Дирофилярия иммитис: Диагностика дирофиляриоза у собак. Dirofilaria immitis (сердечный червь)

Содержание

Анализ №AN309КР, Дирофилярии (D. immitis и D. repens, дифференциальная диагностика) для собак и кошек: показатели, норма

Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens – паразитические нематоды, принадлежащие к надсемейству Filarioidea. Окончательными хозяевами паразитов являются собаки, в редких случаях – кошки. Кроме собак, заражению повержены лисы, волки, койоты, дикие кошки, хорьки, ондатры, носухи, морские львы, а также люди. Промежуточными хозяевами являются комары родов Aedes, Anopheles и Culex.

После инокуляции 2-3 месяца личинки находятся в подкожной клетчатке и мышцах, за это время они два раза линяют.

Самки выделяют в кровеносное русло личинок – микрофилярий, которые могут жить в кровеносных сосудах внутренних органов в течение нескольких месяцев. Это личинки первой стадии, их еще называют «личинки стадии L1». При питании комаров на инвазированных животных микрофилярии попадают в организм насекомых, где в течение примерно двух недель происходит их последующее развитие до стадии L3 . Во время укуса комара инвазионные личинки проникают в организм окончательного хозяина, после чего мигрируют в подкожную клетчатку и мышцы. В течение последующих нескольких месяцев личинки дважды линяют, проходя стадии развития L4 и L5. Стадия L5 – незрелые взрослые особи гельминтов, достигающие длины 1-2 см. Юные особи D. repens остаются паразитировать в пределах подкожной клетчатки, иногда подвергаясь атипичной миграции (в глаза, нервную систему и др.). Особи D. immitis мигрируют в системный кровоток и током крови заносятся в легочные артерии. Как правило, через 7-9 месяцев после начала инвазии в крови циркулируют микрофилярии. Продолжительность жизни гельминтов в организме собаки может достигать семи лет от момента заражения. Юные и взрослые особи D. immitis локализуются преимущественно в каудальных легочных артериях, иногда мигрируя в главные легочные артерии, при тяжелой инвазии – в правые отделы сердца и крупные вены.

Наличие взрослых червей в легочных артериях ведет к развитию реактивных поражений сосудов, вызывающих снижение податливости сосудистой стенки и уменьшение просвета сосуда. Тяжесть поражений зависит от ряда факторов, включающих число червей, продолжительность их паразитирования и индивидуальные особенности взаимодействия «паразит–хозяин». Характерным симптомом при сердечном дирофиляриозе является ворсинчатая миоинтимальная пролиферация легочных артерий. Повреждения эндотелия сосудов вызывают тромбоз, а также периваскулярную тканевую реакцию и периартериальный отек. Развивающийся аллергический эозинофильный альвеолит может способствовать повреждению паренхимы легких. Наличие мертвых червей способствует усилению иммунного ответа и усугублению поражений легких. Части мертвых червей и тромбы вызывают тромбоэмболию и способствуют усилению воспалительной реакции, приводящих к развитию фиброза. Сердечно-легочный дирофиляриоз является одной из причин легочной гипертензии в эндемичных регионах.

Dirofilaria repens вызывает кожную форму дирофиляриоза. Взрослые черви, достигающие длины 15 см, локализуются в подкожной клетчатке. Жизненный цикл сходен с таковым D. immitis. Продолжительность препатентного периода составляет 6-8 месяцев. Инвазия обычно протекает в субклинической форме, в некоторых случаях может развиваться дерматит, сопровождающийся локальной алопецией, зудом, эритемой и образованием корочек.

В качестве основного метода исследования при проведении скрининга на сердечно-легочную форму дирофиляриоза рекомендуется использовать тесты определения антигена взрослых дирофилярий.
Обнаружение циркулирующего антигена возможно через 6,5-7 месяцев после инвазирования, но не ранее пяти месяцев.

Молекулярные методы исследования позволяют повысить точность окончательного диагноза. В настоящее время существуют тест-системы ПЦР, которые используются в нашей лаборатории, позволяющие обнаруживать ДНК дирофилярий в образцах цельной крови, а также дифференцировать инвазию D. immitis и D. repens.

ПРЕАНАЛИТИКА:

1. Провести процедуру взятия крови.

2. После внесения биоматериала в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА) осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

3. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.

5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

6. Срок хранения образца при -17°С…-23°С   две недели.

7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет)

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КРОВИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ 

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.


Россельхознадзор — Региональные новости

ФГБУ «Челябинская МВЛ» подведомственной Россельхознадзору может проводить исследования крови собак на дирофиляриоз. Результат лабораторного исследования можно получить в течение 1 суток.

Дирофиляриозы — инвазионные заболевания плотоядных, вызываемые паразитированием в кровеносной системе и подкожной клетчатке животных нематод из семейства Филярииде. Известно 2 вида возбудителей: Дирофилярия иммитис (паразитирует в сердце и легочной артерии собак, кошек, лисиц, волков) и Дирофилярия репенс (дирофиляриоз подкожной соединительной ткани у собак и лисиц) . Промежуточными хозяевами обоих видов дирофилярий являются комары из семейства Кулициде. В последние годы отмечена тенденция к широкому распространению дирофилярозов и расширению их ареала не только на юге, но и в средней полосе России. Причиной распространения этих заболеваний являются неограниченные перемещения животных, ввоз зараженных животных из других стран, ограничение использования химических средств защиты от комаров.

Первичное заражение животных совпадает с началом лета комаров и заканчивается поздней осенью. Передача возбудителя происходит в процессе питания комаров кровью, при этом микрофилярии проникают из хоботка комара в кровь дефинитивного хозяина. Микрофилярии циркулируют в крови около 70-120 суток. По истечении этого времени личинок Д.иммитис можно обнаружить в сердце и легочной артерии. Д.репенс развивается так же, как и Д.иммитис, однако развитие Д.репенс происходит на 6 недель быстрее. Установлено, что заболеванию подвержены собаки всех возрастных групп, за исключением собак до года. При этом наибольшая экстенсивность инвазии отмечена у собак в возрасте 4-6 лет. Максимальную ЭИ отмечали у собак летом. При сердечном дирофиляриозе клинически болезнь начинает проявляться гипертрофией желудочков. Развивается сердечная недостаточность, которая в свою очередь сопровождается отеком легких, почек, печени, повышенным портальным давлением, асцитом и отеком различных частей тела. При дирофиляриозе подкожной клетчатки болезнь клинически проявляется у 20% инвазировнных собак: наблюдается поражение кожи в области головы и на лапах в виде папулезного дерматита, кожа в этих местах гиперемирована, папулы наполнены серозным или гнойным содержимым, в котором обнаруживаются личинки дирофилярий.

Лабораторные методы диагностики включают в себя микроскопию свежей цельной крови и исследование сыворотки крови. Исследование сыворотки крови включает в себя различные методы с применением уксусной кислоты или 2% формалина (метод Кнотта).

Эффективность основных лабораторных методов подтверждается методом непрямой иммунофлюоресценции, электрокардиографией, рентгенографией грудной полости, биохимическими исследованиями крови, хотя биохимический анализ не позволяет точно поставить диагноз на дирофиляриоз, но помогает определить патологические изменения в органах и тканях.связанных с дирофиляриозом

Эффективность описанных методов может повышаться при их комплексном применении. Однако ни один из этих методов не может исключать дирофиляриоз окончательно из-за распространенности амикрофиляриемической формы болезни и при небольшом количестве циркулирующих в крови личинок. Амикрофиляриемическая форма дирофиляриоза связана, очевидно, с развитием иммунологических реакций, приводящих к лизису микрофилярий.

В случаях, когда диагноз на дирофиляриоз приходится ставить без обнаружения микрофилярий в крови (при отсутствии 2-3 кратных исследованиях с интервалом в 1- 2 недели), можно сделать следующие выводы: 1. До постановки диагноза для лечения был использован микрофиляриоцид, о чем неизвестно врачу

2. Возможно, у собаки паразитируют только самцы или самки

3. Дирофилярии не достигли половой зрелости и не отраждают личинок.

4. Собака страдает от болезни сердца или сосудов другой этиологии.

При отсутствии половозрелых филярий и при обнаружении микрофилярий:

1. Возможно, что половозрелые дирофилярии погибли несколько месяцев назад, а микрофилярии остались в крови

2. 2. Обнаруженные микрофилярии были личинками Дипеталонема или некоторых других филяриид.

Для профилактики дирофиляриоза изучена персистентность двух отечественных препаратов-ивермека и абиктина (в дозе 6 мкг/кг). (Результаты исследований показали, что персистентность микрофилярицидного действия ивермека составила 45 дней, абиктина- 40 дней. Рекомендовано применение этих двух препаратов для профилактики дирофиляриоза собак перед началом лета комаров и затем через каждые 1,5 месяца в течение периода активности комаров.

С.В. Ларионов для профилактики дирофиляриозов рекомендует применять левамизол-75 в дозе 7,5 мг/кг (по ДВ) подкожно с интервалом 1 месяц в период лета комаров.

По указанию фирмы Пфицер, стронгхолд применяют для профилактики дирофиляриозов 1 раз в месяц в период сезона активности комаров. Стронгхолд можно назначать также за 1 месяц до перевозки собак в регионы распространения дирофиляриозов с целью предотвращения заражения собак и дальнейшего распространения возбудителей дирофиляриозов.

Для профилактики дирофиляриозов применяют отпугивающие средства или инсектициды против комаров. Обрабатывают не только животных, но и помещения. Животных опрыскивают 0,5% раствором диброма, 0,025-0,05% эмульсией перметрина при норме расхода 100-150 мл на животное. Помещения обрабатывают 1% эмульсией дифоса при норме расхода 20 мл/м при помощи дезинфекционных установок (ЛСД, ДУК и др.) Личинок комаров уничтожают 0,005-0,02% водной эмульсией дифоса из расчета 20-50 г ДВ на 1 га площади, сульфидофоса-40-100 г/га, бактокулицида- 0,5-2 кг/га

Дирофиляриоз

13.03.2015

Дирофиляриоз

Дирофиляриоз

13.03.2015

Дирофиляриоз — уже не новое для нашего региона гельминтозное заболевание, вызываемое нематодами рода Dirofilaria. Окончательный хозяин этого возбудителя — домашние собаки и другие представители псовых. Промежуточным хозяином являются комары родов Aedes, Culex, Anopheles. Количество гельминтов у заражённой собаки
может колебаться от 1 до 250 особей. В Московском регионе на сегодняшний день регистрируют две основные формы дирофиляриоза:
• D. immitis — взрослые особи этого вида паразитируют в
лёгочных артериях и правых отделах сердца, вызывая
лёгочно-сердечную форму заболевания;
• D. repens — взрослые особи паразитируют в подкожной
клетчатке, вызывая кожную форму болезни.

И если до некоторого времени мы сталкивались исключительно с завозными случаями лёгочного дирофиляриоза, то сегодня регистрируются пациенты с инвазией
D. immitis, которые не вывозились за пределы Москвы и МО
в течение последних 5 лет. Однако доминирующей формой
для нашего региона является подкожная (D. repens). Следует отметить, что типирование вида дирофилярий необходимо для определения стратегии лечения, поскольку патогенез болезни, клиническое проявление и прогноз приразных видах существенно различаются.

Патогенез лёгочно-сердечной формы дирофиляриоза напрямую зависит от интенсивности инвазии. Клинические проявления болезни зависят в основном от количества паразитов в организме, продолжительности болезни и взаимодействия организма хозяина и паразитов. Во всех случаях заражения в лёгочных артериях развивается ворсинчатая миоинтимальная пролиферация, которая, в свою очередь, приводит к лёгочной гипертензии и правосторонней сердечной недостаточности.

Инвазия D. repens, в отличие от D. immitis, редко становится угрозой для здоровья животного и, как правило,
не влияет на продолжительность жизни. Инвазия D. Repens чаще всего бессимптомна, но иногда наблюдается генерализированный дерматит, очаговая алопеция. В редких случаях у гладкошёрстных собак можно наблюдать мигрирующие новообразования, изредка сопровождающиеся зудом.

У большей части заражённых дирофиляриозом животных развивается поражение лёгочной паренхимы, связанное с эозинофильным пневмонитом, и гломерулонефрит. Происходит это в результате воздействия поверхностного антигена вольбахий, облигатных бактерий-эндосимбионтов, от которых зависят плодовитость и
выживаемость дирофилярий. Заражённость дирофилярий вольбахиями составляет 100%. Гломерулонефриты и эозинофильные пневмониты вызывают не взрослые дирофилярии, а вольбахии вместе с микрофиляриями, что в том числе является причиной необходимости проводить регулярную профилактику.

На сегодняшний день разработан и утверждён план диагностики лёгочно-сердечной формы дирофиляриоза, который включает в себя выявление микрофиляриемии, тестирование на антиген, рентгенографию грудной клетки и эхокардиографию. При этом тест-системы для выявления Аг являются ключевым диагностическим инструментом, они же используются для скрининговых исследований.

Микрофиляриемия диагностируется доступными и распространёнными исследованиями: нативным мазком крови и модифицированным методом Кнотта. Следует отметить, что даже с положительным результатом Аг-теста определение микрофиляриемии не исключается. Наличие личинок первой стадии идентифицирует пациента как источник инвазии, с одной стороны, и влияет на тактику лечения — с другой, особенно если количество микрофилярий высокое.

Лечение дирофиляриоза зависит от вида гельминтов.
При кожной форме дирофиляриоза применяются макролиды и, при необходимости, хирургическое и симптоматическое лечение. При инвазии D.immitis терапия включает в себя использование микрофилярицидной терапии, антибиотикотерапии и применение меларсомина. Однако основное внимание должно уделяться профилактике. Для предотвращения инвазии ежемесячно и круглогодично проводят обработку животных препаратами из группы макроциклических лактонов. Все они обладают сходными показателями эффективности и безопасности для здоровья животных. Препарат для профилактики должен назначать ветеринарный врач. Перед первой обработкой рекомендуется исключить заражение собаки дирофиляриозом, с обязательным серологическим исследованием крови (Аг). В нашей клинике в течение нескольких месяцев применялся препарат Эндогард (Virbac), который прошёл апробацию на 30 собаках с установленным диагнозом «дирофиляриоз» и микрофиляриемией. После обнаружения микрофилярий в крови проводилась однократная обработка препаратом Эндогард (Virbac) в соответствии с инструкцией. При повторном исследовании крови через 7–10 дней микрофиляриемия выявлена у двух собак, после повторной обработки тем же препаратом микрофилярии в крови не обнаруживались.

На сегодняшний день ведущие организации и эксперты настоятельно рекомендуют проводить профилактику круглогодично: несмотря на то, что интенсивность передачи инвазии зимой существенно снижается, риск заражения никогда не достигает нуля.

Пьянова Александра Михайловна


Дирофиляриоз. Черви в сердце! — Ветеринарная клиника Пес и Кот в Санкт Петербурге

Dirofilariasis, от лат. «diro, filum» — «злая нить». С этим заболеванием можно столкнуться вне зависимости от региона проживания.

Кто вызывает?

Нематоды рода Dirofilaria.

Длина взрослых особей может достигать 40см, диаметр до 1,3мм. Конечным хозяином являются собаки или другие животные семейства собачьи. Промежуточным хозяином являются комары (роды Aedes, Culex, Anopheles).


Собаки

У собак возможно заражение двумя типами дирофилярий. От вида паразита будет зависеть и течение заболевания. Для понимания отличий обратимся к схематичным изображениям заражения и развития болезни.

Dirofilaria immitis — взрослые особи этого вида паразитируют в легочных артериях и правых отделах сердца, вызывая сердечно-легочную форму заболевания


Dirofilaria repens — взрослые особи этого вида паразитируют в подкожной клетчатке и мышцах, вызывая кожную форму болезни.


Можно ли понять по симптомам, что собака больна именно дирофиляриозом?

К сожалению, данное заболевание не имеет строго специфичных симптомов. Кроме того, заболевание может протекать абсолютно бессимптомно в течение длительного времени.

Вовремя выявить данных паразитов помогут регулярные исследования питомца. Для этого проводят скрининг исследования сердца (эхокардиографию), рентгенографию и рутинные анализы крови, в том числе общий клинический анализ крови, в котором уже можно выявить микрофиляремию (микрофилярии — личинки дирофилярий). Так же существуют доступные экспресс тест-системы, которые являются основным элементом скрининга.

Лечение

Лечение и профилактика будут зависеть от многих факторов жизни вашего питомца: место проживания, время года, путешествия в другие страны с питомцем.

В случае подозрения на заражение дирофиляриозом рекомендуется консультация ветеринарного врача. Диагностика и тактика дальнейшего наблюдения, лечения, профилактика будет подобрана врачом для вашего питомца с учетом его особенностей.

Один из методов лечения — транссосудистое удаление взрослых особей дирофилярий из сердца. Мы уже рассказывали о наших пациентах, которым была проведена такая операция.

Кошки

Кошки так же могут заболеть дирофиляриозом, несмотря на то, что они более устойчивы к этому заболеванию. Паразитировать могут также два вида дирофилярий, однако, болезнь протекает в более агрессивной форме.

Еще одна из особенностей кошачьих — у них сложнее найти микрофиляремию.

Если кошка проживает в зоне, где большой риск заражения, регулярные исследования и профилактика помогут избежать заражения.

Люди

Человек может заразится данным паразитом через укус комара. Но у людей развивается только местная реакция — уплотнение в месте укуса комара, где развивается паразит. Один из характерных симптомов — миграция — перемещение уплотнение или паразита под кожей. Скорость перемещения до 30 см за 1-2 суток. Половина случаев дирофиляриоза у людей приходится на локализацию в органах зрения (веки, конъюнктива, глазное яблоко)

В наибольшей зоне риска заражения дирофиляриозом находятся некоторые категории людей, среди которых:

  • люди, проживающие у открытых водоемов;
  • те, кто часто бывает на природе —охотники, туристы, огородники, рыбаки;
  • заводчики собак и кошек.

Человеческий организм для дирофилярии тупиковый вариант, так как большинство личинок гибнут в крови людей. Это значит, что человек не может быть источником заражения.

Подведем итог

Своевременные профилактические действия: диспансеризация животных в эндемичных зонах, обработка питомца репеллентами во время прогулок , защита жилого помещения от комаров и многое другое, помогут уберечь вашего питомца от дирофиляриоза!

Здоровья вам и вашим питомцам!
МВЦ «ПиК»

Дирофиляриоз у собак — Ветеринарная клиника «РуВет», Санкт-Петербург


Это слово с недавнего времени наводит страх на многих собаковладельцев сначала центрального региона, а теперь и нашего – северо-западного. Давайте разберёмся, что же это за болезнь такая страшная, как собака может заразиться, как она проявляется, как можно её профилактировать, а самое главное, можно ли лечить.
  Итак, дирофиляриоз – паразитарное заболевание, вызывается круглыми гельминтами, которые паразитируют во взрослой стадии в полостях сердца (Dirofylaria immitis) или в подкожной клетчатке (Dirofylaria repens), а в личиночной стадии путешествуют по кровеносным сосудам собаки.
   
Способы заражения. Дело в том, что переносчиками и промежуточным хозяином дирофилярий  являются комары, а точнее их самки, в организм которых вместе с выпитой кровью попадают личинки этих нематод – микрофилярии. Некоторое время эти личинки развиваются в теле комара, видоизменяются, а потом мигрируют в его слюнные железы и, при первой возможности, при укусе проникают в организм основного хозяина – собаки. Никаким другим образом дирофиляриозом заразиться нельзя. Соответственно Ваша собака может заболеть, если она находится в таком районе, где есть:
1. Больные дирофиляриозом животные;
2. Комары, которые кусают  Вашу собаку.
Следует знать, что практически все паразиты любят тепло, и поэтому, чем южнее регион, тем больше и тем опаснее там  паразитарные заболевания. Дирофиляриоз не является исключением. До последних лет он не был распространен в нашей стране, но в связи с тем, что выставочные собаки зачастую много путешествуют, и на выставках встречаются с соплеменниками из далёких южных стран, а от комаров летом спасения нет не только в России, теперь эта опасная болезнь является проблемой и наших владельцев собак.

 Клинические признаки. При небольшой степени заражения  дирофиляриоз может протекать практически бессимптомно: может наблюдаться небольшая анемия, синюшность слизистых оболочек, предрасположенность  к аллергическим реакциям.
При сильной степени заражения все ранее перечисленные симптомы проявляются ярче. В связи с паразитированием взрослых паразитов в полостях сердца, с течением времени там развиваются дегенеративные изменения, что приводит  к застою крови и сердечной недостаточности, которая проявляется в виде отёков конечностей и шеи. Дирофилярии, паразитирующие в подкожной клетчатке, могут со временем  провоцировать разрастание соединительной ткани на молочных железах, конечностях, которые можно ошибочно принять за опухоли.

Способы диагностики.
Существует два достаточно надёжных способа диагностики дирофиляриоза:
 1. Обнаружение личинок (микрофилярий) в крови. При высокой степени инвазии их можно обнаружить  в капле нативной  крови под микроскопом. Существуют более сложные и точные методики обнаружения личинок в крови, связанные с предварительным её центрифугированием для получения их наивысшей концентрации в осадке.
2. Обнаружение в крови антител к дирофиляриям. Дело в том, что паразиты чужеродны организму, их называют антигенами. Для борьбы с антигенами иммунная система животного вырабатывает  антитела, поэтому если в крови обнаруживают антитела к филяриям, значит, есть и заболевание.
Дирофиляриоз можно предположить и по результатам других анализов (клинический и биохимический анализ крови, УЗИ сердца и другие), но подтвердить его можно только одним из выше названных способом.
Лечение дирофиляриоза. Лечение этого заболевания, особенно в случаях сильной зараженности, очень опасно. Массовая гибель паразитов и личинок в крови, после приёма антигельминтика  вызывает сильнейшую интоксикацию продуктами их распада. А мертвые  тела паразитов  могут закупорить сосуды, питающие любой из органов. Это может вызвать как мгновенную гибель собаки (закупорка коронарных сосудов, сосудов мозга), так и отказ таких органов как почки, печень, кишечник, что тоже весьма опасно для жизни. Однако при средней степени заражённости приём  глистогонных препаратов, распространяющихся по крови (левамизол, ивомек, стронгхолд) совместно с антикоагулянтами (гепарин), гепатопротекторами и антигистаминными препаратами может дать хороший лечебный эффект.

Профилактика дирофиляриоза. Чтобы не допустить появление этого заболевания у вашей собаки, необходимо оградить её от укусов комаров, регулярно обрабатывая её репеллентами. Особенно важно это делать в местах, где дирофиляриоз распространен, и при вывозе собаки в более южную зону.
Профилактическая дегельминтизация 2 – 4 раза в год не даёт дирофиляриям размножаться в организме, что значительно снижает интенсивность инвазии и уменьшает риск при лечении.

Таким образом, дирофиляриоз  — опасное заболевание для вашей собаки,  ареал распространения которого в последние годы расширяется,  из-за  участившихся перевозок животных из страны в страну. Профилактировать его появление можно с помощью своевременной дегельминтизации и обработки собак репеллентами. Надеюсь, эти несложные меры помогут не допустить распространения дирофиляриоза в нашем северо-западном регионе.

Дирофиляриоз — Ветеринарний комплекс Передовой

Весенняя радость от потепления, схода снега и появления первой зеленой травы у владельцев собак ежегодно омрачается пробуждением страхов за здоровье и жизнь своих питомцев – приходит время клещей и комаров.
Комары опасны для собак в связи с тем, что они служат промежуточными хозяевами для биогельминтов дирофилярий. Дирофиляриоз – трансмиссивное паразитарное заболевание, характеризующееся сердечными, печёночными и почечными осложнениями.
КОМАРЫ!!!!!!
Еще несколько лет назад данные о случаях дирофиляриоза были только на Дальнем Востоке и в южных районах: в России в Ростовской области, Краснодарском крае, Республике Адыгея, Ставропольском крае. В Европе – в Греции и Болгарии. Но в последнее время все чаще больные животные появляются и в наших регионах. В Европе география их обитания увы, также расширилась (картинка с сайта ESCCAP (European Scientific Counsel Companion Animal Parasites)):

Дирофиляриоз – инвазионное заболевание, вызываемое круглыми гельминтами рода Dirofylaria. У собак паразитируют два вида – D. immitis и D. repens, которые различаются тем, что в половозрелой форме (собственно гельминты) первые локализуются в полостях сердца и крупных сосудах (легочная артерия, аорта), а вторые – в подкожной клетчатке, хотя изредка могут быть обнаружены и в несвойственных им местах: глазах, головном мозге, брюшной полости и спинном мозге. Личинки – микрофилярии – путешествуют по крови, в утренние и вечерние часы концентрируясь на периферии, так как комары именно в это время особенно активно нападают. Три дня после укуса большая часть личинок находятся в подкожных тканях. К 21-й дню большинство личинок мигрируют в брюшные ткани собаки, на 41 день, они мигрируют между мышечными волокнами и проникают в вены, которые переносят их к сердцу и легким. На заключительном этапе на 50 день до 70 % червей достигают легочных сосудов . На 90 – 120 день их длина составляет от 1 до 1,5 дюймов в длину. После этого женские особи червей увеличатся в длину почти в десять раз. Они становятся половозрелыми на 120 день после заражения. Таким образом, профилактируя дирофляриоз ежемесячно, убиваем личинки в коже при размерах в пределах 1,09-1,65 мм или в ходе миграции между мышц и т.д (несколько крупнее). При профилактике раз в 3 месяца – гибель личинок уже будет происходить в сосудах лёгких, при размере личинок более 20 мм.
(Источник: сайт American Heartworm Society www.heartwormsociety.org)
У Bayer есть наглядный жуткий мультик, как происходит проникновение микрофлярий в организм собаки и как они там развиваются.
Собаки в регионах, являющихся стационарно неблагополучными по дирофиляриозу, должны подвергаться ежегодным диагностическим обследованиям:
– Анализ крови на наличие микрофилярий (микроскопическое исследование или тест Кнотта). Его особенность: он выявляет всех имеющихся в крови микрофилярий не зависимо от рода и вида (это могут быть не только представители рода Dirofilaria). Но микрофилярии в крови при этом тесте будут обнаружены только при паразитировании одновременно и самцов, и самок.
– Метод ферментного иммуносорбентного анализа (ELISA), при помощи которого можно обнаружить антитела к дирофиляриям или сам антиген.
– Экспресс-тесты иммунохроматографического выявления агентов D. immitis в сыворотке крови, в плазме крови и цельной крови собак.
– Дополнительные исследования: методы непрямой флюоресценции, рентгенограмма органов грудной клетки, эхокардиография, ангиография.
Очень важно применять ту или иную схему лечения исходя из определенного вида дирофилярий: при применении ударной дозы ангельминтика животному (в особенности некрупному) пораженому D. immitis возникает риск интенсивной закупорки сосудов погибшими дирофиляриями, что может приводить к крайне тяжелым последствиям.
Профилактика дирофиляриоза
Все профилактические средства для борьбы с дирофляриозом в настоящее время относятся к macrocyclic lactone (ML) классу препаратов: это ивермектин и милбемицин оксим для ежемесячного перорального приема или в виде каплей на холку. Жизненный цикл дирофлярий определяет периодичность профилактики – раз в месяц.
Перед применением препаратов, уничтожающих половозрелых дирофилярий, обязательно необходимо сделать тест на их наличие в крови! В случае положительного теста лечение следует проводить только под контролем ветеринаров!
1. Наиболее распространенный препарат для профилактики – капли Стронгхолд (Stronghold), производитель -Pfizer Animal Health, США. Действующее вещество – селамектин. При применении Стронгхолда один раз в месяц в течение сезона лёта комаров-переносчиков препарат полностью предупреждает заражение собак и кошек, убивая микрофилярий и предупреждая их превращение во взрослых нематод. Поскольку препарат не убивает взрослых дирофилярий, его применение безопасно у инвазированных животных. Для защиты животных, которых ввозят в регионы, где распространен дирофиляриоз, им рекомендуется за месяц до предполагаемой даты ввоза назначить Стронгхолд.
2. Достаточно новый препарат широкого действия Эндогард. Производитель – компания Virbac. Является антигельминтным препаратом широкого спектра действия для лечения и контроля возникновения наиболее распространенных эндопаразитов у собак. Также Эндогард используют для лечения лямблиоза и профилактики дирофиляриоза. Действующее вещество для профилактики дирофиляриоза – ивермектин. В неблагополучных по заболеванию регионах препарат применяют в весенне-летне-осенний период (апрель-октябрь): за месяц до начала сезона лёта комаров и москитов (переносчиков возбудителя Dirofilaria immitis) однократно, далее 1 раз в месяц и последний раз в сезон через два месяца после завершения лёта насекомых. В журнале Современная ветеринарная медицина за апрель 2013 года есть статья об этом препарате (на стр.30). Следует учитывать, что 1 таблетка Эндогард 30 (на вес 16-30 кг) содержит 150 мг празиквантела для борьбы с круглыми и ленточными гельминтами, а также фебантел 450мг и пирантел памоат 432мг!
3.Компания Bayer HealthCare предлагает для профилактики дирофиляриоза использовать капли Адвокат. Действующее вещество – моксидектин (полусинтетическое соединение из группы милбемицинов). С целью профилактики дирофиляриоза препарат применяют перед началом лёта комаров однократно, затем – один раз в месяц и последний раз в сезоне через 1 месяц после завершения лёта насекомых.
4. Компания Intervet Schering-Plough Animal Health, Нидерланды в качестве защиты от комаров предлагает инсектоакарицидный ошейник Скалибор (Scalibor® Protector Band), который отпугивает от собак 98-100% обыкновенных комаров (Culex pipiens) и предотвращает кровососание в течение минимум 6 месяцев. Действующее вещество – дельтаметрин из группы пиретроидов. Получается, что смысл ошейника – в отпугивании комаров, непосредственно на микрофилярий и дирофлярий его действие не распространяется.
5. Novartis Animal Health выпускает Мильбемакс (в Мильбемакс таблетках для взрослых собак содержится мильбемицина оксима -12,5 мг/табл. и празиквантела -125 мг/табл), как комплексное средство для борьбы с эндопаразитами.
6. Капли на холку Инспектор Тотал С (Inspector Total С). Производитель ЗАО “НПФ “Экопром” под контролем Veterinar Bio (Germany). Действующие вещества: фипронил, моксидектин. С целью профилактики дирофиляриоза препарат применяют в весенне-летне-осенний период: перед началом лета насекомых от комаров и москитов (переносчиков возбудителя D. Immitis) однократно, затем один раз в месяц и последний раз в сезоне не ранее, чем за 1 месяц после завершения лёта насекомых. Препарат также эффективен против 14 видов наружных и внутренних паразитов, в том числе иксодовых, демодекозных клещей. Он не уничтожает половозрелых дирофилярий, но снижает количество циркулирующих в крови микрофилярий, и может быть применен также и инвазированным животным. Препарат не следует наносить на влажную или поврежденную кожу, животное не следует мыть в течение 4 суток после обработки препаратом.
7.Суспензия Диронет (Производитель – ООО НВЦ «Агроветзащита С.-П.», Россия). Действующие вещества: ивермектин, пирантел памоат и празиквантел. Ивермектин в препарате оказывает губительное действие на личинок (микрофилярий). Для профилактики дирофляриоза рекомендуют ежемесячное применение. Но в составе празиквантел и пирантел, не имеющие отношения к делу!
В чем недостаток профилактики дирофляриоза препаратами комплексного действия (таблетированными гельминтиками)? Рекомендуется их применять ежемесячно, а по мнению паразитологов, ежемесячное потребление празиквантела не оправдано.

Сургутская городская клиническая поликлиника № 4

В Ханты – Мансийском автономном округе за 2012 год зарегистрировано 2 случая заболевания  дирофиляриоза с подкожной локализацией гельминта. В обоих случаях женщины проживали в частных благоустроенных домах, посещали леса, реппеленты не применяли. Об этом сообщило управление Роспотребнадзора по Ханты-Мансийскому автономному округу.

 

Дирофиляриоз — заболевание, вызываемое паразитированием дирофилярий (Dirofilaria repens или D. immitis) в подкожной клетчатке различных частей тела, слизистой и конъюнктиве органа зрения, в полых органах, молочных железах, внутренних оболочках тканей и органов брюшной полости человека, характеризующееся медленным развитием и длительным хроническим течением.

Заражение человека происходит в весенне-летний период, трансмиссивным путем, через укус кровососущих комаров рода Aedes, Culex и Anopheles, при проведении сельскохозяйственных работ, во время отдыха на природе — даче, рыбалке, охоте и других местах.

Источником заражения комаров являются пораженные дирофиляриями домашние собаки, а также кошки. Передача паразита человеку осуществляется комарами, зараженными инвазионными личинками дирофилярий.

Симптомы Дирофиляриоза:

 

 

Обычно спустя несколько дней после укуса заражённым комаром на месте укуса возникает небольшое уплотнение размером с просяное зерно, иногда сопровождающееся зудом. Вскоре зуд и уплотнение могут исчезнуть, однако в дальнейшем уплотнение появляется снова и увеличивается, достигая диаметра 0,5-4,0 см. Кожа над уплотнением обычно незначительно гиперемирована, иногда отмечается умеренная отечность. Развивающийся вторичный воспалительный процесс приводит к появлению зуда от умеренного до очень сильного, болям и при покое и при пальпации.

Характерным симптомом дирофиляриоза является миграция возбудителя — перемещение уплотнения или самого гельминта под кожей, которое отмечается у 10-40 % инвазированных. Расстояние, на которое перемещается дирофилярия, составляет несколько десятков сантиметров, скорость перемещения — до 30 см за 1-2 суток.

 

 

Специфическим признаком дирофиляриоза являются ощущения шевеления и ползания живого «червя» внутри уплотнения, опухоли или подкожного узла. У многих больных инвазия имеет рецидивирующее течение с фазами затихания и обострения процесса. При несвоевременном удалении гельминта может происходить развитие абсцесса в месте его локализации.

В ряде случаев больные извлекают гельминта при расчёсах кожи, или в результате спонтанного вскрытия гнойника гельминт выходит наружу самостоятельно. Другими симптомами заболевания могут быть головная боль, тошнота, слабость, повышенная температура, сильные боли в месте локализации гельминтов с иррадиацией по ходу нервных стволов.

 

Профилактика заболевания заключается в предотвращении контакта комаров с домашними животными и человеком, для этих целей используют репелленты длительного действия, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке, при соблюдении требований инструкции по применению.

Лечение — только хирургическое

 

При появлении клиники заболевания, обращайтесь к врачу, не забывайте, состояние Вашего здоровья зависит только от Вас!

Dirofilaria immitis — обзор

Heartworm Disease

Естественные и экспериментальные инфекции сердечным червем собак Dirofilaria immitis были зарегистрированы у хорьков. 4,8,44,47,56 Хорьки, живущие в эндемичных районах или происходящие из них, наиболее восприимчивы к инфекции. Восприимчивость и жизненный цикл этого паразита были изучены на хорьках и аналогичны таковым у сердечного червя у собак; однако из-за небольшого размера хорьков клинические проявления больше напоминают клинические проявления инфицированных кошек. 76 Жизненный цикл начинается, когда хорька укусил комар, содержащий инфекционных личинок D. immitis , которые откладываются в подкожных тканях. Личинки мигрируют в сосудистую систему и могут быть обнаружены в мелких легочных артериях. Сообщалось о микрофилярии у хорьков как при естественных, так и при экспериментальных инфекциях. Микрофилярии присутствуют у 50–60% инфицированных животных. 76

Хорьки могут серьезно пострадать от присутствия только одного червя.При естественных инфекциях было зарегистрировано от 1 до 21 червя. 44,47,56 Глистов можно найти в легочных артериях, правой стороне сердца и полой вене. Из-за небольшого размера хорька заражение небольшим количеством глистов может вызвать механическое препятствие кровотоку, что приводит к клиническим признакам правосторонней сердечной недостаточности. У собак реакция хозяина на живых червей в легочной сосудистой сети может включать пневмонит, образование гранулемы, легочный эндартериит, тромбоэмболию и легочную гипертензию.Однако эти классические гистопатологические изменения не были выявлены у хорьков, возможно, из-за малого количества гельминтов и их основного расположения в правой части сердца.

Вскрытие выявляет сердечных червей в правом предсердии, правом желудочке, краниальной полой вене и легочных артериях (см. Главу 6). Увеличение правого желудочка и правого предсердия развивается вторично по отношению к легочной гипертензии и механической обструкции. Утолщение трехстворчатого клапана может быть результатом хронического повреждения, вызванного присутствием глистов.Может присутствовать плевральный выпот, асцит и гиперемия органов брюшной полости. Микрофилярии можно увидеть в альвеолярных капиллярах и крупных сосудах. При гистопатологическом исследовании обычно выявляются обызвествленные черви, тромбоз, легочный эндартериит и застойные явления. Сообщается о хроническом пассивном застое в печени и почечном гемосидерозе. Аберрантная миграция личинок у хорьков не отмечена. Сообщалось о наличии черного кала в толстой кишке, но это не постоянный результат. 44,56,61

Клинические признаки у пораженных хорьков включают кашель, летаргию, слабость и одышку.Могут присутствовать признаки правосторонней сердечной недостаточности, включая плевральный выпот и асцит. Переохлаждение — частая находка при физикальном обследовании. Возникает внезапная сердечная смерть, скорее всего, из-за обструкции легочной артерии. 44,56 Должны быть получены рентгенограммы грудной клетки, которые могут показать плевральный выпот и кардиомегалию (рис. 5-8). Часто наблюдается увеличение правого предсердия, каудальной полой вены и правого желудочка. В отличие от собак, рентгенологические изменения периферической легочной артерии у хорьков не являются серьезными, вероятно, потому, что черви находятся в основном в правой части сердца и в главной легочной артерии. 44,56,75 Опубликованы результаты ангиографии хорьков, экспериментально инокулированных D. immitis . 75 Общие признаки — увеличение сердца с правой стороны и дефекты наполнения правой стороны сердца, легочной артерии и полой вены. Хотя ангиография может быть полезным тестом при диагностике сердечного червя, ее клиническое использование ограничено технической неопытностью и потребностью в специализированном оборудовании. Эхокардиография — лучший тест, потому что он неинвазивен и широко доступен.Эхокардиографическое исследование позволяет выявить наличие внутрисердечных паразитов. Черви могут быть визуализированы в легочной артерии, правом желудочке и правом предсердии. Может наблюдаться расширение правого желудочка и правого предсердия. 65 Также следует подозревать наличие легочной гипертензии, и ее можно диагностировать с помощью допплеровской эхокардиографии. 30

Диагностика сердечного червя основана на клинических признаках, рентгенологических и эхокардиографических данных, а также результатах анализа крови на сердечного червя.Микрофилярии обнаруживаются только у 50% инфицированных хорьков. Чаще всего для диагностики инфекции сердечного червя используется антигенный тест — иммуноферментный анализ (ИФА). 70 Антиген выделяется взрослыми самками сердечных червей в кровоток. Поскольку при тестировании на антигены выявляются только самки глистов, вероятность положительного определения хорьков с низким содержанием глистов снижается. Необходимы исследования для дальнейшей оценки чувствительности и специфичности теста на сердечного червя у хорьков. Успешное лечение сердечного червя зависит от раннего и точного обнаружения.Текущий рекомендованный протокол лечения хорьков — ивермектин (50 мкг / кг подкожно каждые 30 дней) до исчезновения клинических признаков и исчезновения микрофиляремии. Предыдущие протоколы лечения, в которых использовалась терапия взрослоубийством меларсомином (Иммитицид, Рона Мерье, Афины, Джорджия), вышли из употребления из-за побочных реакций (Н. Антинофф, личное сообщение, 2010). Может потребоваться лечение плеврального выпота с помощью диуретиков или плевроцентеза. Преднизон (0,5 мг / кг перорально каждые 12-24 часа) рекомендуется на протяжении всего этого периода и до полного исчезновения клинических признаков.Неизвестно, повысит ли предварительная обработка доксициклином Wolbachia (бактерия, присутствующая в составе Dirofilia immitis , которая способствует развитию почечной и легочной патологии) эффективность лечения сердечных червей у хорьков (www.heartwormsociety.org). Контрольный иммуноферментный анализ на антиген сердечного червя следует проводить примерно через 3 месяца после начала терапии и повторять анализы с ежемесячными интервалами до получения отрицательных результатов. Если результаты теста на антиген остаются положительными, могут потребоваться дополнительные диагностические тесты (рентгенограммы, эхокардиография), чтобы определить, сохраняется ли инфекция сердечного червя.Большинство хорьков становятся серонегативными в течение 4 месяцев после успешной противозачаточной терапии.

Профилактическая терапия рекомендуется для хорьков, ранее инфицированных сердечным червем, и для всех хорьков в эндемичных по сердечным червям районах. Ивермектин (0,05 мг / кг) можно вводить перорально или подкожно один раз в месяц в течение 1 месяца до и после сезона сердечных гельминтов. Четверть пероральной таблетки с ивермектином для собак или кошек наименьшего размера (выход примерно 14-17 мкг) (Heartgard-30 и Heartgard-Feline, Merck & Co.Inc., Whitehouse Station, NJ) подходит для хорьков. Поскольку лекарство ухудшается после того, как таблетка сломана, оставшуюся часть таблетки необходимо выбросить. Селемектин местно и оксим милбемицина перорально также могут эффективно применяться у хорьков (рекомендуемые дозировки см. В Приложении).

Регулирование развития микрофилярий Dirofilaria immitis и оценка уровня транскрипта сигнального пути экдизона с помощью цифровой ПЦР в каплях | Паразиты и переносчики

  • 1.

    Американская ветеринарная медицинская ассоциация.https://www.avma.org/. По состоянию на 12 августа 2020 г.

  • 2.

    Hampshire VA. Оценка эффективности средств профилактики сердечных червей в FDA. Vet Parasitol. 2005; 133: 191–5.

    PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 3.

    Blagburn BL, Dillon AR, Arther RG, Butler JM, Newton JC. Сравнительная эффективность четырех имеющихся в продаже препаратов для профилактики сердечных червей против лабораторного штамма MP3 Dirofilaria immitis .Vet Parasitol. 2011; 176: 189–94.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 4.

    Bourguinat C, Keller K, Blagburn B, Schenker R, Geary TG, Prichard RK. Корреляция между потерей эффективности макроциклических лактоновых противоглистных гельминтов и генотипом Р-гликопротеина. Vet Parasitol. 2011; 176: 374–81.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 5.

    Bourguinat C, Keller K, Bhan A, Peregrine A, Geary T., Prichard R. Устойчивость к макроциклическим лактонам в Dirofilaria immitis . Vet Parasitol. 2011; 181: 388–92.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 6.

    Пуласки С.Н., Мэлоун Дж. Б., Бургинат С., Причард Р., Гири Т., Уорд Д. и др. Выявление макроциклических изолятов Dirofilaria immitis , устойчивых к лактону , у экспериментально инфицированных лабораторных собак.Векторы паразитов. 2014; 7: 494.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 7.

    Bourguinat C, Lee ACY, Lizundia R, Blagburn BL, Liotta JL, Kraus MS, et al. Макроциклическая устойчивость к лактону у Dirofilaria immitis : неэффективность профилактических средств против сердечных червей и исследование генетических маркеров устойчивости. Vet Parasitol. 2015; 210: 167–78.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 8.

    Bourguinat C, Keller K, Xia J, Lepage P, McTier TL, Woods DJ, et al. Генетические профили десяти изолятов Dirofilaria immitis , чувствительных или устойчивых к макроциклическим лактоновым профилактическим средствам от сердечных гельминтов. Векторы паразитов. 2017; 10: 504.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 9.

    Центры по контролю и профилактике заболеваний. https://www.cdc.gov/. По состоянию на 12 августа 2020 г.

  • 10.

    Локер Э., Хофкин Б. Паразитология: концептуальный подход. Бока-Ратон: CRC Press; 2015.

    Книга. Google Scholar

  • 11.

    Underwood PC, Harwood PD. Выживаемость и местонахождение микрофилярий Dirofilaria immitis у собаки. J Parasitol. 1939; 25: 23–33.

    Артикул Google Scholar

  • 12.

    Феррейра САС, де Пиньо М.В., Ново МТЛМ, Каладо ММП, Гонсалвес ЛАП, Белу СМД и др.Первая молекулярная идентификация комаров-переносчиков Dirofilaria immitis в континентальной Португалии. Векторы паразитов. 2015; 8: 139.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 13.

    Bowman DD, Atkins CE. Биология сердечных гельминтов, лечение и борьба с ними. Ветеринарная клиника N Am Small Anim Pract. 2009; 39: P1127–58.

    Артикул Google Scholar

  • 14.

    Silaghi C, Beck R, Capelli G, Montarsi F, Mathis A. Развитие Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens в Aedes japonicus и Aedes geniculatus . Векторы паразитов. 2017; 10: 94.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 15.

    Ledesma N, Harrington L. Мелкомасштабные колебания температуры и модуляция развития личинок Dirofilaria immitis в Aedes aegypti .Vet Parasitol. 2015; 209: 93–100.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 16.

    Montarsi F, Ciocchetta S, Devine G, Ravagnan S, Mutinelli F, Frangipane di Regalbono A, et al. Развитие Dirofilaria immitis в составе москита Aedes (Finlaya) koreicus , нового инвазивного вида для Европы. Векторы паразитов. 2015; 8: 177.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 17.

    Кристенсен Б.М., Холландер А.Л. Влияние температуры на отношения переносчиков и паразитов Aedes trivittatus и Dirofilaria immitis . Proc Helminthol Soc Wash, 1978; 45: 115–9.

    Google Scholar

  • 18.

    Тейлор А.Е. Развитие Dirofilaria immitis у комара Aedes aegypti . J Helminthol. 1960; 34: 27–38.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 19.

    Картман Л. Факторы, влияющие на заражение комара Dirofilaria immitis (Leidy, 1856). Exp Parasitol. 1953; 2: 27–78.

    Артикул Google Scholar

  • 20.

    Агуинальдо А.М., Турбевилль Дж. М., Линфорд Л.С., Ривера М.С., Гэри Дж. Р., Рафф Р.А. и др. Доказательства наличия клады нематод, членистоногих и других линяющих животных. Природа. 1997; 387: 489–93.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Булан Л., Милан М., Леопольд П. Системный контроль роста. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2015; 7: a019117.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 22.

    Song Y, Villeneuve DL, Toyota K, Iguchi T, Tollefsen KE. Агонизм рецепторов экдизона, приводящий к летальному нарушению линьки у членистоногих: обзор и развитие путей неблагоприятных исходов. Environ Sci Technol. 2017; 51: 4142–57.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 23.

    Яманака Н, Ревиц К.Ф., О’Коннор МБ. Экдизон, контролирующий переходы в развитии: уроки исследования Drosophila . Анну Рев Энтомол. 2013; 58: 497–516.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 24.

    Ревиц К.Ф., Рыбчинский Р., Уоррен Дж. Т., Гилберт Л. И.. Гены Хэллоуина кодируют ферменты цитохрома P450, опосредующие синтез гормона линьки насекомых. Biochem Soc Trans. 2006; 34: 1256–60.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 25.

    Петрик А., Уоррен Дж. Т., Маркес Дж., Ярчо М. П., Гилберт Л. И., Калер Дж. И др. Shade — это фермент Drosophila P450, который опосредует гидроксилирование экдизона до стероидного гормона линьки насекомых 20-гидроксиэкдизона. Proc Natl Acad Sci USA. 2003; 100: 13773–8.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 26.

    Ревиц К.Ф., Рыбчинский Р., Уоррен Дж. Т., Гилберт Л. Экспрессия развития Manduca shade , P450 опосредует заключительный этап синтеза гормона линьки. Mol Cell Endocrinol. 2006; 247: 166–74.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 27.

    Schubiger M, Truman JW. Ортолог RXR USP подавляет процессы раннего метаморфизма у Drosophila в отсутствие экдистероидов.Разработка. 2000; 127: 1151.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 28.

    Yao TP, Forman BM, Jiang Z, Cherbas L, Chen JD, McKeown M, et al. Функциональный рецептор экдизона является продуктом генов EcR и Ultraspiracle . Природа. 1993; 366: 476–9.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 29.

    Koelle MR, Talbot WS, Segraves WA, Bender MT, Cherbas P, Hogness DS. Ген EcR Drosophila кодирует рецептор экдизона, новый член суперсемейства стероидных рецепторов. Клетка. 1991; 67: 59–77.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 30.

    Cherbas L, Lee K, Cherbas P. Идентификация элементов реакции на экдизон путем анализа гена Drosophila Eip28 / 29 . Genes Dev.1991; 5: 120–31.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 31.

    Antoniewski C, Laval M, Lepesant J-A. Структурные особенности, критически важные для активности сайта связывания рецептора экдизона. Насекомое Biochem Mol Biol. 1993; 23: 105–14.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 32.

    Ashburner M. Последовательная активация генов экдизоном в политенных хромосомах Drosophila melanogaster : I.Зависимость от концентрации экдизона. Dev Biol. 1973; 35: 47–61.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 33.

    Эшбернер М., Ричардс Г. Последовательная активация генов экдизоном в политенных хромосомах Drosophila melanogaster : III. Последствия отмены экдизона. Dev Biol. 1976; 54: 241–55.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 34.

    Шуман И., Кенни Н., Хуэй Дж., Геринг Л., Майер Г. Гены Хэллоуина у панартропод и эволюция пути ранней линьки у Ecdysozoa. R Soc Open Sci. 2018; 5: 180888.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 35.

    Mendis AH, Rose ME, Rees HH, Goodwin TW. Экдистероиды у взрослых нематод, Dirofilaria immitis . Мол Биохим Паразитол. 1983; 9: 209–26.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 36.

    Mercer JG, Barker GC, Howells RE, Rees HH. Анализ экдистероидов в Onchocerca gibsoni , O . заворот и ткани узелка. Троп Мед Паразитол. 1989; 40: 434–9.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 37.

    Shea C, Richer J, Tzertzinis G, Maina CV. Гомолог EcR филяриального паразита Dirofilaria immitis требует активированного лигандом партнера для трансактивации.Мол Биохим Паразитол. 2010. 171: 55–63.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 38.

    Shea C., Hough D, Xiao J, Tzertzinis G, Maina CV. Гомолог rxr / usp паразитической нематоды Dirofilaria immitis . Ген. 2004. 324: 171–82.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 39.

    Crossgrove K, Laudet V, Maina CV. Dirofilaria immitis кодирует Di-nhr-7 , предполагаемый ортолог гена E78 , регулируемого экдизоном Drosophila , регулируемого экдизоном. Мол Биохим Паразитол. 2002; 119: 169–77.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 40.

    Crossgrove K, Maina CV, Robinson-Rechavi M, Lochner MC. Ортологи гена контроля линьки Drosophila melanogaster E75 у филяриальных паразитов Brugia malayi и Dirofilaria immitis .Мол Биохим Паразитол. 2008; 157: 92–7.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 41.

    Tzertzinis G, Egaña AL, Palli SR, Robinson-Rechavi M, Gissendanner CR, Liu C, et al. Молекулярные доказательства функциональной сигнальной системы экдизона у Brugia malayi . PLoS Negl Trop Dis. 2010; 4: e625.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 42.

    Варбрик Э.В., Баркер Г.С., Риз Х.Х., Хауэллс РЭ. Влияние гормонов беспозвоночных и потенциальных ингибиторов гормонов на третью личиночную линьку филяриальной нематоды, Dirofilaria immitis , in vitro, . Паразитология. 1993. 107 (Pt 4): 459–63.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 43.

    Fleming MW. Ascaris suum : роль экдистероидов в линьке. Exp Parasitol.1985; 60: 207–10.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 44.

    Деннис РД. Морфогенетические гормоны насекомых и механизмы развития нематоды, Nematospiroides dubius . Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 1976; 53: 53–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 45.

    Михальски М.Л., Гриффитс К.Г., Уильямс С.А., Каплан Р.М., Мурхед АР.Ресурсный центр реагентов для исследования филяриатоза NIH-NIAID. PLoS Negl Trop Dis. 2011; 5: e1261.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 46.

    Центр ресурсов по реагентам для исследования филяриатоза (FR3). https://www.filariasiscenter.org/. По состоянию на 12 августа 2020 г.

  • 47.

    Quan P-L, Sauzade M, Brouzes E. dPCR: обзор технологии. Датчики (Базель). 2018; 18: 1271.

    Артикул CAS Google Scholar

  • 48.

    Лок JB. Передача сигналов у паразитарных нематод: физико-химическая связь между хозяином и паразитом и пути эндогенной молекулярной трансдукции, управляющие развитием и выживанием червей. Curr Clin Microbiol Rep. 2016; 3: 186–97.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 49.

    WormBase ParaSite. https://parasite.wormbase.org/. По состоянию на 01 января 2020 г.

  • 50.

    Sneller V-P, Weinstein PP.Развитие микрофилярий Dirofilaria immitis in vitro: выбор питательных сред и сывороточных уровней. Int J Parasitol. 1982; 12: 233–8.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 51.

    Сойер Т.К., Вайнштейн П. in vitro Развитие микрофилярий сердечного червя собаки Dirofilaria immitis до «колбасной формы». J Parasitol. 1963а; 49: 218–24.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 52.

    Девани Э., Хауэллс RE. Системы культивирования для поддержания и развития микрофилярий. Ann Trop Med Parasitol. 1979; 73: 139–44.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 53.

    Сойер Т.К., Вайнштейн П.П. Исследования микрофилярий сердечного червя собак Dirofilaria immitis : отделение паразитов от цельной крови. J Parasitol. 1963; 49: 39–45.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 54.

    Тейлор AER. Ведение филярийных червей in vitro . Exp Parasitol. 1960; 9: 113–20.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 55.

    Сойер Т.К., Вайнштейн П.П. Выживаемость микрофилярий Dirofilaria immitis в модифицированных физиологических солевых растворах. J Parasitol. 1961; 47: 24.

    Артикул Google Scholar

  • 56.

    Вайнштейн П.П. Разработка in vitro микрофилярий Wuchereria bancrofti и Litomosoides carinii до колбасной формы. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1963; 57: 236.

    Артикул Google Scholar

  • 57.

    Девани Э., Хауэллс RE. Развитие микрофилярий без оболочки Brugia pahangi и Brugia malayi в линиях клеток комаров. Ann Trop Med Parasitol.1979; 73: 387–92.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 58.

    Klein JB, Bradley RE. Индукция морфологических изменений микрофилярий из Dirofilaria immitis с помощью методов культивирования in vitro . J Parasitol. 1974. 60: 649–749.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 59.

    Litchfield TM, Mackenzie CD, Varma MGR. Условия, необходимые для поддержания микрофилярий Onchocerca lienalis in vitro . Acta Trop. 1991; 48: 293–304.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 60.

    Борхэм ПФЛ, Этвелл РБ. Дирофиляриоз. Бока-Ратон: CRC Press; 1988.

    Google Scholar

  • 61.

    Симон Ф, Силес-Лукас М., Морчон Р., Гонсалес-Мигель Дж, Мелладо I, Карретон Э и др. Дирофиляриоз человека и животных: возникновение зоонозной мозаики. Clin Microbiol Rev.2012; 25: 507–44.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 62.

    Hochachka PW, Lutz PL, Sick TJ, Rosenthal M. Выживание при гипоксии: механизмы контроля и адаптации. Бока-Ратон: CRC Press; 1993.

    Google Scholar

  • 63.

    Crompton DWT. Паразитология: питание человека и паразитарные инфекции. Кембридж: Издательство Кембриджского университета; 1993.

    Google Scholar

  • 64.

    Ши Х.Н., Скотт М.Э., Коски К.Г., Боулай М., Стивенсон М.М. Ограничение энергии и серьезный дефицит цинка влияют на рост, выживание и размножение Heligmosomoides polygyrus (Nematoda) во время первичных и контрольных инфекций у мышей. Паразитология. 1995; 110 (Pt 5): 599–609.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 65.

    Briggs GM, Cheng AC, Lu NC. Исследование потребности в минералах в Caenorhabditis elegans . Nematologica. 1983; 29: 425–34.

    Артикул Google Scholar

  • 66.

    Берд А.Ф., Берд Дж. Строение нематод. Кембридж: Academic Press; 1991.

    Google Scholar

  • 67.

    Wittich R-M, Kilian H-D, Walter RD. Метаболизм полиаминов у нитчатых червей. Мол Биохим Паразитол.1987. 24: 155–62.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 68.

    Mondal M, Kundu JK, Misra KK. Различия в поглощении липидов и жирных кислот среди паразитов нематод и цестод и их хозяина, домашней птицы: взаимодействие хозяин-паразит. J Parasit Dis. 2016; 40: 1494–518.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 69.

    Ли DL. Биология нематод. Бока-Ратон: CRC Press; 2010.

    Google Scholar

  • 70.

    Wood DE, Suitor EC Jr. In vitro Развитие микрофилярий Macacanema formosana в культурах клеток комаров. Природа. 1966; 211: 868–70.

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 71.

    Лонг Т., Альберих М., Андре Ф., Менез С., Причард Р.К., Леспин А.Сердечный червь у собак очень чувствителен к стеринам, которые активируют ортолог ядерного рецептора DAF-12. Научный доклад 2020; 10: 11207.

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • Ложноположительный тест на антиген Dirofilaria immitis после термической обработки образца крови у собаки с микрофиларемией, инфицированной Acanthocheilonema dracunculoides | Паразиты и переносчики

  • 1.

    Американское общество сердечных червей.https://www.heartwormsociety.org. По состоянию на 14 октября 2019 г.

  • 2.

    Starkey LA, Bowles JV, Payton ME, Blagburn BL. Сравнительная оценка коммерчески доступных тестов на антиген сердечного червя в местах оказания медицинской помощи с использованием хорошо изученных образцов плазмы собак. Векторы паразитов. 2017; 10 (Приложение 2): 475.

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Генри Л.Г., Брансон К.Дж., Уолден Х.С., Венцлоу Н., Бичборд С.Е., Барр К.Л. и др. Сравнение шести коммерческих наборов антигенов для выявления инфекций Dirofilaria immitis у собак с подтвержденным аутопсией статусом сердечного червя.Vet Parasitol. 2018; 254: 178–82.

    CAS Статья Google Scholar

  • 4.

    Гиллис Дж. М., Смит Р. Д., Тодд К. С. Мл. Диагностические критерии для иммуноферментного анализа скрытого сердечного червя: стандартизация тест-системы у собак, подвергшихся естественному воздействию. Am J Vet Res. 1984; 45: 2289–92.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 5.

    Schnyder M, Deplazes P.Перекрестные реакции сывороток собак, инфицированных Angiostrongylus vasorum , в имеющихся в продаже тест-наборах Dirofilaria immitis . Векторы паразитов. 2012; 5: 258.

    Артикул Google Scholar

  • 6.

    Aroch I, Rojas A, Slon P, Lavy E, Segev G, Baneth G. Серологическая перекрестная реактивность трех коммерческих иммуноанализов для обнаружения антигенов Dirofilaria immitis с Spirocerca lupi у собак с доброкачественными спироцеркоз пищевода.Vet Parasitol. 2015; 211: 303–5.

    CAS Статья Google Scholar

  • 7.

    Кручик Д.Д., Ван Бонн В., Джонсон С.П. Связь между положительными результатами по антигену сердечного червя собак ( Dirofilaria immitis ) и наличием микрофилярий Acanthocheilonema odendhali у морских львов Калифорнии ( Zalophus californianus ). J Zoo Wildl Med. 2016; 47: 25–8.

    Артикул Google Scholar

  • 8.

    Little S, Saleh M, Wohltjen M, Nagamori Y. Основное обнаружение Dirofilaria immitis : понимание влияния заблокированного антигена на результаты теста на сердечного червя. Векторы паразитов. 2018; 11: 186–95.

    Артикул Google Scholar

  • 9.

    Ciucă L, Genchi M, Kramer L, Mangia C, Miron LD, Del Prete L, et al. Термическая обработка образцов сыворотки от бездомных собак, подвергшихся естественному воздействию Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens в Румынии.Vet Parasitol. 2016; 225: 81–5.

    Артикул Google Scholar

  • 10.

    Venco L, Manzocchi S, Genchi M, Kramer LH. Тепловая обработка и ложноположительное тестирование антигена сердечного червя у ex vivo паразитов и собак, естественно инфицированных Dirofilaria repens и Angiostrongylus vasorum . Векторы паразитов. 2017; 10: 476.

    Артикул Google Scholar

  • 11.

    Ортега-Мора Л.М., Гомес-Баутиста М., Рохо-Васкес, ФА. Активность кислой фосфатазы и морфологические характеристики микрофилярий Dipetalonema dracunculoides (Cobbold, 1870). Vet Parasitol. 1989; 33: 187–90.

    CAS Статья Google Scholar

  • 12.

    Peribáñez MA, Lucientes J, Arce S, Morales M, Casillo JA, Gracia MJ. Гистохимическая дифференциация микрофилярий Dirofilaria immitis , Dirofilaria repens и Acanthocheilonema dracunculoides путем окрашивания с помощью коммерческого набора.Vet Parasitol. 2001. 102: 173–5.

    Артикул Google Scholar

  • 13.

    Magnis J, Lorentz S, Guardone L, Grimm F, Magi M, Naucke TJ и др. Морфометрический анализ микрофилярий крови собак, выделенных с помощью теста Кнотта, позволяет диагностировать Dirofilaria immitis и D. repens видоспецифично и акантохейлонему (син. Дипеталонема), специфичную для рода. Векторы паразитов. 2013; 6: 48.

    Артикул Google Scholar

  • 14.

    Rishniw M, Barr SC, Simpson KW, Frongillo MF, Franz M, Alpizar JLD. Дискриминация между шестью видами собачьих микрофилярий с помощью одной полимеразной цепной реакции. Vet Parasitol. 2006; 135: 303–14.

    CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Муньос К., Гонсалвес М., Рохас А., Мартинес-Карраско С., Банет Г., Берриатуа Е. и др. Массивная микрофиляремия у собаки, субклинически инфицированной Acanthocheilonema dracunculoides .Parasitol Int. 2020; 76: 102070.

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Thomas WP, Gaber CE, Jacobs GJ, Kaplan PM, Lombard CW, Moise NS, et al. Рекомендации по стандартам трансторакальной двумерной эхокардиографии у собак и кошек Комитет по эхокардиографии специальности кардиологии Американский колледж ветеринарной внутренней медицины. J Vet Intern Med. 1993; 7: 247–52.

    CAS Статья Google Scholar

  • 17.

    Бун Дж. Ветеринарная эхокардиография. 2-е изд. Чичестер: Вили-Блэквелл; 2010.

    Google Scholar

  • 18.

    Серрес Ф, Четбоул V, Гуни В., Тиссье Р., Сампедрано СС, Пушелон Дж. Л.. Диагностическая ценность эхо-допплера и тканевой допплеровской визуализации у собак с легочной артериальной гипертензией. J Vet Intern Med. 2007; 21: 1280–9.

    Артикул Google Scholar

  • 19.

    Cornell CC, Kittleson MD, Della Torre P, Häggström J, Lombard CW, Pedersen HD, et al.Аллометрическое масштабирование сердечных измерений в М-режиме у нормальных взрослых собак. J Vet Intern Med. 2004; 18: 311–21.

    Артикул Google Scholar

  • 20.

    Hansson K, Häggström J, Kvart C, Lord P. Индексы левого предсердия и корня аорты с использованием двумерной эхокардиографии и М-режима у кавалер-кинг-чарльз-спаниелей с расширением левого предсердия и без него. Vet Radiol Ultrasound. 2002; 43: 568–75.

    Артикул Google Scholar

  • 21.

    Yuill CDM, O’Grady MR. Скорость кровотока через сердечные клапаны у нормальной собаки, рассчитанная по допплеровскому протоколу. Может J Vet Res. 1991; 55: 185–92.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 22.

    Baneth G. Перспективы гепатозооноза собак и кошек. Vet Parasitol. 2011; 181: 3–11.

    Артикул Google Scholar

  • 23.

    Маринус С.М., ван Энгелен Х., Сатмари В.N-терминальный натрийуретический пептид про-B-типа и фонокардиография в дифференциации невинных сердечных шумов от врожденных сердечных аномалий у бессимптомных щенков. J Vet Intern Med. 2017; 31: 661–7.

    CAS Статья Google Scholar

  • 24.

    Olmeda-García AS, Rodríguez-Rodríguez JA, Rojo-Vázquez FA. Экспериментальная передача Dipetalonema dracunculoides (Cobbold, 1870) через Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806).Vet Parasitol. 1993; 47: 339–42.

    Артикул Google Scholar

  • 25.

    Genchi M, Vismarra A, Lucchetti C., Viglietti A, Crosara S, Gnudi G, et al. Эффективность точечного применения имидаклоприда 10% / моксидектина 2,5% (Advocate®, Advantage Multi®) и доксициклина для лечения естественных инфекций Dirofilaria immitis у собак. Vet Parasitol. 2019; 273: 11–6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 26.

    Bolio ME, Montes AM, Alonso FD, Gutiérrez C, Bernal LJ, Rodríguez-Vivas RI, et al. Распространенность Dipetalonema dracunculoides у собак в Мерсии. Испания Vet Rec. 2004. 154: 726–7.

    CAS Статья Google Scholar

  • 27.

    де Соуза А.И., Джулиано Р.С., Гомес Т.С., де Араужо Д.С., Борхес А.М., Тафури В.Л. и др. Остеолитический остеомиелит, связанный с висцеральным лейшманиозом у собак. Vet Parasitol. 2005; 129: 51–4.

    Артикул Google Scholar

  • 28.

    Мартинес-Эрнандес Л., Касамиан-Сорросал Д., Баррера-Чакон Р., Куэста-Гервено Ю.М., Белинчон-Лоренцо С., Гомес Ньето Л.С. и др. Сравнение поражения миокарда у собак на разных стадиях клинического лейшманиоза и собак с идиопатической хронической болезнью почек. Вет Дж. 2017; 221: 1–5.

    Артикул Google Scholar

  • 29.

    Европейское общество дирофиляриоза и ангиостронгилеза. https://www.esda.vet. По состоянию на 8 апреля 2020 г.

  • Границы | Dirofilaria immitis Microfilariae и личинки третьей стадии вызывают нетоз собак, приводящий к различным типам внеклеточных ловушек нейтрофилов

    Введение

    Сердечно-легочный дирофиляриоз или болезнь сердечных червей — это трансмиссивное зоонозное заболевание, вызываемое паразитарной нематодой. Европа (1).Паразиты передаются в виде личинок третьей стадии (L3) инфицированными самками кулицидных комаров родов Culex, Aedes и Anopheles во время приема пищи с кровью. Взрослые нематоды D. immitis обитают в легочных артериях и в правом сердце окончательных хозяев, где зрелые живородящие самки выпускают в кровоток незащищенных личинок первой стадии (микрофилярий). Первоначальные воспалительные реакции возникают в стенках легочной сосудистой сети и имеют решающее значение для патогенеза и дальнейшего развития заболевания (2).Эта хроническая и прогрессирующая инфекция может привести к летальному исходу для окончательных хозяев, а клинические сердечно-легочные заболевания были зарегистрированы у нескольких плотоядных животных, включая домашних и диких собак [например, лис, волков (3)] и кошачьих. Инфекции кошек все чаще регистрируются из районов, эндемичных по дирофиляриозу собак, но в целом отмечается низкая паразитарная нагрузка и бессимптомные инфекции. В некоторых случаях кошки могут иметь тяжелое заболевание или даже внезапную смерть даже в присутствии небольшого количества взрослых червей (4–8).В настоящее время сердечно-легочный дирофиляриоз рассматривается как развивающееся заболевание в Европе, скорее всего, из-за изменения климата, способствующего расширению промежуточных хозяев, неадекватного содержания домашних животных, вмешательства человека в окружающую среду и существования диких резервуаров (9–11).

    На данный момент имеется мало данных о реакциях врожденного иммунитета против D. immitis . Тот факт, что полиморфноядерные нейтрофилы (PMN) критически вовлечены в уничтожение и клиренс микрофилярий посредством антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности in vitro и от собак с оккультизмом D.immitis (12, 13), указывает на важную роль этого типа клеток врожденного иммунитета. PMN продемонстрировал повышенную активность окислительного взрыва и дегрануляции в ответ на опсонизированные микрофилярии (14) и прикрепился к микрофиляриям D. immitis в отсутствие иммунной сыворотки и в присутствии ивермектина (15, 16). Кроме того, инфильтрация PMN наблюдалась в различных органах и тканях, в том числе в почках и стенках артерий у инфицированных D. immitis собак (17, 18). Соответственно, было продемонстрировано, что несколько паразитарных хемотаксических факторов привлекают PMN (19).Интересно, что эндосимбиотические бактерии из рода Wolbachia , проживающие в пределах взрослых особей D. immitis (20), активируют PMN собак, что приводит к усилению продукции IL-8 (21). Что касается других филяриозных паразитов, PMN, как было показано, способствует уничтожению микрофилярий Onchocerca volvulus (без оболочки) и L3 in vitro (22, 23) и играет важную роль в раннем контроле Litomosoides sigmodontis L3 на стадиях кожа, приводящая к усилению окислительного взрыва и дегрануляции (24).

    Эффекторный механизм НЕТоза осуществляется PMN и другими иммунными клетками и приводит к высвобождению клетками гранулярных белков и хроматина после активации, образуя липкие внеклеточные волокна, способные связывать и убивать грамположительные и отрицательные бактерии, грибы, вирусы и т. простейшие / многоклеточные паразиты (25–28). До сих пор способность образовывать внеклеточные ловушки приписывалась PMN (25), тучным клеткам (29), макрофагам (30), эозинофилам (31) и моноцитам (32–34).НЕТоз в большинстве случаев опосредуется НАДФН-оксидазой (NOX) -зависимой продукцией АФК (35, 36), а эффективная экструзия нейтрофилов внеклеточной ловушки (NET) в большинстве случаев является зависимым от гибели клеток процессом. Однако о нелетальном высвобождении NET также сообщили Yousefi et al. (31, 37), которые продемонстрировали, что эозинофилы и определенные субпопуляции PMN высвобождают NET митохондриального происхождения, не умирая. Кроме того, недавние исследования подтвердили, что PMN все еще жизнеспособны и сохраняют свою способность поглощать бактерии посредством фагоцитоза даже после выполнения НЕТоза (38).

    До сих пор большинство исследований НЕТозов, запускаемых паразитами, были сосредоточены на простейших паразитах (38–45). Напротив, существует мало данных об образовании NET, инициируемом многоклеточными животными (46-50). В случае филярий сообщения о НЕТозе поступают исключительно от Brugia malayi и L. sigmodontis , в которых микрофилярии / L3 были недавно продемонстрированы как мощные триггеры НЭО, приводящие к захвату паразитов, но не убивающие in vitro (24 , 50). Стоит отметить, что взрослый D.immitis черви выживают в среднем 5 лет в пределах окончательного хозяина, высвобождая микрофилярии в кровоток (51). Однако иммунные механизмы, которые управляют толерантностью хозяина и модуляцией врожденных иммунных ответов хозяина, управляемых циркулирующими в крови микрофиляриями, еще полностью не изучены. Кроме того, отсутствуют данные о способности стадий D. immitis в качестве индукторов NET в организме собаки-хозяина.

    В этом исследовании мы показываем, что микрофилярии и L3 из D.immitis Missouri, США, значительно индуцируют образование NET и запускают различные формы NET в зависимости от стадии, способствуя дополнительным и новым реакциям врожденного иммунитета PMN собак против этого паразита.

    Материалы и методы

    Паразиты

    Для всех описанных здесь экспериментов использовался штамм D. immitis Missouri, США. Этот штамм произошел от собаки, содержавшейся в загоне для животных в Миссури в 2000 году. Начиная с 2005 года, штамм поддерживался и подвергался пассированию на гончих собаках в Университете Джорджии (Афины, Джорджия, США) (52).С 2012 года штамм поддерживался в лабораториях Bayer Animal Health, Монхайм, Германия. Здесь все процедуры с животными были одобрены местным комитетом по уходу и использованию животных и государственными органами (LANUV # 200 / A176 и # 200 / A154). Для этого исследования у четырех собак (Beagle, Marshall BioResources, двух самцов и двух самок) брали образцы микрофиляремической крови путем пункции головной вены. Микрофилярии были очищены из образцов крови в соответствии с протоколом, предоставленным Центром ресурсов исследовательских реагентов NIH / NIAID (FR3; Колледж ветеринарной медицины, Университет Джорджии, Афины, Джорджия, США) (http: // www.filariasiscenter.org/protocols/Protocols/purification-of-microfilariae-by-filtration). L3 получали путем скармливания микрофиляремической собачьей крови Aedes aegypti (черноглазый штамм Liverpool). Через пятнадцать дней после кормления L3 выделяли из инфицированных A. aegypti в соответствии с протоколом Evans et al. (52).

    Изоляция PMN собак

    Всего забор крови для выделения PMN был проведен у шести взрослых собак (Beagle, Marshall BioResources) путем пункции яремной вены.В каждую экспериментальную установку были включены по крайней мере три разных донора крови. Гепаринизированную кровь разбавляли равным количеством PBS, содержащего 0,02% EDTA, наносили слой на разделяющий раствор Biocoll ® (Biochrom AG) и центрифугировали (800 × g , 45 мин). Осадок осторожно ресуспендировали и встряхивали в 25 мл дистиллированной воды в течение 20 с для лизиса эритроцитов. Затем осмолярность регулировали, добавляя 5 мл 10-кратного солевого раствора Хенкса (HBSS, Biochrom AG). После этого PMN дважды промывали (400 × г, , 10 мин), ресуспендировали в среде RPMI, считали в камере гемоцитометра Neubauer и инкубировали при 37 ° C и 5% CO 2 в течение не менее 30 минут перед экспериментальным использованием. .

    Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ)

    PMN собак ( n = 3,5 × 10 5 ) были совместно культивированы с витальным D. immitis L3 (10 личинок / образец) или микрофиляриями (20 личинок / образец) на поли-L-лизине (Sigma-Aldrich). предварительно покрытые покровные стекла (60 мин, 37 ° C). После инкубации образцы фиксировали в 2,5% глутаровом альдегиде [60 мин, комнатная температура (RT), Merck], затем фиксировали в 1% тетроксиде осмия (Merck), промывали в дистиллированной воде, обезвоживали, сушили до критической точки CO 2. , стерилизованный золотом.После этого образцы исследовали с помощью растрового электронного микроскопа Philips XL30 в Институте анатомии и клеточной биологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене, Германия.

    NET Визуализация с помощью иммунофлуоресцентного анализа

    PMN собак ( n = 3; 2 × 10 5 /300 мкл) высевали на 15 мм обработанные поли-l-лизином покровные стекла, помещенные в 12-луночные планшеты в среде RPMI 1640 (без фенолового красного, с добавками с 1% пенициллина / стрептомицина, Sigma-Aldrich) и совместно с D.immitis microfilariae (50 личинок на лунку; 37 ° C, 5% CO 2 , 60 мин). После инкубационного периода образцы фиксировали в 4% параформальдегиде (Merck) и хранили при 4 ° C до дальнейшего использования. Структуры собачьей NET визуализировали путем окрашивания внеклеточной ДНК с помощью Sytox Orange ® (1: 1000, 15 мин, Invitrogen) в соответствии с Martinelli et al. (53). Для обнаружения гистонов, миелопероксидазы (MPO) и эластазы нейтрофилов (NE) в структурах NET были использованы следующие антитела: антигистон (h2, h3A / h3B, h4, h5) (клон h21-4, 1: 1000; Merck Millipore), анти-MPO (orb11073, 1: 1000, Byorbit) и анти-NE (AB68672, 1: 1000, Abcam).Вкратце, образцы трижды промывали PBS, блокировали 2% бычьим сывороточным альбумином (Sigma-Aldrich; 30 мин, RT) и инкубировали в растворах антител (60 мин, RT). После этого образцы трижды промывали PBS и инкубировали в растворах вторичных антител (Alexa Fluor 488 козьих антимышиных IgG или Alexa Fluor 488 козьих против кроличьих IgG, обе Life Technologies, 60 мин, 1: 1000, RT). Наконец, образцы трижды промывали PBS и помещали в буфер против выцветания (ProLong Gold Antifade Mountant ® ; Thermo Fisher Scientific).Визуализация была достигнута с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа Olympus IX81, оснащенного цифровой камерой (Olympus).

    Количественная оценка высвобождения внеклеточной ДНК

    Используя 96-луночные планшеты с плоским дном (Nunc), собачий PMN ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) совместно культивировали с микрофиляриями D. immitis (100 и 300 личинок на образец) или L3 ( 10 и 20 личинок на образец) в среде RPMI 1640 (1% пенициллин / стрептомицин, без фенолового красного) в конечном объеме 200 мкл.Параллельно PMN были предварительно обработаны ингибитором NADPH дифенилениодонием (DPI, 10 мкМ 30 мин; Sigma-Aldrich) перед воздействием микрофилярий. Чтобы устранить образование NET, использовали обработку ДНКазой I (90 Ед / образец, Roche Diagnostics). Для уничтожения, вызванного нагреванием (HI), микрофилярии или L3 инкубировали в течение 60 мин при 60 ° C. После сокультивирования в каждую лунку добавляли 3 мкМ красителя нуклеиновой кислоты Sytox Orange ® (Life Technologies, конечная концентрация), и измерения проводили каждые 30 минут в течение до 8 часов.Интенсивность флуоресценции, полученной из Sytox Orange, оценивали с помощью спектрофлуориметрического анализа при длине волны возбуждения 547 нм и длине волны испускания 570 нм с использованием автоматического монохромного ридера для планшетов (Varioskan Flash ® ; Thermo Scientific). В качестве отрицательного контроля использовали PMN в простой среде. Стимуляция PMN зимозаном (1 мг / мл; Invitrogen) служила положительным контролем.

    Анализ прикрепления и захвата

    PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) высевали на покровные стекла, предварительно покрытые поли-l-лизином, и подвергали воздействию D.immitis microfilariae (50 личинок / образец) или L3 (10 личинок / образец) в конечном объеме 200 мкл в течение 60 и 180 минут (37 ° C, 5% CO 2 ). В параллельных условиях PMN подвергали воздействию убитых нагреванием (HI) микрофилярий или предварительно обрабатывали 10 мкМ DPI (Sigma-Aldrich) в течение 30 минут перед воздействием микрофилярий. Обработка PMN 90U ДНКазой I (Fisher Scientific) в момент контакта с паразитами использовалась для растворения NET. После инкубации все образцы фиксировали (4% параформальдегида), и личинки, захваченные PMN, оценивали под микроскопом с использованием инвертированного фазово-контрастного микроскопа DMIRB ® (Leica).Личинки считались захваченными, когда к личинкам прикреплялись сети PMN и / или, полученные из PMN. Данные были выражены как процент пойманных личинок по отношению к общему количеству личинок.

    Оценка различных типов сетей

    Для количественной оценки различных типов NET PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 в дубликатах) высевали на покровные стекла, предварительно покрытые поли-l-лизином, и подвергали воздействию микрофилярий D. immitis ( 50 личинок / образец) и L3 (10 личинок / образец) в течение 60 и 180 мин (37 ° C, 5% CO 2 ).После этого образцы фиксировали (4% параформальдегид) для дальнейшего анализа. Структуры NET визуализировали путем окрашивания внеклеточной ДНК с помощью Sytox Orange ® (1: 1000, 15 мин; Invitrogen) и реагировали с антиглобальным гистоновым антителом (моноклональное антитело клона h21-4, 1: 1000; Merck Millipore) как описано ранее. После этого четыре случайно выбранных изображения из каждого экспериментального условия были проанализированы под микроскопом на основе типичных морфологических характеристик согласно Muñoz-Caro et al.(48) и Lange et al. (49): (i) «диффузные» NET ( diff NET), которые состоят из комплекса внеклеточных деконденсированных сеток хроматина, украшенных антимикробными белками глобулярной и компактной формы, определяемых размером 15-20 мкм в диаметре. , (ii) «распространенные» NET ( spr NET), состоящие из гладких и удлиненных сетчатых структур деконденсированного хроматина и антимикробных белков и состоящие исключительно из тонких волокон диаметром 15-17 мкм, и (iii) « агрегированные »NET ( agg NET), определяемые как кластеры NET-подобных структур с морфологией« клубок пряжи »и размером более 20 мкм в диаметре.Внутри каждой выборки подсчитывались все структуры с описанными характеристиками.

    Анализ убийства личинок из NET

    PMN собак ( n = 3, 2 × 10 5 ) высевали в 12-луночные планшеты для культивирования и подвергали воздействию D. immitis микрофилярий (50 личинок / образец) или L3 (10 личинок / образец) для 24, 36, 48 и 72 ч (37 ° C, 5% CO 2 ). Выживаемость личинок определяли микроскопически на основании наличия или отсутствия подвижности личинок и отслеживали с помощью видеозаписи .В качестве контрольных образцов использовали такое же количество необлученных личинок.

    Статистический анализ

    Учитывая, что данные были нормально распределены, условия совместного культивирования / стимуляции сравнивали с помощью одно- или двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с повторными измерениями. Различия считали достоверными на уровне p ≤ 0,05 и анализировали с помощью программы GraphPad Prism ® . Для анализа временной зависимости был проведен двухфакторный дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями с последующим тестом множественных сравнений Тьюки.Категорией повторных измерений было время, и значение α, чтобы считать p значимым между экспериментальными условиями, составляло 0,05. Данные были нанесены на график как среднее (стандартное отклонение).

    Результаты

    D. immitis Микрофилярии и L3 индуцируют нетоз собак во времени Анализ с помощью сканирующей электронной микроскопии показал, что воздействие на PMN собак микрофилярий D. immitis привело к быстрому и сильному образованию NET, поскольку тонкие и нитчатые, но также прочные структуры, полученные из ДНК, контактировали и захватывали эти незащищенные микрофилярии (Рисунок 1).

    Рисунок 1 . Dirofilaria immitis -индуцированное образование внеклеточной ловушки нейтрофилов (NET) проанализировано с помощью анализа с помощью сканирующей электронной микроскопии . Совместное культивирование полиморфно-ядерных нейтрофилов собак с микрофиляриями D. immitis (MF). (A) Тонкораспространенные сети, улавливающие микрофилярии. (B) Сетка агрегированных сетей ( агг сетей), улавливающих микрофилярии.

    Чтобы подтвердить классические компоненты NETs в структурах, запускаемых паразитами, был проведен анализ на основе флуоресценции.Таким образом, окрашивание Sytox Orange ® (рисунки 2A, D, G, J) подтвердило ДНК-природу внеклеточных NET-подобных структур, образованных PMN собак при воздействии паразитов D. immitis . Кроме того, исследования совместной локализации выявили одновременное присутствие MPO, NE и гистонов (h2, h3A / h3B, h4 и h5) (рисунки 2B, E, H, K) в структурах NET, индуцированных ДНК-положительными паразитами (рисунки 2C, F, I, L). Примечательно, что быстрая индукция NETs наблюдалась через на обеих стадиях, микрофиляриях и L3, поскольку соответствующие реакции были видны уже через 10 минут после совместного культивирования (изображение S1 (A и B) в дополнительном материале).

    Рисунок 2 . Иммунофлуоресцентный анализ образования внеклеточной ловушки нейтрофилов (NET), вызванного микрофиляриями Dirofilaria immitis . Эксперименты по совместной локализации внеклеточной ДНК и гистонов, миелопероксидазы (MPO) и эластазы нейтрофилов (NE) в D . immitis микрофилярий индуцированные структуры NET с использованием ДНК-маркера Sytox Orange и антигистоновых h2, h3A / h3B, h4, h5, анти-MPO и анти-NE антител. (A, D, G, J) Внеклеточная ДНК, окрашенная Sytox Orange (красный). (B) Антигистон (зеленый). (E, H) Anti-NE (зеленый). (K) Anti-MPO (зеленый). (C, F, I, L) Объединяется.

    Количественный анализ подтвердил, что и микрофилярии, и L3 значительно индуцируют образование NET в PMN собак ( p ≤ 0,01, рисунки 3A – C). Как и ожидалось, эти реакции были значительно и почти полностью устранены обработкой ДНКазой I ( p ≤ 0,001, рис. 3A). Чтобы выяснить роль NOX в НЕТозе, инициированном D. immitis , были проведены эксперименты по функциональному ингибированию с использованием DPI в качестве блокатора NOX.Здесь лечение DPI не привело к значительному снижению индуцированного микрофиляриями образования NET (рис. 3A), что позволяет предположить, что это был NOX-независимый процесс. Более того, образование NET, индуцированное микрофиляриями и L3, оказалось независимым от жизнеспособности паразита, поскольку убитые нагреванием микрофилярии (MF-HI) и L3 (L3-HI) индуцировали сопоставимые уровни NET по сравнению с необработанными стадиями паразита (Рисунки 3B). , В). Кроме того, образование NET, вызванное микрофиляриями и L3, оказалось дозозависимым, поскольку увеличенное количество паразитарных стадий не привело к значительному изменению уровня индукции NET (Фигуры 3B, C).Кинетический анализ НЕТоза, индуцированного микрофиляриями D. immitis и L3, показал зависимую от времени картину, поскольку было обнаружено, что образование НЭО все более усиливается (рис. 4A) в случае 100 микрофилярий ( p ≤ 0,05; 4 ч) и 300 микрофилярий ( p ≤ 0,05; 3 ч), а также 10 ( p ≤ 0,05; 3 ч) и 20 L3 ( p ≤ 0,05; 3 ч) (Рисунок 4B). Опять же, в этих анализах не было обнаружено зависимости от дозы.

    Рисунок 3 . Dirofilaria immitis -индуцированная дозой и жизнеспособностью и образование внеклеточной нейтрофильной ловушки (NET), не зависящее от дифенилениодония (DPI). (A) D. immitis микрофилярий (MF; 100) сокультивировали с полиморфно-ядерными нейтрофилами собак (PMN) в течение 180 мин. Для ингибирования НАДФН-оксидазы использовали предварительную обработку DPI. Чтобы устранить образование NET, в сокультуру добавляли ДНКазу I. (B) PMN собак культивировали совместно с жизнеспособными или инактивированными нагреванием микрофиляриями (MF-HI). (C) Жизненно важные и инактивированные нагреванием D. immitis L3 подвергались воздействию PMN собак. Интенсивность флуоресценции, полученной из Sytox Orange, анализировали с помощью спектрофлуориметрического анализа при длине волны возбуждения 547 нм и длине волны испускания 570 нм с использованием автоматического считывающего устройства для монохромных планшетов.В качестве отрицательного контроля использовали PMN в простой среде. PMN, стимулированные зимозаном, служили положительным контролем.

    Рисунок 4 . Зависимость от времени внеклеточных ловушек нейтрофилов, индуцированных Dirofilaria immitis . Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) совместно культивировали с микрофиляриями (A) или L3 (B) в течение 8 часов. Положительные сигналы Sytox Orange анализировали каждый час спектрофлуориметрическим анализом с использованием автоматического считывающего устройства для монохромных планшетов. (A) a: значимое различие между PMN и 100 микрофиляриями; b: значительная разница между PMN и 300 микрофиляриями. (B) a: значительная разница между PMN и 10 L3; б: достоверная разница PMN и 20 L3. Сокращение: нс, не имеет значения.

    Во всех экспериментах стимуляция зимозаном оказалась надежным положительным контролем (обработка зимозаном по сравнению с PMN в простой среде: p ≤ 0,0001). Только микрофилярии и стадии L3, а также только PMN показали почти полное отсутствие или низкие реакции в этих экспериментальных условиях, соответственно.

    D. immitis Микрофилярии и L3 индуцируют различные типы сетей

    В целом, NET могут отображаться в различных морфологических формах, то есть как диффузные NET ( diff NET), агрегированные NET ( agg NET) и спредовые NET ( spr NET). Таким образом, мы здесь проанализировали микроскопически, если микрофилярии и стадии L3 D. immitis индуцировали различные типы NET (в качестве иллюстративных иллюстраций см. Изображения S2 и S3 в дополнительных материалах).В принципе, все типы NET наблюдались в сокультурах PMN / микрофилярий (рис. 5). Количественная оценка различных типов NETs выявила, что diff, NETs и spr NETs были индуцированы обеими паразитическими стадиями, в то время как agg NETs были в основном вызваны более крупными личиночными стадиями (L3) (Рисунок 5). Эта стадия-зависимая разница была очень значимой ( агг НЕТ / микрофилярии по сравнению с агг НЕТ / L3: p ≤ 0,01). Более того, микрофилярные стадии чаще индуцировали NET spr , чем diff NET ( p ≤ 0.01) или агг NET ( p ≤ 0,001). Для образования spr NET и diff NET эти реакции оказались зависимыми от времени и значительно увеличивались с увеличением продолжительности совместного культивирования ( p ≤ 0,05) (рис. 5). Напротив, в случае L3 все формы NET были индуцированы на сопоставимых уровнях, но также продемонстрировали зависящий от времени паттерн для всех трех типов NET ( diff NET: p ≤ 0,05; spr NET и agg СЕТИ: p ≤ 0.01) (Рисунок 5).

    Рисунок 5 . Количественная оценка различных типов внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET), индуцированных стадиями Dirofilaria immitis . Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) ( n = 3, 2 × 10 5 ) мы подвергали действию микрофилярий (MF; 50 личинок) и L3 (10 личинок) на покровных стеклах, предварительно покрытых поли-L-лизином, для 1 и 3 час После фиксации проводили иммунофлуоресцентный анализ с использованием Sytox Orange в качестве ДНК-маркера вместе с антигистоновыми антителами.Типы NET ( diff, NET, spr, NET и agg, NET) были идентифицированы микроскопически и подсчитаны.

    D. immitis Этапы захвачены через сети зависящим от времени способом

    Поскольку D. immitis микрофилярий и L3 были доказаны как индукторы NET в количественных экспериментах, мы здесь проанализировали, какая часть этих личиночных стадий физически контактировала с PMN и захватывалась структурами NET. Здесь для обеих стадий наблюдалось увеличение улова паразитов во времени.Таким образом, значительное увеличение улова паразитов наблюдалось в сокультурах PMN / микрофилярий при воздействии 60 и 180 мин ( p ≤ 0,01, рис. 6A), что привело к улову личинок на 28 и 52% соответственно. Подобные реакции наблюдались для стадий L3, поскольку 62 и 95% были обнаружены захваченными через 60 и 180 минут инкубации ( p ≤ 0,05, рис. 6B). При сравнении двух личиночных стадий, L3, как правило, контактировал и улавливался в большей степени, чем микрофилярии [28% (микрофилярии) vs.62% (L3) через 60 минут и 52% (микрофилярии) по сравнению с 95% (L3) через 180 минут, оба p ≤ 0,05, Рисунок 6B]. Довольно сильный захват L3 также проиллюстрирован на Рисунке 6C1 (60 мин) и Рисунке 6C2 (180 мин). Мы также наблюдали образование сетчатых структур типа «кламмера», прилипающих, в основном, к передней части личинок (рис. 6C2, белая стрелка), и здесь мы предоставляем в качестве дополнительных данных видео с ярким полем и флюоресцентной микроскопией на стадиях L3. захвачены ДНК-положительными agg NET структурами (видео S1 в дополнительном материале).Эти наблюдения также могут быть связаны с индукцией различных типов НЭО на микрофилярных стадиях и стадиях L3. В то время как микрофилярии только индуцировали распространение и диффузию NET, L3 дополнительно запускал формирование наиболее устойчивого типа NET, то есть agNET. В особенности последний тип NET, который состоит из жестких кластеров NET-подобных структур диаметром> 20 мкм, может функционировать лучше, чем другие типы NET, в случае паразитического захвата крупных стадий паразита.

    Рисунок 6 . Dirofilaria immitis- индуцировал захват паразитов. Полиморфноядерные нейтрофилы собак (PMN) подвергались действию жизненно важных микрофилярий D. immitis (A) или L3 (B, C) в течение 60 и 180 мин. (D) В параллельных условиях такое же количество PMN инкубировали либо с термоинактивированными (HI) микрофиляриями (HI MF), либо предварительно обрабатывали дифенилениодонием (DPI) перед воздействием жизненно важных микрофилярий. Кроме того, ДНКаза I была добавлена ​​в момент воздействия жизненно важных микрофилярий.Личинки считались захваченными, когда внеклеточные ловушки нейтрофилов (NET) PMN и / или PMN находились в контакте с личинками. Данные выражены в процентах пойманных личинок по отношению к общему количеству личинок на состояние. Образование сетчатых структур типа «кламмера», прилипающих в основном к передней части личинок, показано белой стрелкой: image [ (C) , 2].

    Как и ожидалось, обработка ДНКазой I значительно снизила захват микрофилярий ( p ≤ 0.001, рис. 6D) и минимизированное прикрепление PMN, доказывая, что NET способствовали этим реакциям. В отличие от образования NET, захват личинок зависел от подвижности паразита, поскольку мертвые (термически обработанные) стадии были захвачены в меньшей степени, чем жизненно важные (52 против 38%, соответственно; p ≤ 0,05, рис. 6D). Как также сообщалось для индукции NET, лечение DPI не влияло на захват паразитов и приводило к незначительным различиям по сравнению с необработанным контролем ( p = 0,104).

    Чтобы выяснить, были ли микрофилярии D. immitis или L3 убитыми NET, выживаемость паразита контролировали в течение 72 часов с помощью микроскопического наблюдения за подвижностью личинок. В целом, ни D. immitis, ни микрофилярии, ни L3 не испытали неблагоприятного воздействия NET в течение этого периода времени, поскольку никаких различий в перемещениях паразитов по сравнению с необработанными стадиями не наблюдалось (см. L3, подвергшийся воздействию PMN через 72 часа в видео S3. в дополнительных материалах). Тем не менее, поскольку наблюдался сильный захват микрофилярий NET (см. Также видео S2 в дополнительном материале), можно предположить, что в сценарии in vivo либо инфекционность D.immitis от комаров могут быть затронуты из-за ослабленной миграционной способности этих стадий, или опосредованная иммунными клетками атака личинок внутри окончательного хозяина может быть облегчена через этой «презентации».

    Обсуждение

    В отличие от подавляющего большинства паразитических нематод, стадия D. immitis паразитирует в правых отделах сердца и кровеносных сосудах и, таким образом, постоянно находится в неблагоприятной среде, в основном состоящей из клеток врожденной и адаптивной иммунной системы (например,g., PMN, моноциты, Т-клетки и NK-клетки), факторы комплемента, антитела и цитокины / хемокины или другие растворимые факторы. Однако исследования ранних реакций врожденного иммунитета собак против этого паразита практически не проводились. Таким образом, мы проанализировали индуцированный паразитами НЕТоз как ранний эффекторный механизм PMN. Помимо микрофилярий, мы также включили D. immitis L3, поскольку эта стадия передается собаке как инфекционная. В целом, здесь мы предоставляем первые свидетельства о D.immitis -запускаемое высвобождение NET как часть ранних врожденных иммунных ответов собачьих PMN, направленных против микрофилярных стадий и стадий L3.

    NET в основном образованы деконденсированным хроматином вместе с ядерными гистонами (h2, h3A / h3B, h4 и h5) и ферментативными гранулярными компонентами, такими как нейтрофильная эластаза (NE), MPO, лактоферрин, катепсин, пентраксин, LL37 и желатиназа, среди которых другие (25, 54, 55). Таким образом, типичные характеристики NET были подтверждены здесь для D. immitis -индуцированных NET экспериментами по совместной локализации на микрофиляриях и L3-триггерном высвобождении внеклеточной ДНК, украшенной гистонами, NE и MPO.В соответствии с исследованиями на других паразитах многоклеточных животных, НЕТоз, вызываемый L3 и микрофилярией, оказался зависимым от времени (47-50, 56). В соответствии с данными по B. malayi, Haemonchus contortus, Strongyloides stercoralis и другим метастронгилоидным видам (47–50), NET растворяли в с помощью обработки ДНКазой I, тем самым доказывая ДНК-природу этих структур. Более того, мы здесь наблюдали, что термоинактивированные микрофилярии и L3 запускают NET на уровне, сопоставимом с жизненно важными, что указывает на то, что жизнеспособность или целостность паразитов не является решающим фактором для индукции NET.В отличие от B. malayi microfilariae (50), D. immitis микрофилярии и L3-индуцированный НЕТоз оказались NOX-независимыми, поскольку лечение DPI не смогло значительно ингибировать образование NET.

    В целом, стоит отметить, что микрофилярии филяриальной крови, по-видимому, индуцируют НЭО независимо от их статуса обволакивания. Микрофилярная оболочка обычно рассматривается как инструмент паразитарного происхождения для улучшения уклонения от иммунитета и, как было описано, содержит специфические для оболочки антигены (57, 58).Тот факт, что микрофилярии крови как в оболочке [ B. malayi (50)], так и без оболочки ( D. immitis , данное исследование) значительно индуцируют образование NET, поднимает вопрос о происходящих на поверхности молекулах-триггерах этих стадий. Однако до сих пор не было выявлено никаких паразитарных индуцирующих NET факторов от филяриозных паразитов. Принимая во внимание тот факт, что микрофилярии присутствуют в кровеносных сосудах и вызывают образование NET, также представляет интерес тот факт, что NET, индуцированные D. immitis, могут также оказывать неблагоприятное воздействие на окружающий эндотелий.В этом контексте недавно сообщалось об индуцированной NET эндотелиальной дисфункции и гибели эндотелиальных клеток (59–61). На сегодняшний день остается неясным, может ли образование NET, вызванное микрофиляриями, также способствовать патогенезу, связанному с D. immitis , в отношении сосудистого повреждения, прогрессирующего артериита и коагулопатий, которые до сих пор в основном относились к взрослым стадиям хронического заболевания. собачий сердечный червь.

    В отличие от предыдущих отчетов, связанных с NET о бактериях и отдельных паразитах (25, 39), но в соответствии с данными по B.malayi, S. stercoralis или H. contortus (47, 48, 50), , запускаемые D. immitis NET не способствовали уничтожению стадий паразита. Таким образом, даже после продолжительной инкубации в течение 72 часов не наблюдалось никаких летальных эффектов, опосредованных NET, что скорее свидетельствует об иммобилизационном эффекте на личиночных стадиях как ключевом механизме НЕТоза, индуцированного D. immitis . До сих пор большинство исследований, посвященных сетям, запускаемым паразитами многоклеточных животных, подчеркивают силу и эффективность захвата подвижных патогенов большого размера по сравнению с бактериями, вирусами, грибами или простейшими.Соответствующие признаки были описаны для S. stercoralis, H. contortus, Angiostrongylus vasorum, Aelurostrongylus abstrusus, Troglostrongylus brevior и B. malayi in vitro , а также in vivo (47-50), что указывает на способность PMN к распознают подвижные патогены и патогены большого размера и явно используют образование NET в качестве специфического эффекторного механизма против таких патогенов, как недавно сообщалось (62).

    NET-опосредованная иммобилизация D. immitis микрофилярных стадий действительно может повлиять на исход этой инфекции, поскольку наличие микрофилярий — помимо взрослых стадий — напрямую связано с патогенезом заболевания.Таким образом, инфекции сердечного червя у собак часто сопровождаются патологическими изменениями, вызванными комплексами антиген-антитело (например, гломерулонефрит), которые зависят от продолжительной циркуляции микрофилярий в кровотоке (17). Интересно, что циркулирующие микрофилярии запускают врожденные иммунные реакции, например, за счет CXCR2 / IL-17-зависимого рекрутирования PMN (63). В целом иммунопатология филяриозных заболеваний у людей и домашних животных сложна, и клинические проявления зависят от типа иммунного ответа хозяина, направленного против филяриатных нематод (64).Дирофиляриоз человека включает легочные гранулематозные реакции, особенно у пациентов с иммунодефицитом (9).

    Интересно, что многие виды филярий содержат облигатные бактериальные эндосимбионты ( Wolbachia ), которые, как недавно было показано, вызывают НЕТоз (65). До сих пор остается неясным, может ли НЕТоз, вызванный микрофиляриями, мешать антифилярному лечению. Эффективное лечение D. immitis инфекций у домашних собак в настоящее время основано на макроциклических лактонах для удаления циркулирующих микрофилярий из системы крови в дополнение к лечению взрослыми цидами (66).Однако, поскольку доказательства устойчивости к этому классу препаратов уже были зарегистрированы в США (67, 68), эффективная профилактика дирофиляриоза собак может оказаться под угрозой в будущем. В этом контексте сообщалось о сильной приверженности PMN к микрофиляриям B. malayi в присутствии низкой концентрации ивермектина и усиленного уничтожения микрофилярий PMN или мононуклеарных клеток периферической крови при лечении ивермектином (69–71). Интересно, что рецепторные сайты для макроциклических лактонов расположены исключительно вблизи экскреторно-секреторного (ES) аппарата, который является основным местом высвобождения микрофилярного белка (72).Белки ES хорошо известны своими иммуномодулирующими свойствами (73), позволяющими паразитам уклоняться от иммунной системы хозяина. Учитывая, что введение макроциклического лактона, по-видимому, препятствует высвобождению белка ES из микрофилярий (71), и поскольку прикрепленные NET могут также подавлять высвобождение ES из-за механических проблем, оба механизма могут способствовать улучшенному системному иммунному ответу хозяина (71). Кроме того, мы здесь постулируем, что высвобождение NET может также способствовать гибели личинок с помощью других иммунокомпетентных клеток, рекрутируемых на сайт образования NET.Предыдущие данные показывают, что, помимо PMN, другие клетки врожденного иммунитета, такие как макрофаги и моноциты, участвуют во врожденных иммунных ответах против нематодных паразитов. Хорошо известно, что филяриатные паразиты вызывают эозинофилию, и анализ крови на эозинофилы обычно используется в качестве инструмента скрининга (74). Исследования in vitro продемонстрировали способность макрофагов, активированных IFN-γ, убивать микрофилярий B. malayi (75). Кроме того, человеческий PMN также способствует летальному исходу для B.malayi microfilariae в присутствии аутологичной сыворотки in vitro и выдавливают NET в ответ на эти заключенные в оболочку микрофилярии, тем самым запутывая эти стадии (50).

    Поразительной особенностью этого исследования был тот факт, что при контакте с D. immitis наблюдались различные типы собачьих NET, т. Е. diff, NET, spr, NET и agg, NET. ловушка. Соответственно, подобное явление наблюдалось и для H.contortus — и НЭО, индуцированные легочными червями (48, 49), демонстрирующие тесную иммобилизацию L3 этими структурами НЭО. Однако, что касается L3-индуцированных agg NETs, ​​можно также предположить, что они функционируют в предотвращении собственно экскретации L3 на стадии L4 внутри окончательного хозяина и тем самым препятствуют продолжающемуся развитию D. immitis .

    Описанные здесь типы D. immitis -опосредованных NET могут быть связаны с недавно описанной способностью PMN млекопитающих воспринимать патогены малого и большого размера и выборочно высвобождать NET в ответ на крупные патогены. Branzk et al.(62). Учитывая, что особенно стадии L3, но также и микрофилярии D. immitis , представляют собой патогены большого размера, кажется очевидным, что ПЯН скорее реагируют НЕТозом, чем фагоцитозом, который будет неэффективен против крупных многоклеточных патогенов.

    В целом, здесь мы представляем новую информацию о раннем врожденном иммунном ответе хозяина, вызванном зоонозным паразитом D. immitis . Мы впервые демонстрируем, что и микрофилярии, и L3 являются мощными индукторами различных типов собачьих NET.В целом, собачьи NET не убивают паразитарные стадии, но могут способствовать их уничтожению другими лейкоцитами, циркулирующими в системе крови, как постулируется в другом месте. До сих пор остается неясным, может ли чрезмерное образование NET также иметь неблагоприятные эффекты для окончательного хозяина, такие как повреждение сосудов или коагулопатии. Следовательно, здесь мы призываем к дополнительным исследованиям не только in vivo свидетельств НЕТоза, вызванного D. immitis , но и его внутрисосудистых последствий в отношении патогенеза и исхода заболевания.

    Заявление об этике

    Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями местного комитета по уходу и использованию животных и государственными органами (LANUV # 200 / A176 и # 200 / A154).

    Авторские взносы

    CH, AT, DK, TMC и IC разработали проект и эксперименты. DK и AP изолировали, очистили и предоставили паразитов, а также кровь для этого исследования. TMC, IC, EZ и UG провели большую часть экспериментов. Рукопись подготовили TMC, AT, CH и IC.Все авторы рецензировали рукопись.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы DK и AP работают в компании Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия. Авторы заявляют, что это исследование в основном финансировалось Институтом паразитологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене, Германия, и частично поддерживалось Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия. Авторы DK и AP (сотрудники Bayer Animal Health GmbH, Леверкузен, Германия) участвовали в разработке проекта и экспериментов, выделяя, очищая и предоставляя паразитов и кровь для текущего исследования и рецензируемой рукописи.Все остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

    Благодарности

    Авторы хотели бы поблагодарить Анику Зейпп, Институт анатомии и клеточной биологии, JLU Giessen, Германия, за ее техническую поддержку в анализах с помощью сканирующей электронной микроскопии. Мы также благодарим всех сотрудников Bayer Animal Health GmbH, Германия, которые принимали участие в поддержании жизненного цикла и сбора личинок D. immitis . Кроме того, мы хотели бы поблагодарить всех сотрудников Центра ресурсов исследовательских реагентов NIH / NIAID (FR3; Колледж ветеринарной медицины, Университет Джорджии, Афины, Джорджия, США) за их поддержку и обсуждения, особенно по вопросам оптимизации протокола. поддержания жизненного цикла Dirofilaria immitis в лаборатории.

    Финансирование

    Настоящая работа финансировалась Институтом паразитологии Университета Юстуса Либиха в Гиссене и частично поддержана компанией Bayer Animal Health Care, Леверкузен, Германия.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00968/full#supplementary-material.

    Видео S1 . D. immitis L3, заключенный в структуры NETs.Видео выполнено с использованием анализа флуоресцентной микроскопии вместе с ДНК-маркером Sytox Orange для окрашивания NETs-ДНК, контактирующей с D. immitis L3.

    Видео S2 . D. immitis микрофилярий, захваченных в сети. С помощью микроскопии в светлом поле наблюдается микрофилярий D. immitis , заключенных в сети.

    Видео S3 . D. immitis L3 не уничтожаются сетями после 72 часов воздействия собачьего PMN. Используя светлопольную микроскопию, D.immitis L3 остается подвижным, захваченным в ag NET после 72 часов совместного культивирования с PMN собак.

    Изображение S1. (A, B) НЕТоз, вызванный D. immitis , после 10 мин инкубации с PMN собак. Объедините изображения на светлопольной и флуоресцентной микроскопии, полученные с помощью окрашивания ДНК Sytox Orange и антигистоновых антител.

    Изображение S2 . D. immitis микрофилярии индуцируют агг, сети и разн, сети.Как указано стрелками, образование различных типов NET демонстрируется, как видно на объединенном изображении, с использованием анализа с использованием яркого поля и флуоресцентной микроскопии с окрашиванием ДНК Sytox Orange и антигистоновыми антителами.

    Изображение S3 . D. immitis микрофилярии индуцируют spr NET. Как указано стрелками, образование различных типов NET демонстрируется, как видно на объединенном изображении, с использованием анализа с использованием яркого поля и флуоресцентной микроскопии с окрашиванием ДНК Sytox Orange и антигистоновыми антителами.

    Список литературы

    2. Фурланелло Т., Калдин А., Веццони А., Венко Л., Китагава Х. Патогенези. В: Genchi C, Venco L, Vezzoni A, редакторы. La filariosi cardiopolmonare del cane e del gatto . Кремона: SCIVAC (1998). п. 31–46.

    Google Scholar

    3. Гаврилович П., Блитва-Робертсон Г., Озвеги Дж., Кишкароли Ф., Бечкей З. Отчет о клиническом случае дирофиляриоза у серых волков в Сербии. Acta Parasitol (2014) 60 (1): 175–8. DOI: 10.1515 / ap-2015-0025

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4.Генчи К., Герреро Дж., Ди Сакко Б., Формаджини Л. В: Солл М.Д., редактор. Распространенность инфекции Dirofilaria immitis у итальянских кошек. Proceedings of the Heartworm Symposium ’92 . Батавия, Иллинойс (1992). п. 97–102.

    Google Scholar

    5. McCall JW, Calvert CA, Rawlings CA. Инфекция сердечного червя у кошек: опасное для жизни заболевание. Vet Med (1994) 89: 639–47.

    Google Scholar

    6. Аткинс К.Э., Де Франческо Т.С., Коутс Дж. Р., Сидли Дж. А., Кин Б. В..Инфекция сердечного червя у кошек: 50 случаев. JAVMA (2000) 217: 355–8.

    Google Scholar

    9. Симон Ф., Силес-Лукас М., Морчон Р., Гонсалес-Мигель Дж., Мелладо И., Карретон Е. и др. Дирофиляриоз человека и животных: возникновение зоонозной мозаики. Clin Microbiol Rev (2012) 25 (3): 507–44. DOI: 10.1128 / CMR.00012-12

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Канкрини Дж., Маги М., Габриелли С., Ариспичи М., Толари Ф., Делл’Омодарме М. и др.Естественные переносчики дирофиляриоза в сельских и городских районах Тосканы, центральная Италия. J Med Entomol (2006) 43 (3): 574–9. DOI: 10.1093 / jmedent / 43.3.574

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Генчи К., Крамер Л. Х., Риваси Ф. Дирофиляриальные инфекции в Европе. J Vector Borne Dis (2011) 11 (10): 1307–17. DOI: 10.1089 / vbz.2010.0247

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Эльсадр В.М., Айкава М., Грин Б.М.Иммунные механизмы in vitro, связанные с удалением микрофилярий Dirofilaria immitis . J Immunol (1983) 130: 428–34.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    13. Жепчик CM, епископ CJ. Иммунологические и ультраструктурные аспекты клеточно-опосредованного уничтожения Dirofilaria immitis microfliariae. Parasite Immunol (1984) 6: 443–57. DOI: 10.1111 / j.1365-3024.1984.tb00815.x

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14.Rzepczyk CM, Bishop CJ, Cheung K, Atwell R, Ferrante A. Стимуляция респираторного взрыва нейтрофилов и реакции йодирования опсонизированными микрофиляриями Dirofilaria immitis . Aust J Exp Biol Med Sci (1986) 64: 43–51. DOI: 10.1038 / icb.1986.5

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Уильямс Дж. Ф., Галиб Х. ​​В., Маккензи К. Д., Элькхалифа М. Ю., Аюя Дж. М., Крон М. А.. Прикрепление клеток к микрофиляриям Onchocerca volvulus : сравнительное исследование. Ciba Found Symp (1987) 127: 146–63.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    16. Ватта А.Ф., Дзимиански М., Стори Б.Е., Камю М.С., Мурхед А.Р., Каплан Р.М. и др. Ивермектин-зависимое прикрепление нейтрофилов и мононуклеарных клеток периферической крови к Dirofilaria immitis microfilariae in vitro . Vet Parasitol (2014) 206 (1–2): 38–42. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2014.02.004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17.Grauer GF, Culham CA, Dubielzig RR, Longhofer SL, Grieve RB. Экспериментальный гломерулонефрит, ассоциированный с Dirofilaria immitis , частично индуцированный образованием иммунных комплексов in situ в стенке капилляров клубочков. J Parasitol (1989) 75 (4): 585–93. DOI: 10.2307 / 3282910

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Форрестер С.Д., Лис Дж. Э.. Почечные проявления полисистемной болезни. В: Osborne CA, Finco DR, редакторы. Нефрология и урология собак и кошек .Балтимор, Мэриленд: Уильямс и Уилкинс (1995). п. 491–504.

    Google Scholar

    19. Horii Y, Fujita K, Owhashi M. Очистка и характеристика хемотаксического фактора нейтрофилов из Dirofilaria immitis . J Parasitol (1986) 72 (2): 315–20. DOI: 10.2307 / 3281611

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Банди С., Деревья А. Дж., Браттиг, северо-запад. Wolbachia у филяриальных нематод: эволюционные аспекты и значение для патогенеза и лечения филяриатных заболеваний. Vet Parasitol (2001) 98: 215–38. DOI: 10.1016 / S0304-4017 (01) 00432-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Bazzocchi C, Genchi C, Paltrinieri S, Lecchi C, Mortarino M, Bandi C. Иммунологическая роль эндосимбионтов Dirofilaria immitis : поверхностный белок Wolbachia активирует собачьи нейтрофилы с образованием IL-8. Vet Parasitol (2003) 117 (1–2): 73–83. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2003.07.013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22.Грин Б.М., Тейлор Х.Р., Айкава М. Клеточное убийство микрофилярий Onchocerca volvulus : эозинофилы и нейтрофил-опосредованное иммунное сывороточное разрушение. J Immunol (1981) 127: 1611–8.

    Google Scholar

    23. Brattig NW, Buttner DW, Hoerauf A. Накопление нейтрофилов около червей Onchocerca и хемотаксис нейтрофилов зависят от эндобактерий Wolbachia . Микробы заражают (2001) 3: 439–46. DOI: 10.1016 / S1286-4579 (01) 01399-5

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Пионье Н., Бротин Э., Караджян Г., Хемон П., Гайдин-Ном Ф., Валларино-Лермитте Н. и др. Мыши с нейтропенией дают представление о роли нейтрофилов, проникающих в кожу, в защитном ответе хозяина против филяриозных инфекционных личинок. PLoS Negl Trop Dis (2016) 10: e0004605. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0004605

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25.Бринкманн В., Райхард Ю., Гусманн С., Фаулер Б., Улеманн Ю., Вайс Д.С. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов убивают бактерии. Science (2004) 303: 1532–5. DOI: 10.1126 / science.10

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Урбан С.Ф., Эрмерт Д., Шмид М., Абу-Абед Ю., Гусманн С., Накен В. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов содержат кальпротектин, цитозольный белковый комплекс, участвующий в защите хозяина от Candida albicans . PLoS Pathog (2009) 5:10.DOI: 10.1371 / journal.ppat.1000639

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Narasaraju T, Yang E, Samy RP, Ng HH, Poh WP, Liew AA, et al. Избыточные нейтрофилы и внеклеточные ловушки нейтрофилов способствуют острому повреждению легких при гриппозном пневмоните. Am J Pathol (2011) 179 (1): 199–210. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2011.03.013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Эрмосилла К., Муньос Каро Т., Сильва Л.М.Р., Руис А., Тауберт А.Интригующий врожденный иммунный ответ хозяина: новая антипаразитарная защита с помощью внеклеточных ловушек нейтрофилов. Паразитология (2014) 141 (11): 1489–98. DOI: 10.1017 / S0031182014000316

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. von Köckritz-Blickwede M, Goldmann O, Thulin P, Heinemann K, Norrby-Teglund A, Rohde M, et al. Независимая от фагоцитоза антимикробная активность тучных клеток за счет образования внеклеточных ловушек. Кровь (2008) 111: 3070–80.DOI: 10.1182 / кровь-2007-07-104018

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Чоу О.А., фон Кокриц-Бликведе М., Брайт А.Т., Хенслер М.Э., Цинкернагель А.С., Коген А.Л. и др. Статины усиливают образование внеклеточных ловушек фагоцитов. Клеточный микроб-хозяин (2010) 8: 445–54. DOI: 10.1016 / j.chom.2010.10.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Юсефи С., Голд Дж. А., Андина Н., Ли Дж. Дж., Келли А. М., Козловски Е. и др.Подобное катапульте высвобождение митохондриальной ДНК эозинофилами способствует антибактериальной защите. Nat Med (2008) 14: 949–53. DOI: 10,1038 / нм 1855

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32. Муньос-Каро Т., Сильва Л.М., Риттер С., Тауберт А., Эрмосилла С. Besnoitia besnoiti тахизоиты вызывают образование внеклеточной ловушки моноцитов. Parasitol Res (2014) 113 (11): 4189–97. DOI: 10.1007 / s00436-014-4094-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    33.Райхель М., Муньос-Каро Т., Санчес-Контрерас Г., Рубио-Гарсия А., Магдовски Г., Гертнер У. и др. ПМЯ и моноциты морского тюленя (phoca vitulina) выделяют внеклеточные ловушки для захвата апикомплексного паразита Toxoplasma gondii . Dev Comp Immunol (2015) 50: 106–15. DOI: 10.1016 / j.dci.2015.02.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Грейнджер В., Фейл Д., Марани В., Ноэль Б., Галле И., Сели Н. и др. Моноциты крови человека способны образовывать внеклеточные ловушки. J Leukoc Biol (2017) 102 (3): 775–81. DOI: 10.1189 / jlb.3MA0916-411R

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35. Доуда Д.Н., Хан М.А., Грасеманн Х., Паланияр Н. Канал SK3 и митохондриальные АФК опосредуют НАДФН-оксидазно-независимый НЕТоз, индуцированный притоком кальция. Proc Natl Acad Sci U S A (2015) 112: 2817–22. DOI: 10.1073 / pnas.1414055112

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Remijsen Q, Kuijpers TW, Wirawan E, Lippens S, Vandenabeele P, Vanden Berghe T.Умереть по причине: НЕТоз, механизмы, лежащие в основе способа гибели антимикробных клеток. Разница в гибели клеток (2011) 18: 581–8. DOI: 10.1038 / cdd.2011.1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Юсефи С., Михалахе С., Козловски Е., Шмид И., Саймон Х.У. Жизнеспособные нейтрофилы высвобождают митохондриальную ДНК с образованием внеклеточных ловушек нейтрофилов. Cell Death Differ (2009) 16 (11): 1438–44. DOI: 10.1038 / cdd.2009.96

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38.Йипп Б.Г., Петри Б., Салина Д., Дженн С.Н., Скотт Б.Н., Збытнуик Л.Д. и др. Индуцированный инфекцией НЕТоз — это динамический процесс, включающий многозадачность нейтрофилов in vivo . Nat Med (2012) 18 (9): 1386–93. DOI: 10,1038 / нм 2847

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39. Guimarães-Costa AB, Nascimento MT, Froment GS, Soares RP, Morgado FN, Conceicao-Silva F, et al. Leishmania amazonensis промастиготы индуцируют и уничтожаются внеклеточными ловушками нейтрофилов. Proc Natl Acad Sci U S. A (2009) 106: 6748–53. DOI: 10.1073 / pnas.06106

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40. Берендт Дж. Х., Руис А., Занер Х., Тауберт А., Эрмосилла С. Образование внеклеточной ловушки нейтрофилов как реакции врожденного иммунитета против апикомплексного паразита Eimeria bovis . Vet Immunol Immunopathol (2010) 133: 1–8. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2009.06.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    41.Аби Абдалла Д.С., Лин Ц., Болл С.Дж., Кинг М.Р., Дюамель Г.Э., Denkers EY. Toxoplasma gondii запускает высвобождение внеклеточных ловушек нейтрофилов человека и мыши. Infect Immun (2012) 80: 768–77. DOI: 10.1128 / IAI.05730-11

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. Сильва Л.М.Р., Муньос-Каро Т., Рюдигер Дж., Вила-Висоса М.Д.М., Кортес Н., Эрмосилла Т. и др. Апикомплексный паразит Eimeria arloingi индуцирует внеклеточные ловушки нейтрофилов коз. Parasitol Res (2014) 113 (8): 2797–807. DOI: 10.1007 / s00436-014-3939-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    43. Перес Д., Муньос М.К., Молина Дж. М., Муньос-Каро Т., Сильва Л. М., Тауберт А. и др. Eimeria ninakohlyakimovae индуцирует НАДФН-оксидазозависимое образование внеклеточной ловушки моноцитов и активирует транскрипцию генов IL-12 и TNF-α, IL-6 и CCL2. Vet Parasitol (2016) 227: 143–50. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2016.07.028

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    44.Wei Z, Hermosilla C, Taubert A, He X, Wang X, Gong P и др. Высвобождение внеклеточных ловушек нейтрофилов собак, вызванное паразитом apicomplexan Neospora caninum in vitro . Front Immunol (2016) 7: 436. DOI: 10.3389 / fimmu.2016.00436

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    45. Вильягра-Бланко Р., Сильва Л.М.Р., Муньос-Каро Т., Янг З., Ли Дж., Гертнер У. и др. Полиморфноядерные нейтрофилы крупного рогатого скота бросают нейтрофильные внеклеточные ловушки против абортивного паразита Neospora caninum . Front Immunol (2017) 8: 606. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.00606

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    47. Bonne-Année S, Kerepesi LA, Hess JA, Wesolowski J, Paumet F, Lok JB, et al. Внеклеточные ловушки связаны с опосредованной нейтрофилами и макрофагами человека и мыши уничтожением личинок Strongyloides stercoralis . Микробы заражают (2014) 16 (6): 502–11. DOI: 10.1016 / j.micinf.2014.02.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    48.Муньос-Каро Т., Рубио RMC, Сильва LMR, Магдовски Г., Гертнер У., Макнейли Т.Н. и др. Образование внеклеточной ловушки, происходящей из лейкоцитов, значительно способствует захвату личинок Haemonchus contortus . Векторы паразитов (2015) 8: 607. DOI: 10.1186 / s13071-015-1219-1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    49. Ланге М.К., Пенагос-Табарес Ф, Муньос-Каро Т., Гертнер У., Мейер Х., Шапер Р. и др. Внеклеточные ловушки гемоцитов, происходящие от гастропод, захватывают метастронгилоидные личиночные стадии Angiostrongylus vasorum, Aelurostrongylus abstrusus и Troglostrongylus brevior . Векторы-паразиты (2017) 10:50. DOI: 10.1186 / s13071-016-1961-z

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    50. Маккой С.Дж., Ривз Б.Дж., Жигер С., Коутс Р., Рада Б., Вольстенхолм А.Дж. Человеческие лейкоциты убивают микрофилярий Brugia malayi независимо от высвобождения внеклеточной ловушки на основе ДНК. PLoS Negl Trop Dis (2017) 11 (1): e0005279. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0005279

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    51.Morchón R, López-Belmonte J, Bazzocchi C, Grandi G, Kramer L, Simón F. Собаки с патентом Dirofilaria immitis имеют более высокую экспрессию циркулирующих мРНК IL-4, IL-10 и iNOS, чем собаки с скрытой инфекцией. Vet Immunol Immunopathol (2007) 15: 184–8. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2006.10.004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    52. Эванс С.С., Мурхед А.Р., Стори Б.Е., Блэгберн Б.Л., Волстенхолм А.Дж., Каплан Р.М. Оценка анализа ингибирования миграции личинок для выявления устойчивости к макроциклическим лактонам у Dirofilaria immitis . Vet Parasitol (2017) 246: 76–81. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2017.09.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    53. Мартинелли С., Урошевич М., Дарьядел А., Оберхольцер П.А., Бауманн С., Фей М.Ф. и др. Индукция генов, опосредующих формирование интерферон-зависимой внеклеточной ловушки во время дифференцировки нейтрофилов. J Biol Chem (2004) 279: 44123–32. DOI: 10.1074 / jbc.M405883200

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    54.Wartha F, Beiter K, Albiger B, Fernebro J, Zychlinsky A, Normark S и др. Капсулы и D-аланилированные липотейхоевые кислоты защищают Streptococcus pneumoniae от внеклеточных ловушек нейтрофилов. Cell Microbiol (2007) 9: 1162–71. DOI: 10.1111 / j.1462-5822.2006.00857.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    55. Папаяннопулос В., Метцлер К.Д., Хакким А., Зихлински А. Нейтрофильная ладаза и миелопероксидаза регулируют образование внеклеточных ловушек нейтрофилов. J Cell Biol (2010) 191 (3): 677–91. DOI: 10.1083 / jcb.201006052

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    56. Чуа С., Джонс М.К., Берк М.Л., Оуэн Х.С., Энтони Б.Дж., Макманус Д.П. и др. Пространственная и временная транскриптомика образования гранулемы печени, индуцированного Schistosoma japonicum , выявляет новые роли нейтрофилов. J Leukoc Biol (2013) 94: 353–65. DOI: 10.1189 / jlb.1212653

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    57.Conraths FJ, Hirzmann J, Hebom G, Zahner H. Экспрессия белка микрофилярной оболочки 2 (shp2) филяриальных паразитов Litomosoides sigmodontis и Brugia malayi . Exp Parasitol (1997) 85: 241–8. DOI: 10.1006 / expr.1996.4138

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    58. Хирцманн Дж., Хинц М., Каспер Т., Шреста Р., Тауберт А., Конратс Ф. Дж. И др. Клонирование и анализ экспрессии двух муциноподобных генов, кодирующих поверхностные белки микрофилярной оболочки паразитических нематод Brugia и Litomosoides . J Biol Chem (2002) 277: 47603-12. DOI: 10.1074 / jbc.M205770200

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    59. Гупта А.К., Джоши М.Б., Филиппова М., Эрн П., Хаслер П., Хан С. и др. Активированные эндотелиальные клетки индуцируют внеклеточные ловушки нейтрофилов и чувствительны к гибели клеток, опосредованной НЕТозом. FEBS Lett (2010) 584 (14): 3193–7. DOI: 10.1016 / j.febslet.2010.06.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    60.Саффарзаде М., Юнеманн С., Кайссер М.А., Лохнит Дж., Баррето Дж., Галуска С.П. и др. Внеклеточные ловушки нейтрофилов непосредственно вызывают гибель эпителиальных и эндотелиальных клеток: преобладающая роль гистонов. PLoS One (2002) 7 (2): e32366. DOI: 10.1371 / journal.pone.0032366

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    61. Кармона-Ривера С., Чжао В., Ялаварти С., Каплан М.Дж. Внеклеточные ловушки нейтрофилов вызывают дисфункцию эндотелия при системной красной волчанке за счет активации матричной металлопротеиназы-2. Ann Rheum Dis (2014) 74 (7): 1417–24. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2013-204837

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    62. Бранцк Н., Любожемска А., Хардисон С.Е., Ван К., Гутьеррес М.Г., Браун Г.Д. и др. Нейтрофилы определяют размер микробов и выборочно высвобождают внеклеточные ловушки нейтрофилов в ответ на крупные патогены. Nat Immunol (2014) 15 (11): 1017–25. DOI: 10.1038 / ni.2987

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    63.O’Connell AE, Redding KM, Hess JA, Lok JB, Nolan TJ, Abraham D. Растворимый экстракт нематоды Strongyloides stercoralis индуцирует CXCR2-зависимый / IL-17-независимый хемотаксис нейтрофилов. Микробы заражают (2011) 13: 536–44. DOI: 10.1016 / j.micinf.2011.01.016

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    64. Симон Ф., Крамер Л. Х., Роман А., Блазини В., Морчон Р., Маркос-Аткутеги С. и др. Иммунопатология инфекции Dirofilaria immitis . Vet Res Commun (2007) 31 (2): 161–71.DOI: 10.1007 / s11259-006-3387-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    65. Tamarozzi F, Turner JD, Pionnier N, Midgley A, Guimaraes AF, Johnston KL, et al. Эндосимбионты Wolbachia индуцируют образование внеклеточной ловушки нейтрофилов при онхоцеркозе человека. Sci Rep (2016) 6: 35559. DOI: 10.1038 / srep35559

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    68. Bourguinat C, Lee ACY, Lizundia R, Blagburn BL, Liotta JL, Kraus MS, et al.Макроциклическая устойчивость к лактону у Dirofilaria immitis : неэффективность профилактических средств против сердечных червей и исследование генетических маркеров устойчивости. Vet Parasitol (2015) 210: 167–78. DOI: 10.1016 / j.vetpar.2015.04.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    69. Рао У.Р., Чандрашекар Р., Субрахманьям Д. Влияние ивермектина на сывороточно-зависимые клеточные взаимодействия с микрофиляриями Dipetalonema viteae microfilariae. Trop Med Parasitol (1987) 38 (2): 123–7.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    70. Zahner H, Schmidtchen D, Mutasa JA. Ивермектин-индуцированное уничтожение микрофилярий in vitro нейтрофилами, опосредованное NO. Exp Parasitol (1997) 86: 110–7. DOI: 10.1006 / expr.1997.4160

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    72. Морено Ю., Набхан Дж. Ф., Соломон Дж., Маккензи К. Д., Гири Т. Г.. Ивермектин нарушает функцию выделительно-секреторного аппарата микрофилярий Brugia malayi . Proc Natl Acad Sci U S A (2010) 107 (46): 20120–5. DOI: 10.1073 / pnas.1011983107

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    73. Olgilvie BM, Wilson RJM. Уклонение паразитов от иммунного ответа. Br Med Bull (1976) 32 (2): 177–81. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.bmb.a071352

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    74. Муссо Д. Актуальность анализа крови на эозинофилов при банкрофтиловом филяриатозе как скрининговом инструменте лечения. Pathog Glob Health (2013) 107 (2): 96–102. DOI: 10.1179 / 2047773213Y.0000000083

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    75. Тейлор М.Дж., Кросс Х.Ф., Мохаммед А.А., Деревья А.Дж., Бьянко А.Е. Чувствительность микрофилярий Brugia malayi и Onchocerca lienalis к оксиду азота и перекиси водорода в бесклеточной культуре и от IFN-γ-активированных макрофагов. Паразитология (1996) 112: 315–22. DOI: 10.1017 / S0031182000065835

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Обращение с Dirofilaria immitis у импортированной собаки

    Dirofilaria immitis — это филяриозный сердечный червь, в основном псовых, но также он может инфицировать хорьков и кошачьих.Это серьезная причина сердечных заболеваний и бронхита у инфицированных домашних животных. Передача происходит через кормление инфицированными комарами, с острыми клиническими признаками, возникающими в результате миграции личинок в легочную артерию, что может привести к тромбоэмболии, кавальному синдрому и последующей легочной гипертензии. Гибель глистов также может привести к анафилаксии и тромбоэмболии. Типичные результирующие острые клинические признаки включают внезапную смерть, анорексию, слабость, одышку, яремный пульс и слабый бедренный пульс, анемию, гемоглобинурию, рвоту и, в редких случаях, плевральный выпот.Также могут развиваться хронические сердечные и респираторные симптомы. Хронические респираторные симптомы чаще встречаются у кошек.

    Хотя D. immitis не является эндемичным в Великобритании, все больше инфицированных собак-спасателей импортируется из эндемичных стран. У некоторых из них уже была диагностирована инфекция, и новые владельцы в Великобритании получают различные отчеты о том, насколько серьезной может быть инфекция, путем перераспределения благотворительных организаций. Другие не будут знать, что инфекция присутствует. Важно, чтобы инфекция была диагностирована быстро, чтобы можно было принять решение с владельцами относительно вариантов лечения и обсуждения прогноза.Хотя комары-переносчики являются эндемичными в большинстве европейских стран, включая Великобританию, более холодный климат в Северной Европе не позволил сердечному червю стать эндемичным. Это связано с тем, что взрослый комар не живет в более холодном климате достаточно долго, чтобы сердечный червь мог завершить свой жизненный цикл. В результате в настоящее время шансы появления D. immitis в Великобритании малы. Однако изменение климата привело к распространению паразита на север, что повышает вероятность того, что, если эта тенденция сохранится, эндемические очаги могут образоваться на юге Англии.Поэтому ветеринарные специалисты также должны знать о возможности заражения собак, импортированных из эндемичных стран, чтобы снизить воздействие переносчиков комаров в Великобритании.

    Диагноз

    Тщательное клиническое обследование импортированных домашних животных выявит клинические признаки, которые затем можно будет сравнить с распространенными экзотическими паразитарными заболеваниями в странах, которые посещало домашнее животное. Если эти признаки указывают на возможное сердечно-сосудистое или респираторное заболевание, то инфекцию сердечного червя следует рассматривать как дифференциальную.Однако все импортированные собаки должны быть проверены на инфекцию сердечного червя, даже если они уже были проверены перед импортом, если только лабораторные данные или тесты не могут быть проверены. Тесты различаются по чувствительности и специфичности, и вероятность пропуска инфекции можно оценить только в том случае, если можно установить пригодность и надежность используемого теста. За исключением серологии, тестирование выявляет наличие взрослых червей, которые достигают зрелости через шесть месяцев после заражения. Следовательно, тестирование следует повторить через шесть месяцев после прибытия в Великобританию, если только собака не находилась в стране более шести месяцев при первоначальной презентации.Если пациент здоров, можно отложить тестирование до истечения шести месяцев.

    Тесты, помогающие в диагностике, включают:

    • Исследование крови на микрофилярии — прямые мазки — это очень специфический тест в опытных руках, но он также нечувствителен. Методы концентрации, такие как модифицированный тест Кнотта, делают прямое исследование крови более чувствительным у собак и помогают количественно определить количество циркулирующих микрофилярий и обнаружить микрофилярий других филароидных нематод, таких как Dirofilaria repens .При обнаружении микрофилярий следует отличать личинок от D. repens (таблица 1), которые также будут присутствовать в эндемичных странах. Некоторые британские лаборатории теперь предлагают модифицированный тест Knott’s в качестве теста, избавляя от необходимости идентифицировать микрофилярии на практике, что может быть затруднительно.
    • Ультразвуковое исследование — кутикулы взрослых сердечных червей имеют высокую эхогенность, поэтому в опытных руках эхокардиография может быть очень чувствительной и специфичной. Это может быть полезно для определения бремени взрослых глистов.
    • Серологический анализ антигена — это считается золотым стандартом для живых собак.Он очень специфичен и очень чувствителен у собак. Чувствительность возрастает по мере увеличения количества гельминтов у взрослых самок, при этом тест выявляет антигены в секрете матки.
    • Серология на антитела — положительные результаты серологии на антитела указывают только на прошлое или настоящее воздействие инфекции, которая будет обычным явлением у собак, живущих в эндемичных странах. Следовательно, это менее подходящий скрининговый тест, и его следует интерпретировать в связи с клиническими признаками и другими диагностическими тестами
    ТАБЛИЦА (1) Дифференциальные диагностические признаки Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens микрофилярий в крови собак

    Лечение и профилактика

    Лечение инфекции, вызванные взрослыми глистами, требуют хирургического удаления или лечения взрослыми глистами.Внутрисосудистые ловушки и щипцы часто используются в эндемичных странах для удаления глистов наименее инвазивным способом.

    Эхокардиографическая визуализация большого количества глистов в легочной артерии позволяет использовать гибкие щипцы из крокодиловой кожи под рентгеноскопическим контролем для удаления глистов, избегая при этом легочной тромбоэмболии. Однако эти методы требуют опыта и специального оборудования, и в результате большинству британских ветеринаров потребуется медицинский подход к лечению взрослых глистов.

    Перед началом лечения следует определить микрофилярную нагрузку с помощью модифицированного теста Кнотта, поскольку высокая нагрузка увеличивает риск анафилаксии. Также следует установить размер нагрузки для взрослых, поскольку большое количество глистов увеличивает риск обструкции и тромбоэмболии. Это вариант избежать риска осложнений лечения, если инфицированные собаки субклинически и имеют очень низкую нагрузку на гельминтов. Однако существует риск сердечных заболеваний или тромбоэмболии, поскольку глисты стареют и умирают, а риск осложнений от лечения относительно невелик, если бремя болезни невелико, а пациент здоров.Риск фатальных осложнений возрастает по мере увеличения количества червей, если клиническое заболевание прогрессирует или присутствует заболевание, вызванное сопутствующими инфекциями, такими как Leishmania infantum или Ehrlichia canis . Прогноз и осложнения лечения, а также его стоимость и продолжительность должны быть обсуждены с клиентами перед его проведением.

    Существует риск развития сердечных заболеваний или тромбоэмболии по мере старения и смерти глистов.

    Собаки со значительными клиническими признаками сердечного червя должны быть стабилизированы перед применением взрослогоубицида.Это может потребовать введения глюкокортикостероидов, диуретиков, вазодилататоров, положительных инотропных средств и инфузионной терапии.

    Лечение взрослыхицидов состоит из первоначального лечения доксициклином и макроциклическими лактонами до лечения взрослыхицидов. Доступны разные протоколы, но типичный пример:

    • День 1 — доксициклин 10 мг / кг 2 раза в сутки или 2 раза в день в течение 30 дней
    • Профилактика сердечных гельминтов (макроциклический лактон) на 0 и 15 день
    • День 30 — дигидрохлорид меларсомина 2.5 мг / кг внутримышечно (IM)
    • День 60 и 61 — дигидрохлорид меларсомина 2,5 мг / кг IM

    Затем через 30 дней после лечения пациент должен пройти тест на микрофилярии, а через шесть месяцев после лечения — провести серологическое исследование антигена. Доксициклин используется для уничтожения бактериальной инфекции Wolbachia , обитающей в сердечных червях. Черви и бактерии имеют обязательные симбиотические отношения, и обработка Wolbachia доксициклином делает червей более восприимчивыми к лечению (Kramer et al., 2011). Появляется все больше доказательств того, что после лечения доксициклином можно подождать месяц до того, как элитицид будет полезен для уничтожения взрослых глистов. Если это должно быть включено в протокол лечения, то макроциклический лактон следует вводить на 30-й день вместо 15-го, а взрослые циды — на 60-й, 90-й и 91-й дни.

    Преднизон имеет некоторое преимущество в снижении риска тромбоэмболических осложнений Наряду с лечением от взрослыхубийств в случаях высокого заражения гельминтами (Dzimianski et al., 2010). Если есть подозрение на наличие глистов, можно использовать преднизолон перорально с самого начала лечения взрослоубийством в дозе 0,5 мг / кг два раза в день в течение одной недели и 0,5 мг / кг один раз в день в течение второй недели, а затем по 0,5 мг / кг каждые две недели. день в течение двух недель. Эти дозы также полезны при лечении симптомов бронхита. Нет никаких доказательств того, что аспирин оказывает какое-либо защитное действие против тромбоэмболии у сердечных гельминтов во время лечения.

    Тремя наиболее значительными факторами, влияющими на осложнения после лечения взрослыхубийств, являются тяжесть существующего легочного сосудистого заболевания, количество присутствующих глистов и уровень физической нагрузки.Из этих трех наиболее значительным считается чрезмерная физическая нагрузка (Fukami et al. , 1998). Поэтому во время лечения следует ограничить физические упражнения, начиная с 0 дня и по крайней мере до одного месяца после последней инъекции взрослогоицида. Это снизит риск тяжелой тромбоэмболии. Сердечно-сосудистые заболевания можно оценить с помощью рентгенографии и ультразвукового исследования, а бремя взрослого здоровья грубо оценивается с помощью ультразвукового исследования. Тем не менее, ликвидация взрослых глистов остается приоритетной задачей даже у пациентов с высоким риском, хотя у пациентов без острой болезни есть возможность попытаться стабилизировать сердечные и легочные симптомы с помощью поддерживающего лечения до начала лечения взрослоубийством.Период самого высокого риска осложнений от тромбоэмболии легочной артерии составляет от 7 до 10 дней после лечения взрослоубийством, но может возникать и до четырех недель после завершения лечения от взрослыхицида.

    Альтернативным лечением, которое позволяет избежать использования меларсомина для взрослыхубийств, является режим «медленного уничтожения». Его не следует использовать в качестве лечения первого выбора, поскольку он связан с развитием резистентности (Bowman et al. , 2012) и несет определенный риск анафилаксии из-за уничтожения микрофилярий в результате активной инфекции в течение длительного времени. промежуток времени.Это особенно верно, когда в кровотоке присутствует большое количество микрофилярий. При использовании этого метода также не снижается риск тромбоэмболии. Поэтому его следует использовать только в том случае, если операция не показана или нецелесообразна, а меларсомин недоступен или недоступен.

    Протокол:

    • Доксициклин от 10 до 20 мг / кг один раз в день или два раза в день в течение 30 дней
    • Ивермектин в минимальной дозе от 6 до 12 мг / кг в месяц или моксидектин для местного применения 2,5 мг / кг в месяц до двух последовательных отрицательных результатов теста на антиген после 12 месяцев

    В соответствии с этим протоколом также рекомендуется ограничение физических упражнений от начала лечения до устранения инфекции.

    Владельцы, усыновившие инфицированных собак, должны знать о рисках продолжающейся инфекции и вариантах лечения

    Заключение

    Сердечный червь — серьезная и потенциально смертельная инфекция собак, и владельцы, усыновившие инфицированных собак, должны знать о рисках заражения. текущая инфекция и варианты лечения. Многие владельцы будут принимать новых домашних животных из эндемичных стран, не подозревая, что они инфицированы, и быстрая диагностика и распознавание соответствующих клинических признаков имеют важное значение как для благополучия отдельной собаки, так и для минимизации риска заражения британскими комарами заражения паразитом в почве. будущее.Несмотря на то, что существует риск смертельных осложнений как в результате инфекции, так и в результате лечения, многие собаки будут полностью выздоравливать, если факторы риска осложнений будут тщательно учтены, количество глистов будет низким, а клиническое заболевание не продвинется вперед.

    Легочные проявления Dirofilaria immitis (собачий сердечный червь) у человека | Европейский журнал кардио-торакальной хирургии

    Абстракция

    Собачий сердечный червь или Dirofilaria immitis иногда может инфицировать человека.Мы представляем случай 36-летней балканской женщины, направленной к нам для торакоскопической биопсии четко определенной легочной массы. Последний был торакоскопически резецирован и при гистопатологическом исследовании оказался обусловлен Dirofilaria immitis . Насколько нам известно, это второй зарегистрированный случай в Западной Австралии, первый из которых сообщил Brine et al. [1]. Распространенность болезни в Австралии была признана в 1969 году в одном исследовании в штате Квинсленд, где было показано, что 12% из 761 собаки в одной ветеринарной клинике и 20% из 296 собак в другой были инфицированы. Dirofilaria immitis находится в правом желудочке и легочных артериях собак [2]. Микрофилярии попадают в кровоток и передаются вторичным хозяевам комарами.

    1 История болезни

    Наш пациент — здоровая 36-летняя женщина, уже несколько лет живущая в Австралии. Она обратилась к своему терапевту с жалобами на плевритную боль в груди, которая длилась несколько недель. Последующий рентген грудной клетки показал четко выраженное помутнение в верхней доле правого легкого.В прошлом у нее не было серьезной истории болезни. Биохимия крови не выявила анемии (гемоглобин 140 г / л, количество эритроцитов 4,4 × 10 / л). ни эозинофилия (0,08 × 10 / л). Компьютерная томография грудной клетки (рис.1). подтвердили наличие очагового поражения в правой верхней доле легкого. Других патологических находок не обнаружено. Две попытки диагностической тонкоигольной биопсии оказались безуспешными из-за недостаточного количества образцов для гистопатологического исследования. Впоследствии пациент был направлен к нам на торакоскопическую биопсию поражения.

    Рис. 1

    Компьютерная томография грудной клетки, показывающая поражение (стрелка) в правой верхней доле.

    Рис. 1

    Компьютерная томография грудной клетки, показывающая поражение (стрелка) в правой верхней доле.

    При торакоскопии мы обнаружили твердый узелок с четкими границами, расположенный на вершине правой верхней доли. Макроскопическое исследование показало, что размер поражения составляет 20 × 25 × 20 мм. В этом месте верхушка прилегала к грудной стенке.

    Выполнена торакоскопическая резекция клина с помощью автоматического сшивающего аппарата.Узелок с окружающим его примерно 1 см легочной ткани был удален. Микроскопические срезы (рис. 2) показали наличие дегенеративных гельминтов диаметром от 120 до 180 мкм, присутствующих в артериях в зоне инфаркта легкого и окруженных гранулематозной реакцией. Они соответствовали Dirofilaria immitis . Через 6 месяцев пациент чувствовал себя хорошо, рецидивов заболевания на тот момент не было.

    Рис.2

    Гистологический срез, показывающий профили Dirofilaria (стрелка) в просвете артерии (острие стрелки) в инфаркте легкого. (Увеличение 200 ×) (окраска гематоксилином и эозином).

    Рис. 2

    Гистологический срез, показывающий профили Dirofilaria (стрелка) в просвете артерии (острие стрелки) в инфаркте легкого. (Увеличение 200 ×) (окраска гематоксилином и эозином).

    2 комментария

    Дирофиляриальные инфекции хорошо известны ветеринарам [3]. Д . immitis — филяриальная нематода, основным хозяином которой является собака. Заболевание передается от комаров людям, которые являются вторичными хозяевами. Хотя редко, частота дирофиляриальной инфекции, по-видимому, увеличивается [4]. Более того, сходство заболевания с туберкулезом и сложность его диагностики предполагает, что истинная заболеваемость выше, чем сообщалось. Хотя большинство сообщений на сегодняшний день касается передачи вируса от собак, поступали сообщения об инфицировании человека от кошек, енотов, медведей и дикобразов.В регионах, где распространены паразитемии у собак, можно ожидать, что заболеваемость будет выше.

    У инфицированной собаки взрослая самка находится в правом желудочке, где она выпускает тысячи микрофилярий в кровоток. Комар-переносчик, который питается инфицированной собакой, передает микрофилярии другим собакам или вторичным хозяевам, которыми они питаются. У собак микрофилярии мигрируют в подкожную клетчатку и мышечную оболочку, где они созревают и впоследствии транспортируются к сердцу.Похожая схема передачи была предложена для человека. Достигнув сердца человека, червь смывается в легочную артерию, что приводит к эмболизации одного из притоков.

    Черви, изолированные от людей до настоящего времени, постоянно не развивались. Это предполагает, что окружающая среда человека не подходит для распространения паразитического цикла, подразумевая, что черви не достигают беременной формы у человека. Сообщалось об исключениях из этого правила. Boreham et al. [2] предположили, что в то время как D . immitis обычно не выживает в подкожной клетчатке человека, иногда он может развиться в зрелого червя. Кроме того, Beaver et al. [5] сообщили о беременной форме D . immitis у пациента с ослабленным иммунитетом, страдающего лимфолейкозом.

    У большинства пациентов дирофиляриоз протекает бессимптомно. При наличии наиболее частыми симптомами являются кашель, боль в груди, кровохарканье, эозинофилия и лихорадка. Проявление обычно представляет собой сферический субплевральный инфаркт из-за эмболизации червя в ветвь легочной артерии.Обычно существует самоограничивающаяся гранулематозная реакция, которая, как предполагается, вызвана токсинами, выделяемыми мертвым червем. Очаговый инфаркт появляется на рентгенограмме в виде плоского очага. В то время как другие виды Dirofilaria были зарегистрированы в других местах у человека D . immitis был зарегистрирован в основном в легких. Takeuchi et al. Сообщили о внелегочном местонахождении Dirofilaria . [6] в сердце и полой вене, а также Beaver et al. [7], в указательный палец.Moorhouse [8] в 1978 г. сообщил о двух случаях внутриглазной локализации, из которых были изолированы незрелые филярииды. Кроме того, внелегочные инфекции с незрелыми червями, извлеченными из орбиты и брюшной полости двух пациентов соответственно, которые были морфологически неотличимы от D . Сообщалось о immitis [9].

    Диагностика заболевания до операции затруднена. Попытки идентифицировать инфицированных пациентов, включая серологию и кожные пробы, не увенчались успехом.Хотя они могут быть использованы, эти тесты являются спорными, поскольку они не оценивают само поражение легких. Последнее по-прежнему требует иссечения или открытой биопсии.

    Не сообщалось о радиологических, цитологических и бронхоскопических исследованиях для установления окончательного диагноза. Предоперационная диагностика дополнительно осложняется предположением, что Dirofilaria может находиться в тканях человека в течение многих лет, не вызывая реакции хозяина. Однако последнее было оспорено Сантамарией и соавт.[10], которые сообщили об использовании иммуноферментного анализа для идентификации штамма Dirofilaria с реактивностью, аналогичной таковой D . immitis кроличья иммунная сыворотка, которая присутствовала в подкожной клетчатке двух пациентов.

    Заболевание, хотя и не представляет серьезной угрозы для человека, имеет важное медицинское значение из-за дифференциальной диагностики с другими четко определенными легочными поражениями, такими как туберкулез, грибковые инфекции, карцинома и гамартомы.В случаях поражения монетами, которые трудно оценить до операции, следует проявлять осторожность при планировании обширной торакотомии. Диагностическая торакоскопия для выявления доступных поражений, по-видимому, является вмешательством выбора в этих случаях.

    Авторы выражают благодарность миссис Мартиа Харнесс, отдел кардиоторакальной хирургии, больница Фримантла, за помощь в подготовке этой рукописи.

    Список литературы

    [1],,.

    Легочный дирофиляриоз — случай в Западной Австралии

    ,

    Med J Aust

    ,

    1971

    , vol.

    2

    (стр.

    1238

    1241

    ) [2],. ,

    Дирофиляриоз у человека

    ,

    1988

    Бока-Ратон, Флорида

    CRC Press

    (стр.

    217

    234

    ) [3],,. ,

    Труды симпозиума по сердечным червям

    ,

    1978

    Bonner Springs, KS

    Veterinary Medicine Publishing Co

    [4],,,,,,,,.

    Легочный дирофиляриоз: отличный имитатор метастатической опухоли легкого

    ,

    Hum.Патол.

    ,

    1989

    , т.

    20

    (стр.

    69

    76

    ) [5],,.

    Легочный дирофиляриоз: сообщалось о повторном исследовании гельминтов

    ,

    Am J Trop Med Hyg

    ,

    1990

    , vol.

    43

    2

    (стр.

    167

    169

    ) [6],,,,,,,.

    Инфекция человека, вызванная Dirofilaria immitis : сообщение о случае инфицирования сердца и нижней полой вены

    ,

    Am J Trop Med Hyg

    ,

    1981

    , vol.

    30

    5

    (стр.

    966

    969

    ) [7],,.

    Дирофилярия с указательного пальца мужчины в Коста-Рике

    ,

    Am J Trop Med Hyg

    ,

    1986

    , vol.

    35

    5

    (стр.

    988

    990

    ) [8].

    Dirofilaria immitis: причина внутриглазной инфекции человека

    ,

    Инфекция

    ,

    1978

    , т.

    6

    4

    (стр.

    192

    193

    ) [9],,.

    Внелегочные инфекции, подобные Dirofilaria immitis, в западном полушарии

    ,

    Am J Surg Pathol

    ,

    1996

    , vol.

    20

    3

    (стр.

    299

    305

    ) [10],,,,,.

    Серологическая диагностика подкожного дирофиляриоза

    ,

    Clin Exp Dermatol

    ,

    1995

    , vol.

    20

    1

    (стр.

    19

    21

    )

    Elsevier Science B.V.

    Dirofilaria immitis | Американская ассоциация ветеринарных паразитологов

    Dirofilaria immitis (Leidy, 1856) Railliet & Henry, 1911

    Рисунки с 4-52 по 4-56)

    ЭТИМОЛОГИЯ: Диро = dread + filaria = нить вместе с immitis = ????????

    СИНОНИМЫ: Filaria sanguinis Cobbold, 1869; Dirofilaria louisianensis Faust, Thomas, and Jones, 1941.

    ИСТОРИЯ: Сердечный червь издавна известен как болезнь собак-хозяев. Отто (1974) проанализировал историю случаев заболевания кошек с 1921 года и на тот момент перечислил 12 случаев заражения кошачьим глистом в Соединенных Штатах, и он предполагает, что относительная частая встречаемость червя у кошек снижает его вероятность. считается ненормальным хозяином для этого паразита. В последние годы становится все более и более очевидным, что, если распространенность среди собак в определенной области достаточно высока, велика вероятность того, что некоторый процент кошек также будет инфицирован.Кошка может быть относительно часто инфицирована этим паразитом, но неспособность кошки поддерживать большое количество червей или явных инфекций свидетельствует о том, что в биологии этого паразита собака и другие собаки являются хозяевами, имеющими истинное значение для поддержания инфекционных заболеваний. фокусы по всему миру.

    ГЕОГРАФИЧЕСКОЕ МЕСТОПОЛОЖЕНИЕ: Отто (1974) приводит случаи заболевания кошек из США на Гавайях, Бразилии, Филиппинах, Таити, Новой Гвинее, Индонезии, Китае и Японии.Со времени этого отчета были описаны дополнительные случаи в Соединенных Штатах и ​​во всем мире, например, в Италии (Venco et al., 1999), Австралии (Kendall et al., 1991), Тайване (Fei and Mo, 1997). ), Индии (Patnaik, 1989), Японии (Roncalli et al., 1998) и Бразилии (Labarthe et al., 1997)

    РАЗМЕЩЕНИЕ У ХОЗЯИНА: У кошек глисты обычно извлекались из правого желудочка и легочной артерии. У кошек черви также могут появляться на эктопических участках.Сообщалось о нескольких случаях, когда сердечные черви были извлечены из мозга кошек при вскрытии (Ader 1979, Cusick et al., 1976, Doahoe and Holzinger, 1974, и Fukushima et al., 1984, Lindquist and Winters, 1981).

    ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПАРАЗИТА: Взрослых червей относительно легко идентифицировать из-за их размера и расположения в хозяине. Длинных белых червей очень легко распознать, если их удалить с кошки хирургическим путем или при вскрытии. К сожалению, с точки зрения диагноза, кошки, как правило, не имеют циркулирующих микрофилярий (рис. 4-52.), поэтому проверить наличие инфекции путем анализа крови затруднительно. Однако недавно разработанные наборы для обнаружения антигенов позволяют обнаруживать инфекции у кошек, пока в них присутствуют женские черви (Atkins, 1999). Антиген, циркулирующий в крови хозяина, представляет собой маточный антиген, продуцируемый женскими особями глистов, поэтому, если присутствуют только мужские особи, циркулирующий антиген не будет.

    ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ: Жизненный цикл кошки довольно хорошо имитирует цикл жизни собаки; однако кошки, как правило, не поддерживают примерно такое же количество червей и в значительной степени невосприимчивы к инфекции (Zanotti and Kaplan, 1989).Кошки, экспериментально инфицированные Dirofilaria immitis личинки третьей стадии (рис. 4-53 и 4-54), по-видимому, вырабатывают определяемые уровни циркулирующего антигена немного позже, чем можно было бы ожидать у собак (Mansour et al., 1995). Кошки обычно поддерживают от одного до трех взрослых червей, хотя в различных экспериментальных условиях кошки могут переносить больше червей (Stewart et al., 1992).

    КЛИНИЧЕСКОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ И ПАТОГЕНЕЗ: Кошки с более типичным проявлением инфекции сердечного червя будут иметь признаки респираторного или желудочно-кишечного заболевания.К таким признакам относятся одышка, кашель, систолический шум, рвота, анорексия, дисфагия, диарея или обморок (Malik et al, 1998). Это будут признаки, ожидаемые у животных с хронической инфекцией. У кошек с острым началом болезни признаки глистов связаны либо с сердечно-сосудистой системой, либо с эктопическими участками. Когда они связаны с сердечно-сосудистой системой, симптомы могут быть связаны с обструкцией легочной артерии, пневмотораксом или хилотораксом (Birchard and Bilbrey, 1990; Smith et al., 1998). Когда черви попадают в эктопические места, такие как кожа (Dillon et al., 1987) или мозг (рис. 4-55 и 4-46), признаки, связанные с инфекцией, будут связаны с системой органов, поврежденной мигрирующими червями. . Рентгенография и эхокардиография являются полезными инструментами в диагностике сердечного червя у кошек (Venco et al., 1998).

    ЛЕЧЕНИЕ : В настоящее время обычно рекомендуется лечить кошек симптоматической терапией, потому что лечение взрослыхицидов с использованием тиацетарсамида или меласормина, как считается, подвергает кошку риску внезапной смерти (Atkins, 1999; Malik et al., 1998). Хирургическое удаление сердечных гельминтов из правого предсердия кошек с использованием извлекающих щипцов корзиночного типа с катетером также является успешным, особенно когда черви визуализируются во время удаления с помощью ультразвукового исследования (Borgarelli et al., 1997).

    ЭПИЗООТИОЛОГИЯ: Эпизоотология сердечного червя у кошек, кажется, имитирует эпизоотологию болезни собак. Возможно, другие виды комаров, отличные от тех, которые обычно кусают собак, более важны в передаче инфекции кошкам (Borgarelli et al., 1997)), однако в этой области необходимо проделать большую работу.

    ОПАСНОСТИ ДЛЯ ДРУГИХ ЖИВОТНЫХ: Сердечные черви у кошки могут заразить другого хозяина только через передачу через промежуточного хозяина-комара. Тот факт, что кошки редко бывают микрофиляремией, предполагает, что они играют очень небольшую роль в качестве резервуаров для этой инфекции.

    ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА: Инфекции у людей иногда возникают из-за собачьего сердечного червя, но, чтобы заразиться, человек должен быть укушен комаром, инфицированным сердечным червем.Тот факт, что кошачьи черви являются плохими продуцентами микрофилярий, указывает на то, что заражение кошек не представляет большого риска для владельцев.

    КОНТРОЛЬ / ПРОФИЛАКТИКА: Профилактика заражения сердечным червем у кошек теперь может быть легко введена путем ежемесячного введения нескольких продуктов, ивермектина и селамектина, которые способны предотвратить эту инфекцию у кошек.

    ССЫЛКИ:

    Адер П. 1979. Сердечный червь ( Dirofilaria immitis ) в мозге кошки — обзор и отчет о болезни.Calif Vet, ноябрь, стр. 23-25.

    Аткинс С. 1999. Диагноз заражения сердечным червем у кошек. ИААХА 35: 185-187.

    Birchard SJ, Bilbrey SA. 1990. Хилоторакс, связанный с дирофиляриозом у кошек. ЯВМА 197: 507-509.

    Borgarelli M, Venco L, Piga PM, Bonino F, Ryan WG. 1997. Хирургическое удаление сердечных гельминтов из правого предсердия кошки. ЯВМА 211: 68-69.

    Кьюсик П.К., Тодд К.С., Блейк Дж. А., Дейли В. Р.. 1976. Dirofilaria immitis в мозгу и сердце кошки из Массачусетса.ИААХА 12: 490-491.

    Диллон А. Р., Браунер В. Р., Грив Р. Б., Бакстон-Смит Б., Шульц Р. Д.. 1987. Хронические эффекты экспериментальной инфекции Dirofilaria immitis у кошек. Семинары Vet Med Surg (Small Anim) 2: 72-77.

    Донахью JMR, Holzinger EA. 1974. Dirofilaria immitis в мозге собаки и кошки. ЯВМА 164: 518-519.

    Fei CYand Mo KM. 1997. Исследование эндопаразитарных зоонозов у ​​бездомных собак и кошек в городе Тайбэй. J Chin Soc Vet Sci 23: 26-33.

    Fukushima K, Hutsell D, Patton S, Patton CS. 1984. Аберрантный дирофиляриоз у кошек. ЯВМА 184: 199-201.

    Кендалл К., Коллинз Г. Х., Поуп С. Е.. 1991. Dirofilaria immitis у кошек из Внутреннего Сиднея. Aust Vet J 68: 356-357.

    Labarthe N, Lúcia Serrão, Melo YF, de Oliveira SJ, Lourenço-de-Oliveira. 1998. Частота комаров и их пищевые привычки в районе энзоотического дирофиляриоза собак в Нитерой, штат Рио-де-Жанейро, Бразилия. Mem Inst Oswald Cruz 93: 145-154.

    Линдквист В.Д., Винтерс К.Д. 1981. Церебральный дирофиляриоз кошек. Скверна Практик 11: 37-40.

    Малик Р., Church DB, Eade IG, 1998. Обморок у кошки. Aust Vet J 76: 465-471.

    Mansour AE, McCall JW, McTier TL, Supakorndej N, Ricketts R. 1995. Эпидемиология дирофиляриоза кошек. Инфекции, вызванные имитацией естественного воздействия Aedes aegypti , экспериментально инфицированных сердечными червями. Proc Heartworm Sympos ‘95, Оберн, Алабама. С. 87-95.

    Otto GF.1974. Появление сердечного червя в необычных местах и ​​у необычных хозяев. Proc Heartworm Sympos, стр. 6-13.

    Patnaik MM. 1989. О нитчатых нематодах домашних животных в штате Орисса. Ind Vet J 66: 573-574.

    Railliet A, Henry A. 1911a. Sur une filaire péritonéale des porcins. Bull Soc Pathol Exot 4: 386-389.

    Railliet A, Henry A. 1911b. Remarques au sujet des deux notes de MM. Bauche et Bernard. Bull Soc Pathol Exot 4: 485-488.

    Ронкалли Р.А., Ямане Ю., Нагата Т.1998. Распространенность Dirofilaria immitis у кошек в Японии. Ветеринарный паразитол 75: 81-89.

    Смит Дж. У., Скотт-Монкрифф К., Риверс Б. Дж. 1998. Пневмоторакс вторичный к инфекции Dirofilaria immitis у двух кошек. ЯВМА 213: 91-93.

    StewartVA, Hepler DI, Grieve RB. 1992. Эффективность оксима милбемицина в химиопрофилактике дирофиляриоза у кошек. Am J Vet Res 53: 2274-2277.

    Venco L, Morini S, Pedemonte F, Sola LB. 1999. Кардио-легочный филяриоз у кошки.Obiettivie Documenti Veterinari 20:39 46.

    Venco L, Calzolari D, Mazzocchi D, Morini S, Genchi C. 1998. Использование эхокардиографии в качестве диагностического инструмента для обнаружения инфекций сердечного червя кошек ( Dirofilaria immitis ). Feline Pract 26: 6-9.

    Zanotti S, Kaplan P. 1989. Кошачий дирофиляриоз. Comp SA 11: 1005-1018.

    ФИГУРЫ

    Рисунок 4-52. Дирофилярия immitis . Микрофилярии крови собаки как вид с дифференциальным контрастом интерференции в препарате Нотта.Обратите внимание, что ширина микрофилярий в средней части тела больше, чем у призрака эритроцитов. У кошек обычно очень мало циркулирующих микрофилярий.

    Рисунок 4-53. Дирофилярия immitis . Инфекционная личинка третьей стадии, появляющаяся из хоботка комара.

    Рисунок 4-54. Дирофилярия immitis . Инфекционная личинка третьей стадии; видно, что на этой стадии кишечник полностью сформирован.

    Рисунок 4-55. Дирофилярия immitis . Повреждение мозга кошки в результате эктопической миграции взрослого червя.

    Рисунок 4-56. Дирофилярия immitis . То же поражение, что и на предыдущем рисунке, показывающее степень повреждения.

    .

    Leave a Comment

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *