 против контроля или b P <0,05 против обработанных глюкозой). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин; IRS-1 (y): субстрат 1 (y) рецептора инсулина.

    На фиг. 5 показано снижение уровня фосфорилирования Akt (s) примерно на 42% в клетках, обработанных Glc (по сравнению с контролем), что указывает на инактивацию Akt.Однако SXF был способен предотвращать инактивацию Akt, повышая его пониженный уровень примерно в 2 раза или примерно на 18% выше, чем в контроле. Точно так же INS также повышал уровень Glc-супрессированных Akt примерно в 2,1 раза или примерно на 22% больше, чем в контроле.

    Рисунок 5 Влияние SX-фракции или инсулина на фосфорилирование протеинкиназы B (s) [Akt (s)] при высоком уровне глюкозы. Клетки обрабатывали, как описано на фиг. 3, но анализировали на Akt (ы).Все данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение из трех отдельных экспериментов ( a P <0,03 против контроля или b P <0,01 против обработанных глюкозой). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин; Akt (s): протеинкиназа B (s).

    Это открытие указывает на то, что Akt играет критическую роль в развитии последовательных сигнальных событий. За активацией Akt следует активированная фосфатидилинозитол-3-киназа, опосредованная активацией IRS-1 [15,18,34].Активация Akt не только позволяет продолжать сигнальный путь, но и приводит к последнему событию поглощения глюкозы [18]. Исследование здесь показало, что высокий уровень Glc, безусловно, инактивировал Akt, но SXF все же был способен значительно (повторно) активировать его (Рисунок 4). Таким образом, очевидно, что сигнальный путь успешно продолжался с активированным Akt (через активацию фосфатидилинозитол-3-киназы).

    В совокупности, хотя высокий Glc действительно инактивирует IR, закрывая остальную часть сигнального пути, SXF способен сначала активировать IR, а затем последовательную активацию IRS-1 и Akt, чтобы продолжить сигнальный каскад.Это в конечном итоге приведет к транслокации транспорта глюкозы-4 ( GLUT4) [18,37], чтобы способствовать усвоению глюкозы.

    Влияние SXF на поглощение глюкозы

    Чтобы подтвердить, будет ли активированный SXF сигнальный путь в конечном итоге способствовать поглощению глюкозы (инсулино-чувствительными клетками), такое исследование было также выполнено в соответствии с методом, ранее описанным с небольшими модификациями [38]. Дифференцированные клетки L6 высевали в 6-луночный планшет и обрабатывали высоким содержанием Glc (35 ммоль / л) в течение 24 часов.После удаления Glc все лунки тщательно промывали фосфатным буфером Кребса-Рингера для удаления остаточного Glc. Клетки кратковременно культивировали с SXF (300 мкг / мл) или INS (100 нмоль / л) в течение 15 мин. INS использовали в качестве положительного контроля, способного способствовать усвоению глюкозы. Чтобы инициировать захват глюкозы, в планшет добавляли радиоактивный лиганд, 2-дезокси-D- [1- 3 H] -глюкозу ([ 3 H] -DOG; удельная активность 10 Ки / ммоль). с последующей 20-минутной инкубацией при 37 ° C. Затем клетки трижды промывали ледяным фосфатно-солевым буфером и растворяли в 0.1 н. NaOH. Аликвоту солюбилизированных клеток объемом двести мкл измеряли на радиоактивность ([ 3 H] -DOG), включенную в клетки, с использованием сцинтилляционного счетчика. Затем количество поглощенной глюкозы выражали как процент (%) включенной [ 3 H] -DOG по сравнению с контролями (100%).

    Рисунок 6 показывает, что поглощение глюкозы снижалось примерно на 24% при высоком уровне Glc (по сравнению с контролем), но SXF предотвращал или обращал вспять его снижение, увеличивая его примерно на 1.В 5 раз больше, чем Glc-восстановленный, или примерно на 17% выше, чем в контроле. Безусловно, INS продемонстрировал лучший стимулирующий эффект - примерно в 1,7 раза и примерно на 26% больше, чем потребление глюкозы, сниженное Glc, и контроль, соответственно. В целом, эти результаты показывают, что высокий уровень Glc может снижать или ингибировать поглощение глюкозы (из-за незавершенности сигнального пути), но такое снижение можно обратить или преодолеть с помощью SXF, впоследствии увеличивая / облегчая поглощение глюкозы (в качестве успешного завершения сигнальный путь).

    Рисунок 6 Влияние SX-фракции или инсулина на поглощение глюкозы. После 24-часовой обработки глюкозой и 15-минутной SX-фракции или воздействия инсулина поглощение глюкозы измеряли с использованием радиоактивного лиганда и выражали в% относительно контроля (100%). Все данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение из трех отдельных экспериментов ( a P <0,05 против контроля или b P <0.03 против обработанных глюкозой). SXF: SX-фракция; Glc: глюкоза; Инсулин: инсулин.

    Таким образом, повышенное поглощение глюкозы может указывать на завершение сигнального пути. Мы наблюдали, что поглощение глюкозы существенно снижалось при высоком уровне Glc, что приводило к неполному сигнальному событию, тогда как SXF был способен облегчить поглощение глюкозы даже при высоком Glc, указывая на успешное, полное сигнальное событие. Фактически, такое повышенное поглощение глюкозы (с SXF) будет тесно связано с транслокацией GLUT4 к плазматической мембране, и его локализация, как известно, важна и необходима для активного поглощения глюкозы [18,37,39].Хотя индуцированная транслокация GLUT4 не изучалась в этом исследовании, такое исследование в настоящее время продолжается.

    В целом, одним из важных открытий здесь является то, что высокая концентрация Glc действительно нарушает сигнальный путь инсулина, инактивируя ключевые регуляторные элементы, такие как IR, IRS-1 и Akt. Это означает, что постоянно высокий уровень глюкозы в крови может привести к нарушению функционирования сигнального пути и появлению инсулино-инсулиновой инсулинорезистентности, что впоследствии приведет к проявлению диабета.Другим важным открытием является то, что SXF способен последовательно активировать эти ключевые регуляторы для успешного осуществления сигнального пути, что в конечном итоге способствует усвоению глюкозы. Это приведет к снижению уровня глюкозы в крови, проявляя гипогликемический эффект SXF. Вкратце, сигнальный путь, нарушенный высоким Glc (становящийся инсулинорезистентным), может быть (повторно) активирован SXF, способствуя захвату глюкозы. Следовательно, вероятно, что активация сигнального пути с помощью SXF может принципиально объяснить лежащий в основе гипогликемический механизм.Дальнейшее подтверждение еще требует дополнительных исследований.

    Между тем, ключевой вопрос состоит в том, чтобы быстро найти, «какие агенты» будут специфически стимулировать или (повторно) активировать (дисфункциональный) ИР, чтобы запустить и успешно провести весь путь инсулинового сигнала. Другими словами, мы должны активно заниматься поиском эффективных средств и / или агентов / веществ, способных активировать IR (y) для выполнения сигнального пути для лучшего контроля глюкозы (у пациентов с типом 2). По крайней мере, в настоящее время SXF выглядит таким многообещающим кандидатом.

    Относимая доля населения диабета 2 типа из-за отсутствия физической активности у взрослых: систематический обзор

    Задний план: Отсутствие физической активности - это глобальная пандемия. Относимая популяция фракция (PAF) сахарного диабета 2 типа (T2DM), связанного с отсутствием физической активности, колеблется от 3% до 40%. Цель этого систематического обзора состояла в том, чтобы определить наилучшую оценку PAF для T2DM, связанного с недостаточной физической активностью и отсутствием занятий спортом или физических упражнений для мужчин и женщин.

    Методы: Мы провели систематический обзор, который включал всесторонний поиск в MEDLINE, EMBASE, SportDiscus и CINAHL (с 1946 г. по 30 апреля 2013 г.), ограниченный терминами «взрослые» и «английский». Два составителя обзора провели скрининг исследований, извлекли данные, относящиеся к PAF, и оценили качество выбранных исследований. Мы реконструировали 95% доверительных интервалов для исследований, в которых отсутствовали эти данные, с использованием метода замещения.

    Полученные результаты: Из восьми исследований, сообщающих о PAF при T2DM, два исследования включали проспективные когортные исследования (всего 3), а шесть были обзорами. Наблюдались явные различия в качестве определения и измерения отсутствия физической активности, СД2 и поправки на факторы, влияющие на факторы. В США PAFs для отсутствия занятий спортом варьировались от 13% (95% ДИ: 3, 22) у мужчин и 29% (95% ДИ: 17, 41) у женщин.В Финляндии PAFs для отсутствия упражнений варьировались от 3% (95% ДИ: -11, 16) у мужчин до 7% (95% ДИ: -9, 20) у женщин.

    Выводы: PAF отсутствия физической активности из-за T2DM является значительным. Отсутствие физической активности является изменяемым фактором риска СД2. Вклад отсутствия физической активности в СД2 зависит от пола; PAF также различается, если отсутствие физической активности определяется как отсутствие «спорта» или «отсутствие упражнений».

    границ | Сердечная недостаточность с сахарным диабетом 2 типа: связь между антигипергликемическими средствами, гликемическим контролем и фракцией выброса

    Введение

    Сердечная недостаточность (СН) - это прогрессирующий хронический клинический синдром, характеризующийся типичными симптомами одышки, ортопноэ или отека лодыжек, вызванных структурной или функциональной аномалией сердца, приводящей к снижению сердечного выброса и повышению внутрисердечного давления в покое или во время стресса. (1).Сердечная недостаточность - это глобальная пандемия, от которой страдают не менее 26 миллионов человек во всем мире, и ее распространенность растет (2). Распространенность сердечной недостаточности колеблется от 3 до 20 на 1000 населения (3).

    Сахарный диабет 2 типа (СД2) - распространенное неинфекционное заболевание, характеризующееся гипергликемией, возникающей в результате сочетания дефектов секреции инсулина, устойчивости к действию инсулина и чрезмерной секреции глюкагона. Распространенность СД2 увеличилась на 30% во всем мире за последнее десятилетие (2).В Малайзии Национальное обследование здоровья и заболеваемости (NHMS) за 2015 г. показало, что общая распространенность диабета среди взрослых старше 18 лет составляет 17,5%, что свидетельствует о росте распространенности по сравнению с 15,2% в 2011 г. (4, 5). .

    СД2 - это хорошо известный фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний, при этом сердечная недостаточность тесно связана с СД2 (6). Данные Фрамингемского исследования сердца показали, что риск сердечной недостаточности у мужчин и женщин с диабетом в 2 и 5 раз выше, соответственно (7).Данные исследований OPTIMIZE-HF и EVEREST также показали, что ~ 40% пациентов, госпитализированных с сердечной недостаточностью, имели диагноз диабета (8, 9).

    Было показано, что классификация пациентов с сердечной недостаточностью по фракции выброса левого желудочка (ФВЛЖ) имеет прогностическое значение. Сердечная недостаточность была разделена на три подтипа: пациенты с HF с сохраненной фракцией выброса (HFpEF) с ФВ ЛЖ ≥50%, пациенты с HF со средней фракцией выброса (HFmrEF) с ФВ ЛЖ 40–49% и HF с пониженной фракцией выброса (HFrEF). ) пациенты с ФВ ЛЖ <40% (1).ФВЛЖ является признанным показателем эффективности для прогнозирования основных неблагоприятных сердечных событий (MACE) (10). Было показано, что улучшение ФВЛЖ на 3% коррелирует с улучшением смертности на 20% (11). Сообщалось также, что пациенты с различными классами дисфункции миокарда ЛЖ по-разному реагировали на терапию. В то время как годовой уровень смертности после корректировки риска оказался сопоставимым среди пациентов в разных категориях ФВЛЖ, пациенты с сердечной недостаточностью с повышенным функциональным классом Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA) сталкиваются с повышенным риском заболеваемости.Функциональная классификация NYHA используется для оценки и описания тяжести симптомов и переносимости физических нагрузок у пациентов с сердечной недостаточностью (1). Более высокие классы NYHA связаны с повышенным уровнем смертности в течение 1 года. Годовая летальность оценивается в 5–10, 10–15, 15–20 и 20–50%, соответственно, для пациентов с сердечной недостаточностью I, II, III и IV по NYHA (3).

    Плохой гликемический контроль и инсулинорезистентность связаны с ухудшением сердечной недостаточности и дисфункцией ЛЖ (2). Однако имеющиеся данные свидетельствуют об отсутствии разницы в риске обострения сердечной недостаточности между группами пациентов, подвергнутых интенсивному гликемическому контролю, и группами стандартного лечения (2).Связь между гликированным гемоглобином (Hba1c) и ФВЛЖ остается неясной. U-образная зависимость между HbA1c и смертностью среди пациентов с сердечной недостаточностью не соответствует точным целевым показателям или диапазонам гликемии, рекомендованным для этой группы пациентов (2).

    При выборе подходящей антигипергликемической терапии у пациентов с сопутствующими заболеваниями, такими как сердечная недостаточность, особое внимание следует уделять подходу, ориентированному на пациента. Метформин оказался безопасным и эффективным. Напротив, инсулин и сульфонилмочевина связаны с обострением сердечной недостаточности (1).Тиазолидиндионы также продемонстрировали последовательную и надежную связь с повышенным риском сердечной недостаточности (12). Объединенный анализ имеющихся в настоящее время исследований сердечно-сосудистых исходов (CVOT) глюкозоснижающих препаратов показал, что ингибитор дипептидилпептидазы-4 (DPP-4i) и GLP1-RA оказали нейтральное влияние на госпитализацию пациентов с сердечной недостаточностью с СД2. Напротив, ингибитор транспортера-2, связанного с глюкозой натрия (SGLT-2), приводил к статистически значимому сокращению госпитализаций при сердечной недостаточности (13).Предполагая, что метформин и сульфонилмочевина в целом безопасны, Малазийское руководство по клинической практике (CPG) по лечению сердечной недостаточности (HF) также рекомендует ингибитор SGLT-2 для лечения диабета у пациентов с сердечной недостаточностью (3).

    Текущие опубликованные CVOT антигипергликемических средств включают большое количество пациентов из Азии, европеоидной расы и чернокожих из разных стран. Перевод данных клинических испытаний в реальную мировую практику, особенно в странах с ограниченными ресурсами или в больницах, остается проблемой.Данные о реальном использовании диабетической медицины у азиатских пациентов с сердечной недостаточностью и СД2 недостаточно документированы. Это подчеркивает важность поиска лучшего понимания стратегий лечения пациентов с сердечной недостаточностью и СД2 с учетом этнической принадлежности.

    Таким образом, требуется локализованное клиническое обсервационное исследование для определения схемы назначения различных классов антигипергликемической терапии, а также для изучения влияния статуса гликемического контроля пациентов на сердечную функцию пациентов в реальной популяции пациентов с обе болезни.Это исследование направлено на оценку схемы назначения антигипергликемических режимов у пациентов с сердечной недостаточностью и сахарным диабетом 2 типа, а также на изучение связи между гликемическим контролем и другими факторами, такими как демографические и клинические характеристики, с ФВ ЛЖ у этих пациентов.

    Методология

    Дизайн исследования и условия

    Это ретроспективное обсервационное исследование было проведено в больнице Tengku Ampuan Rahimah (HTAR) Klang, государственной больнице третичного уровня на 831 коек.HTAR обслуживает многоэтническое общество, составляющее население Малайзии. Исследование было проведено в соответствии с этическими принципами, изложенными в Хельсинкской декларации и Малайзийском надлежащем клиническом практическом руководстве. Этическое одобрение было получено от Комитета по медицинским исследованиям и этике (MREC) Министерства здравоохранения Малайзии [справочный номер NMRR-19-1358-48105 (IIIR)]. MREC Министерства здравоохранения отказался от необходимости получать письменное информированное согласие участников.

    Критерии включения и исключения

    В это исследование были включены все подходящие пациенты, соответствующие следующим критериям включения и исключения.Критериями включения были пациенты в возрасте ≥ 18 лет, с диагнозом сердечная недостаточность на основании клинического диагноза с эхокардиографическим подтверждением фракции выброса ≤ 70%, с диагнозом сахарный диабет 2 типа по результатам лабораторных измерений HbA1c и назначенным по крайней мере одним пероральным противодиабетическим средством. агент и / или инсулин и получающие противодиабетическую терапию не менее 3 месяцев до включения в исследование. Критериями исключения были пациенты без отчета эхокардиографии и результатов HbA1c, пациенты с СД2, которые не получали никаких противодиабетических средств и находились под контролем диеты и изменения образа жизни, а также беременные женщины.

    Процедура исследования

    Потенциальные пациенты, которые обращались в амбулаторную клинику HTAR с июля по декабрь 2019 г., были идентифицированы из реестра MOPD. Во время визита пациентов был проведен первоначальный скрининг через медицинские карты пациентов для диагностики сердечной недостаточности. Отчеты эхокардиографии пациентов были извлечены из регистра эхокардиограммы, при этом тесты эхокардиограммы выполнялись за 1 неделю до запланированных посещений пациентов в клинике.Были отобраны пациенты с диагнозом СН с фракцией выброса левого желудочка ФВЛЖ ≤ 70% и СД2.

    Данные, которые были собраны из медицинских карт пациентов, включали демографическую информацию, такую ​​как возраст, пол, этническая принадлежность, вес, рост, клинические характеристики, включая историю болезни, сопутствующие заболевания, продолжительность диабета, продолжительность сердечной недостаточности, ФВЛЖ, классификацию NYHA, соответствующие лабораторные результаты. такие как Hba1c, и, наконец, история лекарств, текущий предписанный режим лечения диабета и другие сопутствующие лекарства.

    Наконец, пациенты, которые соответствовали критериям включения и исключения, были идентифицированы и включены в исследование, с обобщенными результатами, представленными на рисунке 1. Пациенты были затем классифицированы в соответствии с их ФВ ЛЖ на HF с сохраненной фракцией выброса (HFpEF), HF со средней -диапазон LVEF (HFmrEF) и HF с пониженной фракцией выброса (HFrEF).

    Рисунок 1 . Обзор дизайна исследования и выбора предметов исследования.

    Соответствующие данные, извлеченные из медицинских карт, вводились вручную в формы для сбора данных.Это было сделано с разрешения лечащих врачей, личности пациентов остались анонимными.

    Результаты исследования

    Первичным результатом было определение схемы назначения антигипергликемических режимов в трех группах пациентов, которые включают пациентов с HFpEF, пациентов с HFmrEF и пациентов с HFrEF. Вторичные результаты заключались в том, чтобы определить, существует ли связь между контролем гликемии и другими характеристиками пациентов с ФВ ЛЖ у пациентов с сердечной недостаточностью и СД2.

    Размер выборки

    Размер выборки, необходимый для этого исследования, был оценен с использованием OpenEpi версии 3.01 (14). Предполагая 95% доверительный интервал или 5% уровень значимости и 5% погрешность, минимальный расчетный размер выборки составил 139.

    Статистические методы

    Полученные данные были проанализированы с использованием программного обеспечения Статистического пакета для социальных наук (SPSS) версии 23 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Тест на нормальность проводился с использованием теста Колмогорова-Смирнова.Непрерывные данные были представлены в виде среднего и стандартного отклонения (SD) при нормальном распределении и в медиане с 25–75% -ными процентильными значениями при ненормальном распределении. Категориальные данные были представлены по частоте и процентному содержанию. Для изучения связи между категориальными переменными использовался критерий хи-квадрат Пирсона. Процедура однофакторного дисперсионного анализа использовалась для проверки различий в характеристиках в трех группах пациентов. Отношение шансов [95% доверительный интервал [ДИ]] было вычислено с использованием двоичной логистической регрессии с фиктивной переменной.Модели множественной полиномиальной логистической регрессии были проведены для проверки связи между антигипергликемическим агентом и характеристиками пациентов с ФВЛЖ с поправкой на возраст, пол и HbA1c. Уровень значимости был установлен на уровне p <0,05.

    Результаты

    Выбор предметов исследования

    Как показано на Рисунке 1, всего 1108 пациентов с сердечной недостаточностью обратились для последующего наблюдения с июля по декабрь 2019 года. Из 976 пациентов с сердечной недостаточностью, у которых были эхокардиографические доказательства фракции выброса ≤ 70, 20.8% имели сопутствующий диагноз СД2. Девять пациентов были исключены из исследования за невыполнение критериев включения. Таким образом, в исследование было включено окончательное общее количество 194 пациента.

    Демографические и клинические характеристики

    Большинство (52,1%) пациентов имели HFpEF, 20,6% имели HFmrEF и 27,3% имели HFrEF. Исследуемая популяция состояла почти на три четверти мужчин. Как показано в таблице 1, возраст пациентов обычно распределялся со средним значением ± стандартное отклонение (SD) 59.6 ± 12,0 лет, минимальный возраст 25 и максимальный возраст 88 лет. ФВЛЖ увеличивается с возрастом. Самый молодой средний возраст был у пациентов из группы HFrEF (57,8 ± 10,9 года). Самой большой этнической популяцией в этом исследовании были малайцы, за ними следовали индийцы, китайцы и другие. Когда мы сравнивали между тремя подгруппами ФВЛЖ, было выявлено значительное неравенство полов в популяции пациентов с СН с СД2. Более 80% пациентов мужского пола относились к категориям HFmrEF и HFrEF; в то время как женщин в группах с HFpEF было более чем в два раза больше, чем в группах с HFmrEF или HFrEF.Пол был единственной характеристикой, достоверно связанной со статусом ФВЛЖ. У мужчин с сердечной недостаточностью вероятность того, что ФВ ЛЖ составляла ≤ 50%, была значительно выше ( p = 0,002). Не было значимой связи между другими демографическими характеристиками, такими как возраст и этническая принадлежность, со статусом ФВЛЖ в трех группах пациентов (таблица 1).

    Таблица 1 . Демографические и клинические характеристики пациентов.

    ФВЛЖ не было нормально распределено со средним значением 51% (межквартильный размах 40–65%).В исследуемой популяции более половины пациентов имели ФВЛЖ ≥ 50%. Результаты показали, что более трех четвертей пациентов были помещены в класс I по NYHA, за которым следуют классы II, III и IV. Во всех группах более трех четвертей пациентов были отнесены к классу 1 по NYHA. В этом исследовании только одному пациенту из группы HFrEF был отнесен класс IV по NYHA. Медиана HbA1c составила 8,2% (межквартильный размах 6,9–9,5%). Примерно три четверти (74,2%) пациентов имели плохой гликемический контроль с HbA1c> 7, классифицированных на основе рекомендаций Американской диабетической ассоциации.Среди трех групп пациентов у более высокой доли пациентов с HFrEF был хороший гликемический контроль и самый низкий средний HbA1c. Не было значительных различий в отношении функционального класса NYHA и гликемического контроля между тремя группами пациентов.

    Антигипергликемические средства, назначаемые пациентам с сердечной недостаточностью и сахарным диабетом 2 типа

    В целом, метформин (59,8%) был наиболее часто назначаемым антигипергликемическим средством, за ним следовали инсулины (56,2%) и сульфонилмочевины (45,4%), как показано в таблице 2.Пациентам с HFpEF чаще всего назначали метформин (65,3%), за которым следовали инсулины (60,4%). Пациентам с HFmrEF чаще всего назначали инсулин (62,5%), а затем метформин (57,5%). Наиболее часто назначаемым препаратом пациентам с HFrEF была сульфонилмочевина (60,4%). Более 60% пациентов из категорий HFpEF и HFmrEF получали инсулины.

    Таблица 2 . Пациентам с СН с СД2 назначают антигипергликемические средства.

    Сульфонилмочевина была единственным классом антигипергликемических средств, достоверно ассоциированным с подгруппами ФВЛЖ ( p = 0.033). Из таблицы 2 видно, что шансы назначения сульфонилмочевины среди пациентов с HFrEF были в 2,42 раза выше, чем у пациентов с HFpEF, с 95% доверительным интервалом [1,23–4,79]. Пациентам с HFrEF вероятность назначения инсулина была вдвое меньше, чем у пациентов с HFpEF, с 95% доверительным интервалом [0,26–0,99]. В остальном, не было различий в плане назначения других препаратов в трех группах пациентов.

    Бигуаниды

    Метформин был назначен 116 пациентам для контроля гликемии.Как показано на Рисунке 2, у 63 пациентов наиболее часто назначалась схема приема метформина в дозе 2000 мг в день. Шестьдесят одному пациенту был назначен метформин немедленного высвобождения 1 г дважды в день, а двоим - метформин пролонгированного высвобождения (ER) в дозе 2000 мг один раз в день. Двум пациентам, принимавшим метформин по 1500 мг в день, были назначены таблетки с пролонгированным высвобождением один раз в день. Из 47 пациентов, получавших метформин 1000 мг в день, пять получали метформин ER 1 г один раз в день, а остальные получали метформин немедленного высвобождения в дозе 500 мг два раза в день.В общей сложности четыре пациента получали метформин 500 мг в день, два пациента получали метформин 250 мг два раза в день, а еще двое получали метформин ER 500 мг в день.

    Рисунок 2 . Режимы суточного дозирования метформина ( n = 116).

    Сульфонилмочевина

    Гликлазид был назначен 88 пациентам. Тридцать шесть пациентов (40,9%) из них были назначены препаратами с модифицированным высвобождением (MR) гликлазида.

    Ингибиторы дипептидилпептидазы-4

    Более 80% пациентов, принимавших ингибиторы ДПП-4, принимали вилдаглиптин, 12 пациентов - вилдаглиптин в дозе 50 мг 1 раз в сутки, 30 пациентов - вилдаглиптин 50 мг 2 раза в день; тогда как оставшимся восьми пациентам назначался ситаглиптин в различных дозах 25, 50 или 100 мг один раз в сутки.

    Ингибиторы транспортера-2, связанного с глюкозой натрия

    Только четырем пациентам были назначены ингибиторы SGLT-2. У этих пациентов использовались схемы дозирования эмпаглифлозина 25, 12,5 и 10 мг один раз в сутки.

    Инсулины

    Как показано на Рисунке 3, наиболее часто назначали подкожную базисно-болюсную терапию. Шестьдесят одному пациенту из 66, получавшему базисно-болюсный режим, была назначена комбинация инсулина НПХ средней продолжительности действия и трех отдельных инъекций обычного инсулина короткого действия при каждом приеме пищи.Остальным пяти пациентам были назначены аналоги базального инсулина пролонгированного действия. Второй наиболее часто назначаемой схемой был предварительно смешанный инсулин два раза в день. Всем 34 пациентам был назначен предварительно смешанный человеческий инсулин, за исключением одного, которому давали предварительно смешанный аналог инсулина. Из семи пациентов, получавших инсулин один раз в день перед сном, шесть получали инсулин НПХ, а один - аналог инсулина. Двое других пациентов получали несколько схем инъекций инсулина. В целом более 90% пациентов, нуждающихся в инсулине, получали человеческий инсулин вместо аналогов инсулина.

    Рисунок 3 . Ежедневные схемы приема инсулинов ( n = 109).

    Ассоциации характеристик пациентов и антигипергликемических агентов с LVEF

    В таблице 3 были показаны несколько моделей полиномиальной логистической регрессии для связи между тенденцией назначения сульфонилмочевины и характеристиками пациентов с ФВЛЖ. В модели 1 принадлежность к мужскому полу значимо ассоциировалась с принадлежностью к подгруппам HFmrEF и HFrEF с OR 4,40 (95% ДИ 1.59–12,20) и 2,71 (95% ДИ 1,22–6,00) соответственно. В модели 2 нескорректированная связь между подгруппами сульфонилмочевины и ФВЛЖ показала, что те, кому была назначена сульфонилмочевина, в 2,42 раза чаще оказывались пациентами с СНrEF. Назначение сульфонилмочевины и мужской пол оставались значимо связанными с подгруппой HFrEF даже после поправки на возраст и HbA1c в последующих моделях.

    Таблица 3 . Характеристики пациентов и антигипергликемические средства, связанные с ФВЛЖ.

    Обсуждение

    В нашей группе пациентов с СН и СД2 метформин является наиболее назначаемым антигипергликемическим средством. Тенденция назначения сульфонилмочевины была в значительной степени связана со статусом пациентов с ФВЛЖ, при этом пациенты с HFrEF в 2 раза чаще получали сульфонилмочевину по сравнению с пациентами с HFpEF. Использование ингибиторов SGLT-2, препаратов, основанных на доказательствах, связанных с улучшением исходов при СН с СД2, было низким и составляло 2,1%. Не было обнаружено связи между контролем гликемии и ФВЛЖ пациентов.

    Метформин был наиболее часто используемым (59,8%) антигипергликемическим средством, поскольку метформин был рекомендованным препаратом первой линии в текущих практических рекомендациях (15). Метформин также был наиболее часто назначаемым лекарством от диабета в Азиатском реестре внезапной сердечной смерти при сердечной недостаточности (ASIAN-HF), исследовании дапаглифлозина и профилактике неблагоприятных исходов сердечной недостаточности (DAPA-HF) и других исследованиях в Азии. процент выписанных рецептов колеблется от 50,8 до 56,8% (16–18). Показатели рецептурных препаратов были аналогичны показателям нашего исследования.Напротив, две отдельные азиатские страны, а именно Япония и Китай, сообщили о низком уровне использования метформина - 11,8 и 14,5%, соответственно, по причинам, которые еще предстоит оценить (17). В рекомендациях Европейского общества кардиологов (ESC) по сердечной недостаточности сообщается, что метформин безопасен для пациентов с сердечной недостаточностью, принимая во внимание возраст пациента и степень почечной или печеночной дисфункции (1). Метформин эффективен, безопасен и связан с улучшенными исходами, такими как снижение частоты госпитализаций по всем причинам и снижения смертности у пациентов с сердечной недостаточностью в регистре ASIAN-HF (19, 20).Следовательно, в соответствии с текущими рекомендациями, метформин должен оставаться препаратом первого выбора, если нет противопоказаний.

    Сульфонилмочевины были наиболее назначаемым антигипергликемическим классом у 60,4% пациентов с HFrEF в нашем исследовании. Сульфонилмочевина использовалась часто, несмотря на то, что она была связана с гипогликемией, увеличением веса и повышенным риском ухудшения сердечной недостаточности (1, 21). По всей Азии использование терапии сульфонилмочевиной среди пациентов с HFrEF варьировалось от 43,8 до 53% (17, 18).Высокая частота назначения сульфонилмочевины, несмотря на отсутствие положительных результатов в отношении исходов, может быть связана с другими факторами, не изученными в нашем исследовании, такими как наличие почечной недостаточности или заболевания печени, при которых использование метформина противопоказано. Хотя в исследовании ADVANCE не сообщалось об отсутствии различий в частоте госпитализаций с сердечной недостаточностью у пациентов, рандомизированных в группу без сульфонилмочевины или группу с комбинацией гликлазида, другие исследования выявили неблагоприятный профиль риска сульфонилмочевины по сравнению с метформином, при этом сульфонилмочевина связана с более высоким риском всех заболеваний. вызывают летальность и застойную сердечную недостаточность (22, 23).Следовательно, со временем следует рассмотреть возможность перехода от сульфонилмочевины к назначению метформина. Однако, если адекватный гликемический контроль не может быть достигнут с помощью метформина или других классов антигипергликемических средств в отношении противопоказаний, сопутствующих заболеваний или относительной стоимости, сульфонилмочевину можно использовать с осторожностью и тщательным мониторингом. Кроме того, пациентам, получающим гликлазид, следует назначать препарат с модифицированным высвобождением (MR) гликлазида, поскольку его режим дозирования один раз в сутки помогает улучшить приверженность пациента лечению, что приводит к лучшему контролю уровня глюкозы в крови по сравнению с обычным гликлазидом.

    В нашей когорте исследования ингибиторы SGLT-2 использовались в недостаточной степени с частотой назначения 2,1%, в отличие от 26,5% на Тайване, как сообщает Chang HY et al. (18). Хотя Chang HY et al. сообщили о более высокой частоте назначения, ингибитор SGLT-2 был только четвертым по частоте назначения антигипергликемическим средством после метформина, ингибитора Dpp-4 и сульфонилмочевины в их когорте пациентов с сердечной недостаточностью (18). Причина нечастого использования ингибиторов SGLT-2 в нашей когорте исследования может быть связана с более высокой стоимостью и ограниченной доступностью лекарств в формулярах.Стоимость ингибиторов SGLT-2 также серьезно ограничивает их доступность в других развивающихся странах Азии (20). Исследование DAPA-HF, исследование EMPA-REG OUTCOME (исследование исходов эмпаглифлозина по сердечно-сосудистым заболеваниям у пациентов с сахарным диабетом 2 типа) и CANVAS (исследование сердечно-сосудистой оценки канаглифлозина) подтвердили, что лечение ингибиторами SGLT2 снижает частоту госпитализаций по поводу сердечной недостаточности (24–26) . Из-за того, что как азиаты, так и не азиаты демонстрируют постоянные преимущества для сердечно-сосудистой системы, важно рассмотреть возможность увеличения использования ингибиторов SGLT-2 у пациентов с сердечной недостаточностью и СД2.

    В этом исследовании не было обнаружено, что гликемический контроль связан с ФВЛЖ. Это контрастирует с результатами когортного исследования в регионе Южного Китая, в котором наблюдалась изогнутая U-образная корреляция между уровнями HbA1c и диастолической дисфункцией ЛЖ (2, 27). Наше исследование показало, что у мужчин была независимая связь с более низким ФВЛЖ. Эти связанные с полом различия согласовывались с данными Регистра по улучшению использования доказательных методов лечения сердечной недостаточности в амбулаторных условиях (IMPROVE HF), которые показали, что у женщин значительно улучшалась ФВЛЖ по сравнению с мужчинами (28).Результат нашего исследования показал, что на ФВЛЖ могут влиять другие факторы, не изученные в нашем исследовании, такие как ИМТ, статус курения, сопутствующие заболевания или лекарства от сердечной недостаточности и их дозы.

    Сила исследования и ограничения

    В этом исследовании были собраны и проанализированы данные в реальном времени, такие как антигипергликемические средства, гликемический контроль, классификация пациентов с сердечной недостаточностью в соответствии с ФВ ЛЖ и функциональным классом NYHA, что отражает клиническую практику в реальной ситуации.Продолжительность воздействия на пациентов антигипергликемических средств была четко определена и составляла не менее 3 месяцев. Место исследования было выбрано на основе обслуживаемой популяции пациентов, количества пациентов с сердечной недостаточностью и наличия опыта в области эхокардиографии. В этом исследовании было несколько ограничений. Выборка субъектов только из одной больницы подразумевает, что продемонстрированные характеристики данной исследуемой популяции могут не точно отражать всю популяцию Малайзии. Кроме того, из-за ретроспективного характера дизайна исследования в некоторых медицинских картах пациентов была неполная информация и отсутствовали данные, такие как продолжительность СН и СД2, а также функции почек и печени пациентов.

    Заключение

    Схема назначения антигипергликемических средств варьировала в трех подгруппах ФВЛЖ. Метформин был наиболее часто назначаемым антигипергликемическим средством. Ингибитор SGLT-2 назначали недостаточно, несмотря на малазийские рекомендации CPG и доказательства того, что ингибитор SGLT-2 был связан с улучшением результатов у пациентов с установленной сердечной недостаточностью и СД. Наше исследование также выявило плохо контролируемый диабет у подавляющего большинства пациентов с сердечной недостаточностью. Понимание текущей схемы назначения антигипергликемических средств поможет повысить осведомленность о важности научно обоснованных стратегий лечения пациентов с сердечной недостаточностью и СД2 для улучшения результатов лечения пациентов.Поскольку и СН, и СД являются хроническими заболеваниями, пациенты с СН с СД2 должны находиться под тщательным мониторингом безопасности и эффективности антигипергликемической терапии.

    Данных о стратегиях лечения сопутствующих заболеваний и клинических исходах у пациентов с сердечной недостаточностью и СД в Малайзии недостаточно. Проспективное последующее исследование изменений ФВЛЖ и сердечно-сосудистых исходов госпитализации и смертности в этой исследуемой популяции продолжается для устранения этих пробелов. Есть надежда, что результат последующего исследования предоставит дальнейшее понимание долгосрочных кардиозащитных эффектов глюкозоснижающих препаратов, тем самым улучшив фармакологическое лечение диабета и сердечной недостаточности и оптимизируя как качество, так и количество жизни пациентов с сердечной недостаточностью, страдающих сердечной недостаточностью. СД2.

    Заявление о доступности данных

    Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

    Заявление об этике

    Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по медицинским исследованиям и этике (MREC) Министерства здравоохранения Малайзии. Письменное информированное согласие на участие не требовалось для этого исследования в соответствии с национальным законодательством и институциональными требованиями.

    Авторские взносы

    Представленная идея возникла у

    SL, HZ и KC. SL разработала методологию и выполнила расчеты. SL и KP собрали данные. HZ и KC проверили дизайн исследования, полученные данные и статистику, ссылки и подтвердили аналитические методы. ST помогал интерпретировать результаты и работал над рукописью. Все авторы обсудили результаты и внесли свой вклад в окончательную рукопись.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы хотели бы поблагодарить команду эндокринологов, врачей, фармацевтов, административный персонал и наших коллег из медицинского отдела HTAR за их руководство, помощь и техническую поддержку на протяжении всего исследования. Мы также хотели бы поблагодарить генерального директора Министерства здравоохранения Малайзии за разрешение опубликовать эту статью.

    Список литературы

    1. Ponikowski P, Voors AA, Anker SD, Bueno H, Cleland JG, Coats AJ, et al. Рекомендации ESC по диагностике и лечению острой и хронической сердечной недостаточности, 2016 г .: рабочая группа Европейского общества кардиологов (ESC) по диагностике и лечению острой и хронической сердечной недостаточности.Разработано при особом участии Ассоциации сердечной недостаточности (HFA) ESC. Eur J Heart Fail . (2016) 18: 891–975. DOI: 10.1002 / ejhf.592

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    2. Данлей С.М., Живертц М.М., Агилар Д., Аллен Л.А., Чан М., Десаи А.С. и др. Сахарный диабет 2 типа и сердечная недостаточность: научное заявление Американской кардиологической ассоциации и общества сердечной недостаточности Америки: это заявление не является обновлением рекомендаций ACC / AHA / HFSA 2017 года по сердечной недостаточности. Тираж . (2019) 140: e294–324. DOI: 10.1161 / CIR.0000000000000691

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    3. Министерство здравоохранения Малайзии. Руководство по клинической практике ведения сердечной недостаточности. Куала-Лумпур: Национальная кардиологическая ассоциация Малайзии (2019).

    Google Scholar

    4. Здоровье IfP. Национальное обследование здоровья и заболеваемости 2011 г. (NHMS 2011). Куала-Лумпур: Министерство здравоохранения Малайзии (2011 г.).

    Google Scholar

    5.Малайзия IfPH. Национальное исследование здоровья и заболеваемости (NHMS 2015). Vol. II: Неинфекционные заболевания, факторы риска и другие проблемы со здоровьем. Институт общественного здравоохранения Малайзии Куала-Лумпур (2015).

    Google Scholar

    6. Густафссон И., Брендорп Б., Зейбек М., Бурхардт Х., Хильдебрандт П., Кёбер Л. и др. Влияние диабета и взаимодействия между полами и диабетом на риск смерти у пациентов, госпитализированных с застойной сердечной недостаточностью. Дж. Ам Кол Кардиол . (2004) 43: 771–7.DOI: 10.1016 / j.jacc.2003.11.024

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Гринберг Б. Х., Абрахам В. Т., Альберт Н. М., Чизуэлл К., Клэр Р., Стаф В. Г. и др. Влияние диабета на характеристики и исходы у пациентов, госпитализированных с сердечной недостаточностью: отчет организованной программы по началу жизненно необходимого лечения госпитализированных пациентов с сердечной недостаточностью (OPTIMIZE-HF). Сердце Дж. . (2007) 154: 277.e1–8. DOI: 10.1016 / j.ahj.2007.08.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9.Сарма С., Менц Р.Дж., Квасны М.Дж., Фоуд Эй-Джей, Хаффман М., Субасиус Х. и др. Связь между сахарным диабетом и исходами после выписки у пациентов, госпитализированных с сердечной недостаточностью: результаты исследования EVEREST. Eur J Heart Fail . (2013) 15: 194–202. DOI: 10.1093 / eurjhf / hfs153

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Scirica BM, Braunwald E, Raz I., Cavender MA, Morrow DA, Jarolim P, et al. Сердечная недостаточность, саксаглиптин и сахарный диабет: наблюдения рандомизированного исследования SAVOR-TIMI 53. Тираж . (2014) 130: 1579–88. DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.114.010389

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Крамер Д.Г., Трикалинос Т.А., Кент Д.М., Антонопулос Г.В., Констам М.А., Удельсон Дж.Э. Количественная оценка воздействия лекарств или устройств на ремоделирование желудочков как предикторов терапевтического воздействия на смертность у пациентов с сердечной недостаточностью и сниженной фракцией выброса: метааналитический подход. Дж. Ам Кол Кардиол . (2010) 56: 392–406.DOI: 10.1016 / j.jacc.2010.05.011

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Линкофф AM, Вольски К., Николлс С.Дж., Ниссен С.Е. Пиоглитазон и риск сердечно-сосудистых событий у пациентов с сахарным диабетом 2 типа: метаанализ рандомизированных исследований. JAMA . (2007) 298: 1180–8. DOI: 10.1001 / jama.298.10.1180

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13. Sinha B, Ghosal S. Мета-анализ эффектов ингибиторов DPP-4, ингибиторов SGLT2 и аналогов рецепторов GLP1 на сердечно-сосудистую смерть, инфаркт миокарда, инсульт и госпитализацию по поводу сердечной недостаточности. Диабет Рес Клин Практик . (2019) 150: 8–16. DOI: 10.1016 / j.diabres.2019.02.014

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. MalaysiaMoH. Руководство по клинической практике ведения сахарного диабета 2 типа. 5 изд. Путраджая: Министерство здравоохранения (2015).

    Google Scholar

    16. Мак-Мюррей Дж. Дж., Деметс Д. Л., Инзукчи С. Е., Кёбер Л., Косибород М. Н., Лангкилде А. М. и др. Исследование дапаглифлозина и профилактики неблагоприятных исходов сердечной недостаточности (DAPA-HF): исходные характеристики. Eur J Heart Fail . (2019) 21: 1402–11. DOI: 10.1002 / ejhf.1548

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Чиа Ю.М., Тэн Т., Тай В.Т., Ананд И., Макдональд М.Р., Яп Дж. И др. Схемы назначения антидиабетических препаратов и клинические исходы у азиатских пациентов с сердечной недостаточностью и сахарным диабетом. Eur J Heart Fail . (2019) 21: 685–8. DOI: 10.1002 / ejhf.1467

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18.Chang HY, Su YW, Feng AN, Fong MC, Huang KC, Chong E, et al. Схема назначения лекарств от диабета, влияющих на клинические исходы пациентов с сердечной недостаточностью и сниженной фракцией выброса. ESC Heart Fail . (2020) 7: 604–15. DOI: 10.1002 / ehf2.12617

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19. Eurich DT, Weir DL, Majumdar SR, Tsuyuki RT, Johnson JA, Tjosvold L, et al. Сравнительная безопасность и эффективность метформина у пациентов с сахарным диабетом и сердечной недостаточностью: систематический обзор наблюдательных исследований с участием 34 000 пациентов. Сердечная недостаточность . (2013) 6: 395–402. DOI: 10.1161 / CIRCHEARTFAILURE.112.000162

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Чиа Ю.М.Ф., Тенг ТХК, Чандрамули К., Яп Дж., Макдональд М., Лам К.С.. Клинические корреляты и фармакологическое ведение азиатских пациентов с сопутствующим сахарным диабетом и сердечной недостаточностью. Heart Fail Ред. . (2018) 23: 461–8. DOI: 10.1007 / s10741-018-9672-5

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21.Сингх Дж. С., Фатхи А., Викнесон К., Морди И., Мохан М., Хьюстон Дж. Г. и др. Исследование влияния ингибирования SGLT2 на ремоделирование левого желудочка у пациентов с сердечной недостаточностью и сахарным диабетом (REFORM) Обоснование и дизайн исследования. Кардиоваск Диабетол . (2016) 15:97. DOI: 10.1186 / s12933-016-0419-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Tzoulaki I., Molokhia M, Curcin V, Little MP, Millett CJ, Ng A, et al. Риск сердечно-сосудистых заболеваний и всех причин смерти среди пациентов с диабетом 2 типа, которым назначаются пероральные противодиабетические препараты: ретроспективное когортное исследование с использованием базы данных исследований общей практики Великобритании. BMJ . (2009) 339: b4731. DOI: 10.1136 / bmj.b4731

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23. Совместная группа ADVANCE. Интенсивный контроль уровня глюкозы в крови и сосудистые исходы у пациентов с сахарным диабетом 2 типа. N Engl J Med . (2008) 358: 2560–72. DOI: 10.1056 / NEJMoa0802987

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. McMurray JJV, Соломон С.Д., Дочерти К.Ф., Джхунд П.С. Дапаглифлозин и профилактика неблагоприятных исходов в исследовании сердечной недостаточности (DAPA-HF) в контексте. Eur Heart J. (2020). DOI: 10,1093 / eurheartj / ehz916. [Epub перед печатью].

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Фитчетт Д., Инзукчи С.Е., Кэннон С.П., Макгуайр Д.К., Скирика Б.М., Йохансен О.Е. и др. Эмпаглифлозин снизил смертность и количество госпитализаций по поводу сердечной недостаточности по всему спектру сердечно-сосудистого риска в исследовании EMPA-REG OUTCOME. Тираж . (2019) 139: 1384–95. DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.118.037778

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26.Rådholm K, Figtree G, Perkovic V, Solomon SD, Mahaffey KW, de Zeeuw D, et al. Канаглифлозин и сердечная недостаточность при сахарном диабете 2 типа: результаты программы CANVAS. Тираж . (2018) 138: 458–68. DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.118.034222

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Цзо Х, Лю Х, Чен Р., Оу Х, Лай Дж, Чжан И и др. Углубленный анализ уровня гликозилированного гемоглобина, индекса массы тела и диастолической дисфункции левого желудочка у пациентов с сахарным диабетом 2 типа. BMC Эндокринное заболевание . (2019) 19:88. DOI: 10.1186 / s12902-019-0419-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Wilcox JE, Fonarow GC, Yancy CW, Albert NM, Curtis AB, Heywood JT, et al. Факторы, связанные с улучшением фракции выброса в клинической практике у пациентов с сердечной недостаточностью: данные IMPROVE HF. Сердце Дж. . (2012) 163: 49–56.e2. DOI: 10.1016 / j.ahj.2011.10.001

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Водная фракция Beta vulgaris уменьшает гипергликемию у мышей с диабетом за счет усиления секреции инсулина, стимулированной глюкозой, опосредованной ацетилхолином и GLP-1, и повышенного поглощения глюкозы за счет увеличения связанных с мембраной переносчиков GLUT4

    Аннотация

    Фон

    Исследование было разработано для изучения возможных механизмов антигипергликемической активности B.Vulgaris .

    Методология / основные выводы

    Водная фракция экстракта B. Vulgaris была единственной активной фракцией (50 мг / кг). Было обнаружено, что уровень инсулина в плазме был самым высоким через 30 минут после введения B. Vulgaris в дозе 200 мг / кг. B. Vulgaris , обработанных мышей, также исследовали на ацетилхолин в плазме, глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1), желудочный ингибирующий пептид (GIP), вазоактивный кишечный пептид, гипофизарный аденилатциклаза-активирующий пептид, подобный инсулиноподобному фактору (PACAP), -1 (IGF-1), полипептиды поджелудочной железы (PP) и соматостатин вместе с соответствующими уровнями инсулина.Ацетилхолин и GLP-1 в плазме значительно увеличились у животных, получавших B. Vulgaris , и были дополнительно изучены. Фармакологические усилители, ингибиторы и антагонисты ацетилхолина и GLP-1 также вводили подопытным животным и измеряли соответствующие уровни инсулина. Эти исследования подтвердили роль ацетилхолина и GLP-1 в усилении секреции инсулина (p <0,05). Основные сигнальные молекулы были количественно определены на изолированных островках мышей для соответствующих путей, чтобы выяснить их активность.Было обнаружено, что повышенных концентраций ацетилхолина и GLP-1 у мышей B. Vulgaris достаточно для активации соответствующих путей секреции инсулина (p <0,05). Количество связанных с мембраной переносчиков GLUT1 и GLUT4 определяли количественно и анализировали последующее поглощение глюкозы и синтез гликогена. Мы показали, что уровни мембраносвязанных переносчиков GLUT4, глюкозо-6-фосфата в скелетных миоцитах, активность гликогенсинтазы и уровень гликогена, депонированного в скелетных мышцах, увеличились (p <0.05).

    Заключение

    Результаты настоящего исследования четко доказывают роль ацетилхолина и GLP-1 в секреторной активности инсулина B. Vulgaris . Повышенное поглощение глюкозы скелетными мышцами и последующий синтез гликогена также могут играть роль в антигипергликемической активности B. Vulgaris .

    Образец цитирования: Kabir AU, Samad MB, Ahmed A, Jahan MR, Akhter F, Tasnim J, et al. (2015) Водная фракция Beta vulgaris улучшает гипергликемию у мышей с диабетом за счет усиления секреции инсулина, стимулированной глюкозой, опосредованной ацетилхолином и GLP-1, и повышенного поглощения глюкозы за счет увеличения связанных с мембраной переносчиков GLUT4.PLoS ONE 10 (2): e0116546. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546

    Академический редактор: Клаудиа Миле, Consiglio Nazionale delle Ricerche, ИТАЛИЯ

    Поступила: 10.08.2014; Одобрена: 9 декабря 2014 г .; Опубликовано: 3 февраля 2015 г.

    Авторские права: © 2015 Kabir et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

    Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах документ и вспомогательные информационные файлы к нему.

    Финансирование: Авторы не получали специального финансирования на эту работу.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

    Введение

    Beta vulgaris subsp. Цикла, также известная как мангольд, представляет собой листовой зеленый овощ с красным стеблем и широко употребляется во всем мире. В Турции он традиционно используется в качестве антигипергликемической пищевой добавки [1]. Нутритивная терапия - важная часть обучения самоконтролю при диабете.Основная цель обучения самоконтролю при диабете - снизить частоту различных диабетических осложнений, свести к минимуму заболеваемость и снизить общую стоимость лечения [2]. Однако конкретных доказательств в отношении этого немного, и распространены неправильные представления об этом методе лечения диабета среди пациентов [3]. Исследования, проведенные Bolken et al (2000), показали увеличение количества β-клеток у диабетических крыс при введении B. vulgaris. Другими важными наблюдениями, сделанными в этом исследовании, были увеличение количества секреторных гранул, гранул низкой плотности и гипертрофических телец Гольджи.В целом, исследование предсказало возможную регенерирующую способность β-клеток у B. vulgaris [4]. Антигипергликемическая активность B. vulgaris была продемонстрирована и на кроликах с диабетом [1]. Гистологические исследования, анализ мочевины и креатинина в сыворотке крови крыс с диабетом, получавших B. vulgaris , также показали значительную нефрозащитную активность этого растительного экстракта [5]. Биохимические исследования функций печеночных ферментов подтвердили значительную защиту печени крыс с диабетом [4].Кроме того, исследователи показали, что B. vulgaris может помочь замедлить начало различных глазных осложнений, обычных у пациентов с диабетом [6]. B. vulgaris также продемонстрировал очень многообещающий антиоксидантный эффект в исследованиях на крысах с диабетом. Исследование показало обратное увеличение перекисного окисления липидов и снижение уровня глутатиона в аорте и сердечных тканях крыс с диабетом [7]. Другие исследования подтвердили этот вывод, изучая антиоксидантные свойства этого растения [8].Из этой совокупности доступной литературы мы проявили особый интерес к работам ŞBolken et al (2000). Авторы этой статьи сделали вывод о потенциальной регенерации β-клеток за антигипергликемической активностью B. vulgaris . Однако они не смогли дать какой-либо точки зрения на увеличенное количество секреторных везикул, наблюдаемое в группе, получавшей экстракт. Широко известно, что экстракты растений часто содержат большое количество углеводов, которые в конечном итоге перевариваются до глюкозы, следовательно, могут быть основным стимулом для секреции инсулина.Таким образом, наше исследование было разработано для выявления стимуляторов, не связанных с глюкозой, которые могут быть ответственны за любое наблюдаемое повышение уровня секреции инсулина. Для этого исследования мы выбрали в общей сложности 10 гормонов, исходя из их установленного значения для секреции инсулина. Адреналин, норэнефрин, ацетилхолин, желудочный ингибирующий пептид (GIP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1), гипофизарный аденилатциклаза-активирующий пептид (PACAP), инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1). 1), полипептиды поджелудочной железы (PP) и соматостатин анализировали в сочетании с соответствующими уровнями инсулина в плазме in vivo.Было обнаружено, что среди всех вышеперечисленных гормонов уровни ацетилхолина и GLP-1 в плазме повышены у мышей, которым вводили B. vulgaris. Чтобы полностью подтвердить роль этих двух гормонов в влиянии экстракта на высвобождение инсулина, мы ввели B. vulgaris в сочетании с соответствующими фармакологическими ингибиторами, усилителями и антагонистами ацетилхолина и GLP-1 для изменения их уровней в плазме или для устранения их эффекта. . Полученный инсулин в плазме наблюдали после каждого вмешательства.Мы воспроизвели ту же концентрацию ацетилхолина и GLP-1 in-vivo in-vitro и экспонировали островки мышей, выделенные из мышей, предварительно обработанных B. vulgaris , для наблюдения за тем, соответствует ли концентрация ацетилхолина и GLP-1, наблюдаемая in vivo способен активировать каскад высвобождения инсулина in vitro. Вторая часть этой статьи заключалась в наблюдении за поглощением глюкозы и определении судьбы этой глюкозы. Были определены связанные с мембраной переносчики GLUT-1, GLUT-4 и глюкозо-6-фосфат.Активность гексокиназы II и активность гликогенсинтазы определяли вместе с гликогеном, депонированным в скелетных мышцах.

    Материалы и методы

    1. Сбор и переработка растений

    B. vulgaris (целое растение) было закуплено в Университетском центре аюрведических исследований (UARC), Джахангирнагарском университете, Дакка, Бангладеш. Идентичность растительного материала была подтверждена ботаником, а образец ваучера был депонирован в Национальный гербарий в Мирпуре, Дакка, Бангладеш.Растительный материал промывали проточной водопроводной водой, сушили на воздухе в печи при 40 ° C и измельчали ​​до мелкого порошка. 500 г порошка добавляли к 5 л этанола и перемешивали с помощью орбитального шейкера (550 об / мин в течение 48 часов). Смесь растительного этанола фильтровали с использованием тонкого муслина для удаления крупных нерастворимых частиц. Центрифугирование (1500 об / мин в течение 10 минут) помогло осаждать более мелкие частицы. Супернатант отбирали пипеткой и повторно фильтровали, используя фильтровальную бумагу Whatman. Фильтрат концентрировали с использованием аппарата Сокслета (ElectrothermalSoxhlet extractor, Великобритания).Этот концентрат оставляли в холодильнике на 7 дней для удаления влаги и превращения его в липкую массу. Затем эту массу фракционировали по методу, описанному Hannan et al. [9]. Затем этанольный экстракт распределяли между н-гексаном и водой. Фракцию н-гексана отделяли и сушили вымораживанием. Водный слой собирали для дальнейшей обработки. Далее слой разделяли сначала хлороформом, затем этилацетатом и, наконец, 1-бутанолом. Органические фракции отделяли и каждый раз индивидуально сушили вымораживанием.Остаточную водную фракцию конденсировали на роторном испарителе и, наконец, сушили вымораживанием. Сушка вымораживанием проводилась при -55 ° C с получением мелкодисперсного порошка. Порошкообразные экстракты всех различных фракций хранили в пакетах с застежкой-молнией вместе с пакетиками силикагеля (осушитель) до дальнейшего использования.

    2. Работа с животными

    Мышей с диабетом 2 типа (тип db / db) были приобретены в Harlan Laboratories (США) и выращены в птичнике Департамента фармацевтических наук Университета Северного Юга.Вес мышей составлял около 27 ± 2 г (24,7–28,9 г). Все подопытные животные содержались в зоопарке Университета Северного и Южного при температуре окружающей среды 22 ± 5 ° C и влажности 50–70%. 12-часовой цикл день-ночь поддерживался, чтобы избежать колебаний циркадного ритма. Стандартные гранулы и фильтрованная питьевая вода предоставлялись подопытным животным ad libitum в течение всего эксперимента, за исключением периода голодания перед определенными испытаниями. Во время голодания давали только воду. В течение большей части экспериментального периода мышей содержали поодиночке в полупрозрачных пластиковых клетках со стерилизованной деревянной стружкой в ​​качестве подстилки.Голодных животных помещали в клетки с решетчатым дном без подстилки для предотвращения образования тел. Мыши были помечены идентификатором I.D. номер, который был введен в компьютерную программу. Это произвольно распределило по 10 мышей в каждую группу. Смотритель птичника отвечал за введение испытуемых соединений животным. Группам были присвоены номера случайным образом, и исследователи не знали о лекарственном статусе животных в каждом боксе до завершения анализа данных.Многие предыдущие исследования Beta Vulgaris проводились в дозах до 2000 мг / кг, и в этой дозе были нетоксичны [1,4,6]. В нашем хроническом скрининге in vivo (кормление один раз в день в течение 8 недель) только водная фракция показала антигипергликемическую активность и была выбрана для этого исследования. Минимальная доза, необходимая для этой деятельности, составляла 50 мг / кг (неопубликованные данные). Множественные факторы (100 мг / кг, 200 мг / кг и 400 мг / кг) этой дозы использовались для дозозависимого исследования. Поскольку было обнаружено, что как дозы 200 мг / кг, так и дозы 400 мг / кг проявляют активность, мы выбрали дозу 200 мг / кг для нашего исследования механизма.Эта активность достигла пика через 30 минут, следовательно, была определена как оптимальная временная точка для наших последующих гормональных анализов. Процедуру повторяли на новой группе мышей после 8 недель введения B. Vulgaris , после чего определяли различные гормоны крови и соответствующие уровни инсулина. Было обнаружено, что уровни ацетилхолина и GLP-1 увеличиваются с соответствующим повышением уровня инсулина в плазме, и были выбраны для наших последующих механистических исследований. Все остальные гормоны были исключены из нашего исследования после этого момента.Свежей партии мышей повторно вводили B. Vulgaris в течение еще 8 недель, в конце которых мышам вводили последнюю дозу B. Vulgaris (200 мг / кг) вместе с фармакологическими ингибиторами, усилителями или антагонистами. ацетилхолина и GLP-1. Затем определяли уровни этих двух гормонов в плазме вместе с уровнями инсулина в плазме. Одновременно другую партию мышей обрабатывали B. Vulgaris вместе с контрольной группой в течение 8 недель, после чего мышей умерщвляли и собирали их островки.

    3. Заявление об этике

    Разработанный протокол эксперимента был одобрен Комитетом по этике исследований на животных Университета Северного Юга. Он был разработан в соответствии с «Пересмотренным руководством Американского физиологического общества по уходу и использованию лабораторных животных» [10]. На протяжении экспериментов со всеми животными обращались гуманно, и были предприняты максимальные меры для минимизации боли у экспериментальных животных. Все хирургические вмешательства проводились под анестезией пентобарбитоном натрия.Поддержание анестезии постоянно контролировалось с интервалом в 15 минут с помощью «защемления пальца ноги». В конце эксперимента животных умерщвляли передозировкой ксилазина и кетамина.

    4. Острое влияние водной фракции B. vulgaris

    на гомеостаз глюкозы и секрецию инсулина (исследования OGTT)

    Пероральный тест на толерантность к глюкозе (OGTT) был проведен после 8 недель введения B. vulgaris , как описано ранее [11]. Вкратце, после назначенного периода голодания животных анестезировали внутрибрюшинной инъекцией (100 мг / кг) пентобарбитона натрия (Therapon, Burwood, Виктория, Австралия) и катетером из силиката, заполненным гепаринизированным физиологическим раствором (20 Ед / мл). был вставлен в левую сонную артерию.Мышам также была выполнена трахеотомия для облегчения дыхания. Болюс глюкозы вводился в желудок с помощью иглы для желудочного зонда (калибр 20, длина изогнутой 38 мм, с шариковым концом 21/4 мм; Able Scientific, Canning Vale, Западная Австралия, Австралия) и 200 мкл крови было взяты пробы через 0, 30, 60, 90 и 120 минут для анализа глюкозы в плазме и инсулина. Кровь немедленно центрифугировали, плазму отделяли и хранили при -20 ° C до анализа. Эритроциты ресуспендировали в равном объеме гепаринизированного физиологического раствора и повторно вливали животному через сонную артерию перед взятием следующего образца крови для предотвращения анемического шока.Уровни глюкозы в крови анализировали методом GOD-PAP [12] (набор глюкозы, Randox, Великобритания), а уровни инсулина в плазме определяли с помощью набора Mice Insulin ELISA Kit (Crystal Chem, США)

    .

    5. Сбор крови, подготовка плазмы и биохимический анализ различных параметров плазмы

    После исследований OGTT была определена временная точка максимальной секреции инсулина и измерены уровни различных эндогенных гормонов, секретирующих или ингибирующих инсулин. В текущем исследовании уровень инсулина в плазме был самым высоким через 30 минут после введения экстракта и, следовательно, был выбран в качестве временной точки измерения для дальнейших анализов in vivo.На этом этапе были повторно измерены уровни инсулина в плазме, чтобы получить взаимосвязь инсулина с другими гормональными уровнями. Гормоны, у которых не наблюдалось повышения уровня при лечении B. Vulgaris , в дальнейшем не исследовались. В то время как те гормоны, уровень которых в плазме повышался в соответствии с повышением инсулина, дополнительно анализировали с использованием множества положительных и отрицательных контролей, фармакологических усилителей, ингибиторов или антагонистов гормонов. Это вмешательство помогло нам полностью подтвердить роль этих гормонов и нарисовать механистическую картину антигипергликемической активности B.vulgaris . Количественная оценка всех биохимических параметров в этом разделе проводилась с использованием методов колориметрии, ELISA или EIA в соответствии с инструкциями производителя, прилагаемыми к набору. Уровни инсулина в плазме измеряли с помощью набора ELISA для сверхчувствительных мышей (Crystal Chem, США). Уровни ацетилхолина в плазме определяли с помощью колориметрического набора для количественного определения холина / ацетилхолина (Abcam, США). Адреналин в плазме измеряли с помощью набора для ELISA на адреналин (Abnova, Тайвань). Плазменный норадреналин анализировали с использованием набора для анализа норадреналина ELISA (Eagle Biosciences Inc.США). GIP в плазме анализировали с использованием набора для анализа GIP ELISA (Total) крысы / мыши (EMD Millipore, США). VIP в плазме анализировали с использованием набора для анализа VIP ELISA (USCN Life Sciences Inc, Китай). PACAP в плазме анализировали с использованием набора для анализа мышиного PACAP ELISA (MyBioSourceInc. США). Плазменный IFG-1 анализировали с использованием набора для анализа ELISA на мышиной IGF-1 (Sigma Aldrich, США). Плазменный полипептид поджелудочной железы анализировали с использованием набора для анализа мышиного полипептида поджелудочной железы ELISA (MyBioSourceInc. США). Соматостатин в плазме анализировали с использованием набора для анализа Somatostatin EIA (Phoenix Pharmaceutical Inc.США).

    6. Анализ для подтверждения роли опосредованного

    B. vulgaris увеличения ацетилхолина в усилении секреции инсулина после лечения B. vulgaris

    8 недель B. vulgaris мышей с диабетом, которых кормили, брали и не кормили в течение 24 часов перед следующей процедурой. Мышам вводили водную фракцию B.vulgaris в дозе 200 мг / кг отдельно или с различными антагонистами, ингибиторами и усилителем ацетилхолина. Эти фармакологические препараты вводили внутривенно за 30 минут до B.Администрация Vulgaris . Затем вводили глюкозную нагрузку (2,5 г / кг) вместе с B. vulgaris (200 мг / кг). Необработанная контрольная группа получала только носитель (вода; 10 мл / кг) во всех точках эксперимента. Атропин, общий антагонист мускариновых рецепторов, вводили внутривенно в дозе 0,1 мг / кг для наблюдения за ролью повышенного связывания ацетилхолина в высвобождении инсулина. Гемихолиний-3 (HCM-3), блокатор захвата холина, вводили внутривенно в дозе 0,1 мг / кг; таким образом подавляя лимитирующую стадию синтеза ацетилхолина, снижая уровень ацетилхолина в плазме.Везамикол (VML), ингибитор везикулярного транспорта ацетилхолина, вводили внутривенно в дозе 3,5 мг / кг, что, в свою очередь, уменьшало высвобождение ацетилхолина и уровни ацетилхолина в плазме. Физостигмин (PTM), обратимый ингибитор холинэстеразы, вводили внутривенно в дозе 0,5 мг / кг, тем самым подавляя распад ацетилхолина и повышая его уровень. Блокатор рецепторов и модуляторы ацетилхолина вместе с соответствующими уровнями инсулина помогают нам полностью установить роль повышенного ацетилхолина B.Vulgaris лечение секреции инсулина.

    7. Анализ для подтверждения роли опосредованного

    B. vulgaris увеличения GLP-1 в усилении секреции инсулина после лечения B. vulgaris

    GLP-1 определяли из того же образца плазмы, что и ранее (30 минут), с использованием набора GLP-1 EIA Kit (Sigma-Aldrich, США). Для дальнейшего подтверждения роли GLP-1 в опосредовании индуцированного B. Vulgaris высвобождения инсулина мы использовали эксендин 9-39 (Ext9), мощный антагонист рецептора GLP-1, в дозе 300 пмоль / кг / мин.Ext9 вводили через катетер в бедренную вену непрерывно в течение 30 минут, в то время как животные находились под анестезией пентобарбиталом натрия. Саксаглиптин (SxLn), ингибитор дипептидилпептидазы-4 (DPP-4), в дозе 10 мкмоль / л вводится перорально за 4 часа до нагрузки глюкозой и лечения B. Vulgaris .

    8. Препарирование изолированного островка

    Островки поджелудочной железы мышей выделяли путем расщепления коллагеназой, как ранее описано Ли и его коллегами [13].Раствор для переваривания готовили растворением коллагеназы XI в сбалансированном солевом растворе Хэнка (1000 ед. / Мл). Мышь была полностью анестезирована и умерщвлена ​​смещением шейки матки. Место расположения ампулы зажималось хирургическими зажимами на стенке двенадцатиперстной кишки, чтобы остановить путь желчи к двенадцатиперстной кишке. Поджелудочная железа была увеличена путем введения 3 мл переваривающего раствора через общий желчный проток. Затем его удалили и поместили в 50-миллилитровый флакон, содержащий 2 мл переваривающего раствора. Флакон помещали в водяную баню на 35 ° С.7 ° C в течение 15 минут и коротко встряхивают вручную два-три раза в течение периода инкубации. В конце инкубационного периода флаконы встряхивали вручную для разрушения поджелудочной железы до тех пор, пока суспензия не стала полностью гомогенной. Реакцию переваривания останавливали, помещая пробирку на лед и добавляя 25 мл CaCl 2 (1 мМ) буфера HBS (CAHBS). Затем его центрифугировали при 290 g в течение 30 с при 4 ° C и супернатант отбрасывали. Осадок ресуспендировали в 20 мл охлажденного льдом CAHBS.Этот процесс повторяли второй раз, чтобы полностью остановить переваривание, и полученный осадок повторно суспендировали с 15 мл CAHBS. Повторно суспендированный осадок выливали через предварительно смоченный фильтр для клеток размером 70 мкм. Флаконы промывали 20 мл CAHBS, чтобы гарантировать, что незначительное количество островков прилипло к стенке флакона. Еще 25 мл раствора CAHBS налили через фильтр. Сетчатый фильтр переворачивали над стерильной чашкой Петри и тщательно промывали питательной средой (глутамин-L 20 мМ, пенициллин 100 ед / мл, стрептомицин 100 мкл / мл, 10% буфер FSB в среде RPMI 1640) для захвата островков.Островки собирали вручную с помощью пипетки с широким наконечником, подсчитывали и помещали в инкубатор с 5% CO 2 при 37 ° C.

    9. Анализ пути активации секреции инсулина, опосредованной ацетилхолином

    Ацетилхолин-опосредованный секреторный путь инсулина задействует множество клеточных сигнальных молекул, наиболее известными из которых являются фосфолипаза C (PLC), диацеилглицерин (DAG) и протеинкиназа C-alpha (PKC-α) [14]. В текущем исследовании мы инкубировали ранее изолированные островки (25 островков на группу) из B.Vulgaris , обработанные и необработанные мыши с наблюдаемыми концентрациями ацетилхолинина-vivo (обработанные: 198 пг / мл, необработанные: 123 пг / мл). Была приготовлена ​​третья партия островков из группы, обработанной B. Vulgaris , которую инкубировали с атропином вместе с концентрацией ацетилхолина in vivo, как было обнаружено ранее (обработанный BV + атропин: 189 пг / мл). Выделенные островки инкубировали в той же питательной среде, которая использовалась ранее (глутамин-L 20 мМ, пенициллин 100 мкл / мл, стрептомицин 100 мкл / мл, 10% буфер FSB в среде RPMI 1640).Островки инкубировали в инкубаторе CO 2 при концентрации 5% CO 2 при температуре 37 ° C в течение 30 минут. Жизнеспособность и однородность функции каждой партии изолированных островков обеспечивали путем определения секреции инсулина до эксперимента (2,9 ± 0,21 нг / мг островкового белка). В конце инкубационного периода островки гомогенизировали на льду, используя ручной стеклянный гомогенизатор. Гомогенаты немедленно анализировали на активность PLC, активность PKC-α и уровни DAG с использованием имеющихся в продаже наборов.Активность PLC определяли с помощью набора EnzChek Direct Phospholipase C Assay Kit (Invitrogen, США). Уровни DAG определяли количественно с использованием набора для ELISA Kit for Mouse DAG (Uscn Life Science Inc, Китай). Специфическую активность PKC-α анализировали с использованием набора для анализа протеинкиназы C. В анализе использовали субстрат, специфичный для PKC-α (Panvera, США). Сопутствующую секрецию инсулина в среде измеряли с помощью набора для ELISA Ultra Sensitive Mouse Insulin (CrystalChem, США).

    10. Анализ пути активации секреции инсулина, опосредованной GLP-1

    GLP-1-опосредованная секреция инсулина задействует ряд ключевых сигнальных молекул, наиболее важными из которых являются протеинкиназа A (PKA) и циклический аденозинмонофосфат (cAMP) [15].В текущем исследовании мы инкубировали ранее изолированные островки (25 островков на группу) от обработанных и необработанных мышей с концентрациями GLP-1, наблюдаемыми in vivo (обработанные: 21,4 пмоль / л, необработанные: 14,7 пмоль / л соответственно). Была приготовлена ​​третья партия островков из группы лечения, которую инкубировали с экстендином (9–39) (2 мкмоль / л) вместе с концентрацией GLP-1 in vivo, как было обнаружено ранее (BV + Extendin: 21,5 пмоль / л). . Выделенные островки инкубировали в той же питательной среде, что и ранее (глутамин-L 20 мМ, пенициллин 100 мкл / мл, стрептомицин 100 мкл / мл, 10% буфер FSB в среде RPMI 1640).Островки инкубировали в инкубаторе CO 2 при концентрации 5% CO 2 при температуре 37 ° C в течение 30 минут. Жизнеспособность и однородность функции каждой партии изолированных островков обеспечивали путем определения секреции инсулина перед экспериментом (2,97 ± 0,17 нг / мг островкового белка). В конце периода воздействия изолированные островки гомогенизировали на льду, используя ручной стеклянный гомогенизатор. Гомогенаты немедленно анализировали на активность PKA, уровень цАМФ и уровни инсулина с использованием имеющихся в продаже наборов.Активность PKA определяли с помощью набора для анализа активности PKA (Arbor Assays, США). Уровни цАМФ определяли с помощью набора для прямого иммуноанализа цАМФ (abcam, США). Сопутствующую секрецию инсулина в среде измеряли с помощью набора для ELISA Ultra Sensitive Mouse Insulin (CrystalChem, США).

    11. Сбор, гомогенизация и последующее приготовление общей фракции клеточных мембран из скелетных миоцитов мышей

    В конце 8-недельного периода исследования была введена последняя доза B. vulgaris .Через 30 минут подопытных животных умерщвляли путем смещения шейных позвонков, скелетные мышцы задней конечности удаляли и быстро отделяли от соединительных тканей. Мышцы отдельных мышей помещали в Трис-буфер (pH 7,4, 20 мМ Трис-основание, 0,05 М сахароза, 0,1 мМ ЭДТА, 5 мкг / мл лупептина, 5 мкг / мл апротинина, 1 мкг / мл пепстатина и 400 мкМ фенилметансульфонилфторида). 1 г ткани помещали в 5 мл трис-буфера. Общую мембранную фракцию готовили по методикам, описанным Klip et al.[16] с небольшими изменениями согласно Барону и его коллегам [17]. Короче говоря, рассеченная мышечная ткань была тонко гомогенизирована с использованием стеклянного гомогенизатора (пять импульсов по 5 секунд при настройке 5, а затем 10 движений тефлоновым пестиком вверх и вниз). Аликвоты гомогената немедленно анализировали на активность гексокиназы II, глюкозо-6-фосфат, активность гликогенсинтазы и содержание мышечного гликогена, а остаток дополнительно обрабатывали для получения мембранной фракции. Гомогенат центрифугировали при 1000 g в течение 10 минут и собирали супернатант.Полученный осадок ресуспендировали в Трис-буфере и повторно гомогенизировали с использованием того же прибора и метода, которые описаны ранее, и повторно центрифугировали при 1000 g в течение следующих 10 минут. Полученный осадок отбрасывали, а второй супернатант добавляли к первому супернатанту, тщательно встряхивали в течение 1 минуты и центрифугировали при 9000 g в течение 10 минут. Полученный супернатант, полученный в результате этого процесса, центрифугировали при 1

    g в течение 1 часа. Его отбрасывали, а осадок ресуспендировали, что составляло общую мембранную фракцию.Мембрану хранили при -80 ° C до дальнейшего анализа.

    12. Влияние

    B. vulgaris на содержание транспортеров GLUT1 и GLUT4 в мембранах скелетных миоцитов

    Предварительно подготовленную мембранную фракцию скелетных миоцитов мышей анализировали для определения количества прикрепленных к мембране рецепторов GLUT1 и GLUT4 в скелетных миоцитах. Связанные с мембраной переносчики GLUT1 и GLUT4 количественно определяли с использованием набора для ELISA, полученного от UScn Life Science Inc. (США), в соответствии с инструкциями производителя.

    13. Влияние

    B. vulgaris на активность гексокиназы II в скелетных миоцитах

    Активность гексокиназы II определяли из мышечного гомогената с помощью колориметрического анализа гексокиназы II (Sigma Aldrich, США). Активность определяли с помощью анализа сопряженных ферментов, в котором глюкоза превращалась в глюкозо-6-фосфат гексокиназой II. Впоследствии он окисляется глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой с образованием НАДН. Образующийся НАДН восстанавливает бесцветный зонд, образуя колориметрический продукт, пропорциональный присутствующей активности гексокиназы II, абсорбция которой происходит при 450 нм.

    14. Влияние

    B. vulgaris на содержание глюкозо-6-фосфата в скелетных миоцитах

    Глюкозо-6-фосфат из гомогената скелетных мышц определяли количественно в мышечных миоцитах с использованием набора для колориметрического анализа (Abcam, США). В этом анализе глюкозо-6-фосфат окисляли с образованием продукта, который превращает почти бесцветный зонд в колориметрически активный продукт, который показывает поглощение при 450 нм.

    15. Влияние

    B. vulgaris на активность фермента гликогенсинтазы

    Гомогенат мышц разводили в 300 раз и анализировали активность гликогенсинтазы в соответствии с методом, описанным Danfoth et al.[18]. Вкратце, реакционная смесь состояла из трис-буфера 50 мМ, MgCl 2 12,5 мм, 1 мМ ЭДТА, 2,5 мМ меркаптоэтанола, 0,75 мМ UDP-D-гукозы и 1% гликогена. Анализ проводили в присутствии 0,1 мМ и 10 мМ глюкозо-6-фосфата. Реакцию гасили нагреванием на термостатируемой кипящей водяной бане в течение 70 секунд. Это помогло денатурировать белки, которые впоследствии были удалены центрифугированием при 400 g. Супернатант собирали и анализировали на UDP. Это было сделано путем взаимодействия UDP с фосфенолпируватом в присутствии фермента пируваткиназы.Образовавшийся в результате пируват реагировал с DPNH в присутствии фермента лактатдегидрогеназы. ДПНГ постепенно исчезал, за чем наблюдали спектрофотометрически. Результаты выражали в нмоль / мин / мг белка экстракта.

    16. Влияние

    B. vulgaris на содержание гликогена в мышцах

    Около 15 мг мышечной ткани было собрано с левой задней ноги мышей. 10 мг мышечной ткани гомогенизировали вместе с 200 мкл H 2 O на льду.Гомогенат кипятили в течение 5 минут для инактивации всех ферментов. Вареные образцы центрифугировали при 13000 об / мин в течение 5 минут для удаления нерастворимых материалов; затем супернатант анализировали на гликоген с использованием колориметрического набора для анализа гликогена (Abcam, США) в соответствии с инструкцией. Фоновую глюкозу измеряли в отдельных лунках перед добавлением гидролитического буфера и вычитали из конечного значения.

    17. Статистический анализ

    Статистические тесты были проведены с использованием статистического пакета программного обеспечения для социальных наук (SPSS) вер.20 (IBM, Inc., Чикаго, Иллинойс, США). Результаты были представлены как среднее ± стандартное отклонение. Данные экспериментальных групп сравнивали с использованием непарного t-критерия Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни, если это необходимо. Эксперименты, в которых данные собирались через несколько интервалов времени, были проанализированы с использованием дисперсионного анализа с повторными измерениями с последующей корректировкой Бонферрони, обеспечивающей погрешность в пределах ≤5%. Был проведен однофакторный дисперсионный анализ и проведено попарное сравнение с контрольной группой с использованием критерия Даннета для поддержания допустимой погрешности 5%.Двустороннее значение P <0,05 считалось статистически значимым.

    Результат

    1. Острое влияние водной фракции B. vulgaris

    на гомеостаз глюкозы и секрецию инсулина (исследования OGTT)

    Все три дозы B. Vulgaris успешно поддерживали снижение уровня глюкозы в крови в течение самого конца периода эксперимента после первоначального острого перорального инсульта глюкозы (p <0,05). Максимальное снижение уровня глюкозы наблюдалось через 30 минут в B.Vulgaris обрабатывали группы, тогда как резкий рост продолжался в необработанной группе (рис. 1).

    Рисунок 1. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) уровень глюкозы в крови и B) уровень инсулина в плазме во время теста на толерантность к глюкозе у мышей db / db с диабетом.

    Значения представляют собой средние значения и стандартные отклонения (SD), представленные вертикальными полосами (n = 10). Натощак мышам перорально вводили водную фракцию B. Vulgaris (50 мг / кг, 100 мг / кг и 200 мг / кг массы тела) или носитель для контрольной группы (вода; 10 мл / кг) с глюкозой (2.5 г / кг массы тела). Средние значения, отмеченные звездочкой (*) или двумя (**), значительно отличались от значений в соответствующей контрольной группе при p <0,05 и p <0,01 соответственно. (Получено из дисперсионного анализа с повторными измерениями и скорректировано с использованием поправки Бонферрони).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g001

    Это падение уровня глюкозы в плазме было полностью оправдано соответствующим повышением уровня инсулина в крови в те же моменты времени с лечением три дозы B.Vulgaris (р <0,05). Максимальное высвобождение инсулина наблюдалось через 30 минут во всех группах, получавших B. Vulgaris (рис. 1).

    Интересно, что снижение уровня глюкозы и повышение уровня инсулина в группе, получавшей B. Vulgaris , были дозозависимыми. B. Vulgaris животных, получавших лечение (200 мг / кг), давали самое высокое снижение уровня глюкозы в крови и максимальное повышение уровня инсулина в крови через 30 минут (p <0,01) и в остальные периоды времени (p <0,05).

    2.Острое действие водной фракции B. vulgaris

    на различные гормоны, секретирующие или ингибирующие инсулин в состоянии стимуляции глюкозой

    Среди гормонов, проверенных в нашем исследовании, только уровни ацетилхолина и GLP-1 были значительно увеличены при лечении B. Vulgaris (200 мг / кг) через 30 минут после острой нагрузки глюкозой (p <0,05). Уровни ацетилхолина и GLP-1 увеличились на 55,91% и 45,58% соответственно (Таблица 1). Инсулин в плазме повысился на 237,28% от базального уровня (p <0.01).

    Другие параметры: адреналин, норэпинефрин, GIP, VIP, PACAP, IGF-1, панкреатический полипептид и соматостатин существенно не изменились.

    3. Подтверждение роли

    B. vulgaris , опосредованного повышенным содержанием ацетилхолина в усилении секреции инсулина при лечении B. vulgaris

    Подобно предыдущим экспериментам, в группе, обработанной B. Vulgaris , наблюдалось одновременное повышение уровней ацетилхолина (55,91%) и инсулина (237.28%) (p <0,05) (рис. 2 A&B).

    Рисунок 2. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) уровень ацетилхолина в плазме и B) связанный уровень инсулина в плазме в различных группах лечения мышей с диабетом db / db через 30 минут после введения глюкозной нагрузки.

    Значения представляют собой средние значения и стандартное отклонение (SD), представленные вертикальными полосами (n = 9). Голодным мышам перорально вводили водную фракцию B. Vulgaris (200 мг / кг) отдельно или с другими лекарствами, вводимыми внутривенно за 30 минут до B.Введение Vulgaris с нагрузкой глюкозой (2,5 г / кг массы тела). Необработанная группа получала только носитель (вода; 10 мл / кг). Атропин: антагонист мускариновых рецепторов; доза 0,1 мг / кг. HCM-3: гемихолиний-3, блокатор захвата холина; доза 0,1 мг / кг. VML: Vesamical, ингибитор везикулярного транспорта ацетилхолина; 3,5 мг / кг. ПТМ: физостигмин, обратимый ингибитор холинэстеразы; доза 0,5 мг / кг. Средние значения, отмеченные звездочкой (*), двумя (**) или тремя (***), были значительно выше значений контрольной группы с p <0.05 или p <0,01 или p <0,001 соответственно (получено из однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Даннета).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g002

    B. Vulgaris + группа, получавшая атропин, также испытала повышенный уровень ацетилхолина в аналогичной степени (53,66%; p <0,01), но сравнительно меньший всплеск уровня инсулина (80,70%; p <0,05) по сравнению с контролем (рис. 2 A&B).

    Гемихолиний-3 + B.Обработка Vulgaris уменьшала эффект B. Vulgaris на уровень ацетилхолина, выраженный снижением на 65,85% по сравнению с группой, не получавшей лечения (p <0,01). Было отмечено повышение уровня инсулина на 75% по сравнению с группой, не получавшей лечения (рис. 2 A и B).

    Везамикол + B. Vulgaris в группе, получавшей снижение уровня ацетилхолина в плазме на 52,03% по сравнению с группой, не получавшей лечения (p <0,05). Наблюдалось повышение уровня инсулина в плазме на 76,32% (p <0,05) (рис. 2 A и B).

    Physostigmine + B. Vulgaris , получавшая группу, показала значительное увеличение уровней ацетилхолина и инсулина (128,46% и 295,16% соответственно) по сравнению с группой, не получавшей лечения (p <0,01). Это увеличение было более интенсивным, чем в группе, получавшей только B. Vulgaris (рис. 2 A&B).

    4. Подтверждение роли

    B. vulgaris , опосредованного повышенным GLP-1, в усилении секреции инсулина при лечении B. vulgaris

    Б.Лечение Vulgaris вызывало значительное повышение уровня GLP-1 в плазме (45,58%, p <0,05) и уровня инсулина в плазме (237,28%, p <0,01) по сравнению с группой, не получавшей лечения (фиг. 3 A&B).

    Фигура 3. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) уровень GLP 1 в плазме и B) связанный уровень инсулина в плазме в различных группах лечения мышей с диабетом db / db через 30 минут после введения глюкозной нагрузки.

    Значения представляют собой средние значения и стандартное отклонение (SD), представленные вертикальными полосами (n = 10).Мышам, голодным, вводили перорально водную фракцию B. Vulgaris (200 мг / кг) отдельно или с другими лекарственными средствами вместе с нагрузкой глюкозой (2,5 г / кг массы тела). Необработанная группа получала только носитель (вода; 10 мл / кг).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g003

    Ext9: эксендин (9–39), антагонист рецептора GLP-1; доза 300 пмоль / кг / мин; вводили через катетер в бедренную вену непрерывно в течение 30 минут, пока животные находились под анестезией пентобарбиталом натрия.SxLn: саксаглиптин, ингибитор дипептидилпептидазы-4; доза 10 мкмоль / л; вводили перорально за 4 ч до нагрузки глюкозой и лечения B. Vulgaris .

    Средние значения, отмеченные звездочкой (*) или двумя (**), были значительно выше значений связанной контрольной группы с p <0,05 или p <0,01 соответственно (получено из однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Даннета).

    Совместное лечение B. Vulgaris + Extendin (9–39) дало аналогичное значительное повышение уровня GLP-1 (46.26%, р <0,05). Однако, в отличие от уровня GLP-1, уровень инсулина не был повышен до такой степени, как при индивидуальном лечении B. Vulgaris ; однако увеличение было значительным (56,58%, p <0,05) (рис. 3 A&B).

    Saxagliptin + B. Vulgaris лечение вызвало дальнейшее повышение как уровня GLP-1 (112,93%, p <0,05), так и уровня инсулина в плазме (327,19%, p <0,001) (рис. 3 A&B).

    5. Анализ активации пути

    B. Vulgaris индуцировал усиленную секрецию инсулина, опосредованную ацетилхолином

    Б.В партии островков, обработанных Vulgaris , наблюдалось повышение активности фосфолипазы C (PLC) на 122,92% по сравнению с контролем (p <0,05). Совместная обработка атропином + B. Vulgaris снижала рост и сохраняла активность PLC, аналогичную контролю (фиг. 4A).

    Рисунок 4. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) активность фосфолипазы C, B) уровень диацилглицерина (DAG), C) активность протеинкиназы C (PKC) и D) секрецию инсулина изолированными островками мыши. после 30 минут инкубации.

    Значения представляют собой средние значения и стандартное отклонение (SD), представленные вертикальными полосами (n = 4). Группы из 25-30 островков были изолированы от мышей с диабетом db / db после расщепления коллагеназой. Мышей кормили B. Vulgaris (200 мг / кг) в течение 8 недель перед процедурой выделения. Изолированные островки подвергали воздействию 5,6 мМ глюкозы в течение 60 минут для адаптации к исходной концентрации глюкозы. Затем они подвергались воздействию только 16,7 мМ глюкозы (необработанная группа), B. Vulgaris (50 мкг / мл) или B.Vulgaris (50 мкг / мл) + атропин (1 ммоль / л) в течение 30 минут. В то же время группы также подвергались воздействию ацетилхолина 123 пг / мл (необработанная группа), 198 пг / мл (группа, получавшая B. Vulgaris ) и 189 пг / мл ( B. Vulgaris + группа, получавшая атропин. ) (концентрация ацетилхолина, обнаруженная во время теста in vivo в ответ на различные виды лечения через 30 минут). После периода инкубации образцы собирали или островки обрабатывали ультразвуком, где это необходимо, и анализировали эквивалентное количество островкового белка.Значения, отмеченные звездочкой (*), были значительно выше значений контрольной группы с p <0,05 (получено из однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Даннета). В случае активности PLC мы определяем 1 единицу активности фермента как количество, которое переносит 1 мкмоль PI / мин.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g004

    Значительное повышение (89,57%) содержания островкового DAG наблюдалось в партии, обработанной B. Vulgaris (p <0,05). Совместное лечение атропином оказало меньшее влияние на B.Vulgaris индуцировал содержание DAG (фиг. 4B).

    Активность

    протеинкиназы C (PKC) увеличивалась на 91,40% при обработке B. Vulgaris (p <0,05). Однако совместная обработка атропином снижала усиление активности PKC на B. Vulgaris (фиг. 4C).

    Ожидаемое повышение (129,45%) секреции инсулина из островков наблюдалось в партии, обработанной B. Vulgaris , по сравнению с необработанной серией (p <0,05). Партия, совместно обработанная атропином, не показала каких-либо значительных изменений секреции инсулина по сравнению с необработанной серией (рис.4D).

    6. Анализ активации пути

    B. Vulgaris индуцировал усиленную секрецию инсулина, опосредованную GLP-1

    Обработка B. Vulgaris привела к увеличению содержания цАМФ на 1324,18% в соответствующей партии островков (p <0,01). Но совместное лечение с экстендином (9–39) отменило это увеличение (рис. 5А).

    Фигура 5. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) содержание цАМФ, B) активность протеинкиназы A (PKA) и C) секрецию инсулина изолированными островками мыши после 30-минутного инкубационного периода.

    Значения представляют собой средние значения и стандартное отклонение (SD), представленные вертикальными полосами (n = 4). Группы из 25-30 островков были изолированы от мышей с диабетом db / db после расщепления коллагеназой. Мышей кормили B. Vulgaris (200 мг / кг) в течение 8 недель перед процедурой выделения. Изолированные островки подвергались воздействию 5,6 мМ глюкозы в течение 60 минут для адаптации к исходной концентрации глюкозы. Затем они подвергались воздействию только 16,7 мМ глюкозы (необработанная группа) или B. Vulgaris (50 мкг / мл) или B.Vulgaris (50 мкг / мл) + Ext9 (Extendin 9–39) (2 мкмоль / л) в течение 30 минут. В то же время группы также подвергались воздействию GLP-1 14,7 пмоль / л (необработанная группа), 21,4 пмоль / л (группа, получавшая B. Vulgaris ) и 21,5 пмоль / л ( B. Vulgaris + Extension 9–39 обработанная группа) (концентрации GLP-1, обнаруженные во время теста in vivo в ответ на различные обработки через 30 минут). После периода инкубации образцы собирали или островки обрабатывали ультразвуком, где это необходимо, и анализировали эквивалентное количество островкового белка.Значения, отмеченные звездочкой (*) или двумя (**), были значительно выше значений контрольной группы с p <0,05 или p <0,01 соответственно (получено из однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Даннета).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g005

    Увеличение активности протеинкиназы A (PKA) на 192,17% наблюдалось в партии островков, обработанных B. Vulgaris (p <0,05) . Экстендин (9–39) + B. Vulgaris , совместно обработанный, не показал значимой разницы в активности (рис.5Б).

    Секреция инсулина из партии островков, обработанных B. Vulgaris , была увеличена по сравнению с необработанной партией на 152,6% (p <0,05). На островках, совместно обработанных B. Vulgaris + Extendin (9–39), наблюдалось повышение уровня инсулина, однако повышение не было значительным (рис. 5C).

    7. Влияние

    B. vulgaris на содержание транспортеров GLUT1 и GLUT4 в мембранах скелетных миоцитов

    Количество прикрепленного к мембране транспортера GLUT1 не было существенно изменено в скелетных миоцитах B.Группа, обработанная Vulgaris (фиг. 6A). Интересно, что количество GLUT4 значительно увеличилось в группе, получавшей B. Vulgaris , по сравнению с группой, не получавшей лечения (277,60%, p <0,05) (фиг. 6B).

    Рисунок 6. Влияние водной фракции Beta vulgaris (BV) на A) уровень GLUT 1 и B) уровень GLUT 4 в скелетных гладких мышцах мембраны, C) активность гексокиназы II, D) глюкозо-6-фосфат (g- 6-P) содержание, E) активность гликоген-синтазы и F) содержание гликогена в гладких мышцах скелета в различных группах лечения мышей с диабетом db / db через 1 час после введения глюкозной нагрузки.

    Значения представляют собой средние значения и стандартное отклонение (SD), представленные вертикальными полосами (n = 8). Натощак мышам перорально вводили водную фракцию B. Vulgaris (200 мг / кг) или носитель (вода; 10 мл / кг) вместе с нагрузкой глюкозой (2,5 г / кг веса тела) за 1 час до образования гладкомышечной мембраны и гладкой мускулатуры. мышцы собирали и обрабатывали, как описано в разделе «Материалы и методы» для анализа. Средние значения, отмеченные звездочкой (*), были значительно выше значений связанной контрольной группы с p <0.05 (получено из t-критерия Стьюдента).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0116546.g006

    8. Влияние

    B. vulgaris на активность гексокиназы II, содержание глюкозо-6-фосфата и активность гликогенсинтазы в скелетных миоцитах Активность

    гексокиназы II увеличилась в скелетных миоцитах группы B. Vulgaris ; однако это не было значительным (рис. 6C).

    Содержание глюкозо-6-фосфата значительно увеличилось на 71.67% в группе, получавшей B. Vulgaris , по сравнению с группой, не получавшей лечения, после 8-недельного периода лечения (p <0,05) (фиг. 6D).

    Значительно повышенная активность гликогенсинтазы была обнаружена в группе, получавшей B. Vulgaris , после 8-недельного периода лечения, когда ее стимулировали 10 мМ G-6-P (56,23%, p <0,05). Однако не наблюдалось значительных изменений в присутствии 0,1 мМ G-6-P (фиг. 6E).

    9. Влияние

    B. vulgaris на содержание гликогена в мышцах

    8-недельное лечение препаратом B.Vulgaris привел к значительному увеличению количества мышечного гликогена по сравнению с необработанной группой (97,09%, p <0,05) (фиг. 6F).

    Обсуждение

    Секреция инсулина может происходить из-за глюкозных или не глюкозных стимулов. Горючими стимулами являются глюкоза, свободные жирные кислоты, триглицериды и т. Д., А не топливными стимулами - гормоны, такие как ацетилхолин, GLP-1, адреналин и т. Д. [14,19–23]. Целью настоящего исследования было дальнейшее изучение возможного антигипергликемического действия B.vulgaris и раскрыть лежащие в его основе молекулярные механизмы. Пероральный тест на толерантность к глюкозе (OGTT), проведенный на мышах с диабетом, предоставил нам конкретную основу для наших последующих исследований. Было замечено, что мыши, обработанные B. Vulgaris , были более толерантными к пероральным пробам глюкозы, демонстрируя антигипергликемическую активность экстракта растений. Наше исследование подтверждает предыдущие результаты, которые также продемонстрировали успешное уменьшение диабетической гипергликемии [1,4]. Примечательно, что никакие другие фракции, кроме водной B.Фракция Vulgaris показала значительную активность. Водная фракция оказалась активной при гораздо более низкой дозе 50 мг / кг. Предыдущие исследования в основном проводились при гораздо более высокой дозе 2000 мг / кг. Таким образом, мы можем сделать вывод, что водная фракция B. Vulgaris , вероятно, содержит активные компоненты, ответственные за антигипергликемическую активность, и может быть дополнительно проанализирована для обнаружения биоактивных молекул. Однако ни одно из вышеперечисленных исследований не пыталось провести механистическое исследование своих предварительных наблюдений.Исследователи ясно показали заметную взаимосвязь между диабетической гипергликемией и различными микрососудистыми и макрососудистыми осложнениями, ретинопатией, невропатией, нефропатией, гипертонией, окислительным стрессом и т. Д. [24–29]. Исследователи обнаружили, что пациенты с гипергликемией, госпитализированные в больницы с общим осложнением здоровья или особыми патологическими состояниями, такими как инсульт или инфаркт миокарда, имеют более высокий уровень смертности [30]. Поэтому большое клиническое значение имеет поддержание концентрации глюкозы в плазме около исходного уровня [31].Несмотря на то, что существуют многочисленные антигипергликемические средства для контроля гликемических всплесков у пациентов с диабетом, они дороги, обычно требуют пожизненного режима лечения и плохо интегрируются с образом жизни пациентов [32–34]. В результате, возможно, диабетическая диетотерапия заняла достойное место в лечении диабета [2,3,35].

    Настоящее исследование добавляет новое измерение в гликемическое исследование B. vulgaris в том отношении, что большинство предыдущих исследователей использовали модель индуцированного стрептозотоцином или аллоксаном 1 типа [1,4], которая оказывала пагубное влияние на поджелудочную железу [36]. ].Следовательно, ранее использованные модели не позволили нам наблюдать какую-либо возможную инсулинотропную активность, которую лечение B. vulgaris может иметь при диабетических состояниях 2 типа. Во время перорального теста на толерантность к глюкозе мы наблюдали, что уровень инсулина в плазме значительно выше у мышей, получавших B. vulgaris , по сравнению с контрольной группой. Таким образом, мы можем частично связать наблюдаемый антигипергликемический эффект с активностью стимулятора секреции инсулина B. vulgaris .Повышенный уровень инсулина в плазме может исправить гипергликемию не только у пациентов с диабетом 1 типа, но и у пациентов с диабетом 2 типа [37]. Таким образом, текущие результаты придают важное клиническое значение пациентам с диабетом 2 типа. Однако основная цель настоящего исследования состояла в том, чтобы продемонстрировать вероятный механизм секреции инсулина при введении B. vulgaris .

    Для того, чтобы выявить любой возможный гормон, который может отвечать за секрецию инсулина. Мы исследовали уровни адреналина, норэнефрина, ацетилхолина, GIP, VIP, GLP-1, PACAP, IGF-1, PP и соматостатинина в плазме в сочетании с соответствующими уровнями инсулина в плазме in vivo.В начальных скрининговых тестах мы обнаружили заметное повышение уровней ацетилхолина и GLP-1 в плазме наряду с одновременным повышением уровня инсулина в плазме в группе, получавшей B. vulgaris . Уровень инсулина достиг максимума через 30 минут после последнего введения экстракта. Уровни других гормонов в плазме оставались в основном неизменными в разных группах, и поэтому были исключены из исследования после этого момента. Ранее исследователи продемонстрировали, что повышение уровня ацетилхолина в плазме или GLP-1 стимулирует усиленную секрецию инсулина [38–41].Известно, что ацетилхолин инициирует основной молекулярный каскад в секреторном пути инсулина [42]. GLP-1, с другой стороны, активно разрабатывается как потенциальное лекарство для пациентов с диабетом [43–45]. Таким образом, наши предварительные результаты подтверждают установленную положительную корреляцию между инсулином, ацетилхолином и GLP-1. Это также дает нам первое представление о механизме, посредством которого B. vulgaris может инициировать высвобождение инсулина. Чтобы дополнительно подтвердить роль ацетилхолина и GLP-1 в секреции инсулина, мы обрабатывали группы подопытных животных ингибиторами, антагонистами или усилителями этих двух эндогенных веществ.Четырем отдельным группам, получавшим B. Vulgaris , вводили атропин (антагонист ацетилхолиновых рецепторов), гемихолиний-3 (ингибитор захвата холина), везамикол (ингибитор везикулярного транспорта ацетилхолина) и физостигмин (ингибитор ацетилхолинэстеразы). Гемихолиний и везамикол снижали уровни ацетилхолина в группе, получавшей B. vulgaris , в то время как введение физостигмина увеличивало уровни ацетилхолина в плазме даже выше, чем в группе, получавшей B.Только vulgaris . У мышей, получавших гемихолиний и везамикол вместе с B. Vulgaris , наблюдалось последовательное снижение уровней ацетилхолина и инсулина. У мышей, которым вводили физостигмин, наблюдалось четырехкратное увеличение инсулина в плазме, самое высокое среди всех групп, что можно отнести к максимальному уровню ацетилхолина в плазме. У мышей, которым вводили атропин, несмотря на высокий уровень ацетилхолина в плазме, не наблюдалось повышения уровня инсулина в плазме, вероятно, из-за блокировки холинергических рецепторов, ответственных за активацию пути секреции инсулина.Это показало, что B. Vulgaris увеличивает уровень ацетилхолина, что, в свою очередь, увеличивает уровень инсулина в плазме.

    GLP-1, инсулинотропный гормон, также продемонстрировал рост в нашем предварительном скрининге, поэтому он был признан нашим вторым кандидатом для дальнейшего анализа. Группам мышей совместно вводили B. vulgaris вместе с саксаглиптином (селективный ингибитор фермента, разрушающего GLP-1, DPP4) и экстендин (9–39) (антагонист рецептора GLP-1). Саксаглиптин уменьшал деградацию GLP-1 в плазме и, таким образом, увеличивал уровень GLP-1 в плазме, в то время как Extendin антагонировал активность GLP-1.После совместного введения саксаглиптина и B. vulgaris уровень GLP-1 был повышен в наибольшей степени. Это, в свою очередь, увеличивало уровни инсулина в плазме. С другой стороны, B. vulgaris , вводимый совместно с Экстендином, хотя и сохранял повышенный уровень GLP-1 в плазме, показал заметное снижение секреции инсулина, что позволяет нам сделать вывод, что антагонизм рецептора GLP-1 может быть ответственным за наблюдаемый снижение. При лечении B. vulgaris только у подопытных животных с диабетом наблюдалось примерно трехкратное увеличение уровней инсулина в плазме.

    Когда B. vulgaris вводили по отдельности мышам с диабетом, это приводило к более чем 3-кратному увеличению уровня инсулина в плазме. Исключение GLP-1 или ацетилхолина из уравнения с использованием вышеупомянутых антагонистов и ингибиторов снизило высвобождение инсулина только в 1,5 раза по сравнению с исходным уровнем. Половина первоначально наблюдаемого количества инсулина все еще секретировалась либо в результате блокирования GLP-1, либо ацетилхолина. Исходя из этих результатов, мы можем предположить, что роль обоих этих гормонов была примерно одинаковой в B.vulgaris опосредует секрецию инсулина.

    В наших исследованиях изолированных островков мы инкубировали островки в питательной среде вместе с ацетилхолином и GLP-1 в тех же концентрациях, которые наблюдались in vivo в группах, обработанных B. vulgaris , и в контрольной группе. Целью этих экспериментов было убедиться, что наблюдаемые уровни ацетилхолина и GLP-1 в плазме способны активировать каскадные реакции секреции инсулина. Были приготовлены отдельные идентичные партии островков с добавлением атропина (антагонист холинергических рецепторов) и экстендина (антагонист рецептора GLP-1) в качестве групп отрицательного контроля.Островки, инкубированные при физиологических концентрациях ацетилхолина у мышей, обработанных B. vulgaris , показали значительное повышение PLC, активности PKC-α и уровней DAG, наряду с повышенным высвобождением инсулина после 30 минут инкубации. Таким образом, наши результаты позволяют сделать вывод, что индуцированный ацетилхолином путь высвобождения инсулина, как было предложено Prentki et al и Zawawalich et al, был активирован наблюдаемым увеличением физиологического ацетилхолина при обработке B. vulgaris [14]. Напротив, в партиях контроля и отрицательного контроля (холостые и с добавлением атропина) эти сигнальные молекулы оставались на своих базальных уровнях.Эти результаты недвусмысленно подтвердили, что наблюдаемые физиологические уровни ацетилхолина после лечения B. vulgaris действительно способны инициировать ранее предложенный, опосредованный ацетилхолином, путь секреции инсулина.

    Первичным эффектором секреции инсулина, индуцированной GLP-1, является цАМФ, и цАМФ опосредует его инсулинотропный эффект через PKA-зависимое фосфорилирование нижестоящих мишеней [15]. Следовательно, повышенные уровни цАМФ и активность ПКА при воздействии на физиологические уровни (в B.vulgaris ) GLP-1 может указывать на активацию опосредованного GLP-1 пути секреции инсулина. Было обнаружено, что партии контроля и отрицательного контроля обладают базальной активностью PKA, уровнями цАМФ и инсулина. В то время как партия, инкубированная только с GLP-1, показала значительно повышенные уровни вышеупомянутых молекул. Поскольку концентрация GLP-1, используемая в экспериментах с островками, была такой же, как наблюдаемая у животных, получавших B. vulgaris , мы можем заключить, что эта концентрация достаточна для активации пути секреции инсулина, опосредованного GLP-1.Повышенный уровень GLP-1 может также придавать дополнительный эффект снижения апоптоза и увеличения пролиферации β-клеток поджелудочной железы, как ранее было установлено Wang et al. Исследование, проведенное на клеточной линии INS-1, показало, что этот эффект опосредуется протеинкиназой B [46]. Хотя нет уверенности в том, что выводы Ванга о клеточных линиях инсулиномы INS-1 останутся верными в нашей модели in vivo, его результаты заставляют нас задуматься, можно ли повторить такие наблюдения и in vivo. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования для проведения подробного гистологического исследования поджелудочной железы мышей для наблюдения за морфологией клеток и относительной склонностью к апоптозу или пролиферации, как указано выше.

    Повышенное периферическое поглощение глюкозы печенью и скелетными миоцитами является ключевой мишенью для управления постпрандиальными скачками гликемии, особенно при сахарном диабете 2 типа [47]. В текущем исследовании мы решили наблюдать за удалением глюкозы в скелетных миоцитах, потому что большая часть глюкозы сбрасывается в миоциты, и основным путем поступления глюкозы в эти клетки являются транспортеры GLUT1 и GLUT4 [48–52]. Исследователи также обнаружили, что уровни белков-переносчиков глюкозы сильно коррелируют с индуцированным инсулином удалением глюкозы у людей [53].В настоящем исследовании мы количественно определили прикрепленные к мембране переносчики GLUT1 и GLUT4 из-за их особого количества в клетках скелетных мышц. После этого следовали анализ активности гексокиназы II, уровней глюкозо-6-фосфата, активности гликогенсинтазы и содержания гликогена в гомогенизированных образцах мышц. Результаты нашего исследования показали повышение уровней мембраносвязанного переносчика GLUT4, в то время как уровни GLUT1 остались неизменными после лечения B.vulgaris. Повышенные уровни мембраносвязанных переносчиков GLUT4 объясняют повышенное количество глюкозо-6-фосфата в мышечных клетках, при этом активность мышечной гексокиназы II остается на исходном уровне.Это приводит нас к выводу, что увеличенный переносчик GLUT4 является преимущественно ответственным переносчиком большей части повышенного поглощения глюкозы. Глюкоза, поступающая в скелетные миоциты, быстро фосфорилируется до глюкозо-6-фосфата, который является важным сырьем для синтеза гликогена. Он также помогает увеличить активность фермента гликоген-синтазы за счет аллостерического связывания с ним [54]. Следовательно, повышение его уровня можно рассматривать как предвестник повышенного образования гликогена в мышцах.Последующие анализы показали повышение уровня мышечного гликогена, что может быть логически связано с повышенной активностью фермента гликогенсинтазы, что подтверждает нашу первоначальную гипотезу. Текущее исследование, однако, ограничено в определении деталей передачи сигналов инсулина B. vulgaris по фосфорилированию инсулинового рецептора, фосфорилированию субстрата инсулинового рецептора, активации протеинкиназ B и C в тканях-мишенях. B. vulgaris может изменять любой из вышеупомянутых параметров, тем самым значительно повышая чувствительность к инсулину органов-мишеней, а именно печени и скелетных мышц.Дальнейшие исследования будут неоценимы для определения того, как повышенная секреция инсулина улучшает общую чувствительность организма к инсулину.

    Заключение

    Основные выводы, которые можно сделать из этого исследования, следующие:

    1. Водная фракция этанольного экстракта B. Vulgaris - единственная активная фракция, обладающая сильной антигипергликемической активностью (активна всего лишь при 50 мг / кг).
    2. Противогипергликемическая активность B.vulgaris частично опосредован инсулином и частично из-за улучшенного удаления глюкозы в скелетных миоцитах.
    3. B. vulgaris , индуцированное усиление секреции инсулина, стимулированной глюкозой, опосредуется повышением уровня ацетилхолина в плазме и уровня GLP-1. Концентрации ацетилхолина и GLP-1 in vivo способны инициировать каскадную реакцию секреции инсулина in vitro.
    4. B. vulgaris , индуцированное усиленное удаление глюкозы в скелетных миоцитах, связано с увеличением количества прикрепленных к плазматической мембране транспортеров GLUT4.Поглощенная глюкоза быстро превращается в гликоген из-за повышенной активности гликогенсинтазы у мышей, получавших B. vulgaris .

    Благодарности

    Авторы хотели бы выразить свою сердечную благодарность г-же Нинад Малрина Д’Коста, г-же Джунаиде Халеке, г-ну Пандею и г-ну Садрулу за их неустанную поддержку этой работы. Мы хотели бы выразить нашу особую благодарность доктору Хасану Махмуду Резе, председателю кафедры фармацевтических наук Университета Север-Юг за то, что благодаря его мудрым советам эта работа стала возможной.

    Вклад авторов

    Проведен первичный обзор литературы: AUK MBS. Проведенные эксперименты: АУК МБС JMAH. В проведении экспериментов участвовали: AA MRJ FA JT SMNH SSS. Проведен анализ данных: АУК. Оформление рукописи: МБС. Отредактированная предварительная рукопись: AUK AA MRJ FA JT SMNH SSS JMAH. Критически переработанная рукопись: МБС. Осуществлял общее наблюдение, координировал все экспериментальные действия и первоначально одобрил протоколы экспериментов: JMAH.

    Список литературы

    1. 1.Янарда Р., Чолак Х (1998) Эффект мангольда (Beta vulgaris L. var. Cicla) на уровень глюкозы в крови у нормальных и вызванных аллоксаном диабетических кроликов. Фармация и фармакологические коммуникации 4: 309–311.
    2. 2. Пасторы JG, Warshaw H, Daly A, Franz M, Kulkarni K (2002) Доказательства эффективности лечебного питания в лечении диабета. Уход за диабетом 25: 608–613. pmid: 11874956
    3. 3. Бантл Дж. П., Уайли-Розетт Дж., Олбрайт А. Л., Аповиан К. М., Кларк Н. Г. и др.(2008) Рекомендации по питанию и вмешательства при диабете: заявление о позиции Американской диабетической ассоциации. Лечение диабета 31: S61 – S78.
    4. 4. Bolkent Ş, Yanardağ R, Tabakoğlu-Oğuz A, Özsoy-Saçan Ö (2000) Эффекты экстракта мангольда ( Beta vulgaris L. var. Cicla) на B-клетки поджелудочной железы у стрептозотоцино-диабетических крыс: морфологическое и биохимическое исследование. Журнал этнофармакологии 73: 251–259.
    5. 5. Янардаğ Р., Болкент Ş, Озсой-Сачан Ö, Карабулут-Булан Ö (2002) Эффекты мангольда (Beta vulgaris L.var. cicla) на ткани почек, уровни мочевины и креатинина в сыворотке крови крыс с диабетом. Фитотерапевтические исследования 16: 758–761. pmid: 12458482
    6. 6. Ярат А., Озэлик Ф., Янардаг Р., Тунали Т., Озсой О и др. (1998) Эффект мангольда (Beta vulgaris L. var. Cicla) на белковые и антиоксидантные системы в линзах у крыс с диабетом, вызванным стрептозотоцином. Фармация и фармакологические коммуникации 4: 271–274.
    7. 7. Sener G, Saçan Ö, Yanardag R, Ayanoglu-Dülger G (2002) Эффекты мангольда (Beta vulgaris L.var. cicla) при окислительном повреждении аорты и сердца крыс с диабетом, страдающим стрептозотоцином. Журнал лечебного питания 5: 37–42. pmid: 12511111
    8. 8. Эскрибано Дж., Педреньо М.А., Гарсия-Кармона Ф., Муньос Р. (1998) Характеристика антирадикальной активности беталаинов из корней Beta vulgaris L. Фитохимический анализ 9: 124–127.
    9. 9. Ханнан Дж.МА., Али Л., Халеке Дж., Ахтер М., Флатт П.Р. и др. (2012) Антигипергликемическая активность корней Asparagus racemosus частично опосредована ингибированием переваривания и всасывания углеводов и усилением действия клеточного инсулина.Британский журнал питания 107: 1316–1323. pmid: 21899804
    10. 10. Bayne K (1996) Доступно пересмотренное руководство по уходу и использованию лабораторных животных. Американское физиологическое общество. Физиолог 39: 199, 208. pmid: 8854724
    11. 11. Andrikopoulos S, Blair AR, Deluca N, Fam BC, Proietto J (2008) Оценка теста на толерантность к глюкозе у мышей. Американский журнал физиологии, эндокринологии и метаболизма 295: E1323 – E1332. pmid: 18812462
    12. 12. Триндер П. (1969) Метод глюкозы GOD-PAP, энзиматический колориметрический метод.Ann Clin Biochem 6:24 pmid: 12481676
    13. 13. Li D-S, Yuan Y-H, Tu H-J, Liang Q-L, Dai L-J (2009) Протокол выделения островков из поджелудочной железы мыши. Протоколы природы 4: 1649–1652. pmid: 19876025
    14. 14. Prentki M, Matschinsky FM (1987) Са2 +, цАМФ и мессенджеры на основе фосфолипидов в механизмах сцепления секреции инсулина. Physiol Rev 67: 1185–1248. pmid: 2825225
    15. 15. Baggio LL, Drucker DJ (2007) Биология инкретинов: GLP-1 и GIP.Гастроэнтерология 132: 2131–2157.
    16. 16. Klip A, Ramlal T, Young DA, Holloszy JO (1987) Инсулино-индуцированная транслокация переносчиков глюкозы в мышцах задних конечностей крысы. Письма FEBS 224: 224–230. pmid: 2960560
    17. 17. Барон А.Д., Чжу Дж. С., Чжу Дж. Х., Велдон Х., Майану Л. и др. (1995) Глюкозамин вызывает инсулинорезистентность in vivo, влияя на транслокацию GLUT 4 в скелетных мышцах. Последствия токсичности глюкозы. Журнал клинических исследований 96: 2792. pmid: 8675649
    18. 18.Danforth WH (1965) Активность гликоген-синтетазы во взаимном преобразовании двух форм скелетных мышц и контроле синтеза гликогена. Журнал биологической химии 240: 588–593.
    19. 19. Porte D Jr (1967) Рецепторный механизм для подавления высвобождения инсулина адреналином у человека. Журнал клинических исследований 46: 86. pmid: 6018752
    20. 20. Loubatieres-Mariani MM, Chapal J, Alric R, Loubatieres A (1973) Исследования холинергических рецепторов, участвующих в секреции инсулина, с использованием изолированной перфузированной поджелудочной железы крысы.Диабетология 9: 439–446. pmid: 4589822
    21. 21. Malaisse WJ, Sener A, Herchuelz A, Hutton JC (1979) Высвобождение инсулина: топливная гипотеза. Метаболизм 28: 373–386.
    22. 22. Fehmann H-C, Arnold R, Goke B (1989) Передача сигнала после связывания амида GLP-I (7–36) в клетках RINm5F.
    23. 23. Prentki M, Matschinsky FM, Madiraju SR (2013) Метаболическая передача сигналов при секреции инсулина, индуцированной топливом. Клеточный метаболизм 18: 162–185. pmid: 237
    24. 24.Сауэрс Дж. Р., Стэндли П. Р., Рам Дж. Л., Якобер С., Симпсон Л. и др. (1993) Гиперинсулинемия, инсулинорезистентность и гипергликемия: факторы, влияющие на патогенез гипертонии и атеросклероза. Американский журнал гипертонии 6: 260S – 270S. pmid: 8398010
    25. 25. Klein R, Klein BEK, Moss SE, Cruickshanks KJ (1994) Взаимосвязь гипергликемии с длительной заболеваемостью и прогрессированием диабетической ретинопатии. Архив внутренней медицины 154: 2169–2178.pmid: 7944837
    26. 26. Klein R (1995) Гипергликемия и микрососудистые и макрососудистые заболевания при диабете. Уход за диабетом 18: 258–268. pmid: 7729308
    27. 27. Boulton AJM, Malik RA (1998) Диабетическая невропатия. Медицинские клиники Северной Америки 82: 909–929.
    28. 28. Равид М., Брош Д., Равид-Сафран Д., Леви З., Рахмани Р. (1998) Основными факторами риска нефропатии при сахарном диабете 2 типа являются уровни холестерина в плазме, среднее кровяное давление и гипергликемия.Архив внутренней медицины 158: 998–004. pmid: 9588433
    29. 29. Монье Л., Мас Э, Жине С., Мишель Ф., Вийон Л. и др. (2006) Активация окислительного стресса за счет резких колебаний глюкозы по сравнению с устойчивой хронической гипергликемией у пациентов с диабетом 2 типа. Джама 295: 1681–1687. pmid: 16609090
    30. 30. Umpierrez GE, Isaacs SD, Bazargan N, You X, Thaler LM, et al. (2002) Гипергликемия: независимый маркер внутрибольничной смертности у пациентов с недиагностированным диабетом.Журнал клинической эндокринологии и метаболизма 87: 978–982. pmid: 11889147
    31. 31. Герих JE (2003) Клиническое значение, патогенез и лечение постпрандиальной гипергликемии. Архив внутренней медицины 163: 1306–1316. pmid: 12796066
    32. 32. Рубин Р.Дж., Альтман В.М., Мендельсон Д.Н. (1994) Расходы на здравоохранение для людей с сахарным диабетом, 1992. Журнал клинической эндокринологии и метаболизма 78: 809A – 809F. pmid: 8157701
    33. 33.Тернер Р.К., Холман Р.Р., Калл К.А., Страттон И.М., Мэтьюз Д.Р. и др. (1998) Интенсивный контроль уровня глюкозы в крови с помощью сульфонилмочевины или инсулина по сравнению с традиционным лечением и риск осложнений у пациентов с диабетом 2 типа (UKPDS 33). ланцет 352: 837–853.
    34. 34. Болен С., Фельдман Л., Васси Дж., Уилсон Л., Йе Х. С. и др. (2007) Систематический обзор: сравнительная эффективность и безопасность пероральных препаратов при сахарном диабете 2 типа. Анналы внутренней медицины 147: 386–399.pmid: 17638715
    35. 35. Франц М.Дж., Монах А., Барри Б., Макклейн К., Уивер Т. и др. (1995) Эффективность лечебного питания, проводимого диетологами, при лечении инсулиннезависимого сахарного диабета: рандомизированное контролируемое клиническое исследование. Журнал Американской диетической ассоциации 95: 1009–1017. pmid: 7657902
    36. 36. Szkudelski T (2001) Механизм действия аллоксана и стрептозотоцина в B-клетках поджелудочной железы крысы. Физиологическое исследование 50: 537–546.pmid: 11829314
    37. 37. Ilkova H, Glaser B, Tunçkale A, Bagriaçik N, Cerasi E (1997) Индукция долгосрочного гликемического контроля у недавно диагностированных пациентов с диабетом 2 типа с помощью транзиторной интенсивной терапии инсулином. Уход за диабетом 20: 1353–1356. pmid: 9283777
    38. 38. Honey RN, Weirf GC (1980) Ацетилхолин стимулирует высвобождение инсулина, глюкагона и соматостатина в перфузированной поджелудочной железе цыпленка *. Эндокринология 107: 1065–1068. pmid: 6105951
    39. 39. Mojsov S, Weir GC, Habener JF (1987) Инсулинотропин: глюкагоноподобный пептид I (7–37), кодируемый геном глюкагона, является мощным стимулятором высвобождения инсулина в перфузируемой поджелудочной железе крысы.Журнал клинических исследований 79: 616. pmid: 3543057
    40. 40. Henquin J-C (2000) Запуск и усиление путей регуляции секреции инсулина глюкозой. Диабет 49: 1751–1760. pmid: 11078440
    41. 41. Дуттарой А., Зимлики С.Л., Гаутам Д., Цуй Й., Мирс Д. и др. (2004) Мускариновая стимуляция панкреатического инсулина и высвобождение глюкагона отменяется у мышей с дефицитом мускаринового ацетилхолинового рецептора. Диабет 53: 1714–1720. pmid: 15220195
    42. 42.Расмуссен H, Завалич KC, Ganesan S, Calle R, Zawalich WS (1990) Физиология и патофизиология секреции инсулина. Уход за диабетом 13: 655–666.
    43. 43. Наук М., Кляйне Н., Орсков С., Холст Дж. Дж., Уиллмс Б. и др. (1993) Нормализация гипергликемии натощак экзогенным глюкагоноподобным пептидом 1 (амид 7–36) у пациентов с диабетом 2 типа (инсулиннезависимый). Диабетология 36: 741–744. pmid: 8405741
    44. 44. Вилсбёлл Т., Здравкович М., Ле-Тхи Т., Краруп Т., Шмитц О. и др.(2007) Лираглутид, аналог глюкагоноподобного пептида-1 человека длительного действия, применяемый в качестве монотерапии, значительно улучшает гликемический контроль и снижает массу тела без риска гипогликемии у пациентов с диабетом 2 типа. Уход за диабетом 30: 1608–1610. pmid: 17372153
    45. 45. Parks M, Rosebraugh C (2010) Взвешивание рисков и преимуществ лираглутида - обзор FDA новой противодиабетической терапии. Медицинский журнал Новой Англии 362: 774–777. pmid: 20164475
    46. 46. Ван Кью, Ли Л., Сюй Э, Вонг В., Родос С. и др.(2004) Глюкагоноподобный пептид-1 регулирует пролиферацию и апоптоз посредством активации протеинкиназы B в бета-клетках INS-1 поджелудочной железы. Диабетология 47: 478–487. pmid: 14762654
    47. 47. DeFronzo RA, Bonadonna RC, Ferrannini E (1992) Патогенез NIDDM: сбалансированный обзор. Уход за диабетом 15: 318–368.
    48. 48. Morgan HE, Henderson MJ, Regen DM, Park CR (1961) Регулирование поглощения глюкозы в мышцах. J Biol Chem 236: 253–261.
    49. 49. Evans DJ, Murray R, Kissebah AH (1984) Взаимосвязь между инсулинорезистентностью скелетных мышц, инсулино-опосредованной утилизацией глюкозы и связыванием инсулина.Эффекты ожирения и топография жировых отложений. Журнал клинических исследований 74: 1515. pmid: 6148358
    50. 50. Baron AD, Brechtel G, Wallace P, Edelman SV (1988) Скорости и участки тканей неинсулино- и инсулино-опосредованного поглощения глюкозы у людей. Американский журнал физиологии, эндокринологии и метаболизма 255: E769 – E774. pmid: 3059816
    51. 51. Kraegen EW, Sowden JA, Halstead MB, Clark PW, Rodnick KJ, et al. (1993) Переносчики глюкозы и поглощение глюкозы in vivo в скелетных и сердечных мышцах: исследования GLUT1 и GLUT4 при голодании, стимуляции инсулином и иммуноизоляции.Biochem. 295: 287–293. pmid: 8216230
    52. 52. Zisman A, Peroni OD, Abel ED, Michael MD, Mauvais-Jarvis F, et al. (2000) Целенаправленное нарушение транспортера глюкозы 4 избирательно в мышцах вызывает инсулинорезистентность и непереносимость глюкозы. Природная медицина 6: 924–928. pmid: 10932232
    53. 53. Корани Л.И., Буре Р.Э., Вуоринен-Марккола Х., Койвисто В.А., Мюклер М. и др. (1991) Уровень белка-переносчика глюкозы в скелетных мышцах коррелирует с индуцированным инсулином удалением глюкозы во всем организме у человека.Диабетология 34: 763–765. pmid: 1959709
    54. 54. Villar-Palasi C, Guinovart JJ (1997) Роль глюкозо-6-фосфата в контроле гликогенсинтазы. Журнал FASEB 11: 544–558.

    Полифенольная фракция бергамота противодействует эректильной дисфункции, возникающей у пациентов, страдающих диабетом 2 типа

    Основные моменты

    Эректильная дисфункция (ЭД) - сложное заболевание, возникающее в основном у пациентов с метаболическими нарушениями, включая сахарный диабет, метаболический синдром и сердечно-сосудистые нарушения. .

    Мы обобщаем некоторые недавние достижения в лечении ЭД у пациентов с диабетом с помощью полифенольной фракции бергамота (BPF 47%).

    BPF отдельно или в сочетании с другими лекарственными растениями представляет собой новый естественный терапевтический вариант для противодействия ЭД у пациентов с кардиометаболическими расстройствами.

    Abstract

    Эректильная дисфункция (ЭД) - сложное заболевание, встречающееся в основном у пациентов с метаболическими нарушениями, включая сахарный диабет и метаболический синдром.Это коррелирует с учащением сердечно-сосудистых заболеваний, включая ишемическую болезнь сердца и сердечную недостаточность. Наряду с разработкой ингибиторов 5-ФДЭ (силденафил, тадалафил и т. Д.), Многие лекарственные растения, используемые в традиционной медицине, были заявлены как потенциально полезные при приближении к ЭД, хотя требуются дополнительные клинические доказательства, чтобы продемонстрировать их эффективность в противодействии ЭД. такое болезненное состояние. Здесь мы суммируем некоторые из недавних достижений в лечении ЭД у пациентов с диабетом с помощью полифенольной фракции бергамота (BPF 47%), природного антиоксиданта, который, как известно, снижает уровень липидов и глюкозы в сыворотке крови.Кроме того, влияние BPF отдельно или в сочетании с Tribulus Terrestris и экстрактом Epimedium на поддержку эндотелиальной функции и реактивную вазодилатацию было исследовано после 120-дневного лечения с помощью Международного индекса эректильной функции, определения допплеровского кровотока в половом члене и измерений Endopat, показав значительный положительный эффект. влияние на общие параметры, изученные для оценки ЭД.

    Таким образом, BPF сам по себе или в сочетании с другими лекарственными растениями представляет собой новый естественный терапевтический вариант для противодействия ЭД у пациентов с кардиометаболическими нарушениями, в основном благодаря его активности в поддержке функции эндотелия и модуляции артериолярного кровотока полового члена.

    Ключевые слова

    Эректильная дисфункция

    Эндотелиальная дисфункция

    Диабет

    Полифенольная фракция бергамота

    Окислительный стресс

    Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

    Просмотреть аннотацию

    © 2015 Elsevier B.V.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирующие статьи

    Фракция стромальных сосудов человека (hSVF, из жировой ткани диабета 2 типа)

    *** Продукт доступен только с индивидуальной изоляцией, пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы узнать цену.***

    Описание продукта

    Фракция стромальных сосудов человека (hSVF) представляет собой свежевыделенную фракцию гетерогенных клеток, полученную из нативной жировой ткани или липосакционных аспиратов от нормальных доноров, пациентов с ожирением (ИМТ> 30) или диабетом 2 типа. СВФ - это то, что осталось в осадке после удаления компонентов крови и жира. Это грубая и неоднородная смесь множества популяций клеток с разной степенью зрелости и функций. Большинство источников указывают, что стволовые клетки, полученные из жировой ткани (ADSC), составляют до 10% (2 ~ 10%) SVF.Эндотелиальные клетки (зрелые и предшественники) составляют от 7 до 30% SVF. Фибробласты могут составлять до 50% SVF. CD34 + клетки присутствуют в большом количестве и могут составлять до 63% SVF.

    iXCells Biotechnologies предлагает SVF из подкожной белой жировой ткани человека. Эти клетки отрицательны в отношении ВИЧ-1, HBV, HCV, микоплазмы, бактерий, дрожжей и грибов.

    Рисунок 1. Получение SVF и его состав.

    Подробнее о продукте

    Список литературы

    [1] Бурин П. и др. И Гимбл Дж. М..Стромальные клетки из полученной из жировой ткани стромальной сосудистой фракции и культуры увеличили стромальные / стволовые клетки жировой ткани: совместное заявление Международной федерации жировой терапии и науки (IFATS) и Международного общества клеточной терапии (ISCT). Цитотерапия, 2013; 15 (6): 641-648.

    [2] Гимбл Дж. М. и др. И Гилак Ф. Краткий обзор: полученные из жировой ткани клетки стромальной сосудистой фракции и стволовые клетки: давайте не потеряемся при переводе. Стволовые клетки.2011; 29 (5): 749-754.

    [1] Бурин П. и др. И Гимбл Дж. М.. Стромальные клетки из полученной из жировой ткани стромальной сосудистой фракции и культуры увеличили стромальные / стволовые клетки жировой ткани: совместное заявление Международной федерации жировой терапии и науки (IFATS) и Международного общества клеточной терапии (ISCT). Цитотерапия, 2013; 15 (6): 641-648.

    [2] Гимбл Дж. М. и др. И Гилак Ф. Краткий обзор: полученные из жировой ткани клетки стромальной сосудистой фракции и стволовые клетки: давайте не потеряемся при переводе.Стволовые клетки. 2011; 29 (5): 749-754.

    Биологический
    Система ячеек Система жировых клеток
    Система ячеек Система сосудистых клеток
    Тип ячейки Стволовые клетки, полученные из жировой ткани
    Виды Человек (Обычный)
    .

    Leave a Comment

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *