Хотя большинство ВПЧ-инфекций и предраковых поражений проходят сами по себе, для всех женщин существует риск того, что ВПЧ-инфекция может стать хронической, а предраковые поражения разовьются в инвазивный рак шейки матки.

У женщин с нормальной иммунной системой рак шейки матки развивается в течение 15-20 лет. У женщин с ослабленной иммунной системой, например с ВИЧ-инфекцией при отсутствии лечения, на его развитие может потребоваться лишь 5-10 лет.

• тип ВПЧ – его канцерогенность, или способность вызывать рак;
• иммунный статус – люди с ослабленной иммунной системой, такие как ВИЧ-инфицированные люди, с большей вероятностью имеют стойкие ВПЧ-инфекции, которые быстрее развиваются в предрак и рак;
• коинфекция другими возбудителями, передаваемыми половым путем, такими как возбудители простого герпеса, хламидиоза и гонореи;
• количество родов (число рожденных детей) и ранние первые роды;
• употребление табака.

Рак шейки матки является четвертым наиболее распространенным видом рака среди женщин в глобальных масштабах – по оценкам, в 2018 г. произошло 570 000 новых случаев заболевания, и на этот вид рака пришлось 7,5% всех случаев смерти женщин от рака. По оценкам, более 85% из более чем 311 000 ежегодных случаев смерти от рака шейки матки происходят в странах с низким и средним уровнем дохода. Вероятность заболевания раком шейки матки у женщин с ВИЧ-инфекцией в шесть раз выше, чем у женщин, не инфицированных ВИЧ, и, по оценкам, 5% всех случаев заболевания раком шейки матки связаны с ВИЧ (2).

В странах с высоким уровнем дохода имеются программы, которые предоставляют девочкам возможности для вакцинации против ВПЧ, а женщинам – для регулярного скрининга. Скрининг позволяет выявлять предраковые поражения на стадиях, когда их можно легко лечить. 

В странах с низким и средним уровнем дохода доступ к таким профилактическим мерам ограничен, и рак шейки матки часто выявляется лишь на поздних стадиях, когда развиваются симптомы. Кроме того, доступ к лечению болезни на таких поздних стадиях (например, хирургическая операция, лучевая терапия и химиотерапия) может быть очень ограниченным, что приводит к высоким уровням смертности от рака шейки матки в этих странах.

Высокую глобальную смертность от рака шейки матки (стандартизированный по возрасту показатель: 6,9/100 000 в 2018 г.) можно снизить с помощью эффективных мероприятий.

В Глобальной стратегии по ускорению элиминации рака шейки матки как проблемы общественного здравоохранения, принятой ВАЗ в 2020 г., рекомендуется применять комплексный подход к профилактике рака шейки матки и борьбе с ним. Рекомендуемый комплекс мер включает мероприятия, охватывающие весь жизненный цикл.

Борьба должна быть многодисциплинарной и включать компоненты просвещения на уровне общин, социальной мобилизации, вакцинации, скрининга, лечения и паллиативной помощи.

Первичная профилактика начинается с вакцинации девочек против ВПЧ в возрасте 9‑14 лет, то есть до того, как они становятся сексуально активными. 

Женщины, ведущие активную половую жизнь, должны проходить скрининг для выявления аномальных цервикальных клеток и предраковых поражений начиная с 30‑летнего возраста. Скрининг сексуально активных женщин с ВИЧ-инфекцией следует начинать в более раннем возрасте, сразу после получения положительного результата теста на ВИЧ.  

Для лечения предраковых поражений рекомендуется удаление аномальных клеток или поражений, которое проводится амбулаторно (аномальную ткань шейки матки можно разрушить с помощью криотерапии или термоабляции).

При наличии признаков рака шейки матки варианты лечения инвазивного рака включают хирургическую операцию, лучевую терапию и химиотерапию, и пациентов необходимо направлять на правильный уровень обслуживания.

В настоящее время имеются 3 преквалифицированные вакцины, защищающие от ВПЧ
16 и 18, которые, как известно, вызывают как минимум 70% раковых заболеваний шейки матки. Третья вакцина защищает еще от пяти канцерогенных типов ВПЧ, которые вызывают еще 20% раковых заболеваний шейки матки. Учитывая, что вакцины, которые защищают только от ВПЧ 16 и 18, имеют также некоторую перекрестную защиту от этих менее распространенных типов ВПЧ, вызывающих рак шейки матки, ВОЗ считает, что эти три вакцины в равной мере защищают от рака шейки матки. Две из этих вакцин защищают также от ВПЧ 6 и 11 типов, которые приводят к развитию аногенитальных кондилом.

Результаты клинических испытаний и пост-маркетингового наблюдения свидетельствуют о том, что вакцины против ВПЧ в высокой степени безопасны и эффективны в профилактике ВПЧ-инфекций, серьезных предраковых поражений и инвазивного рака (3).

Вакцины против ВПЧ наиболее эффективны, если вакцинация проводится до воздействия ВПЧ. Поэтому ВОЗ рекомендует проводить вакцинацию девочек в возрасте от 9 до 14 лет, когда большинство из них еще не начинают половую жизнь. Вакцины не могут лечить ВПЧ-инфекции или связанные с ВПЧ заболевания, такие как рак.

В некоторых странах введена вакцинация мальчиков с учетом того, что вакцинация позволяет предотвращать развитие генитального рака как у мужчин, так и у женщин, а две имеющиеся вакцины позволяют также предотвращать развитие генитальных кондилом у мужчин и женщин. 

ВОЗ рекомендует проводить вакцинацию девочек в возрасте 9-14 лет, поскольку это является самой эффективной с точки зрения затрат мерой общественного здравоохранения против рака шейки матки.

Вакцинация против ВПЧ не заменяет скрининг на рак шейки матки. В странах, где вакцинация против ВПЧ введена в действие, программы скрининга все еще могут нуждаться в разработке или усилении.

Скрининг на рак шейки матки включает тестирование на предрак и рак, при этом проводится все больше тестов на ВПЧ-инфекцию. Тестирование проводится среди женщин, не имеющих симптомов и чувствующих себя совершенно здоровыми. Если скрининг выявляет ВПЧ-инфекцию или предраковые поражения, их можно легко лечить и тем самым предотвратить развитие рака. Скрининг может также выявить рак на ранней стадии с высокой вероятностью излечения.

С учетом того что предраковые поражения развиваются на протяжении многих лет, каждой женщине начиная с 30 лет, а затем регулярно (в зависимости от используемого теста) рекомендуется проходить скрининг. Для сексуально активных женщин с ВИЧ‑инфекцией скрининг необходимо проводить как можно раньше, как только они узнают о своем ВИЧ-статусе. 

Скрининг должен быть увязан с лечением и ведением пациентов с положительными результатами скрининга. Скрининг без надлежащего ведения пациентов не соответствует требованиям этики.

В настоящее время ВОЗ рекомендует 3 разных типа скрининга:

• ДНК-тестирование на типы ВПЧ высокого риска
• визуальная проверка с использованием уксусной кислоты
• обычный тест Папаниколау (Pap) и жидкостная цитология  

Для лечения предраковых поражений ВОЗ рекомендует использовать криотерапию или термоабляцию, а также процедуру электрохирургического петлевого иссечения при ее наличии. В случае поражений на поздних стадиях женщин следует направлять для дальнейших исследований и надлежащего лечения.

Женщин с симптомами, позволяющими предполагать рак шейки матки, необходимо направлять в соответствующие медицинские учреждения для дальнейшего обследования, диагностики и лечения.

Симптомы ранней стадии рака шейки матки могут включать:

• нерегулярные кровянистые выделения или небольшие кровотечения в период между менструациями у женщин репродуктивного возраста;
• кровянистые выделения или кровотечения в постклимактерический период;
• кровотечения после полового акта; и
• обильные влагалищные выделения, иногда с неприятным запахом.

По мере развития рака шейки матки могут появляться более серьезные симптомы, включая:

• постоянные боли в области спины, ноги и/или таза;
• потеря веса, усталость, потеря аппетита;
• выделения с неприятным запахом и неприятные ощущения во влагалище; и
• отек ноги или обеих нижних конечностей.

На более поздних стадиях могут возникать другие тяжелые симптомы в зависимости от того, на какие органы распространился рак.

Диагноз рака шейки матки должен ставиться на основе результатов гистопатологического исследования. Определение стадии проводится на основе размера опухоли и распространения болезни в пределах таза и на удаленные органы. Лечение зависит от стадии болезни и включает хирургическую операцию, лучевую терапию и химиотерапию. Паллиативная помощь также является важным элементом ведения онкологических пациентов, позволяющим облегчать чрезмерную боль и страдания.

Всемирная ассамблея здравоохранения приняла глобальную стратегию по ускорению элиминации рака шейки матки как проблемы общественного здравоохранения и установленные в ней цели и задачи на период 2020-2030 гг. (WHA73.2) (4). В рамках глобальной стратегии поставлены задачи для ускорения элиминации рака шейки матки: 

• пороговое значение для элиминации в качестве проблемы общественного здравоохранения установлено на уровне 4 на 100 000 женщин в год;
• для того чтобы страны встали на путь элиминации рака шейки матки к 2030 г. должны быть достигнуты приведенные ниже целевые показатели 90-70-90;
• 90% девочек к 15 годам должны быть в полной мере вакцинированы против ВПЧ;
• 70% женщин должны пройти скрининг на основе высокоэффективного теста в возрасте 35 лет и затем в возрасте 45 лет;
• 90% женщин с выявленной болезнью шейки матки должны получать лечение (обеспечить лечение для 90% женщин с предраком; обеспечить ведение 90% женщин с инвазивным раком).

ВОЗ разработала руководство и инструментарий по профилактике рака шейки матки и борьбе с ним путем вакцинации, скрининга и лечения инвазивного рака, которые размещены в хранилище знаний. ВОЗ сотрудничает со странами и партнерами в разработке и осуществлении всеобъемлющих программ в соответствии с глобальной стратегией.

(1) Ferlay J, Ervik M, Lam F, Colombet M, Mery L, Piñeros M, Znaor A, Soerjomataram I, Bray F (2018). Global Cancer Observatory: Cancer Today. Lyon, France: International Agency for Research on Cancer. Available from: https://gco.iarc.fr/today

(2) Stelzle D, Tanaka LF, Lee KK, et al. Estimates of the global burden of cervical cancer associated with HIV. Lancet Glob Health 2020; published online Nov 16. DOI:S2214-109X(20)30459-9  https://www.thelancet.com/journals/langlo/article/PIIS2214-109X(20)30459-9/fulltext 

(3) Lei et al (2020)  HPV Vaccination and the Risk of Invasive Cervical Cancer.  N Engl J Med 2020;383:1340-8. DOI: 10.1056/NEJMoa1917338

(4) World Health Organization. Global strategy to accelerate the elimination of cervical cancer as a public health problem  https://www.who.int/publications/i/item/9789240014107

Дифференцированное количественное определение ДНК ВПЧ (Вирус папилломы человека, Human papillomavirus, HPV) 14 типов (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68)

Различные типы ВПЧ вызывают развитие:
цервикальной, вульвальной, влагалищной дисплазии шейки матки;
преинвазивного и инвазивного рака шейки матки, рака влагалища и перианальной области;
остроконечных кондилом половых органов, мочевых путей;
генитальных кондилом.
Пути распространения инфекции
Основной путь передачи ВПЧ — половой, но описаны случаи бытовой передачи инфекции. Женщины и мужчины подвергаются инфицированию с одинаковой частотой. Приблизительно у 70% обследованных, ВПЧ выявляется у обоих половых партнеров. Возможно внутриутробное инфицирование.

По данным некоторых исследователей, частота инфицирования вирусом прямо пропорциональна числу половых партнёров: при наличии одного партнера, ВПЧ выявляется у 17–20% женщин, при наличии 5 и более партнёров — у 70–80%.

Инкубационный период

Клинические проявления
ВПЧ может по-разному воздействовать на эпителий: способствовать возникновению доброкачественных образований (папиллом, кондилом) или объединению ДНК папиллома-вируса с геном клетки, что приводит к дисплазии и неоплазии, в дальнейшем к раку. Наиболее частая область локализации рака — переходная зоне шейки матки в цервикальный канал.

Клинические формы папилломавирусной инфекции обнаруживают у 40–60% мужчин, являющихся половыми партнёрами инфицированных женщин. Поражения у них вызываются теми же типами ВПЧ, что и у женщин. В 2/3 случаев возникают характерные высыпания на коже и слизистых оболочках половых органов.

Анализы на ВПЧ цена — сдать анализ на папилломавирус человека в СПб

Вирус папилломы человека (ВПЧ) — одна из самых распространённых инфекций, передающихся половым путём и при контакте «кожа-к-коже». Нет точной статистики, сколько людей в мире заражены ВПЧ, потому что у большинства заражённых вирус никак себя не проявляет. Биологи считают, что около 80 % населения земли — носители ВПЧ.

Опасность вируса в том, что некоторые его типы могут привести к онкологии. 98 % рака шейки матки (по данным учёных США — 100 %) связаны с ВПЧ. Вирус провоцирует рак влагалища, вульвы, анального канала, мужских половых органов, горла, рта. Причём смертельно опасное заболевание может развиться спустя годы, десятилетия после заражения, если возникнут благоприятные для этого условия.

Всего в группу ВПЧ входит более 170 вирусов и штаммов, из них примерно 40 передаются половым путём, а 13 способны вызвать рак.

Заражение отдельными типами ВПЧ — при наличии высокого иммунитета — проходит незаметно, бесследно для организма. Другие штаммы заставляют клетки кожи усиленно делиться, в итоге появляются бородавки, папилломы, кондиломы («венерические бородавки»). Третьи типы, интегрируя в ДНК человека, действуют как онкогены и способствуют злокачественной трансформации клеток, росту опухолей.

Это важно! ВПЧ не является достаточным фактором для развития онкологического заболевания. Но он — один из важнейших онкофаторов, «провокатор» озлокачествления клеток.

Чтобы началось перерождение здоровой ткани в раковую, необходимо сочетание нескольких условий, в их числе — сбои в работе иммунной системы. Именно иммунитет — главный защитник в том числе и от увеличения вирусной нагрузки ВПЧ.

Очень важно периодически сдавать анализа на ВПЧ, чтобы предотвратить опасность, вызванную вирусом. Так, можно вылечить предраковое состояние шейки матки. Другие онкологии, связанные с ВПЧ, лучше поддаются лечению, если оно начинается на ранней стадии заболевания и контролируется периодическими исследованиями на снижение/повышение вирусной нагрузки.

Основные способы заражения:

• вагинальный, оральный, анальный секс с человеком, заражённым ВПЧ;

• при контактах «кожа-к-коже» с человеком, заражённым папилломавирусом, или контакте с поверхностями, которых касался заражённый человек — бытовое заражение возможно, если на коже имеются порезы, ссадины, другие повреждения;

• при родах — от матери к ребёнку.

Последние исследования американских и европейских учёных показали, что велика вероятность заражения ВПЧ в медицинских учреждениях — при переливании крови, использовании медицинского оборудования, вдыхании вирусных частиц, например — при лазерной абляции или электрокоагуляции кондилом.

Сложность борьбы с неполовыми формами заражениями в том, что вирус чрезвычайно устойчив к большинству дезинфицирующих средств. ВПЧ — первый вирус, оказавшийся нечувствительным к инактивации (обработке) глутаровым альдегидом (средством для стерилизации хирургических инструментов, требующих абсолютной чистоты). Перед врачами и технологами встала проблема обеззараживания приборов, которые нельзя автоклавировать и подвергать воздействию агрессивных химических соединений.

Симптомы заражения различаются в зависимости от типа ВПЧ. Некоторые типы, например — ВПЧ5, сохраняются в организме человека без клинических симптомов и могут быть обнаружены только специальными исследованиями. Штаммы ВПЧ1, 2, 4, 7, 22, 63 вызывают образование бородавок на руках, ногах, подошвах.

Типы 6, 11, 42, 44 способны вызвать развитие генитальных бородавок, папилломатоза гортани; 6, 16, 18, 31 и другие — анальной дисплазии; 60 — вирусной кисты.

К раку половых органов способны привести штаммы 26, 53, 66. Штаммы с высоким онкориском — 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59. Самым высоким риском трансформации клеток в злокачественные обладают типы 16, 18, 31, 45.

Когда назначаются

Анализы на ВПЧ нужно пройти каждому взрослому человеку самостоятельно, без назначения, т. к. вероятность, что вы заражены — 8 из 10.

Направление на анализ обычно выдаётся дерматологом, урологом, гинекологом при наличии характерных внешних признаков или заболеваний, причиной которых может стать вирус.

Анализы на ВПЧ сдают при планировании беременности, при выявлении причин и лечении бесплодия, патологий беременности и вынашивания. В этом случае анализы сдают оба партнёра.

Факторами риска и поводом для сдачи анализа у женщин также являются:

• ранняя половая жизнь;

• отношения с разными, иногда сразу несколькими половыми партнёрами;

• общие хронические, гинекологические заболевания, патологии;

• слабый иммунитет.

Факторами риска и поводом для сдачи анализа у мужчин также являются:

• множественные половые контакты;

• половые контакты с женщинами, заражёнными ВПЧ;

• плохая гигиена;

• сужение крайней плоти;

• слабый иммунитет.

Кольпоскопическое исследование

Кольпоскопия — осмотр с помощью кольпоскопа влагалищной части шейки матки, входа и стенок влагалища. Это простой, недорогой, но высокоинформативный метод диагностирования заболеваний шейки матки.

Клиническое значение имеет расширенная кольпоскопия с применением нескольких тестов — с 3-процентной уксусной кислотой, йодным раствором Люголя. Тесты выявляют различные типы эпителия, позволяют оценить размеры и качество патологических образований (при их наличии), сосудистый рисунок, качество шеечных желёз.

Во время кольпоскопии проводят прицельную биопсию с наиболее атипично изменённых участков.

Цитологическое исследование

Задача цитологического исследования шеечных мазков (тест Папаниколау, пап-тест) — выявление специфических для ВПЧ-инфекции клеток — койлоцитов и дискератоцитов.

Подтверждением папилломовирусной инфекции считается обнаружение койлоцитов, трансэпителиальной лимфоцитарной инфильтрации, базально-клеточной гиперплазии в биоптате (биоматериале, взятом на исследование).

Пап-тест обязателен для:

• женщин после 30 лет;

• женщин, у кого был ранее диагностирован ВПЧ;

• женщин, у кого во время кольпоскопии обнаружили зоны с изменённым эпителием.

По результатам пап-теста определяют класс опасности для здоровья женщины: 1—2 класс — без подозрения на рак, 3 класс — подозрение на онкологию, 4—5 класс — наличие раковых клеток в малом или большом количестве.

К недостаткам цитологического исследования относят сложность исполнения, высокие квалификационные требования к врачу-цитологу. Потому проходить исследование нужно в диагностических центрах и лабораториях, персонал которых постоянно подтверждает свой профессионализм.

Гистологическое исследование

Гистологический метод обнаружения ВПЧ можно было бы считать золотым стандартом диагностики вируса, однако мешает его высокая стоимость, невозможность частого проведения и не всегда точный прицельный забор биоптата из шейки матки. Для проведения гистологической диагностики также требуются специалисты очень высокой квалификации.

Поэтому гистологическое исследование биоптата часто служит дополнением к пап-анализу. Оно позволяет оценить состояние клеток, степень поражения, определить, чем является новообразование — опухолью или кондиломой.

ПЦР диагностика папилломавируса 

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) относится к высокоразрешающим технологиям детекции нуклеиновых кислот. Современные ПЦР тест-системы обладают высокой чувствительностью, используются не только для выявления ВПЧ, но и вирусной нагрузки на организм (количественный показатель заражённости) главных клинически значимых генотипов (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59), которые ответственны за почти 94 % случаев тяжёлых цервикальных дисплазий и рака шейки матки. ПЦР тест-системы используют также для обнаружения штаммов ВПЧ 6 и 11.

Такие возможности тест-системы позволяют прогнозировать течение ВПЧ-инфекции, оценивать эффективность терапии. Установлено, что папилломавирусная инфекция имеет дозозависимый эффект: чем выше концентрация ДНК вируса в исследуемом материале, тем выше риск развития неоплазии и раковой опухоли.

В результатах теста указывают концентрацию ВПЧ:

• Lg < 3 — папилломавирус обнаружен в клинически незначимом количестве;

• Lg 3–5 — папилломавирус обнаружен в клинически значимом количестве;

• Lg > 5 — папилломавирус обнаружен в высокой концентрации, вирусная нагрузка на организм высокая.

Виды исследуемого материала, правила забора:

• для пап-теста — шеечный мазок;

• для цитологического исследования — биоптат, взятый прицельно с атипично изменённых участков слизистой.

• для ПЦР-теста — соскоб клеток слизистых оболочек генитального тракта.

Мазок у женщин берут из цервикального канала, у мужчин — из уретры. Для мазка используют мягкую щётку или ватный тампон. Их бережно вводят в канал, затем осторожно вынимают, вращая. На поверхности щётки/тампона остаются эпителиальные клетки, нужные для исследования.

Взятие биоматериала не проводится во время менструации, за 5 дней до её начала и в течение 5 дней по окончании. Нельзя проходить исследование, если есть воспалительные процессы.

За 2 суток до забора биоматериала женщинам и мужчинам нужно воздержаться от сексуальных контактов. Женщинам нельзя в течение 48 часов использовать вагинальные кремы, лекарства, суппозитории, спринцевания, тампоны, вместо ванны нужно принимать душ. Мазок берут до проведения любых гинекологических манипуляций или через 2 суток после них.

Если биоматериал берут из уретры, то от последнего мочеиспускания до забора биоматериала должно пройти не менее 90 минут.

При заборе биоптата для гистологического исследования соблюдаются те же правила, что и при подготовке к забору мазка. После биопсии в течение 2—3 недель нельзя:

вступать в половые контакты,

• испытывать значительные физические нагрузки,

• перегреваться (баня, сауна, жаркая погода),

• купаться в открытом водоёме или бассейне,

• принимать препараты, разжижающие кровь;

• использовать вагинальные средства.

Если возникнет кровотечение, следует пользоваться только прокладками (не тампонами!)

На точность результата могут влиять антибиотики, пробиотики, местные антисептики, которые вы принимали/применяли даже 2 месяца назад. Перед сбором материала нужно рассказать врачу обо всех лекарственных средствах, которыми вы пользовались или пользуетесь.

Стоимость исследования на заражение ВПЧ зависит от вида исследования, охвата штаммов вируса, определения типа/без определения, расчёта вирусной нагрузки.

Цены на виды исследований в медицинских подразделениях АО «СЗДЦМ» представляют собой разнообразные комбинации по охватности, подробности, прогностической ценности.

Какой способ исследования выбрать, вам подскажет врач — гинеколог, дерматолог, венеролог. Если вы сдаёте анализы по собственной инициативе, выберите исследование на наличие онкогенных штаммов ВПЧ.

Анализы на ВПЧ вы можете сдать в медицинских подразделениях АО «СЗДЦМ», расположенных в Санкт-Петербурге, Ленинградской области, в Великом Новгороде, Старой Руссе и других городах.

Чтобы найти ближайший к вам пункт, воспользуйтесь интерактивной картой или перечнем медицинских учреждений АО «СЗДЦМ».

Во всех наших отделениях — терминалах и центрах — вас встретят внимательные, опытные специалисты с высокой квалификацией. Медицинские учреждения АО «СЗДЦМ» оснащены современным оборудованием, лабораторными материалами, одноразовыми инструментами и расходными материалами.

Мы гарантируем вам точность исследований, заботливое отношение, полную конфиденциальность ваших личных данных и результатов обследования.

Будьте здоровы! А для этого вовремя и регулярно проходите важные обследования в АО «СЗДЦМ».

Мы поможем вам сохранить и вернуть здоровье! 

ВПЧ — КВД №2

Что такое ВПЧ?

Генитальная папилломавирусная инфекция – это инфекция, передаваемая половым путем (ИППП). Возбудитель папилломавирусной инфекции — вирусы папилломы человека (ВПЧ). Вирусы папилломы человека – это группа вирусов, которая включает около 100 различных типов. Более 30 типов ВПЧ передаются половым путем, инфицируют половые органы и область ануса женщин и мужчин.

Большинство инфицированных не знают о своем заболевании, не имеют клинических проявлений и, более того, могут самопроизвольно выздороветь.

Часть этих вирусов называют вирусами «высокого канцерогенного риска», они могут вызвать предраковые поражения гениталий. Исследования последних лет подтвердили главную роль ВПЧ в развитии рака шейки матки. ВПЧ высокого риска также играют роль в возникновении рака вульвы, влагалища у женщин и рака полового члена у мужчин. К вирусам высокого риска относят 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 68, 69 типы – эти типы ВПЧ ответственны за 95-98% случаев развития рака шейки матки. Они вызывают рост ненормальных клеток, который является обычно плоским и почти невидим при обычном осмотре по сравнению с доброкачественными бородавками, которые вызываются вирусами низкого риска – 6, 11 типами. Доброкачественные аногенитальные бородавки появляются через 2 – 6 месяцев после заражения. На развитие предраковых или раковых изменений, связанных с носительством ВПЧ высокого риска уходят годы и часто происходит самопроизвольное излечение от ВПЧ.

Инфекция наиболее распространена в возрасте от 15 до 40 и затрагивает одинаково и женщин и мужчин. К 50 годам жизни, около 80 процентов женщин приобретут ВПЧ — инфекцию.

Около 50-75% сексуально активных людей инфицируются ВПЧ в течение их жизни, и в большинстве случаев инфекция не вызывает заболевания и самопроизвольно излечивается.

Приблизительно 90% ВИЧ-инфицированных также имеют ВПЧ-инфекцию.

Как передается ВПЧ

Вирусы папилломы человека, инфицирующие половую область, передаются, через половые контакты. Большинство заразившихся не имеют видимых проявлений заболевания и поэтому носители ВПЧ не знают о своем инфицировании и могут заразить своих половых партнеров. Иногда инфицированная мать может заразить новорожденного во время родов. Это может привести к так называемому папилломатозу гортани новорожденных.

Проявления инфекции

Большинство заразившихся людей не знают об этом. ВПЧ часто не вызывает никаких проявлений на коже и слизистых оболочках. У части людей развиваются половые бородавки или происходят предраковые изменения на шейке матки, вульве, анальной области или половом члене. Очень редко эти изменения переходят непосредственно в рак. От инфицирования до развития тяжелой дисплазии в среднем проходит 20 лет. Большинство женщин спонтанно излечиваются в течение 9 – 15 месяцев от момента заражения. Основное проявление папилломавирусной инфекции – половые бородавки или остроконечные кондиломы (вызываются ВПЧ 6 и 11 типа) — мягкие бородавчатые образования на короткой тонкой ножке, напоминающие цветную капусту или петушиный гребень с различным расположением (головка полового члена, половой член, малые и большие половые губы, влагалище, шейка матки, область ануса). Остроконечные кондиломы появляются через 2 – 6 месяцев после заражения. Видимые кондиломы обнаруживаются при осмотре.

Диагностика инфекции

Диагностика кондилом проводится на основании осмотра. Диагностика ВПЧ высокого канцерогенного риска и связанных с ними изменений, более сложная задача. В основе диагностики предраковых заболеваний шейки матки в течении многих стоял цитологический анализ мазка (исследование мазка под микроскопом). Однако он имеет ряд существенных недостатков – сложность, низкая чувствительность и высокая частота неопределенных результатов. Американский комитет FDA (комитет по медикаментам и продовольствию) одобрил исследование ВПЧ методом полимеразной цепной реакции — ПЦР, который может определить 13 типов ВПЧ высокого риска. ПЦР на ВПЧобладает высокой чувствительностью, прост в исполнении. Совместное использование цитологических исследований и ПЦР тестов позволяет значительно повысить эффективность диагностики, чувствительность увеличивается до 99 – 100%. Применяемые в РКВД ПЦР тест-системы не уступают, а чаще, даже превосходят зарубежные аналоги. Важно, что выявление ВПЧ высокого риска происходит задолго до появления предраковых изменений слизистых.

ПЦР исследование на ВПЧ высокого риска рекомендовано:

— Как первичный метод в дополнение к цитологии для женщин старше 30 лет.

— Для разрешения сомнительных результатов цитологического исследования.

— Пациенткам, проходящим лечение по поводу дисплазии или рака.

— На первом этапе диагностики для стран, где плохо организованы программы обследования на папилломавирусную инфекцию.

— Для обследования мужчин.

Можно ли излечить это заболевание?

Диагностика и лечение ИППП, должна проводиться в условиях специализированной клиники – КВД, имеющей все необходимые средства для быстрой и точной диагностики.

Специфического лекарства против ВПЧ на сегодняшний день нет. Существует множество методов удаления кондилом, но болезнь может вернуться вновь, поскольку вирус остается в организме человека. Рецидивы возможны в 25% случаев в течение 3 месяцев после лечения. При лечении кондилом необходим осмотр половых партнеров. Однако подавляющее большинство половых партнеров заражены ВПЧ и просто не имеют видимых проявлений заболевания.

Лечение предраковых заболеваний заключается в использовании химических, физических и других методов, с целью изменить структуру пораженных участков слизистых оболочек, а также в применении препаратов стимулирующих иммунитет. В дальнейшем необходимо ежегодное цитологическое исследование и определение ВПЧ методом ПЦР.

Какая связь между ВПЧ и раком шейки матки?

Только факты:

• Вирусы папилломы человека высокого риска являются основной причиной рака шейки матки.
• В случаях тяжелой дисплазии (предрака) и рака шейки матки ВПЧ выявляется почти в 100% случаев.
• Выявление ВПЧ связано с 250-кратным увеличением риска развития тяжелой дисплазии.
• Рак шейки матки занимает 1-е место среди причин женской смертности в развивающихся странах.
• Рак шейки матки занимает 2-е место после рака молочной железы среди женщин в мире – 250 тысяч смертей ежегодно.
• В России ежегодно 12 300 женщин заболевает раком шейки матки и более 6 тысяч пациенток ежегодно умирает.
• За последние 10 лет средний возраст заболевших снизился с 58 до 55 лет.
• У женщин до 29 лет заболеваемость выросла в 2 раза.
• ВПЧ высокого риска вызывают рак шейки матки в 100% случаев, рак заднего прохода – 90%, рак влагалища и вульвы – 40%, рак полового члена – 40% и рак ротоглотки в 12% случаев.
• Американское Общество Раковых Заболеваний прогнозировали на 2004 год, что приблизительно у 10 520 женщин разовьется агрессивный рак шейки матки и приблизительно 3 900 женщины умрут от этой болезни. Большинство женщин с агрессивным раком шейки матки, не проходили правильного обследования на ВПЧ инфекцию.

Профилактика инфекции

Вернейший способ предотвращения половой ВПЧ-инфекции состоит в том, чтобы воздержаться от любого полового контакта с другим индивидуумом.

Долговременные сексуальные отношения с постоянным половым партнером не дает 100% гарантии от инфицирования ВПЧ. Трудно определить, без специальных тестов, инфицирован ли в настоящее время половой партнер.

Мужские презервативы из латекса, при правильном применении снижают риск передачи инфекции.

Любые проявления, такие как боль или неприятные ощущения при мочеиспускании, необычная сыпь, выделения являются сигналом для прекращения половых контактов и немедленного обследования в условиях специализированной клиники – РКВД. Если у больного обнаружены ИППП, он должен сообщить об этом своим половым партнерам, для того чтобы они также прошли полное обследование и соответствующее лечение. Это снизит риск развития серьезных осложнений и предотвратит возможность повторного заражения.

Вирус папилломы человека высокого онкогенного риска

Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой группу вирусов, чрезвычайно широко распространенную во всем мире. Существует более 100 типов ВПЧ, из которых, по меньшей мере, 13 приводят к развитию рака (они известны также как вирусы высокого онкогенного риска).

В настоящее время вирус папилломы человека высокого онкогенного риска бесспорно считается инициирующим фактором в генезе рака шейки матки, заболеваемость которым занимает одно из первых мест в мире. Особенностью вирусной инфекции является длительное латентное течение.

         В большинстве случаев заражения иммунная система справляется с вирусом в течение года без какого-либо лечения. Однако, при неблагоприятных воздействиях вирус реактивируется, вызывая клинические проявления папилломовирусной инфекции. Отдаленным последствием заражения папилломавирусом высокого онкогенного риска может стать рак шейки матки. И, к сожалению, частота этой патологии все еще остается на довольно высоком уровне. Серьезная болезнь развивается через 10-20 лет после инфекции. Как кажется, времени для успешной диагностики и лечения достаточно. Наученные горьким опытом пациентки скажут: «Не стоит расслабляться».

Эта инфекция — очень коварна, и связанные с нею предшествующие раку изменения не только не вызывают никакого беспокойства и дискомфорта, но часто не обнаруживаются при обычном осмотре у гинеколога.

Тест на вирус папилломы человека (ВПЧ-тест) является надежным помощником врачу: выявление вируса обращает особое внимание врача на проблему возможного развития рака, вынуждает провести дополнительные обследования, которые могут однозначно определить, есть болезнь или нет.

Тактика регулярного обследования

Поскольку рак шейки матки – это отдаленный результат вирусной инфекции, основой профилактики этого серьезного заболевания является регулярное обследование на вирус (ВПЧ-тест). Такая тактика называется цервикальным скринингом (от «цервикс» — шейка матки, «скрининг» — отбор, поиск) и используется для борьбы против рака шейки матки в большинстве цивилизованных стран.

Каждая женщина должна проходить обследование раз в 3-5 лет. Опыт ряда стран показал, что подобная практика позволяет снизить вероятность заболеть раком шейки матки более чем в 1000 раз!

В настоящее время имеются две вакцины, защищающие от ВПЧ 16 и 18 типа, которые, как известно, вызывают, по меньшей мере, 70% раковых заболеваний шейки матки. Эти вакцины могут также обеспечивать некоторую перекрестную защиту от других менее распространенных типов ВПЧ, вызывающих рак шейки матки. Одна из этих вакцин защищает также от типов ВПЧ 6 и 11, которые вызывают аногенитальные кондиломы.

Результаты клинических испытаний свидетельствуют о том, что обе вакцины более эффективны, если вакцинация проводится до воздействия ВПЧ. Поэтому предпочтительнее проводить вакцинацию до первого сексуального контакта.

Минский клинический консультативно-диагностический центр,

Врач лабораторной диагностики высшей квалификационной категории                               Марушкевич Г.И.

Скрининг ВПЧ, расширенный 15 типов + КВМ HPV 6/ HPV 11/ HPV 16 / HPV 16,31,33,35,52,58 / HPV18 / HPV 18,39,45,59/ HPV 51,56,68 / HPV 51 / HPV 56 / HPV 68

Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции — важнейший элемент скрининга и профилактики рака шейки матки (РШМ), что объясняется подтверждением этиологической роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии данного заболевания.

Метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR), позволяющем определить количество ДНК клинически значимых типов ВПЧ в образце. Результаты исследования представлены в копиях ДНК вируса ВПЧ в исследуемом образце. Технологические особенности RT-PCR позволяют врачу-клиницисту подобрать оптимальный вариант диагностического лабораторного обследования каждого пациента и, при необходимости, динамического мониторинга ВПЧ. Стандартизация диагностических тест-систем на основе RT-PCR дает возможность пересчёта полученных результатов в единицы Digene, поэтому все клинические рекомендации по интерпретации результатов Digene-теста могут быть применены для результатов, полученных методом RT-PCR.

Выявляемые показатели

Количественные результаты по группам клинически значимых типов HPV высокого онкогенного риска (13 типов HPV):

• HPV 16, 31, 33, 35, 52, 58;
• HPV 18, 39, 45, 59;
• HPV 51, 58, 68.

Определение типа ВПЧ с количественной оценкой вирусной нагрузки рекомендуется:

• при выявлении любых изменений на шейке матки;
• для оценки эффективности вакцинации;
• для контроля проводимой терапии;
• в качестве скринингового обследования специальных групп женщин.

Стартовый возраст для начала скрининга:

• с 21 года или в течение 3 лет после начала половой жизни;
• с 18 лет при высокой степени сексуальной активности;
• с 30 лет для новых программ (основанных на выявлении ДНК ВПЧ) или с 25 лет для существующих программ (классическое цитологическое исследование).
• Специальные группы, которым показан скрининг:
• женщины, имеющие в анамнезе рак шейки матки;
• женщины в возрасте 25-65 лет, которым никогда не проводилось цитологическое исследование или проводилось более 3 лет назад;
• женщины с кровотечением в репродуктивном периоде, кровотечениями после наступления менопаузы, посткоитальными кровотечениями.

hpcH — 4-гидрокси-2-оксогептан-1,7-диоатальдолаза — Escherichia coli

Реакция альдольного присоединения протекает по механизму быстрого равновесия в случайном порядке.

Взгляните на последние статьи

В текущем исследовании изучается диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения ДНК / РНК, меченных 13C, в клетках рака десен.Диагностика рака десен по образцам биопсии основывается на морфологическом анализе с использованием опыта гистопатологов или цитологов, имеющих многолетний опыт изучения этих образцов. Это дополняется методами, которые позволяют визуализировать специфические маркеры рака десен с использованием диагностики клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК при раке десен. клетки, где профили генов могут быть визуализированы с помощью платформ микрочипов.Характерные транслокации могут быть обнаружены с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), особенно в гематопатологии. Использование оптических методов для исследования клеток рака десен быстро развивается, и диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения ДНК / РНК, меченных 13C, в клетках рака десен предоставляет новую модальность, которая многообещающа.

диагностика, клетки рака десен, ДНК / РНК, интеллектуальный анализ базы данных, регрессия, высокое разрешение, назначение

Диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченых ДНК / РНК в клетках рака десен все чаще исследуется для диагностики рака десен.По мере того, как потенциал этой техники исследуется и реализуется, она постепенно внедряется в клиники. В последние годы появилось больше сообщений, показывающих, что это может помочь врачам в диагностике рака десен. Однако еще предстоит решить ряд проблем, особенно в диагностике рака десен in vivo. В этой статье с критической точки зрения обсуждается недавний прогресс этой техники в направлении клинической диагностики рака десен. Диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием анализа базы данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен может предоставить подробную химическую информацию об образце ткани и, таким образом, понимание химические изменения, сопровождающие заболевание десен.В отличие от флуоресценции, существует большое количество диагностики клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК в активных молекулах клеток рака десен в ткани рака десен, и их спектральные характеристики четкие и хорошо очерченные. Возможность измерения нескольких различных химических веществ имеет особое значение при изучении рака десен из-за неоднородности заболевания.Хотя диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченых ДНК / РНК в клетках рака десен обеспечивает высокий уровень информативности, сигналы на несколько порядков слабее, чем флуоресценция. Однако при тщательном проектировании системы можно осуществить сбор клинических данных в нужное время с помощью безопасной мощности лазера. По этим причинам мы исследовали диагностику клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения ДНК / РНК, меченных 13C, в клетках рака десен в качестве клинического инструмента для диагностики. различных патологий рака десен [1-10].

Диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения ДНК / РНК, меченных 13C, в клетках рака десен потенциально может предоставить диагностическую информацию врачу. Этот метод имеет ряд преимуществ, позволяющих исследовать отдельные клетки без окрашивания. При дальнейшем развитии технологий хирург сможет быстро получать точную диагностическую информацию во время операции, используя оптоволоконную диагностику клеток рака десен на основе ДНК / РНК, используя интеллектуальный анализ базы данных и поддерживать векторную регрессию с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного назначения. 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен.Улучшения в обнаружении сигналов и анализе данных, такие как модулированная диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержка векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен, позволят быстрое получение и анализ спектров. Также имеется значительный потенциал для скрининга тканевых жидкостей на наличие клеток рака десен, чтобы облегчить раннее выявление и последующее наблюдение после операции по поводу рака десен.Сотрудничество между клиницистами, патологами и физиками открывает новые области в этой быстро развивающейся области (рис. 1).

Рис. 1. Диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием анализа базы данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен

Диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержки векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения ДНК / РНК, меченных 13C, в клетках рака десен потенциально может предоставить диагностическую информацию врачу.Этот метод имеет ряд преимуществ, позволяющих исследовать отдельные клетки без окрашивания. При дальнейшем развитии технологий хирург сможет быстро получать точную диагностическую информацию во время операции, используя оптоволоконную диагностику клеток рака десен на основе ДНК / РНК, используя интеллектуальный анализ базы данных и поддерживать векторную регрессию с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного назначения. 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен. Улучшения в обнаружении сигналов и анализе данных, такие как модулированная диагностика клеток рака десен на основе ДНК / РНК с использованием интеллектуального анализа данных и поддержка векторной регрессии с помощью эксперимента 4D HPCH с высоким разрешением для последовательного определения 13C-меченных ДНК / РНК в клетках рака десен, позволят быстрое получение и анализ спектров.Также имеется значительный потенциал для скрининга тканевых жидкостей на наличие клеток рака десен, чтобы облегчить раннее выявление и последующее наблюдение после операции по поводу рака десен. Сотрудничество между клиницистами, патологами и физиками открывает новые области в этой быстро развивающейся области.

Это исследование было поддержано Проектом по разработке научных приборов и оборудования Института исследований рака (CRI), Национальным фондом естественных наук Соединенных Штатов, Международной совместной программой основных исследовательских лабораторий биоспектроскопии при поддержке Южного Калифорнийского университета (CSU) и Ключевой проект поддержан Американским институтом международных стандартов (AISI), Ирвин, Калифорния, США.

1. Heidari A, Brown C (2015) Изучение состава и морфологии наночастиц оксида кадмия (CdO) для уничтожения раковых клеток. J Nanomed Res 2 (5): 20.
2. Heidari A, Brown C (2015) Изучение морфологических, фитохимических и структурных характеристик поверхности наночастиц оксида родия (III) (Rh ₂ O ₃ ). Международный журнал фармакологии, фитохимии и этномедицины 1 (1): 15-19.
3. Heidari A (2016) Экспериментальное биоспектроскопическое исследование семенной плазмы для определения качества спермы для оценки мужского бесплодия. Int J Adv Technol 7: e007.
4. Heidari A (2016) Экстракция и концентрирование N-толил-сульфонил-фосфорамид-Saeure-дихлорид в качестве противоракового препарата из растений: исследование фармакогнозии. J Pharmacogn Nat Prod 2: e103.
5. Heidari A (2016) Термодинамическое исследование гидратации и дегидратации ДНК и комплексов РНК-амфифил. J Bioeng Biomed Sci S: 006.
6. Heidari A (2016) Вычислительные исследования молекулярных структур и эффектов карбонильных и кетеновых групп синглетных и триплетных энергий азидокетена O = C = CH – NNN и изоцианатокетена O = C = CH – N = C = O. J Appl Computat Math 5: e142.
7. Heidari A (2016) Исследование облучения для усиления индукции диссоциации водородных связей между пептидными цепями и перехода от спиральной структуры к случайной спиральной структуре с использованием спектроскопии ATR – FTIR, комбинационного рассеяния и спектроскопии ¹ HNMR. J Biomol Res Ther 5: e146.
8. Heidari A (2016) Будущие перспективы точечной флуоресцентной спектроскопии, флуоресцентной визуализации и флуоресцентной эндоскопии в фотодинамической терапии (ФДТ) раковых клеток. Дж. Биоанал Биомед 8: e135.
9. Heidari A (2016) Биоспектроскопическое исследование плотности ДНК и роли цвета как определяющего фактора для поглощенного излучения в раковых клетках. Adv Cancer Prev 1: e102.
10. Heidari A (2016) Процесс производства солнечных элементов с использованием наночастиц оксида кадмия (CdO) и оксида родия (III) (Rh ₂ O ₃ ). J Biotechnol Biomater 6: e125.

Синтез и термическое гелеобразование гидроксипропилхитина

Полностью водорастворимый гидроксипропилхитин (HPCh) был синтезирован путем модификации хитина пропиленоксидом в водном растворе NaOH, зеленом и хорошем растворителе хитина. HPCh с разной степенью замещения (DS) получали, варьируя соотношение подачи пропиленоксида к хитину. Растворы HPCh претерпевают переход золь-гель при нагревании.Переход был обратимым, хотя в процессе охлаждения наблюдается явный гистерезис. Температура гелеобразования ( T _гель ) снижается с увеличением DS и концентрации полимера. Термическое гелеобразование может происходить даже при такой низкой концентрации, как 0,25 мас.%. Регулируя DS полимера, гель T может быть настроен от ∼20 ° C до ∼80 ° C. Между тем концентрация NaCl и pH незначительно влияют на гель T .Предварительные тесты показывают, что полимер нетоксичен для клеток и разлагается в присутствии лизоцима. Способность к гелеобразованию при температурах ниже температуры тела, при относительно низкой концентрации полимера, а также биосовместимость и биоразлагаемость HPCh делают новые термические гелеобразующие материалы вполне подходящими для биомедицинских применений.

У вас есть доступ к этой статье

(IUCr) Экспрессия, очистка и предварительный кристаллографический анализ 2,4-дигидроксигепта-2-ен-1,7-диоатальдолазы (HpcH) из Escherichia coli C

1.Введение

Бензольное кольцо — одно из наиболее распространенных химических образований в биосфере (Diaz, 2004). Рециркуляция ароматического ядра в основном достигается за счет специфической катаболической активности бактерий и грибов. Помимо рециркуляции природных ароматических соединений, эти организмы могут развить способность или быть спроектированными для разложения ксенобиотических соединений, таких как гербициды, пестициды и промышленные сточные воды, многие из которых содержат бензольное ядро ​​(Diaz et al., 2001; Диаз, 2004; Билефельдт и Корт, 2005). Лучшее понимание путей разложения ароматических ароматических веществ в бактериях может облегчить разработку биоразлагаемых химических веществ или привести к развитию сконструированных организмов, полезных для биоремедиации. Кроме того, ароматические пути разложения используют разнообразный набор ферментативных активностей, которые могут быть подходящими для использования в синтетической химии для стереоселективного синтеза органических соединений.

У бактерий деградация ароматического ядра инициируется дигидроксилированием ароматического кольца с образованием более реакционноспособных частиц, которые поддаются раскрытию цикла (Diaz, 2004).Эта по существу необратимая стадия происходит либо между двумя гидроксильными группами ( орто--расщепление), либо рядом с одной из гидроксильных групп ( мета--расщепление). Продукты расщепления кольца впоследствии включаются в центральные метаболические пути организма.

Один из самых длинных и хорошо изученных катаболических путей включает разложение 4-гидроксифенилуксусной кислоты (4-HPA) до пирувата и янтарного полуальдегида (Cooper & Skinner, 1980).Каталитический путь включает 11 генов, кодирующих белки для восьми стадий, катализируемых ферментами, а также белок-переносчик, участвующий в захвате 4-HPA и регуляторного белка. Гены, необходимые для деградации 4-HPA, были клонированы из Escherichia coli C (Jenkins & Cooper, 1988; Roper et al. , 1993) и E. coli W (Prieto et al. , 1996). . На первой стадии 4-HPA гидроксилируют с получением 3,4-дигидроксифенилуксусной кислоты (гомопротокатехуат; HPC).Следовательно, по историческим причинам этот путь известен как путь HPC в E. coli C и путь 4-HPA в E. coli W.

Многие из ферментов были охарактеризованы биохимически (Roper & Cooper, 1993 ; Roper et al. , 1995), и кристаллические структуры были определены для двух ферментов (Subramanya et al. , 1996; Tame et al. , 2002). Заключительная стадия пути включает превращение 2,4-дигидроксигепта-2-ен-1,7-диоата (HHED) в пируват и янтарный полуальдегид.Эта реакция катализируется 2,4-дигидроксигепта-2-ен-1,7-диоатальдолазой (HpcH). HpcH (262 аминокислоты, 28 кДа) принадлежит к подклассу альдолаз, зависимых от ионов двухвалентных металлов, для которых имеется относительно мало структурной и механистической информации. Действительно, единственной кристаллической структурой фермента этого типа является 2-дегидро-3-дезоксигалактарат (DDG) альдолаза (Izard & Blackwell, 2000). Предполагается, что этот фермент катализирует разрыв углерод-углеродной связи в субстрате через — новый механизм, включающий участие фосфата, связанного в активном центре, который действует как основание, отрывая протон от субстрата.Также недавно сообщалось о кристаллизации YfaU из E. coli K12, гомолога HpcH и DDG (Wright et al. , 2002). Интересно, что E. coli K12 не содержит генов пути HPC и не может выжить на 4-HPA или HPC в качестве единственных источников углерода. Анализ данных последовательности из E. coli C (Roper et al. , 1995) и E. coli B (Prieto et al. , 1996) показывает, что кластер генов HPC был вставлен в область между геном tsr метил-акцепторного белка хемотаксиса и предполагаемым белком углеродного голодания YjiY по сравнению с E.coli K12 геном. Сравнение кристаллических структур DDG, HpcH, YfaU и родственных ферментов должно улучшить наше понимание субстратной специфичности и каталитического механизма этого класса магний-зависимых альдолаз класса II (рис.1), особенно в отношении участия фосфата в реакции механизм.

2. Материалы и методы

2.1. Клонирование, сверхэкспрессия и очистка

Ген, кодирующий E. coli C HpcH, амплифицировали с помощью ПЦР из E.coli C хромосомной ДНК с использованием праймеров, включающих сайты Nco I и Xho I на 5′- и 3′-концах гена соответственно. Фрагмент ПЦР был расщеплен этими ферментами и лигирован в вектор экспрессии pProEx-HTa, который также был разрезан этими ферментами. Положительные рекомбинанты отбирали рестрикционным гидролизом, и полученную плазмиду pProEx-HTa-HpcH, содержащую ген HpcH, меченный гексагистидином на N-конце, использовали для трансформации E. coli BL21 (DE3).Бактерии выращивали при 310 К в 2 л среды LB, содержащей 100 мг / мл ^-1 ампициллина. Экспрессию белка индуцировали добавлением IPTG к 1 мкл M , и рост продолжался при 293 К в течение 18 часов. Клетки собирали центрифугированием при 6000 g в течение 15 мин и ресуспендировали в 50 м M HEPES pH 8,0, 0,5 M NaCl, 25 м M имидазол (буфер A ) перед обработкой ультразвуком и осветлением экстракт центрифугированием при 20 000 г в течение 30 мин.Экстракт клеток наносили на колонку с никель-сефарозой, уравновешенную буфером A . Колонку промывали буфером A и буфером B (50 мкм M HEPES pH 8,0, 0,5 M NaCl, 100 мкм M имидазол) и фермент элюировали буфером C (50 мкм M HEPES pH 8,0, 0,5 M NaCl, 500 m M имидазол). Фракции, содержащие HpcH, объединяли, концентрировали в центрифужном концентраторе и наносили на колонку для гель-фильтрации Superdex 75, уравновешенную в 50 м M Tris – HCl pH 8.0, 200 м M NaCl. HpcH, элюируемый из этой колонки, оказался чистым> 99% по данным SDS-PAGE, его диализовали в 10 мл M Tris-HCl pH 8,0 и концентрировали до 12 мг / мл ^-1 перед кристаллизацией.

2.2. Кристаллизация

Первоначальные испытания кристаллизации проводили с использованием метода диффузии паров сидя-капля с 96-луночными планшетами (Greiner Bio-One Ltd, Великобритания), содержащими 0,05 мл резервуарных растворов, взятых из набора Hampton Research Crystal Screen HT (Jancarik & Kim , 1991).На всем протяжении использовались капли, состоящие из 2 мкл раствора белка и 1 мкл резервуарного раствора. Кристаллы появлялись через 16 часов с использованием ряда условий и условий A3 (0,4 M дигидрофосфат аммония) и F4 (0,5 M NaCl, 2% полимер этиленимина, 0,1 M тринатрийцитрат pH 5,6) были оптимизированы с использованием 24- лунки планшетов Linbro, содержащих 0,2 мл резервуарного раствора. Тип I (0,4 M дигидрофосфат аммония, 30% глицерин) и тип II (0,5 M хлорид натрия, 0.1 M цитрата натрия pH 5,5, 20% глицерина) оказались пригодными для дифракционных исследований с размерами более 0,1 × 0,1 × 0,2 мм (рис. 2).

3. Рентгеноструктурный анализ

Кристаллы собирали из кристаллизационной капли с помощью нейлоновой петли, переносили непосредственно в криопоток, охлаждали до 100 К и хранили в жидком азоте до тех пор, пока они не потребовались для сбора данных. Полные наборы данных были собраны с кристаллов типа I и типа II с разрешением 1,6 и 2,0 Å соответственно на BM14 в Европейском центре синхротронного излучения с использованием детектора MAR CCD с углом колебания 1 °.Типичные дифракционные изображения показаны на рис. 3. Все данные были проиндексированы, интегрированы и масштабированы с использованием набора программ HKL (Otwinowski & Minor, 1997). Кристаллы типа I относятся к пространственной группе R 32, с параметрами элементарной ячейки a = b = 128,92, c = 175,30 Å. Расчет вероятности Мэтьюза предполагает присутствие двух молекул в асимметричной единице со значением V _M 2,25 Å ³ Да ^-1 и содержанием растворителя 45%.Кристаллы типа II, выращенные в растворе, содержащем 0,5 M хлорид натрия, 0,1 M цитрат натрия pH 5,5 принадлежат к пространственной группе I 222, с параметрами элементарной ячейки a = 133,35, b = 155,39, c = 168,4 Å. Расчет вероятности Мэтьюса предполагает присутствие шести молекул в асимметричной единице со значением V _M 2,33 Å ³ Да ^-1 и содержанием растворителя 47%. Статистика сбора и обработки данных представлена ​​в таблице 1.В настоящее время мы пытаемся найти решение по замене молекул, используя координаты для 2-дегидро-3-дезоксигалактарат альдолазы (Izard & Blackwell, 2000), которая имеет 46% идентичность последовательности с HpcH.

Благодарности

Мы благодарны за доступ и поддержку пользователей на установке синхротронного излучения ESRF, Гренобль. Эта работа финансируется BBSRC (номер гранта BBC0044501) и финансируется за счет гранта на оборудование от Wellcome Trust (номера грантов 068598, 075861 и 071998).

Ссылки

Билефельдт, А. Р. и Корт, Т.(2005). Biotechnol. Bioeng. 89 , 680–689. Web of Science CrossRef PubMed CAS Google Scholar
Купер Р. А. и Скиннер М. (1980). J. Bacteriol. 143 , 302–306. CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Diaz, E. (2004). Внутр. Microbiol. 7 , 173–180. Web of Science PubMed CAS Google Scholar
Диас Э., Феррандес А. и Гарсия Дж. Л. (1988). J. Bacteriol. 180 , 2915–2923.Google Scholar
Диас, Э., Феррандес, А., Прието, М. А. и Гарсия, Дж. Л. (2001). Microbiol. Мол. Биол. Ред. 65 , 523–569. Web of Science CrossRef PubMed CAS Google Scholar
Изард, Т. и Блэквелл, Н.С. (2000). EMBO J. 19 , 3849–3856. Web of Science CrossRef PubMed CAS Google Scholar
Jancarik, J. & Kim, S.-H. (1991). J. Appl. Cryst. 24 , 409–411. CrossRef CAS Web of Science Журналы IUCr Google Scholar
Jenkins, J.Р. и Купер, Р. А. (1988). J. Bacteriol. 170 , 5317–5324. CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Otwinowski, Z. & Minor, W. (1997). Methods Enzymol. 276 , 307–326. CrossRef CAS Web of Science Google Scholar
Прието, М. А., Диас, Э. и Гарсия, Дж. Л. (1996). J. Bacteriol. 178 , 111–120. CrossRef CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Ропер Д. И. и Купер Р. А. (1993). Eur.J. Biochem. 217 , 575–580. CrossRef CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Ропер Д. И., Фосетт Т. и Купер Р. А. (1993). Mol. Genet Genet. 237 , 241–250. CrossRef CAS PubMed Google Scholar
Ропер Д. И., Стрингфеллоу Дж. М. и Купер Р. А. (1995). Ген , 156 , 47–51. CrossRef CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Субраманья, Х. С., Ропер, Д. И., Даутер, З., Додсон, Э. Дж., Дэвис, Г. Дж., Уилсон, К. С. и Уигли, Д. Б. (1996). Биохимия , 35 , 792–802. CrossRef CAS PubMed Web of Science Google Scholar
Тейм, Дж. Р. Х., Намба, К., Додсон, Э. Дж. И Ропер, Д. И. (2002). Биохимия , 41 , 2982–2989. Web of Science CrossRef PubMed CAS Google Scholar
Райт, А., Блеветт, А., Фюлоп, В., Купер, Р., Берроуз, С., Джонс, К. и Ропер, Д. (2002). Acta Cryst. D 58 , 2191–2193. Web of Science CrossRef CAS IUCr Journals Google Scholar

© Международный союз кристаллографии.Для воспроизведения коротких цитат, таблиц и рисунков из этой статьи не требуется предварительного разрешения при условии ссылки на авторов и источник. Нажмите сюда, для получения дополнительной информации.

ISSN: 2053-230X

Не существует в / genome / burkholderia-ambifaria-mex-5 / nz_ablk01000133 / features

Salmonella schwarzengrund 4-гидрокси-2-оксогептан-1,7-диоатальдолаза (hpcH)

От редакции — Реферат — Community Genetics 2001, Vol.4, № 1

Особый раздел

Бесплатный доступ

Подробности статьи / публикации

Опубликовано онлайн: 27 июля 2001 г.
Дата выпуска: июль 2001 г.

Количество страниц для печати: 1
Количество рисунков: 0
Количество столов: 0

ISSN: 1662-4246 (печатный)
eISSN: 1662-8063 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/PHG

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности